WO2010074591A1 - Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием - Google Patents

Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием Download PDF

Info

Publication number
WO2010074591A1
WO2010074591A1 PCT/RU2008/000793 RU2008000793W WO2010074591A1 WO 2010074591 A1 WO2010074591 A1 WO 2010074591A1 RU 2008000793 W RU2008000793 W RU 2008000793W WO 2010074591 A1 WO2010074591 A1 WO 2010074591A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
creatine
amides
mmol
amino acid
water
Prior art date
Application number
PCT/RU2008/000793
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Сергей Владимирович БУРОВ
Alexej Nikolaevich KHROMOV (ХРОМОВ, Алексей Николаевич)
Original Assignee
Закрытое Акционерное Общество "Beptekc"
ХРОМОВА Наталья Васильевна
ХРОМОВ Пётр Алексеевич
ХРОМОВА Анна Александровна
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42287974&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO2010074591(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Закрытое Акционерное Общество "Beptekc", ХРОМОВА Наталья Васильевна, ХРОМОВ Пётр Алексеевич, ХРОМОВА Анна Александровна filed Critical Закрытое Акционерное Общество "Beptekc"
Priority to EP08878506A priority Critical patent/EP2269980A4/de
Priority to PCT/RU2008/000793 priority patent/WO2010074591A1/ru
Priority to US12/734,183 priority patent/US8350077B2/en
Publication of WO2010074591A1 publication Critical patent/WO2010074591A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups

Definitions

  • the technical field relates to the field of pharmaceutical chemistry, namely to new biologically active substances (BAS) and their properties.
  • Creatine is an endogenous nutrient present in various mammalian tissues, for example, in the liver, kidneys, muscle tissue, brain tissue, blood and is both in a free state and in the form of creatine phosphate. Creatine is considered as a means of improving energy tissue metabolism - increasing the energy reserve of ATP, primarily in muscle and nerve cells.
  • creatine In the mitochondria of a cell under the action of the creatine kinase enzyme, creatine reversibly interacts with adenosine triphosphate (ATP) to form creatine phosphate and adenosine diphosphate (ADP). This interaction performs the function of maintaining the concentration of ATP at a constant level at the moments of its intense consumption. Other ways - glycolysis or oxidative phosphorylation replenish ATP reserves much slower. When ATP is consumed, a large amount of ADP is released in the cell, which leads to the transfer of orthophosphate from creatine phosphate to ADP and the restoration of the initial ratio between ATP and ADP. Due to the high affinity of creatine kinase for ADP, this process proceeds up to a decrease in the concentration of creatine phosphate below several tens of microns.
  • ATP adenosine triphosphate
  • ADP adenosine diphosphate
  • Creatine phosphate (CrF) during the maintenance of the membrane potential, activation of metabolites or contractile activity of the cell is a reserve of macroergic phosphate. It maintains the level of ATP with increasing energy expenditures in the cell, i.e. returns the orthophosphate residue to ADP.
  • KrF is one of the main sources of the high-energy phosphate conversion cycle and, thus, is involved in the oxidative phosphorylation of glucose, which provides the release of energy necessary for the functioning of muscle tissue cells, including skeletal muscle and heart muscle.
  • creatine phosphate Due to the fact that creatine phosphate is able to regenerate ATP at a faster rate than is achieved using glycogen, an increase in the amount of creatine in the muscles increases muscle reserves of creatine phosphate, improves the working capacity (endurance) of muscles and increases muscle mass.
  • Creatine phosphate and creatine are also allosteric regulators of cellular processes. Oral administration of creatine has been shown to increase the total creatine content in the body. So, taking from 20 to 30 g of creatine monohydrate per day for several days leads to an increase of more than 20% in the total creatine content in human skeletal muscle. These properties attract particular attention in connection with the possibility of using creatine as a food supplement to strengthen the body and increase working capacity, especially especially when used as an additive to the diet of athletes. So, the use of creatine monohydrate in a daily dose of 15 g for at least 2 days is used to increase muscle strength (WO
  • creatine is poorly absorbed from the gastrointestinal tract - the degree of absorption is 1-14%. This necessitates the use of high doses of creatine.
  • compositions currently produced Me require an intake of up to 20 g per day.
  • the introduction of high doses of creatine can lead to negative consequences for the body - impaired nitrogen metabolism, gastrointestinal upsets, diarrhea, etc.
  • creatine pyruvates (US6166249, 2000; RU2114823, 1998) to increase performance, reduce body weight, adapt to conditions of oxygen deficiency in ischemia, as a dietary supplement, to protect the skin from aging and exposure to sunlight (US7186754, 2007) in the treatment of female genital disorders, in particular dysmenorrhea (US6503951, 2000).
  • creatine and malonic, maleic, fumaric, orotic acids and taurine are indicated for nutritional supplementation; creatine citrate (US2004077719, 2004) is recommended as a nootropic agent, as well as for use in cosmetic compositions.
  • creatine citrate US2004077719, 2004
  • the magnesium salt of creatine phosphate (CN 1709896, 2005), indicated for exposure to the heart muscle, should be noted.
  • creatine esters such as ethyl and benzyl (WO 02/22135, 2002) and compositions based on them, which, compared with creatine, have higher solubility in water and penetrate better through cell me- brane.
  • the pharmacokinetics of the creatine esters themselves have not been studied, however, it was assumed that, when they enter the blood, these derivatives are converted to creatine by the action of enzymes (esterases).
  • Creatine ester formulations are used as a dietary supplement orally in the form of solutions, emulsions, tablets or capsules.
  • pyrrolidone derivatives for example, piracetam
  • drugs that enhance cholinergic processes for example, amiridine, tacrine, gliatilin, etc.
  • GABA-energy drugs for example, gamma-aminobutyric acid, hopantenic acid, picamilon, phenibut
  • activating Krebs cycle enzymes for example, antioxidants and membrane protectors (for example, mexidol, meclofenoxate, pyritino, ubiquinonl); drugs with complex metabolic effects (for example, vinpocetine), op- timizing redox processes that improve energy metabolism
  • Actovegin which is the closest analogue in action to the claimed drugs, received the greatest use.
  • Actovegin contains deproteinized hemode-
  • X is an organic or mineral acid or water.
  • amino acids various aliphatic, aromatic and heteroaromatic L-amino acids, or their derivatives, in particular amino acid esters, amino acid amides, pep-
  • organic or mineral acids pharmaceutically acceptable low molecular weight organic or mineral acids (molecular weight, usually less than 300), such as acetic, hydrochloric, citric, etc.
  • organic or mineral acids pharmaceutically acceptable low molecular weight organic or mineral acids (molecular weight, usually less than 300), such as acetic, hydrochloric, citric, etc.
  • Creatine amides were obtained by the interaction of free or protected guanidylating agents with sarcosine amides in polar organic solvents at a temperature of no more than 50 0 C. Synthesis at a higher temperature, as a rule, reduces the yield of the target product and negatively affects its biological activity due to adverse reactions. The choice of specific synthesis conditions is determined by the characteristics of the reagents used and the resulting product. Derivatives of amino acids can be obtained, in particular, using standard chemical reactions described in the literature (A. A. Gershkovich, V. K. Kibirev “Synthesis of Peptides. Reagents and Methods”.
  • Creatine amides can be introduced into the body either independently or as part of compositions containing a mixture of the active principle with excipients.
  • excipients substances permitted by the Pharmacopoeia are used that improve the conditions for the preparation, storage or use of a medicinal product, such as solvents, fillers, binders, disintegrants, and sliding lubricants
  • auxiliary substances as solvents, such as water, solutions of potassium, magnesium, zinc, manganese salts,
  • saline, syrup masses such as crospovidone, sugars and their derivatives, polysaccharides and their derivatives, in particular lactose, sucrose, microcrystalline cellulose, starch, glucose, mannitol, cyclodextrins, alginates, dextrin, salts of organic and mineral acids; binders such as water, ethyl alcohol,
  • Example 1 Synthesis of creatine amide and substituted ⁇ -aminobutyric acid - creatinyl- ⁇ -aminobutyric acid ethyl acetate.
  • Example 3 Synthesis of creatine amide and substituted phenylalanine - creatinyl-L-phenylalaninamide acetate. Creatinyl-L-phenylalanine amide obtained under the conditions of Example 2 was dissolved in water and applied to a 25 x 100 mm column filled with silica gel Lixhorr RP-18 (43-60 ⁇ m, Merck), after which it was eluted with 0.2% acetic acid acid and isolated from solution.
  • Example 4 The synthesis of creatine amide and substituted glycine - creatinyl-glycine benzyl ester hydrochloride.
  • Example 6 The synthesis of creatine amide and substituted glycine - creatinyl-glycineethylamide acetate.
  • the yield of tert-butyloxycarbonyl-ornithyl-glycine ethyl ester was 6 g 10 (100%).
  • reaction mixture was diluted with 300 ml ethyl - acetate, washed with 5% NaHCO3 solution, IN H 2 SO 4 , water. The solution was cooled and kept for 3 hours at 4 0 C; the product precipitated. The precipitate was filtered off, washed with ether and dried in vacuo. T. pl. 189-192 0 C; R f 0.40 in the CHCl 3 : EtOAc: MeOH system (20: 10: 3).
  • the evaporator was rotary evaporated at 25 ° C.
  • the residue was crystallized from 250 ml of diethyl ether and dried in vacuo.
  • the purity of the obtained product was checked by RP HPLC on a Phepomepech L ⁇ ia ⁇ -18, 5 ⁇ , 4.6x150 mm column using a linear gradient of acetonitrile in water containing 0.1% trifluoroacetic acid (7–
  • Example 8 The synthesis of creatine amide and unsubstituted phenylalanine - creatinyl-phenylalanine hydrochloride.
  • Example 9 The study of the stability of creatine amides in aqueous solution and blood plasma.
  • the analysis was carried out on a L ⁇ ia 5 ⁇ Cl 8 (2) 100 ⁇ 150 ⁇ 4.6 mm column ( ⁇ flower ⁇ technically speak ⁇ réelle ⁇ , USA) with a Guard ⁇ artridge Cl 8 pre-column at a flow rate of 1 ml / min in a linear acetonitrile gradient: from 5% to 25 for the analogue of Example 1 % acetonitrile in 20 min (buffer A: 0.1% H 3 PO 4 - H 2 O, buffer B: 0.1% H 3 PO 4 - acetonitrile), in the case of the substance from example 2-8, from 3% to 23% acetonitrile per 20 minutes.
  • Detection was carried out at a wavelength of 220 nm.
  • the dosage of the samples on the column was carried
  • creatine amides have high stability in the plasma of both humans and rats - their concentration for 3 hours remained virtually unchanged, while the concentration of the drug-analogue of creatine benzyl ester in human blood plasma for 0.75 hours decreased to 53% in all cases.
  • Example 10 Nootropic effect of creatine amides A study of the effect of creatine amides on their ability to exhibit a neuroprotective effect on brain tissue was performed on a model of focal and global cerebral ischemia of rats.
  • the intracerebroventricular (IVC) cannula was injected stereotactically into the left lateral cerebral ventricle using ketamine anesthesia and connected to an Alzet (AP) osmotic mini pump (model 1002, solution flow rate 0.25 ⁇ l / h), which was pre-filled with an experimental solution and placed subcutaneously between the shoulder blades.
  • AP Alzet
  • the studied drugs were administered (a, b), or orally (a) in doses of 20 mg / kg weight, in the following experimental variants: (a) - starting 5 days before ischemia and continuing 7 days after ischemia (assessment of the effectiveness of the drug for the prevention and treatment of ischemia);
  • compositions based on creatine amides have a positive effect on the restoration of cognitive functions after an experimental stroke and the latency of movement initiation, which characterizes the general state of energy tissue metabolism of the animal’s brain tissue, the functional state of neurons and associative areas of the cerebral cortex.

