WO2010076517A1 - Érythrocytes contenant du facteur viii, préparation et utilisations - Google Patents

Érythrocytes contenant du facteur viii, préparation et utilisations Download PDF

Info

Publication number
WO2010076517A1
WO2010076517A1 PCT/FR2009/052608 FR2009052608W WO2010076517A1 WO 2010076517 A1 WO2010076517 A1 WO 2010076517A1 FR 2009052608 W FR2009052608 W FR 2009052608W WO 2010076517 A1 WO2010076517 A1 WO 2010076517A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
factor viii
erythrocytes
erythrocyte
treatment
vivo
Prior art date
Application number
PCT/FR2009/052608
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-François Prost
Original Assignee
Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies filed Critical Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies
Publication of WO2010076517A1 publication Critical patent/WO2010076517A1/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/18—Erythrocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5063—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents

Definitions

  • the present application relates to erythrocytes containing factor VIII, their preparation and their uses, in particular for the treatment of hemophilia.
  • Hemophilia is a hereditary hemorrhagic disease, linked to an X-linked sex chromosome abnormality. This pathology originates from mutations on its protein genes involved in coagulation and is therefore reflected in an inability to coagulate in people with the disease. There are two types of smallpox, a factor VIII deficiency or a factor IX deficiency.
  • Hemophilia A is caused by factor VIII deficiency and remains the most common defect affecting blood clotting: it affects 1 in 5000 men in France, and accounts for 80% of patients with hemophilia.
  • Hemophilia B caused by a factor IX deficiency, affects 20% of patients with hemophilia.
  • the current treatment for hemophilia type A or R is to administer intravenously the deficient or missing coagulation factor.
  • Factor VIII plays a central role in coagulation. Activated by thrombin, it becomes the catalyst for the activation reaction of factor X by activated factor IX, in the presence of calcium ion and phospholipids. The factor X activation reaction is accelerated about 200,000 fold in the presence of factor VIII. Activated Factor X acquires catalytic activity that allows it to convert prothrombin into thrombin. This degrades fibrinogen to fibrin. The clot thus formed will be stabilized by the factor XIII, which makes it possible to stop the bleeding. In plasma, factor VIII circulates as a dimer stabilized by Von WILLEBRAND factor.
  • factor VIII The main source of factor VIII appears to be the liver (Leon et al, 1981, Blood). However, the increase in the factor VIII level in hepatocellular insufficiencies, supposes other sources. This could be confirmed by the highlighting of the mRNA of this factor in other organs, particularly the kidney, the spleen and lymphocytes (Wion, 1985, Nature).
  • the ADM coding for Factor VIII was isolated and expressed in mammalian cells (Wood et al., 198-4 Nature), and its amino acid sequence deduced from cDNA. Its gene is located on the distal end of the long arm of chromosome X. It has a length of 186,000 base pairs (bp), which represents 0.1
  • the DNA coding for the mRNA consists of 26 exons containing
  • Domain A consists of three segments Al, A2, A3: Al (residues 1 - 372), A2 (residues 373-740), A3 (residues 1 (49-2019), and domain B (residues 741-1648).
  • Domain C consists of two segments C1, C2 of about 150 amino acids each: (1 (residues 2020-2172) and € 2 (residues 2173-2332).
  • the sequence of the different domains from the amino terminus is A1-A2-B-A3-C1-C2.
  • Structural homologies exist between Factor VIII and Factor A domains (30-40%) and ceruloplasmin.
  • serine proteases can activate factor VIII (Bihoreau et al., 1992, Med Sciences, Pittman et al., 1988, Proc Natl Acad ScL).
  • factor VIII interacts with von Willebrand factor (VWF), which protects it from plasmatic proteases. It is in this form that the factor Viil circulates in the blood. Vi factor VIII dissociates from VWF after cleavage by thrombin. This cleavage resulted? the elimination of the R domain and the activation of factor VIIl in the form of a heterodimerc. ( 1 ⁇ l) consists of a heavy chain (Al, A2) and a light chain (A3, Cl, C2). When infused into a haemophiliac patient, factor VIII binds to VVV1- blood flow of the patient. For a long time, the treatment of hemophiliacs has been based on the use of plasma products.
  • VWF von Willebrand factor
  • factor VIII for the treatment of hemophiliacs is now available as a drug derived from blood as well as a recombinant drug, comprising factor VIIl produced by genetic engineering. These treatments are! Administered by seeing venous irstra. However, there is difficulty in the formulation of factor VIIl and its duration of action in vivo, which require repeated preparations and administrations.
  • the present invention provides a novel mode of administration of factor VIII. More specifically, the present invention proposes to encapsulate factor VIII in erythrocytes, and to administer erythrocytes to patients in need of treatment with factor VIII.
  • the present application shows that it is possible to encapsulate a protein as large as factor VIII in erythrocytes, and that erythrocytes are capable of releasing active factor VIII in vivo.
  • the invention thus offers a new advantageous approach for the administration of factor VIII.
  • An object of the invention therefore resides in an erythrocyte characterized in that it contains added factor VIII, also designated erythrocyte "loaded" factor VIII.
  • Another subject of the invention resides in a cell suspension comprising erythrocytes as defined above.
  • Another subject of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising an erythrocyte as defined above and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • Another subject of the invention relates to a flexible bag for infusion comprising erythrocytes or a pharmaceutical composition as defined above.
  • Another subject of the invention is the use of erythrocytes as defined above for the preparation of a composition for the delivery of factor VIII to patients in need of factor VIII, in particular hemophiliac patients.
  • Another subject of the invention is erythrocytes as defined above for the delivery of factor VIII to haemophiliac patients.
  • Another object of the invention is a method of administering factor VIII to a subject, including in vitro or in vivo encapsulation of factor VIII in erythrocytes and administration of erythrocytes to the subject.
  • Another object of the invention resides in a method for providing factor VIII to a subject, in particular a hemophiliac patient, the method comprising the administration to said subject of an effective amount of erythrocytes as defined above.
  • the invention also relates to a process for the preparation of factor VIII-loaded erythrocytes, comprising the in vitro or ex vivo permeabilizing treatment of erythrocytes in the presence of factor VIII, and the harvesting of erythrocytes having encapsulated factor VIII.
  • factor VIII is understood to mean a logically active biological protein as defined above, that is to say in particular a protein capable of catalyzing the activation of factor X. It may be a natural protein (plasma) or a recombinant protein. Furthermore, factor VIII may be free or in complexed form, in particular with vWF. A protein of human origin is preferably used. Nevertheless, any mammalian protein or any variant or analog of factor VIII can be administered according to the method of the present invention.
  • the present invention proposes for the first time to encapsulate a high molecular weight protein in erythrocytes, factor VIII.
  • the invention provides different approaches for the production of these erythrocytes and for the release of factor VIII in vivo.
  • the invention thus makes it possible to offer a new solution for the supply of factor VIII to patients, particularly in the context of the treatment of hemophilia.
  • An object of the invention is therefore an erythrocyte containing added factor VIII.
  • factor VIII added refers to the fact that it is factor VIII introduced into the cell, but not factor VIII produced endogenously and naturally by the erythrocyte.
  • containing refers to the fact that factor VIII is present inside the cell, either in free form or in membrane bound form.
  • erythrocytes of varied origin preferably mammalian, especially human erythrocytes. They may be autologous erythrocytes (that is to say obtained from the patient for whom the treatment is intended), allogeneic (of the same species, but not autologous) or xenogeneic (of a species different from that of of the patient).
  • Factor VIII can be encapsulated in erythrocytes using different techniques.
  • the erythrocytes of the invention are typically obtained by subjecting in vitro or ex vivo erythrocytes to a permeabilizing treatment in the presence of factor VIII, followed by the recovery of packed erythrocytes.
  • the permeabilizing treatment may be followed by a renaturing treatment, if appropriate.
  • the process of the invention may be carried out by means of Presswell dilution or, preferably, by a resealing process.
  • the lysis-resealing technique has been described in several prior patents, and in particular in Applications Nos. EP882,448, EP101341, EP679101 or EP 1773452.
