WO2010143423A1 - 糖尿病性腎症の検査方法 - Google Patents

糖尿病性腎症の検査方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2010143423A1
WO2010143423A1 PCT/JP2010/003837 JP2010003837W WO2010143423A1 WO 2010143423 A1 WO2010143423 A1 WO 2010143423A1 JP 2010003837 W JP2010003837 W JP 2010003837W WO 2010143423 A1 WO2010143423 A1 WO 2010143423A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
diabetic nephropathy
podocalyxin
urinary
urine
stage
Prior art date
Application number
PCT/JP2010/003837
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
原正則
斎藤亮彦
富野康日己
淺沼克彦
黒澤寛之
小笠原真也
平山吉朗
Original Assignee
国立大学法人 新潟大学
学校法人順天堂
デンカ生研株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人 新潟大学, 学校法人順天堂, デンカ生研株式会社 filed Critical 国立大学法人 新潟大学
Priority to JP2011518307A priority Critical patent/JP5759372B2/ja
Priority to US13/377,509 priority patent/US20120164667A1/en
Priority to EP10785955.5A priority patent/EP2442106B1/en
Publication of WO2010143423A1 publication Critical patent/WO2010143423A1/ja
Priority to US15/401,698 priority patent/US20170146554A1/en

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04Endocrine or metabolic disorders
    • G01N2800/042Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34Genitourinary disorders
    • G01N2800/347Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Definitions

