【명세서】
【발명의 명칭】
푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 포함하는 백모 또는 백반증 예 방 및 치료용 조성물
【기술분야】
<1> 백모 또는 백반증 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
<2> 일반적으로 노화가 진행되면서 자라나는 백모는 노령이라는 인상을 강하게 주기 때문에 , 생성된 백모를 감추기 위하여 이를 검게 염색하는 염색제가 많이 연 구되어 왔다. 그러나 염색은 일시적인 방법에 불과하므로 백모가 자라나면 다시 염 색해야 하고, 현재 널리 사용되고 있는 산화형 흑발 염색제는 산화제 등을 포함하 므로 피부에 손상을 주는 단점이 있다.
<3> 백모 억제제로서, 검은깨, 호두살, 한련초 , 꿀에 보조 성분으로 숙지황, 천 문동, 맥문동을 배합하여 사용하거나, 적하수오, 측백나무잎, 여정자, 한련초, 석 염, 숙지황, 천문동, 맥문동, 검정콩을 함께 용기에 넣은 후 5(rc에서 끓인 액을 사용하기도 한다. 또는 검정깨, 혹송잎, 다시마를 사용하거나, 오갈피추출 액기스, 뇌하수체 호르몬, C— AMP (사이클릭 아데노신 모노포스페이트) 또는 비타민 D3을 사 용하기도 하나, 체감할 수 있는 효과는 그리 크지 않다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
<4> 본 발명은 백모 또는 백반증을 예방 및 치료하는 조성물을 제공하고자 한다.
【기술적 해결방법】
<5> 본 발명의 일측면에 따른 백모 예방 및 치료용 조성물은 푸에라리아
(Pueraria) 속 식물 추출물을 유효 성분으로 포함한다.
<6> 본 발명의 다른 일측면에 따른 백반증 예방 및 치료용 조성물은 푸에라리아
(Pueraria) 속 식물 추출물을 유효 성분으로 포함한다.
<7> 본 발명의 일측면에 따른 백모 예방 및 치료용 조성물은 푸에라린 (puerarin) 을 유효 성분으로 포함한다.
<8> 본 발명의 다른 일측면에 따른 백반증 예방 및 치료용 조성물은 푸에라린
(puerarin)을 유효 성분으로 포함한다.
【유리한 효과】
<9> 본 발명의 일축면에 따론 조성물은 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라 린을 유효 성분으로 포함하는 것으로, 멜라노사이트의 MITF(Microphthalmia- associated Transcription Factor) 발현을 증가시켜 멜라노사이트를 활성화시키고 멜라닌 합성을 촉진함으로써 백모또는 백반증을 예방 및 치료하는 효과를 가진다. 【도면의 간단한 설명】
<ιο> 도 1은 실험예 1에서 푸에라린의 멜라닌 합성 효과를 양성 대조군 및 음성 대조군과 비교하여 평가한 결과 그래프이다.
<ιι> 도 2는 실험예 2에서 백모 유도 마우스 모델에 음성 대조군, 푸에라린 및 푸 에라리아 속 식물 추출물을 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다 (*: p<0.1, **: p<0.05).
<12> 도 3은 실험예 3에서 백모유도 수컷 마우스 모델에 양성 대조군, 음성 대조 군 및 0.5%와 1% 푸에라린을 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다 (*: ρθ.1).
<13> 도 4은 실험예 3에서 백모 유도 암컷 마우스 모델에 양성 대조군, 음성 대조 군 및 0.5%와 1% 푸에라린을 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다 (*: p<0.1, **: p<0.05).
<14> 도 5는 실험예 3에서 양성 대조군, 음성 대조군 및 0.5%와 1%푸에라린을 도 포한 후 자라난 마우스 모발의 모습을 촬영한 사진이다. (a)와 (b)는 수컷 마우스 와 암컷 마우스에 각각 음성 대조군을 도포, (c)와 (d)는 수컷 마우스와 암컷 마우 스에 각각 0.5% 푸에라린 조성물을 도포, (e)와 (f)는 수컷 마우스와 암컷 마우스 에 각각 푸에라린 조성물을 도포, (g)와 (h)은 수컷 마우스와 암컷 마우스에 각 각 양성 대조군을 도포한 결과를 나타낸다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
<15> 본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로 서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
<16> 또한 본 명세서에서 "모발 11은 체모 (體毛)와 두발 (頭髮)올 총칭하는 것으로 헤어 (hair)로도 기재될 수 있다. 또한 상기 모발은 사람 및 동물의 것을 모두 포함 한다.
