WO2011136533A2 - 크로마토그래피 장치 및 방법 - Google Patents

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WO2011136533A2
WO2011136533A2 PCT/KR2011/003015 KR2011003015W WO2011136533A2 WO 2011136533 A2 WO2011136533 A2 WO 2011136533A2 KR 2011003015 W KR2011003015 W KR 2011003015W WO 2011136533 A2 WO2011136533 A2 WO 2011136533A2
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Inventor
전수희
김진일
Original Assignee
㈜셀트리온
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies

Definitions

  • the present invention relates to a chromatography apparatus and method for improving the efficiency of an adsorbent.
  • the three most commonly used chromatographic processes for purifying monoclonal antibodies in the biopharmaceutical industry are as follows: 1) First step: Protein A, the selective capture of monoclonal antibodies in cell culture. A) chromatography, 2) second step: cation exchange resin chromatography as an intermediate purification step; And 3) Third step: Anion exchange resin chromatography as the last purification step (see FIG. 1).
  • Protein A chromatography has a very strong affinity for monoclonal antibodies in cell culture, so a single purification yields more than 90% yield and purity is 99% based on SEC (Size Exclusion Chromatography). It has been the strongest weapon in monoclonal antibody chromatography purification.
  • the biggest bottleneck for the production of therapeutic monoclonal antibodies via high titer cell culture processes is the purification process, particularly the Protein A chromatography process, which is traditionally carried out in batch mode and has disadvantages:
  • the simulated mobile phase chromatography process uses at least four columns and up to 20 identical columns for Biogen Idec.'S patent.
  • all rubber or plastic parts that have been in contact with the product are usually used to perform product change over to end production of one product and prevent cross-contamination between products before producing the next product.
  • the system is complicated and the number of columns is large, which requires a lot of time and labor.
  • Simulated mobile phase chromatography is a complex system of control consisting of multiple columns, pumps and valves, and it is difficult to keep the process operating coefficients stable in the event of a failure of the pump or valve.
  • a start column and a end column for chromatography for obtaining a target protein; in each of the injection step of loading a sample, a recovery step including washing and elution, and a regeneration step are performed.
  • a starting column and a terminal column A sample injection hole for the start column and an end column provided in each of the start column and the end column for sample loading;
  • an end sample distributor for loading through the end sample inlet for the sample passed through the end column to the starting column; provides a chromatography device comprising a.
  • n columns are terminated from the start column.
  • N columns consisting of columns, allowing sample flow from the front column to the back column on the flow of the sample, and allowing sample flow from the end column to the start column (the start column being the back column of the end column)
  • a chromatographic method for obtaining a target protein using the method comprising the steps of: 1) loading a sample into a front column by using the starting column as a front column; 2) loading the sample from the front column into the back column; 3) prior to the washing of the front column, blocking loading to the back column and loading the sample directly into the back column; 4) loading the sample passed through the back column into the next column; And 5) prior to the washing of the back column, blocking loading to the next column, and loading the sample directly onto the next column; including, starting from the end column to the end column again from the end column.
  • the use efficiency of the adsorbent (resin) is increased to shorten the process time, the number of column operations is reduced compared to the same volume of a single batch column, and the amount of resin used is also reduced at the same ratio. Therefore, it is economical by purifying the desired protein with high efficiency.
  • 1 is a flow chart of therapeutic monoclonal antibody production.
  • FIG. 3 compares the schematic diagram of the one column batch chromatography and the two column chromatography apparatus and the three column chromatography apparatus:
  • FIG. 6 is a conceptual diagram of operation of a two column chromatography apparatus.
  • FIG. 7 is a conceptual diagram of operation of a three column chromatography apparatus.
  • FIG. 8 is a schematic diagram of a two column chromatography apparatus.
  • 10 is a one column batch chromatography graph.
  • 11 is a two column chromatography apparatus graph.
  • the inventors have devised a multi-column (e.g. two or three column) chromatography system to compensate for the shortcomings of one column batch chromatography. Purification results were calculated.
  • a multi-column e.g. two or three column
  • the two-column chromatography system was equivalent or shorter than the control in the process time per batch in the bioreactor titer range of 1.0 g / L to 10.0 g / L, and the sorbent (resin) utilization efficiency was maximized.
  • the number of driving operations decreased by 30-50%.
  • the bioreactor titer ranges from 3.0 g / L to 10 g / L, the process time per batch is equal to or shorter than the control and the maximum use of adsorbent (resin) results in 30 to 30 50% decrease.
  • the present invention was completed by confirming that a high titer cell culture batch could be an alternative chromatographic system capable of meeting the demand for high throughput and high efficiency purification.
  • the chromatography apparatus of the present invention is as follows.
  • the chromatography apparatus has two independent inlets for each column. One is a cell culture medium injection only and the other is an injection hole for exclusively injecting several buffer solutions used in the Protein A batch process (FIGS. 8 and 9).