  • the present invention relates to a test method for diabetic nephropathy including detection of podocalyxin in urine, and a reagent for test for diabetic nephropathy used in the test method, including an anti-podocalyxin antibody.
  • Diabetic nephropathy is one of the three major complications of diabetes and has recently become the leading cause of hemodialysis. Diabetic nephropathy develops when 10 years or more have passed since diabetes mellitus, diabetes is poorly controlled, and a hyperglycemic state continues for a long period of time. The glomerular filtration rate increases, the blood pressure in the glomerulus increases (glomerular hypertension), the permeability of plasma proteins from the glomerular capillaries increases, and albuminuria appears. As the disease progresses further, the glomerular basement membrane becomes rougher and larger proteins are excreted, resulting in proteinuria. When proteinuria is advanced, it becomes hypoproteinemia, and edema occurs in conjunction with a decrease in glomerular filtration function. As it progresses further, waste, water, and salt excretion in the body are impaired, leading to renal failure and eventually requiring hemodialysis or kidney transplantation.
  • the ratio and number of diabetic nephropathy patients as the causative disease of end stage renal failure is increasing year by year, and diagnosis and treatment of diabetic nephropathy has become a major issue.
  • the prognosis of dialysis patients with diabetic nephropathy is often poor, and the current situation is that dialysis therapy does not necessarily contribute greatly to the improvement of the patient's life prognosis and QOL.
  • clinical diagnosis of diabetic nephropathy has been made based on the knowledge of persistent proteinuria, renal dysfunction, hypertension, etc. associated with diabetes because renal biopsy is difficult.
  • treatment with persistent proteinuria is difficult and often leads to end stage renal failure after 5-6 years. Therefore, from the standpoint of clinical medicine, it is strongly desired to diagnose renal lesions early and perform early treatment before urine protein becomes positive by the usual urine test paper method.
  • Urinary albumin excretion (mg / gCre) can be determined by 100 ⁇ urine albumin concentration (mg / L) ⁇ urine creatinine concentration (mg / dL).
  • Urinary albumin excretion “ALB / Cre” is less than 30 mg / g Cre, stage I (early nephropathy), if less than 30-300 mg / g Cre, stage II (early nephropathy stage), 300 mg / g Cre The above cases correspond to stage III (apparent nephropathy stage).
  • stage I early nephropathy
  • stage II early nephropathy stage
  • the above cases correspond to stage III (apparent nephropathy stage).
  • stage III apparent nephropathy stage.
  • microalbumin which corresponds to stage II, pathologically mild to moderate and chronic lesions already existed, and the presence of nodular lesions is also known It's time. Therefore, diagnosis of urinary albumin cannot always determine true initial nephropathy, and an index for early diagnosis of diabetic nephropathy is required.
  • a method is disclosed in which von Willebrand factor cleaving enzyme is used as a diagnostic index instead of urinary albumin concentration (Patent Document 1). Specifically, by analyzing the amount of vWF using an immunological method for the amount or enzyme activity of von Willebrand factor cleaving enzyme, the prediction of the degree of progression of renal injury and the prognosis of diabetic nephropathy patients Means for making improvements are disclosed.
  • Podocalixin is a glycoprotein that exists on the surface of octopus podocytes (podocytes) constituting the kidney glomerulus and has a filtration function. Since podocytes are located on the Bowman's cavity side of the glomerular basement membrane and play an important role in the glomerular filtration mechanism, it is known that understanding the degree of podocyte damage is extremely important in kidney disease. (Non-Patent Document 1).
  • An object of the present invention is to provide a test method for discovering diabetic nephropathy earlier than the conventional method.
  • the present inventors have focused on the possibility of diabetic nephropathy when the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” is higher than that of a healthy person.
  • the present inventors have found that diabetic nephropathy can be examined by detecting.
  • this invention consists of the following. 1. A method for testing diabetic nephropathy, comprising detecting urinary podocalyxin. 2. 2. The examination method according to item 1 above, wherein the stage classification of diabetic nephropathy is at least stage I. 3. 3. The test method according to item 1 or 2, wherein the urinary podocalyxin level is determined to be diabetic nephropathy when the urinary podocalyxin level is higher than a reference value. 4). 4. The examination method according to item 3 above, wherein the reference value is an upper limit value of a 95% confidence interval of the urinary podocalyxin value of a healthy person. 5).
  • a reagent for testing diabetic nephropathy which is used in the testing method according to item 8 above, which comprises an anti-podocalyxin antibody for detecting urinary podocalyxin. 10.
  • a reagent kit for testing diabetic nephropathy which is used in the testing method according to the item 9, including a reagent for detecting urinary podocalyxin using an anti-podocalyxin antibody.
  • diabetic nephropathy By measuring urinary podocalyxin and carrying out the test method of the present invention, diabetic nephropathy can be detected early. According to the test method of the present invention, it is possible to classify patients who are classified as stage I (early nephropathy) according to urinary albumin excretion “ALB / Cre” into patients with a high risk of nephropathy. . Early detection of diabetic nephropathy by the test method of the present invention also leads to prevention of nephropathy progression. Further, the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” tends to increase with the progress of diabetic nephropathy, and the test method of the present invention makes it possible to grasp the pathological condition of diabetic nephropathy.
  • stage I early detection of diabetic nephropathy by the test method of the present invention also leads to prevention of nephropathy progression.
  • the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre”
  • the urinary podocalyxin excretion reflects the hyperfunctioning state of the glomerulus and the subsequent progressive disorder, it is possible to effectively diagnose active glomerular disorder.
  • the test method of the present invention it is considered that the pathological condition of diabetic nephropathy can be easily monitored, and the treatment policy and the like can be determined promptly.
  • Example 2 The figure which classified the urinary podocalyxin excretion amount "PCX / Cre" of patients with diabetes and diabetic nephropathy according to the stage classification of diabetic nephropathy is shown.
  • Example 2 The figure which classified the urinary podocalyxin excretion amount "PCX / Cre" of the diabetic and diabetic nephropathy patients except eGFR ⁇ 60 according to the stage classification of diabetic nephropathy is shown. (Example 2)
  • the present invention is characterized by testing for diabetic nephropathy by detecting urinary podocalyxin in a subject.
  • the urine sample may be obtained from any subject, but is preferably obtained from a patient suffering from diabetes. Diabetes may be diagnosed by a conventionally known means.
  • the method of collecting urine is not limited, but it is preferable to use early morning urine or occasional urine.
  • the amount of urine necessary for the test method of the present invention is about 10 to 200 ⁇ L.
  • the inspection method of the present invention may be performed at the same time as a general urinalysis such as a conventional health checkup, or by separately collecting urine from a subject suspected of having diabetes or a patient diagnosed with diabetes. May be.
  • inspection method of this invention may be performed in order to monitor the onset or progress of diabetic nephropathy about a diabetic patient.
  • the treatment of urine which is a specimen, can be performed by adding a treatment liquid to urine and mixing it.
  • the treatment solution may be any solution that can adjust the pH of urine, mask urine sediment, and solubilize podocalyxin, but preferably a chelating agent or a surfactant is added to the buffer solution.
  • the solution is exemplified.
  • the buffer solution and the chelating agent may be any known one, and the surfactant is preferably a nonionic surfactant.
  • the treatment solution include a solution containing 0.2 M EDTA and 2% (Vol./Vol.) Triton X-100 in 2MTES-NaOH (pH 7.0).
  • a urine sample solution can be obtained by adding 10 ⁇ L of the treatment liquid to 90 ⁇ L of the urine sample and mixing them.
  • Immunological methods include, for example, immunostaining (including fluorescent antibody method, enzyme antibody method, heavy metal labeled antibody method, radioisotope labeled antibody method), separation by electrophoresis and fluorescence, enzyme, radioisotope, etc. Combination with detection methods (including Western blotting and fluorescence two-dimensional electrophoresis), enzyme immunoassay adsorption (ELISA), dot blotting, latex agglutination (LA: Latex-Agglutination-Turbidimetric Immunoassay), immunochromatography, etc.
  • immunostaining including fluorescent antibody method, enzyme antibody method, heavy metal labeled antibody method, radioisotope labeled antibody method
  • separation by electrophoresis and fluorescence enzyme, radioisotope, etc.
  • detection methods including Western blotting and fluorescence two-dimensional electrophoresis
  • enzyme immunoassay adsorption (ELISA) enzyme immunoassay adsorption
  • LA Latex-Agglutin
  • the sandwich method a urine sample solution is added to a microtiter plate on which an anti-podocalyxin antibody is solid-phased to cause an antigen-antibody reaction, and then an enzyme-labeled anti-podocalyxin antibody is added to cause an antigen-antibody reaction, followed by washing. It is possible to react with the enzyme substrate and develop color, measure the absorbance, detect podocalyxin in urine, and calculate the urinary podocalyxin concentration.
  • the anti-podocalyxin antibody used in the immunological technique may be an antibody that can detect podocalyxin.
  • the anti-podocalyxin antibody used in the present invention may be a known antibody or an antibody developed in the future, and is not particularly limited. For example, a monoclonal / polyclonal antibody, a labeled antibody, a chimeric antibody, a human Antibodies and their binding active fragments.
  • the urinary podocalyxin value used in the present invention may be the urinary podocalyxin concentration, but the urinary podocalyxin concentration is corrected by the value of the urinary component stably excreted in the urine (urinary component value) It is desirable that As the urine component, urine creatinine is particularly preferable. Urinary creatinine is considered to be almost constant in any individual regardless of disease because creatinine production depends on muscle mass. In the examination of urinary excretion substances, in order to avoid errors in urine volume, a method of correcting the amount of urinary excretion substances by the amount per 1 g of creatinine is generally used. It becomes possible to compare the urinary excretion substances per hit.
  • a correction value obtained by correcting the urinary podocalyxin concentration with the urinary creatinine concentration is referred to as urinary podocalyxin excretion (PCX / Cre), and the urinary podocalyxin excretion can be calculated by the following equation.
  • the urinary podocalyxin value obtained by the test method of the present invention preferably the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” is higher than the reference value, it can be determined that the patient has diabetic nephropathy.
  • the reference value can be set as appropriate, and the urinary podocalyxin value, preferably the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre”, can be used.
  • Healthy individuals may include not only diabetic subjects but also diabetic patients who do not develop diabetic nephropathy, but preferably non-diabetic subjects are preferred, and not diabetic patients, Subjects with negative renal function markers are preferred. Examples of other renal function markers include estimated glomerular filtration rate (eGFR) and urine protein.
  • eGFR estimated glomerular filtration rate
  • the urinary podocalyxin value preferably the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” is obtained for a plurality of healthy persons, and the upper limit value of the 95% confidence interval of the urinary podocalyxin excretion amount is used as the reference value.
  • the 95% confidence interval can be obtained by a known method.
  • the urinary podocalyxin value of a healthy person is normally distributed, it can be obtained by the following formula.
  • 95% confidence interval mean of normal human urinary podocalyxin ⁇ t ⁇ standard deviation of normal human urinary podocalyxin value
  • t is the degree of freedom and varies depending on the number of healthy human samples, so select based on the t distribution table do it. In general, for a 95% confidence interval t is 1.96.
  • the urinary podocalyxin value of a healthy person is not normally distributed, a range that occupies 95% including the median value is set as a reference range, and the upper limit value is set as a reference value of the urine podocalyxin value.
  • the reference value is 50 ⁇ g / g to 300 ⁇ g / g, preferably 75 ⁇ g / g to 200 ⁇ g / g, more preferably 100 ⁇ g / g to 180 ⁇ g / g.
  • stage I early nephropathy stage
  • stage II early nephropathy stage
  • stage III explicit nephropathy stage
  • urinary albumin shows normal values
  • histopathological features include no or mild lesions.
  • stage II early nephropathy stage
  • microalbumin is present in urine
  • histopathologically mild to moderate and chronic lesions are present
  • nodular lesions are sometimes present.
  • stage III apparent nephropathy stage
  • persistent proteins are present in the urine, and histopathologically, moderate to severe and chronic lesions are present, and nodular lesions are often present. It has been.
  • the test method of the present invention makes it possible to determine not only stage II and stage III but also stage I diabetic nephropathy in the stage classification.
  • stage I does not develop nephropathy, but according to the test method of the present invention, stage I can be determined and diabetic kidney It is possible to diagnose the disease early.
  • the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” reflects the ongoing glomerular hyperfunction state and the subsequent progressive disorder. For this reason, the progress of the pathological condition of diabetic nephropathy can be determined and / or predicted by confirming the increase in the urinary podocalyxin excretion.
  • the glomeruli is active in methods of determining and / or predicting the progression of diabetic nephropathy, or staging diabetic nephropathy, depending on the ongoing glomerular hyperactivity state. It is preferable to target subjects in a state where glomerular hardening has not progressed. Such a subject is preferably a subject who showed a negative result with another renal function marker, such as a subject having an eGFR of 60 or more.
  • the present invention is used for the test method described above, which includes a reagent for testing diabetic nephropathy and a reagent containing an anti-podocalyxin antibody, which is used in the test method including an anti-podocalyxin antibody for detecting podocalyxin in urine. It also extends to reagent kits for testing diabetic nephropathy.
  • the anti-podocalyxin antibody contained in the test reagent or test reagent kit may be labeled with, for example, an enzyme.
  • the test reagent kit may contain two or more types of anti-podocalyxin antibodies, and the antibodies are preferably antibodies that recognize different epitopes.
  • the kit can contain reagents such as processing solutions, chromogenic substrates, and instruments necessary for testing.
  • Example 1 Measurement of urinary podocalyxin concentration
  • two types of anti-human podocalyxin monoclonal antibodies were used. These two types of antibodies each recognize two different epitopes of human podocalyxin, each of which includes an anti-human podocalyxin monoclonal antibody a (hereinafter simply referred to as “antibody a”) and an anti-human podocalyxin monoclonal antibody.
  • antibody b hereinafter simply referred to as “antibody b”.
  • HRP horseradish Peroxidase
  • PBS-T 3.6 mM Na 2 HPO 4 , 1.4 mM KH 2 PO 4 , 145 mM NaCl, 0.05% (Vol./Vol.) Tween 20
  • PBS-T 3.6 mM Na 2 HPO 4 , 1.4 mM KH 2 PO 4 , 145 mM NaCl, 0.05% (Vol./Vol.) Tween 20
  • HRP-labeled antibody b solution was added at 100 ⁇ L / well. After standing at 37 ° C. for 1 hour, the HRP-labeled antibody b solution was removed by decantation.
  • PBS-T was added at 200 ⁇ L / well, PBS-T was removed by decantation, and washing was performed. This washing process was performed three times in total. Thereafter, TMB One-Step Substrate System (Dako) was used as a substrate solution for the HRP enzyme reaction, added at 100 ⁇ L / well, and allowed to stand at 25 ° C. for 30 minutes in the dark. Thereafter, 313 mM H 2 SO 4 solution was added as a reaction stop solution at 100 ⁇ L / well, and the absorbance of each well was measured at wavelengths of 450 nm and 630 nm using Multiscan Ascent and Ascent Software for Multiskan (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.). .
  • TMB One-Step Substrate System Dako
  • 313 mM H 2 SO 4 solution was added as a reaction stop solution at 100 ⁇ L / well, and the absorbance of each well was measured at wavelengths of 450 nm and 630 nm using
  • Example 2 Clinical significance of urinary podocalyxin excretion in diabetic nephropathy
  • urinary podocalyxin excretion (creatinine correction value) of 71 patients with diabetes and diabetic nephropathy was obtained, Were classified according to the staging of diabetic nephropathy. Healthy group A, diabetic nephropathy stage I (early nephropathy) patient group B, diabetic nephropathy stage II (early nephropathy stage) patient group C, diabetic nephropathy stage 1
  • group D A group of patients in stage III (apparent nephropathy) is designated as group D.
  • the specimen in which the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” obtained by the method of Example 1 is higher than the reference value is diabetic nephropathy.
  • the reference value is the upper limit value of the 95% confidence interval of the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” obtained from urine obtained from 66 healthy subjects (this example does not include diabetic patients), and the reference value is 161 ⁇ g / g.
  • Table 1 and FIG. 1 show the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” of diabetic and diabetic nephropathy patients classified according to the stage classification of diabetic nephropathy.
  • Table 2 and FIG. 2 show the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” of patients with diabetes and diabetic nephropathy excluding eGFR ⁇ 60 classified according to the stage classification of diabetic nephropathy.
  • urinary podocalyxin excretion "PCX / Cre" is the standard It can be seen that the proportion of cases that are greater than or equal to the value is the same in stage I, and that in stage II and stage III, 46 cases excluding cases with eGFR ⁇ 60 are greatly exceeded (Tables 1, 2 and 1). , FIG. 2). In other words, it was found that the urinary podocalyxin excretion reflects the glomerular hyperfunction state and the subsequent progressive disorder. That is, it is possible to provide an inspection method suitable for diagnosing active glomerular disorders using the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre”.
  • the urinary podocalyxin excretion amount “PCX / Cre” is earlier than the urinary albumin excretion amount “ALB / Cre” used as an index for diagnosis of diabetic nephropathy. It turned out to be a sharp reflection of the onset.
  • urinary podocalyxin excretion “PCX / Cre” as a diagnostic marker for diabetic nephropathy, diabetic nephropathy can be detected early and the degree of disorder (progress of disease state) can be accurately determined. be able to.
  • the test method of the present invention is useful because it makes it possible to prevent the diabetic nephropathy from becoming serious and reduce the cost of medical care, and to promptly determine a treatment policy and the like.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

 本発明は、従来の方法より早期に糖尿病性腎症を発見するための検査方法を提供することを課題とする。かかる課題は、尿中ポドカリキシンを測定することを特徴とする、糖尿病性腎症の検査方法、糖尿病性腎症を少なくとも第I期から判定する当該検査方法、前記検査方法のための検査用試薬、および前記検査方法のための検査用試薬キットによる。本発明は、尿中ポドカリキシンが、尿中アルブミンよりも早期から鋭敏に、糖尿病性腎症の発症および病態を反映していることを見出したことに基づく。

Description

糖尿病性腎症の検査方法
 本発明は、尿中のポドカリキシンを検出することを含む、糖尿病性腎症の検査方法、および抗ポドカリキシン抗体を含む、当該検査方法に用いる糖尿病性腎症検査用試薬に関する。
 本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願特願2009-139188号優先権を請求する。
 糖尿病性腎症は糖尿病の3大合併症のひとつであり、近年血液透析導入の原因疾患の第1位となっている。糖尿病性腎症は、糖尿病にかかってから10年以上が経過し、糖尿病のコントロールが悪く、高血糖状態が長期間続くことにより発症する。糸球体濾過量は増加し、糸球体のなかの血圧が高くなり(糸球体高血圧)、糸球体の毛細血管からの血漿タンパク質の透過性が高まって、アルブミン尿が出現する。さらに病態が進むと、糸球体の基底膜の目が粗くなり、よりサイズの大きい蛋白も排泄されるようになり、蛋白尿になる。蛋白尿が高度になると低蛋白血症になり、糸球体濾過機能の減少と相まって浮腫が起きる。さらに進行すると、体内の老廃物や水分、塩分の排泄が損なわれ、腎不全状態となり、最終的には血液透析か腎移植が必要になる。
 末期腎不全の原因疾患としての糖尿病性腎症患者の比率・数は年々増加しており、糖尿病性腎症の診断・治療は、大きな課題となっている。糖尿病性腎症の透析患者の予後は不良であることが多く、透析療法が必ずしも患者の生命予後、QOLの向上に大きな貢献をもたらしていないのが現状である。また、糖尿病性腎症の臨床診断は、腎生検が困難なことから糖尿病に併発した持続性蛋白尿、腎機能障害、高血圧等の知見から行われている。しかし、持続性蛋白尿が出現すると治療が難しく、5~6年の経過で末期腎不全に陥る場合が多い。そのため、通常の尿試験紙法で尿蛋白が陽性となる前に早期に腎病変を診断して、早期治療を行うことが、臨床医学の立場から強く望まれている。
 試験紙法による尿蛋白が陰性の早期から、糖尿病性腎症患者を診断する手法として、放射線免疫測定法、酵素免疫測定法、ラテックス凝集免疫比濁法、免疫沈降法による尿中のアルブミン測定が行われている。かかる手法の指標としては、尿中アルブミン排泄量「ALB/Cre」が用いられている。尿中アルブミン排泄量(mg/gCre)は100×尿中アルブミン濃度(mg/L)÷尿中クレアチニン濃度(mg/dL)により求めることができる。尿中アルブミン排泄量「ALB/Cre」が、30mg/gCre未満の場合は第I期(腎症前期)、30~300mg/gCre未満の場合は第II期(早期腎症期)、300mg/gCre以上の場合は第III期(顕性腎症期)に相当する。尿中アルブミン排泄量が30mg/gCre未満の場合は、腎症を発症していない段階と判定される。微量アルブミンを呈することにより糖尿病性腎症であると診断され、これは第II期に相当し、病理学的に軽度から中等度のび慢性病変が既に存在し、結節性病変の存在も知られている時期である。したがって、尿中アルブミンの診断では必ずしも真の初期腎症を判断することができず、糖尿病性腎症の早期診断のための指標が求められている。
 尿中アルブミン濃度に替えて、フォンヴィレブランド因子(von Willebrandfactor)切断酵素を診断の指標に用いる方法が開示されている(特許文献1)。具体的には、フォンヴィレブランド因子切断酵素の量または酵素活性について、vWFの量を免疫学的手法を用いて分析することにより、糖尿病性腎症患者における腎障害の進展度の予測および予後の改善を行う手段が開示されている。
 腎疾患に関連して、尿中ポドカリキシンを測定することによる、簡便な腎障害の検査手段が開示されている(特許文献2)。ポドカリキシンは、腎糸球体を構成するタコ足細胞(ポドサイト)の表面に存在し、濾過機能を担っている糖タンパク質である。ポドサイトは、糸球体基底膜のボウマン腔側に位置し、糸球体濾過機構に重要な役割をもつため、ポドサイトの障害の程度を把握することは、腎疾患において極めて重要な意味を持つことが知られている(非特許文献1)。
特開2008-216137号公報 国際公開WO2002/037099号
Hara et al., Nephron69: 397-403 (1995)
 本発明は、従来の方法より早期に糖尿病性腎症を発見するための検査方法を提供することを課題とする。
 本発明者らは上記課題を解決するために、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が健常人の値よりも高い場合に糖尿病性腎症の可能性があることに着目し、尿中ポドカリキシンを検出することにより糖尿病性腎症の検査を行い得ることを見出し、本発明を完成した。
 すなわち、本発明は以下よりなる。
1.尿中ポドカリキシンを検出することを特徴とする、糖尿病性腎症の検査方法。
2.糖尿病性腎症の病期区分が少なくとも第I期のものである、前項1に記載の検査方法。
3.尿中ポドカリキシン値が基準値よりも高い場合に、糖尿病性腎症であると判定される、前項1または2に記載の検査方法。
4.基準値が、健常人の尿中ポドカリキシン値の95%信頼区間の上限値である、前項3に記載の検査方法。
5.糖尿病性腎症の進展および/または糖尿病性腎症の病期区分が判定される、請求項1または2に記載の糖尿病性腎症の検査方法。
6.尿中ポドカリキシン値が、尿中成分の値で補正されたものである、前項1~5のいずれか1項に記載の検査方法。
7.尿中成分が尿中クレアチニンである、前項6に記載の検査方法。
8.尿中ポドカリキシンの検出を、免疫学的手法により行う、前項1~7のいずれか1に記載の検査方法。
9.尿中ポドカリキシンを検出するための抗ポドカリキシン抗体を含む、前項8に記載の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬。
10.抗ポドカリキシン抗体を用いた尿中ポドカリキシンを検出するための試薬を含む、前項9に記載の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬キット。
 尿中ポドカリキシンを測定して本発明の検査方法を実施することにより、糖尿病性腎症を早期に発見することができる。本発明の検査方法により、尿中アルブミン排泄量「ALB/Cre」により第I期(腎症前期)に分類された患者であっても、腎症リスクが高い患者に分類することが可能となる。本発明の検査方法により、早期に糖尿病性腎症を発見することは、腎症進行の予防にもつながる。
 また、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」は、糖尿病性腎症の進行に伴って高くなる傾向があり、本発明の検査方法により、糖尿病性腎症の病態を把握することが可能となる。尿中ポドカリキシン排泄量は、糸球体の機能亢進状態ならびにそれに続く進行性の障害を反映しているため、活動的な糸球体障害を効果的に診ることが可能である。本発明の検査方法により、簡便に糖尿病性腎症の病態をモニタリングすることができ、治療方針等を速やかに決定することができると考えられる。
糖尿病および糖尿病性腎症患者の尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を糖尿病性腎症の病期区分に従い分類した図を示す。(実施例2) eGFR<60を除いた糖尿病および糖尿病性腎症患者の尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を糖尿病性腎症の病期区分に従い分類した図を示す。(実施例2)
 本発明は被験者の尿中ポドカリキシンを検出することにより糖尿病性腎症の検査を行うことを特徴とする。本明細書において、検体である尿は、いかなる被験者から得られたものであってもよいが、糖尿病を罹患した患者から得られたものが好ましい。糖尿病の診断は、従来より公知の手段により行えばよい。尿の採取方法は問わないが、早朝尿もしくは随時尿を用いることが好ましい。また本発明の検査方法に必要な尿の量は10~200μL程度である。本発明の検査方法は、従来の健康診断等の一般的な尿検査と同時に行われてもよいし、糖尿病の疑いのある被験者や、糖尿病と診断された患者について別途尿を採取して行われてもよい。また本発明の検査方法は、糖尿病患者について、糖尿病性腎症の発症または進行をモニタリングする目的として、行われてもよい。
 検体である尿の処理は、尿に処理液を添加して混合することにより行うことができる。処理液は、尿のpH調整、尿沈渣のマスキングおよび、ポドカリキシンの可溶化が可能なものであればいかなるものであってもよいが、好ましくは、緩衝液にキレート剤および界面活性剤などを添加した溶液が例示される。緩衝液、キレート剤は、公知のものであればいずれであってもよく、界面活性剤は、非イオン界面活性剤を用いることが好ましい。処理液としては、例えば2MTES-NaOH(pH7.0)に、0.2M EDTAと2%(Vol./Vol.)TritonX-100を含む溶液が例示される。かかる処理液10μLを、尿検体90μLに添加して混合することにより、尿試料溶液を得ることが可能である。
 尿試料溶液からポドカリキシンを検出する方法は様々な方法が考えられる。尿中ポドカリキシンの検出の一例として、免疫学的手法が挙げられる。免疫学的手法は、例えば、免疫染色法(蛍光抗体法、酵素抗体法、重金属標識抗体法、放射性同位元素標識抗体法を含む)、電気泳動法による分離と蛍光、酵素、放射性同位元素などによる検出方法との組み合わせ(ウェスタンブロット法、蛍光二次元電気泳動法を含む)、酵素免疫測定吸着法(ELISA)、ドット・ブロッティング法、ラテックス凝集法(LA:Latex Agglutination-TurbidimetricImmunoassay)、イムノクロマト法などにより行うことができるが、ELISA法もしくはLA法を用いることが好ましい。定量性の観点からELISA法のうちサンドイッチ法を用いることが好ましい。サンドイッチ法では、抗ポドカリキシン抗体を固相化したマイクロタイタープレートに尿試料溶液を添加し、抗原・抗体反応をさせ、さらに酵素標識した抗ポドカリキシン抗体を添加し、抗原・抗体反応をさせ、洗浄後、酵素基質と反応・発色させ、吸光度を測定して尿中のポドカリキシンを検出すると共に尿中ポドカリキシン濃度を算出することができる。
 免疫学的手法において用いられる抗ポドカリキシン抗体は、ポドカリキシンを検出しうる抗体であればよい。本発明において用いられる抗ポドカリキシン抗体は、公知のものであってもよく、また今後開発される抗体であってもよく、特に限定されないが、例えばモノクローナル・ポリクローナル抗体や標識化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体ならびにこれらの結合活性断片などが挙げられる。
 本発明において用いられる尿中ポドカリキシン値は、尿中ポドカリキシン濃度であってもよいが、尿中ポドカリキシン濃度を尿中に安定に排泄される尿中成分の値(尿中成分値)により補正したものであることが望ましい。尿中成分としては、特に尿中クレアチニンが好ましい。尿中クレアチニンはクレアチニンの産生が筋肉の量に依存することから、一個体において疾患にかかわらずほぼ一定であると考えられている。尿中排泄物質の検査においては、尿量誤差を回避するため、クレアチニン1g当りの量により目的とする尿中排泄物質の量を補正する手法が一般的に用いられており、これによりクレアチニン単位グラム当たりの尿中排泄物質を比較することが可能になる。尿中ポドカリキシン濃度を、尿中クレアチニン濃度により補正して得られる補正値を、尿中ポドカリキシン排泄量(PCX/Cre)と称し、尿中ポドカリキシン排泄量は、以下の式により算出することができる。
<式> PCX/Cre:尿中ポドカリキシン排泄量(μg/g)=100×尿中ポドカリキシン濃度(ng/mL)÷尿中クレアチニン濃度(mg/dL)
 本発明の検査方法により得られた尿中ポドカリキシン値、好ましくは尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が基準値より高い場合、糖尿病性腎症であると判定することができる。基準値は適宜設定することができるが、健常人の尿中ポドカリキシン値、好ましくは尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を用いることができる。健常人には、糖尿病患者ではない被験者のみならず糖尿病性腎症を発症していない糖尿病患者が含まれていてもよいが、好ましくは糖尿病患者でない被験者が望ましく、さらに糖尿病患者ではなく、他の腎機能マーカーで陰性を示した被験者が望ましい。他の腎機能マーカーとしては、推算糸球体濾過量(eGFR:estimatedglomerular filtration rate)や、尿蛋白が例示される。さらに好ましくは、複数の健常人について尿中ポドカリキシン値、好ましくは尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を得、当該尿中ポドカリキシン排泄量の95%信頼区間の上限値を基準値として用いる。
 95%信頼区間は公知の手法により求めることができる。健常人の尿中ポドカリキシン値が正規分布している場合は以下の式によって求めることができる。
 95%信頼区間=健常人尿中ポドカリキシン値の平均±t×健常人尿中ポドカリキシン値の標準偏差
 なお、tは自由度であり、健常人の検体数によって変動するため、t分布表に基づき選択すればよい。一般に95%信頼区間の場合tは1.96である。
 一方、健常人の尿中ポドカリキシン値が正規分布していない場合は中央値を含んだ95%を占める範囲を基準範囲とし、その上限値を尿中ポドカリキシン値の基準値とする。
 本発明において基準値は、50μg/g~300μg/g、好ましくは75μg/g~200μg/g、より好ましくは100μg/g~180μg/gである。
 糖尿病性腎症の病期分類としては、第I期(腎症前期)、第II期(早期腎症期)、第III期(顕性腎症期)が一般的である。第I期(腎症前期)では、尿中アルブミンは正常値を示し、病理組織学的特徴としてはび慢性病変は存在しないか軽度のものが存在する。第II期(早期腎症期)では、尿中に微量アルブミンを呈し、病理組織学的には軽度から中等度のび慢性病変が存在し、結節性病変が時に存在することが知られている。第III期(顕性腎症期)では、尿中に持続性蛋白が呈し、病理組織学的には中等度から高度のび慢性病変が存在し、結節性病変が多くの場合存在することが知られている。
 本発明の検査方法により、上記病期分類における第II期、第III期のみならず、第I期の糖尿病性腎症について、判定することが可能となる。従来の尿中アルブミン測定による場合は、第I期が腎症を発症していない段階と判定されるが、本発明の検査方法によれば、第I期を判定することができ、糖尿病性腎症を早期に診断することが可能である。
 また、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」は、進行中の糸球体の機能亢進状態ならびにそれに続く進行性の障害を反映する。このため、尿中ポドカリキシン排泄量の増大を確認することにより、糖尿病性腎症の病態の進展を判定および/または予測することができる。糖尿病性腎症の病態の進展を判定および/または予測する場合、被験者の尿中ポドカリキシン値を経時的に測定することが好ましく、尿中ポドカリキシン値が上昇した場合に、糖尿病性腎症の病態の進展と判定される。また、尿中ポドカリキシンの排泄量に基づいて、糖尿病性腎症の病期分類を行うことも可能である。
 進行中の糸球体の機能亢進状態により、糖尿病性腎症の病態の進展を判定および/または予測する、あるいは、糖尿病性腎症の病期分類を行う方法においては、糸球体が活動的であり、糸球体硬化が進んでいない状態の被験者を対象とすることが好ましい。このような被験者は他の腎機能マーカーで陰性を示した被験者であることが好ましく、例えばeGFRが60以上の被験者が挙げられる。
 本発明は、尿中ポドカリキシンを検出するための、抗ポドカリキシン抗体を含む、前記の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬および、抗ポドカリキシン抗体を含む試薬を含む、前記の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬キットにも及ぶ。検査用試薬または、検査用試薬キットに含まれる抗ポドカリキシン抗体は、例えば酵素などにより標識化されたものであってもよい。また、検査用試薬キットは2種類以上の抗ポドカリキシン抗体を含んでもよく、当該抗体は互いに異なるエピトープを認識する抗体であることが好ましい。さらに当該キットには、処理液、発色基質等の試薬および、試験に必要な器具等を含むことができる。
 以下に本発明の実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で種々の応用が可能である。
(実施例1)尿中ポドカリキシン濃度の測定
 ポドカリキシン濃度の測定には、2種類の抗ヒトポドカリキシンモノクローナル抗体を用いた。これらの2種類の抗体は、ヒトポドカリキシンの異なる2つのエピトープを各々認識し、それぞれ抗ヒトポドカリキシンモノクローナル抗体a(以下単に「抗体a」と称する)と、抗ヒトポドカリキシンモノクローナル抗体b(以下単に「抗体b」と称する)である。本実施例では、抗体a固相化マイクロタイタープレート(分割型マイクロプレートGF8高:Nunc社)と、西洋ワサビPeroxidase(以下「HRP」と略す)により標識化した抗体bを用いた。
 まず、被験者から得た尿90μLと、2M TES-NaOH、0.2M EDTA、2%(Vol./Vol.)TritonX-100、pH7.0の溶液10μLを混合した。混合して得られた尿試料溶液100μLを、抗体a固相化マイクロタイタープレートのウェルへ加えた。37℃で1時間静置後、ウェルから尿試料溶液をデカンテーションにより除去した。3.6mM NaHPO、1.4mMKHPO、145mM NaCl、0.05%(Vol./Vol.)Tween20(以下「PBS-T」と略す)を、マイクロタイタープレートのウェルに200μL/ウェルで添加し、デカンテーションによりPBS-Tの除去を行い、洗浄を行った。この洗浄の工程を計3回行った。その後、HRP標識化抗体b溶液を、100μL/ウェルで添加した。37℃で1時間静置後、HRP標識化抗体b溶液をデカンテーションにより除去した。PBS-Tを200μL/ウェルで添加し、デカンテーションによりPBS-Tの除去を行い、洗浄を行った。この洗浄の工程を計3回行った。その後、TMB One-Step Substrate System(Dako社)をHRP酵素反応の基質溶液として用いて、100μL/ウェルで添加し、25℃で30分間、遮光で静置した。その後、313mMHSO溶液を反応停止溶液として100μL/ウェルで添加し、マルチスキャンアセントとAscent Software for Multiskan(大日本製薬株式会社)を使用し、波長450nmと630nmで各ウェルの吸光度を測定した。そして、波長450nmの吸光度から波長630nmの吸光度を引いた値を測定値とした。検量線の標準品として腎臓から抽出したNativeなヒトポドカリキシンを使用し、検体中のポドカリキシン濃度を導き出した。そして尿中ポドカリキシン濃度を尿中クレアチニン濃度により補正した尿中ポドカリキシン排泄量を以下の式から算出した。
<式> PCX/Cre:尿中ポドカリキシン排泄量(μg/g)=100×尿中ポドカリキシン濃度(ng/mL)÷尿中クレアチニン濃度(mg/dL)
(実施例2)糖尿病性腎症における尿中ポドカリキシン排泄量の臨床的意義
 実施例1の方法により、糖尿病および糖尿病性腎症患者71症例の尿中ポドカリキシン排泄量(クレアチニン補正値)を求め、それを糖尿病性腎症の病期分類に従って分類した。健常人群をA群、糖尿病性腎症第I期(腎症前期)の患者群をB群、糖尿病性腎症第II期(早期腎症期)の患者群をC群、糖尿病性腎症第III期(顕性腎症)の患者群をD群とする。実施例1の方法により求めた尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が基準値より高値を示した検体は糖尿病性腎症であることを意味する。基準値は健常人66例(本実施例では糖尿病患者は含まない)から得た尿より求めた尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」の95%信頼区間の上限値であり、その基準値は161μg/gである。
 糖尿病および糖尿病性腎症患者の尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を糖尿病性腎症の病期区分に従い分類したものを、表1と図1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 表1、図1より病態が悪化するに従って、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が基準値以上である検体の割合が上昇していることが分かった。さらに、微量アルブミン尿が出現する前の正常アルブミン尿の段階(第I期)から、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が基準値以上である症例が、46.2%存在することが分かった。これは、微量アルブミン尿が出現する前にポドカリキシンが尿中へ排泄されていることを意味している。尿中ポドカリキシンを検出することにより、糖尿病性腎症の病期区分により第I期(腎症前期)に分類された患者を、腎症リスクが高い患者に分類することが可能であることがわかった。
 次に、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が活動的な糸球体障害を診ることが可能か否かを検討した。そこで、糖尿病および糖尿病性腎症患者71症例から糸球体硬化が進み、尿排泄を許容し得るボウマン腔側の間隙スペースが減少していると考えられるeGFR<60未満の症例を除いた46症例についての尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」のサブ解析を行った。
 eGFR<60を除いた糖尿病および糖尿病性腎症患者の尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を糖尿病性腎症の病期区分に従い分類したものを表2と図2に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 糖尿病性腎症の病期分類で糖尿病および糖尿病性腎症患者71症例の結果とeGFR<60未満の症例を除いた46症例の結果を比較すると、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」が基準値以上である症例の割合が第I期では同等、第II期、第III期ではeGFR<60未満の症例を除いた46症例が大きく上回っていることがわかる(表1、表2、図1、図2)。つまり、尿中ポドカリキシン排泄量は現在進行中の糸球体の機能亢進状態ならびにそれに続く進行性の障害を反映していることが分かった。つまり、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を以って、活動的な糸球体障害を診るのに適した検査方法を提供することが可能となる。
 上記説明したとおり、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」は、糖尿病性腎症の診断の指標として用いられている尿中アルブミン排泄量「ALB/Cre」よりも早期から、糖尿病性腎症の発症を鋭敏に反映していることが判明した。また、尿中ポドカリキシン排泄量「PCX/Cre」を糖尿病性腎症の診断マーカーとして使用することで、早期に糖尿病性腎症を発見し、かつ障害の程度(病態の進展)を的確に判別することができる。本発明の検査方法により、糖尿病性腎症の重症化を予防し医療費の費用軽減することが可能となり、かつ治療方針等の速やかな決定を行うことができ、有用である。

