WO2010116097A1 - Procede de preparation de complexes moleculaires entre un agent retinoïde et des cyclodextrines - Google Patents

Procede de preparation de complexes moleculaires entre un agent retinoïde et des cyclodextrines Download PDF

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WO2010116097A1
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cyclodextrins
cyclodextrin
retinoid
diffusion
molecular
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PCT/FR2010/050680
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Hubert Lochard
Bernard Freiss
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Pierre Fabre Medicament
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
    • C08B37/0015—Inclusion compounds, i.e. host-guest compounds, e.g. polyrotaxanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Definitions

  • the present invention is in the field of chemistry and pharmacy and relates to a process for the preparation of soluble molecular complexes by the technology of dense fluids under pressure, in particular that of CO2.
  • the present invention relates to a process for the preparation of molecular complexes between a retinoid agent and cyclodextrins by the technology of dense fluids under pressure.
  • the new pharmaceutical molecules are in 40% of cases insoluble or poorly soluble in water, which affects their bioavailability.
  • Van Hees et al. (Application of Supercritical Carbon Dioxide for the Preparation of a Piroxicam-ss-Cyclodextrin Compound Inclusion, Pharmaceutical Research, Vol.16, N12, 1999) describe in their publication a method of inclusion of Piroxicam in (3-cyclodextrins by CO2 Since piroxicam is not very soluble in water, its inclusion in ⁇ -cyclodextrins should increase its solubility in water by placing a mixture of piroxicam and (3-cyclodextrins) in a reactor. left in static mode.
  • the mixture obtained is milled and homogenized before characterization by: DSC (Differential Scarming Calorimetry), measurement of solubility in acetonitrile and comparison with the solubility of piroxicam alone, and spectroscopic methods.
  • DSC Different Scarming Calorimetry
  • composition comprising adapalene solubilized in aqueous media with cyclodextrins or derivatives thereof.
  • the composition thus comprises a physical mixture between adapalene and cyclodextrins.
  • WO2004 / 096284 discloses a method for preparing soluble molecular complexes comprising one or more poorly soluble active substances in an aqueous medium included in one or more host molecules and in particular analgesics, antipyretics, antibiotics, anti-inflammatories. Said method comprises a step (a) of contacting one or more active substances with one or more host molecules, a step (b) of implementing a molecular diffusion step by placing in contact, in static mode , a dense fluid under pressure with the mixture obtained in step (a) in the presence of one or more diffusion agents, (c) recovery of the molecular complex thus formed.
  • a process comprising a step of molecular diffusion by a dense fluid under pressure in static mode and without the subsequent washing step using a supercritical fluid, significantly improved the inclusion rate of the active substance and in particular a retinoid agent as a function of the amount of a diffusion agent added to the medium.
  • this method makes it possible to obtain a molecular complex comprising a retinoid agent and cyclodextrins whose solubility is very much improved compared to the physical mixture with a retinoid agent and cyclodextrins.
  • the present invention relates to a process for the preparation of soluble molecular complexes comprising an active substance that is poorly soluble in an aqueous medium and in particular a retinoid agent included in one or more host molecules, characterized in that it is limited by the steps following:
  • step (a) contacting one or more active substances with one or more host molecules, (b) performing a molecular diffusion step by contacting, in static mode, a dense fluid under pressure with the mixture obtained in step (a) in the presence of one or more diffusion agents,
  • the method described above may comprise an additional step d) of drying the complex, advantageously at a temperature of between 40 ° C. and 60 ° C., preferably under vacuum.
  • the present invention relates to a process for the preparation of molecular complexes between a retinoid agent and cyclodextrins by the technology of dense fluids under pressure.
  • the present invention relates to a process for the preparation of molecular complexes between retinal and cyclodextrins by the technology of dense fluids under pressure.
  • the term "dense fluid under pressure” means any fluid used at a temperature or a pressure greater than their critical value.
  • it is pure CO2 or in mixture with an organic solvent conventionally used by those skilled in the art.
  • active substance poorly soluble in an aqueous medium is meant in the sense of the present invention any active substance little or not soluble in an aqueous medium and having in particular a solubility of less than at least 20 mg / ml.
  • it is an active substance chosen from the group of retinoids or derivatives with the exception of adapalene.
  • Retinoid means any compound binding to RAR and / or RXR receptors such as tretinoin (in particular Retacnyl® product marketed by Galderma) or isotretinoin (Roaccutane® product marketed by Roche Laboratories).
  • tretinoin in particular Retacnyl® product marketed by Galderma
  • isotretinoin Rostaccutane® product marketed by Roche Laboratories.
  • the retinoid preferentially chosen is retinal.
  • retinoid of retinoic acid, tretinoin, tazarotene, retinal, retinol and those described in the following patents or patent applications: US 4,666,941, US 4,581,380, EP 0 210 929, EP 0 232 199, EP 0 260 162, EP 0 292 348, EP 0 325 540, EP 0 359 621, EP 0 409 728, EP 0 409 740, EP 0 552 282, EP 0 584 191, EP 0 514 264, EP 0 514 269, EP 0 661 260, EP 0 661 258, EP 0 658 553, EP 0 679 628, EP 0 679 631, EP 0 679 630, EP 0 708 100,
  • EP 0 709 382 EP 0 722 928, EP 0 728 739, EP 0 732 328,
  • the preferred retinoid concentrations are between 0.0001 and 20% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the composition according to the invention comprises between 0.001 and 5% and advantageously between 0.01 and 1% by weight of retinoid relative to the total weight of the composition, preferably between 0.01 and 0.5%, preferably between 0.1 and 0.4. % by weight of retinoid, more preferably 0.3% by weight of retinoid.
  • the term "host molecule” means any substance capable of capturing active substances.
  • the host molecule is chosen from the group consisting of polyoses and monosaccharides, in particular cyclodextrins and their mixture.
  • the cyclodextrins used in the present invention are those known from the literature.
  • Cyclodextrins are cyclic oligosaccharides consisting of (OC-1, 4) OC-D-glucopyranose units with a lipophilic central cavity and a hydrophilic outer surface (Fromming KH, Szejtli J: "Cyclodextrins in pharmacy", Kluwer Academy Publishers, Dortrecht, 1994).
  • Cyclodextrins are known to increase the solubility of molecules through the formation of a "Cage" form having an outer hydrophilic portion and an inner hydrophobic portion. Cyclodextrins can thus form inclusion complexes with many drugs by accepting inside the cavity the whole molecule, or more commonly the lipophilic part of the molecule.
  • cyclodextrins The most abundant natural cyclodextrins are ⁇ -cyclodextrins, ⁇ -cyclodextrins and ⁇ -cyclodextrins.
  • ⁇ -Cyclodextrins (also known as Schardinger's CC-dextrin, cyclomaltohexaose, cyclohexaglucan, cyclohexamylose, OC-CD, ACD, C6A) comprise 6 units of glucopyranose.