  • Injection of the cell culture is carried out continuously and the injection of the buffer changes sequentially with each step of the batch process.
  • the columns are connected in series and the distributor distributes the flow of fluid from the column to the wastewater treatment, product collection tank or inlet of another column.
  • the two column chromatography apparatus (FIG. 6) is designed for the case where the titer of the cell culture is less than 3.0 g / L, but is applicable even more.
  • Cell cultures filtered at the injection stage are injected to the maximum binding capacity at equilibrium and the product leaking from the first column is continuously injected into the second column.
  • the first column Once the first column has adsorbed the product to its maximum, it is separated from the second column and enters the recovery stage.
  • the cell culture is then injected up to the second column and the column rotation is repeated until the cell culture is depleted.
  • the three-column chromatographic apparatus (FIG. 7) is designed for processes with normal cell culture titers of 3.0 g / L or more, in which the bioreactors have the same relatively short sample infusion time compared to low cell culture titers.
  • the filtered cell culture in the sample injection step is injected to the maximum binding capacity at equilibrium, and the sample flowing out without being adsorbed in the first column is continuously injected into the second column.
  • the column is separated from the second column and enters the recovery stage. At this moment, the cell culture is injected into the second column as much as possible and the sample flowing out without being adsorbed to the second column is continuously injected into the third column which is equilibrated in advance.
  • next column shift occurs when the injection of the second column is complete, where the first column enters the regeneration phase for the next cycle. This cycle continues until the cell culture is depleted (FIG. 7).
  • the chromatographic apparatus of the present invention comprises: an intermediate column for chromatography for obtaining a target protein; an injection step for loading a sample, a recovery step including a washing and an elution, and a regeneration step are performed, and the sample is separated from the starting column distributor.
  • Loadable intermediate column An injection port for an intermediate column provided in the intermediate column for sample loading;
  • an intermediate column distributor for loading through the intermediate column inlet for distributing the sample passed through the intermediate column; characterized in that it further comprises.
  • the chromatographic apparatus of the present invention is characterized in that the distributor for the starting column loads the sample passed through the starting column into the end column.
  • the chromatographic apparatus of the present invention is characterized in that the distributor for the intermediate column loads the sample passed through the intermediate column into the end column.
  • the target protein in the step of loading the sample is monoclonal antibody, immunoglobulin and recombinant protein, but is not limited thereto.
  • the solid phase of the step of loading the sample is protein A or protein G.
  • the wash buffer solution may be a low salt concentration or a high salt concentration, more preferably the low salt concentration is when the addition of 0.001 mM to 100 mM NaCl in 10 mM to 50 mM buffer.
  • the high salt concentration of the wash buffer solution is when 1 M NaCl is added at 0.001 mM to 100 mM buffer at 50 mM.
  • the elution buffer preferably comprises an acid buffer.
  • the regeneration buffer is a clean in place (CIP) solution
  • the CIP solution comprises phosphoric acid or citric acid.
  • Bioreactor cell culture titers were applied at 0.3 g / L, 1.0 g / L, 3.0 g / L and 10.0 g / L, reflecting information from Professor Matt Crougham of Keck graduate Institute, cited by Genentech of the United States at IBC 2008.
  • the use volume of the bioreactor was set to 12,500 L which is commonly used on production scale.
  • the diameter of the column was chosen as the diameter of several representative columns on the production scale and the column bed height was also chosen as 22.2 cm, which is a commonly used height on the production scale.
  • the flow rate of the buffer solution was applied at 300 cm / hr at a linear velocity, the maximum operational flow rate of the MabSelect Xtra ® resin applied in the examples.
  • the injection target per chromatography number was set to 35 g / L, which is 90% of the maximum dynamic binding capacity of MabSelect Xtra® resin in the control column, 1 column batch column.
  • for column chromatography injection per number chromatography goal it was set to 80% of the q m MabSlect Xtra r resin maximum static binding capacity (static binding capacity) of.
  • Cycle no RoundUp (Titer (g / L) / 0.9 DBC m / column vol. (L))
  • Cycle no RoundUp (Titer (g / L) / 0.8 DBC m / column vol. (L))
  • Table 4 Calculated number of chromatographic runs by experiment group Simulation condition Bioreactor titer (g / L) Column bore (mm) Column volume (L) Count / Batch 1 column (control) 2 columns 3 columns One 0.3 450 35 4 2 2 2 1.0 600 63 6 4 4 3 1.0 1,000 174 3 2 2 4 3.0 1,400 342 4 2 2 5 10.0 2,000 697 6 4 4
  • Resin was assumed to be able to use up to 200 refilled resins, with an annual yield of 60 batches.
  • the calculated amount of buffer solution per batch is shown in Table 6, and the two-column chromatography unit showed a decrease of 22% to 42% compared to the control group, and the three-column chromatography unit was 10.0 at 3.0 g / L based on the bioreactor titer. It was found to decrease from 29% to 40% in the g / L range.
  • the calculated process time for each condition is shown in Table 7 and the two-column chromatographic apparatus showed the same result as the control at 1.0 g / L bioreactor titer, and then decreased up to 48% at 3.0 g / L.
  • the maximum increase was 123% compared to the control at 1.0 g / L or less, but the decrease was 18% at 3.0 g / L and 63% at 10.0 g / L.