  • erythrocytes are subjected to osmotic shock, inducing their lysis at least partial, then to a reconstitution treatment ("resealing"), in the presence of the active agent.
  • the erythrocytes loaded with factor VIII according to the invention are prepared by a process comprising the following steps:
  • d) harvest comprising erythrocytes loaded with factor VIII, generally in the form of a suspension.
  • Factor VIII may be added to the suspension in step a), b) or c).
  • the entire process is carried out at a temperature of less than 10 ° C.
  • the process is carried out in a continuous dialysis unit.
  • the method may comprise an additional step of measuring the osmotic fragility of the erythrocytes, in order to adjust the parameters of the lysis.
  • the suspension of erythrocytes is continuously introduced into the primary compartment of a dialysis element.
  • the secondary compartment is intended to contain a hypotonic aqueous solution relative to the suspension of erythrocytes.
  • the erythrocytes are lysed. Erythrocytes are then resealed in the presence of factor VIII, by increasing the osmotic pressure, preferably in another compartment.
  • the erythrocytes thus loaded with factor VIII can then be recovered in the form of a suspension.
  • the packed red cell is advantageously a leukocyte depleted pellet and pathogen free. It may also have been irradiated.
  • the initial red blood cell has been treated to be enriched in erythrocytes, or even to eliminate any blood components other than erythrocytes. This treatment may consist, for example, of washing in the presence of a saline solution or of preservation, optionally in the presence of factor VIII.
  • the method employs a globular pellet whose blood group is compatible with the recipient, when the latter is identified.
  • the lysis of the erythrocytes is carried out using a hypotonic saline solution with respect to the suspension of step a). It may be for example a solution having an osmolarity of between 40 and 150 mOsm, preferably between 60 and 120 mOsm.
  • the resealing step is advantageously carried out by adding a hypertonic solution to the lysed suspension and, preferably, heating to a temperature of between 25 ° C. and 42 ° C., more preferably between 35 ° C. and 40 ° C. during a period of time ranging from a few minutes to a few hours, typically less than 2 hours.
  • the erythrocytes obtained can be washed, for example in the presence of a saline solution, in particular to remove cell debris or incorrectly reconstituted cells.
  • the method may further include one or more steps of treating or conditioning erythrocytes to facilitate or adapt subsequent release of factor VIII in vivo.
  • This step or these steps may be carried out beforehand, concomitantly or posteriorly to the encapsulation process, in particular in steps a) -d) above.
  • the factor VIII release profile according to the invention can be modified by a denaturing treatment of erythrocytes, to cause a massive or gradual release of factor VIII.
  • the erythrocytes of the invention are treated, before, during or after encapsulation, so as to promote their recognition and their destruction by macrophages.
  • This type of treatment results in faster release of factor VIII in vivo.
  • the treatment can be chemical or physical.
  • erythrocytes can be treated with glutaraldehyde or neuraminidase, as described in eg, Millan et al., Supra.
  • the erythrocytes may be subjected to a thermal denaturing treatment at a temperature of, for example, between 40 ° C. and 65 ° C.
  • the erythrocytes of the invention loaded with a protein of interest, for example factor VIII, are treated before, during or after encapsulation, to express or over-express Rhesus D antigen.
  • the erythrocytes thus obtained are in fact sensitive or more sensitive in vivo to lysis by anti-Rh.
  • the packed erythrocytes of the invention may be stored in various suitable solutions, such as red blood cell preservation solutions, saline solutions, etc., preferably at a temperature of between 1 and 10 ° C.
  • suitable solutions such as red blood cell preservation solutions, saline solutions, etc., preferably at a temperature of between 1 and 10 ° C.
  • the hematocrit level final product is preferably between 40 and 70%.
  • the erythrocytes of the invention are preserved in the form of a suspension in the presence of a suitable saline solution (for example NaCl optionally supplemented with mannitol or glucose), optionally containing other preservatives and stabilizers.
  • a suitable saline solution for example NaCl optionally supplemented with mannitol or glucose
  • the amount of encapsulated factor VIII can be adapted by those skilled in the art. It corresponds preferably to the amount adapted so that a composition or bag according to the invention contains a dose corresponding to a medical prescription of factor VIII.
  • the erythrocytes of the invention may contain one or more other active ingredients, or may be used in admixture with other active ingredients.
  • Another subject of the invention relates to a pharmaceutical composition comprising an erythrocyte as defined above and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • the vehicle is advantageously chosen from saline solutions, sterile, preferably isotonic, optionally supplemented with different preservatives.
  • the compositions are in freeze-dried form, put into solution just before administration.
  • Another subject of the invention relates to a flexible bag for infusion comprising erythrocytes or a pharmaceutical composition as defined above.
  • Another object of the invention resides in the use of erythrocytes as defined above for the preparation of a composition for the delivery of factor VIII to patients in need of factor VIII, in particular hemophiliac patients.
  • Another subject of the invention is erythrocytes as defined above for the delivery of factor VIII to haemophiliac patients.
  • Another object of the invention is a method of administering factor VIII to a subject, including in vitro or in vivo encapsulation of factor VIII in erythrocytes and administration of erythrocytes to the subject.
  • Another object of the invention resides in a method for providing factor VIII to a subject, in particular a haemophiliac patient, the method comprising the administration to said subject of an effective amount of erythrocytes as defined above.
  • compositions of the invention are particularly suitable for systemic administration, preferably intravenously, by injection or infusion.
  • the treatment advantageously comprises a prior step of collecting blood from the patient, obtaining a red blood cell, preparing the drug as described above, and re-infusion.
  • the compositions of the invention comprise a volume or number of packed erythrocytes sufficient to provide the patient with the required dose of factor VIII, i.e., a dose of between 10 and 200 IU protein per day, and per kg of body weight. Administrations can be repeated according to the appropriate therapeutic protocol for the patient.
  • the method of the invention comprises the administration of an erythrocyte composition loaded with a protein of interest, for example, but without limitation, factor VIII.
  • the method of the invention may then further comprise a step of administering an anti-Rhesus D antibody.
  • the erythrocytes express the Rhesus D antigen and the administration of such antibodies makes it possible to increase the speed of in vivo release.
  • the co-administration or the sequential administration of anti-Rhesus D antibodies thus makes it possible to control the release profile of the protein of interest, such as factor VIII, in vivo.
  • the term "protein of interest” means a precise sequence of amino acids, whether or not modified, with or without non-natural amino acids.
  • the protein is of therapeutic interest.
  • the protein of interest is a high molecular weight protein (for example greater than 65 KDa, preferably greater than 67 KDa), such as factor VIII.
  • erythrocytes of the invention expressing a Rhesus D antigen
  • technologies well known to those skilled in the art For example, it is possible to use transfection methods to express an exogenous nucleotide sequence coding for Rh-D using an expression vector.
  • a vector may contain the elements necessary for the expression of the protein in the erythrocyte cell.
  • the vectors preferably include: a promoter, translation initiation and termination signals, and appropriate transcriptional regulatory regions.
  • a particular object of the invention therefore lies in a method for providing a protein of interest, for example factor VIII, to a subject, in particular a hemophiliac patient, the method comprising administering to said subject an effective amount of erythrocytes as defined above and an anti-Rhesus D antibody.
  • the anti-Rhesus antibody D can be administered before, during or after the administration of erythrocytes, preferably during and / or after.
  • Another subject of the invention relates to a composition
  • a composition comprising erythrocytes as defined above and an anti-Rhesus antibody D, for administration in a grouped or separate form, simultaneous or spaced apart over time.
  • BRINKHOUS K.M. Purifed human factor VIII procoagulant protein: comparative hemostatic response after hemophilia infusion and von WILLEB RAND disease dogs. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 82, 8752-8756.
  • PITTMAN D.D. KAUFMAN R.J.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