Abstract

Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к новым биологически активным веществам (БАВ) и их свойствам, а именно к производным креатина общей формулы: NH=C(NH2)-N(CH3)- CH2-CO-NH-R*X, где R- аминокислотный остаток, или замещенный аминокислотный остаток; X - низкомолекулярная органическая или минеральная кислота или вода. Новые вещества получают взаимодействием гуанидилирующих агентов с амидами саркозина в полярных органических растворителях при температуре не более 50°C. Новые соединения проявляют нейропротекторное, действие и могут применяться в качестве средства, перспективного ддя профилактики и лечения ишемии мозга.

Description

АМИДЫ КРЕАТИНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
Область техники Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к новым биологически активным веществам (БАВ) и их свойствам. В частности, изобретение относится к производным креатина - веществам общей формулы: NH=C(NH2)-N(CH3)-CH2-CO-NH-R*X, где R- аминокислотный остаток, или замещенный аминокислотный остаток; X - низкомолекуляр- ная органическая или минеральная кислота или вода.
Предшествующий уровень техники
Креатин (Kp) является эндогенным питательным веществом, присутствующим в различных тканях млекопитающих, например, в печени, почках, мышечной ткани, ткани головного мозга, крови и находится как в свободном состоянии, так и в форме креатинфосфата. Креатин рассматривается в качестве средства, улучшающего энергетический тканевый метаболизм - повышающего энергетический резерв АТФ, прежде всего, в мышечных и нервных клетках.
В митохондриях клетки под действием фермента креатинкиназы, креатин обратимо взаимодействует с аденозинтрифосфатом (АТФ) с образованием креатинфорфата и аденозиндифосфата (АДФ). Это взаимодействие выполняет функцию подержания концентрации АТФ на постоянном уровне в моменты его интенсивного потребления. Другие пути - гликолиз или окислительное фосфорилирование пополняют запасы АТФ зна- чительно медленнее. При потреблении АТФ в клетке высвобождается большое количество АДФ, что приводит к переносу ортофосфата от креатинфосфата к АДФ и восстановлению исходного соотношения меж- ду АТФ и АДФ. Благодаря высокому сродству креатинкиназы к АДФ, этот процесс протекает вплоть до понижения концентрации креатинфосфата ниже нескольких десятков мкМ.
Креатинфосфат (КрФ) в ходе поддержания мембранного потенциала, активации метаболитов или сократительной активности клетки представляет собой резерв макроэргического фосфата. Он поддерживает уровень АТФ при увеличении затрат энергии в клетке, т.е. возвращает ортофосфатный остаток на АДФ. Наряду с гликогеном, КрФ является одним из основных источников цикла превращений высокоэнергетичных фосфатов и, таким образом, участвует в окислительном фосфорилировании глюкозы, что обеспечивает выделение энергии, необходимой для функционирования клеток мышечной ткани, включая скелетные мышцы и сердечную мышцу. В связи с тем, что креатинфосфат способен регенерировать АТФ с большей скоростью, чем это достигается с использованием гликогена, увеличение количества креатина в мышцах увеличивает мы- шечные запасы креатинфосфата, улучшает работоспособность (выносливость) мышц и увеличивает мышечную массу.
Креатинфосфат и креатин являются также и аллостерическими регуляторами клеточных процессов. Было показано, что пероральное введение креатина увеличивает общее содержание креатина в организме. Так, прием от 20 до 30 г моногидрата креатина в сутки в течение нескольких дней, приводит к повышению более чем на 20% общего содержания креатина в скелетных мышцах человека. Данные свойства привлекают особое внимание в связи с возможностью использования креатина в качестве пищевой добавки для укрепления организма и повышения работоспособности, осо- бенно при использовании в качестве добавки к рациону спортсменов. Так, применение креатина моногидрата в суточной дозе 15 г в течение, по крайней мере, 2 дней, используется для повышения мышечной силы (WO
5 94/02127, 1994). В настоящее время креатин рекомендуется в качестве пищевой добавки, что особенно важно для пожилых людей и вегетарианцев, так как у данных групп имеется выраженная тенденция к снижению содержания креатина в мышцах. Добавки используются в виде сухого порошка, жидкости, или полужидкой формы (WO 97/45026, 1997). Полученные на их ιо основе композиции стабильны в холодильнике при температуре 4 0C в течение длительного времени, но при комнатной температуре деградируют в течение недели.
Наряду с применением в пищевой промышленности, креатин и креа- тинфосфат находят достаточно широкое применение в медицине. Так,
15 креатин, креатинфосфат и циклокреатин (US6706764, 2004) рекомендованы для лечения заболеваний нервной системы, таких как диабетические и токсические невропатии, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инсульт и т.п, таких нарушений метаболизма, как гипергликемиия и сахарный диабет (US6193973, 2001). Пероральное применение креатина описано для лечения
20 сердечной и дыхательной недостаточности (WO/EP97/06225, 1999), астмы (US6093746, 2000). Показано применение креатинфосфата для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, перспективность для лечения новообразований (US5219846, 1993). Вместе с тем, применение креатина и креатинфосфата ограничено плохой растворимостью и нестабильностью в водных
25 средах при физиологических значениях рН (RU 2295261 , 2007).
Более того, креатин плохо абсорбируется из желудочно-кишечного тракта - степень абсорбции составляет 1-14 %. Это вызывает необходимость применения высоких доз креатина. Для того чтобы употребление креатина было эффективным, композиции, производимые в настоящее вре- зо мя, требуют приема в количестве до 20 г в сутки. Вместе с тем, наряду с повышением стоимости терапии, введение высоких доз креатина может приводить к негативным последствиям для организма - нарушение азотно- го обмена, желудочно-кишечные расстройства, диарея и т.п.
В этой связи большой интерес представляет получение производных креатина, обладающих большей стабильностью или более высокой биологической активностью, что позволит с одной стороны снизить дозу применяемого вещества, а с другой стороны - обнаружить новые области при- менения.
Наибольший интерес вызвали производные креатина и различных органических кислот. Так, известно использование пируватов креатина (US6166249, 2000; RU2114823, 1998) для повышения работоспособности, снижения веса тела, адаптации к условиям кислородной недостаточности при ишемии, в качестве пищевой добавки, для защиты кожи от старения и воздействия солнечных лучей (US7186754, 2007) при лечении женских половых расстройств, в частности дисменореи (US6503951, 2000).
Производные креатина и малоновой, малеиновой, фумаровой, орото- вой кислот и таурина (CN 10/249338, 2003; US6861554, 2005; US6166249, 2000; CA 10/740263, 2003) показаны для лечебного питания как пищевые добавки; креатина цитрат (US2004077719, 2004) рекомендован в качестве ноотропного средства, а также для использования в косметических композициях. Из других производных креатина следует отметить магниевую соль креатинфосфата (CN 1709896, 2005), показанную для воздействия на сердечную мышцу.
Наиболее близкими к заявляемым веществам являются эфиры креатина, такие как этиловый и бензиловый (WO 02/22135, 2002) и композиции на их основе, которые по сравнению с креатином обладают более высокой растворимостью в воде и лучше проникают через клеточную мем- брану. Фармакокинетика самих эфиров креатина не исследовалась, однако предполагалось, что при попадании в кровь указанные производные под действием ферментов (эстераз) превращаются в креатин. Препараты на ос- нове эфиров креатина используются в качестве пищевой добавки перораль- но в виде растворов, эмульсий, таблеток или капсул.
Недостатком указанных соединений является недостаточная стабильность в организме и низкая биоэквивалентность. Это делает предпочтительным использование эфиров креатина в твердых формах или порошках и повышенных суточных дозах.