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Abstract

본 발명은 목적 단백질 획득을 위한 크로마토그래피용 시작 컬럼 및 말단 컬럼;으로서, 각각에서, 시료를 로딩(loading)하는 주입 단계, 세척 및 용출을 포함하는 회수 단계 및 재생 단계가 행해지는 시작 컬럼 및 말단 컬럼; 시료 로딩을 위해 시작 컬럼 및 말단 컬럼 각각에 구비된 시작 컬럼용 주입구 및 말단 컬럼용 시료 주입구; 시작 컬럼용 주입구를 통해 로딩되어 시작 컬럼을 거친 시료를 분배시키는 시작 컬럼용 분배기; 그리고, 말단용 시료 주입구를 통해 로딩되어 말단용 컬럼을 거친 시료를 시작 컬럼에 로딩하는 말단용 시료 분배기;를 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치 및 이를 이용하는 크로마토그래피 방법에 관한 것이다.

Description

크로마토그래피 장치 및 방법
본 발명은 흡착제의 효율을 향상시킨 크로마토그래피 장치 및 방법에 관한 것이다.
최근에 치료용 단일클론 항체 시장이 매우 빠르게 성장하고 있으며 따라서 생산성 또한 급격히 증가하고 있는 데 특히 세포주 공학 기술 및 세포 배양 기술의 발달에 힘입어 상업 생산 규모로 세포 배양액의 역가가 약 10 g/L까지 증가했다.
일반적으로 바이오 의약품 산업에서 단일클론 항체를 정제하는 데 가장 빈번히 사용하는 크로마토그래피 공정 세 단계는 하기와 같다: 1) 첫 번째 단계: 세포 배양액에서 단일클론 항체를 선택적으로 포집하는 단계인 단백질 A(protein A) 크로마토그래피, 2) 두 번째 단계: 중간 정제 단계로서 양이온 교환 수지 크로마토그래피; 및 3) 세 번째 단계: 마지막 정제 단계로서 음이온 교환 수지 크로마토그래피(도 1 참조).
이 중, 단백질 A 크로마토그래피는 세포 배양액 안에 있는 단일클론 항체에 대해 매우 강력한 친화력을 갖고 있어서 단 한 번의 정제로 수율은 90% 이상, 순도는 SEC(Size Exclusion Chromatography) 기준으로 99% 이상을 직접 얻을 수 있기 때문에 단일클론 항체 크로마토그래피 정제에서 가장 강력한 무기가 되어 왔다.
고 역가의 세포 배양 공정을 통한 치료용 단일클론 항체 생산에 있어서 가장 큰 병목(bottle neck)은 정제 공정 특히 단백질 A 크로마토그래피 공정인데, 전통적으로 회분식 방식으로 실시되고 있으며, 단점들이 있다:
1) 시장에서 구입할 수 있는 단백질 A 레진 가격이 매우 고가이며, 리간드가 단백질이므로 다른 레진 보다 상대적으로 수명이 짧고, 회분식으로 운영할 경우 단백질 흡착의 반응 속도론적 한계 때문에 충진된 레진의 약 30 ~ 50 %까지 밖에 활용을 하지 못한다. 만약 상기 컬럼이 평형 상태에서 운영되었을 때 요구되는 부피의 두 배 또는 세 배의 컬럼 부피를 필요로 한다;
2) 보통 회분식으로는 단 하나의 충진된 컬럼이 사용되며 평형, 시료 주입, 세척, 용출, 그리고 재생 및 소독이 순차적으로 진행되어 상대적으로 긴 공정 시간을 갖고 상당히 낮은 배치(batch) 처리 속도를 보인다(도 2 참조); 및
3) 회분식 크로마토그래피에서 세척 및 용출 공정은 상당히 많은 부피의 완충액을 필요로 하는 데 이 완충액들은 모두 주사용수(Water for Injection)로 조제되는 것이어서 경제적으로 부담이 된다.
이러한 회분식 크로마토그래피 공정의 단점을 극복하고 세포 배양 공정에서의 고역가 문제를 해결하기 위해 모사 이동상 크로마토그래피(Simulated Moving Bed(SMB) chromatography)를 치료용 항체 생산에 적용하려는 연구들이 최근에 많이 이루어 지고 있다.
모사 이동상 크로마토그래피는 석유 화학 및 광물 산업에서 많이 이용되어 왔으며 회분식 크로마토그래피와 비교하여 완충액 소모량, 높은 생산성, 및 높은 최종 제품 농도의 장점을 같기 때문에 최근 들어 바이오 물질을 분리하는 데 적용하려는 연구가 많이 이루어 지고 있다.
상기 모사 이동상 크로마토그래피 기술을 생물 공학 제품 특별히 단백질을 정제하는 데 적용하기 위해서는 아래와 같이 해결해야 할 문제들이 있다:
1) 초기 가동 및 마지막 공정 마감 시 제품의 손실이 불가피하다. 이런 이유로 짧은 기간의 생산에 적용하면 제품 손실이 회분식에 비해 상대적으로 훨씬 크다;
2) 바이오 의약품 생산에서 중요하게 여기는 배치(batch) 구분이 어렵다. 특히 공정 원리 상 세포 배양액을 연속적으로 처리해야 효율이 유지되는 방식이어서 근본적으로 배치 구분이 어렵다;
3) 짧은 기간 동안 여러 제품을 생산 시 적합하지 않다. 보통 모사 이동상 크로마토그래피 공정은 최소한 4개의 컬럼을 사용하며, Biogen Idec.이 보유한 특허의 경우 최대 20개의 동일한 컬럼을 사용한다. 바이오 의약품 생산 시 한 제품의 생산을 끝내고 다음 제품 생산하기 전에 제품간 교차 오염을 방지할 목적으로 제품 교체 작업(Product change over)을 수행하는 데 보통 제품과 접촉한 모든 고무 또는 플라스틱 재질의 부품들을 교체하고 또 컬럼의 레진을 바꾸어 균일하게 충진을 해야 하는데, 모사 이동상 크로마토그래피의 경우 시스템이 복잡하고 컬럼 개수가 많아 많은 시간과 인력을 요한다.
4) 모사 이동상 크로마토그래피는 여러 개의 컬럼, 펌프와 밸브들을 구성하여 제어하는 시스템이 복잡하고 펌프 또는 밸브에 고장이 발생할 경우 공정 운전 계수들을 안정되게 유지하기가 어렵다.
참고문헌
미국특허공보 제7,220,356호
Comparison of protein A affinity sorbent II Mass Transfer properties , Alios Jungbauer et al, Journal of chromatography A, 1093(2005) pp.98-110.
본 발명의 목적은 기존 회분식 크로마토그래피에 사용되는 흡착제의 저조한 사용효율을 증대시키는 것이다.