La présente demande concerne des érythrocytes contenant du facteur VIII, leur préparation et leurs utilisations, notamment pour le traitement de l'hémophilie.

Description

Erythrocytes contenant du facteur VIII, préparation et utilisations
La présente demande concerne des erythrocytes contenant du facteur VIII, leur préparation et leurs utilisations, notamment pour le traitement de l'hémophilie.
L'hémophilie est une maladie hémorragique héréditaire, liée a une anomalie du chromosome X. à transmission récessive liée au sexe. Cette pathologie a pour origine des mutations sur Ses gènes de protéine intervenant dans la coagulation ci se traduit donc par une incapacité à coaguler chez les personnes atteintes. II en existe deux varioles, soit un déficit en facteur VIII, soit un déficit en facteur IX.
L'hémophilie A est causée par la déficience en facteur VIII et reste Ia plus commune des déficiences affectant la coagulation sanguine : elle louche en France 1 homme sur 5000, et représente 80% des patients atteints d'hémophilie. L'hémophile B, causée par une déficience en facteur IX, touche 20% des patients atteints d'hémophilie.
Le traitement actuel de l'hémophilie de type A ou R consiste à administrer par voie intraveineuse le facteur de coagulation déficient ou manquant.
Le facteur VIII joue un rôle central dans la coagulation. Activé par la thrombine, il devient le catalyseur de la réaction d'activation du facteur X par le facteur IX activé, en présence d'ion calcium et de phospholipides. La réaction d'activation du facteur X est accélérée environ 200 000 fois en présence du facteur VIII. Le facteur X activé acquiert une activité catalytique qui lui permet de transformer la prothrombine en thrombine. Celle-ci dégrade le fîbrinogène en fibrine. Le caillot ainsi formé sera stabilisé par le facteur XIII, ce qui permet l'arrêt du saignement. Dans le plasma, le facteur VIII circule sous forme d'un dimère stabilisé par le facteur de Von WILLEBRAND.
La source principale du facteur VIII semble être le foie (Léon et al, 1981, Blood). Cependant l'augmentation du taux de facteur VIII dans les insuffisances hépato- cellulaire, suppose d'autres sources. Ceci a pu être confirmé par la mise en évidence de l'ARNm de ce facteur au niveau d'autres organes, en particulier, le rein, la rate et au niveau des lymphocytes (Wion, 1985, Nature).
L'ADM codant pour Ic Facteur VlIl a été isolé et exprime dans des cellules de mammifères (Wood et al , 198-4. Nature), et sa séquence en acides aminés déduite à partir de FADNc. Son gène est localisé sur l'extrémité distale du bras long du chromosome X. Il a une longueur de 186 000 paires de bases (bp), ce qui représente 0,1
% du chromosome X. L'ADN codant pour l'ARNm est constituée de 26 exons contenant
69 à 3 106 bp. Les 25 introns se répartissent entre 207 à 32 400 bp. Le Facteur VIII sécrété es? une glycoprofόine de niasse moléculaire de 300 Kda (2332 acides aminés).
L'analyse de la molécule facteur VIII montre qu'elle est constituée de trois domaines distincts A, B, C, de l'extrémité N-tcmimaîe à l'extrémité C-terminale (Bihoreau et al, 1992, Med. Sciences ; Philip et al, 1993, Thrombosis and Haemostasie ; White et al, 1989, Blood). Le domaine A est constitué de trois segments Al, A2, A3 : Al (résidus 1 - 372), A2 (résidus 373-740), A3 (résidus 1(49-2019). Le domaine B (résidus 741-1648) est unique. Le domaine C est constitué de deux segments Cl, C2 d'environ 150 acides aminés chacun : (1 { résidus 2020-2172) et €2 { résidus 2173-2332). La séquence des différents domaines à partir de l'extrémité amino -terminale est A1-A2-B-A3-C1-C2. Il existe des homologies de structure entre, les domaines A du facteur VIII et celle du facteur V (30 à 40 %) et la céruloplasmine. Plusieurs serines protéases peuvent activer le facteur VIII (Bihoreau et al, 1992, Med. Sciences , Pittman et al, 1988, Proc. Natl. Acad. ScL).
Apres sécrétion, Ic facteur VIII interagit avec le facteur von Willebrand (VWF) qui le protège des protéases plasmaiiques. C'est sous celle forme que le facteur Viil circule dans le sang. Lc facteur VlII se dissocie du VWF après clivage par la thrombinc. Cc clivage abouti? à l'éliminât ion du domaine R et a l'activation du facteur VIIl sous la forme d'un heterodimerc. (1Ct héicrodnnère est constitué dîme chaîne lourde (Al, A2) et d'une chaîne légère (A3, Cl, C2). Lorsqu'il est perfusé à un patient hémophile, le facteur VIII se fixe sur le VVVl-" dans la circulation sanguine du patient. Depuis longtemps, le traitement des hémophiles est basé sur l'utilisation de produits plasmatiques. La production de facteur VIII recombinant a permis de produire une molécule dépourvue de tous risques infectieux. Son efficacité hémostatique a été démontrée chez de nombreux patients (Bihoreau et al, 1992, Med. Sciences ; Brinkhous, 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. ; Kaplan, 1993, Med. Sciences ; White et al, 1989, Blood).
En France, Io facteur VIII destine au traitement des hémophiles est désormais disponible sous tonne de médicament dérive du sang ainsi que sous forme de médicament recombinant, comprenant du facteur VIIl produit par génie génétique. Ces traitements son! administres par voir irstra veineuse. Une difficuUé réside néanmoins dans îa formulation du facteur VIIl et dans sa durée d'action in vivo, qui nécessitent des préparations et des administrations répétées.
La présente invention propose un nouveau mode d'administration du facteur VIII. Plus précisément, la présente invention propose d'encapsuler le facteur VIII dans des érythrocytes, et d'administrer les érythrocytes à des patients ayant besoin d'un traitement par le facteur VIII. La présente demande montre qu'il est possible d'encapsuler une protéine aussi volumineuse que le facteur VIII dans des érythrocytes, et que les érythrocytes sont capables de libérer le facteur VIII actif in vivo. L'invention offre ainsi une nouvelle approche avantageuse pour l'administration de facteur VIII.