Технической задачей, решаемой авторами, являлось создание новых производных кератина, получаемых методом химического синтеза, обладающих более высокой стабильностью и широким спектром биологического действия, в частности, обладающих нейропротекторным действием. B настоящее время известна многочисленная группа лекарственных веществ, обладающих способностью оказывать специфическое воздействие на энергетический метаболизм мозговой ткани, актировать интегративные функции мозга, повышать устойчивость мозга к повреждающим факторам (М.Д. Машковский. Лекарственные средства, M., Медицина; Goodman E. Gilmап's. Тhе Рhаrmасоlоgiсаl Ваsis оf Тhеrареutiсs, 11 еd, МсGrаw-НШ, Меdiсаl Рublishιmg Divisiоп, Nеw Yогk 2006; RUl 746886, 1991, WO96/08527, 1996). К их числу, в частности, относятся: производные пир- ролидона (например, пирацетам), активирующие энергетический обмен; препараты, усиливающие холинергические процессы (например, амиридин, такрин, глиатилин и т.д; ГАМК-энергетические препараты (например, гам- ма-аминомаслянная кислота, гопантеновая кислота, пикамилон, фенибут), активирующие ферменты цикла Кребса; антиоксиданты и мембранопротек- торы (например, мексидол, меклофеноксат, пиритино, убихинонл); препараты комплексного метаболического действия (например, винпоцетин), оп- тимизирующие окислительно-восстановительные процессы, способствующие улучшению энергетического метаболизма
Недостатками большинства указанных веществ является узкий спектр
5 действия, значительное число противопоказаний, невысокая нейропротек- торная эффективность. Вместе с тем, известно, что использование в клинике эффективных нейропротекторов позволило бы увеличить долю «мa- лыx» инсультов среди ишемических поражений мозгового кровообращения, значительно уменьшить размеры зоны инфаркта, удлинить период ю «тepaпeвтичecкoгo oкнa», осуществить защиту от реперфузионного повреждения (Lапсеt, 2004, 363, 349-45).
Среди препаратов данной группы наибольшее применение получил Актовегин, являющийся наиболее близким аналогом по действию к заявляемым препаратам. Актовегин содержит депротеинизированный гемоде-
15 риват из крови телят, применяемый в. виде таблеток или раствора для инъекций (Справочник ВИДАЛЬ, 2001, АстраФармСервис, с. Б- 18)
Сущность изобретения
Технический результат был получен путем синтеза производных креатина общей формулы: NH=C(NH2)-N(CH3)-CH2-CO-NH-R*X, где R- ами-
20 нокислотный остаток или замещенный аминокислотный остаток; X — органическая или минеральная кислота или вода.
В качестве аминокислот могут применяться различные алифатические, ароматические и гетероароматические L-аминокислоты, либо их производные, в частности, сложные эфиры аминокислот, амиды аминокислот, пеп-
25 тиды и т.п. В качестве органических или минеральных кислот - фармацевтически приемлемые низкомолекулярные органические или минеральные кислоты (молекулярная масса, как правило, менее 300), такие как уксусная, соляная, лимонная и т.п. Как было установлено в ходе биологических экспериментов, синтезирован- зо ные амиды креатина по сравнению с известными аналогами обладают повышенной растворимостью и стабильностью в водных растворах, что позволяет более широко использовать их в качестве источника креатина в организме.
5 Амиды креатина получали взаимодействием свободных или защищенных гуанидилирующих агентов с амидами саркозина в полярных органических растворителях при температуре не более 50 0C. Проведение синтеза при более высокой температуре, как правило, снижает выход целевого продукта и негативно сказывается на его биологической активности за счет ю протекания побочных реакций. Выбор конкретных условий синтеза определяется особенностями используемых реактивов и получаемого продукта. Производные аминокислот могут быть получены, в частности, с использованием стандартных химических реакций, описанных в литературе (А. А. Гершкович, В. К. Кибирев «Cинтeз пептидов. Реагенты и мeтoды».
15 Киев. «Hayкoвa дyмкa». 1987) или путем использования в качестве исходного сырья амидов креатина, полученных выше приведенным методом.
Анализ химической чистоты и полупрепаративную очистку амидов креатина проводили методом высокоэффективной жидкостной- хроматографии на хроматографе Sуstеm GoId (Весkmап) и колонках Рhепоmепех
20 Luпа Ci8 (4.6x150 мм, 5мкм) для аналитической хроматографии и Disсоvеrу Ci s (10x250 мм, 5 мкм) - для полупрепаративной. Условия анализа: УФ- детектирование при 230 нм, градиентное элюирование в системе 0.1 % раствор кислоты трифторуксусной - ацетонитрил при скорости потока 1 мл/мин - для аналитической хроматографии, и градиентное элюирование
25 в системе 0.1 % раствор кислоты трифторуксусной - ацетонитрил при скорости потока S мл/мин - для полупрепаративной хроматографии. Масс- спектры регистрировали на времяпролетном масс-рефлектроне MX-5303 с источником ионов типа "Электроспрей" (ФИНЭПХФ РАН).
зо Варианты осуществления изобретения
Наиболее перспективной областью использования амидов креатина является их применение в качестве веществ, обладающих нейропротектор-
5 ным действием. Как показали проведенные эксперименты, при их введении в организм в дозе 20 мг/кг и более наблюдается улучшение когнитивных функций, что делает амиды креатина перспективными средствами для профилактики и лечения ишемических поражений мозга.
Амиды креатина могут вводиться в организм как самостоятельно, так и ю в составе композиций, содержащих смесь активного начала со вспомогательными веществами. В качестве вспомогательных веществ используются разрешенные Фармакопеей вещества, улучшающие условия получения, хранения или применения лекарственного средства, такие как растворители, наполнители, связующие, разрыхлители, скользяще-смазывающие ве-
15 щества, пленкообразователи, пигменты, пластификаторы, пролонгирующие вещества, ароматизаторы, вкусовые добавки, стабилизаторы, консерванты и т.п.
Так, в качестве вспомогательных веществ могут использоваться такие растворители, как вода, растворы солей калия, магния, цинка, марганца,
20 физиологический раствор, сиропные массы; такие наполнители, как крос- повидон, сахара и их производные, полисахариды и их производные, в частности, лактоза, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, глюкоза, маннит, циклодекстрины, альгинаты, декстрин, соли органических и минеральных кислот; такие связующие, как вода, этиловый спирт,
25 сахарный сироп, крахмальный клейстер, растворы производных целлюлозы, повидонов, желатина, альгинатов и т.п.; такие разрыхлители, как крахмалы, кросповидоны, полисорбаты, натрия лаурилсульфат, аэросил и т.п.; такие скользяще-смазывающие вещества, как крахмалы, тальк, полиэти- ленгликоль, аэросил, стеараты кальция и магния, стеариновая кислота, на- зо трий стеарилфумарат и т.п.; такие пленкообразователи, как алкилцеллюло- зы и их производные, и т.п.; такие пластификаторы, как полисорбаты, глицерин, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, дибутилфталат, триацетат глицерина и т.п. 5 Промышленная применимость
Пример 1. Синтез амида креатина и замещенной -γ-аминомасляной кислоты - креатинил-γ-аминомасляной кислоты этилового эфира ацетата.
К раствору 0.66 г (2.08 мМ) трифторацетата саркозил-γ-аминомасляной ю кислоты этилового эфира в 1.5 мл диметилформамида добавляли 0.94 мл (4.16 мМ) диизопропилэтиламина и 0.9 г (2.08 мМ) тозилата бензотриазол- 1-кapбoкcaмидинa. Реакционную смесь перемешивали в течение 60 час при комнатной температуре, разбавляли н-бутиловым спиртом и водой, растворитель упаривали. Остаток перекристаллизовывали из изопропилового 15 спирта и очищали с помощью ионообменной хроматографии на колонке с Сефадексом SE C-25 в 0.002 M пиридин-ацетатном буфере. Фракции, содержащие конечный продукт объединяли, и растворитель упаривали. Выход CioH2oN4Oз*CHзCOOH 0.3 г (59 %). Массгспектр, найдено: т/z: 245.17. Вычислено: M244.15.
20
Пример 2. Синтез амида креатина и замещенного фенилаланина - креатинил-L-фенилаланинамида гидрата.
К раствору 4 г (11.45 мМ) трифторацетата амида саркозил-L- фенилаланина в 30 мл диметилформамида добавляли 3.2 мл (22.9 мМ) три- 25 этиламина и 5.3 г (11.45 мМ) N,N'-ди-бeнзилoкcикapбoнил-l-H-бeнзoтpи- aзoл-1-кapбoкcaмиидинa. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 час при комнатной температуре и разбавляли 200 мл этилацетата. Органическую фазу промывали 5 %-ным раствором NаНСОз, водой, 1 н HCl, водой и выдерживали 12 час при +4 ° С. Выпавший осадок, содержащий амид дибензилоксикарбонил-креатинил-L-фенилаланина, отфильтровывали, промывали холодным этилацетатом и высушивали. Выход 3.8 г (62 %).
Для удаления защитной группы 3.8 г (6.96 мМ) амида дибензил- оксикарбонил-креатинил-фенилаланина растворяли в 150 мл смеси диоксан - вода (9 : 1) и гидрировали над Pd чернью в течение 5 час (контроль с помощью тонкослойной хроматографии). Катализатор отфильтровывали, растворитель упаривали, и остаток, содержащий гидрат амида креатинил-L- фенилаланина кристаллизовали из изопропилового спирта. Выход Ci3Hi9N5O2 515H2O 1.2 г (43 %). Масс-спектр, найдено: т/z: 278.15. Вычислено: M277.15.