본 발명의 일 태양에 의하면, 목적 단백질 획득을 위한 크로마토그래피용 시작 컬럼 및 말단 컬럼;으로서, 각각에서, 시료를 로딩(loading)하는 주입 단계, 세척 및 용출을 포함하는 회수 단계 및 재생 단계가 행해지는 시작 컬럼 및 말단 컬럼; 시료 로딩을 위해 시작 컬럼 및 말단 컬럼 각각에 구비된 시작 컬럼용 주입구 및 말단 컬럼용 시료 주입구; 시작 컬럼용 주입구를 통해 로딩되어 시작 컬럼을 거친 시료를 분배시키는 시작 컬럼용 분배기; 그리고, 말단용 시료 주입구를 통해 로딩되어 말단용 컬럼을 거친 시료를 시작 컬럼에 로딩하는 말단용 시료 분배기;를 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치가 제공된다.
본 발명의 다른 태양에 의하면, 각각에서, 시료의 주입 과정, 세척 과정, 용출 과정 및 재생 과정이 행해지는 n개(n>1, n은 정수)의 컬럼으로써, n개의 컬럼이 시작 컬럼부터 말단 컬럼으로 이루어지며, 시료의 흐름 상에서 앞 컬럼으로부터 뒷 컬럼으로의 시료의 흐름이 가능하고, 말단 컬럼으로부터 시작 컬럼으로의 시료의 흐름이 가능한(시작 컬럼은 말단 컬럼의 뒷 컬럼이 됨) n개의 컬럼을 이용하여 목적 단백질을 획득하는 크로마토그래피 방법에 있어서, 1) 시작 컬럼을 앞 컬럼으로 하여, 앞 컬럼에 시료를 로딩하는 단계; 2) 앞 컬럼을 거친 시료를 뒷 컬럼에 로딩하는 단계; 3) 앞 컬럼의 세척 과정에 앞서, 뒷 컬럼으로의 로딩을 차단하고, 뒷 컬럼에 직접 시료를 로딩하는 단계; 4) 뒷 컬럼을 거친 시료를 다음 컬럼에 로딩하는 단계; 그리고, 5) 뒷 컬럼의 세척 과정에 앞서, 다음 컬럼으로의 로딩을 차단하고, 이 다음 컬럼에 직접 시료를 로딩하는 단계;를 포함하며, 시작 컬럼으로부터 말단 컬럼에 이르기까지 다시 말단 컬럼으로부터 시작 컬럼으로 단계 1) ~ 5)를 반복하면서, 뒷 컬럼으로의 시료의 로딩이 차단된 앞 컬럼에서는 세척 과정, 용출 과정 및 재생 과정이 행해지는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법이 제공된다.
본 발명의 크로마토그래피 장치 및 크로마토그래피 방법에 의하면, 흡착제(레진) 사용 효율이 증가하여 공정 시간을 단축시키며, 동일 부피의 단일 회분식 컬럼 대비 컬럼 운전 횟수가 감소되고, 레진의 사용량 또한 동일 비율로 감소하여, 고효율로 목적하는 단백질을 정제함으로 경제적이다.
도 1은 치료용 단일클론 항체 생산 공정도이다.
도 2는 단백질 A 회분식 크로마토그래피 공정도이다.
도 3은 1 컬럼 회분식 크로마토그래피 개념도 및 2 컬럼 크로마토그래피 장치 및 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 개념도를 비교한 것이다:
(a) 전통적인 1 컬럼 회분식 크로마토그래피 장치;
(b) 2 컬럼 크로마토그래피 장치; 및
(c) 3 컬럼 크로마토그래피 장치.
도 4는 각 장치 별 레진 사용 효율 비교 결과이다.
도 5는 각 장치 별 레진 사용 효율 및 생산성 비교 결과이다.
도 6은 2 컬럼 크로마토그래피 장치의 운전 개념도이다.
도 7은 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 운전 개념도이다.
도 8은 2 컬럼 크로마토그래피 장치의 모식도이다.
도 9는 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 모식도이다.
도 10은 1 컬럼 회분식 크로마토그래피 그래프이다.
도 11은 2 컬럼 크로마토그래피 장치 그래프이다.
도 12는 3 컬럼 크로마토그래피 장치 그래프이다.
이하에서 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명자들은 1 컬럼 회분식 크로마토그래피의 단점을 보완하기 위하여 복수 컬럼(예: 2 컬럼 또는 3 컬럼) 크로마토그래피 시스템을 고안하였으며, 실제로 1 컬럼 단백질 A 크로마토그래피 시스템과 2 컬럼 또는 3 컬럼 크로마토그래피 시스템의 정제 결과를 계산하였다.
그 결과, 2 컬럼 크로마토그래피 시스템은 바이오리엑터(bioreactor) 역가 1.0 g/L ~ 10.0 g/L 범위에서 배치 당 공정시간에 있어서 대조군보다 동등하거나 더 짧았으며 흡착제(레진) 사용 효율이 최대로 증가하여 운전 실시 횟수가 30~50% 감소하는 것으로 나타났다.
3 컬럼 크로마토그래피 시스템의 경우 바이오리엑터 역가 범위 3.0 g/L ~ 10 g/L에서 배치 당 공정 시간이 대조군보다 동등하거나 더 짧았으며 흡착제(레진) 사용 효율이 최대로 증가하여 운전 실시 횟수가 30~50% 감소하는 것으로 나타났다.
결론적으로 고역가의 세포 배양액 배치를 고처리 용량 및 고효율로 정제하여야 하는 수요를 충족시킬 수 있는 대안적인 크로마토그래피 시스템이 될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 크로마토그래피 장치는 하기와 같다.
크로마토그래피 장치에는 각 컬럼들에 대해 각각 독립된 두 개의 주입구가 있다. 하나는 세포 배양액 주입 전용이고 나머지 하나는 단백질 A 배치 공정에서 사용되는 여러 완충 용액들을 전용으로 주입하는 주입구이다(도 8 및 도 9).
세포 배양액의 주입은 연속적으로 이루어지며 버퍼의 주입은 배치 공정의 각 단계에 따라 순차적으로 바뀐다.
컬럼들은 직렬로 연결되어 있고 분배기가 컬럼에서 나오는 유체의 흐름을 폐수 처리구, 제품 수집 탱크 또는 또 다른 컬럼의 주입구로 분배해 준다.
본 발명의 2 컬럼 크로마토그래피 장치의 운전은 하기와 같이 실행된다.
2 컬럼 크로마토그래피 장치(도 6)는 세포 배양액의 역가가 3.0 g/L 미만인 경우를 위해 설계되었으나 그 이상에도 적용 가능하다.
주입 단계에 여과된 세포 배양액은 평형 상태의 최대 결합 능력(binding capacity)까지 주입되고 첫 컬럼으로부터 누출되어 나오는 제품은 연속적으로 두 번째 컬럼에 주입된다.
일단 그 첫 컬럼은 제품을 최대까지 흡착한 다음 두 번째 컬럼으로 부터 분리되어 회수 단계에 들어가게 된다.
이때 세포 배양액은 두 번째 컬럼에 최대까지 주입되며 컬럼의 교대는 세포 배양액이 고갈될 때까지 반복된다.