Claims (10)

  1. 尿中ポドカリキシンを検出することを特徴とする、糖尿病性腎症の検査方法。
  2. 糖尿病性腎症の病期区分が少なくとも第I期のものである、請求項1に記載の検査方法。
  3. 尿中ポドカリキシン値が基準値よりも高い場合に、糖尿病性腎症であると判定される、請求項1または2に記載の検査方法。
  4. 基準値が、健常人の尿中ポドカリキシン値の95%信頼区間の上限値である、請求項3に記載の検査方法。
  5. 糖尿病性腎症の進展および/または糖尿病性腎症の病期区分が判定される、請求項1または2に記載の糖尿病性腎症の検査方法。
  6. 尿中ポドカリキシン値が、尿中成分の値で補正されたものである、請求項1~5のいずれか1項に記載の検査方法。
  7. 尿中成分が尿中クレアチニンである、請求項6に記載の検査方法。
  8. 尿中ポドカリキシンの検出を、免疫学的手法により行う、請求項1~7のいずれか1に記載の検査方法。
  9. 尿中ポドカリキシンを検出するための抗ポドカリキシン抗体を含む、請求項8に記載の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬。
  10. 抗ポドカリキシン抗体を用いた尿中ポドカリキシンを検出するための試薬を含む、請求項9に記載の検査方法に用いる、糖尿病性腎症検査用試薬キット。
PCT/JP2010/003837 2009-06-10 2010-06-09 糖尿病性腎症の検査方法 WO2010143423A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011518307A JP5759372B2 (ja) 2009-06-10 2010-06-09 糖尿病性腎症の検査方法
US13/377,509 US20120164667A1 (en) 2009-06-10 2010-06-09 Method for test on diabetic nephropathy
EP10785955.5A EP2442106B1 (en) 2009-06-10 2010-06-09 Method for test on diabetic nephropathy
US15/401,698 US20170146554A1 (en) 2009-06-10 2017-01-09 Method for test on diabetic nephropathy

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2009139188 2009-06-10
JP2009-139188 2009-06-10

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US13/377,509 A-371-Of-International US20120164667A1 (en) 2009-06-10 2010-06-09 Method for test on diabetic nephropathy
US15/401,698 Continuation-In-Part US20170146554A1 (en) 2009-06-10 2017-01-09 Method for test on diabetic nephropathy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010143423A1 true WO2010143423A1 (ja) 2010-12-16

Family

ID=43308686

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2010/003837 WO2010143423A1 (ja) 2009-06-10 2010-06-09 糖尿病性腎症の検査方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20120164667A1 (ja)
EP (1) EP2442106B1 (ja)
JP (1) JP5759372B2 (ja)
WO (1) WO2010143423A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2011105474A1 (ja) * 2010-02-26 2013-06-20 原 正則 急性腎障害の検査方法
CN104764885A (zh) * 2015-03-24 2015-07-08 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 糖尿病肾病早期筛查试剂盒、生物标志物检测方法及应用
WO2016149971A1 (zh) * 2015-03-24 2016-09-29 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 糖尿病肾病早期检测试纸盒、生物标志物检测方法及应用
WO2023079706A1 (ja) * 2021-11-05 2023-05-11 国立大学法人東北大学 糖尿病性腎症の判定方法

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090104649A1 (en) 2007-06-11 2009-04-23 Garovic Vesna D Markers for preeclampsia
US20170146553A1 (en) * 2009-06-10 2017-05-25 Masanori Hara Test method on renal diseases
US20170146554A1 (en) * 2009-06-10 2017-05-25 Masanori Hara Method for test on diabetic nephropathy
AU2010339723B2 (en) 2009-12-21 2014-11-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Early marker of proteinuria in patients treated with an anti-VEGF treatment
US9804154B2 (en) 2013-03-12 2017-10-31 Epinex Diagnostics, Inc. Rapid test for urine albumin and urine creatinine
WO2015080838A1 (en) * 2013-11-27 2015-06-04 Mayo Foundation For Medical Education And Research Detecting podocyte injury in diabetic nephropathy and glomerulonephritis
JP6817762B2 (ja) * 2016-09-23 2021-01-20 シスメックス株式会社 糖尿病性腎症2期以降への進行リスクの診断を補助する方法及び装置
JP2018048962A (ja) * 2016-09-23 2018-03-29 シスメックス株式会社 糖尿病性腎症の進行リスクの診断を補助する方法及び装置
JP7297479B2 (ja) 2019-03-15 2023-06-26 エイブリック株式会社 半導体装置

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0611507A (ja) * 1992-06-25 1994-01-21 Fujirebio Inc ヒトポドカリキシンの測定方法
JP2008122410A (ja) * 2000-10-27 2008-05-29 Masanori Hara 腎障害の検査方法
JP2008216137A (ja) 2007-03-06 2008-09-18 Mitsubishi Kagaku Iatron Inc 糖尿病性腎症患者の病態把握方法
JP2009139188A (ja) 2007-12-05 2009-06-25 Toyama Prefecture 超音波表面粗さ測定方法と装置

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5804452A (en) * 1995-04-27 1998-09-08 Quidel Corporation One step urine creatinine assays
US7026126B1 (en) * 1999-03-19 2006-04-11 Kiyoshi Kurekawa Method for detecting megsin protein and use thereof
DE60039441D1 (de) * 1999-09-10 2008-08-21 Takashi Muramatsu Tumormarker für frühes krebsstadium
JPWO2002037099A1 (ja) * 2000-10-27 2004-03-11 国際試薬株式会社 腎障害の診断方法
WO2007102787A1 (en) * 2006-03-06 2007-09-13 Agency For Science, Technology & Research Human embryonic stem cell methods and podxl expression
WO2008084331A2 (en) * 2006-06-21 2008-07-17 Hopitaux Universitaires De Geneve Biomarkers for renal disorders
US20090068683A1 (en) * 2007-06-11 2009-03-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research Markers for preeclampsia
JP5515740B2 (ja) * 2007-09-27 2014-06-11 国立大学法人 新潟大学 尿中タンパク質定量用の尿前処理剤、尿前処理方法、及び尿中タンパク質定量方法。

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0611507A (ja) * 1992-06-25 1994-01-21 Fujirebio Inc ヒトポドカリキシンの測定方法
JP2008122410A (ja) * 2000-10-27 2008-05-29 Masanori Hara 腎障害の検査方法
JP2008216137A (ja) 2007-03-06 2008-09-18 Mitsubishi Kagaku Iatron Inc 糖尿病性腎症患者の病態把握方法
JP2009139188A (ja) 2007-12-05 2009-06-25 Toyama Prefecture 超音波表面粗さ測定方法と装置

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HARA ET AL., NEPHRON, vol. 69, 1995, pages 397 - 403
MASANORI HARA: "Jin Shikkan no Shinryo ni Yakudatsu Atarashii Kensa Nyochu Podocyte Kensa, Nyochu Podocalyxin Teiryo", KIDNEY AND DIALYSIS, vol. 65, no. 4, 25 October 2008 (2008-10-25), pages 488 - 491, XP008149076 *
MASANORI HARA: "Nyo Tanpaku Nyochu Bio Marker (1)Podocyte Kensa, Nyochu Podocalyxin Teiryo Kensa", JINZO, vol. 32, no. 3, 25 March 2010 (2010-03-25), pages 196 - 200, XP008150661 *
NAKAMURA T. ET AL.: "Urinary excretion of podocytes in patients with diabetic nephropathy", NEPHROL.DIAL.TRANSPLANT., vol. 15, no. 9, 2000, pages 1379 - 1383, XP009065526 *
SHIGERU SEKINE ET AL.: "Jin Shogai no Atarashii Marker ni Tsuite -Nyochu Podocyte, Podocalyxin to Rinsho Byorigakuteki Igi-", THER.RES., vol. 29, no. 11, 2008, pages 1900 - 1904, XP008148139 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2011105474A1 (ja) * 2010-02-26 2013-06-20 原 正則 急性腎障害の検査方法
CN104764885A (zh) * 2015-03-24 2015-07-08 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 糖尿病肾病早期筛查试剂盒、生物标志物检测方法及应用
WO2016149972A1 (zh) * 2015-03-24 2016-09-29 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 糖尿病肾病早期筛查试剂盒、生物标志物检测方法及应用
WO2016149971A1 (zh) * 2015-03-24 2016-09-29 深圳市贝沃德克生物技术研究院有限公司 糖尿病肾病早期检测试纸盒、生物标志物检测方法及应用
WO2023079706A1 (ja) * 2021-11-05 2023-05-11 国立大学法人東北大学 糖尿病性腎症の判定方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP2442106A1 (en) 2012-04-18
EP2442106B1 (en) 2015-08-19
EP2442106A4 (en) 2013-02-20
US20120164667A1 (en) 2012-06-28
JPWO2010143423A1 (ja) 2012-11-22
JP5759372B2 (ja) 2015-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5759372B2 (ja) 糖尿病性腎症の検査方法
EP1946107B1 (en) Diagnosis and monitoring of chronic renal disease using ngal
DK2623517T3 (en) Urine and serum biomarkers associated with diabetic nephropathy
EP2671083A1 (en) Methods of prognosis and diagnosis in chronic heart failure
EP2281203A1 (en) A marker for graft failure and mortality
Liu et al. Methodological evaluation and comparison of five urinary albumin measurements
JP2008241705A (ja) 透析の必要性を予測するためのbnp型ペプチド類の使用
US20240103014A1 (en) Inspection Method Enabling Specific Diagnosis of Pathological State of Diabetic Nephropathy at Early Stage
EP2442105B1 (en) Test method on renal diseases
Najafi et al. Assessment of serum and urine neurophil gelatinase-associated lipocalin (s-NGAL and u-NGAL) level as a predictive factor of disease progression in diabetic nephropathy in type 2 DM
EP2391653B1 (en) Biomarkers associated with nephropathy
Harding et al. Serum free light chain immunoassay as an adjunct to serum protein electrophoresis and immunofixation electrophoresis in the detection of multiple myeloma and other B-cell malignancies
TWI735470B (zh) 糖尿病性腎病之判定方法、及於此種判定方法中生物標記之用途
WO2011105474A1 (ja) 急性腎障害の検査方法
JP7190165B2 (ja) 慢性腎臓病罹患の可能性の判定のための方法
WO2020064995A1 (en) Use of biomarkers representing cardiac, vascular and inflammatory pathways for the prediction of acute kidney injury in patients with type 2 diabetes
JP6083937B2 (ja) 急性腎障害の検査方法
Kryvoviaz et al. Evaluation of the functional state of the kidneys in healthy and patients with type 1 diabetes with different levels of albumin in the urine.
WO2024159237A1 (en) Assay and related methods, kits and devices
WO2022221264A1 (en) Methods and compositions for analysis of acute kidney injury
US20170146553A1 (en) Test method on renal diseases
Matsha et al. and iron status in patients with oesophageal cancer and healthy control subjects from Transkei, South Africa

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10785955

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011518307

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010785955

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13377509

Country of ref document: US