Пример 3. Синтез амида креатина и замещенного фенилаланина - креатинил-L-фенилаланинамида ацетата. Амид креатинил-L-фенилаланина, полученный в условиях примера 2, растворяли в воде и наносили на колонку 25 х 100 мм, заполненную сили- кагелем Liсhгорrер RP- 18 (43-60 μm, Меrсk), после чего элюировали 0.2 %- ной уксусной кислотой и выделяли из раствора.
Выход Ci3H19N5O2*CH3COOH 0.72 г (60 %). Масс-спектр, найдено: m/z\ 278.15. Вычислено: M 211.15.
Пример 4. Синтез амида креатина и замещенного глицина - креатинил- глицин бензилового эфира гидрохлорида.
К раствору 2.5 г (7.07 мМ) трифторацетата бензилового эфира сарко- зил-глицина в 20 мл диметилформамида добавляли 1.97 мл (14.14 мМ) три- этиламина и 2.8 г (7.07, мМ) N,N'-ди-тpeтбyтилoкcикapбoнил-l-H- бeнзoтpиaзoл-1-кapбoкcaмидинa и перемешивали 24 часа при 20 0C. Реакционную смесь разбавляли 200 мл этилацетата, промывали органическую И фазу 5 % раствором NaHCO3, IN H2SO4, водой и высушивали над Na2SO4. Растворитель упаривали на роторном испарителе, и остаток кристаллизовали из смеси диэтиловый эфир — петролейный эфир. Выход бензилового 5 эфира ди-трет-бутилоксикарбонил-креатинил-глицина 2.3 г (67 %). Rf= 0.68 в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3)
Для удаления защитных групп через раствор, содержащий 2.3 г (4.78 мМ) бензилового эфира ди-трет-бутилоксикарбонил-креатинил- глицина в 70 мл сухого диэтилового эфира, при О 0C и сильном перемеши- ю вании пропускали ток сухого HCl в течение 45 минут. Выпавший осадок отфильтровывали, промывали сухим диэтилόвым эфиром и высушивали в эксикаторе над NaOH. Выход C13Hi8N4O3 - 0.3 г (20 %). Масс-спектр, найдено: т/z: 279.14. Вычислено: M278.14.
Пример 5. Синтез амида креатина и замещенного тирозина — кретинил- 15 тирозинамида сукцината.
К раствору третбутилоксикарбонилсаркозина (4.49 г, 23.74 мМ) и гидроксибензотриазола (3.21 г, 23.74 мМ) в 30 мл диметилформамида, при охлажденнии на ледяной бане и перемешивании, прибавляли раствор дицик- логексилкарбодиимида (4.9 г, 23.74 мМ) в 10 мл диметилформамида. Через
20 10 мин. к реакционной смеси добавляли гидрохлорид метилового эфира тирозина (5 г, 21.58 мМ) и триэтиламин (3.02 мл, 21.58 мМ), после чего перемешивали 1 ч при О 0C и 12 ч при 20 0C. Реакционную смесь разбавляли 300 мл этилацетата, промывали 5 % NaHCO3, IN H2SO4, водой и высушивали над Na2SO4. Растворитель упаривали на роторном испарителе. Rf конечного
25 продукта - 0.75 в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3). Выход третбу- тилоксикарбонилсаркозил-тирозина метилового эфира - 6.2 г (78.5%).
6.2 г (16.92 мМ) третбутилоксикарбонилсаркозил-тирозин метилового эфира растворяли в 200 мл 6 M раствора аммиака в метаноле, охлажденном до О 0C. Колбу плотно закрывали, и раствор выдерживали 48 ч при комнат ной температуре. Контроль за ходом реакции осуществляли с помощью тонкослойной хроматографии в системе CHCl3: EtOAcMeOH (20:10:3). Rf продукта 0.32. Растворитель упаривали, остаток растирали с диэтиловым эфиром
5 до образования сухого аморфного осадка и высушивали в вакууме. Выход третбутилоксикарбонилсаркозил-тирозинамида - 5.4 г (90 %).
5.4 г третбутилоксикарбонилсаркозил-тирозинамида растворяли в 20 мл трифторуксусной кислоты, выдерживали 15 минут при комнатной температуре, растворитель упаривали на роторном испарителе при 25 0C. Oc- ю таток кристаллизовали из диэтилового эфира и высушивали в вакууме. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Luna C-IS 4.6 х 150 mm, 5 μm (Рhепоmепех) с использованием линейного градиента ацетонитрила в воде, содержащей 0.1% ортофосфорной кислоты (О - 20 % ацетонитрила за 20 мин), скорость потока 1 мл/мин. Выход триф-
15 торацетата саркозил-тирозинамида - 5.4 г (96 %).
К раствору трифторацетата саркозил-тирозинамида ( 5.4 г, 14.8 мМ) и бeнзoтpиaзoл-1-кapбoкcaмидa тозилата (4.92 г, 14.8 мМ) в 7 мл диметилфо- рамида при перемешивании прибавляли N,N'-диизoпpoпилэтилaмин (5.06 мл, 29.6 мМ). По данным ВЭЖХ через 72 часа полнота прохождения ре-
20 акции составляла около 90 %. Растворитель упаривали со смесью вода : н- бутанол (2 : 3), остаток растворяли в 20 мл воды, наносили на колонку 25 х 150 мм с Сефадексом SE C-25 (Рhаrmасiа Fiпе Сhеmiсаls), уравновешенную в 0.002 M пиридин-сукцинатном буфере. Скорость потока - 2 мл/мин. Дальнейшее разделение проводили в градиенте пиридин-сукцинатного буфера в
25 диапазоне концентраций от 0.002 до 0.5 M. Фракции, содержащие кретинил- тирозинамида сукцинат, анализировали с помощью ОФ ВЭЖХ, объединяли и упаривали. Окончательную очистку проводили путем кристаллизации из изопропилового спирта. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Luna C-18, 4.6 х 150 мм, 5мкм (Рhепоmепех) с зо использованием линейного градиента ацетонитрила в воде, содержащей 0.1% ортофосфорной кислоты (0-20 % ацетонитрила за 20 мин), скорость потока 1 мл/мин.
Выход кретинил-тирозинамид сукцината 2.7 г (51 %). Масс-спектр, 5 найдено: т/z: 292.27. Вычислено: M 292.29.
Пример 6. Синтез амида креатина и замещенного глицина - креатинил- глицинэтиламид ацетата.
К раствору третбутилоксикарбонилсаркозил-глицин метилового эфира ю (15 г, 54.88 мМ) в 20 мл сухого этанола, дйЙжДеннощ до О 0C, прибавляли 10 мл этиламина, колбу плотно закрывали и оставляли при комнатной температуре. По данным TCX, реакция за 48 час проходит полностью. Растворитель упаривали на роторном испарителе. Rf продукта 0.45 в системе CHCl3 : / EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3). Выход третбутилоксикарбонилсаркозил-глицин-
15 этиламида - 14.7 г (98 %).
14.7 г (53.85 мМ) третбутилоксикарбонилсаркозил-глицинэтиламида растворяли в 40 мл трифторуксусной кислоты, выдерживали 15 минут при комнатной температуре, растворитель упаривали на роторном испарителе при 25 0C. Остаток кристаллизовали из 150 мл диэтилового эфира и высуши-
20 вали в вакууме. Чистоту полученного продукта контролировали с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Zоrbах ODS 250 х 4.6 mm, 5μm (DuРопt) в подвижной фазе, содержащей 0.1% TFA (0.5-20 % ацетонитрила за 20 мин). Выход трифторацетата саркозил-глицинэтиламида 13.9 г (92 %).
К раствору трифторацетата саркозил-глицинэтиламида (5 г, 17.3 мМ) и
25 бeнзoтpиaзoл-1-кapбoкcaмидa тозилата (5.78 г, 17.3 мМ) в 10 мл диметид- формамида при перемешивании добавляли N, N-диизопропилэтиламин (6 мл, 34.6 мМ). По данным Оф ВЭЖХ на колонке Zоrbах ODS 250x4.6 mm, 5μm (градиент ацетонитрила 0-20 % за 20 мин), через 48 час реакция проходит на 90 %. Растворитель упаривали со смесью вода - н-бутанол (2 : 3), зо остаток растворяли в 40 мл 20 % изопропилового спирта в воде и наносили на колонку 25 х 150 мм с Сефадексом SE C-25 (Рhаrmасiа Fiпе Сhеmiсаls), уравновешенную в 0.002 M пиридин-ацетатном буфере, содержащем 20 % изопропилового спирта. Далее проводили разделение в градиенте концен-
5 трации буфера от 0.002 до 0.25 M. Фракции, содержащие креатинил- глицинэтиламида ацетат, анализировали методом ОФ ВЭЖХ на колонке Zоrbах ODS 250x4.6 мм, 5мкм в подвижной фазе, содержащей 0.1% TFA (0 - 20 % ацетонитрила за 20 мин), объединяли и упаривали. Окончательную очистку продукта проводили путем кристаллизации из 10 мл изопропилово- ю го спирта при —5 0C. Чистоту продукта контролировали методом ОФ ВЭЖХ на колонке Zоrbах ODS 250x4.6 mm, 5μm в подвижной фазе, содержащей 0.1% TFA (0.5-20 % ацетонитрила за 20 мин). Выход креатинил- глицинэтйламид ацетата 2.7 г (56 %). Масс-спектр, найдено: т/z: 214.27. Вычислено: M214.25
15
Пример 7. Синтез амида креатина и замещенного фенилаланина - креа- тинил-фенилаланил-арrинил-глицин этилового эфира ацетата
К раствору дициклогексилкарбодиимид-третбутилоксикарбонил-орни-т тина (7.9 г, 21.52 мМ) и гидроксибензотриазола (2.91 г, 21.52 мМ) в 20 мл
20 диметилформамида при охлаждении на ледяной бане и перемешивании прибавляли раствор N, N'-дициклогексилкарбодиимида (4.44 г, 21.52 мМ) в 10 мл диметилформамида. Через 10 минут к реакционной смеси добавляли глицин этиловый эфир гидрохлорид (3 г, 21.52 мМ) и триэтиламин (3 мл, 21.52 мМ), перемешивали 1 час при 0 ° С и 20 час - при 20 ° С. Реакционную