회수 단계 동안 제품은 회수되고 컬럼은 다음 싸이클을 위해 재생된다.
3 컬럼 크로마토그래피 장치(도 7)는 정상적으로 세포 배양액 역가가 3.0 g/L 이상인 공정을 위해 설계되었는데 이 시스템에서는 바이오리엑터의 크기가 동일할 경우 세포 배양액 역가가 낮을 경우에 비해 상대적으로 짧은 시료 주입 시간을 갖는다.
시료 주입 단계에서 여과된 세포 배양액은 평형 상태에서 최대 결합 능력(binding capacity)까지 주입되고 첫 번째 컬럼에서 흡착되지 않고 흘러나온 시료는 두 번째 컬럼에 연속적으로 주입된다.
일단 첫 번째 컬럼이 제품을 최대로 흡착한 다음 그 컬럼은 두 번째 컬럼으로 부터 분리되고 회수 단계에 들어간다. 이 순간에 세포 배양액은 두 번째 컬럼에 최대한 주입되고 두 번째 컬럼에 흡착되지 않고 흘러나온 시료는 미리 형평화 되어 있는 세 번째 컬럼에 연속적으로 주입된다.
다음번 컬럼의 교대는 두 번째 컬럼의 주입이 완료될 때 일어나며 이때 첫 번째 컬럼은 다음 싸이클을 위한 재생 단계에 들어간다. 세포 배양액이 고갈될 때까지 이 싸이클은 계속된다(도 7).
이하에서, 본 발명의 다양한 실시형태에 대해 설명한다.
본 발명의 크로마토그래피 장치는, 목적 단백질 획득을 위한 크로마토그래피용 중간 컬럼;으로서, 시료를 로딩하는 주입 단계, 세척 및 용출을 포함하는 회수 단계 및 재생 단계가 행해지며, 시작 컬럼용 분배기로부터 시료를 로딩받을 수 있는 중간 컬럼; 시료 로딩을 위해 중간 컬럼에 구비된 중간 컬럼용 주입구; 그리고, 중간 컬럼용 주입구를 통해 로딩되어 중간 컬럼을 거친 시료를 분배시키는 중간 컬럼용 분배기;를 추가로 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 크로마토그래피 장치는, 시작 컬럼용 분배기가 시작 컬럼을 거친 시료를 말단 컬럼으로 로딩하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 크로마토그래피 장치는, 중간 컬럼용 분배기가 중간 컬럼을 거친 시료를 말단 컬럼으로 로딩하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 시료를 로딩하는 단계의 목적 단백질은 단일클론 항체, 면역글로블린 및 재조합 단백질이나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 시료를 로딩하는 단계의 고체상은 단백질 A(protein A) 또는 단백질 G(protein G)이다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 세척 완충 용액은 낮은 염 농도 또는 높은 염 농도일 수 있으며, 보다 바람직하게는 낮은 염 농도는 10 mM에서 50 mM 버퍼에 0.001 mM에서 100 mM의 NaCl이 첨가된 경우이고, 세척 완충 용액의 높은 염 농도는 50 mM에서 100 mM 버퍼에 0.001 mM에서 1 M의 NaCl이 첨가된 경우이다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 용출 완충액은 산성 완충액을 포함한다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 재생 완충액은 CIP(Clean in place) 용액이며, 보다 바람직하게 상기 CIP 용액은 인산(phosphoric acid) 또는 구연산(citric acid)을 포함한다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다.
단 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로서 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예
본 발명자들은 본 발명의 유효성을 입증하기 위해 하기 표 1과 같이 산업 현장에서 사용중인 컬럼 규격 및 레진의 스팩을 정하였고, 레진의 결합 능력(binding capacity)을 결정짓는 흡착 등온 방정식(Adsorption isotherm)의 값들은 이미 공개된 문헌(R.Halm et al., J. Chromatogr, A 1093(2005), pp. 98-100)의 값을 적용하여 계산하였다.
바이오리엑터의 세포 배양액 역가는 IBC 2008에서 미국의 Genentech사가 인용한 Keck Graduate Institute의 Matt Crougham 교수의 정보를 반영하여, 0.3 g/L, 1.0 g/L, 3.0 g/L 및 10.0 g/L를 적용하였고, 바이오리엑터의 사용 부피는 생산 스케일에서 흔히 사용되는 12,500 L로 설정하였다. 컬럼의 직경은 생산 스케일의 여러 대표적인 컬럼의 직경을 선택하였고 컬럼 베드 높이 또한 생산 스케일에서 흔히 사용되는 높이인 22.2 cm를 선택하였다. 완충 용액의 유속은 실시예에서 적용한 MabSelect Xtraⓡ 레진의 운전 가능한 최대의 유속인 선속도로 300 cm/hr을 적용하였다. 크로마토그래피 횟수당 주입 목표는 대조군인 1 컬럼 회분식 컬럼의 경우 MabSelect Xtraⓡ 레진의 최대 역동적 결합 능력(dynamic binding capacity)의 90%인 35 g/L로 정하였으며, 실험군인 2 컬럼 크로마토그래피 장치와 3 컬럼 크로마토그래피의 경우 크로마토그래피 횟수당 주입 목표는 MabSlect Xtraⓡ 레진의 최대 정적 결합 능력(static binding capacity)인 q m의 80%로 정하였다.
표 1 모델 공정 계수들(Model Process parameters)
카테고리 단계 파라미터
세포배양액 부피(Cell culture fluid volume) 12,000 L
항체 역가(Antibody titer) 0.3, 1.0, 3.0, 10.0 g/L
단백질 A 레진(protein A resin) Mabselect Xtraⓡ
컬럼 베드 높이(Column bed height) 22.2 cm
선속도(Linear flow rate) 300 cm/hr