Un objet de l'invention réside donc dans un érythrocyte caractérisé en ce qu'il contient du facteur VIII ajouté, également désigné érythrocyte « chargé » en facteur VIII.
Un autre objet de l'invention réside dans une suspension cellulaire comprenant des érythrocytes tels que définis ci-dessus.
Un autre objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant un érythrocyte tel que défini ci-dessus et un support ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique.
Un autre objet de l'invention concerne une poche souple pour perfusion comprenant des érythrocytes ou une composition pharmaceutique tels que définis ci-dessus. Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d'érythrocytes tels que définis ci- dessus pour la préparation d'une composition pour la délivrance de facteur VIII à des patients ayant besoin de facteur VIII, notamment des patients hémophiles.
Un autre objet de l'invention réside dans des érythrocytes tels que définis ci-dessus pour la délivrance de facteur VIII à des patients hémophiles.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode d'administration de facteur VIII à un sujet, comprenant l'encapsulation in vitro ou in vivo de facteur VIII dans des érythrocytes et l'administration des érythrocytes au sujet.
Un autre objet de l'invention réside dans une méthode pour fournir du facteur VIII à un sujet, notamment un patient hémophile, la méthode comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'érythrocytes tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne également un procédé de préparation d'érythrocytes chargés en facteur VIII, comprenant le traitement perméabilisant in vitro ou ex vivo d'érythrocytes en présence de facteur VIII, et la récolte d'érythrocytes ayant encapsulé du facteur VIII.
L'invention propose une nouvelle approche pour la délivrance de facteur VIII in vivo. Au sens de l'invention, on entend par facteur VIII une protéine bio logiquement active telle que définie précédemment, c'est-à-dire notamment une protéine capable de catalyser l'activation du facteur X. Il peut s'agir d'une protéine naturelle (plasmatique) ou d'une protéine recombinante. Par ailleurs, le facteur VIII peut être libre ou sous forme complexée, notamment au vWF. On utilise de préférence une protéine d'origine humaine. Néanmoins, toute protéine mammifère ou tout variant ou analogue du facteur VIII peut être administré selon la méthode de la présente invention.
L'utilisation d'érythrocytes pour véhiculer des principes actifs a déjà été proposée dans la littérature. Ainsi notamment, la demande WO2007/042647 propose d'encapsuler du 5-FU et la demande WO2006/114691 propose d'encapsuler de l'arginine déiminase. Millan et al., Journal of Controlled Release 95, 2004 : 27-49, rapporte par ailleurs différentes études visant à encapsuler des agents anti-cancéreux dans des érythrocytes.
Cependant, les travaux réalisés jusqu'à présent portent principalement sur l'encapsulation de petites molécules et non de protéines de structure complexe et de haut poids moléculaire. Par ailleurs, comme souligné par Labrude et al. (1985 Lyon Pharmaceutique 1985, 36, 4 : 181- 187), l'utilisation d' érythrocytes pour délivrer des principes actifs nécessite la réalisation d'études spécifiques pour chaque molécule candidate, pour évaluer (i) la capacité des érythrocytes à servir de véhicule, (ii) développer une méthode d'encapsulation et (iii) vérifier la libération appropriée in vivo.
La présente invention propose pour la première fois d'encapsuler une protéine de haut poids moléculaire dans des érythrocytes, le facteur VIII. L'invention propose différentes approches pour la production de ces érythrocytes et pour la libération du facteur VIII in vivo. L'invention permet ainsi d'offrir une nouvelle solution pour la fourniture de facteur VIII aux patients, notamment dans le cadre du traitement de l'hémophilie.
Un objet de l'invention réside donc dans un érythrocyte contenant du facteur VIII ajouté.
Au sens de l'invention, le terme facteur VIII « ajouté » désigne le fait qu'il s'agit de facteur VIII introduit dans la cellule, mais pas de facteur VIII produit de manière endogène et naturelle par l'érythrocyte. Par ailleurs, le terme "contenant" désigne le fait que le facteur VIII est présent à l'intérieur de la cellule, soit sous forme libre soit sous forme liée à une membrane.
Pour la mise en œuvre de l'invention, on peut utiliser des érythrocytes d'origine variée, de préférence de mammifère, tout particulièrement des érythrocytes humains. Il peut s'agir d' érythrocytes autologues (c'est-à-dire obtenus à partir du patient auquel le traitement est destiné), allogéniques (de la même espèce, mais non autologues) ou xénogéniques (d'une espèce différente de celle du patient).
Le facteur VIII peut être encapsulé dans les érythrocytes selon différentes techniques. Ainsi, les érythrocytes de l'invention sont typiquement obtenus en soumettant in vitro ou ex vivo des érythrocytes à un traitement perméabilisant en présence de facteur VIII, suivi de la récupération des érythrocytes chargés. Le traitement perméabilisant peut être suivi d'un traitement renaturant, le cas échéant.
Le procédé de l'invention peut être mis en œuvre par dilution Presswell ou, de préférence, par un procédé de Iy se/rescellement. La technique de lyse-rescellement a été décrite dans plusieurs brevets antérieurs, et notamment dans les demandes n° EP882 448, EP101341, EP679101, ou EP 1773452. Selon ce procédé, on soumet des érythrocytes à un choc osmotique, induisant leur lyse au moins partielle, puis à un traitement de reconstitution (« rescellement »), en présence de l'agent actif.
Ainsi, dans un mode particulier de réalisation, les érythrocytes chargés en facteur VIII selon l'invention sont préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes :
a) mise en suspension d'un culot globulaire dans une solution isotonique ;
b) lyse des érythrocytes dans une solution hypotonique ;