25 смесь разбавляли 300 мл этилацетата, промывали 5 % раствором NaHCO3, IN H2SO4, водой и высушивали над Na2SO4. Растворитель упаривали на роторном испарителе, остаток - кристаллическое вещество. T. пл. 113-115 0C; Rf 0.89 в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3). Выход дициклогексил- карбодиимид-третбутилоксикарбонил-орнитил-глицин этилового эфира - зо 8.6 г (88 %). К раствору 8.6 г дициклогексилкарбодиимид-третбутилоксикарбонил-ор- нитил-глицин этилового эфира в 150 мл перегнанного над Mg метанола, добавляли палладиевую чернь и гидрировали в течение 3 часов. Полноту реак-
5 ции контролировали методом TCX в системе. CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3). Растворитель упаривали на роторном испарителе. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью TCX в системе EtOAc : п-ВuОН : AcOH : H2O (2 : 1 : 1 : l). Rf= 0.43.
Выход третбутилоксикарбонил-орнитил-глицин этилового эфира - 6 г ю (100 %).
К раствору дициклогексилкарбодиимид-фенилаланина (6.24 г, 20,86 мМ) и гидроксибензотриазола (2.82 г, 20.86 мМ) в 20 мл диметилформами- да при охлаждении на ледяной бане и перемешивании прибавляли раствор дициклогексилкарбодиимида (4.3 г, 20.86 мМ) в 10 мл диметилформа-
15 миде. Через 10 мин. к реакционной массе добавляли третбутилоксикарбо- нил-орнитил-глицин этиловый эфир (6 г, 18.92 мМ), перемешивали 1 час при О 0C и 20 час - при 20 0C. Реакционную смесь разбавляли 300 мл этил- ацетата, промывали 5 % раствором NaHCO3, IN H2SO4, водой и высушивали над Na2SO4. Растворитель упаривали на роторном испарителе, продукт го при упаривании кристаллизовался. T. пл. 179-182 0C; Rf 0.52 в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3).
Выход дициклoгeкcилкapбoдиимид-фeнилaлaнил-opнитил(тpeтбyтил- oкcикaρбoнил)-глицин этилового эфира 8.7 г (77 %).
К раствору 8.7 г дициклогексилкарбодиимид-фенилаланил-орнитил-
•5 (тpeтбyтилoкcикapбoнил)-глицин этилового эфира в 150 мл перегнанного над Mg метанола, добавляли палладиевую чернь и гидрировали в течение 3 час. Полноту реакции контролировали с помощью TCX в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3). Растворитель упаривали на роторном испарителе. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью TCX в системе о EtOAc : п-ВuОН : AcOH : H2O (2 : 1 : 1 : 1). Rf = 0.27. Выход фeнилaлaнил-oρнитил(тpeтбyтилoкcикapбoнил)-глицин этилового эфира - 6.58 г (100 % ).
К раствору третбутилоксикарбонилсаркозина (3.78 г, 20 мМ) и гидро-
5 ксибензотриазола (2.7 г, 20.00 мМ) в 20 мл диметилформамида при охлаждении на ледяной бане и перемешивании прибавляли раствор дицикло- гексилкарбодиимида (4.12 г, 20.00 мМ) в 10 мл диметилформамида. Через 10 мин к реакционной смеси добавляли фeнилaлaнил-opнитил(тpeтбyтил~ oкcикapбoнил)-глицин этилового эфира (6.58 г, 14.2 мМ) и перемешивали ιо 1 ч при О 0C и 20 ч - при 20 0C. Реакционную смесь разбавляли 300 мл этил- ацетата, промывали 5 % раствором NаНСОз, IN H2SO4, водой. Раствор охлаждали и выдерживали 3 часа при 4 0C; продукт выпадал в осадок. Осадок отфильтровывали, промывали эфиром и высушивали в вакууме. T. пл. 189- 192 0C; Rf 0.40 в системе CHCl3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3).
15 Выход тpeтбyтилoкcикapбoнилcapкoзил-фeнилaлaнил-opнитил(тpeтбy- тилoкcикapбoнил)-глицин этилового эфира - 6.5 г (72 %).
6.5 г тpeтбyтилoкcикapбoнилcapкoзил-фeнилaлaнил-opнитил(тpeтбy- тилoкcикapбoнил)-глицин этилового эфира растворили в 40 мл трифторук- сусной кислоты, выдерживали 15 минут при комнатной температуре, рас-
20 творитель упаривали на роторном испарителе при 25 0C. Остаток кристаллизовали из 250 мл диэтилового эфира и высушивали в вакууме. Чистоту полученного продукта проверяли методом ОФ ВЭЖХ на колонке Рhепоmепех Lшiа С- 18, 5μ, 4.6x150 мм с использованием линейного градиента ацетонитрила в воде, содержащей 0.1 % трифторуксусной кислоты (7—
25 27 % ацетонитрила за 20 мин), скорость потока 1 мл/мин.
Выход трифторацетата саркозил-фенилаланил-орнитил-глицина этилового эфира - 6.5 г (96 %).
Раствор трифторацетата саркозил-фенилаланил-орнитил-глицин этилового эфира (2 г, 3.02 мМ) в 5 мл воды наносили на колонку 15x 100 мм с Ам- зо берлитом IRA-67 ("Sigmа") в ОЕГ форме, промывали колонку водой. Фрак- ции с рН более 7 объединяли, упаривали и высушивали путем трехкратной отгонки с изопропиловым спиртом. Полученный саркозил-фенилаланил- орнитил-глицин этилового эфира растворяли в 5 мл диметилформамида, до-
5 бавляли 0.5 г LiCI (Меrсk) для улучшения растворимости, после чего вносили N3 N' - диизопропилэтиламин (1.05 мл, 6.04 мМ) и бeнзoтpиaзoл-1-кaρбo- ксамида тозилат (2.0 Ir, 6.04мM), добавляли 5 мл диметилформамида и перемешивали 72 час. По данным ОФ ВЭЖХ на колонке Рhепоmепех Lιmа C- 18, 5μ, 4.6x150 мм, линейный градиент ацетонитрила в воде, содержащей ю 0.1% трифторуксусной кислоты (7-27 % ацетонитрила за 20 мин, скорость потока 1 мл/мин), реакция проходит более чем на 90 % через 40 час. Растворитель упаривали со смесью вода - н-бутанол (2:3), остаток растворяли в 20 мл воды и наносили на колонку 25 х 150 мм с Сефадексом SE C-25 (Рhаrmасiа Fiпе Сhеmiсаls), уравновешенную в 0.002 M пиридин-ацетатном
15 буфере. Колонку промывали 400 мл 0.002 M буфера (скорость потока 2 мл/мин), проводили разделение в градиенте 0.002-0.5 M пиридин-ацетатного буфера. Фракции, содержащие креатинил-фенилаланил-аргинил-глицин этиловый эфир ацетат, объединяли и упаривали. Окончательную очистку продукта проводили путем кристаллизации из 20 мл изопропилового спирта при
20 комнатной температуре. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Luna C-18, 5 μм, 4.6x150 мм (Рhепоmепех) с использованием линейного градиента ацетонитрила в воде, содержащей 0.1 % ортофосфорной кислоты (8-28 % ацетонитрила за 20 мин), скорость потока 1 мл/мин.
25 Выход креатинил-фенилаланил-аргинил-глицин этиловый эфир ацетата
0.72 г (37 %). Масс-спектр, найдено: т/z: 520.60. Вычислено: M 520.61.
Пример 8. Синтез амида креатина и незамещенного фенилаланина - креатинил-фенилаланина хлоргидрата.
30 К раствору третбутидоксикарбонилсаркозина (4 г, 21.14 мМ) и гид- роксибензтриазола (2.86 г, 21.14 мМ) в 30 мл диметилформамида при охлаждении на ледяной бане и перемешивании прибавляли раствор дициклогек- 5 силкарбодиимида (4.36 г, 21.14 мМ) в 10 мл диметилформамида. Через 10 мин к реакционной массе добавляли фенилаланин бензиловый эфир п-толуолсульфокислый (8.13 г, 19.03 мМ) и триэтиламин (2.7 мл, 19.03 мМ), перемешивали 1 ч при 0 0C и 20 ч - при 20 0C. N5N'- дициклогексилмочевину отфильтровывали, реакционную смесь разбавляли ю 200 мл этилацетата, промывали 5 % раствором NaHCO3, IN H2SO4, водой и высушивали над Na2SO4. Растворитель упаривали на роторном испарителе. Rf основного вещества равен 0.85 в системе CHCI3 : EtOAc : MeOH (20 : 10 : 3).
Выход: третбутилоксикарбонилсаркозил-фенилаланин бензилового 15 эфира - 7.3 г (90 %).
7.3 г (17.15 мМ) третбутилоксикарбонилсаркозил-фенилаланин бензилового эфира растворяли в 20 мл 65 % трифторуксусной кислоты в CH2Cl2, выдерживали 30 минут при комнатной температуре, растворитель упаривали на роторном испарителе при 25 0C. Остаток кристаллизовали из 20 200 мл диэтилового эфира, высушивали в вакууме. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Рhепоmепех Lιmа C- 18, 5μм, 4.6x150 мм (20 - 40 % ацетонитрила за 20. мин).
Выход: саркозил-фенилаланин бензилового эфира трифторацетата -
6 г (80 %).
25 К раствору саркозил-фенилаланин бензилового эфира трифторацетата
(6 г, 13.62 мМ) и бeнзoтρиaзoл-1-кapбoкcaмид тозилата (4.54 г, 13.62 мМ) в
7 мл диметилформамида при перемешивании добавляли N,N'-диизoпpo- пилэтиламин (4.74 мл, 27.24 мМ). По данным ОФ ВЭЖХ на колонке Рhепоmепех Luпа С- 18, 5μм, 4.6x150 mm (20-40 % ацетонитрила за 20 зо мин), через 72 ч реакция прошла практически полностью. Растворитель упаривали со смесью вода - н-бутанол (2:3), остаток растворяли в 80 мл 30 % водного изопропилового спирта и наносили на колонку 25 х 150 мм с Сефадексом SE C-25 (Рhаrmасiа Fiпе Сhеmiсаls), уравновешенную в 0.002
5 M пиридин-ацетатном буфере, содержащем 20 % изопропилового спирта. Колонку промывали 400 мл стартового буфера (скорость потока 2 мл/мин), проводили разделение в градиенте 0.002-0.5 M пиридин-ацетатного буфера, содержащего 20 % изопропилового спирта.
Фракции, содержащие креатинил-фенилаланин бензиловый эфир аце- ю тат, анализировали с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Рhепоmепех Lшiа C- 18, 5μм, 4.6x150 мм (20 - 40 % ацетонитрила за 20 мин), объединяли и упаривали. Выход креатинил-фениламин бензилового эфира ацетата - 2.54 г (41 %).
2.54 г (5.93 мМ) креатинил-фениламин бензилового эфира ацетата