대조군 컬럼 내경(Control Column ID) 45, 60, 100, 140, 200 cm
최대역동적 결합 능력(DBCm) 40 (mg/mL)
등온 흡착식 Langmuir(q=qmd(c+Kd)
최대 결합 능력(q m) 68.3(mg/mL)
평행 해리상수(Equilibrium Dissociation constant:Kd) 0.088(mg/mL)
1 컬럼 대조군에 대한 주입 능력 90% DBCm
2 컬럼 또는 3 컬럼 CFCSC에 대한 주입 능력 80% qm
레진 입자 직경(d p) 75 μm
총 공극율(εb) 0.92
레진 입자 내부 공극율(εα) 0.87
각 바이오리엑터의 역가 당 대조군과 실험군의 컬럼 직경 및 컬럼 부피와 개수는 하기 표 2와 같다.
표 2
주입 역가(g/L) 1 컬럼 배치 2 컬럼 3 컬럼
컬럼 ID(cm) 컬럼 부피(L) 컬럼 ID(cm) 컬럼 부피(L) 컬럼 ID(cm) 컬럼 부피(L)
0.3 45 34.7 31.6 17.4×2 25.8 11.6×3
1.0 60 62.8 42.4 31.4×2 34.6 20.9×3
3.0 100 174.4 70.7 87.2×2 57.7 58.1×3
10.0 140 341.7 99.0 170.9×2 80.8 113.9×3
200 697 141.4 38.7×2 115.4 232.3×3
각 조건별로 최적의 크로마토그래피 실시 횟수 및 그 결과 레진의 사용량, 완충 용액의 사용량 및 공정 시간을 계산하여 표 3과 같이 생산 현장에서 흔히 적용되는 공정 순서 및 완충 용액 종류를 설정하여 계산하였다.
표 3 크로마토그래피 단위 단계 및 완충액 부피
단위 단계 완충액 부피(컬럼 부피) 유속(cm/hr)
사전 살균(Pre Sanitization) 4.01 CV 300
사전 재생(Pre Regeneration) 4.01 CV 300
평형(Equilbration) 5.01 CV 300
주입(Loading) 1,2500 / Cycle no.1)(L) 300
재 평형(Re Equilibration) 4.01 CV 300
세척(Wash) 6.01 CV 300
용출(Elution) 3 CV 200
재생(Regeneration) 4.01 CV 300
살균(Sanitization) 4.01 CV 300
중화(Nuetralization) 3.01 CV 300
저장(Storage) 4.01 CV 300
1) 1 컬럼 회분식의 경우,
Cycle no = RoundUp(Titer(g/L) / 0.9 DBCm/column vol.(L))으로 계산되고,
2 컬럼 또는 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 경우
Cycle no = RoundUp(Titer(g/L) / 0.8 DBCm/column vol.(L))으로 계산된다.
계산 결과, 표 4와 같이 각 바이오리엑터 세포 배양액의 역가당 대조군과 실험군 각각의 최적 크로마토그래피 실시 횟수가 계산되었다. 실험군들의 경우 모든 조건에서 대조군 대비 33% 내지 50%의 실시 횟수 감소가 있었다.
표 4 실험군별 계산된 크로마토그래피 실시 횟수
시뮬레이션 조건 바이오리엑터 역가(g/L) 컬럼 내경(mm) 컬럼 부피(L) 횟수/배치(Cycle/Batch)
1 컬럼(대조군) 2 컬럼 3 컬럼
1 0.3 450 35 4 2 2
2 1.0 600 63 6 4 4
3 1.0 1,000 174 3 2 2
4 3.0 1,400 342 4 2 2
5 10.0 2,000 697 6 4 4
계산된 실험군별 레진 소모량은 표 5에 나타나 있으며 두 실험군들이 모든 조건에서 대조군 대비 33%에서 50%까지 감소함을 나타냈다.
레진은 한 번 충진한 레진을 최대 200회까지 사용할 수 있는 것으로 가정하였고 연간 생산량은 60 배치(batch)를 가정하였다.
표 5 계산된 레진 연간 소비량
시뮬레이션 조건 바이오리엑터 역가(g/L) 컬럼 내경(mm) 컬럼 부피(L) 레진 연간 사용량(L/year)
1 컬럼(대조군) 2 컬럼 3 컬럼
1 0.3 450 35 42 21 21
2 1.0 600 63 113 75 75
3 1.0 1,000 174 157 105 105
4 3.0 1,400 342 410 205 205
5 10.0 2,000 697 1255 836 836
실험군별 계산된 배치당 완충액 사용량은 표 6에 나타나 있으며 2 컬럼 크로마토그래피 장치의 경우 대조군 대비 22%에서 42%의 감소가 나타났고 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 경우 바이오리엑터 역가 기준 3.0 g/L 에서 10.0 g/L 범위에서 29%에서 40%까지 감소하는 것으로 나타났다.
표 6
시뮬레이션 조건 바이오리엑터 역가(g/L) 컬럼 내경(mm) 컬럼 부피(L) 배치당 완충액 소모량 (L/year)
1 컬럼(대조군) 2 컬럼 3 컬럼
1 0.3 450 35 4,995 3,452 4,066
2 1.0 600 63 11,773 9,235 10,223
3 1.0 1,000 174 16,524 12,557 13,150
4 3.0 1,400 342 40,364 23,458 24,052
5 10.0 2,000 697 116,666 82,340 83,352
각 조건별 계산된 공정 시간은 표 7에 나타나 있으며 2 컬럼 크로마토그래피 장치의 경우 1.0 g/L 바이오리엑터 역가에서 대조군과 동등한 결과를 얻었으며 이후 3.0g/L에서는 최대 48%의 감소율을 보였다. 3 컬럼 크로마토그래피 장치의 경우 1.0g/L 이하에서는 대조군 대비 최대 123% 증가하였으나 3.0g/L 에서는 18% 그리고 10.0g/L에서는 63% 감소하는 것으로 계산되었다.
표 7 계산된 실험군 별 배치당 공정 시간
시뮬레이션 조건 바이오리엑터 역가(g/L) 컬럼 내경(mm) 컬럼 부피(L) 배치당 공정 시간(hr/batch)
1 컬럼(대조군) 2 컬럼 3 컬럼
1 0.3 450 35 38 55 84
2 1.0 600 63 30 31 48
3 1.0 1,000 174 14 12 20
4 3.0 1,400 342 14 7 12
5 10.0 2,000 697 17 11 6

