WO2010076921A1 - 약용버섯 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품 - Google Patents

약용버섯 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품 Download PDF

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WO2010076921A1
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cancer
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배기환
김문일
유재국
박병욱
김진표
이익수
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주식회사한국신약
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Definitions

  • the present invention relates to a health food for anticancer containing fermented ginseng powder of Cordyceps sinensis or situation mushroom.
  • Ginseng is a perennial plant belonging to the genus Panax, which has been used as a traditional drug in Korea and China since ancient times, and the genus Panax is one of the most important genus in Chinese medicine. Ginseng not only has an excellent effect on the prevention and treatment of various diseases, but also has a wide range of effects as a tonic and energizing agent for those who have no disease at all, and is known to have no side effects even after long-term use.
  • the central pharmacy said that it greatly strengthens the energy, strengthens the lungs, improves the spleen, and makes the heart comfortable.
  • ginseng is a medicine that boosts the yang of the five intestines, ie, the liver, heart, lung, kidney, and spleen. Used to open the stomach, giwaran, vomiting, thirst quenches the blood well through the long-term body is lighter and longer life.
  • saponin a major component of ginseng, is known to be good for cancer, diabetes, male function enhancement, hypertension, arteriosclerosis, dementia, osteoporosis prevention, anti-aging, promoting brain activity, menopausal disorders, and skin care for women.
  • saponin has been found to have higher anticancer activity, potent hypoglycemic action, and suppress complications than anticancer drugs.
  • the chemical structure of saponin is a glycoside consisting of glyco and aglycone.
  • saponins When these saponins are absorbed by the body, they are broken down by the unique microorganisms in the human intestine and absorbed into the body.
  • the intestinal microorganisms that break down ginseng saponin vary depending on the human constitution and dietary habits, and their presence and degree of retention. Therefore, the effects of ginseng saponin may be different after taking ginseng.
  • Cordyceps sinensis is a mushroom that grows in a rare plateau in China's Qinghai, Sagwang, Yunnan provinces, etc., which is rarely located above 4000 meters above sea level.
  • Cordyceps sinensis Royal Dragonfly Cordyceps, Stink Bugs Cordyceps, Chrysalis Cordyceps, Snowflower Cordyceps, Bubble Bug Cordyceps, and Beetle Cordyceps.
  • Phellinus linteus is a fungus belonging to the genus Phellinus Ban. Em. Imaz , which grows on the stems of mulberry trees and is yellow except for the surface of the mulberry.
  • About 48 species of mud mushrooms belonging to this situation mushroom have been reported all over the world, but in Korea, rust mud mushrooms ( Phellinus ferruginosu ), dried mud mushrooms ( Phellinus gilvus ), dung mud mushrooms ( Phellinus igniarius ), and eggplant mud mushrooms ( Phellinus leavigatus ) , the cherry mud mushroom (Phellinus pomaceus), scratching the mud mushroom (Phellinus obustus) have been reported, including 8 species.
  • Situation mushrooms have been used for uterine bleeding, menstrual irregularities, etc., and have recently been reported to have excellent effects on anticancer activity, tumor suppression, immunity enhancement and whitening.
  • ginseng, Cordyceps sinensis and situation mushroom have excellent anti-cancer effect and immunity strengthening effect.
  • the anti-cancer effect and mushroom spawn of ginseng are due to the biological transformation ability of mushroom seeds. You can maximize your anticancer effects.
  • Korean Patent Registration No. 10-0706696 describes a method of converting ginseng saponin composition
  • Korean Patent Publication No. 2004-0108476 Preparation method of functional biotransformation ginseng using edible and medicinal mushroom culture
  • Korean Patent Publication No. 2008-0020749 describes ginseng and its extract fermented with Cordyceps sinensis and its use
  • Korean Patent Publication No. 2006-0009612 uses ginseng badge Cultivation methods of cordyceps are known.
  • the present inventors have tested the anticancer activity of fermented ginseng using the cedar fungus and the situation mushroom seedlings, fermenting the fungus of the cordyceps, the situation mushroom seedlings in ginseng without a separate process to the biomolecular conversion ability of the mushroom seedlings By confirming that the anticancer effect of the mushroom fermented ginseng is significantly increased and completed the present invention.
  • the problem to be solved by the present invention is to ferment ginseng and mushroom spawn to easily ingest the active ingredient of ginseng irrespective of the constitution of human, medicinal mushroom that can maximize the anticancer effect of ginseng and mushroom spawn To provide a fermented ginseng powder.
  • an object of the present invention is to provide an anti-cancer health food containing the medicinal mushroom fermented ginseng powder.
  • Anti-cancer health food according to the present invention for solving the above problems includes fermented ginseng powder fermented with mushroom spawn.
  • Method for producing a health food for cancer for solving the other problems is the step of drying ginseng; Sterilizing the ginseng; Inoculating and fermenting mushroom seedlings on the ginseng to make fermented products; Pulverizing the fermented product.