c) rescellement des érythrocytes dans une solution hypertonique, en présence de facteur VIII ; et
d) récolte comprenant d' érythrocytes chargés en facteur VIII, généralement sous forme d'une suspension.
Le facteur VIII peut être ajouté à la suspension à l'étape a), b) ou c). Avantageusement, l'ensemble du procédé est réalisé à une température inférieure à 100C. Dans un mode de mise en œuvre particulier, le procédé est réalisé dans une unité de dialyse en continu. Par ailleurs, le procédé peut comprendre une étape supplémentaire de mesure de la fragilité osmotique des érythrocytes, afin d'ajuster les paramètres de la lyse.
Dans un mode de mise en œuvre particulier, on introduit en continu la suspension d' érythrocytes dans le compartiment primaire d'un élément de dialyse. Le compartiment secondaire est prévu pour contenir une solution aqueuse hypotonique par rapport à la suspension d'érythrocytes. De ce fait, lors du passage des érythrocytes dans le compartiment secondaire, les érythrocytes sont lysés. On induit ensuite le rescellement des érythrocytes, en présence du facteur VIII, en augmentant la pression osmotique, de préférence dans un autre compartiment. Les érythrocytes ainsi chargés en facteur VIII peuvent ensuite être récupérés, sous forme de suspension.
Le culot globulaire mis en œuvre est avantageusement un culot déleucocyté et dépourvu de pathogène. Il peut en outre avoir été irradié. Dans un mode préféré, le culot globulaire initial a été traité pour être enrichi en érythrocytes, voire pour éliminer tout composant sanguin autre que les érythrocytes. Ce traitement peut consister par exemple en un lavage en présence d'une solution saline ou de conservation, éventuellement en présence du facteur VIII.
De préférence, on utilise dans le procédé un culot globulaire dont le groupe sanguin est compatible avec le receveur, lorsque ce dernier est identifié.
La lyse des érythrocytes est réalisée au moyen d'une solution saline hypotonique par rapport à la suspension de l'étape a). Il peut s'agir par exemple d'une solution ayant une osmolarité comprise entre 40 et 150 mOsm, de préférence entre 60 et 120 mOsm.
L'étape de rescellement est avantageusement réalisée par ajout d'une solution hypertonique à la suspension lysée et, de préférence, chauffage jusqu'à une température comprise entre 25°C et 42°C, plus préférentiellement entre 35°C et 400C, pendant une période de temps comprise entre quelques minutes et quelques heures, typiquement moins de 2h. Les érythrocytes obtenus peuvent être lavés, par exemple en présence d'une solution saline, notamment pour éliminer les débris cellulaires ou les cellules incorrectement reconstituées.
Le procédé peut en outre comprendre une ou des étapes supplémentaires de traitement ou conditionnement des érythrocytes pour faciliter ou adapter la libération ultérieure du facteur VIII in vivo. Cette ou ces étapes peuvent être réalisées de manière préalable, concomitante ou postérieure au procédé d'encapsulation, notamment aux étapes a)-d) ci-dessus. Compte tenu de la taille importante du facteur VIII, sa libération à partir des érythrocytes chargés de l'invention peut en effet être augmentée ou mieux contrôlée en modifiant les érythrocytes. Ainsi, le profil de libération du facteur VIII selon l'invention peut être modifié par un traitement dénaturant des érythrocytes, permettant de provoquer une libération massive ou graduelle du facteur VIII. Dans un mode de réalisation particulier, les érythrocytes de l'invention sont traités, avant, pendant ou après l'encapsulation, de manière à favoriser leur reconnaissance et leur destruction par les macrophages. Ce type de traitement entraîne une libération plus rapide du facteur VIII in vivo. Le traitement peut être chimique ou physique. Par exemple, les érythrocytes peuvent être traités par le glutaraldéhyde ou la neuraminidase, comme décrit dans e.g., Millan et al., supra. En variante, les érythrocytes peuvent être soumis à un traitement dénaturant thermique à une température comprise par exemple entre 400C et 65°C.
Dans un autre mode de réalisation, qui peut éventuellement être combiné avec le précédent, les érythrocytes de l'invention chargés d'une protéine d'intérêt, par exemple le facteur VIII sont traités, avant, pendant ou après l'encapsulation, de manière à exprimer ou sur-exprimer un antigène du rhésus D. Les érythrocytes ainsi obtenus sont en effet sensibles ou plus sensibles in vivo à une lyse par des anticorps anti-Rhésus D.
Les érythrocytes chargés de l'invention peuvent être conservés dans différentes solutions adaptées, telles que des solutions de conservation de globule rouge, des solutions salines, etc., de préférence à une température comprise entre 1 et 100C. Le taux d'hématocrite final du produit est de préférence compris entre 40 et 70%.
De préférence, les érythrocytes de l'invention sont conservés sous forme de suspension en présence dans une solution saline adaptée (par exemple NaCl éventuellement supplémenté de mannitol ou de glucose), contenant le cas échéant d'autres agents conservateurs, stabilisants.
La quantité de facteur VIII encapsulée peut être adaptée par l'homme du métier. Elle correspond de préférence à la quantité adaptée pour qu'une composition ou poche selon l'invention contienne une dose correspondant à une prescription médicale du facteur VIII. Par ailleurs, les érythrocytes de l'invention peuvent contenir un ou plusieurs autres principes actifs, ou être utilisés en mélange avec d'autres principes actifs. Un autre objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant un érythrocyte tel que défini ci-dessus et un support ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique. Le véhicule est avantageusement choisi parmi des solutions salines, stériles, de préférence isotoniques, éventuellement supplémentées de différents agents conservateurs. Dans un mode particulier, les compositions sont sous forme lyophilisée, remise en solution juste avant administration.
Un autre objet de l'invention concerne une poche souple pour perfusion comprenant des érythrocytes ou une composition pharmaceutique tels que définis ci-dessus.
Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d' érythrocytes tels que définis ci- dessus pour la préparation d'une composition pour la délivrance de facteur VIII à des patients ayant besoin de facteur VIII, notamment des patients hémophiles.
Un autre objet de l'invention réside dans des érythrocytes tels que définis ci-dessus pour la délivrance de facteur VIII à des patients hémophiles.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode d'administration de facteur VIII à un sujet, comprenant l'encapsulation in vitro ou in vivo de facteur VIII dans des érythrocytes et l'administration des érythrocytes au sujet.
Un autre objet de l'invention réside dans une méthode pour fournir du facteur VIII à un sujet, notamment un patient hémophile, la méthode comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d' érythrocytes tels que définis ci-dessus.
Les compositions de l'invention sont particulièrement adaptées à une administration systémique, de préférence par voie intraveineuse, par injection ou perfusion. Lorsque les érythrocytes utilisés sont autologues, le traitement comprend avantageusement une étape préalable de prélèvement de sang du patient, d'obtention d'un culot globulaire, de préparation du médicament comme décrit ci-dessus, et de réinfusion. Typiquement, les compositions de l'invention comprennent un volume ou un nombre d'érythrocytes chargés suffisant pour fournir au patient la dose requise de facteur VIII, c'est-à-dire une dose comprise entre 10 et 200 UI de protéine par jour et par kg de poids corporel. Les administrations peuvent être répétées, selon le protocole thérapeutique approprié au patient. Dans une variante particulière de mise en œuvre, la méthode de l'invention comprend l'administration d'une composition d'érythrocytes chargés d'une protéine d'intérêt, par exemple, mais de manière non limitée, du facteur VIII. La méthode de l'invention peut alors comprendre en outre une étape d'administration d'un anticorps anti-Rhésus D. En effet, les érythrocytes expriment l'antigène Rhésus D et l'administration de tels anticorps permet d'accroitre la vitesse de libération in vivo. La co-administration ou l'administration séquentielle d'anticorps anti-Rhésus D permet ainsi de contrôler le profil de libération de la protéine d'intérêt, telle que du facteur VIII, in vivo. De plus, comme indiqué précédemment, il est possible dans une variante particulière de l'invention de modifier les érythrocytes de l'invention pour qu'ils sur-expriment un antigène Rhésus D, de manière à accroitre encore leur sensibilité aux anticorps anti- Rhésus D.
Par "protéine d'intérêt" on entend, au sens de la présente invention, désigner un enchainement précis d'acides aminés, modifiés ou non, comportant ou non des acides aminés non naturels. De manière préférée, la protéine présente un intérêt sur le plan thérapeutique. Dans un mode de réalisation préféré, la protéine d'intérêt est une protéine de haut poids moléculaire (par exemple supérieure à 65 KDa, de préférence supérieure à 67 KDa), telle que le facteur VIII.
Pour obtenir les érythrocytes de l'invention exprimant un antigène Rhésus D, il est envisagé d'utiliser des technologies bien connues de l'homme du métier. Par exemple, il est possible d'utiliser des méthodes de transfection pour exprimer une séquence nucléotidique exogène codant pour le Rhésus D, à l'aide de vecteur d'expression. Un tel vecteur peut contenir les éléments nécessaires à l'expression de la protéine dans la cellule érythrocytaire. Lesdits vecteurs comportent de préférence: un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que des régions appropriées de régulation de la transcription.
De tels vecteurs sont préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les vecteurs recombinants en résultant peuvent être introduits dans les érythrocytes par des méthodes standards, soit ex vivo (par exemple lipofection, électroporation, choc thermique, transformation après perméabilisation chimique de la membrane, fusion cellulaire) soit in vivo (électroporation). Un objet particulier de l'invention réside donc dans une méthode pour fournir une protéine d'intérêt, par exemple du facteur VIII, à un sujet, notamment un patient hémophile, la méthode comprenant l'administration au dit sujet d'une quantité efficace d'érythrocytes tels que définis ci-dessus et d'un anticorps anti-Rhésus D. L'anticorps anti-Rhésus D peut être administré avant, pendant ou après l'administration des érythrocytes, de préférence pendant et/ou après.
Un autre objet de l'invention concerne une composition comprenant des érythrocytes tels que définis ci-dessus et un anticorps anti-Rhésus D, en vue d'une administration sous forme groupée ou séparée, simultanée ou espacée dans le temps.
REFERENCES
BIHOREAU N., Le facteur VIII (anti-hémophilique A) recombinant : relation structure/ fonction. Médecine, Sciences, 1992, 8, 1043-1050.
BRINKHOUS K.M., Purifed human factor VIII procoagulant protein : comparative hemostatic response after infusions into hémophilie and Von WILLEB RAND disease dogs. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 82, 8752-8756.
KAPLAN J.C., DELPECH M, Biologie moléculaire et médecine, de la biologie à la clinique. Ed. Médecine, Sciences, Flammarion, 2ème édition 1993.
LEON W., HOYER., The factor VIII complex : structure and fonction. Blood, 1981, vol. n° 1, GuIy), 1-13.
PHILIP J., FAY; Factor VIII : structure and function. Thrombosis and Haemostasis, 1993, 70 (1), 63-67.
PITTMAN D.D., KAUFMAN R.J., Proteolytic requirements for thrombin activation of antihemophilic factor (factor VIII). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85, 2429-2433.
WHITE C, SHOEMAKER C.B., Factor VIII gène and haemophilia A. Blood 1989, vol. 73, n° 1, 1-12.
WION K.L., KELLY D., Distribution of factor VIII mRNA and antigen in human liver and other tissues. Nature, 1985, 317-326.

Claims

REVENDICATIONS
1. Erythrocyte caractérisé en ce qu'il contient du facteur VIII.
2. Erythrocyte selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est obtenu par traitement perméabilisant ex vivo ou in vitro d'un erythrocyte en présence de facteur VIII dans des conditions permettant l'encapsulation du facteur VIII dans l'érythrocyte.
3. Erythrocyte selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est modifié ou traité pour faciliter ou adapter la libération ultérieure du facteur VIII in vivo.
4. Erythrocyte selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est soumis à un traitement dénaturant permettant de provoquer une libération massive ou graduelle du facteur VIII.
5. Erythrocyte selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il est modifié pour exprimer ou sur-exprimer un antigène du rhésus D.
6. Erythrocyte selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un erythrocyte humain.
7. Erythrocyte selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le facteur VIII est un facteur VIII humain.
8. Composition pharmaceutique comprenant un érythrocyte selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 et un support ou excipient acceptable sur le plan pharmaceutique.
9. Composition selon la revendication 8, ou érythrocyte selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, pour le traitement de l'hémophilie.
10. Utilisation d'érythrocytes selon l'une des revendications 1 à 7 pour préparation d'une composition pour la délivrance de facteur VIII à des patients ayant besoin de facteur VIII, notamment des patients hémophiles.
11. Utilisation selon la revendication 10, comprenant en outre une étape de traitement in vitro des érythrocytes permettant d'augmenter la lyse in vivo des érythrocytes contenant du facteur VIII.
12. Procédé de préparation d'érythrocytes selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, comprenant le traitement perméabilisant in vitro ou ex vivo d'érythrocytes en présence de facteur VIII, et la récolte d'érythrocytes ayant encapsulé du facteur VIII.
13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que le traitement perméabilisant est un traitement par lyse/rescellement.
14. Procédé selon la revendication 12 ou 13, caractérisé en ce que les érythrocytes sont en outre modifiés pour exprimer un antigène du Rhésus D.
15. Procédé selon l'une des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que les érythrocytes sont soumis à un traitement dénaturant destiné à favoriser leur reconnaissance par les cellules érythrophagocytaires.
16. Poche souple pour perfusion, contenant des érythrocytes selon l'une des revendications 1 à 7 ou une composition selon la revendication 8.
PCT/FR2009/052608 2008-12-18 2009-12-18 Érythrocytes contenant du facteur viii, préparation et utilisations WO2010076517A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0858777 2008-12-18
FR0858777A FR2940087B1 (fr) 2008-12-18 2008-12-18 Erythrocytes contenant du facteur viii, preparation et utilisations.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010076517A1 true WO2010076517A1 (fr) 2010-07-08

Family

ID=40636702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2009/052608 WO2010076517A1 (fr) 2008-12-18 2009-12-18 Érythrocytes contenant du facteur viii, préparation et utilisations

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR2940087B1 (fr)
WO (1) WO2010076517A1 (fr)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9518087B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9814780B2 (en) 2010-08-10 2017-11-14 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Compositions for inducing antigen-specific tolerance
US9850296B2 (en) 2010-08-10 2017-12-26 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10821157B2 (en) 2014-02-21 2020-11-03 Anokion Sa Glycotargeting therapeutics
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11253579B2 (en) 2017-06-16 2022-02-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0101341A1 (fr) 1982-07-05 1984-02-22 Etablissement Public dit: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) Procédé et dispositif pour l'encapsulation dans les érythrocytes d'au moins une substance à activité biologique, notamment des effecteurs allostériques de l'hémoglobine et érythrocytes ainsi obtenus
EP0679101A1 (fr) 1991-07-03 1995-11-02 Europ Communities Appareil pour faire penetrer des medicaments dans des globules rouges.
EP0882448A1 (fr) 1997-05-05 1998-12-09 DIDECO S.p.A. Méthode d'encapsulation d'agents actifs biologiquement dans des erythrocytes et appareil
FR2873925A1 (fr) * 2004-08-05 2006-02-10 Erytech Pharma Soc Par Actions Procede et dispositif de lyse-rescellement pour l'incorporation de principe actif notamment asparaginase ou inositol hexaphosphate, dans des erythrocytes
WO2006114691A1 (fr) 2005-04-25 2006-11-02 Erytech Pharma Erythrocytes contenant de l'arginine desiminase
WO2007042647A1 (fr) 2005-10-06 2007-04-19 Erytech Pharma Erythrocytes contenant du 5-fluorouracile (5-fu) et/ou de l’oxaliplatine
WO2007097934A2 (fr) * 2006-02-17 2007-08-30 Elusys Therapeutics, Inc. Procédés et compositions permettant d'utiliser des érythrocytes comme véhicules de délivrance de médicaments

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0101341A1 (fr) 1982-07-05 1984-02-22 Etablissement Public dit: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) Procédé et dispositif pour l'encapsulation dans les érythrocytes d'au moins une substance à activité biologique, notamment des effecteurs allostériques de l'hémoglobine et érythrocytes ainsi obtenus
EP0679101A1 (fr) 1991-07-03 1995-11-02 Europ Communities Appareil pour faire penetrer des medicaments dans des globules rouges.
EP0882448A1 (fr) 1997-05-05 1998-12-09 DIDECO S.p.A. Méthode d'encapsulation d'agents actifs biologiquement dans des erythrocytes et appareil
FR2873925A1 (fr) * 2004-08-05 2006-02-10 Erytech Pharma Soc Par Actions Procede et dispositif de lyse-rescellement pour l'incorporation de principe actif notamment asparaginase ou inositol hexaphosphate, dans des erythrocytes
EP1773452A2 (fr) 2004-08-05 2007-04-18 Erytech Pharma Procede de lyse/rescellement et dispositif permettant d'incorporer un ingredient actif, en particulier de l'asparaginase ou de l'inositol hexaphosphate, dans des globules rouges
WO2006114691A1 (fr) 2005-04-25 2006-11-02 Erytech Pharma Erythrocytes contenant de l'arginine desiminase
WO2007042647A1 (fr) 2005-10-06 2007-04-19 Erytech Pharma Erythrocytes contenant du 5-fluorouracile (5-fu) et/ou de l’oxaliplatine
WO2007097934A2 (fr) * 2006-02-17 2007-08-30 Elusys Therapeutics, Inc. Procédés et compositions permettant d'utiliser des érythrocytes comme véhicules de délivrance de médicaments