<17> 본 명세서에서 추출물 "이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로 써 얻어진 물질이라면, 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다.
예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출 해 낸 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어 진 것 등을모두포함하는 광의의 개념이다.
<18>
<19> 이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
<20> 백모는 멜라노사이트의 즐기세포 소실 및 멜라노사이트의 활성 저하에 의해 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히 노화로 인한 백모는 주로 줄기세포의 소실에 의하여 발생하고, 새치를 포함한 백모 발생은 현대 사회의 환경적, 정신적인 스트 레스로 인한 멜라노사이트의 활성 저하에 의한다고 알려져 있다 .
<21>
<22> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 0¾e a /a) 속 식물 추출물은 콩과
(ᅳ Leg画 inosae)^ 푸에라리아 G¾erar/a) 속에 일반적으로 속하는 식물의 추출물을 포함하는 푸에라리아 (/ /erar/a) 속 식물 추출물 중에서 선택된 하나 이상의 추출물 을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸에라리아 0¾ers a) 속 식물 추출물 은 푸에라리아 미리피카 (P. mirifica), 푸에라리아 투베로사 디씨 (P. tuberosa (Roxb.ex filld.) DCJ, 푸에라리아 쓴소니 벤쓰 (P. thomsonii Benth), 푸에라리 아 썬버기아나 벤쓰 ueraria thunbergiana Benth) , 푸에라리아 페던쿨라리스 (Ρ. peduncular is Grah), 푸에라리아 오메이엔시스 '왕 이티 탕 (P. one i ens is Fang et Tang), 푸에라리아 파세오로이데스 벤쓰 (P. phaseoloides (Roxb.) Benth) , 푸에라 리아 몬타나 메르 (ρ· montana (Lour.) Merr) 및 푸에라리아 에두리스 팜프 (P. edulis Pamp) 추출물올 포함하는 푸에라리아 (A/erar/ ) 속 식물 추출물 중에서 선 택된 하나 이상의 추출물을 포함한다.
<23> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물은 상기 푸에라리아 속 식물을 통상적인 방법으로 추출하여 얻을 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물은 푸에라리아 속 식물을, 물 또는 알코올을 포함하는 유기 용매를 사용하여 온도, 압력을 조절함으로써 추출함을 통해 얻을 수 있다. 일 실시예에서, 상기 유기 용매는, 특별히 제한되는 것은 아니며, (:广^의 저급 알코을 일 수 있다. 상기 d-Cs의 저급 알코올은, 예를 들어, 메탄올, 에탄을, 이소프로필 알코올, n-프로필알코을, n-부탄을 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느하나또는둘 이상의 흔합용매일 수 있다.
<24> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물은 미로에스테를
(miroesterol) , 다이드진 (daidzin) , 다이드제인 (daidzein) , 제니스틴 (genistin), 제니스테인 (genistein), 푸에라린 (puerarin), 베타 -시토스테롤 (beta-si tosterol), 스티그마스테를 (stigmasterol), 쿠메스테를 (coumesterol), 미리피쿠메스탄 (mirif icoumestan) , 미리피신 (mirif icin), 캄페스테를 (c卿 esteraol ) 또는 콱후린 (kwakhurin) 등의 성분을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물은 푸에라린을 유효 성분으로 포함한다.
<25>
<26> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라린 (Puerarin)은 이소플라본 (Isoflavone) 계 열 물질로, 다이드제인 (daidzein)의 8-글루코사이드 (glucoside) 형태의 배당체이 다.