  • ⁇ -cyclodextrins also known as Schardinger's ⁇ -dextrin, cyclomaltoheptaose, cycloheptaglucan, cycloheptamylose, ⁇ -CD, BCD, C7A
  • ⁇ -cyclodextrins also known as Schardinger ' ⁇ -dextrin, cyclomaltooctaose, cyclooctaglucan, cyclooctaamylose, ⁇ -CD, GCD, C8A
  • glucopyranose also known as Schardinger's ⁇ -dextrin, cyclomaltooctaose, cyclooctaglucan, cyclooctaamylose, ⁇ -CD, GCD, C8A
  • ⁇ -cyclodextrins appear to be the most useful complexing pharmaceutical agents because of the size of their cavity, their availability, their properties and their low cost.
  • cyclodextrins are advantageous but also have limiting factors which restrict the application of cyclodextrins to certain types of pharmaceuticals. Moreover, not all products are not suitable for complexation with cyclodextrins. Many products can not be complexed or complexation provides no essential benefit. Inorganic compounds are generally unsuitable for complexing with cyclodextrins.
  • Cyclodextrin derivatives are also useful in the present invention.
  • each glucopyranose unit has three free hydroxyl groups that differ in their function and reactivity.
  • the methyl ⁇ -cyclodextrin will be chosen in particular that known under the name of CRISMEB and preferably the "randomized" methyl ⁇ -cyclodextrin known under the name of RAMEB.
  • the molar ratio between the active agent and the cyclodextrin (s) are of the order of 1: 1 to 1: 10. In a preferred mode, the molar ratio is 1: 2 or 1: 4 or 1: 6 or 1: 8 or 1: 10.
  • the term "diffusion agent” is intended to mean any solvent which promotes an interaction of the active substance with the host molecule.
  • this diffusion agent is chosen from the group consisting of alcohols, ketones, ethers, esters and water with or without surfactant and their mixtures. Even more advantageously, it is water.
  • the term "static mode" means a reaction or a process in which all the reagents are simultaneously brought into contact and the reaction is allowed to proceed.
  • the active substance (s), water and supercritical CO 2 are placed in an autoclave and allowed to react for several hours. The mass of product does not change during the reaction.
  • the reagents are provided as the reaction or production progresses.
  • the active substance and the host molecule are introduced in solid or liquid form into a container in which the dense fluid under pressure and the diffusion agent are injected in carefully chosen proportions.
  • the conditions of pressure and temperature and the duration of the treatment are defined, by any appropriate method, depending on the nature of the active substance (s) and the host molecule (s).
  • the molecular diffusion step (b) of the process according to the present invention is carried out with stirring.
  • the diffusion agent may be added continuously or discontinuously in an amount of between 1 and 25% by weight, preferably between 8 and 20% by weight. Preferentially, for natural cyclodextrins the amount is between 10 and 15%; between 8 and 15% for cyclodextrins of RAMEB or HBCD type; between 12 and 15% for cyclodextrin derivatives.
  • step (b) can be repeated as many times as desired to obtain a satisfactory dissolution rate.
  • step (b) lasts between about 2 and 16 hours.
  • step (b) The pressure and temperature conditions of step (b) are chosen so as to promote molecular diffusion.
  • the pressure of the supercritical fluid is between 5 MPa and 40 MPa and the temperature between 0 and 120 ° C.
  • the temperature conditions of step b) are between 60 ° C. and 90 0 C and preferably between 60 ° C and 85 ° C.
  • step (b) of the process according to the present invention is carried out in a reactor closed at high pressure.
  • the process comprises an additional step (b ') in which the cyclodextrin (s) are added in excess.
  • the excess of cyclodextrin (s) is added to obtain at the end of the process a total concentration of cyclodextrin (s) of the order of 24 g / l to 98 g / l and preferably between 60 g / l. 1 and 85 g / l.
  • the process may be carried out batchwise or as described in patent application WO 03/043604.
  • the process according to the present invention is carried out batchwise.
  • the present invention also relates to soluble molecular complexes comprising a poorly soluble active substance in a retinoid-type aqueous medium included in one or more host molecules, characterized in that they may be obtained by the process according to the present invention.
  • the implementation of the molecular diffusion step in dense medium under pressure in the presence of a diffusion agent allows a strong interaction of the particles of active substance with the host molecule, which favors dissolution in an aqueous medium, which is multiplied by about 100 by the method according to the present invention.
  • the invention also relates to the use of the complexes obtained by the process for the treatment.
  • the complexes of the invention are particularly suitable in the following therapeutic areas:
  • the compounds can also be used in certain inflammatory conditions that do not have a keratinization disorder, such as folliculitis,
  • the complexes according to the invention are particularly suitable for the treatment, in a preventive or curative manner, of acne vulgaris.
  • This example is intended to verify the complexation of adapalene with supercritical CO2 cyclodextrins in order to increase the aqueous solubility of the active ingredient.
  • the complexation yield is evaluated by measuring the reduction (or disappearance) of the thermal peak relative to the active ingredient remained free.
  • the operating conditions are fixed by default:
  • Adapalene exactly weighed into a 25 ml vial.
  • Dissolve and top up with Dimethylformamide (DMF) HPLC. Take 1.0 ml of solution in a 20 ml vial. Add 5 ml DMF, make up to the volume with the mobile phase.
  • DMF Dimethylformamide
  • Control solution SM: Add 100 mg of control Adapalene in a 100 ml flask. Dissolve and make up to the volume with tetrahydrofuran (THF). Range Tl: Dilution at 1 / 1000th of SM in the mobile phase (O.OOlmg / ml)
  • T2 Dilution at 1 / 100th of SM in the mobile phase
  • T4 1 / 20th dilution of SM in the mobile phase
  • the correlation coefficient must be greater than 0.995.
  • the chromatographic conditions and the concentrations of the control solutions are the same as that of the assay.
  • This example shows the complexation of ⁇ adapalene with at least 2 types of cyclodextrins and shows a very improved solubility in the case of the complexation of adapalene with the cyclodextrin methyl beta RAMEB.
  • Example 2 Stabilization of the Complex Comprising Adapalene and the Cyclodextrin Methyl Beta RAMEB
  • This example is intended to show the stability of the complex obtained in Example 1 by varying the molar ratio and temperature parameters of the process by studying the dissolution profile of the complex.
  • TNT-Methyl-beta 02041 1468 mcg / ml 1304 ⁇ g / ml 1308 g / ml nr 1257 mcg / ml RAMEB / 1: 4 (3.9) (3.9; ( "/ -; (4.o;
  • TNT-Methyl-beta 02042 2425 ug / ml 1964 g / ml 1864 g / ml nr 1914 mcg / ml RAMEB / 1: 6 (3.8J (3.7) ( "/ -; (3.s ;;
  • Example 3 Obtaining a Complex Comprising Retinal (Active Substance) and Different Types of Cyclodextrins (Host Molecule)
  • This example is intended to verify the complexation of retinal with cyclodextrins by supercritical CO2 in order to increase the aqueous solubility of the active ingredient.