Claims (14)

  1. 목적 단백질 획득을 위한 크로마토그래피용 시작 컬럼 및 말단 컬럼;으로서, 각각에서, 시료를 로딩(loading)하는 주입 단계, 세척 및 용출을 포함하는 회수 단계 및 재생 단계가 행해지는 시작 컬럼 및 말단 컬럼;
    시료 로딩을 위해 시작 컬럼 및 말단 컬럼 각각에 구비된 시작 컬럼용 주입구 및 말단 컬럼용 시료 주입구;
    시작 컬럼용 주입구를 통해 로딩되어 시작 컬럼을 거친 시료를 분배시키는 시작 컬럼용 분배기; 그리고,
    말단용 시료 주입구를 통해 로딩되어 말단용 컬럼을 거친 시료를 시작 컬럼에 로딩하는 말단용 시료 분배기;를 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치.
  2. 제 1항에 있어서, 목적 단백질 획득을 위한 크로마토그래피용 중간 컬럼;으로서, 시료를 로딩하는 주입 단계, 세척 및 용출을 포함하는 회수 단계 및 재생 단계가 행해지며, 시작 컬럼용 분배기로부터 시료를 로딩받을 수 있는 중간 컬럼;
    시료 로딩을 위해 중간 컬럼에 구비된 중간 컬럼용 주입구; 그리고,
    중간 컬럼용 주입구를 통해 로딩되어 중간 컬럼을 거친 시료를 분배시키는 중간 컬럼용 분배기;를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치.
  3. 제 1항에 있어서, 시작 컬럼용 분배기는 시작 컬럼을 거친 시료를 말단 컬럼으로 로딩하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치.
  4. 제 2항에 있어서, 중간 컬럼용 분배기는 중간 컬럼을 거친 시료를 말단 컬럼으로 로딩하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 장치.
  5. 각각에서, 시료의 주입 과정, 세척 과정, 용출 과정 및 재생 과정이 행해지는 n개(n>1, n은 정수)의 컬럼으로써, n개의 컬럼이 시작 컬럼부터 말단 컬럼으로 이루어지며, 시료의 흐름 상에서 앞 컬럼으로부터 뒷 컬럼으로의 시료의 흐름이 가능하고, 말단 컬럼으로부터 시작 컬럼으로의 시료의 흐름이 가능한(시작 컬럼은 말단 컬럼의 뒷 컬럼이 됨) n개의 컬럼을 이용하여 목적 단백질을 획득하는 크로마토그래피 방법에 있어서,
    1) 시작 컬럼을 앞 컬럼으로 하여, 앞 컬럼에 시료를 로딩하는 단계;
    2) 앞 컬럼을 거친 시료를 뒷 컬럼에 로딩하는 단계;
    3) 앞 컬럼의 세척 과정에 앞서, 뒷 컬럼으로의 로딩을 차단하고, 뒷 컬럼에 직접 시료를 로딩하는 단계;
    4) 뒷 컬럼을 거친 시료를 다음 컬럼에 로딩하는 단계; 그리고,
    5) 뒷 컬럼의 세척 과정에 앞서, 다음 컬럼으로의 로딩을 차단하고, 이 다음 컬럼에 직접 시료를 로딩하는 단계;를 포함하며,
    시작 컬럼으로부터 말단 컬럼에 이르기까지 다시 말단 컬럼으로부터 시작 컬럼으로 단계 1) ~ 5)를 반복하면서, 뒷 컬럼으로의 시료의 로딩이 차단된 앞 컬럼에서는 세척 과정, 용출 과정 및 재생 과정이 행해지는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  6. 제 5항에 있어서, n이 2인 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  7. 제 5항에 있어서, n이 3인 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  8. 제 5항에 있어서, 목적 단백질은 단일클론 항체, 면역글로블린 및 재조합 단백질인 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  9. 제 5항에 있어서, 시료를 로딩하는 고체상은 단백질 A(protein A) 또는 단백질 G(protein G)인 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  10. 제 5항에 있어서, 세척 완충 용액은 낮은 염 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  11. 제 5항에 있어서, 세척 완충 용액은 높은 염 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  12. 제 5항에 있어서, 용출 완충액은 산성 완충액을 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  13. 제 5항에 있어서, 재생 완충액은 CIP(Clean in place) 용액인 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 CIP 용액은 인산(phosphoric acid) 또는 구연산(citric acid)을 포함하는 것을 특징으로 하는 크로마토그래피 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11590434B2 (en) 2011-10-04 2023-02-28 Merck Patent Gmbh Method and apparatus for chromatographic purification