<27> 상기 푸에라린의 화학식은 아래 화학식 1과 같이 나타낼 수 있으몌 화학명 은 다이드제인 -8— C-글루코피라노사이드 (Daidzein-8-C-glucopyranoside) , 8-C-베타- D-글루코피라노실 -4', 7-디하이드록시이소플라본 (8-C-beta-D-Glucopyranosyl-4' ,7- dihydroxyi sof 1 avone), 8-C-베타 -D-글루코피라노실ᅳ 7-하이드록시 -3-(4-하이드록시 페닐) -4H-1-벤조피란 -4-온 (8-C-beta-D-Glucopyranosyl— 7ᅳ hydroxy-3-(4- hydroxyphenyl)_4H— l_benzopyran— 4一 one)으로 표현될 수 있다.
<28> 【화학식 1】
<30>
<31> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라린은 천연에서 얻거나 합성할 수 있다. 천연 에서는 주로 ^ Leg画 inosae) 푸에라리아 (/ erar/a) 속 근연 식물 뿌리에 존재한 다. 본 발명의 일측면에 따른 푸에라린은
푸에라리아 (Pueraria) 속에 속하는 식물에서 얻을 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸 에라린은 푸에라리아 미리피카 (P. wirifica), 푸에라리아 투베로사 디씨 (P. tuberosa (Roxb.ex Willd. ) DC), 푸에라리아 쓴소니 벤쓰 (P. thomsonii Benth) , 푸에라리아 썬버기아나 벤쓰 Pueraria thunbergiana Benth) , 푸에라리아 페던쿨라 리스 (P. peduncular is Grah), 푸에라리아 오메이엔시스 왕 이티 탕 (P. omeiensis Wang et Tang), 푸에라리아 파세오로이데스 벤쓰 (P. phaseoloides (Roxb.) Benth), 푸에라리아 몬타나 메르 (P. montana (Lour.) Merr), 푸에라리아 에두리스 팜프 (P. edulis Pamp)또는 푸에라리아 로바타 (P. lobata (Willd. ) Ohwi)를 포함 하는 푸에라리아 속 식물에서 얻을 수 있다.
<32>
<33> 멜라노사이트의 멜라닌 합성 활성은 MITF(Microplithalmia-associated
Transcription Factor)의 활성에 크게 영향을 받는데, 푸에라리아 속 식물 추출물
또는 푸에라린을 포함하는 조성물은 멜라노사이트의 MITF (Microphthalmia- associated Transcription Factor) 발현을 촉진함으로써 멜라닌 생성을 촉진하는 효과를 가진다. 즉, 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸 에라린을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 멜라노사이트에서 MITF의 발현을 현저 히 상승시켜 멜라닌 합성을 유도함으로써, 백모 또는 백반증을 예방 및 치료할 수 있다.
<34> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분으로 포함하는 조성물에서, 상기 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린은 조성물 전체 중량을 기초로 0.1 내지 10 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분으로 포함하 는 조성물에서, 상기 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린은 조성물 전체 중 량을 기초로 0.1 내지 5 중량 %로 포함될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에 따 른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분으로 포함하는 조성물에 서, 상기 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린은 조성물 전체 중량을 기초로 0.1 내지 2.5 중량 %로 포함될 수 있다. 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린 을 전체 조성물 증량 대비 0.1 내지 10 중량 %의 범위로 사용할 경우 본 발명의 의 도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 축면에서도 상기 범위로 사용하는 것이 적절 할 수 있다.
<35> 본 발명의 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 모발 또는 두피에 도포하는 것일 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분으로 포 함하는 조성물은 피부에 도포하는 것일 수 있다.
<36>
<37> 본 발명의 일측면은 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분 으로 포함하는 조성물을 포함하는 미용 조성물을 제공한다. 상기 미용 조성물은 화 장료 조성물일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부 과학적으로 허 용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다 . 이는 국소 적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀 견 , 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀견 , 멀티 에멀젼 , 현탁액, 마이크로 에멀견, 마이크로 캡술, 미세 과립구 또는, 이은형 (리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의
형태로, 또는 크림 , 스킨 , 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 클렌져 또는 콘실 스틱 의 형태로 제공될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 포말 (foam)의 형태, 압 축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태 또는 패치 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
<38> 상기 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 함유하는 것도 무방하몌 본 발명의 유효 성분 이외에 다른 성분올 기타 화장료 조성물의 제 형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
<39> ' 예컨대, 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 액기스로 이루어진 군 에서 선택된 물질올 포함할 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 화장료 조성물은 상 기 유효 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되는 다른 성분을 포함할 수 있고, 이의 예로서 유지 성분, 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 유 기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제 , 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한 (制汗)제, 정제 수 등을 들 수 있다. 상기 화장료 조성물에 포함될 수 있는 기타 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니고, 또한 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상 시키지 않는 범위 내에서 가능하다.