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIHOREAU ET AL., MED. SCIENCES, 70819
BIHOREAU N.: "Le facteur VIII (anti-hémophilique A) recombinant : relation structure/ fonction", MÉDECINE, SCIENCES, vol. 8, 70819, pages 1043 - 1050
BRINKHOUS K.M.: "Purifed human factor VIII procoagulant protein : comparative hemostatic response after infusions into hemophilic and Von WILLEBRAND disease dogs", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 82, 61019, pages 8752 - 8756, XP009004983, DOI: doi:10.1073/pnas.82.24.8752
BRINKHOUS, PROC. NATL. ACAD. SCI., 61019
GOLDSMITH J C ET AL: "A NEW TREATMENT STRATEGY FOR HEMOPHILIA B INCORPORATION OF FACTOR-IX INTO RED CELL GHOSTS", AMERICAN JOURNAL OF HEMATOLOGY, vol. 7, no. 2, 1979, pages 119 - 126, XP002529041, ISSN: 0361-8609 *
HAMIDI ET AL: "Applications of carrier erythrocytes in delivery of biopharmaceuticals", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 118, no. 2, 2 March 2007 (2007-03-02), pages 145 - 160, XP005912142, ISSN: 0168-3659 *
IHLER ET AL: "Erythrocyte Carriers", PHARMACOLOGY AND THERAPEUTICS, ELSEVIER, GB, vol. 20, no. 2, 1 January 1983 (1983-01-01), pages 151 - 169, XP023858166, ISSN: 0163-7258, [retrieved on 19830101] *
KAPLAN, MED. SCIENCES, 70919
LABRUDE ET AL., LYON PHARMACEUTIQUE, vol. 36, no. 4, 70119, pages 181 - 187
LEON W.; HOYER.: "The factor VIII complex : structure and function", BLOOD, vol. 1, 7060919, pages 1 - 13
MILLAN ET AL., JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, vol. 95, 10420, pages 27 - 49
PHILIP J.: "FAY; Factor VIII : structure and function", THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS, vol. 70, no. 1, 70919, pages 63 - 67
PITTMAN D.D.; KAUFMAN R.J.: "Proteolytic requirements for thrombin activation of antihemophilic factor (factor VIII)", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 85, 70419, pages 2429 - 2433, XP002019693, DOI: doi:10.1073/pnas.85.8.2429
WHITE C.; SHOEMAKER C.B.: "Factor VIII gene and haemophilia A", BLOOD, vol. 73, no. 1, 70519, pages 1 - 12
WHITE ET AL., BLOOD, 70519
WION K.L.; KELLY D.: "Distribution of factor VIII mRNA and antigen in human liver and other tissues", NATURE, 70119, pages 317 - 326
WION, NATURE, 70119

Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11884721B2 (en) 2010-08-10 2024-01-30 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US11246943B2 (en) 2010-08-10 2022-02-15 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Antigen-specific tolerance and compositions for induction of same
US9850296B2 (en) 2010-08-10 2017-12-26 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9878048B2 (en) 2010-08-10 2018-01-30 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Compositions for generating immune tolerance by targeting erythrocytes
US9901645B2 (en) 2010-08-10 2018-02-27 Ecole Polytechnique Fedrale de Lausanne (EPFL) Methods for reducing immune responses
US9901646B2 (en) 2010-08-10 2018-02-27 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Methods for induction of antigen-specific immune tolerance
US9814780B2 (en) 2010-08-10 2017-11-14 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Compositions for inducing antigen-specific tolerance
US10265415B2 (en) 2010-08-10 2019-04-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Compositions for inducing antigen-specific tolerance
US10471155B2 (en) 2010-08-10 2019-11-12 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Antigen-specific tolerance and compositions for induction of same
US10392437B2 (en) 2010-08-10 2019-08-27 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US10265416B2 (en) 2010-08-10 2019-04-23 École Polytechnique Fédérale de Lausanna (EPFL) Compositions for generation of immune tolerance to specific antigens
US10800838B2 (en) 2010-08-10 2020-10-13 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9518087B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US10919963B2 (en) 2010-08-10 2021-02-16 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US10821157B2 (en) 2014-02-21 2020-11-03 Anokion Sa Glycotargeting therapeutics
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10940209B2 (en) 2014-02-21 2021-03-09 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11654188B2 (en) 2014-02-21 2023-05-23 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11666638B2 (en) 2014-02-21 2023-06-06 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11793882B2 (en) 2014-02-21 2023-10-24 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11801305B2 (en) 2014-02-21 2023-10-31 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US11253579B2 (en) 2017-06-16 2022-02-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance

Also Published As

Publication number Publication date
FR2940087A1 (fr) 2010-06-25
FR2940087B1 (fr) 2011-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2010076517A1 (fr) Érythrocytes contenant du facteur viii, préparation et utilisations
Villa et al. Erythrocytes as carriers for drug delivery in blood transfusion and beyond
US20100028311A1 (en) Using of scaffold comprising fibrin for delivery of stem cells
FR2593393A1 (fr) Solution aqueuse a usage parenteral d'activateur tissulaire du plasminogene, procede pour la preparer et recipient obture la contenant
FR2526660A1 (fr) Procede de traitement thermique d'une fraction de plasma, produit obtenu et composition pharmaceutique le contenant
BE1001425A4 (fr) Utilisation de l'activateur tissulaire du plasminogene, son association avec une superoxyde-dismutase et formulation pharmaceutique contenant cette association.
LU86444A1 (fr) Nouvelle compostion d'activateur tissulaire du plasminogene
CA1341376C (fr) Concentre de proteines coagulables par la thrombine, son procede d'obtention et son utilisation therapeutique
WO1989012097A1 (fr) PROCEDE DE PREPARATION D'UNE FRACTION CONCENTREE EN FACTEUR VIIa ET SON APPLICATION A TITRE DE MEDICAMENT
CN104994869B (zh) 止血组合物
WO2014118481A1 (fr) Mutants du facteur x
BE1008491A3 (fr) Sequence polypeptidique antigenique du facteur viii, fragments et/ou epitopes de celle-ci.
CA2525049C (fr) Implant injectable de globine insoluble
EP3280436A1 (fr) Nouvelle utilisation du facteur von willebrand
US9255263B2 (en) Antithrombotic compounds
JP6518591B2 (ja) シーラント組成物
JP2916947B2 (ja) Ｃｐｂ―ｉの安定化方法及び製剤組成物
WO2015086748A1 (fr) Preparations injectables a base de collagenes capables de controler les saignements et/ou de se substituer a des plaquettes dans le cas de syndromes hemorragiques
CA2678190A1 (fr) Nouveaux facteurs viii pour le traitement des hemophiles de type a
EP3010533B1 (fr) Facteur x depourvu de domaine gla
WO2024017192A1 (fr) Système d'administration de médicament comprenant des cellules sanguines
JP2916948B2 (ja) Ｃｐｂ―ｉの安定化方法及びこの製剤組成物
KR20240042134A (ko) A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자
FR2667789A1 (fr) Composition cicatrisante et procede pour sa preparation.
KR20240040125A (ko) A형 혈우병 치료용 변형된 콜로이드 입자

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09805743

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09805743

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1