  • Drying the ginseng using a conventional ginseng drying method comprises the step of drying to 10 to 36 hours at 15 ⁇ 30 °C to dry the moisture content to 60 to 80%.
  • Inoculating and fermenting the mushroom spawn to the ginseng making the fermented product includes inoculating the mushroom spawn at a concentration of 10 to 15% (total weight percent of the medium), the mushroom spawn and the ginseng 25 ⁇ 30 °C 30 to 60 days in solid fermentation comprises the step of making the fermentation.
  • the grinding of the fermented product includes drying the hot air at 40 to 60 ° C. after the fermentation to grind the conventional ginseng.
  • the mushroom spawn may be at least one selected from the group comprising vegetable worms and Phellinus linteus spawn.
  • the ginseng may be at least one selected from the group consisting of ginseng, white ginseng, straight ginseng, half-goak ginseng, grain ginseng, blood white ginseng, red ginseng, cheonsam, jisam, sheep ginseng, jeolsam, taegeuk ginseng, misam ginseng, and ginseng ginseng.
  • Fermented ginseng fermented using mushroom spawn is made in advance in the form of ginseng saponin which can be absorbed through the fermentation process, so that it is easily absorbed in vivo through metabolic process, and thus the mushroom fermented ginseng extract of the present invention is added to health food and various foods. It can be used, and can be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixed amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment), and may be used according to the effective dose of the pharmaceutical composition. In the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of health control, it may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving cancer comprising the extract of the present invention and a food supplement acceptable food supplement.
  • the health functional food of the present invention includes the form of tablets, capsules, pills or liquids, and the food to which the compound of the present invention can be added, for example, various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, etc. And health functional foods. Specifically, it provides a health functional food for cancer prevention or improvement comprising an extract containing the extract of the present invention as an active ingredient and a food supplement acceptable food supplement additive.
  • the anti-cancer health food containing the mushroom fermented ginseng powder according to the present invention increases the absorption power in vivo through metabolic process by fermenting mushroom spawn in ginseng and making it in the form of ginseng saponin which can be absorbed in vivo. Regardless of the presence of enteric microorganisms, anyone can standardize the effects of ginseng saponin.
  • mushroom spawn and ginseng can maximize the effect of blood lipid reduction, blood sugar lowering, vasodilation, etc. that mushroom spawn and ginseng has, and can help prevent and treat diabetes, hypertension and various diseases.
  • Cordyceps sinensis ginseng increases Rb2, which stimulates macrophage activation, promotes protein and lipid synthesis, Rc, which promotes analgesic activity, and Rd, which stimulates the secretion of adrenal cortex-stimulating hormone, and increases Ck, which increases anti-inflammatory and immunity.
  • Situation mushroom fermented ginseng increased Rg1, which inhibits platelet aggregation, Rh, which stimulates corticosteroid secretion, Rb2, which activates corticosteroid secretion, Rb2, which activates macrophage activation, and Rd, which stimulates corticosteroid secretion. It has a better anticancer effect and pharmacological action than conventional ginseng.
  • fermented ginseng increases the main ingredient of ginseng and saponin, the main ingredient of anti-cancer activity of ginseng, so it shows higher effect than the anti-cancer effect of mushrooms and ginseng.
  • Fermented ginseng prepared by the method according to the present invention can be applied to fermented foods or functional foods, etc. to increase shelf life and improve the medical functionality of the fermented foods or functional foods.
  • FIG. 1 is a flow chart sequentially showing the manufacturing process of mushroom fermented ginseng powder according to the present invention.
  • Figure 2 is a chromatograph analyzed by HPLC the content of saponin standard compared to the saponin content of the fermented ginseng powder according to the present invention.
  • Figure 3 is a chromatograph analyzed by HPLC the content of saponin standard compared to the saponin content of Cordyceps sinensis ginseng powder according to the present invention.
  • Figure 4 is a chromatograph analyzed by HPLC the content of saponin standard compared to the saponin content of the situation mushroom fermented ginseng powder according to the present invention.
  • Cordyceps sinensis powder was prepared using Cordyceps sinensis.
  • Example 1 After cooling the sterile ginseng sterilized in the process of Example 1 10% inoculation of Cordyceps sinensis, solid fermentation at 25 °C for 50 days, harvested and hot-air dried at 50 °C, and then pulverized to prepare Cordyceps fermented ginseng powder.
  • Example 4 In the same manner as in Example 4, inoculated with mushroom mushroom spawn, solid fermentation at 28 °C for 50 days, harvested and hot-air dried at 50 °C, and then pulverized to prepare a mushroom mushroom fermented ginseng.
  • the rats used in the experiment were Japanese black rats (BDF 1 male) purchased from Central Experimental Animal Co., Ltd., and their weight was 20 ⁇ 2g, the breeding temperature was 22 ⁇ 2 °C, and the solid feed (Samyang Feed (Co.) and water)
  • the first solvent (EP) was used as the extraction solvent, and the sample was a sterile saline solution prepared by Korea Pharmaceutical Co., Ltd.
  • RPMI 1640 medium used for cancer cell culture was used as a medium provided by WelGENE Inc.
  • GIBCO Co., Ltd. was used as a test tube for cell culture, a flask for culture, and a filter for obtaining cancer cells, Falcon Co., Ltd.
  • the devices used for cancer transplantation were sterilized at 120 ° C. for 30 minutes. The volume of the cancer was measured using a digital caliper (Digital Caliper).
  • the lung cancer (Lewis Lung Carcinoma: LLC) cells used in the experiment were used by the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, and the lung cancer (Lewis Lung Carcinoma: LLC) cells were cultured in an incubator at 37 ° C with RPMI 1640 medium containing 10% FBS. Trypsin-EDTA was used to separate from the attachment surface. When cells were filled in a 200 ml culture flask, two animals were transplanted and grown in vivo, and then animal experiments were performed using them.
  • the comparative evaluation of the anticancer effect of the prepared by the present invention was evaluated through an anticancer animal experiment, and after the administration of fermented ginseng powder was stopped on the 15th day after the cancer transplantation, the results were measured using a digital caliper. .
  • Inhibition Ratio of Tumor Volume, IRTV) (TV of control-TV of test) x 100 / TV of control.
  • Table 1 shows the results of calculating the inhibition rate by stopping the sample administration and measuring the volume of the cancer and the weight of the cancer 15 days after transplanting the lung cancer (LCC) cells to the mouse.
  • the ginseng powder (Example 1) showed no cancer volume inhibition rate of 17.7% and a cancer weight inhibition rate of 16.8%, and the cancer volume inhibition rate of Cordyceps sinensis powder (Example 2) was 16.4% and cancer weight inhibition rate was 13.1. It was expressed in%, the cancer volume inhibition rate of the situation mushroom powder (Example 3) was 13.7%, the cancer weight inhibition rate was 15.0%, showing a low anticancer effect.
  • Cordyceps fermented ginseng fermented with mushroom spawn in ginseng showed the highest anticancer effect with 36.3% of cancer volume inhibition rate and 35.2% of cancer weight inhibition.
  • the volume inhibition rate was 32.0% and the cancer weight inhibition rate was 30.9%.
  • the positive control group showed good anticancer effect as Taxol was 36.0% and the cancer weight inhibition rate was 36.0%.
  • Cordyceps fermented ginseng and situation mushroom fermented ginseng which fermented ginseng together with mushroom spawn were found to have a significantly better anticancer effect than conventional ginseng and mushrooms. It has been confirmed that the effect is sufficient as a chemical cancer preventive agent or a cancer improvement preventive.
  • the saponin content of ginseng powder, fermented ginseng powder, Cordyceps sinensis ginseng powder, and situation mushroom fermented ginseng powder according to the present invention was analyzed by HPLC.
  • HPLC analysis conditions A pump was used as a mobile acid, H 2 O, B pump was used as AcCN, and the time difference was used.
  • the oven temperature of the column was 30 °C and UV detection was 230nm.
  • Column is Discovery C18 (4.6 ⁇ 250 mm, 5 ⁇ m, Supelco Co.).
  • the ginseng powder fermented ginseng powder of Example 4 according to the present invention was increased Rc, Rb2, Rd, ck than the ginseng powder of Example 1 (see Fig. 2)
  • the situation mushroom of Example 5 Fermented ginseng powder was found to increase Rg1, Re, Rb2, Rd.
  • Cordyceps fermented Ginseng powder and Sichuan mushroom fermented Ginseng powder fermented ginseng with mushroom spawn were better in content of saponin than ginseng powder not fermented with mushroom spawn.

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Abstract

본 발명은, 약용 버섯발효 인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품에 관한 것으로, 인삼을 건조하는 단계; 상기 인삼을 멸균하는 단계; 상기 인삼에 버섯종균을 접종 및 발효시켜 발효물을 만드는 단계; 상기 발효물을 분쇄하는 단계를 포함한다. 이로써, 발효인삼은 종래의 인삼과 달리 버섯종균과 함께 발효시킴으로써 인삼의 주요성분인 사포닌 함량이 증가되고, 항암효과 등 약리작용에 더 효과적이다.

Description

[규칙 제26조에 의한 보정 13.04.2009]　약용버섯 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품
본 발명은 동충하초 또는 상황버섯의 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품에 관한 것이다.
인류 건강을 위협하는 최악의 질병인 악성종양, 즉 암은 심혈관 질환 다음으로 서구사회에서 가장 일반적인 사망원인이다. 현대사회에서 인구의 노령화 흡연인구의 증가 및 대기오염으로 인한 폐암이 현저히 증가하고 있으며 식생활의 서구화에 따른 고지방식의 섭취, 환경오염물질의 증가 음주량의 증가 등으로 대장암, 유방암, 전립선암 등이 지속적으로 증가 추세이다.
따라서 암의 조기예방 및 치료를 가능하게 하여 인간 건강의 증진, 건강한 삶의 질 향상 및 인류보건 증진에 기여할 수 있는 새로운 항암 물질의 창출이 절실히 요구되고 있다. 암치료를 위해 개발된 약제들은 전신치료용 주사나 경구투여에 따른 혈류를 따라 전신에 작용하는 비특이성으로 암세포에 대한 특이성이 낮다. 따라서 약제 투여에 따른 전신적인 부작용이 많으며 수술이나 방사선 치료에 비해 부작용이 많이 나타나는 단점이 있다. 기존의 항암 약물들을 이용하는 암치료 기간은 1주일에 3~5 일씩 3~4 주 간격으로 6개월에서 1년 정도 장기간 투여함에 따라 다양한 항암제 부작용을 야기하여 치료를 중단하는 사례가 많이 발생하고 있다.
암세포를 직접 공격하여 약효를 발휘하는 기존의 화학적 치료법은 부작용이 매우 강할 뿐만 아니라 비특이성의 단점에도 불구하고 임상적으로는 제한적으로 사용할 수 밖에 없는 실정이다. 이에 많은 연구자들은 항암 활성을 가지는 천연 소재를 찾아오고 있으며 그 중에서도 인삼을 포함한 버섯류의 항암 활성에 대한 많은 연구결과들을 보고하고 있다.
상기 천연물중에서 인삼은 예로부터 한국과 중국에서 전통적인 약물로 사용되어온 파낙스(Panax)속에 속하는 다년생 식물로, 파낙스(Panax)속은 한의학에서 의학적으로 가장 중요한 속(genus)들 중의 하나이다. 인삼은 각종 질병의 예방과 치료에 탁월한 효과를 나타낼 뿐만 아니라 전혀 병이 없는 사람들에게도 힘과 활력을 주는 강장제로서 광범위한 약효를 나타내며 장기간 사용하여도 전혀 부작용이 없다고 알려져 있다.
특히, 중추약학에서는 원기를 크게 보하고 폐를 튼튼하게 하며, 비장을 좋게 하고, 심장을 편안하게 해준다고 했으며, 신농본초경에는 인삼은 오장 즉 간장, 심장, 폐장, 신장, 비장의 양기를 돋구어 주는 주약으로 사용하고, 위장의 기를 열어주며, 곽란, 구토, 갈증을 멎게 하고 혈액을 잘 통하게 하며 오래 복용하면 몸이 가벼워지고 장수한다고 기록하고 있다.
또한, 인삼의 주요 성분인 사포닌은 암, 당뇨병, 남성기능 향상, 고혈압, 동맥경화, 치매, 골다공증 예방, 노화방지, 두뇌활동 촉진, 갱년기 장애, 여성 피부미용등에 좋은 것으로 알려져 있다. 특히, 항암제보다 더 높은 항암작용을 하고 강력한 혈당강하작용을 하며 합병증을 억제시키는 효능이 있는 것으로 밝혀졌다.
인삼의 주요성분인 사포닌의 화학구조는 크게 당부분(glycone)과 비당부분(aglycone)으로 구성된 배당체이다. 이러한 사포닌이 체내에서 흡수될 때는 사람의 장내에 있는 특유 미생물에 의해 분해되어 체내로 흡수되어 진다. 하지만 인삼사포닌을 분해하는 장내 미생물은 사람의 체질에 따라 그리고 식습관에 따라 그 존재의 유무와 보유하고 있는 정도가 다르며, 그로 인해 인삼의 복용 후 저마다 효능의 차이가 나타날 수 있다.
한편 동충하초(vegetable worms)는 버섯의 균사체가 동절기에 곤충의 유충이나 성충의 체내에 잠복해 있다가, 하절기에는 곤충의 체내에서 버섯으로 피어나는 신비의 버섯이다. 동충하초는 중국의 청해, 사광, 운남성 등지의 해발 4,000m이상의 인적이 드문 고원지대에서 자생하는 버섯으로 예로부터 그 가치를 매우 귀중하게 여겨 인삼, 녹용을 능가하는 신비의 불로초라 불렸다. 동충하초의 종류로는 왕잠자리동충하초, 노린재동충하초, 풍뎅이동충하초, 번데기동충하초, 눈꽃동충하초, 거품벌레동충하초, 벌동충하초 등 많이 있다.
1997년, 국내에서 동충하초 인공적재배에 성공, 대량생산이 가능하게 되었으며 동충하초는 균의 종류만 해도 시내신스(Cordyceps sinensis), 자포니카(Paecilomyces japonica), 밀리터리스(Cordyceps militaris)등 300여종 이상에 달하며 어떤 곤충에 자랐는가에 따라 다양한 종류와 특이한 모양을 형성하게 된다. 국내에서는 시내신스균으로 재배가 성공한 바 없고 유통되는 동충하초의 균종류에는 밀리터리스, 자포니카 두 종류가 있다.
상황버섯(Phellinus linteus)은 진흙버섯 속(Phellinus Quel. em. Imaz)에 속하는 버섯으로 뽕나무 줄기에 자생하며 삿갓표면을 제외하고는 모두 황색이다. 이 상황버섯 속에 속하는 진흙버섯 속에는 전 세계적으로 약 48종이 보고되고 있으나 우리나라에서는 녹슨진흙버섯(Phellinus ferruginosu), 마른진흙버섯(Phellinus gilvus), 말똥진흙버섯(Phellinus igniarius), 가지진흙버섯(Phellinus leavigatus), 벚나무진흙버섯(Phellinus pomaceus), 찰진흙버섯(Phellinus obustus) 등으로 8종이 보고되었다. 예로부터 상황버섯은 자궁출혈, 월경불순 등에 이용되어 왔으며 최근에는 항암작용, 종양억제, 면역력 강화 및 미백에 우수한 효과가 있다고 보고되어 있다.
이와 같이, 인삼과 동충하초, 상황버섯은 뛰어난 항암효과 및 면역력 강화 효과 등이 있어 이러한 버섯의 종균을 인삼과 함께 발효시키면 버섯종균이 지니고 있는 생물학적변환 능력에 의해 인삼이 지니고 있는 항암효과와 버섯종균이 가지고 있는 항암효과를 극대화시킬 수 있다.
이러한 인삼과 동충하초, 상황버섯은 공통적으로 뛰어난 항암효과 및 면역력 강화 효과가 있다고 보고되어 있는 등 식품은 물론 의약품, 기능성식품 및 화장품의 제조에 널리 사용되고 있다.
따라서, 항암효과가 뛰어난 인삼과 버섯을 이용한 다양한 형태의 제조방법이 개발되어 있으며, 특히, 대한민국 특허 등록번호 제10-0706696호에는 인삼사포닌 조성의 전환방법, 대한민국 특허 공개번호 제2004-0108476호에는 식용 및 약용버섯 배양을 이용한 기능성 생변환 인삼의 제조법, 대한민국 특허 공개번호 제2008-0020749호에는 동충하초로 발효된 인삼과 그 추출물 및 그 용도, 대한민국 특허 공개번호 제2006-0009612호에는 인삼배지를 이용한 동충하초의 재배방법이 공지되어 있다.
상술한 바와 같이 인삼을 미생물 배양용 첨가물에 흡수시킨 후 동충하초와 상황버섯을 접종하는 제조방법이 있으며, 상황버섯 종균을 감자한천배지에 접종 배양한 후 인삼에 배양하는 제조방법이 있으나, 감자한천배지는 추출작업에 번거로움이 있어 불편하며, 인삼 표면에 곡류 분말을 코팅시키고 여기에 동충하초의 균사를 접종하는 제조방법이 공지되어 있으나, 곡류 분말을 제조하는 과정이 필요하므로 제조하는 시간을 연장시키고, 제조해야하는 번거로움이 있다.
따라서, 본 발명자들은 끊임없는 동충하초와 상황버섯 종균을 이용한 발효인삼에 대한 항암활성 효과를 실험한 결과, 동충하초, 상황버섯 종균을 인삼에 별도의 공정 없이 발효시키어 버섯종균이 지니고 있는 생몰학적 변환 능력에 의해 버섯 발효인삼이 가지고 있는 항암효과가 현저히 증가됨을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 인삼과 버섯종균을 발효시켜 인삼의 유효성분을 사람의 체질과 상관없이 용이하게 섭취할 수 있고, 인삼과 버섯종균이 지니고 있는 항암효과를 극대화시킬 수 있는 약용버섯 발효인삼 분말을 제공하는데 있다.
나아가, 본 발명의 과제는 상기 약용버섯 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품을 제공하는데 있다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명에 따른 항암용 건강식품은 버섯종균과 함께 발효시킨 발효인삼 분말을 포함한다.
상기 다른 과제를 해결하기 위한 본 발명에 따른 항암용 건강식품의 제조방법은 인삼을 건조하는 단계; 상기 인삼을 멸균하는 단계; 상기 인삼에 버섯종균을 접종 및 발효시켜 발효물을 만드는 단계; 상기 발효물을 분쇄하는 단계를 포함한다.
상기 인삼을 건조하는 단계는 통상적인 인삼 건조하는 방법을 사용하며, 본 발명에서는 15~30℃에서 10 내지 36시간 건조시켜 수분 함량이 60~80% 되게 건조하는 단계를 포함한다.
상기 인삼을 멸균하는 단계는, 상기 인삼을 1~1.5cm 크기로 절단하는 단계, 상기 인삼을 비닐팩에 190~210g씩 담고 실러(sealer)로 밀봉하는 단계; 상기 비닐팩을 고압 멸균기 안에 넣고, 110~130℃, 1.2kgf/cm2 조건으로 10~20분간 멸균하는 단계; 상기 고압 멸균기에서 상기 비닐팩을 꺼내어 방냉하는 단계를 포함하며 통상적인 인삼 멸균 방법을 사용하며, 본 발명에서는 고압멸균기를 사용한다.
상기 인삼에 버섯종균을 접종 및 발효시켜 발효물을 만드는 단계는 버섯종균을 10~15%(전체 배지 중량%)의 농도로 접종하는 단계를 포함하며, 상기 버섯종균과 상기인삼을 25~30℃에서 30~60일간 고체발효시켜 발효물을 만드는 단계를 포함한다.
상기 발효물을 분쇄하는 단계는, 상기 발효 후 40~60℃에서 열풍 건조하여 통상적인 인삼의 분쇄방법으로 분쇄하는 단계를 포함한다.
상기 버섯종균은 동충하초(vegetable worms), 상황버섯(Phellinus linteus)종균을 포함하는 그룹에서 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
상기 인삼은 수삼, 백삼, 직삼, 반곡삼, 곡삼, 피대백삼, 홍삼, 천삼, 지삼, 양삼, 절삼, 태극삼, 미삼, 수미삼을 포함하는 그룹에서 선택되는 적어도 하나일 수 있다.
버섯종균을 이용하여 발효된 발효인삼은 발효과정을 통해 흡수 가능한 인삼 사포닌의 형태로 미리 만들어줌으로써 대사과정을 통해 생체 내 흡수가 용이하게 되어 본 발명의 버섯 발효인삼 추출물을 건강식품 및 다양한 식품에 첨가물로 사용이 가능하며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있고, 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 개선용을 위한 건강 기능식품을 제공한다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 상세하게는, 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 암 예방 또는 개선용 건강 기능식품을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 버섯 발효인삼 분말을 함유하는 항암용 건강식품은, 인삼에 버섯종균을 발효시켜 생체내에 흡수가 가능한 인삼 사포닌의 형태로 미리 만들어줌으로써 대사과정을 통해 생체내의 흡수력을 높이며, 사포닌 분해능을 갖는 장내미생물의 존재 유무에 관계없이 누구나 인삼 사포닌의 효능이 발휘될 수 있도록 표준화를 할 수 있다.
또한, 버섯종균과 인삼을 발효시킴으로써 버섯종균과 인삼이 지니고 있는 혈중 지방질 감소, 혈당저하, 혈관확장 등의 효과를 극대화시킬 수 있으며 당뇨병, 고혈압 및 각종 질병의 예방 및 치료에 도움을 줄 수 있다.
특히 동충하초, 상황버섯과 인삼의 발효를 통해 버섯의 주요 성분과 인삼의 주요성분인 사포닌이 증가되어 기존의 버섯과 인삼의 항암효과보다 더 높은 효과를 나타내며 부작용이 없어 누구나 섭취할 수 있다.
종래의 인삼보다 동충하초 발효 인삼은 대식 세포 활성화 작용을 하는 Rb2,단백질 및 지질합성 촉진, 진통 작용을 하는 Rc, 부신피질 자극호르몬 분비 촉진 작용을 하는 Rd, 항염작용, 면역력 증가 작용을 하는 Ck를 증가시키고, 상황버섯 발효인삼은 혈소판 응집 억제작용을 하는 Rg1, 부신피질자극호르몬, 코티코스테론분비 촉진 작용을 하는 Re, 대식 세포 활성화 작용을 하는 Rb2, 부신피질 자극호르몬 분비 촉진 작용을 하는 Rd를 증가시켜 종래의 인삼보다 좋은 항암효과 및 약리작용을 갖게 되었다.
따라서 발효인삼은 인삼의 주요 성분과 인삼의 항암활성 주요성분인 사포닌이 증가되어 기존의 버섯과 인삼의 항암효과보다 더 높은 효과를 나타내며 부작용이 없어 누구나 섭취할 수 있다.
본 발명에 따른 방법으로 제조된 발효인삼은 발효식품이나 기능성 식품 등에 적용하여 저장성을 높이고 발효식품이나 기능성 식품의 의학적 기능성을 향상시킬 수 있다.
도 1 은 본 발명에 따른 버섯 발효인삼 분말의 제조공정을 순차적으로 나타내는 순서도이다.
도 2 는 본 발명에 따른 발효인삼 분말의 사포닌 함량에 비교가 되는 사포닌 표준물질의 함량을 HPLC로 분석한 크로마토그래프이다.
도 3 은 본 발명에 따른 동충하초 발효인삼 분말의 사포닌 함량에 비교가 되는 사포닌 표준물질의 함량을 HPLC로 분석한 크로마토그래프이다.
도 4 는 본 발명에 따른 상황버섯 발효인삼 분말의 사포닌 함량에 비교가 되는 사포닌 표준물질의 함량을 HPLC로 분석한 크로마토그래프이다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시 예를 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되어지는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예는 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되어지는 것이다.
<실시예 1> 인삼 분말
수삼을 깨끗한 물로 세척한 후, 25℃에서 24시간 건조시켜 수분함량이 70%가 되도록 조절한 후, 소독된 칼이나 가위를 이용하여 수삼을 1cm 크기로 절단하고, 비닐팩에 200g씩 담아 실러(sealer)로 밀봉한 후, 멸균기 121℃, 1.2kgf/cm2 조건에서 10분간 멸균한 후 멸균기에서 비닐팩을 꺼내어 방냉한 후 50℃에서 열풍건조시킨 후, 분쇄하여 인삼분말을 제조하였다.
<실시예 2> 동충하초 분말
실시예 1과 동일한 방법으로 하되, 동충하초을 이용하여 동충하초 분말을 제조하였다.
<실시예 3> 상황버섯 분말
실시예 1과 동일한 방법으로 하되, 상황버섯을 이용하여 상황버섯 분말을 제조하였다.
<실시예 4> 동충하초 발효인삼 분말
실시예 1의 과정에서 멸균된 인삼 방냉 후 동충하초종균을 10% 접종하고, 25℃에서 50일간 고체발효시키고, 수확하여 50℃에서 열풍건조시킨 후, 분쇄하여 동충하초 발효인삼 분말을 제조하였다.
<실시예 5> 상황버섯 발효인삼 분말
실시예 4와 동일한 방법으로 하되, 상황버섯종균을 접종하고, 28℃에서 50일간 고체발효시키고, 수확하여 50℃에서 열풍건조시킨 후, 분쇄하여 상황버섯 발효인삼 분말을 제조하였다.
<실험예 1> 제조된 인삼, 버섯, 발효인삼 분말의 항암효과 테스트
상기 실시예 1~5에서 제조된 인삼분말, 동충하초 분말, 상황버섯 분말, 동충하초 발효인삼 분말, 상황버섯 발효인삼 분말, 탁솔(양성대조군, 시그마에서 구입)의 항암효과를 검증하기 위해 동물실험을 실시하였다.
실험에 사용한 쥐는 중앙실험동물(주)에서 구입한 일본산 검은 쥐(BDF1 male)로서 체중은 20±2g이며, 사육온도는 22±2℃ 였고 고형사료(삼양사료(Co.)와 물을 충분히 공급하였다. 추출용 용매는 1급 시약(E.P.)을 사용하였으며, 시료는 대한약품주식회사에서 제조한 멸균 생리식염수를 사용하였다. 암세포배양에 사용한 RPMI 1640배지는 WelGENE Inc.에서 제공한 배지를 사용하였고, Trypsin-EDTA는 GIBCO사 것을 사용하였다. 세포배양에 필요한 시험관과 배양용 플라스크 그리고 암세포를 얻기 위한 필터는 Falcon사 것을 사용하였다. 암 이식에 사용한 기구들은 120℃에서 30분 소독한 기구들을 사용하였고, 암의 부피는 디지털 캘리퍼스(Digital Caliper)를 사용하여 그 부피를 측정하였다.
실험에 사용한 폐암(Lewis Lung Carcinoma:LLC)세포는 한국생명공학연구원에서 분양받아 사용하였으며, 폐암(Lewis Lung Carcinoma:LLC)세포는 10% FBS를 넣은 RPMI 1640배지로 37℃의 배양기에서 배양하였고, 부착면으로부터 분리할 때는 Trypsin-EDTA를 사용하였다. 200ml의 배양용 플라스크에 세포가 차면 2마리 동물에 이식하여 in vivo에서 세포를 키운 후 그것을 사용하여 동물실험을 진행하였다.
항암동물실험은 약 15×15×15mm3 크기로 자란 종양을 수술하여 Falcon사의 필터를 이용하여 암세포를 다른 세포와 분리하였으며, 여러 번 세척하여 얻은 암세포를 2×105cell/ml의 농도로 만들어 실험동물의 겨드랑이에 0.1ml씩 주사하여 암을 유발하였다. 암 이식 후 다음날로부터 14일간 인삼분말, 동충하초 분말, 상황버섯 분말, 동충하초 발효인삼 분말, 상황버섯 발효인삼 분말을 각각 100mg/kg의 용량으로 알본산 검은 쥐에게 경구투여하고, 양성대조군으로 탁솔 50mg/kg을 14일간 매일 1회 복강주사 하였다. 암 이식 후 15일째 발효인삼 분말과 탁솔의 투여를 중지하였다.
<시험예 1> 제조된 버섯 발효인삼 분말의 항암효과 비교평가
본 발명에 의해 제조된 의 항암효과에 관한 비교평가를 항암동물 실험을 통해 평가하였으며, 암 이식 후 15일째 발효인삼 분말의 투여를 중지한 후, 디지털 캘리퍼스(Digital Caliper)를 사용하여 결과를 측정하였다. 암의 부피와 암부피억제율의 계산은 암의 부피(Tumor Volume, TV)=Length(mm)×Width2/2. Inhibition Ratio of Tumor Volume,IRTV)=(TV of control - TV of test)×100/ TV of control의 공식으로 계산하였다. 암의 부피를 측정한 후 수술하여 암 덩어리를 얻어 그 중량을 측정하였고, 억제율은 암무게억제율(Inhibition Ratio of Tumor Weight, IRTW)=(TW of control - TW of test)×100/ TW of control의 공식으로 계산하였다.
모든 데이터는 mean±S.D.로 나타냈으며, 분석은 Student's t-test를 실시하였고, p values는 0.05 이하인 경우 유의성이 있다고 하였다. 실험결과는 아래 표1 에 제조된 인삼, 버섯, 발효인삼분말의 항암효과 비교평가 결과를 나타내었다.
표 1
구분 용량(mg/kg) 종양 크기 (mm3) 암부피억제율(%) 종양 무게(g) 암무게억제율(%)
대조군 0 1885±235 0 1.67±0.3 0
인삼분말 100 1551±126 17.7 1.40±0.3 16.8
동충하초분말 100 1574±131 16.4 1.45±0.1 13.1
상황버섯분말 100 1357±128 13.7 1.42±0.3 15.0
동충하초 발효인삼 분말 100 1198±110 36.3 1.08±0.2 35.2
상황버섯 발효인삼 분말 100 1281±125 32.0 1.15±0.3 30.9
탁솔(양성대조군) 50 1206±77 36.0 1.05±0.3 37.0
상기 표1 은 마우스에게 폐암(LCC)세포를 이식 후 15일째 샘플투여를 중지하고 암의 부피 및 암의 무게를 측정하여 억제율을 계산한 결과를 나타낸다. 발효과정을 거치지 않은 인삼분말(실시예1)의 암부피제율은 17.7%, 암무게억제율은 16.8%로 나타났고, 동충하초 분말(실시예2)의 암부피억제율은 16.4%, 암무게억제율은 13.1%로 나타나으며, 상황버섯분말(실시예3)의 암부피억제율은 13.7%, 암무게억제율은 15.0%로 낮은 항암효과를 보였다. 그러나 인삼에 버섯종균을 발효시킨 동충하초 발효인삼(실시예4)의 암부피억제율은 36.3%, 암무게억제율은 35.2%로 가장 높은 항암효과를 보였으며, 상황버섯 발효인삼(실시예5)의 암부피억제율은 32.0%, 암무게억제율은 30.9%로 좋은 항암효과를 보였으며, 양성대조군으로 탁솔은 암부피억제율은 36.0%, 암무게억제율은 37.0%로 좋은 항암효과를 보였다.
따라서, 버섯종균과 함께 인삼을 발효시킨 동충하초 발효인삼과 상황버섯 발효인삼은 종래의 인삼과 버섯보다 항암효과가 현저하게 우수하다는 것으로 확인되었으며, 탁솔과 비슷한 항암효과를 보여 우리가 평소에 섭취하여 암을 예방하는 화학적 암 예방제 또는 암 개선용으로서 그 효과가 충분하다는 것으로 확인 되었다.
<실험예 2> HPLC를 이용한 발효인삼의 시포닌 함량 분석
본 발명에 따른 인삼분말, 발효인삼 분말, 동충하초 발효인삼 분말, 상황버섯 발효인삼 분말의 사포닌 함량을 HPLC로 분석하여 비교하였다.
HPLC분석 조건으로는 이동산으로는 A pump는 H2O, B pump는 AcCN을 사용하였고, 시간대 별로 비율차이를 두어 실시하였으며, 칼람의 오븐 온도는 30℃, UV 검파는 230nm였고, 실험에 사용된 칼람은 Discovery C18 (4.6×250mm, 5μm, Supelco Co.)이다.
실험 결과, 실시예 1의 인삼분말(도 2 참조)보다 본 발명에 따른 실시예4의 동충하초 발효인삼 분말(도 3 참조)은 Rc, Rb2, Rd, ck가 증가되었고, 실시예5의 상황버섯 발효인삼 분말(도 4 참조)은 Rg1, Re, Rb2, Rd가 증가된 것으로 나타났다.
이로써, 버섯종균과 함께 인삼을 발효시킨 동충하초 발효인삼 분말, 상황버섯 발효인삼 분말은 버섯종균과 함께 발효시키지 않은 인삼분말보다 사포닌 성분의 함량이 우수하다는 것으로 확인되었다.

Claims (4)

  1. 버섯 발효인삼 분말의 제조에 있어서,
    인삼을 수분함량 60~80%로 건조하는 단계(제 1공정);
    상기 인삼을 멸균하는 단계(제 2공정);
    상기 인삼에 동충하초(vegetable worms), 상황버섯(Phellinus linteus)을 포함하는 그룹에서 선택되는 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 종균을 접종 및 20~30℃에서 30~60일간 고체발효시켜 발효물을 만드는 단계(제 3공정);
    상기 발효물을 분쇄하는 단계(제 4공정);
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 버섯 발효인삼 분말의 제조 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 인삼은 수삼, 백삼, 직삼, 반곡삼, 곡삼, 피대백삼, 홍삼, 천삼, 지삼, 양삼, 절삼, 태극삼, 미삼, 수미삼을 포함하는 그룹에서 선택되는 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 약용버섯 발효인삼 분말의 제조 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 버섯종균은 접종량은 인삼 사용중량의 5~20%인 것을 특징으로 하는 약용버섯 발효인삼 분말의 제조방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 하나의 항의 방법으로 제조된 버섯 발효인삼 분말을 함유하는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 개선용 건강식품.
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