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10948483B2 (en) * 2013-04-08 2021-03-16 Chromacon Ag Method for control, monitoring and/or optimization of a chromatographic process
US10099156B2 (en) † 2013-04-08 2018-10-16 Chromacon Ag Chromatographic purification method
CN105848746B (zh) 2013-09-05 2019-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于层析重复利用的方法
US11566082B2 (en) 2014-11-17 2023-01-31 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
EP3037513A1 (de) * 2015-05-13 2016-06-29 Bayer Technology Services GmbH Verfahren zur kontinuierlichen elution eines produktes von chromatographiesäulen
EP3455240A1 (en) 2016-05-11 2019-03-20 GE Healthcare BioProcess R&D AB Method of storing a separation matrix
US10889615B2 (en) 2016-05-11 2021-01-12 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
CN109071613A (zh) 2016-05-11 2018-12-21 通用电气医疗集团生物工艺研发股份公司 分离基质
US10654887B2 (en) 2016-05-11 2020-05-19 Ge Healthcare Bio-Process R&D Ab Separation matrix
US10703774B2 (en) 2016-09-30 2020-07-07 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US11753438B2 (en) 2016-05-11 2023-09-12 Cytiva Bioprocess R&D Ab Method of cleaning and/or sanitizing a separation matrix
US10730908B2 (en) 2016-05-11 2020-08-04 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US11180526B2 (en) 2016-07-13 2021-11-23 Chromacon Ag Purification method and uses thereof
GB201905886D0 (en) * 2019-04-26 2019-06-12 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Method in liquid chromatography

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100372209B1 (ko) * 1994-02-22 2003-04-10 스미스클라인 비참 코포레이션 항체정제법
US20040241878A1 (en) * 2002-09-13 2004-12-02 Jorg Thommes Method of purifying polypeptides by simulated moving bed chromatography
KR20060081422A (ko) * 1998-05-06 2006-07-12 제넨테크, 인크. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법
WO2008153472A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-18 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Chromatography method

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE0400501D0 (sv) 2004-02-27 2004-02-27 Amersham Biosciences Ab Antibody purification

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100372209B1 (ko) * 1994-02-22 2003-04-10 스미스클라인 비참 코포레이션 항체정제법
KR20060081422A (ko) * 1998-05-06 2006-07-12 제넨테크, 인크. 이온 교환 크로마토그래피에 의한 단백질 정제 방법
US20040241878A1 (en) * 2002-09-13 2004-12-02 Jorg Thommes Method of purifying polypeptides by simulated moving bed chromatography
WO2008153472A1 (en) * 2007-06-15 2008-12-18 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Chromatography method

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11590434B2 (en) 2011-10-04 2023-02-28 Merck Patent Gmbh Method and apparatus for chromatographic purification

Also Published As

Publication number Publication date
KR101152036B1 (ko) 2012-06-08
US20130046080A1 (en) 2013-02-21
US9024000B2 (en) 2015-05-05
KR20110119174A (ko) 2011-11-02
WO2011136533A3 (ko) 2012-04-19

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