<40> 상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다. 예를 들에 유연 화장수, 영양 화장수, 에센스, 영양 크림, 마사지 크림, 팩, 젤, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 립스틱, 패치, 분무제 아이 크림, 아이 에센스, 클렌징 크림, 클렌징 품, 클렌징 워터, 클 렌져, 모발 샴푸, 모발 컨디셔닝, 모발 트리트먼트, 모발 에센스, 모발 로션, 두피 헤어토닉, 두피 에센스, 헤어젤 헤어 스프레이, 헤어팩, 바디 로션, 바디 크림, 바디 오일 및 바디 에센스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제 조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
<41>
<42> 본 발명의 일측면은 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린을 유효 성분 으로 포함하는 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한디-. 이러한 약학 조성물은 유효 성분 이외에 방부제, 안정회 -제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위
한 염 및 /또는 완층제 , 회석제 (예 : 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니를, 솔비 를, 셀를로오즈 또는 글리신), 활택제 (예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그 네슘 또는 칼슘염 또는 폴리에틸렌 글리콜), 결합제 (예: 마그네슘 알루미늄 실리케 이트, 전분 페이스트, 젤라틴 , 트라가칸스, 메틸셀를로오즈, 나트륨 카복시메틸셀 를로오즈 또는 폴리비닐피를리딘) 등의 약제학적 보조제 또는 기타 치료적으로 유 용한 물질을 추가로 포함할 수 있다. 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 다른 약제학 적 첨가제를 포함할 수 있다.
<43> 상기 약학 조성물은 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있타. 상기 비경구 투여제는 예를 들어, 점적제, 연고 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 (坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이 에 제한되는 것은 아니다.
<44> 본 발명의 일측면에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 국소, 경피 둥 으로 투여될 수 있다.
<45> 상기 유효 성분의 적용량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 일반적인 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 2000mg/kg/일, 보다 구체적으로 는 0.5mg/kg/일 내지 500mg/kg/일이다.
<46>
<47> 본 발명의 일측면은 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸에라린올 유효 성분 으로 포함하는 조성물을 포함하는 건강식품 조성물을 제공한다. 상기 건강식품 조 성물은 제형이 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립게, 드링크제, 캬라 멜, 다이어트바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 건강식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용 할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
【발명의 실시를 위한 형태】
<48> 이하, 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다.
그러나 이들 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 실험예에 의해 제한되는 것은 아니다.
<49>
<50> [실험예 1] 멜라닌 합성 촉진 효과 평가
<51> 푸에라린의 멜라닌 합성 촉진 효과를 평가하기 위해 먼저 멜란ᅳ에이 멜라노 사이트 (Melan-a nielanocytes)(5.0X104)를 24 웰 플레이트 (well plate)에 분주하고, 37 °C, 10% C02 분위기에서 밤새 배양한다. 10% FBS, TPA가 첨가된 RPMI 배지에 시험 물질인 ΙΟμΜ, 50μΜ, 및 ΙΟΟμΜ의 퓨에라린을 희석하여 처리한다. 음성 대조군으 로 컨트를 (CTL)과 양성 대조군으로 100 μΜ의 이소부틸메틸잔틴 (Isobutlymethylxanthine, IBMX)도 함께 처리하여 실험 한다. 5일 후 세포 내 멜라 닌을 IN NaOH으로 용해시키고 로우리 (Lawry)법으로 단백질을 정량한다. 405nm에서 흡광도를 측정하고 단백질 값으로 멜라닌 값을 보정 한다.
<52> 음성 대조군의 멜라닌 함량을 100으로 보았을 때 양성 대조군 및 각 험 물 질의 멜라닌 함량을 평가하여 도 1에 나타내었다.
<53> 도 1에서 블 수 있듯이, 푸에라린의 경우 음성 대조군에 비해 멜라닌의 함량 이 높아 멜라닌 합성 촉진 효과가 있음을 확인할 수 있으며, 또한 농도 의존적으로 멜라닌 합성을 촉진함을 알 수 있다.
<54>
<55> [실험예 2] 푸에라리아 속 식물 추출물 및 푸에라린의 백모 방지 효과 평가
<56> 미국의 잭슨 랩 (The Jackson Lab)에서 구입한 백모 유도 마우스 를 이용한 백모 방지 효과 실험 방법은 다음과 같다. 상기 마우스는 시간이 흐를수록 모낭에서의 멜라닌 합성이 감소하여 모발의 백화가 진행되는 특징을 가진디-. 10주 령 된 상기 마우스 암컷을 마취한 후 모발을 제거 (epilation)하여 , 모낭의 주기를 성장기로 유도한다. 이 띠ᅵ, 모발을 제거하는 부위의 넓이는 각 개체마다 동일하게 조절한다. 모발을 뽑은 다음날부터 하루에 두 번씩 O.lmL의 시험 물질, 음성 대조 군을 각각 모발을 뽑은 부위에 도포한다. 이를 1주일에 5번씩 3주 동안 시행한다. <57> 상기에서 시험 물질로는 1%의 푸에라린 조성물, 각각 1¾의 푸에라리아 미리 피카 (P. mirifica) , 푸에라리아 투베로사 디씨 {P. tuberosa (Roxb. ex filld. ) DC), 푸에라리아 쏜소니 벤쓰 P. thomsonii Bentti) , 푸에라리아 썬버기아나 벤 쓰 {Pueraria thunbergi ana Bentti) , 푸에라리아 페던클라리스 CP. peduncular is Grali) , 푸에라리아 오메이엔시스 왕 이티 탕 ( . omeiensis ¥ang et Tang) , 푸에라 리아 파세오로이데스 벤쓰 P. phaseoloides (Roxb.) Bentli) , 푸에라리아 몬타나
메르 U3. won tana (Lour.) Merr) 및 푸에라리아 에두리스 팜프 P. edulis Painp) 추출물을 사용하며, 시험 물질의 운반체 (vehicle)로는 EtOH: 1,3-BG:DW = 3:2:5(부 피비)의 흔합물을 사용한다. 또한 상기 운반체를 음성 대조군으로 한다.
<58> 3주 후 시험 대상 마우스 각각의 시험 부위에서 모발을 뽑아 그 멜라닌 양을 측정한다. 단백질 가수분해 효소인 에스페라제 (Esperase, Novozyme 함유)를 포함한 트리스 버퍼 (Tris buffer)를 상기 모발에 처리하고 400nm 파장에서 흡광도를 측정 하면 멜라닌 양을 측정할 수 있다.
<59> 도 2는 백모 유도 마우스 모델에 음성 대조군 및 상기 각 시험 물질을 3주 동안 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다.
<60> 도 2에서 볼 수 있듯이, 푸에라린 및 푸에라리아 속 식물 추출물은 음성 대 조군에 비해 3주 후 모발의 멜라닌 함량이 높다. 따라서 이들은 백모 유도 마우스 모발의 멜라닌 함량을 높이고 백모를 억제하는 효과를 가짐을 확인할수 있다.
<61>
<62> [실험예 3] 푸에라린의 백모 방지 효과 평가
<63> 미국의 잭슨 랩 (The Jackson Lab)에서 구입한 백모 유도 마우스 를 이용하여 농도별 푸에라린의 백모 방지 효과를 평가하였다. 실험 방법은 상기 실험 예 2와 유사하다. 10주령 된 상기 마우스 수컷 및 암컷을 마취한 후 모발을 제거 (epilation)하여, 모낭의 주기를 성장기로 유도한다. 이 때, 모발을 제거하는 부위 의 넓이는 각 개체마다 동일하게 조절한다. 모발을 뽑은 다음날부터 하루에 두 번 씩 각 O.lniL의 시험 물질, 양성 및 음성 대조군을 모발을 뽑은 부위에 도포한다. 이를 1주일에 5번씩 3주 동안 시행한다.
<64> 상기에서 시험 물질로는 0.5% 및 W의 푸에라린 조성물을 사용하며 , 시험 물 질의 운반체 (vehicle)로는 EtOH: 1,3-BG:DW = 3:2:5(부피비)의 흔합물을 사용한다. 또한 상기 운반체를 음성 대조군으로 하고, 50mM의 IBMX(1.1¾)을 양성 대조군으로 한다.
<65> 3주 후 시험 대상 마우스를 수컷과 암컷으로 나눈 후 각각의 시험 부위에서 모발을 뽑아 그 멜라닌 양을 측정한다. 단백질 가수분해 효소인 에스페라제 (Esperase, Novozyme 함유)를 포함한 트리스 버퍼 (Tris buffer)를 상기 모발에 처 리하고 400nm 파장에서 흡광도를 측정하면 멜라닌 양을 측정할 수 있다.
<66> 도 3은 백모 유도 수컷 마우스 모델에 양성 대조군 (IBMX), 음성 대조군 및 시험 물질을 3주 동안 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다. 도 4는
백모 유도 암컷 마우스 모델에 양성 대조군, 음성 대조군 및 시험 물질을 3주 동안 도포한 후 멜라닌 함량을 측정한 결과 그래프이다. 도 5는 양성 대조군, 음성 대조. 군 및 시험 물질을 3주 동안 도포한 후 자라난 수컷과 암컷 마우스 모발의 모습을 촬영한 사진이다. 도 5에서 (a)와 (b)는 수컷 마우스와 암컷 마우스에 각각 음성 대조군을 도포, (c)와 (d)는 수컷 마우스와 암컷 마우스에 각각 0.5% 푸에라린 조 성물을 도포, (e)와 (f)는 수컷 마우스와 암컷 마우스에 각각 1% 푸에라린 조성물 을 도포, (g)와 (h)은 수컷 마우스와 암컷 마우스에 각각 양성 대조군을 도포한 결 과이다.
<67> 도 3 내지 도 5에서 볼 수 있듯이, 푸에라린은 수컷과 암컷을 불문하고 백모 유도 마우스 모발의 멜라닌 함량올 높이고 백모를 억제하는 효과를 가짐을 확인할 수 있다. 또한 푸에라린의 농도가 높을수록 그 효과가 높아지는 것을 알수 있다.
<68>
<69> 하기에 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 다른 여러 가지 제형으 로도 응용 가능하며, 이는 본 발명올 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명 하고자 함이다.
<70>
<71> [제형예 1] 모발샴푸
<72> 【'표 1】
[제형예 2] 모발 컨디셔닝
【표 2】
중량 % 염화세 ¾트리메팀암모뉴 (29%) 7.0 염화디스테아림디메팀암모뉴 (75%) 4.0 세토스테아림일"콜 3.5 폴리옥시에 ¾렌스테아림에테르 1.0 유동파라휘 2.0 프로필레_글리콜 1.5 푸에라리아 속 식물 추출물 또는 푸 0.1-2.5 에라리
조합향 적량 구여산 적량 정제수 잔량
[제형예 3] 두피 헤어토닉
【표 3】
[제형예 4] 두피 에센스
【표 4】
<82>
W
13
[제형예
【표 5】
[제형예 6] 로션
【표 6】
성분 중량 ¾> 푸에라리아속식물 추출물또는푸에라 0.1-2.5 린
이 ~ 4.0 폴리솜베이트 60 1.5 솜비탄세스퀴올레이트 1.5 유동파라핀 0.5 카프림릭 /카프릭트리글리세라이드 5.0 글리세린 3.0 부팀해금리콜 3.0 프로 ¾렌금리콜 3.0
[제형예 ] 정제
【표 7】
성분 증량 % 푸에라리아속식물 추출물또는푸에라 0.1-2.5 린
스테아린산 마그네슥 2.0 비타 1 C 2.0 옥수수 분 50.0 잔량