  • the complexation yield is evaluated by measuring the reduction (or disappearance) of the thermal peak relative to the active ingredient remained free.
  • the operating conditions are fixed by default: one mole of retinal with the equivalent of 2 moles of cyclodextrins.
  • Phase B pH 6.4 buffer
  • the correlation coefficient must be greater than 0.995.
  • Retinal content expressed in p. cent (m / m) is given by the formula:
  • the chromatographic conditions and the concentrations of the control solutions are the same as that of the assay.
  • Dissolution Physical Mix Dissolution after maturation ( ⁇ g / mL) ( ⁇ g / mL)
  • TNT 06 175 B gama 1: 2 4.16 2.8 2, 7 2.9 3.0 4.6 4.6 6.2 6.6
  • This example shows the complexation of retinal with at least two types of cyclodextrins and shows a very improved solubility in the case of the complexation of retinal with cyclodextrin methyl beta RAMEB.

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Abstract

La présente invention se rapporte à un procédé de préparation de complexes moléculaires entre un agent rétinoïde et des cyclodextrines par la technologie de fluides denses sous pression en particulier celle du C02.

Description

PROCEDE DE PREPARATION DE COMPLEXES MOLECULAIRES ENTRE UN AGENT RETINOIDE ET DES CYCLODEXTRINES .
La présente invention se situe dans le domaine de la chimie et de la pharmacie et concerne un procédé de préparation de complexes moléculaires solubles par la technologie des fluides denses sous pression, notamment celle du C02. En particulier, la présente invention se rapporte à un procédé de préparation de complexes moléculaires entre un agent rétinoïde et des cyclodextrines par la technologie de fluides denses sous pression.
Les nouvelles molécules pharmaceutiques, à forte valeur ajoutée, sont dans 40% des cas insolubles ou peu solubles dans l'eau, ce qui nuit à leur biodisponibilité.
Dans les domaines pharmaceutiques, cosmétique et nutraceutique, il existe un certain nombre de demandes de brevets, brevets et publications relatifs à la formation, en milieu sous pression, de complexes moléculaires d'une substance active dans un substrat enrobant. Néanmoins, la plupart des procédés décrits ne concerne pas l'objectif d'amélioration de la biodisponibilité, mais plutôt l'adsorption d'une substance active sur un substrat.
Van Hees et al. (Application of supercritical carbon dioxide for tAze préparation of a Piroxicam-ss-cyclodextrin inclusion compound, Pharmaceutical Research, Vol. 16, N 12, 1999) décrivent dans leur publication un procédé d'inclusion de Piroxicam dans les (3-cyclodextrines par CO2 supercritique. Le piroxicam étant peu soluble dans l'eau, son inclusion dans les P-cyclodextrines doit permettre d'augmenter sa solubilité dans l'eau. Le procédé consiste à placer un mélange de piroxicam et de (3-cyclodextrines dans un réacteur, laissé en mode statique. Après dépressurisation le mélange obtenu est broyé et homogénéisé avant caractérisation par : DSC (Differential Scarming Calorimetry) , mesure de solubilité dans 1 ' acétonitrile et comparaison avec la solubilité du piroxicam seul, et méthodes spectroscopiques .
L'analyse par DSC permet de conclure quant à la complexation du piroxicam avec la p-cyclodextine .
Dans la demande WO2006/070093, il est décrit une composition comprenant de l'adapalene solubilisé en milieux aqueux avec des cyclodextrines ou des dérivés de celles-ci. La composition comprend donc un mélange physique entre l'adapalene et les cyclodextrines.
La demande WO2004/096284 décrit un procédé de préparation de complexes moléculaires solubles comprenant une ou plusieurs substances actives peu solubles dans un milieu aqueux incluses dans un ou plusieurs molécules hôtes et en particulier des analgésiques, des antipyrétiques, des antibiotiques, des anti-inflammatoires. Ledit procédé comprend une étape (a) de mise en contact d'une ou plusieurs substances actives avec une ou plusieurs molécules hôtes, une étape (b) de mise en oeuvre d'une étape de diffusion moléculaire par mise en contact, en mode statique, d'un fluide dense sous pression avec le mélange obtenu à l'étape (a) en présence d'un ou plusieurs agents de diffusion, (c) récupération du complexe moléculaire ainsi formé.
De façon surprenante, les inventeurs de la présente demande ont découvert qu'un procédé comprenant une étape de diffusion moléculaire par un fluide dense sous pression en mode statique et dépourvu de l'étape de lavage subséquente à l'aide d'un fluide supercritique, améliorait significativement le taux d'inclusion de la substance active et en particulier un agent rétinoïde en fonction de la quantité d'un agent de diffusion ajoutée au milieu.
En effet, comme démontré dans les exemples, ce procédé permet d' obtenir un complexe moléculaire comprenant un agent rétinoïde et des cyclodextrines dont la solubilité est très améliorée par rapport au mélange physique avec un agent rétinoïde et des cyclodextrines.
Ainsi, la présente invention concerne un procédé de préparation de complexes moléculaires solubles comprenant une substance active peu soluble dans un milieu aqueux et en particulier un agent rétinoïde incluse dans une ou plusieurs molécules hôtes, caractérisé en ce qu'il est limitativement constitué par les étapes suivantes:
(a) mise en contact d'une ou plusieurs substances actives avec une ou plusieurs molécules hôtes, (b) mise en oeuvre d'une étape de diffusion moléculaire par mise en contact, en mode statique, d'un fluide dense sous pression avec le mélange obtenu à l'étape (a) en présence d'un ou plusieurs agents de diffusion,
(c) récupération du complexe moléculaire ainsi formé. Le procédé décrit ci-dessus peut comprendre une étape supplémentaire d) de séchage du complexe, avantageusement à une température comprise entre 400C et 600C de préférence sous vide.
La présente invention se rapporte à un procédé de préparation de complexes moléculaires entre un agent rétinoïde et des cyclodextrines par la technologie des fluides denses sous pression. En particulier, la présente invention se rapporte à un procédé de préparation de complexes moléculaires entre le rétinal et des cyclodextrines par la technologie des fluides denses sous pression.
Par fluide dense sous pression, on entend au sens de la présente invention tout fluide utilisé à une température ou une pression supérieure à leur valeur critique. Avantageusement il s'agit du CO2 pur ou en mélange avec un solvant organique classiquement utilisé par l'homme du métier .
Par substance active peu soluble dans un milieu aqueux, on entend au sens de la présente invention toute substance active peu ou pas soluble dans un milieu aqueux et ayant en particulier une solubilité inférieure à au moins 20 mg/ml .
Avantageusement il s'agit d'une substance active choisie dans le groupe des rétinoïdes ou les dérivés à l'exception de l'adapalène.