15 растворили в 80 мл метанола и гидрировали над Pd чернью. По мере протекания реакции продукт выпадал в осадок. Через 4 часа по данным TCX в системе ACN: E-2O: AcOH (7:1:1) гидрирование прошло практически полностью. Выпавший осадок вместе с катализатором отфильтровывали, промывали метанолом и растворяли в 200 мл 0.01 M HCI в 40 % водном метаноле.,
20 Катализатор отфильтровывали, фильтрат упаривали, остаток кристаллизовали из 10 мл изопропилового спирта. Чистоту полученного продукта проверяли с помощью ОФ ВЭЖХ на колонке Luna C-18, 5μм, 4.6 х 150 mm. Рhепоmепех (5-25 % ацетонитрила за 20 мин).
Выход 1.1 г (69 %). Масс-спектр, найдено: т/z: 278.27. Вычислено: M
25 278.29.
Пример 9. Исследование стабильности амидов креатина в водном растворе и плазме крови.
Изучение стабильности амидов креатина в водном растворе, а также плазме крови человека и крысы, проводилось методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием хроматографической системы Весkmап Sуstеm GoId (США) в следующей комплектации: Рrоgrаmmаblе Sоlvепt
Моdulе 126, Маrшаl Iпjесtоr Rhеоdупе 7725i, Рrоgrапimаblе Dеtесtоr Моdulе 166, оснащенной программой управления и обработки данных Весkmап Sуstеm GoId Сhrоmаtоgrарhу Sоftwаrе. Анализ проводили на колонке Lшiа 5μ Cl 8(2) 100 А 150 х 4.6 mm ( Рhепоmепех, США) с предколонкой Guаrd Саrtridgе Cl 8 при скорости потока 1 мл/мин в линейном градиенте ацетонитрила : для аналога из примера 1 от 5 % до 25 % ацетонитрила за 20 мин ( буфер А: 0.1% H3PO4- H2O, буфер В : 0.1% H3PO4 - ацетонитрил ), в случае вещества из примера 2-8 — от 3 % до 23 % ацетонитрила за 20 мин. Детекция осуществлялась на длине волны 220 нм. Дозировка образцов на колонку проводилась петлей 20 мкл.
Для приготовления растворов исследуемых веществ на аналитиче- ских весах бралась точная навеска каждого амида. К ней добавляли расчетное количество бидистиллированной воды для получения концентрации
2 мг/мл. Часть раствора разбавляли в 10 раз и сразу проводили анализ образца. Далее этот раствор выдерживали при комнатной температуре и через
3 часа повторяли анализ. По результатам этих определений площадь пиков обоих препаратов через 3 ч снижается незначительно (менее 3 %), не обнаружено появление новых пиков.
Для изучения стабильности амидов креатина к 200 мкл раствора в воде исходного амида с концентрацией 2-3 мг/мл добавляли 1 мл воды или плазмы крови, встряхивали и сразу же отбирали пробу объемом 200 мкл и проводили анализ начальной концентрации амида креатина. Далее раствор помещали в вибротермостат при температуре 37 0C и из нее отбирали алик- воту 200 мкл через 0,5, 1 и 3 часа термостатирования. К отобранной пробе прибавляли 20 мкл 10 % раствора трихлоруксусной кислоты и выдержи- вали 15 мин при температуре минус 24 0C, цинтрифугировали при 6000 g в течении 5 мин для осаждения белков плазмы, отбирали супернатант и проводили его анализ. Для оценки стабильности препаратов сравнивали площади пиков соответствующего соединения в начале эксперимента и через выбранные промежутки времени (таблицы 1-2).
Таблица 1. Стабильность аналогов креатина в плазме крови человека
Figure imgf000022_0001
Таблица 2. Стабильность аналогов креатина в плазме крови крысы
Figure imgf000022_0002
Figure imgf000023_0001
Как следует из приведенных данных, амиды креатина имеют высокую стабильность в плазме как человека, так и крысы - их концентрация в течение 3 ч оставалась практически неизменной, в то время, как концентрация препарата-аналога — бензилового эфира креатина в плазме крови человека за 0.75 часа снижалась до 53 % во всех случаях.
Пример 10. Ноотропное действие амидов креатина Исследование влияния амидов креатина на их способность проявлять нейропротекторное действие на ткани головного мозга проведены на модели фокальной и глобальной церебральной ишемии крыс.
Глобальную церебральную ишемию индуцировали у самцов крыс S- D, анестезированных нембуталом путем пережатия обеих сонных артерий на 12 мин. с одновременной контролируемой гипотензией (45 мм Hg).
Интрацеребровентрикулярную (и.ц.в.) канюлю вводили стереотакси- чески в левый латеральный церебральный желудочек при использовании кетаминовой анестезии и присоединяли к осмотическому мини насосу Аlzеt (AP), (модель 1002, скорость подачи раствора 0,25 мкл/ч), который был предварительно заполнен экспериментальным раствором и размещен подкожно между лопатками.
Исследуемые препараты вводили и.ц.в. (а, b), или перорально (а) в дозах 20 мг/кг массы, в следующих вариантах эксперимента: (а) - начиная за 5 дней до ишемии и продолжая 7 дней после ишемии (оценка эффективности препарата для профилактики и терапии ишемии);
(b) — начиная через 30 мин после индукции ишемии и продолжая 5 7 дней (оценка эффективности препарата для терапии ишемии);
(c) - начиная за 1 час до ишемии (оценка эффективности препарата для профилактики и терапии ишемии);
На 7 день после ишемии крыс умерщвляли декапитацией, мозг удаляли, погружали на 12-24 ч. в 2 % параформальдегид, затем - в 96 % эта- ιо нол, кодировали для «cлeпoгo» анализа и проводили морфологическое исследование. Степень повреждения мозга оценивали по количеству «cжaв- шиxcя» нейронов в различных регионах мозга.
В целом, заключение об эффективности препаратов проведено на основе изучения их влияния на поведенческие реакции животных в водном
15 лабиринте Морриса и на основе анализа морфологических изменений ткани головного мозга при введении амидов креатина на фоне глобальной и фокальной церебральной ишемии.
1. Данные поведенческого тестирования в водном лабиринте Морриса (BTM) при внутрибрюшинном введении препарата.
20 Для исследования использованы композиции препарата ниже приведенного состава (таблица 3).
Таблица 3. Состав композиций для биологического исследования
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000026_0001
При анализе эффективности в отношении нарушений энергетического тканевого метаболизма, вызванного фокальной ишемией мозга, сравнивались данные обучения в BTM крыс группы с в/б инъекциями и перораль- ным введением препаратов (n=7), негативного контроля с в/б введением физиологического раствора (n=13), позитивного контроля (n=5) и ложно оперированных животных (JIO) (n=5).
Статистический анализ (метод ANOVA с повторными измерениями) показал, что группы существенно отличаются по ходу обучения. Обучение наблюдалось у экспериментальной группы (введение препарата), группы 27 цирования ФИМ - через 1 и 3 дня. По данному эффекту группа с введением исследуемого препарата приближается к группе позитивного контроля (ги- потремии) и группе JIO животных. При анализе данных поведения животных в установке «Oткpытoe по- лe» отмечено выраженное влияние в/б введения амидов креатина на один из показателей функционального состояния животных при хронической ФИМ - латентность инициации движения, отражающую степень нарушения структуры нейронов и межнейронных связей. Сравнивались данные по латентности инициации движения крыс группы с в/б инъекциями композиции (n=7), негативного (n=13), позитивного контролей (n=5) и ложноопери- рованных животных (n=5) за один день до и через 1, 3 и 7 дней после ФИМ. Инициация движения (wаrm-uр) - комплексная мультистадийная двигательная реакция организма на внутренние и/или внешние стимулы. В соответствии с предложенной Gоlапi еt аl (Gоlапi I5 Wolgin DL,
Теitеlbаum, Р., 1979) процедурой, для оценки инициации движения измерялось время, необходимое животному для того, чтобы выйти за пределы участка пространства - квадрата 20x20 см, расположенного в центре установки открытого поля (1x1 x0,5 м). Полученные результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5. Данные поведенческого тестирования животных в «oткpытoм пoлe» - (композиция 2, эксперимент а)
Figure imgf000027_0001
28
Введение амидов креатина приводит к достоверному снижении площади повреждения головного мозга при экспериментальной ишемии (таблица 6).
Таблица 6 . Показатели повреждения головного мозга крыс при экспериментальной ишемии/постишемической реперфузии на фоне введения амидов креатина
Figure imgf000028_0001
Приведенные данные свидетельствуют о нейропротекторном воздействии препаратов, содержащих амиды креатина, в условиях ишемии мозговой ткани. Композиции на основе амидов креатина положительно влияют на восстановление когнитивных функций после экспериментального инсульта и латентность инициации движений, характеризующую общее со- стояние энергетического тканевого метаболизма мозговой ткани животного, функциональное состоянии нейронов и ассоциативных областей коры мозга.

