WO2011126301A2 - 근육 타입 변화를 촉진하는 조성물 - Google Patents

근육 타입 변화를 촉진하는 조성물 Download PDF

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    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • the present invention relates to a composition capable of promoting changes in muscle type.
  • Muscles produced by aerobic exercise reduce body fat by converting primary energy sources from carbohydrates to fats. In addition, less carbohydrates are used, so blood sugar levels are kept constant so that you feel less fasting.
  • the muscles in our body are about 50% of the muscles of type II and type I.
  • Fast muscle is a muscle type that appears white because it lacks myoglobin, and carbohydrates are used as the main energy source. It is a type of muscle produced mainly by anaerobic exercise, such as weight training. It has a large volume and is used for fast movement. By contrast, the myoglobin appears reddish due to the presence of myoglobin and uses fat as the main energy source instead of carbohydrates.It is mainly produced by aerobic exercise, has a small volume, and is used when moving slowly for a long time. In the roots of the mitochondria, the number of active and high resistance to fatigue is possible to exercise for a long time. ⁇
  • sprinters have a ratio of about 70:30 in their fast muscles to the close muscles, and their upper body develops.
  • marathoners generally have a ratio of about 30:70 of the fast muscles and the roots, and have an overall dry body shape. 5
  • the marathoners are five times higher than those of ordinary people having the same weight. It is about as small as it is, because the muscle is about five times smaller than the equivalent weight of fat.
  • the present invention promotes muscle type changes, increase muscle mass, strengthen muscles, improve athletic performance , To provide a composition for reducing lipids, inhibiting lipid accumulation, reducing blood sugar, controlling weight or losing weight.
  • the composition for promoting muscle type change, increasing muscle mass, strengthening muscles, improving mobility, reducing lipids, inhibiting lipid accumulation, reducing blood sugar, weight control, or weight loss may include PPAR- ⁇ (Peroxisome prol).
  • PPAR- ⁇ Ferator-act ivated receptor- ⁇ (activator), AMP-act ivated protein kinase (AMPK) activator and PGC1—a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1-a) activator Contains as an ingredient.
  • the composition according to an aspect of the present invention is a PPAR- ⁇ (Peroxisome pro- activator-activated receptor- ⁇ ) activity promoting substance, AMPK (AMP act ivated protein kinase) active activating substance and PGC1-a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1- a) It contains an active promoting substance as an active ingredient, which promotes muscle type changes, increases muscle mass, strengthens muscles, strengthens motor performance, decreases lipids, inhibits lipid accumulation, reduces blood sugar, Effect of weight control or weight loss.
  • AMPK AMP act ivated protein kinase
  • PGC1-a Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1- a
  • FIG. 1 is a graph showing fluorescence values of 22 natural product extracts attached to LBD of PPAR- ⁇ .
  • FIG. 2 shows the extracts of Salvia Militiorrhiza, Angelica, Loquat Leaf, Pinus leaf, Wenzhou, Echochocho extract on muscle cells
  • FIG. 3 is a graph showing the extent to which luciferase expresses several natural product extracts, including Astragalus extract, by activating the PGCl-a promoter.
  • Figure 4 is a negative control of the expression level of the genes CPTlp, PDK4, PGCl-a after treatment to muscle cells alone or in combination with various substances including 200 / ml of jinjin Mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract
  • This is a graph compared with (Dolphur Sulphur: Dolberry Leaf Extract + Phosphorus Mugwort Extract + Astragalus Extract, Dolhu Sulfur: Dolberry Leaf Extract + EPA + Astragalus Extract, Dolpi: Dolberry Leaf Extract: EPA + Pinotin (Pine Extract), Warm Phosphorus : Wenzhou extract + Injin mugwort extract + Astragalus extract , Won Yi Sulfur : Wenzhou extract + EPA + Astragalus extract, Onpi : Wenzhou extract + EPA + Pinotin (pine extract), Dolby : Outer leaf extract + Injin mugwort extract + Pinotin ( Pine nut extract), whole
  • FIG. 5 is a graph showing the exercise duration of the Injin mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof.
  • FIG. 6 is a graph showing the weight gain of the group administered with Injin mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof.
  • Figure 7 is a graph showing the weight of the epididymis of the jinjin Mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination administration group thereof.
  • FIG. 8 is a graph showing the calf rear muscle weights of Injin mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof.
  • Figure 9 is a graph showing the amount of adiponectin and insulin compared to the negative control group of the jinjin Mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof.
  • 11 is a result showing the degree of hepatic triglycerides of the jinjin Mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination administration group thereof.
  • FIG. 12 shows the results of brown adipose tissue fat globule size of Injin mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof.
  • FIG. 13 is a graph showing the expression levels of CPTip, PDK4, and PGCl- ⁇ genes in muscle cells of Injin mugwort extract, EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract alone or a combination thereof. .
  • extract includes all materials regardless of the method of extraction or the type of the component, as long as it is a substance obtained by extracting a component therein from a natural product.
  • extract includes all components obtained by extracting a component dissolved in a solvent from a natural product using water or an organic solvent, and those obtained by extracting only a specific component such as oil, for example.
  • the term "metabolism” refers to the action of decomposing, synthesizing, and nourishing substances in living organisms, which are consumed from outside the body, to produce substances or energy used for biological components or life activities, and to release substances that are not needed out of the body.
  • Active metabolism increases body energy consumption.
  • Peroxysome proli ferator-act ivated receptor- is a factor expressed in muscle and brown adipose tissue. It is known to promote the oxidation of fatty acids in the obesity (adiposity) inhibitory effect. PPAR- ⁇ activators also increase the expression of proteins such as CPT1
  • AMP-act ivated protein kinase is a protein that is activated when intracellular AMP is detected. It inhibits ATP-consuming signaling pathways and activates ATP-synthesizing signaling pathways to protect cells from external stress. It is a representative protein that plays a role. Muscle is known to inhibit fat synthesis, promote fatty acid oxidation, and liver to inhibit gkiconeogenesis to inhibit sugar production.
  • PPAR- ⁇ Peroxisome proli fer-act ivated receptor ⁇
  • a muscle type comprising an active promoting substance, an AMP-act ivated protein kinase (AMPK) activating substance and a PGCl- ⁇ (Peroxisome protein fermenter-act ivated receptor gamma coact ivator 1—a) activating substance
  • AMPK AMP-act ivated protein kinase
  • PGCl- ⁇ Peroxisome protein fermenter-act ivated receptor gamma coact ivator 1—a
  • the PPAR- ⁇ activity promoting substance is recognized to have an effect of increasing the expression of enzymes that promote fat and sugar metabolism in muscle cells by attaching to PPAR- ⁇ and increasing its activity.
  • the ⁇ activity promoting substance can regulate the overall energy metabolism by promoting phosphorylation of ⁇ protein.
  • the PGCl- ⁇ activity-promoting substance may increase mitochondrial
  • the composition according to an aspect of the present invention may include a PPAR- ⁇ activity promoting substance, an AMPK activity promoting substance and a PGC1—a activity promoting substance as active ingredients, thereby promoting changes in muscle type.
  • the muscle type change includes a change from the fast muscle type to the slow muscle type or an increase in the slow muscle type. As described above, if there are a lot of muscles of the muscle type, the muscles have a smaller volume than the muscles of the muscles, so even if they have the same weight, they look externally slim. It also uses fat instead of carbohydrates as the main energy support, reducing body lipids and inhibiting lipid accumulation. In addition, compared to the fast muscles, muscles are used when moving slowly for a long time, so the end muscles can increase endurance.
  • the composition according to one aspect of the present invention includes a PPAR- ⁇ activity promoting substance, an AMPK activity promoting substance and a PGCl-a activity promoting substance as active ingredients, thereby increasing the body's muscle mass and strengthening muscles to exercise And metabolic capacity.
  • a PPAR- ⁇ activity promoting substance an AMPK activity promoting substance and a PGCl-a activity promoting substance as active ingredients, thereby increasing the body's muscle mass and strengthening muscles to exercise And metabolic capacity.
  • CPTip, PDK4, PGC1 a, GAPDH, etc. genes involved in fat and sugar metabolism in muscle cells has the effect of lowering the body lipids, blood lipids and blood glucose levels.
  • composition comprising a PPAR- ⁇ activity promoting material, an AMPK activity promoting material and a PGCl-a activity promoting material according to one aspect of the present invention as an active ingredient is similar to that in which aerobic exercise is applied to an animal or a person. The effect can be seen and further weight control and weight control will be possible.
  • the PPAR- ⁇ Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- ⁇
  • Activity promoting substance is human
  • E. coli Eicosapentaenoic acid (EPA)
  • Piper is Nigri Fructus extract, green mate (Ilex paraguariensis) main extract and Root (Pueraria root) extract.
  • the EPA is natural PPAR- ⁇ ligand.
  • the AMPK (AMP-activated protein kinase) activity promoting substance is Gynoste a pentaphyllwi) ⁇ extract, Wenzhou Citrus unshiu Marked extract and ⁇ Houttuynia cor data Thunberg) extract One or more of them.
  • the PGCl- ⁇ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1—a) activity promoting substance is Astragali Radix extract, browning (/ erar / a Genus plant) extract and bilberry (/ s leiocarpa) extract.
  • the extracts may be obtained by extracting each corresponding natural product in a conventional manner.
  • the extracts may be obtained by heating and extracting each natural product in an organic solvent including water or alcohol, followed by filtration and concentration under reduced pressure.
  • the organic solvent is not particularly limited, and may be CrC ⁇ lower alcohol ⁇ (lower alcohol of : ⁇ (: 5 , for example, methanol, ethane, , Isopropyl alcohol, ⁇ -propyl alcohol, n-butanol and isobutanol may be any one or two or more mixed solvents selected from the group consisting of.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting substance, AMPK activity promoting substance and PGCl- ⁇ activity promoting substance may be included in an amount of 1 to 80% by weight based on the total weight of the composition. .
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGCl- ⁇ activity promoting material may be included in 5 to 60% by weight based on the total weight of the composition.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGCl-a activity promoting material may be included in 10 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
  • the composition is not only suitable for showing the intended effect of the present invention, but also the composition. It can satisfy both the stability and safety, and may be appropriate to use in the above range in terms of cost-effectiveness.
  • PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material according to an aspect of the present invention and
  • a composition comprising a PGCl- ⁇ activity promoting substance as an active ingredient
  • the PPAR— ⁇ activity promoting substance, A ⁇ activity promoting substance and PGCl- ⁇ activity promoting substance may each be included in an amount of 1 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGCl-a activity promoting material may be included in 5 to 20% by weight, based on the total weight of each composition.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGCl-a activity promoting material may each be included in 5 to 10% by weight based on the total weight of the composition.
  • PPAR- ⁇ Activity Promoting Materials When AMPK activity promoting materials and PGCl-a activity promoting materials are used in the range of 1 to 30% by weight based on the total weight of the composition, respectively, they are not only suitable for showing the intended effect of the present invention, but also the stability and All of the safety can be satisfied, but it may be appropriate to use the above range in terms of cost effectiveness.
  • composition comprising a PGCl-a activity promoting material as an active ingredient, the PPAR- ⁇ activity promoting material, the AMPK activity promoting material and the PGCl-a activity promoting material may be mixed in a ratio of 1—10: 1-10: 1-10. Can be.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGCl-a activity promoting material may be mixed in a ratio of 1-5: 1-5: 1-5.
  • the PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and PGC1—a activity promoting material may be mixed in a ratio of 1-2: 1-2: 1-2.
  • composition according to one aspect of the present invention is applicable to humans as well as animals .
  • One aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a composition comprising a PPAR- ⁇ activity promoting substance, an AMPK activity promoting substance and a PGC1-a activity promoting substance as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition may be used as pharmaceutical preservatives such as preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifying accelerators, salts for osmotic control and / or laxatives and other therapeutically useful water. It may further contain the vagina and may be formulated in various oral or non-oral dosage forms according to conventional methods.
  • the oral dosage forms include, for example, tablets, pills, hard and soft accelerators, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, powders, powders, granules, granules, pellets, and the like.
  • active ingredients include, for example, tablets, pills, hard and soft accelerators, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, powders, powders, granules, granules, pellets, and the like.
  • surfactants e.g. lactose, dextrose, sucrose, manny, solbi, cellulose and glycine
  • glidants e.g. silica, talc, stearic acid and their magnesium or calcium Salts and polyethylene glycols.
  • Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyridine, where appropriate starch, agar, It may contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeteners such as alginic acid or its sodium salt.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyridine, where appropriate starch, agar, It may contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeteners such as alginic acid or its sodium salt.
  • binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyridine, where appropriate starch, agar, It may contain pharmaceutical additives such as disintegrants, absorbents, colorants, flavors, and sweeten
  • parenteral administration agent may be, for example, formulations such as injections, drops, ointments, lotions, gels, creams, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, and patches. It is not limited.
  • compositions according to the present invention may be administered by oral, parenteral, rectal, topical, transdermal, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous round.
  • the pharmaceutically acceptable dose of the active ingredient i.e., the dosage
  • the dosage is determined by the age, sex, weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration or the prescription. It will depend on your judgment. Dosage determination based on these factors is within the level of skill in the art. Typical dosages may be from 0.01 mg / kg / day to 2000 mg / kg / day, and may be from 1 mg / kg / day to 100 mg / kg / day, but the dosage may be in any way the present invention. It is not intended to limit the scope of.
  • the food composition may be a health food composition.
  • the formulation of the food or health food composition is not particularly limited, but may be, for example, formulated into tablets, granules, drinks, caramels, diet bars, tea tea bags, and the like.
  • those commonly used in the art may be selected by a person skilled in the art without difficulty according to the formulation or purpose of use. It can be blended and synergistic effect can occur when applied simultaneously with other raw materials. Determination of the dosage of the active ingredient is within the level of those skilled in the art, and its daily dosage may vary depending on various factors such as age, health condition, complications, etc. of the subject to be administered.
  • Another aspect of the present invention provides a PPAR- ⁇ activity promoting material, AMPK activity promoting material and
  • composition comprising a composition comprising a PGC1- ⁇ activity promoting substance as an active ingredient.
  • the cosmetic composition may be, for example, a cosmetic composition, the cosmetic appearance of which is cosmetically or dermatologically acceptable .
  • a cosmetic composition the cosmetic appearance of which is cosmetically or dermatologically acceptable .
  • All formulations suitable for topical application include, for example, emulsions obtained by dispersing the oil phase in solution, gels, solids, pasty anhydrides, water phases, emulsions obtained by dispersing the oil phase in water phases, multi-emulsions, suspensions, It may be provided in the form of an aerosol composition further containing microemulsion dogs, microcapsules, microgranules or ionic (liposomal) and nonionic vesicle dispersants, foams or compressed propellants. These compositions can be prepared according to conventional methods in the art.
  • Cosmetic compositions may include fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners, gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, silver or nonionic emulsifiers. , Layering agents, metal ion sequestrants, chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives 1, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in cosmetics It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic or dermatological fields such as. The adjuvant is introduced in an amount generally used in the cosmetic or dermatological fields.
  • the cosmetic composition is not particularly limited in dosage form, and may be appropriately selected in accordance with the intended purpose.
  • lotions, lotions, essences, creams, ointments, gels, packs, patches, sprays, powder foundations, emulsion foundations, concealed sticks, hand or foot lotions, hand or foot creams, hand or foot oils, hand or It may be prepared in one or more formulations selected from the group consisting of foot essences, hand or foot cleansers, soaps, cleansing creams, cleansing lotions, cleansing foams and cleansing water, but is not limited thereto.
  • Injin mugwort was grown in Cheongcheon-dong, Jecheon-si, Cheoncheongbuk-do, Korea, and 70 ml of ethane was added to 300 g of injin mugwort and stirred at 70 to 80 ° C. for 3 hours. After repeating this twice, the mixture was concentrated under reduced pressure using a filtrate-ol rotary vacuum concentrator filtered with a filter paper. After freeze drying to give 29 g of dry powder.
  • Astragalus generally purchased domestic products available on the market, Astragalus: 3
  • Example 1 was prepared by mixing the above-mentioned Injin mugwort extract, stone monocotyledonous extract and Astragalus extract in a ratio of 1: 1: 1, and EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract were 1: 1: 1.
  • Example 2 was prepared by mixing with.
  • PPAR- ⁇ Peroxisome pro- fer ator-act ivated receptor— ⁇
  • PPAR- ⁇ Peroxisome pro- fer ator-act ivated receptor— ⁇
  • the degree of adhesion to PPAR ' ⁇ -LBD was quantified by the fluorescence value.
  • the rooting root has excellent activity.
  • the PPAR- ⁇ -LBD ligand EC 50 value of Injin mugwort was confirmed to be 9 / ml.
  • AMPK AMP ⁇ activated protein
  • C2C12 immature myocytes were produced by the American Tissue Culture Collection (ATCC).
  • FBS fetal bovine serum
  • the natural product dissolved in DMS0 was treated at a concentration of 200 // g / ml for 24 hours.
  • Centrifugation is performed at 15,000 g of gravity acceleration, and the supernatant is collected.
  • Results of the six kinds of plants excellent in the AMPK activity effect among the natural products tested are shown in FIG. 2. From FIG. 2, it can be seen that the cells treated with the monocotyledonous, Wenzhou, and Echo herb have an excellent effect of increasing the phosphorylation of AMPK compared to other cells.
  • the promoter activation effect was evaluated.
  • the APRDC PGC1- ⁇ promoter cell line is a human liver cell line (Accession No. KCTC 11218BP) stably expressing a vector in which the promoter of the PGC1- ⁇ promoter and the luciferase gene are genetically fused.
  • FIG. 3 shows the results of several natural products having excellent APRDC PGC1- ⁇ promoter activity effects among the natural products.
  • the treatment of Astragalus, Gallium, and Blank writing showed a stronger response in the degree of color development of fluorescence color than in the case of treatment with other substances as well as the negative control treated with DMS0. .
  • PKC1- ⁇ promoter activation promoting effect of Astragalus, browning, and tangerine is excellent.
  • C2C12 immature muscle cells were prepared from the American Tissue Culture Collection (ATCC). 5% C0 until 7M confluent with medium exchange once per DMEKDulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) medium containing 1M fetal bovine serum (FBS) Incubated in 2 incubators. Differentiation into muscle cells was induced by culture in medium containing 2% horse serum (HS). Muscle cells incubated for 4 days in a medium containing 2% HSChorse serum) were treated with a mixture of 200 g / ml each of Injin mugwort extract, monocotyledonous extract, and Astragalus extract. As a negative control, DMS0 was treated with 1/1000 of the medium volume.
  • ATCC American Tissue Culture Collection
  • FBS fetal bovine serum
  • the experimental mice were run on a treadmill at a speed of 15 m / min to measure exercise duration.
  • the measurement result is shown in FIG. Referring to Figure 5, the groups administered with the mixture of dodol leaf extract, jinjin mugwort extract and Astragalus extract or a mixture of dodol leaf extract, EPA and Astragalus extract compared to the negative control group or the group treated alone did not exercise time About 70% increase.
  • the weight of the epididymal fat is as shown in Figure 7, the group administered with a mixture of dolsop leaf extract, jinjin wormwood extract and Astragalus extract or a mixture of dolsapex extract, EPA and Astragalus extract is not a negative control or 34% and 36% reduction, respectively, compared to the group treated alone.
  • Blood glucose was measured using an Accu-Check Active kit (Roche-diagnostics, Seoul, Korea).
  • the blood glucose and triglyceride concentrations were not administered by the group administered with the mixture of the extract of the monocotyledonous extract, phosphorus mugwort extract and Astragalus extract or the mixture of the extract of the monocotyledonous extract, EPA and Astragalus extract. It was significantly reduced compared to the negative control or the group treated with alone.
  • Plasma Blood was collected in an anti-unggo tube and centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes to separate plasma. Plasma was diluted 20, 000-fold and the amount of adiponectin expressed was measured using a mouse adiponectin quant ikine kit (R & D system). The concentration of insulin was measured using a mouse insulin quant ikine kit (R & D system) after diluting the plasma 20, 000 times. The measurement results are shown in FIG. 9.
  • a negative control group not treated by a group administered with a mixture of a monocotyledonous extract, Injin mugwort extract, and Astragalus extract or a mixture of a monocotyledonous extract, EPA and Astragalus extract, or Insulin concentration was increased by about 50% compared to that of the group administered with the mixture of Dolberry leaf extract, Injin mugwort extract and Astragalus extract, or a combination of Dolberry leaf extract, EPA and Astragalus extract, 60% and 55% reduction, respectively, compared to the treated group.
  • a combination of substances that activate the three mechanisms of PPAR— ⁇ , ⁇ , and PGCl- ⁇ , respectively, increases adiponectin concentration, a protein hormone involved in blood sugar control and fatty acid metabolism, and decreases insulin concentration.
  • the decrease in insulin here means that blood sugar is kept low.
  • C57BL / 6 males were purchased and 10 experimental mice were prepared for each group. 200 mg / kg of each leaf extract, Ingerium mugwort extract, Astragalus extract or EPA alone, Injin mugwort extract, Asteraceae extract and Astragalus extract, or EPA, Astragalus extract and Astragalus extract was administered orally once a day for 8 weeks, and then fasted from 12 hours before necropsy.
  • mice Five-week-old C57BL / 6 males were purchased to prepare 10 experimental mice for each group. 200 mg / kg of each of the extracts of monocotyledonous extract, Injin mugwort extract, Astragalus extract or EPA alone, a mixture of Injin mugwort extract, monocotyledonous extract and Astragalus extract, or a mixture of EPA, monocotyledonous extract and Astragalus extract After oral administration once a day for 8 weeks, triglycerides in liver tissues were evaluated. Experimental mice were fasted 12 hours before necropsy.
  • Liver tissues of the experimental mice were extracted and frozen in liquid nitrogen.
  • the frozen tissue was cut into 10 m thick using cryotome, followed by 0. Oil red 0 (0—0625, Sigma- Aldrich, USA) propylene glycol (031301, Samchun pure) chemical Co. Ltd. , Korea) was reacted at 60 ° C for 8 minutes, and then reacted with 85% propylene glycol for 2 minutes. It was then rinsed in running water for 1 minute, contrast stained with Maier's hematoxyl in (10029273, DAK0, USA) and observed under an optical microscope. The results are shown in FIG. .
  • mice Five-week-old C57BL / 6 males were purchased to prepare 10 experimental mice for each group. 200 mg / kg of each of the monocotyledonous extract, Injin mugwort extract, Astragalus extract or EPA alone, or a mixture of Injin mugwort extract, Astragalus extract and Astragalus extract, or a mixture of EPA, Astragalus extract and Astragalus extract After oral administration once a day for 8 weeks, the fat globules of brown adipose tissue were evaluated. Experimental mice were fasted 12 hours before necropsy.
  • the group administered with the mixture of the stone monocotyledonous extract, Injin mugwort extract and Astragalus extract, or the group of a mixture of the monocotyledonous extract, EPA and Astragalus extract are treated with a negative control or not treated alone Compared with the group, the expression of each gene was increased by 2 times. Therefore, it can be seen that the administration of a combination of substances that activate three mechanisms of PPAR- ⁇ , AMP, and PGCl-ci, respectively, can promote fat and sugar metabolism in muscle.
  • each component is added to the purified water to dissolve it, and the lemon flavor is added to the appropriate amount.
  • the above components are mixed, and then purified water is added to adjust the total amount to 100 and layered into a brown bottle to prepare a liquid solution. do.
  • Vitamin B1 0.13 mg ⁇ i90> Vitamin B2 .... 0.15 mg
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixtures described above is a relatively suitable composition suitable for health foods in a preferred embodiment, but the composition ratio may be arbitrarily modified, and according to the conventional health food manufacturing method Then, the granules can be prepared and used for preparing the health food composition according to a conventional method.
  • the cream may be prepared according to a conventional method as shown in Table 3 below.

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Abstract

본 발명은 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGC1-α 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 근육 타입 변화 촉진, 근육량 증가, 근육 강 화, 운동 능력 향상, 지질 감소, 지질 축적 억제, 혈당 감소, 체중 조절 또는 체중 감소용 조성물을 제공한다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
근육 타입 변화를 촉진하는 조성물
【기술분야】
<1> 본 발명은 근육 타입의 변화를 촉진할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
<2> 유산소 운동에 의해 만들어진 근육은 1차 에너지원을 탄수화물에서 지방으로 바꿈으로써 체내 지방을 감소시킨다. 뿐만 아니라ᅳ 탄수화물을 덜 쓰게 하므로 혈 증 당 농도를 일정하게 하여 공복감을 덜 느끼게 하고， 탄수화물 대신 지방으로
ATP를 생성하므로 ATP 생성시 수반되는 활성 산소,를 적게 하여 활성 산소에 의한 세포 손상을 방지한다. 그러나 모든 운동이 이러한 효과를 나타내는 것은 아니다. 달리기， 자전거 타기를 예로 들 수 있는 유산소 운동이 우리 몸의 속근 타입 근육 을 지근 타입으로 바꾸기 때문에 위의 같은 효과를 나타내는 것이다.
<3> 우리 몸의 근육은 속근 (Type II)과 지근 (Type I)이 각각 50% 정도 존재한다. 속근은 미오글로빈 (Myoglobin)이 없어서 하얗게 보이는 근육 타입으로써 탄수화물 을 주 에너지원으로 사용한다. 주로 웨이트트레이닝 같은 무산소 운동에 의해 생성 되는 근육 타입이고， 큰.부피를 가지며, 빠르게 움직일 때 사용된다. 이에 비해 지 근은 미오글로빈이 존재하여 붉게 보이며, 탄수화물 대신 지방을 주 에너지원으로 사용한다.ᅳ주로 유산소 운동에 의해 생성되며 , 작은 부피를 가지고， 천천히 장시간 움직일 때 사용된다. 지근에는 미토콘드리아의 수가 많고 활성이 높아 피로에 대한 저항력이 높으므로 장시간 동안 운동을 가능하게 한다. ᅵ
<4> 일반적으로 단거리 선수들은 속근:지근의 비율이 약 70:30 이며 상체가 발달 된 체형을 가지게 된다. 이에 반해 마라토너들은 일반적으로 속근:지근이 약 30:70 의 비율로ᅵ 존재하며, 전체적으로 마른 체형을 가지게 된다ᅳ 마라토너들은 같은 체 중을 갖는 일반인 (속근：지근 = 약 50:50)에 비해 5배 가량 작은 사이즈를 가지게 되 는데 이것은 근육이 같은 무게의 지방에 비해 5배 가량 작은 부피를 가지기 때문이 다. 유산소 운동에 의해 마라토너와 같은 체형을 가지기 위해서는 최대 심박수 기 준으로 65~75¾의 강도의 운동을 하루 40분 이상 주 3회 이상, 6주 이상 수행해야 하는데, 이는 결코 쉽지 않다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
<5> . 본 발명은 근육 타입 변화 촉진， 근육량 증가, 근육 강화, 운동 능력 향상， 지질 감소， 지질 축적 억제， 혈당 감소, 체중 조절 또는 체중 감소용 조성물을 제 공하고자 한다.
【기술적 해결방법】
<6> 본 발명의 일측면에 따른 근육 타입 변화 촉진, 근육량 증가, 근육 강화, 운 동 능력 향상， 지질 감소， 지질 축적 억제， 혈당 감소, 체중 조절 또는 체중 감소 용 조성물은 PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 촉진 물질 , AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1— a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1- a ) 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함한다.
【유리한 효과】
<7> 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 PPAR-δ (Peroxisome prol i ferator- act ivated receptor- δ ) 활성 촉진 물질， AMPK( AMP act ivated protein kinase) 활 성 족진 물질 및 PGC1- a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1- a ) 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 것으로 , 근육 타입 변화 촉진, 근육량 증가, 근육.강화， 운동 능력 향상， 지질 감소, 지질 축적 억게， 혈당 감소， 체중 조절 또는 체중 감소의 효과를 나타낸다.
[도면의 간단한 설명】
<8> 도 1은 22종의 천연물 추출물들이 PPAR-δ의 LBD에 붙는 정도를 형광값으로 나타낸 그래프이다.
<9> 도 2는 단삼, 당귀, 비파엽, 돌외잎， 온주, 어성초 추출물들을 근육 세포에
24시간 처리하였을 때 AMPK 단백질의 인산화 정도를 나타낸 것이다.
<]0> 도 3은 황기 추출물을 비롯한 여러 천연물 추출물들이 PGCl-a 프로모터를 활성화시켜 루시퍼라아제를 발현시키는 정도를 나타낸 그래프이다
<n> 도 4는 200 /ml의 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물을 비롯한 여러 물질들을 단독 또는 흔합하여 근육 세포에 처리한 후 유전자 CPTlp , PDK4, PGCl-a의 발현 정도를 음성 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다 (돌인황 ： 돌외잎 추출물 + 인진쑥 추출물 + 황기 추출물， 돌이황 ： 돌외잎 추출물 + EPA + 황기 추출물， 돌이피 ： 돌외잎 추출물 + EPA + 피노틴 (잣추출물)， 온인황 : 온주 추출물 + 인진쑥 추출물 + 황기 추출물， 온이황 ： 온주 추출물 + EPA + 황기 추출 물, 온이피 ： 온주 추출물 + EPA + 피노틴 (잣추출물), 돌인피 ： 돌외잎 추출물 + 인진쑥 추출물 + 피노틴 (잣추출물), 온인피 ： 온주 추출물 + 인진쑥 추출물 + 피노 틴 (잣추출물)， 키이피 ： 키토올리고당 + EPA + 피노틴 (잣추출물)， 레이피 ： 레즈베 라트를 + EPA + 피노틴 (잣추출물)， 키인황 ： 키토올리고당 + 인진쑥 추출물 + 황기 추출물, 키이황 ： 키토올리고당 + EPA + 황기 추출물).
<12> 도 5는 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 운동 지속 시간을 나타낸 그래프이다.
<13> 도 6은 인진쑥 추출물, EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 체중 증가량을 나타낸 그래프이다.
<14> 도 7은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 부고환 무게를 나타낸 그래프이다.
<15> 도 8은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 종아리 뒷 근육 무게를 나타낸 그래프이다.
<|6> 도 9는 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 아디포넥틴 및 인슐린의 양을 음성 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다.
<17> 도 10은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 근육 타입을 나타낸 결과이다.
<18> 도 11은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 간 중성 지방 정도를 나타낸 결과이다.
<19> 도 12은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 갈색 지방 조직 지방구 크기를 나타낸 결과이다.
<2()> 도 13은 인진쑥 추출물， EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물 단독 또는 이의 흔합물 투여군들의 근육 세포에서의 CPTip , PDK4, PGCl- α 유전자들 발현 정도를 을성 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다.
【발명의 실시를 위한 형태】
<21> 본 명세서에서 "추출물"이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로 써 얻어진 물질이라면， 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출 해 낸 것， 천연물의 특정 성분， 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어 진 것 등을 모두 포함하는 광의의 개념이다.
<22> 본 명세서에서 "대사 "란 생물체가 몸 밖으로부터 섭취한 영양 물질을 몸 안 에서 분해하고， 합성하여 생체 성분이나 생명 활동에 쓰는 물질이나 에너지를 생성 하고 필요하지 않은 물질을 몸 밖으로 내보내는 작용을 말한다. 이러한 대사가 활 발하게 일어나는 경우 신체 에너지 소비가 늘어난다. <23>
<24> 이하에서, 본 발명을 상세하게 설명한다 .
<25> 퍼옥시좀 증식인자-활성화 수용체 델타 (Peroxisome proli ferator-act ivated receptor- δ )(PPARᅳ δ )는 근육과 갈색 지방 조직 등에서 발현되는 인자로서 , 이 전 사인자가 과발현된 생쥐는 지방 세포에서 지방산의 산화를 촉진하여 비만 (adiposity) 억제 효과를 보인다고 알려져 있다. 또한 PPAR- δ 활성화제는 CPT1|3 (Carnitine palmitoyltransferase I β)와 PDK4( Pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 4) 등의 단백질들의 발현을 증가시킴으로써, 골격 근육 세포의 신진 대사 속도를 증가시키고， 인슐린에 대한 민감도를 향상시키며ᅳ 지방 세포를 줄이고 염증 반웅을 억제하는 역할을 수행한다고 알려진 바 있다.
<26> AMPK(AMP-act ivated protein kinase)는 세포 내 AMP를 감지할 때 활성화되는 단백질로서 ATP를 소모하는 신호전달경로를 억제하고 ATP를 합성하는 신호전달경로 를 활성화하여 외부 스트레스로부터 세포를 보호하는 역할을 하는 대표적인 단백질 이다. 근육에서는 지방 합성을 억제하고 지방산 산화를 촉진하며， 간에서는 당신생 과정 (gkiconeogenesis)를 억제하여 당의 생성을 억제한다고 알려져 있다.
<27> 하지만 위의 PPAR— δ 및 ΑΜΡΚ을 활성화시키는 물질만으로는 근육을 속근 타 입에서 지근 타입으로 변화시키거나 지근 타입을 증가시키는 효과가 크지 않다. 특 히 근육이 완전히 발달된 성인에게서는 그 효과가 미미하다. 따라서 위의 PPAR-δ 및 ΑΜΡΚ를 활성화시키는 물질만으로는 근육량을 증가시키고, 근육을 강화하며, 체 내 지방을 감소시키고， 혈당을 낮추는 등의 유산소 운동 효과를 보기 어렵다.
<28> 유산소 운동을 할 때, 근육에서는 에너지 생산을 담당하는 소기관인 미토콘 드리아가 많이 증가한다. 미토콘드리아는 지방산 산화 (fatty acid oxidation)를 관 장하는 역할을 하고, 미토콘드리아의 지방산 산화가 촉진되면 ATP 에너지가 생성된 다. 이러한 지방산 산화를 관장하는 미토콘드리아의 수와 능력은 PGCl-α에 의해 조절된다.
<29>
<30> 본 발명의 일측면은 PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptorᅳ
δ) 활성 촉진 물질, AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGCl- α (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1— a ) 활 성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 근육 타입 변화 촉진， 근육량 증가， 근육 강화， 운동 능력 향상， 지칠 감소， 지질 축적 억제, 혈당 감소, 체중 조절 또는 체 중 감소용 조성물을 제공한다. <3i> 상기 PPAR— δ 활성 촉진 물질은 PPAR-δ에 붙어 그의 활성을 증가시킴으로써 근육 세포 내 지방 및 당 대사를 촉진하는 효소의 발현을 증가시키는 효능이 인정 된다. 상기 ΑΜΡΚ 활성 촉진 물질은 ΑΜΡΚ 단백질의 인산화를 촉진하여 에너지 대사 전반을 조절할 수 있다. 상기 PGCl- α 활성 촉진 물질은 PGCl-α의 프로모터에 작 용하여 PGCl-a 유전자 발현을 촉진함으로써 미토콘드리아 생합성을 증가시킬 수 있다.
<32>
<33> 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 PPAR-δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGC1— a 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함함으로써， 근육 타입의 변화 를 촉진시킬 수 있다. 상기 근육 타입 변화는 속근 타입에서 지근 타입으로의 변화 또는 지근 타입의 증가를 포함한다. 앞서 살펴본 바와 같이 , 근육 중 지근 타입의 근육이 많은 경우 지근이 속근에 비해 부피가 작으므로 동일한 체중을 갖더라도 외 부적으로 날씬해 보이는 효과가 있다. 또한 지근은 탄수화물 대신 지방을 주 에너 지원으로 사용하므로 체내 지질을 감소시키고 지질 축적을 억제한다. 또한 지근은 속근과 비교할 때 천천히 장시간 움직일 때 사용되는 근육이므로 지근이 많아지면 지구력이 향상될 수 있다.
<34> 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함함으로써， 체내 근육량을 증 가시키고, 근육을 강화하여 운동 능력 및 신진 대사 능력을 개선시킬 수 있다. 또 한 근육 세포에서 지방 및 당 대사에 관여하는 유전자들인 CPTip , PDK4, PGC1 a , GAPDH 등의 발현을 증가시킴으로써 체내 지질， 혈중 지질 및 혈당량을 낮추는 효과 를 가진다.
<35> 따라서 본 발명의 일측면에 따른 PPAR-δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물올 동물 또는 사 람에 적용하면 유산소 운동을 한 것과 유사한 효과가 나타날 수 있으며， 나아가 체 중 조절 및 체중 억제가 가능할 것이다.
<36>
<37> 본 발명의 일측면에 따른 조성물에서, 상기 PPAR-δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) . 활성 촉진 물질은 인간
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princeps) 추줄물, EPA(Eicosapentaenoic acid) , 호초 (早주, Piper is Nigri Fructus) 추출물， 그린 마테 (green mate, Ilex paraguariensis) 주줄물 및 갈근 {Pueraria 속 식물 뿌리) 추출물 중 하나 이상을 포함한다. 상기 EPA는 천연 PPAR- δ 리간드이다.
<38> 본 발명의 일측면에 따른 조성물에서, 상기 AMPK(AMP— activated protein kinase) 활성 촉진 물질은 돌^ Gynoste a pentaphyllwi)^ 추출물， 온주 Citrus unshiu Marked 추출물 및 ^^^ Houttuynia cor data Thunberg) 추출물 중 하나 이 상을 포함한다.
<39> 본 발명의 일측면에 따른 조성물에서， 상기 PGCl-α (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coact ivator 1— a ) 활성 촉진 물질은 황기 {Astragali Radix) 추출물, 갈화 (/ erar/a 속 식물 꽃) 추출물 및 빈귤 ( /s leiocarpa) 추출물 중 하나 이상을 포함한다.
<40>
<41> 본 발명의 일측면에서 상기 추출물들은 각 해당하는 천연물을 통상적인 방 법으로 추출하여 얻을 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서， 상기 추출물들은 각각 의 천연물을 물 또는 주정을 포함하는 유기 용매에서 가열하고 추출한 후, 여과 및 감압 농축하는 공정을 통해 수득되는 것일 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에 서, 상기 유기 용매는， 특별히 제한되는 것은 아니며， CrC^ 저급 알코올일 수 있 다ᅳ 상기 (：广(：5의 저급 알코올은, 예를 들어， 메탄올， 에탄을, 이소프로필알코올， η-프로필알코올， n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 흔합 용매일 수 있다.
<42>
<43> 본 발명의 일측면에 따른 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및
PGC1- Q 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물에서, 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-α 활성 촉진 물질은 조성물 전체 중량을 기초로 1 내지 80 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 PPAR- δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-α 활성 촉진 물질은 조성 물 전체 중량을 기초로 5 내지 60 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일 측면에서， 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉 진 물질은 조성물 전체 중량을 기초로 10 내지 30 중량 %로 포함될 수 있다. PPAR- δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질을 전체 조성 물 중량 대비 1 내지 80 중량 ¾의 범위로 사용할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나 타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으 며， 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절할 수 있다.
<44> 본 발명의 일측면에 따른 PPAR-δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-α 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물에서， 상기 PPAR— δ 활성 촉진 물질, ΑΜΡΚ 활성 촉진 물질 및 PGCl-α 활성 촉진 물질은 각각 조성물 전체 중량을 기초로 1 내지 30 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서， 상 기 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl- a 활성 촉진 물질은 각 각 조성물 전체 중량을 기초로 5 내지 20 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질은 각각 조성물 전체 중량을 기초로 5 내지 10 중량 %로 포함될 수 있다. PPAR- δ 활성 촉진 물질 AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질을 각각 전체 조성물 중량 대비 1 내지 30 중량 %의 범위로 사용할 경우 본 발명의 의 도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라， 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으몌 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절 할 수 있다.
<45> 본 발명의 일측면에 따른 PPAR-δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및
PGCl-a 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물에서， 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질은 1—10 ： 1-10 ： 1-10 의 비로 흔합될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서， 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물 질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질은 1—5 ： 1-5 ： 1-5의 비로 흔 합될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서， 상기 PPAR-δ 활성 촉진 물질， AMPK 활성 촉진 물질 및 PGC1— a 활성 촉진 물질은 1-2 ： 1-2 ： 1-2의 비로 흔합될 수 있다. PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGCl-a 활성 촉진 물질을 상기 비율로 흔합할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니 라， 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면 에서도 적절할 수 있다.
<46>
<47> 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 동물은 물론이고 인간에게도 적용 가능하 다,
<48>
<49> 본 발명의 일측면은 PPAR-δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및 PGC1- a 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제 공한다.
<50> 상기 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제， 삼투압 조 절을 위한 염 및 /또는 완층제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물 질을 추가로 함유할 수 있으며， 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비 경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.
<51> 상기 경구 투여제는 예를 들면， 정제， 환제， 경질 및 연질 갑셀제， 액제, 현 탁제, 유화제， 시럽제， 분제， 산제， 세립제， 과립제， 펠렛제 등이 있으며， 이들 제 형은 유효 성분 이외에 계면 활성제, 회석제 (예: 락토즈， 덱스트로즈, 수크로즈, 만니를, 솔비를， 셀를로오스 및 글리신), 활택제 (예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트， 전분 페이스트， 젤라틴， 트라가칸스, 메틸셀롤로오 스， 나트륨 카복시메틸셀를로오스 및 폴리비닐피를리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며 , 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡 수제, 착색제， 향미제， 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 흔합， 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
<52> 또한, 상기 비경구 투여제는 예를 들어, 주사제， 점적제, 연고, 로션， 겔, 크림， 스프레이, 현탁제, 유제， 좌제 (坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제 한되는 것은 아니다.
<53> 본 발명의 일실시예에' 따른 상기 약학 조성물은 경구 , 비경구， 직장, 국소 , 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 둥으로 투여될 수 있다.
<54> 또한 , 상기 유효 성분의 약제학적으로 허용 가능한 용량 , 즉 투여량은 치료 받을 대상의 연령， 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병 리 상태의 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 일반적인 투여량은 0.01 mg/kg/일 내지 2000 mg/kg/일이 될 수 있고, 1 mg/kg/일 내지 100 mg/kg/일이 될 수 있으나， 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아 니다.
<55>
<56> 본 발명의 다른 일측면은 PPARᅳ δ 활성 촉진 물질 , ΑΜΡΚ 활성 촉진 물질 및
PGC1- α 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 식품 조성물 을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강 식품 조성물일 수 있다.
<57> 상기 식품 또는 건강 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어， 정제， 과립제, 드링크쩨, 캐러멜, 다이어트바, 차 티백 등으로 제형화될 수 있다ᅳ 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용 되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며， 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다. <58> 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 투여하고자 하는 대상의 연령， 건강 상태， 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
<59>
<60> 본 발명의 다른 일측면은 PPAR-δ 활성 촉진 물질 , AMPK 활성 촉진 물질 및
PGC1- α 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 미용 조성물 을 제공한다.
<6ΐ> 상기 미용 조성물은 예를 들어 화장품 조성물일 수 있으며, 화장품의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용.가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소 적용에 적합한 모든 제형으로， 예를 들면， 용액， 겔， 고체, 반죽 무수 생성물, 수 상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀견, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀견, 멀티에 멀견， 현탁액 , 마이크로 에멀견 , 마이크로캡슐， 미세과립구 또는, 이온형 (리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제， 포말 (foam) 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따 라 제조될 수 있다.
<62> 미용 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제， 농축제, 겔화제, 연화제, 항 산화제， 현탁화제， 안정화제, 발포제 (foaming agent), 방향제， 계면 활성제, 물, 이은형 또는 비이온형 유화제, 층전제， 금속이온봉쇄제， 킬레이트화제, 보존제， 비 타민, 차단제， 습윤화제， 에센셜 오일, 염료, 안료， 친수성 또는 친유성 활성거 1, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보 조제는 화장품학 또는 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.
<63> 상기 미용 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제 형을 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어， 화장수, 로션， 에센스, 크림， 연고, 젤 ， 팩, 패치, 분무제， 파우더 파운데이션, 유탁액 파운데이션， 콘실 스틱， 핸드 또 는 풋 로션, 핸드 또는 풋 크림, 핸드 또는 풋 오일， 핸드 또는 풋 에센스, 핸드 또는 풋 세정제, 비누， 클렌징 크림， 클렌징 로션， 클렌징 폼 및 클렌징 워터로 이 루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
<64>
<65> 이하, 제조예， 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구 체적으로 설명한다. 그러나 이들 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해 를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 ■ 제조예， 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것은 아니다.
<66>
<67> [제조예 1] 인진쑥 추출물의 제조
<68> 인진쑥은 한국 층청북도 제천시 청천동에서 재배한 것을 구입하였으며, 인진 쑥 300 g에 70% 에탄을 3L를 가한 후 70 내지 80°C에서 3 시간 동안 교반하였다. 이를 2회 반복한 후， 여과지로 여과한 여과액올 회전 진공 농축기를 사용하여 감압 농축하였다. 이후 동결 건조하여 건조 분말 29 g을 수득하였다.
<69>
<70> [제조예 2] 돌외잎 추출물의 제조
<7i> 돌외잎 1kg을 분쇄한 후， 그 10배 가량의 물 또는 주정을 넣고 12~24 시간 동안 90~100°C에서 2~3회 반복 추출한 후 여과하였다. 이후 감압 농축하여 돌외잎 추출물을 제조하였다.
<72>
<73> [제조예 3] 황기 추출물의 제조
<74> 황기는 일반적으로 시장에서 구할 수 있는 국산 제품을 구입하였다, 황기: 3
차 증류수를 1:10의 비율로 섞고， 3시간 동안 약탕기에서 추출하였다. 이를 2회 반 복한 후， 여과지로 여과하여 추출물을 제조하였다. 여과액을 회전 진공 농축기로 감압 농축한 후, 동결 건조하고 건조 분말을 수득하여 황기 추출물을 제조하였다.
<75>
<76> [실시예]
<77> 상기에서 제조한 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물을 1:1:1의 비율로 흔합하여 실시예 1을 제조하고, EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물을 1:1:1의 비율로 흔합하여 실시예 2를 제조하였다.
<78>
<7 > [실험예 1] PPAR-δ 활성화 물질 스크리닝
<80> PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor— δ)는 이 단백질의
LBDdigand binding domain)에 리간드가 붙으면 활성화되어 다른 유전자들의 발현 을 조절하게 된다. 따라서， 이 전사 인자를 활성화시키는 물질은 LBD에 붙는 특성 을 가지고 있어야 한다. 이를 토대로 90여종의 식용 가능한 천연물을 대상으로 PPAR- δ 활성화 물질을 스크리닝하였다. <8i> 상기 천연물들을 DMS0(dimethyl sulfoxide)에 녹여 200， 100, 50 g/nil의 농
도로 하였으며, 분석 키트 (LanthaScreen TR-FRET Peroxisome Proliferator
Receptor delta Coactivator Assay kit； Invitrogen,CA)를 사용하여 상기 물질들의
PPARᅳ δ-LBD에 붙는 정도를 형광값으로 정량하였다. DMS0를 음성 대조군으로 사용
하였다. 실험한 천연물 증 PPAR-S-LBD에 붙는 정도가 우수한 22종의 천연물에 대
한 결과를 도 1에 나타내었다.
<82> 도 1에서 볼 수 있듯이, 그 중에서도 인진쑥, 호조, 그린 마테 (green mate),
갈근이 우수한 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있다. 그 중에서도 인진쑥의 PPAR- δ-LBD 리간드 EC50값은 9 /ml임을 확인하였다.
<83>
<84> [실험예 2] AMPK 활성화 물질 스크리닝
<85> 90여종의 식용 가능한 천연물을 대상으로 AMPK( AMPᅳ activated protein
kinase) 활성 효과 유무를 평가하고자 하기와 같은 실험을 실시하였다.
<86> C2C12 미성숙 근육세포는 ATCC(American Tissue Culture Collection, USA)로
부터 구입하여 준비하였다. 이를 10% 우태혈청 (fetal bovine serum; FBS)이 포함된
DMEM(Dulbecco' s modified Eagle' s Medium, Gibco 1210-0038) 배지에서 이틀에
한번씩 배지를 교환하면서 70% 컨플루언트 (confluent)할 때까지 '5% C02 배양기에서 배양하였다. 근육 세포로의 분화는 2% HSOiorse serum)을 포함한 배지에서 배양하
여 유도하였다. 2% HS(horse serum)를 포함한 배지에서 4일 동안 배양한 근육 세포
에 DMS0에 녹인 천연물을 200 //g/ml 농도로 24시간 동안 처리하였다.
<87> 양성 대조군으로 AMPK 활성제로 알려진 AICAR Cell Signaling Technology,
Inc. UK) 1ml를 처리하였다. 음성 대조군으로는 DMS0를 배지 부피의 1/1000로 처리
하였다. 24시간 후， 상기 세포를 PBS로 세척하고, 8M 우레아， 2% CHAPS(3-[(3- chloramidopropyl )-dimethylammonio]-l-propane-sul fonate) , 50mM
Dn(dithiothreitol), 2M 티오우레아， 2mM PMSF( phenyl methane sulfonyl
fluoride) 및 lOQig/ μΑ 류펩틴 ( leupeptine)을 포함하는 단백질 추출 완층 용액 200 ¬로 처리한 후， 10분 동안 상온에서 방치하였다. 그 후, 4°C에서 10분 동안
15,000g의 중력 가속도로 원심 분리를 수행하여， 상층액을 수거한 후， 바이오 -래드
단백질 염료 시약 (BIO-Rad Protein Dye Reagent TM)을 이용하여 단백질을 정량 하였
다. 100g의 단백질을 > SDS-PAGE를 이용하여 크기 별로 분리하고, 50V로 12시간
동안 PDF(BioRad)막에 블로팅하였다. 이러한 블롯을 5% 탈지 우유 용액으로 1시간
동안 블로킹시킨 후， 일차 항체로서 안티 -AMPK- a (Cell signaling), 안티-포스포 (phospho) AMPK-a(Cell signaling) 및 안티 -β-actin을 사용하였고, 이차 항체로 서 호스 래디쉬 퍼옥시다아제 (horse radish peroxidase)가 결합된 항체 (애머샴바이 오사이언스)를 반웅시킨 다음， ECUenhanced chemi luminescence) 키트 (애머샴바이 오사이언스)를 이용하여 발색시켰다. 반웅시킨 블롯을 X선 후지 필름에 감광시킨 후 현상하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 필름 상의 밴드를 파워룩 (PowerLook) 2100 XL (Umax)으로 스캐닝한 후, 이미지마스터 (ImageMaster) 2D 엘라이트 (Elite) (Amersham Bioscience) 이미지 분석 프로그램을 이용하여 분석하였다.
<88> 상기 실험한 천연물 중 AMPK 활성 효과가 우수한 6종의 식물에 대한 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2로부터， 그 중에서도 돌외잎, 온주, 어성초를 처리한 세포 가 다른 세포들에 비해 AMPK의 인산화를 증가시키는 효과가 뛰어나다는 것을 알 수 있다.
<89>
<90> [실험예 3] PGC1- α 활성화 물질 스크리닝
<9!> APRDC PGC1- α 프로모터 세포주를 이용하여 90종의 천연물에 대한 PGC1- α
프로모터 활성화 효과를 평가하였다. 상기 APRDC PGC1- α 프로모터 세포주는 PGC1— α의 프로모터와 루시퍼라제 유전자를 유전 공학적으로 융합시킨 백터가 안정적으 로 발현되는 인간 간 세포주 (수탁번호 KCTC 11218BP)이다.
<92> 먼저 APRDC PGC1- α 프로모터 세포주에 24시간 동안 DMS0에 녹인 90종의 천 연물을 200 /g/ml으로 처리한 다음, PBS(Phosphate buffered saline) 용액으로 2회 세척하고 루시퍼라제 분석 키트 (Steady Glo Luciferase assay system, Pr omega, Cat No. E2520)를 이용하여 리포터 유전자인 루시퍼라제 활성을 측정하였다. 루시 퍼라제 활성 측정은 반웅이 끝난 샘플을 96-웰 플레이트로 옮긴 후 형광 측정기 (Luminometer)를 이용하여 형광 발색 값을 측정하는 방법으로 이루어졌다. 음성 대 조군으로는 DMS0를 사용하였다.
<93> 상기 실험한 천연물 중 APRDC PGC1- α 프로모터 활성 효과가 우수한 몇몇 천 연물에 대한 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에 나타난 바와 같이, 황기， 갈화, 빈 글을 처리한 경우가 DMS0를 처리한 음성 대조군 뿐만 아니라 다른 물질들을 처리한 경우보다 형광 발색 값의 발색 정도에 있어 강한 반응을 나타내었다..이는 황기 , 갈화, 빈귤의 PGC1— α 프로모터 활성화 촉진 효과가 우수함을 의미한다.
<94>
<95> [실험예 4] 근육 세포에서의 유전자 발현 평가 (세포 수준)
<96> 상기에서 살펴 본 각각 PPAR- δ , AMPK 및 PGC1— α의 3가지 기전을 활성화시 키는 대표적인 물질, 즉 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물, 황기 추출물을 단독으로 처리했을 때 및 각각을 1:1:1로 섞은 흔합물을 처리했을 때 근육 세포에서 지방과 당 대사에 관여하는 유전자들의 발현 조절 효과를 측정하였다.
<97> C2C12 미성숙 근육세포는 ATCC(American Tissue Culture Collection, USA)로 부터 구입하여 준비하였다. 이를 1M 우태혈청 (fetal bovine serum; FBS)이 포함된 DMEKDulbecco' s modified Eagle' s Medium, Gibco 1210-0038) 배지에서 이를에 한번씩 배지를 교환하면서 7M 컨플루언트 (confluent)할 때까지 5% C02 배양기에서 배양하였다. 근육 세포로의 분화는 2% HS(horse serum)을 포함한 배지에서 배양하 여 유도하였다. 2% HSChorse serum)를 포함한 배지에서 4일 동안 배양한 근육 세포 에 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물, 황기 추출물 각 200 /g/ml씩을 흔합하여 또는 각각 단독으로 처리하였다. 음성 대조군으로는 DMS0를 배지 부피의 1/1000을 처리 하였다. 각 시료를 처리한 세포들을 37°C에서 24 시간 배양하고, 차가운 식염수로 2회 세척한 후， 트리졸 시약 (TRIzol agent , Invitrogen)으로 RNA를 추출하였다. 상 기에서 추출하여 정량한 1 /≠^\ RNA와 역전사 시스템 (Promega)을 이용하여 cDNA 를 합성하였다.
<98> 합성된 cDNA와 CPT 3 , PDK4, PGC1 α , GAPDH의 각 유전자에 대해 미리 디자 인된 프라이머 (Primer)와 프루브 (probe) (Appl ied biosys terns; CPT1 β , Mm00487200_ml; PD 4, Mm00447181_ml； PGC1— a Mm00447181_ml; GAPDH, Mm99999915_ql)를 이용하여 각 유전자들의 발현 양상을 측정하였다. PCR 반웅과 분 석은 로터-진 3000 시스템 (Rotor-Gene 3000 system; Corbet t Research, Sydney, Australia)을 이용하였다ᅳ 상가실험 결과를 도 4에 나타내었다. . .
<99> 도 4에서 3가지 물질을 흔합 처리한 경우, 음성 대조군이나 각 물질을 단독 처리한 경우에 비해 CPTIP , PDK4, PGCl-α의 발현을 2배 이상 증가시키는 것을 확 인할 수 있다. 따라서 PPAR-δ , AMP 및 PGCl-a의 3가지 기전을 각각 활성화시키 는 물질을 흔합한 투여는 근육에서 지방 및 당 대사를 촉진할 수 있음을 알 수 있 다.
<100>
<ιοι> [실험예 5] 운동 지속 시간 평가
<102> (1) 실험 마우스 준비
<103> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 정상 식이군, 고지방 식이군 및 유산소 운동군을 구성하였다. 정상 식이군은 D12450B (10% fat, Research diet, Inc. , NJ, USA) 사료를 먹였고, 고지방 식이군은 D12492 (60% fat) 를 8주 동안 먹였다. 유산소 운동군은 고지방식이를 하면서 일주일에 5회， 40분씩 트레드밀 (15m/mim)을 이용하여 달리게 하였다. 실험군은 고지방식이와 함께 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물， 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 EPA, 돌외 잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 경구 투여하였다. 매주 1회 체 중과 사료량을 측정하였다.
<104> (2) 운동 지속 시간 측정
<105> 시험 물질 투여 8주 후, 실험 마우스를 15m/min 속도의 트레드밀에서 달리게 하여 운동 지속 시간을 측정하였다. 측정 결과는 도 5와 같다. 도 5를 보면, 돌외 잎 추출물， 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들은 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 운동 시간이 약 70% 증가하였다.
<106> 따라서 각각 PPAR— δ , ΑΜΡΚ 및 PGC1- α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 혼합한 투여는 장시간 운동을 가능하게 함을 알 수 있다.
<107>
<108> [실험예 6] 체중 및 각 조직 무게 측정 평가
<109> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물, 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 혼합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 경구 투여하였다. 한편, 실험 마우스는 부검하기 12시간 전부터 절식시켰다.
<ιιο> 시험 물질을 8주간 투여하면서 측정한 체중은 도 6과 같다. 도 6를 보면 돌 외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들은 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 체중이 각각 26%， 28% 감소하였다.
<ιπ> 부고환 지방의 무게는 도 7과 같으며, 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물 및 황 기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들은 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 각각 34%, 36% 감소하였다.
<Π2> 마우스의 종아리 뒷 근육 (plantaris muscle)을 분리하여 그 무게를 측정한 결과는 도 8과 같으며 , 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들은 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 약 55¾> 증가하였다.
따라서 각각 PPAR-δ , AMPK 및 PGCl-α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여는 체중 및 부고환 지방의 무게는 감소시키면서 , 근육량은 증가시킴을 알 수 있다.
[실험예 7] 혈액 분석
5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물， 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물， 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여 한 후 혈당， 혈청 내 중성 지방 및 콜레스테를 농도를 평가하기 위해 혈액 분석을 행하였다.
혈당은 아큐-책 액티브 키트 (Accu-Check Active kit) (Roche-diagnostics, Seoul, Korea)를 이용하여 측정하였다.
혈액을 3000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈청만 분리하였다. 분리된 혈청 내 중성 지방과 콜레스테를 농도를 비타랩 셀렉트라 이 분석기 (VITALAB Selectra E analyzer) (Vital Scientific, Dieren, The Nether lands)를 이용하여 분석하였다. 분석 결과는 아래 표 1과 같다.
【표 1】
Figure imgf000017_0001
<120>
<121> 표 1에서 볼 수 있듯이, 혈당 및 중성 지방 농도의 경우 돌외잎 추출물, 인 진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들이 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비 해.유의적으로 감소하였다.
<)22> 따라서 각각 PPAR-δ , AMP 및 PGCl-α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여는 혈당과 혈액 내 중성 지방을 낮추는 효과가 있음을 알 수 있다.
<123> <I24> [실험예 8] 아디포넥틴 및 인술린 농도 분석
<125> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물, 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물， 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의' 흔합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 혼합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여 한 후 아디포넥틴과 인슐린 농도를 측정하였다.
<126> 혈액을 항웅고 튜브에 채취하여 3000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장을 20， 000배 희석하고 마우스 아디포넥틴 퀀티킨 키트 (mouse adiponectin quant ikine kit: R&D system)를 이용하여 발현된 아디포넥틴의 양을 측정하였다. 인술린의 농도는 혈장을 20, 000배 희석하고， 마우스 인슐린 뭔티킨 키 트 (mouse insulin quant ikine kit： R&D system)를 이용하여 측정하였다. 측정 결과 는 도 9에 나타내었다.
<127> 아디포넥틴의 농도의 경우 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들이 투여하 지 않는 음성 대조군이나.단독으로 처리한 군에 비해 약 50% 증가하였으며， 인술린 농도의 경우 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들이 투여하지 않는 음성 대조군 이나 단독으로 처리한 군에 비해 각각 60%， 55% 감소하였다.
<128> 따라서 각각 PPAR— δ , ΑΜΡΚ 및 PGCl-α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여는 혈당 조절 및 지방산 대.사에 관여하는 단백질 호르몬인 아디포넥틴 농도를 증가시키고， 인슐린 농도를 감소시킴을 알 수 있다ᅳ 여기에서 인슐린이 감 소된다는 것은 혈당이 낮게 유지됨을 의미한다.
<129>
<130> [실험예 9] 근육 타입 변화 분석
<131> 시험 물질 투여 후 마우스의 근육 타입 변화를 평가하기 위해 5주령된
C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하였다. 시험 물 질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물, 황기 추출물 또는 EPA를 단 독으로， 인진쑥 추출물， 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여한 후 부검하기 12시간부터 절식시켰다.
<i32> 각 실험군의 종아리 뒷 근육 (plantaris muscle)을 취하여 액체 질소에서 동 결하였다. 동결된 조직을 cryotome을 이용하여 10 두께로 박절한 후 아세톤에서 10분 고정하고 PBS로 3회 세척하였다. 10% 우태아혈청을 포함하는 PBS로 2시간 블 로킹한 후, 항 -지근 타입 마이오신 (MyosinKabcam, Cambridge, UK) 항체를 1차 항 체로, 그리고 FTKX fluorescein isohiocyanate)가 결합된 항 -생쥐 IgG 항체 (Molecular Probes)를 2차 항체로 처리하였다. 이를 안티페이드 (Ant i-fade) 용액으 로 마운팅 (mounting)한 후 공초점 (confocal ) 현미경을 통해 분석하였다.
<133> 분석 결과는 도 10 및 아래 표 2에 나타내었다.
<134> 【표 2】
Figure imgf000019_0001
<135>
<136> 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출 물, EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들의 근육 조직에서, 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군의 근육 조직에 비해 지근 타입 마이오신이 약
2배 증가하였다. 이는 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 돌외잎 추출물, EPA 및 황기 추출물의 흔합물의 투여가 마우스의 근육 타입을 지근으로 변화시킴을 의미한다. 또한 이러한 근육 타입의 변화는 각각 PPAR— δ , ΑΜΡΚ 및 PGCl-α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여가 유산소 운동 와 유사한 근육 타입 변화 결과를 가져올 수 있음을 의미한다.
<137>
<138> [실험예 10] 간 조직의 중성 지방 분석
<139> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물， 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물， 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여 한 후 간 조직의 중성 지방을 평가하였다. 한편 실험 마우스는 부검하기 12시간 전 부터 절식시켰다.
<140> 실험 마우스의 간 조직을 적출하여 액체 질소에서 동결하였다 . 동결된 조직 을 cryotome을 이용하여 10 m 두께로 박절한 후 0. Oil red 0 (0—0625, Sigma- Aldrich, USA) 프로필렌 글라이콜 (propylene glycol ) (031301 , Samchun pure chemical Co. Ltd. , Korea)에 60 °C에서 8분간 반웅시킨 후, 85% 프로필렌 글라이 콜 (propylene glycol)에 2분간 반웅시켰다. 그 뒤 1분간 흐르는 물에 수세하고, 마 이어스 헤마토실린 (Mayer' s hematoxyl in) (10029273, DAK0, USA)을 이용하여 대조 염색한 후 광학 현미경 하에서 관찰하였다ᅳ 그 결과를 도 11에 나타내었다.
<141> 도 11에서 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌 외잎 추출물， EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들이 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 열게 나타나는 것으로 보아 조직에서의 중 성 지방이 현격히 감소한 것을 확인할 수 있다.
<142> 따라서 각각 PPAR-δ , AMPK 및 PGCl- α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여는 간 조직의 중성 지방을 감소시킴을 알 수 있다ᅳ
<143>
<144> [실험예 11] 갈색 지방 조직의 지방구 분석
<145> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물， 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로, 인진쑥 추출물, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여 한 후 갈색 지방 조직의 지방구를 평가하였다. 한편 실험 마우스는 부검하기 12시 간 전부터 절식시켰다ᅳ
<146> 각 실험군의 갈색 지방을 취하여 10% 중성 포르말린에 고정하였다. 파라핀 포매 과정을 거친 조직은 파라핀 포매 후 마이크로롬 (microtome)을 이용하여 3 두께로 박절한 후, Hematoxylin( 10029273, DAK0, USA) & Eosin(075K4346, Sigma- Aldrich, USAXH&M)을 이용하여 염색하고, 광학 현미경 하에서 관찰하였다. 그 결 과는 도 12에 나타내었다.
<147> 도 12를 보면， 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물, EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들이 투여하지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 갈색 지방 조직의 지방구 크기가 현격히 감 소한 것을 확인할 수 있다.
<148> 따라서 각각 PPAR— δ , AMPK 및 PGCl- α의 3가지 기전을 활성화시키는 물질을 흔합한 투여는 갈색 지방 조직의 지방구를 감소시킴을 알 수 있다.
<149>
<150> [실험예 12] 근육 세포에서의 유전자 발현 평가 (동물 수준)
<i5i> 5주령된 C57BL/6 수컷을 구입하여 각 군당 10마리씩의 실험 마우스를 준비하 였다. 시험 물질로 각 200 mg/kg씩의 돌외잎 추출물, 인진쑥 추출물， 황기 추출물 또는 EPA를 단독으로， 인진쑥 추출물， 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또 는 EPA, 돌외잎 추출물 및 황기 추출물의 흔합물을 하루에 1회씩 8주간 경구 투여 한 후 근육 세포에서의 유전자 발현 정도를 평가하였다ᅳ 한편 실험 마우스는 부검 하기 12시간 전부터 절식시켰다.
<152> 각 실험군의 근육을 분쇄한 후, 트리졸 시약 (TRIzol agent , Invitrogen)을 이용하여 RNA를 추출하였다. 상기에서 추출하여 정량한 1 g/ 의 RNA와 역전사 시 스템 (Promega)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA와 CPT13 , PDK4, PGC1 α , GAPDH 등의 각 유전자에 대해 미리 디자인된 프라이머 (Primer)와 프루브 (probe) (Applied biosys terns; CPT1, Mm00487200_ml； PDK4, Mm00447181_ml; PGC1- Q , Mm00447181_ml, GAPDH, Mm99999915_ql)를 이용하여 각 유전자들의 발현 양상을 측정하였다. PCR 반웅과 분석은 로터-진 3000 시스템 (Rotor-Gene 3000 system; Corbet t Research, Sydney, Australia)을 이용하였다. 상기 실험 결과는 도 13에 나타내었다. .
<153> 도 13에서 알 수 있듯이， 돌외잎 추출물， 인진쑥 추출물 및 황기 추출물의 흔합물 또는 돌외잎 추출물, EPA 및 황기 추출물의 흔합물을 투여한 군들은 투여하 지 않는 음성 대조군이나 단독으로 처리한 군에 비해 각 유전자들의 발현이 2배 정 도 증가하였다. 따라서 각각 PPAR-δ , AMP 및 PGCl-ci의 3가지 기전을 활성화시키 는 물질을 흔합한 투여는 근육에서 지방 및 당 대사를 촉진할 수 있음을 알 수 있 다.
<154>
<155> 이하 본 발명에 의한 PPAR— δ 활성 촉진 물질, AMPK 활성 촉진 물질 및
PGC1- α 활성 촉진 물질을 유효 성분으로 포함하는 조성물을 포함하는 약학 조성 물， 식품 조성물 및 미용 조성물의 제형예를 보다 세하게 설명하나, 약학 조성 물， 식품 조성물 및 미용 조성물은 여러 가지 제형으로 웅용 가능하고, 이는 본 발 명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. '
<156>
<157> [제형예 1] 정제의 제조
<158> 실시예 50 mg
<159> 옥수수전분 100 mg
<160> 유당 100 mg
<i6i> 스테아린산 마그네슘 2 mg <i62> 비타민 C 50 mg
<163> 상기의 성분들을 흔합한 후 통상의 정제 제조 방법에 따라 타정하여 정제를 제조한다.
<164>
<165> [제형예 2] 캅셀제의 제조
<166> 실시예 50 mg
<167> 옥수수전분 100 mg
<168> 유당 100 mg
<169> 스테아린산 마그네슘 2 mg
<170> 비타민 C 50 mg
<i7i> 세린 50 mg
<172> 통상의 캅셀제 제조 방법에 따라 상기의 성분을 흔합하고 젤라틴 캅샐에 층 전하여 캅셀제를 제조한다.
<173>
<174> [제형예 3] 액제의 제조
<175> 실시예 100 mg
<176> 이성화당 10 g
<177> 만니를 5 g
<178> 비타민 C 50 mg
<179> 세린 50 mg
<180> 유지 적량
<181> 정제수 잔량
<182> 통상의 액제 제조 방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 흔합한 후 정제수를 가하여 전체 100 로 조절하고 갈색병에 층진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
<183>
<184> [제형예 4] 건강 식품의 제조
<185> 실시예 1000 mg
<186> 비타민 흔합물 .
<187> 비타민 A 아세테이트 70 llg
<188> 비타민 E 1.0 mg
<189> 비타민 B1 0.13 mg <i90> 비타민 B2 .... 0.15 mg
<i9i> 비타민 B6 0.5 mg
<192> 비타민 Β12· ... 0.2 ng
<193> 비타민 C 10
<194> 비오틴 10 S
<195> 니코틴산아미드 7 mg
<196> 엽산 50 /g
<197> 판토텐산 칼슘. 0.5 mg
<1 8> 무기질 흔합물
<199> 황산제 1철 1.75 mg
Figure imgf000023_0001
<201> 탄산마그네슘.. 25.3 mg
<202> 제 1인산칼륨.ᅳ . ..15 mg
<203> 제 2인산칼슘.… ..55 mg
<204> 구연산칼륨.... ..90 mg
<205> 탄산칼슘 .100 mg
<206> 염화마그네슘.. 24.8 mg
<207> 상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강 식품에 적합한 성 분을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만， 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며， 통상의 건강 식품 제조 방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강 식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<208>
<20 > [제형예 5] 음료의 제조
<2io> 실시예 1000 mg
<2ΐι> 구연산 1000 mg
<212> 올리고당 100 g
<213> 매실농축액 2 g
<214> 타우린 1 g
<2i5> 정제수를 가하여 전체 1000 mi
통상의 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 약 1시간 동안 85 °C에서 교반 가열한다. 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2£용기에 취득한 후 밀 봉 멸균한 뒤 넁장 보관하여 본 발명의 음료 조성물 제조에 사용한다. <2I7>
<218> [제형예 6] 크림
<219> 하기 표 3과 같이 크림을 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다.
<220> 【표 3]
Figure imgf000024_0001
<221>

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1】
PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질， AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1- a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coactivator 1- a ) 활성 족진 물질을 유효 성분으로 포함하는 근육 타입 변화 촉진용 조성물.
【청구항 2]
제 1 항에 있어서,
상기 근육 타입 변화는 속근 타입에서 지근 타입으로의 변화 또는 지근 타입 의 증가를 포함하는 근육 타입 변화 촉진용 조성물.
【청구항 3】
PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질 , AMPI AMP— activated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1- a (Peroxisome prol if erator-act ivated receptor gamma coactivator 1_ a ) 활성 족진 물질을 유효 성분으로 포함하는 근육량 증가， 근육 강화 또는 운동 능력 향상용 조성물.
【청구항 4】
PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질 , AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1- a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coactivator 1— a ) 활성 족진 물질을 유.효 성분으로 포함하는 지질 감소， 지질 축적 억제 또는 혈당 감소용 조성물.
【청구항 5】
PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질 , AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1- a (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor gamma coactivator 1— a ) 활성 족진 물질을 유효 성분으로 포함하는 체중 조절 또는 체중 감소용 조성물.
【청구항 6】
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서ᅳ
상기 PPAR- δ (Peroxisome prol i ferator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질은 인진쑥 추출물， EPA(Eicosapentaenoic acid), 호조 추출물， 그린 마테 추출 물 및 갈근 추출물 중 하나 이상인 조성물.
【청구항 7】
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질은 돌외잎 추출물, 온주 추출물 및 어성초 추출물 중 하나 이상인 조성물.
【청구항 8】
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서 ,
상기 PGC1- a (Peroxisome prol i f erator-act ivated receptor gamma coactivator 1- a ) 활성 촉진 물질은 황기 추출물， 갈화 추출물 및 빈귤 추출물 중 하나 이상인 조성물.
【청구항 9】
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서，
PPAR- δ (Pero isome prol i f erator-act ivated receptor- δ ) 활성 족진 물질 , AMPK(AMP-act ivated protein kinase) 활성 촉진 물질 및 PGC1— a (Peroxisome prol i f erator-act ivated receptor gamma coactivator 1_ a ) 활성 족진 물질의 흔합 비는 1-10 ： 1-10 ： 1—10인 조성물.
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