Par rétinoïde, on entend tout composé se liant aux récepteurs RAR et/ou RXR tel que la trétinoïne (notamment le produit Retacnyl® commercialisé par la société Galderma) ou l' isotrétinoïne (produit Roaccutane® commercialisé par les Laboratoires Roche) . Le rétinoïde préférentiellement choisi est le rétinal.
A titre d'exemple on peut encore citer comme rétinoïde, l'acide rétinoique, la trétinoine, le tazarotène, le rétinal, le rétinol ainsi que ceux décrits dans les brevets ou demandes de brevet suivants : US 4,666,941, US 4,581,380, EP 0 210 929, EP 0 232 199, EP 0 260 162, EP 0 292 348, EP 0 325 540, EP 0 359 621, EP 0 409 728, EP 0 409 740, EP 0 552 282, EP 0 584 191, EP 0 514 264, EP 0 514 269, EP 0 661 260, EP 0 661 258, EP 0 658 553, EP 0 679 628, EP 0 679 631, EP 0 679 630, EP 0 708 100,
EP 0 709 382, EP 0 722 928, EP 0 728 739, EP 0 732 328,
EP 0 740 937, EP 0 776 885, EO 0 776 881, EP 0 823 903,
EP 0 832 057, EP 0 832 081, EP 0 816 352, EP 0 826 657, EP 0 874 626, EP 0 934 295, EP 0 915 823, EP 0 882 033,
EP 0 850 909, EP 0 879 814, EP 0 952 974, EP 0 905 118,
EP 0 947 496, WO98/56783, WO99/10322, WO99/50239, WO99/65872. ]
Les concentrations en rétinoïde préférées sont comprises entre 0,0001 et 20 % en poids par rapport au poids total de la composition.
De manière préférée, la composition selon l'invention comprend entre 0.001 et 5% et avantageusement entre 0.01 et 1 % en poids de rétinoïde par rapport au poids total de la composition, préférentiellement entre 0.01 et 0.5%, de préférence, entre 0.1 et 0.4 % en poids de rétinoïde, encore plus préférentiellement 0.3 % en poids de rétinoïde.
Par molécule hôte, on entend au sens de la présente invention toute substance apte à capter des substances actives. Avantageusement la molécule hôte est choisie dans le groupe constitué par les polyoses et les oses, notamment les cyclodextrines et leur mélange.
Les cyclodextrines utilisées dans la présente invention sont celles connues de la littérature.
Les cyclodextrines (CD) sont des oligosaccharides cycliques constitués d'unités (OC-I, 4) OC-D- glucopyranose avec une cavité centrale lipophile et une surface externe hydrophile (Frômming KH, Szejtli J : « Cyclodextrins in pharmacy », Kluwer Académie Publishers, Dortrecht, 1994) .
Les cyclodextrines sont connues pour augmenter la solubilité de molécules par la formation d'une structure en forme de « cage » possédant une partie hydrophile externe et une partie hydrophobe interne. Les cyclodextrines peuvent ainsi former des complexes d' inclusion avec beaucoup de médicaments en acceptant à l'intérieur de la cavité la molécule entière, ou plus communément la partie lipophile de la molécule.
Les cyclodextrines naturelles les plus abondantes sont les α-cyclodextrines, les β-cyclodextrines et les γ- cyclodextrines.
Les α-cyclodextrines (connues également sous le nom de Schardinger' s CC-dextrin, cyclomaltohexaose, cyclohexaglucan, cyclohexaamylose, OC-CD, ACD, C6A) comprennent 6 unités de glucopyranose . Les β-cyclodextrines (connues également sous le nom Schardinger' s β-dextrin, cyclomaltoheptaose, cycloheptaglucan, cycloheptaamylose, β- CD, BCD, C7A) comprennent 7 unités de glucopyranose, et les γ-cyclodextrines (connues également sous le nom Schardinger' s γ-dextrin, cyclomaltooctaose, cyclooctaglucan, cyclooctaamylose, γ-CD, GCD, C8A) comprennent 8 unités de glucopyranose .
Parmi ces trois types de CDs, les β-cyclodextrines apparaissent comme les agents pharmaceutiques complexants les plus utiles en raison de la taille de leur cavité, de leur disponibilité, de leurs propriétés et de leur faible coût .
Selon Dr J. Szejtli (« Cyclodextrins », in Encyclopedia of Supramolecular Chemistry, eds . Marcel Dekker, 2004) les cyclodextrines sont avantageuses mais présentent également des facteurs limitants qui restreignent l'application des cyclodextrines à certains types de produits pharmaceutiques. Par ailleurs, tous les produits ne sont pas appropriés pour une complexation avec des cyclodextrines . Beaucoup de produits ne peuvent pas être complexés ou bien la complexation ne procure aucun avantage essentiel. Les composés inorganiques sont en général inappropriés à la complexation avec des cyclodextrines.
Les dérivés des cyclodextrines sont également utilisables dans la présente invention. Dans les cyclodextrines, chaque unité de glucopyranose possède trois groupements hydroxyles libres qui diffèrent dans leur fonction et leur réactivité.
De façon avantageuse, il s'agit de la cyclodextrine alpha, de la cyclodextrine beta, de la cyclodextrine gama ainsi qu'aux dérivés de cyclodextrine tel que la methyl beta cyclodextrine, 1 ' hydroxy-propyl beta cyclodextrine, la suifobutylcyclodextrine .
Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, on choisira la méthyl β-cyclodextrine notamment celle connu sous le nom de CRISMEB et préférentiellement la « randomised » méthyl β-cyclodextrine connue sous le nom de RAMEB .
Le ratio molaire entre l'agent actif et la ou les cyclodextrine (s) sont de l'ordre de 1 :1 à 1 :10. Dans un mode préféré, le ratio molaire est 1 : 2 ou 1 : 4 ou 1 : 6 ou 1 : 8 ou encore 1 :10.
Par agent de diffusion, on entend au sens de la présente invention n'importe quel solvant favorisant une interaction de la substance active avec la molécule-hôte.
Avantageusement, cet agent de diffusion est choisi dans le groupe constitué par les alcools, les cétones, les éthers, les esters et l'eau avec ou sans agent surfactant et leurs mélanges. De façon encore plus avantageuse, il s'agit de 1 ' eau .
Par « mode statique » on entend au sens de la présente invention une réaction ou un procédé dans lequel tous les réactifs sont mis simultanément en présence et où on laisse la réaction se dérouler. Par exemple, dans l'étape (b) de la présente invention, on met dans un autoclave la ou les substance (s) active (s), de l'eau et du C02 supercritique et on laisse réagir pendant plusieurs heures. La masse de produit n'évolue pas durant la réaction. A l'inverse, en mode dynamique, les réactifs sont apportés au fur et à mesure de l'évolution de la réaction ou de la production.
Souvent dans le cadre d'un mode dynamique, il y a circulation d'un fluide ou agitation. La masse de produit évolue durant la production.
La substance active et la molécule-hôte sont introduites sous forme solide ou liquide dans un récipient dans lequel est injecté le fluide dense sous pression et l'agent de diffusion dans des proportions judicieusement choisies. Les conditions de pression et de température ainsi que la durée du traitement sont définies, par toute méthode appropriée, en fonction de la nature de la ou des substances actives et du ou des molécules-hôtes.
De façon avantageuse, l'étape (b) de diffusion moléculaire du procédé selon la présente invention est réalisée sous agitation.
L'agent de diffusion peut être ajouté en continu ou en discontinu dans une quantité comprise entre 1 et 25% en masse, de préférence entre 8 et 20% en masse. Préférentiellement , pour des cyclodextrines naturelles la quantité est comprise entre 10 et 15% ; entre 8 et 15% pour des cyclodextrines de type RAMEB ou HBCD ; entre 12 et 15% pour des dérivés de cyclodextrines.
Le temps nécessaire à la diffusion moléculaire de l'étape
(b) est déterminé par toute méthode appropriée. Cette étape
(b) peut être réitérée autant de fois que souhaitée pour obtenir une vitesse de dissolution satisfaisante. Avantageusement, l'étape (b) dure entre environ 2 et 16 heures .
Les conditions de pression et de température de l'étape (b) sont choisies de façon à favoriser la diffusion moléculaire. Avantageusement la pression du fluide supercritique est comprise entre 5 MPa et 40 MPa et la température entre 0 et 1200C. Dans un mode préféré de l'invention, les conditions de température de l'étape b) se situent entre 60 0C et 900C et de manière préférentielle entre 60°C et 85°C.
Avantageusement l'étape (b) du procédé selon la présente invention est mise en oeuvre dans un réacteur fermé en haute pression.
Dans un mode alternatif de la présente invention, le procédé comporte une étape supplémentaire (b' ) dans la quelle, la ou les cyclodextrine (s) sont ajoutées en excès. Dans un mode préféré, l'excès de cyclodextrine (s) est ajouter pour obtenir en fin de procédé une concentration totale de cyclodextrine (s) de l'ordre de 24 g/1 à 98 g/1 et de préférence entre 60 g/1 et 85 g/1. Le procédé peut être mis en oeuvre en batch ou comme décrit dans la demande de brevet WO 03/043604.
De façon avantageuse le procédé selon la présente invention est réalisé en batch.
La présente invention concerne également les complexes moléculaires solubles comprenant une substance active peu soluble dans un milieu aqueux de type rétinoïde incluses dans une ou plusieurs molécules hôtes, caractérisés en ce qu'ils ont susceptibles d'être obtenus par le procédé selon la présente invention.
La mise en oeuvre de l'étape de diffusion moléculaire en milieu dense sous pression en présence d'un agent de diffusion permet une forte interaction des particules de substance active avec la molécule hôte, ce qui favorise la dissolution en milieu aqueux, laquelle est multipliée par environ 100 par le procédé selon la présente invention.
L'invention se rapporte également à l'utilisation des complexes obtenus par le procédé pour le traitement. En particulier, compte-tenu de l'activité marquée des rétinoïdes dans les domaines de la différenciation et de la prolifération cellulaire, les complexes de l'invention conviennent particulièrement bien dans les domaines thérapeutiques suivants :
1) pour traiter les affections dermatologiques liées à un désordre de la kératinisation portant sur la différenciation et sur la prolifération notamment pour traiter les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, rosacées, les acnés nodulokystiques, conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle, l' hidradenite supurative, 2) pour traiter d'autres types de troubles de la kératinisation, notamment les ichtyoses, les états ichtyosiformes, la maladie de Darrier, les kératodermies palmoplantaires, les leucoplasies et les états leucoplasiformes, le lichen cutané ou muqueux (buccal) ,
3) pour traiter d'autres affections dermatologiques liées à un trouble de la kératinisation avec une composante inflammatoire et/ou immuno-allergique et notamment toutes les formes de psoriasis qu'il soit cutané, muqueux ou unguéal, et même le rhumatisme psoriatique, ou encore 1 ' atopie cutanée, telle que l'eczéma ou 1 ' atopie respiratoire ou encore l'hypertrophie gingivale ; les composés peuvent également être utilisés dans certaines affections inflammatoires ne présentant pas de trouble de la kératinisation telles que les folliculites,
4) pour traiter toutes les proliférations dermiques ou épidermiques qu'elles soient bénignes ou malignes, qu'elles soient ou non d'origine virale telles que verrues vulgaires, les verrues planes, le molluscum contagiosum, et 1 ' épidermodysplasie verruciforme, les papillomatoses orales ou florides et les proliférations pouvant être induites par les ultra-violets notamment dans le cas des kératoses actiniques, 5) pour réparer ou lutter contre le vieillissement de la peau, qu'il soit photo-induit ou chronologique, ou pour réduire les pigmentations, ou toutes pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique, 6) pour traiter de manière préventive ou curative les troubles de la cicatrisation, les ulcères cutanés, pour prévenir ou pour réparer les vergetures, ou encore pour favoriser la cicatrisation, 7) pour lutter contre les troubles de la fonction sébacée tels que 1 ' hyperséborrhée de l'acné ou la séborrhée simple,
8) dans le traitement de toute affection d'origine fongique au niveau cutané tel que le tinea pedis et le tinea versicolor,
9) dans le traitement d'affections dermatologiques à composante immunologique,
10) dans le traitement de désordres cutanés dus à une exposition aux rayonnements U. V., et
11) dans le traitement d'affections dermatologiques liées à une inflammation ou une infection des tissus environnants le follicule pileux, notamment dues à une colonisation ou infection microbienne notamment l'impétigo, la dermite séborrhéique, la folliculite, le sycosis barbae ou impliquant tout autre agent bactérien ou fongique.
De préférence, les complexes selon l'invention sont particulièrement adaptés au traitement, de manière préventive ou curative, des acnés vulgaires.
Les exemples suivants de mise en oeuvre du procédé sont donnés à titre indicatif non limitatif.
Exemple 1 : Obtention d/ un complexe comprenant de l'Adapalene (substance active) et différents types de cyclodextrines (molécule-hôte)
Cet exemple a pour but de vérifier la complexation de l'adapalène avec des cyclodextrines par CO2 supercritique afin d'augmenter la solubilité aqueuse du principe actif Le rendement de complexation est évalué par mesure de la réduction (ou disparition) du pic thermique relatif au principe actif resté libre.
Matières utilisées
Le tableau I ci-dessous répertorie l'ensemble des matières utilisées au cours de cette étude.
M (g/mol) eau g%g N0 Lot
Adapalène 412,52 / RM000144K1263
Cyclodextπne alpha 972 9 % 60P304
Cyclodextπne CRISMEB 1190 2,6 % EOOl LAB 3487
Cyclodextπne Méthyl beta 1311, 4 1,00 % 71P018 RAMEB
N = 7*1, 8
Eau distillée stérile 18 MP 7005
Condi tions opératoires
Les conditions opératoires sont fixées par défaut :
Une mole d' adapalène avec l'équivalent de plusieurs moles de cyclodextrines .
Ajout d'eau pour atteindre une teneur de 20 % pour les cyclodextrines naturelles, 10 % pour les cyclodextrines greffées.
Maturation de 2 heures à 600C et 150 bars
Séchage à 500C sous vide durant une nuit. Méthodes analytiques
La teneur en principe actif et les cinétiques de dissolution ont été effectuées en suivant les méthodes décrites ci-après.
a) Méthode de Dosage
Conditions chromatographiques HPLC :
• Colonne : Symmetry C18 250x4.6 mm 5 μm
• Phase mobile : 430 volumes d' acétonitrile 360 volumes de tétrahydrofurane
210 d'eau 0.2 volume d'acide trifloroacétique
• Appareillage HPLC : WATERS 2690 / 2487
• Débit : 1 ml / min • Longueur d'onde : 270 nm
• Sensibilité du détecteur : 2 AUFS
• Volume injecté : 10 μl
• Température du four : 25°C
• Temps d'analyse : 15 minutes
Préparation des solutions : Solutions à examiner :
Introduire l'équivalent de 200 mg d'Adapalène exactement pesés dans une fiole de 25 ml. Dissoudre et compléter au volume avec du Diméthylformamide ( DMF ) HPLC. Prélever 1.0 ml de solution dans une fiole de 20 ml. Ajouter 5 ml de DMF, compléter au volume avec la phase mobile.
Solution témoin : SM : Introduire 100 mg d'Adapalène témoin dans une fiole de 100 ml. Dissoudre et compléter au volume avec du Tétrahydrofurane ( THF ) . Gamme Tl : Dilution au l/1000ème de SM dans la phase mobile ( O.OOlmg/ml )
T2 : Dilution au l/100ème de SM dans la phase mobile
( 0.010 mg/ml ) T3 : Dilution au l/50ème de SM dans la phase mobile (
0.020 mg / ml )
T4 : Dilution au l/20ème de SM dans la phase mobile (
0.050 mg / ml )
T5 : Dilution au l/10ème de SM dans la phase mobile ( 0.100 mg / ml )
Réalisation de 1 'essai :
Injecter 10 μl de chaque solution témoin.
Effectuer une régression linéaire des surfaces des pics d'Adapalène par rapport aux concentrations. Le coefficient de corrélation doit être supérieur à 0.995.
Réaliser 2 préparations par essai
Injecter 20 μl des solutions à examiner. Mesurer l'aire du pic d'Adapalène dans chaque solution à examiner. En déduire la concentration X en mg/ml d'après la droite de régression des témoins
La teneur en d'Adapalène exprimée en p. cent (m/m) est donnée par la formule : [Adapalène] en p. cent (m/m) = X x 500x100 / Pe
Pe : prise d'essai en mg de la substance à examiner
b) Cinétique de dissolution à 3 g/1 et à 250C
Les conditions chromatographiques et les concentrations des solutions témoin sont les mêmes que celle du dosage.
Appareillage :
• Agitation : Banc 15 positions • Bain thermostaté : 25°C +/- 2°C vérifié sur sonde Prolabo PR 531
• HPLC Waters 2690 - Détecteur 2487/2996
• Pesées : Balance Sartorius A200 • Dilutions : Micro-pipette Eppendorf Research 1000, Eppendorf Research 5000, Gilson M1000
• Station d'eau Ultrapure : ELGA Conditions opératoires :
Dans un erlenmeyer de 100 ml, introduire une prise d'essai équivalente à 150 mg d'Adapalène. Ajouter 50 ml d'eau. Mettre sous agitation magnétique à 400 rpm ou position 4 dans un bain-marie à 25°C +/- 2°C. Effectuer un prélèvement de 2 ml sous agitation magnétique à 15, 30, 60, 120 et 1140 minutes. Filtrer ces prélèvements sur filtres polypropylène 0.45μm Gelman GHP Acrodisc. La solution doit être limpide. Diluer les prélèvements dans la phase mobile d'un facteur « a » permettant d'avoir un pic d'Adapalène de surface comprise entre les surfaces des Témoin 1 et Témoin 5.
Réalisation de 1 'essai
Injecter 10 μl de chaque solution témoin. Effectuer une régression linéaire des surfaces des pics de Adapalène par rapport aux concentrations. Le coefficient de corrélation doit être supérieur à 0.995. Injecter 10 μl des solutions à examiner.
Mesurer l'aire du pic d'Adapalène dans chaque solution à examiner .
En déduire la concentration X en μg/ml d'après la droite de régression des témoins Calculer la concentration en μg d'Adapalène solubilisé par ml avec la formule :
[Adapalène] en μg/ml = X x a Représenter graphiquement la variation de la quantité dissoute en μg/ml en fonction du temps.
Immédiatement, en fin de dissolution, noter l'aspect et mesurer le pH de la solution.
RESULTATS ET DEROULEMENT DE L'ETUDE
Afin de vérifier la solubilité apparente de l'adapalène en milieux aqueux, trois essais ont été réalisés avec différentes cyclodextrines et en utilisant l'éthanol comme agent de diffusion: la cyclodextrine alpha (6 unités glucose) la cyclodextrine méthyl-beta CRISMEB la cyclodextrine méthyl-beta RAMEB / Ethanol
Ces échantillons ont été analysés et les résultats sont regroupés dans le tableau II, ci-dessous dans lequel sont indiqués :
- Les différents systèmes « cyclodextrine / ratio molaire »
- La référence de l'échantillon
- La teneur massique en principe actif après maturation
- Les résultats de dissolution aqueuse à 15, 30, 60 et 120 minutes de l'adapalène après maturation (gras) et pour un mélange physique correspondant (italique) .
- Le pH du milieu de dissolution après 120 minutes pour la poudre après maturation (gras) et pour le mélange physique correspondant (italique) .
Tableau II
Figure imgf000020_0001
Cet exemple montre la complexation de lλadapalene avec au moins 2 types de cyclodextrines et montre une solubilité très améliorée dans la cas de la complexation de l'adapalène avec la cyclodextrine méthyl beta RAMEB. Exemple 2 : stabilisation du complexe comprenant de l'Adapalene et la cyclodextrine méthyl beta RAMEB
Cet exemple a pour but de montrer la stabilité du complexe obtenu dans l'exemple 1 en faisant varier les paramètres de ratio molaire et de température du procédé en étudiant le profil de dissolution du complexe.
Afin de confirmer l'intérêt d'augmenter la concentration de cyclodextrine et de différencier l'effet des cyclodextrines complexées au cours de la maturation avec l'effet des cycldextrines ajoutées au milieu de dissolution, des complexes à différents ratios ont été réalisés par CO2 supercritique ( ratio molaire 1 : 2 ; 1 : 4 ; 1:6 ; 1:8 ; 1:10) . Par ailleurs, pour cette série d'essai, la température de maturation a été de 85°C au lieu de 6O0C. Des cinétiques de dissolution ont été ensuite effectuée à 15 minutes, 7 jours, 30 jours et 48 jours (Tableau III) .
Ces valeurs sont reportées graphiquement sur la Figure 1. On constate que l'augmentation de la température de maturation et du ratio de cyclodextrine ont permis d'obtenir une solubilité apparente plus importante même si les profils restent généralement décroissants.
Tableau I I I
Dissolution (pH)
N° de lot cyclo / ratio Teneur 15 7 30 48 massique minutes jours jours jours
Adapalène seul 100 % 0 μg/ml 0 μg/ml nr nr (5J) (5.7)
TNT-01149 Méthyl-beta 12,5 % 993 μg/ml 720 μg/ml 391 μg/ml 370 μg/ml RAMEB/ 1 : 2 (3.9) (3.9J (nr) (4.6)
TNT-02041 Méthyl-beta 7,3 % 1413 μg/ml 854 μg/ml 704 μg/ml 625 μg/ml RAMEB / 1 : 4 (3.9) (3.9J ("/-; (4.5)
TNT-02042 Méthyl-beta 5.0 % 2406 μg/ml 1723 μg/ml 1456 μg/ml 1392 μg/ml RAMEB / 1 : 6 (3.8) (3.8) (nr)
TNT-02043 Méthyl-beta 3,4 % 2307 μg/ml 1867 μg/ml 1755 μg/ml 1829 μg/ml RAMEB / 1 : 8 (3.7J (3.8J ("/-; (3.9)
TNT-02044 Méthyl-beta 3,1 % 2919 μg/ml 2383 μg/ml 2189 μg/ml 2318 μg/ml RAMEB / 1 : (3.8J (3.8J (nr) (3.8J 10
Augmenter le ratio molaire au cours de la maturation revient à augmenter la concentration de cyclodextrine méthyl-beta RAMEB présent ultérieurement dans le milieu de dissolution. Pour bien dissocier ces deux effets, des profils de dissolution des lots ratio 1:2, 1:4 et 1:6 ont aussi été effectués dans une solution contenant de la cyclodextrine en excès afin de maintenir une concentration totale en cyclodextrine de 80 g/1 (Figure 2) .
Sur le graphe en figure 2, les courbes pointillés correspondent à des solutions dont les compositions sont strictement identiques (C-adapalène = 3 g/1, C- cyclodextrine = 80 g/1) . Les valeurs numériques de ces courbes sont indiquées dans le tableau IV ci-dessous. Tableau IV
Dissolution (pH)
N° de lot cyclo / ratio 15 7 30 35 48 minutes jours jours jours jours
Mélange physique 2 μg/ml 80 μg/ml nr 82 μg/ml nr (5,0) (4.5)
TNT-01149 Méthyl-beta 1001 μg/ml 934 μg/ml 896 μg/ml nr 979g/ml RAMEB / 1 : 2 (4.0) (nr) (4.12)
TNT-02041 Méthyl-beta 1468 μg/ml 1304μg/ml 1308 μg/ml nr 1257 μg/ml RAMEB / 1 : 4 (3.9) (3.9; ("/-; (4.o;
TNT-02042 Méthyl-beta 2425 μg/ml 1964 μg/ml 1864 μg/ml nr 1914 μg/ml RAMEB / 1 : 6 (3.8J (3.7) ("/-; (3.s;;
Nous pouvons conclure que la cyclodextrine complexée au cours de la maturation contribue à augmenter la solubilité apparente de l'adapalène tandis que la cyclodextrine simplement ajoutée au milieu améliore la stabilité de la solution d' adapalène en maintenant l'état d'équilibre vers la forme complexée.
Exemple 3 : Obtention d'un complexe comprenant du Rétinal (substance active) et différents types de cyclodextrines (molécule-hôte)
Cet exemple a pour but de vérifier la complexation du rétinal avec des cyclodextrines par CO2 supercritique afin d'augmenter la solubilité aqueuse du principe actif
Le rendement de complexation est évalué par mesure de la réduction (ou disparition) du pic thermique relatif au principe actif resté libre. Matières utilisées
Le tableau V ci-dessous répertorie l'ensemble des matières utilisées au cours de cette étude.
M (g/mol) eau g%g N0 LOt
Rétinal 284,44 LP 120
Cyclodextrine gama 1297 2,6 % 80P211
Cyclodextrine Méthyl-beta RAMEB 1311 ,4 1 ,00 % 71 P018
N = 7*1 ,8
Eau distillée stérile 18 / MP 12695
Conditions opératoires
Les conditions opératoires sont fixées par défaut : - Une mole de rétinal avec l'équivalent de 2 moles de cyclodextrines .
Ajout d'eau pour atteindre une teneur de 20 % pour les cyclodextrines naturelles, 10 % pour les cyclodextrines greffées. - Maturation de 2 heures à 400C et 150 bars.
Méthodes analytiques
La teneur en principe actif et les cinétiques de dissolution ont été effectuées en suivant les méthodes décrites ci-après. c) Méthode de Dosage
Conditions chromatographiques HPLC :
• Colonne : - Phase stationnaire : Symmetry 30 C 18 - Dimension L X D (mm) : 250 X 4,6
- Diamètre des particules (μm) : 5,0
• Phase mobile : Phase A : Acétonitrile
Phase B : Tampon pH 6,40
• Appareillage HPLC : WATERS 2690 / 2487 • Débit : 1,5 ml / min
• Longueur d'onde : 365 nm
• Volume injecté : 10 μl
• Temps d'analyse : 47 minutes
• Phase de dissolution : Acétonitrile
Préparation des solutions : Solutions à examiner :
Dans une fiole jaugée de 50,0 ml, introduire 25,0 mg exactement pesés de rétinal, diluer dans 5,0 ml de Diméthylformamide et compléter au volume avec la phase de dissolution .
Solution témoin :
Solution Mère (SM) :
Dans une fiole jaugée de 50,0 ml, introduire 50,0 mg exactement mesuré de rétinal et compléter au volume avec la phase de dissolution. Gamme :
Tl Dilution au l / 100eme de SM ( 0 , 010 mg/ml ; T2 Dilution au l / 50eme de SM ( 0 , 020 mg/ml ; T3 Dilution au l /25eme de SM ( 0 , 040 mg/ml ; T4 Dilution au l / 10eme de SM (0,100 mg/ml) T5 Dilution au l / 5eme de SM (0, 200 mg/ml) Réalisation de 1 'essai :
Injecter 10 μl de chaque solution témoin.
Effectuer une régression linéaire des surfaces des pics de rétinal par rapport aux concentrations. Le coefficient de corrélation doit être supérieur à 0.995.
Réaliser 2 préparations par essai
Injecter 10 μl des solutions à examiner. Mesurer l'aire du pic de rétinal dans chaque solution à examiner. En déduire la concentration X en mg/ml d'après la droite de régression des témoins
La teneur en de rétinal exprimée en p. cent (m/m) est donnée par la formule :
[Rétinal] en p. cent (m/m) = X x 50x100 / Pe Pe : prise d'essai en mg de la substance à examiner
d) Cinétique de dissolution à 370C
Les conditions chromatographiques et les concentrations des solutions témoin sont les mêmes que celle du dosage.
Appareillage :
• Agitation : Banc 15 positions
• Bain thermostaté : 37°C+/- 2°C vérifié sur sonde Prolabo PR 531 • HPLC Waters 2690 - Détecteur 2487/2996
• Pesées : Balance de précision Mettler A200
• Dilutions : Micro-pipette Eppendorf Research 1000, Eppendorf Research 5000, Gilson M1000
• Station d'eau Ultrapure : ELGA • Filtration sur Acrodisc GHP : 0,45μm Conditions opératoires :
Dans un erlenmeyer de 100 ml, introduire une prise d'essai équivalente à 50 mg de rétinal. Ajouter 50 ml d'eau. Mettre sous agitation magnétique à 400 rpm ou position 4 dans un bain-marie à 37°C +/- 2°C. Effectuer un prélèvement de 2 ml sous agitation magnétique à 15, 30, 60, 120 minutes. Filtrer ces prélèvements sur filtres polypropylène 0.45μm Gelman GHP Acrodisc.
Réalisation de 1 'essai
Injecter 10 μl de chaque solution témoin. Effectuer une régression linéaire des surfaces des pics de rétinal par rapport aux concentrations. Le coefficient de corrélation doit être supérieur à 0.995. Injecter 10 μl des solutions à examiner.
Mesurer l'aire du pic de rétinal dans chaque solution à examiner .
En déduire la concentration X en μg/ml d'après la droite de régression des témoins Calculer la concentration en μg de rétinal solubilisé par ml avec la formule :
[rétinal] en μg/ml = X x 1000
Représenter graphiquement la variation de la quantité dissoute en μg/ml en fonction du temps.
Immédiatement, en fin de dissolution, mesurer le pH de la solution .
RESULTATS ET DEROULEMENT DE L'ETUDE
Afin de vérifier la solubilité apparente du rétinal en milieux aqueux, deux essais ont été réalisés avec différentes cyclodextrines : - la cyclodextrine gamma (Figure 3)
- la cyclodextrine méthyl-beta RAMEB (Figure 4)
Ces échantillons ont été analysés et les résultats sont regroupés dans le tableau VI, ci-dessous dans lequel sont indiqués :
- Les différents systèmes « cyclodextrine / ratio molaire »
- La référence de l'échantillon - La teneur massique en principe actif après maturation
- Les résultats de dissolution aqueuse à 15, 30, 60 et 120 minutes du rétinal après maturation (gras) et pour un mélange physique correspondant (italique) .
- Le pH du milieu de dissolution après 120 minutes pour la poudre après maturation (gras) et pour le mélange physique correspondant (italique) .
Dissolution Mélange Physique Dissolution après maturation (μg/mL) (μg/mL)
cyclo % API 15' 30' 60' 120' 15" 30" 60" 120" /ratio
Rétinal 100 0,0 0,0 0,0 0,0 I I I I
TNT 06 175 B gama 1 :2 4,16 2,8 2, 7 2,9 3,0 4,6 4,6 6,2 6,6
TNT 06 175 C RAMEB 5,3 2,8 3,2 6, 7 16, 1 22,5 23,0 24,4 21,6
1 :2
Cet exemple montre la complexation du rétinal avec au moins 2 types de cyclodextrines et montre un solubilité très améliorée dans le cas de la complexation du rétinal avec la cyclodextrine méthyl béta RAMEB.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation de complexes moléculaires solubles comprenant une substance active peu soluble dans un milieu aqueux incluses dans une ou plusieurs molécules hôtes, caractérisé en ce qu'il est constitué par les étapes suivantes : (a) mise en contact d'une ou plusieurs substances actives avec une ou plusieurs molécules hôtes,
(b) mise en oeuvre d'une étape de diffusion moléculaire par mise en contact, en mode statique, d'un fluide dense sous pression avec le mélange obtenu à l'étape (a) en présence d'un ou plusieurs agents de diffusion, (c) récupération du complexe moléculaire ainsi formé, caractérisé en ce que la substance active est un rétinoïde ou l'un de ses sels, à l'exception de l'adapalène.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le rétinoïde est le rétinal.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend une étape supplémentaire d) de séchage du complexe, avantageusement à une température comprise entre 400C et 600C de préférence sous vide.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le fluide dense sous pression est du C02.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la molécule hôte est choisie dans le groupe constitué par les polyoses et les oses, de préférence parmi les cyclodextrines et les dérivés de cyclodextrines et leur mélange.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les cyclodextrines sont choisis parmi les -cyclodextrines et les cyclodextrines méthyl béta RAMEB
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'agent de diffusion est choisi dans le groupe constitué par les alcools, les cétones, les éthers, les esters et l'eau avec ou sans agent surfactant et leurs mélanges.
8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'agent de diffusion est l'eau.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que l'étape (b) de diffusion moléculaire est réalisée sous agitation.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il comporte un étape (b' ) dans laquelle la cyclodextrine est ajoutée en excès.
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que l'agent de diffusion est ajouté en continu ou en discontinu dans une quantité comprise entre 1 et 25 % en masse, de préférence entre 8% et 15 % en masse.
12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le ratio molaire rétinoïde/cyclodextrine est compris entre 1/1 et 1/10, avantageusement entre 1/1 et 1/6 et de préférence entre ^ et H.
13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que la pression du fluide supercritique est comprise entre 5 MPa et 40 MPa et la température entre 0 et 120 C, préférentiellement entre 60° C et 900C.
14. Procédé de solubilisation aqueuse de rétinoïde comprenant les étapes suivantes :
a) fournir un complexe d' inclusion de rétinoïde et de cyclodextrine b) solubiliser le complexe de l'étape a) dans une solution aqueuse
c) ajouter un excès de cyclodextrine dans la solution obtenue en b) .
15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que l'étape c) consiste en un ajout de cyclodextrine permettant d'obtenir une concentration totale de la solution en cyclodextrine comprise entre 50 et 120 g/L ; de préférence entre 70 et 90 g/L.
16. Complexes moléculaires solubles comprenant une substance active peu soluble dans un milieu aqueux incluse dans une ou plusieurs molécules hôtes, caractérisés en ce qu'ils ont susceptibles d'être obtenus par le procédé selon l'une quelconque des revendications l à 13.
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