Claims

29ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Амиды креатина общей формулы:
NH=C(NH2)-N(CH3)-CH2-CO-NH-R*X, где R- аминокислотный ос- 5 таток алифатической, ароматической или гетероароматической аминокислоты или ее производное, представляющее собой фармацевтически приемлемые соли аминокислот, сложные эфиры аминокислот, амиды аминокислот или пептиды; X - низкомолекулярная органическая или минеральная кислота, или вода. ю 2.Cпocoб получения амидов креатина по п. l, заключающийся в том, что реакцию гуанидилирующих агентов с амидами саркозина проводят в полярных органических растворителях при температуре не более 50 0C. 3. Амиды креатина общей формулы:
NH=C(NH2)-N(CHз)-CH2-CO-NH-R*X, где R- аминокислотный ос- 15 таток алифатической, ароматической или гетероароматической аминокислоты или ее производное, представляющее собой фармацевтически приемлемые соли аминокислот, сложные эфиры аминокислот, амиды аминокислот или пептиды; X - низкомолекулярная органическая или минеральная кислота или вода, в качестве средства, обладающего нейро- 20 протекторным действием.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2008/000793 2008-12-24 2008-12-24 Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием WO2010074591A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08878506A EP2269980A4 (de) 2008-12-24 2008-12-24 Creatinamide, verfahren zu ihrer herstellung und wirkstoff zur ausführung einer neuroprotektiven aktion
PCT/RU2008/000793 WO2010074591A1 (ru) 2008-12-24 2008-12-24 Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием
US12/734,183 US8350077B2 (en) 2008-12-24 2008-12-24 Amides of creatine, method of their preparation, and remedy possessing a neuroprotective activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2008/000793 WO2010074591A1 (ru) 2008-12-24 2008-12-24 Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010074591A1 true WO2010074591A1 (ru) 2010-07-01

Family

ID=42287974

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000793 WO2010074591A1 (ru) 2008-12-24 2008-12-24 Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием

Country Status (3)

Country Link
US (1) US8350077B2 (ru)
EP (1) EP2269980A4 (ru)
WO (1) WO2010074591A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8445466B2 (en) 2010-04-08 2013-05-21 John H. Owoc Stable aqueous compositions comprising amide-protected bioactive creatine species and uses thereof
WO2014191885A3 (en) * 2013-05-27 2015-04-02 Mahesh Kandula Compositions and methods for the treatment of neuromuscular disorders

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2692719T3 (en) 2012-07-30 2016-09-12 Commissariat L Energie Atomique Et Aux Energies Alternatives A process for the preparation of kreatinfedtestere, thus prepared and to their use kreatinfedtestere
JP2016536372A (ja) * 2013-11-05 2016-11-24 ウルトラジェニクス ファーマシューティカル インク．Ｕｌｔｒａｇｅｎｙｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｃ． クレアチン類似体及びその使用
RU2579120C1 (ru) * 2015-05-19 2016-03-27 Закрытое Акционерное Общество "Вертекс" Способ получения амидов креатина
TWI815832B (zh) 2017-12-01 2023-09-21 美商奧特吉尼克斯製藥公司 肌酸前藥、其組合物及使用方法

Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3870709A (en) * 1972-02-22 1975-03-11 Pfizer 6-(alpha-(ome ga-guanidinoalkanoylamido)acylamido)penicillanic acids
US5219846A (en) 1991-12-03 1993-06-15 Nicole Bru Treatment of human tumors utilizing compounds having a phosphoamides linkage or enol phosphate linkage
WO1994002127A1 (en) 1992-07-24 1994-02-03 Eric Hultman A method of increasing creatine supply depot
WO1996008527A1 (fr) 1994-09-14 1996-03-21 Tovarischestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostju 'mormetall' Ortho-oligomere a empilage spirale et regulateur de systemes bio-energetiques cellulaires dans des eukaryotes et des prokaryotes bases sur ledit oligomere
WO1997045026A1 (en) 1996-05-31 1997-12-04 The Howard Foundation Improvements in or relating to compositions containing creatine
RU2114823C1 (ru) 1992-12-02 1998-07-10 Фурнье Эндюстри Э Санте Аналоги 15-деоксиспергуалина, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
US6093746A (en) 1997-09-05 2000-07-25 Yoshiyuki Uchida Therapeutic agents for asthma
US6166249A (en) 1996-12-20 2000-12-26 Skw Trostberg Aktiengesellschaft Creatine pyruvates
US6193973B1 (en) 1997-08-22 2001-02-27 B. David Tuttle Dietary supplement for boosting energy and increasing muscular strength
WO2002022135A1 (en) 2000-09-14 2002-03-21 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Creatine ester pronutrient compounds and formulations
DE10057996A1 (de) * 2000-11-23 2002-06-06 Max Planck Gesellschaft Diurethan-geschützte 1H-Benzotriazol-1-carboxamidinderivate
US6503951B2 (en) 1999-06-30 2003-01-07 Skw Trostberg Aktiengesellschaft Use of creatine and/or creatine derivatives for treating typical disorders in women
US6706764B2 (en) 1994-11-08 2004-03-16 Avicena Group, Inc. Use of creatine or creatine analogs for the treatment of diseases of the nervous system
US20040077719A1 (en) 2000-12-28 2004-04-22 Ralf Jager Creatine/citric acid compound, method for the production of the same and the use thereof
RU2236401C2 (ru) * 1999-01-11 2004-09-20 Мерк Патент Гмбх (аминоиминометил)амино)алканкарбоксидамиды и их применение в терапии
US6861554B2 (en) 2001-03-23 2005-03-01 Biosalts S.R.L. Creatine salt having enhanced nutritional and therapeutic efficacy and compositions containing same
CN1709896A (zh) 2005-07-10 2005-12-21 杨喜鸿 磷酸肌酸的镁盐及其制备方法和在制药中的应用
US7186754B2 (en) 1999-06-25 2007-03-06 Avicena Group, Inc. Use of creatine or creatine compounds for skin preservation
RU2295261C2 (ru) 2001-03-02 2007-03-20 Дзе Ховард Фаундейшн Композиция, содержащая креатин и креатинин, и способ ее получения
RU2354645C1 (ru) * 2007-11-21 2009-05-10 Закрытое Акционерное Общество "Вертекс" Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5561146A (en) * 1994-06-10 1996-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Modified guanidino and amidino thrombin inhibitors
US7816116B2 (en) * 2006-04-25 2010-10-19 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Modified creatinine amide hydrolase having improved affinity for substrate, and reagent composition for determination of creatinine

Patent Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3870709A (en) * 1972-02-22 1975-03-11 Pfizer 6-(alpha-(ome ga-guanidinoalkanoylamido)acylamido)penicillanic acids
US5219846A (en) 1991-12-03 1993-06-15 Nicole Bru Treatment of human tumors utilizing compounds having a phosphoamides linkage or enol phosphate linkage
WO1994002127A1 (en) 1992-07-24 1994-02-03 Eric Hultman A method of increasing creatine supply depot
RU2114823C1 (ru) 1992-12-02 1998-07-10 Фурнье Эндюстри Э Санте Аналоги 15-деоксиспергуалина, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
WO1996008527A1 (fr) 1994-09-14 1996-03-21 Tovarischestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostju 'mormetall' Ortho-oligomere a empilage spirale et regulateur de systemes bio-energetiques cellulaires dans des eukaryotes et des prokaryotes bases sur ledit oligomere
US6706764B2 (en) 1994-11-08 2004-03-16 Avicena Group, Inc. Use of creatine or creatine analogs for the treatment of diseases of the nervous system
WO1997045026A1 (en) 1996-05-31 1997-12-04 The Howard Foundation Improvements in or relating to compositions containing creatine
US6166249A (en) 1996-12-20 2000-12-26 Skw Trostberg Aktiengesellschaft Creatine pyruvates
US6193973B1 (en) 1997-08-22 2001-02-27 B. David Tuttle Dietary supplement for boosting energy and increasing muscular strength
US6093746A (en) 1997-09-05 2000-07-25 Yoshiyuki Uchida Therapeutic agents for asthma
RU2236401C2 (ru) * 1999-01-11 2004-09-20 Мерк Патент Гмбх (аминоиминометил)амино)алканкарбоксидамиды и их применение в терапии
US7186754B2 (en) 1999-06-25 2007-03-06 Avicena Group, Inc. Use of creatine or creatine compounds for skin preservation
US6503951B2 (en) 1999-06-30 2003-01-07 Skw Trostberg Aktiengesellschaft Use of creatine and/or creatine derivatives for treating typical disorders in women
WO2002022135A1 (en) 2000-09-14 2002-03-21 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Creatine ester pronutrient compounds and formulations
DE10057996A1 (de) * 2000-11-23 2002-06-06 Max Planck Gesellschaft Diurethan-geschützte 1H-Benzotriazol-1-carboxamidinderivate
US20040077719A1 (en) 2000-12-28 2004-04-22 Ralf Jager Creatine/citric acid compound, method for the production of the same and the use thereof
RU2295261C2 (ru) 2001-03-02 2007-03-20 Дзе Ховард Фаундейшн Композиция, содержащая креатин и креатинин, и способ ее получения
US6861554B2 (en) 2001-03-23 2005-03-01 Biosalts S.R.L. Creatine salt having enhanced nutritional and therapeutic efficacy and compositions containing same
CN1709896A (zh) 2005-07-10 2005-12-21 杨喜鸿 磷酸肌酸的镁盐及其制备方法和在制药中的应用
RU2354645C1 (ru) * 2007-11-21 2009-05-10 Закрытое Акционерное Общество "Вертекс" Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HANDBUCH VIDAL, ASTRAPHARMSERVICE, 2001, pages B-18
LANCET, vol. 363, 2004, pages 349 - 45
See also references of EP2269980A4 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8445466B2 (en) 2010-04-08 2013-05-21 John H. Owoc Stable aqueous compositions comprising amide-protected bioactive creatine species and uses thereof
WO2014191885A3 (en) * 2013-05-27 2015-04-02 Mahesh Kandula Compositions and methods for the treatment of neuromuscular disorders

Also Published As

Publication number Publication date
EP2269980A1 (de) 2011-01-05
US8350077B2 (en) 2013-01-08
EP2269980A4 (de) 2011-05-18
US20110269986A1 (en) 2011-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2061749B1 (en) Positively charged water-soluble prodrugs of acetaminophen and related compounds with very fast skin penetration rate
CN102471248B (zh) 用于递送1,3-丙二磺酸的方法、化合物和组合物
WO2010074591A1 (ru) Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием
IE49701B1 (en) Amides of acyl-carnitines,process for preparing same and pharmaceutical compositions containing such amides
EP2692719B1 (en) Method for preparing creatine fatty esters, creatine fatty esters thus prepared and uses thereof
US20200407395A1 (en) Chiral peptides
BRPI0619261A2 (pt) derivados de purina e métodos de uso desses
KR101682427B1 (ko) 통증 및 기타 질병을 치료하기 위한 화합물 및 방법
ES2897475T3 (es) Composición y método para el tratamiento de trastornos metabólicos
RU2354645C1 (ru) Амиды креатина, способ их получения, средство, обладающее нейропротекторным действием
CN107540710A (zh) 肝递送抗病毒前体药物核苷环磷酸酯化合物及应用
BR112019010816A2 (pt) composto de fórmula i, composto de fórmula ii, composto de fórmula iii, composto de fórmula iv, composto de fórmula v, composição farmacêutica, compostos, composto de fórmula viii, composto de fórmula ix, e composto de fórmula x
WO2003076457A1 (de) HEMMSTOFFE DES GERINNUNGSFAKTORS Xa, IHRE HERSTELLUNG UND VERWENDUNG
JPS6012347B2 (ja) 新規アミノ酸誘導体の製法
JP2021508732A (ja) 関節の障害を防止又は処置するためのグルコサミン誘導体
JPS6131118B2 (ru)
EP2497765B1 (de) Verfahren zur herstellung von kreatinamiden
DK2909169T3 (en) CRYSTALLINIC PHASE OF (3S, 3S ') 4,4'-DISULPHANDYLBIS (3-AMINOBUTANE 1-SULPHONIC ACID) WITH L-LYSINE
US20030144244A1 (en) Stable compositions of S-adenosyl-l-methionine with dextran
CN112830884A (zh) 一种丹参素衍生物及其制备方法及其医药用途
RU2517209C2 (ru) Средство, обладающее ноотропным воздействием на организм
EA037869B1 (ru) Применение фенилкреатина для профилактики или лечения экстрасистолии
AU2018210739B2 (en) Phenylcreatine, its use and method for its production
WO2023052449A1 (en) New salt forms of amiloride and its derivatives for pharmaceutical use
US3461211A (en) Lipotropic compositions and their administration

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12734183

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008878506

Country of ref document: EP

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08878506

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE