WO2010041977A1 - Cпособ получения янтарной кислоты - Google Patents

Cпособ получения янтарной кислоты Download PDF

Info

Publication number
WO2010041977A1
WO2010041977A1 PCT/RU2009/000427 RU2009000427W WO2010041977A1 WO 2010041977 A1 WO2010041977 A1 WO 2010041977A1 RU 2009000427 W RU2009000427 W RU 2009000427W WO 2010041977 A1 WO2010041977 A1 WO 2010041977A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
catalyst
succinic acid
acid
hydrogenation
palladium
Prior art date
Application number
PCT/RU2009/000427
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Роман Анатольевич ТРУНИН
Михаил Львович УЧИТЕЛЬ
Евгений Ильич MAEBСКИЙ
Владимир Израилевич ХЕЙФЕЦ
Дана КАССЕИНОВА
Лариса Петровна ПИВОНЕНКОВА
Татъяна Борисовна ЛЮБИМОВА
Original Assignee
Trunin Roman Anatolievitch
Uchitel Michail Lvovitch
Maevskij Evgenij Iljich
Heifets Vladimir Izrailech
Kasseinova Donna
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Trunin Roman Anatolievitch, Uchitel Michail Lvovitch, Maevskij Evgenij Iljich, Heifets Vladimir Izrailech, Kasseinova Donna filed Critical Trunin Roman Anatolievitch
Priority to CN200980134050.6A priority Critical patent/CN102177128B/zh
Priority to US13/061,147 priority patent/US8546611B2/en
Priority to DE112009002089T priority patent/DE112009002089T5/de
Publication of WO2010041977A1 publication Critical patent/WO2010041977A1/ru

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J23/00—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00
    • B01J23/70—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of the iron group metals or copper
    • B01J23/89—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of the iron group metals or copper combined with noble metals
    • B01J23/892—Nickel and noble metals
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J23/00—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00
    • B01J23/38—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of noble metals
    • B01J23/40—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of noble metals of the platinum group metals
    • B01J23/44—Palladium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/347—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides by reactions not involving formation of carboxyl groups
    • C07C51/36—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides by reactions not involving formation of carboxyl groups by hydrogenation of carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C51/43—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change of the physical state, e.g. crystallisation

Definitions

  • the invention relates to an improved method for the production of biologically active succinic acid (NAC), which is widely used in medicine, food and cosmetic industry.
  • NAC biologically active succinic acid
  • Yangaric acid is one of the indispensable metabolites of the energy cycle of all living organisms, both plants and animals. In animal organisms, it also provides a number of signaling functions in interaction with orphan receptors.
  • the therapeutic properties of UC have been known since the fifteenth century and were first described in the pharmacopeia of the Armenian physician Amasiatsi in 1493 (see Amasiatsi A. Unnecessary for the uneducated (medieval eshklope game skip dictionary) , httr: //libbox.it ⁇ fo/book_reading, 91900.html)
  • ⁇ catalytically promotes the activation of energy metabolism, has a cardiotonic, radioprotective, weak diuretic effect.
  • a number of methods are known for producing succinic acid from various EIDs of the feedstock, primarily from maleic anhydride, maleic acid, butadiene rubbers, furfural, etc., while the authors of the inventions generally do not declare the degree of biological activity of UC.
  • the biological activity of the UC obtained in this way is limited - this acid, according to the tests, is mainly a diuretic.
  • the method does not allow to obtain a product that meets the requirements for the safety of food production, as it contains a large amount of harmful impurities.
  • the catalysts in the known methods are metals of group VIII of the periodic system (nickel, ruthenium, palladium, rhodium, platinum) in the form of skeletal contact or activated carbon deposited on various supports, alumina, kieselguhr, asbestos and
  • a common disadvantage of these methods is the use of contacts having a high content of precious metals and low productivity per unit weight of the active component.
  • the closest method to the present invention is a method for producing a highly biologically active UC by hydrogenation of maleic anhydride (malenovic acid, fumaric acid) in an aqueous medium on heterogeneous catalysts, the active phase of which are complex compounds of palladium and iron with succinic, maleic or fumaric acids (or their alkaline salts). After hydrogenation, the catalyst is separated off and succinic acid is isolated from the solution by cooling, freezing or evaporating the catalysis.
  • maleic anhydride malenovic acid, fumaric acid
  • the method includes a preliminary stage of preparing a modified complex palladium-iron catalyst on which hydrogenation is then carried out (see patent RU 2237056) [5].
  • a method of preparing a catalyst in the form of a complex includes several successive stages of mixing its components under certain conditions. The resulting complexes are applied to the substrate at the time of their formation. Succinic acid obtained in this way has biological properties similar to natural UC.
  • the problem to which the invention is directed is to create an improved method for producing high-purity succinic acid, stably having high biological activity, including high adaptogenicity.
  • the technical result is achieved through the development of a new method for producing succinic acid with a stably high biological activity, including adaptogenicity, which includes the stages of obtaining a modified palladium-containing catalyst using acid and liquid-phase hydrogenation of unsaturated acid compounds on the obtained modified catalyst at elevated temperatures and pressure with separation of the catalyst after hydrogenation and the allocation of the obtained succinic acid, while different
  • the resulting acid has a high degree of purity (99%), does not differ in quality) 'from the used seed and does not contain impurities of fumaric and yalennoy acid, and also has a stable high biological activity.
  • the method according to technology and implementation is simpler than the previously known closest analogue and allows the use of an extensive range of known palladium-containing catalysts on a support. This eliminates the multi-stage and laborious synthesis of a complex catalyst with its preliminary selection.
  • the use of “filling” product in the form of succinic acid with high biological activity during crystallization allows improving the quality and biological stability of the obtained succinic acid.
  • a catalyst that is active and selective in the hydrogenation of maleic anhydride (maleic and fumaric acids or a mixture thereof) to UC comparable in biological activity to ⁇ bulk and can be superior to it can be obtained by preliminary (immediately before hydrogenation) modification of maleic , fumaric or succinic acids of any palladium-containing catalyst on a carrier.
  • M o the dif ficient of the anabi l and allallic acid catalyst in the indicated acids is carried out in aqueous solutions of these acids in an oxygen free atmosphere.
  • the concentration of the catalyst suspension in the aqueous solution varies between 0, 1-4, 5% sass, and the palladium / acid ratio is maintained in the range l ⁇ 1-400.
  • the concentration of palladium on the carrier according to this invention ranged from 0L-
  • the modification process is preferably carried out directly in the hydrogenation reactor in an oxygen-free atmosphere with constant stirring in a wide temperature range from 5 to 70 ° C (optimal recommended range is 15-4O 0 C).
  • maleic anhydride maleic or fumaric acids
  • the system is purged with hydrogen, and the necessary temperature conditions and pressure of hydrogen are established.
  • the leadzt process at a temperature of 100-120 0 C and a pressure of no higher than 25 atm. Higher pressure does not give a positive additional effect.
  • the catalyst is separated by “hot” filtration, and the catalysis (aqueous solution) succinic acid) with a temperature of SO-IOO 0 C is fed into a heated crystallizer, where the so-called '-- ⁇ -charge''is a reference acid of natural origin or identical in biological activity.
  • Crystallization is carried out with a controlled decrease in temperature: first, at a rate of 3-4 ° C per minute (up to 45 ° C). then 1-2 0 C per minute (up to 25 ° C) and at the final stage 0.3-0.5 0 C per minute (up to 5-15 ° C). As a result, a crystalline precipitate of succinic acid is formed, which is filtered off and dried at a temperature not exceeding 100 0 C.
  • the resulting succinic acid (after separation of the mother liquor and drying) has a high degree of purity (the content of the basic substance is not less than 99.0%. Maleic and fumaric acids are absent) and does not differ in its biological activity from the acid used as a charge during crystallization.
  • the proposed method allows, in addition, to be used in the practical: implementation of the process, an extensive range of currently known supported catalysts, the active phase of which is palladium.
  • Examples 1 to 14 The practical implementation of the claimed invention is illustrated by the following examples 1 to 14 and the attached Tables 1 to S .. In examples 1. 2 and 3 reproduced data on analogues and prototype).
  • Examples 4-10 illustrate the claimed invention.
  • the “original” UC was used. obtained by pyrolysis of amber chips.
  • Examples 11-14 correspond to the tests for biological activity obtained in examples 1-10 of the samples in comparison with the "broad” UC.
  • Example 1 (method according to [2]).
  • the process of obtaining succinic acid by oxidation of furfural is carried out in a laboratory setup (flask with a stirrer and reflux condenser, immersed in a boiling water bath). 200 cm 3 of 30% hydrogen peroxide are placed in the flask. 250 cm J of water and 48 g of furfural. With stirring, a concentrated sodium hydroxide solution is added so that the pH of the medium is maintained at a level of 2-4 for 45 minutes. after which the pH is adjusted to 7.
  • Example 2 (method [4]) Hydrogenation of maleic acid at the substitution periodic operation, consisting of a hydrogenation reactor, a heated filter to separate the catalyst, a crystallizer with a jacket for cooling and a stirrer, a filter for the separation of succinic acid (or its salts) and a steam-heated dryer. 12 l of water are charged into the reactor.
  • Example 2 A Preparation of a catalyst with a calculated content of palladium 0.1% and iron 0.1% (calculated on the weight of the dry carrier — OU-B coal) in a plant comprising four containers with mixers for preparing the initial solutions, a synthesis reactor and a bag filter.
  • reaction mass is heated to 60-70 0 C and stirred to obtain a solution of the palladium chloride complex, which is then hydrolyzed after cooling to 30-40 0 C, slowly dosing a solution of -55 ml IN solution of sodium hydroxide, followed by a two-hour exposure.
  • the catalyst on the filter is washed in portions of 120 dm 3 of water, and the washing water is also sent to the collector.
  • the washed catalyst is dried on a filter with nitrogen to a residual moisture content of -55% and the catalyst is discharged in the form of a wet paste in an amount of -3.8 kg (in terms of dry).
  • the catalyst contains 0, 11% palladium and 0, 15% iron.
  • Hydrogenation of malic anhydride in the presence of the obtained palladium-iron catalyst is carried out on a batch pilot plant, including a suspension and a hydrogenation reactor with a capacity of 100 dm each, a heated filter for separating the catalyst, a crystallizer and a suction filter for separating the product.
  • the process is carried out at a temperature of 40-105 0 C. an overpressure of 15 atm.
  • succinic acid is obtained (after separation of the catalyst by hot filtration and crystallization of the product by cooling the hydrogenation catalyst from 90 to 10 ° C) with a yield of 80% of theoretical - according to cycle I n 95.8% of theoretical - for the third cycle of recycling of the mother liquor.
  • UC For “filling” during crystallization, UC with a pre-tested biological activity is used, while UC obtained both synthetically and “single-walled” is used.
  • UC is tested in rats undergoing immobilization stress. A blood smear taken from the tail vein of the animal determines the lymphatic composition of the blood (before and after stress). If the proportion of eosinophils is more than 0.5%, and preferably 1% (25% and 50% of the initial background, respectively), the acid is suitable for use in the crystallization process. A detailed description of the testing method is shown in example 13.
  • Air is displaced from the apparatus by argon, then a weighed portion (4.6 g) of NPF-L catalyst is introduced.
  • the active phase of this catalyst (according to the specification) is palladium in the form of polychlorohydroxocomplexes promoted with nickel and iron compounds.
  • the palladium content is 0.2% of the mass, nickel -0.2% of the mass, iron - 0.07% of the mass.
  • the suspension of the catalyst in an aqueous solution of maleic acid was stirred at room temperature (-20 0 C) for 1 hour.
  • the suspension of the modified catalyst with argon pressure is transferred into an autoclave with a capacity of 1.0 dm 3 , where 600 ml of a solution of maleic acid are pre-charged (acid concentration 27, 7% by weight).
  • a coolant is fed into its jacket.
  • the hydrogen pressure in the apparatus is increased to 20 atm and include stirring. Hydrogenation (hydrogen uptake) begins almost immediately after the stirrer is turned on.
  • the process is carried out at a temperature of ⁇ 90-100 ° C, after completion of hydrogen absorption and aging at 90-100 0 C, the suspension of the catalyst in the succinic acid solution is pumped through the heated filter into the crystallizer (temperature> S0 ° C ⁇ where 0.5 ml of solution is introduced, containing 0.07 g of succinic acid isolated from natural amber.
  • the crystallization of succinic acid from the solution is carried out with an adjustable cooling rate: 1 stage (up to 45 ° C) at a rate of 3 ° C per minute;
  • Stage 2 (up to 25 ° C) at a rate of 1 ° C per minute;
  • Stage 3 (up to 10 0 C) at a rate of 0.3 0 C per minute.
  • Agora is preparing a solution of 20 kg of maleic anhydride in 40 l of water.
  • the concentration of acid in water is 0.012% of the mass.
  • the reactor is purged with nitrogen, then it is filled with a nitrogen-hydrogen mixture (l ⁇ l vol.), After which a POW-08 catalyst is loaded (300 g per dry weight), the active phase of which, according to the specification. is palladium in reduced form.
  • the suspension of the catalyst in a dilute aqueous solution of succinic acid is maintained with constant stirring for 30-40 minutes. while the temperature of the reactor is gradually increased to 40-50 0 C.
  • an aqueous solution of maleic anhydride maleic acid
  • the nitrogen-hydrogen mixture in the reactor is displaced by hydrogen and hydrogenated at a pressure of 10-15 atm in polythermal mode (due to the heat of the reaction, the temperature rises to 120 0 C).
  • the cooling rate is reduced so that about 35% of all succinic acid crystallizes in 35-40 minutes from the start of cooling. Cooling is carried out to 8-10 0 C (the entire crystallization process is completed in 1.5-2 hours), the precipitate obtained is separated on a suction filter from the mother liquor, which is returned to recycling.
  • the mother liquor is used both for preparing the initial solution of maleic anhydride, and for modifying the “fresh” catalyst. Acid)? dried in a shelf c ⁇ iniDiKe at a temperature of 90-95 0 C.
  • the succinic acid obtained after drying with a yield of about 80% of theoretical has high quality indicators: the content of the main substance is 100%, the melting point is 187-187.5 ° C, there are no unsaturated acids . After a three-fold recycle of the mother liquor, the yield of succinic acid reaches 99.7% of the theoretical.
  • 240 l of water, 210 g of succinic acid, 210 g of maleic acid and 4,200 g (per dry weight) of the PF catalyst are loaded into the apparatus, the active phase of which (according to the specification) are palladium polychlorohydroxyl complexes promoted with iron salts.
  • Air is forced out of the apparatus with nitrogen, which is then replaced by hydrogen.
  • After sealing the reactor, its contents are heated to 30 ° C and the catalyst is modified for 1.5 hours with constant stirring.
  • the catalyst “palladium at Sibinite” obtained by applying hydroxyl complexes of palladium to pyrocarbon is used.
  • the apparatus is purged with a nitrogen-argon mixture (10: 1 v). Cooled water with a temperature of 5 ° C and for 2 hours with constant stirring are modifying.
  • the succinic acid solution enters the crystallizer, where the solution is added, which is a mixture of succinic acid obtained in Example 6 (50%) and the “natural” succinic acid (50%).
  • the catalyst (7.5 g) is preliminarily ground to a particle size of the main fraction within 63-100 ⁇ m and placed in an autoclave, where 650 ml of a 0.06% aqueous solution of succinic acid are charged.
  • the reactor is purged with nitrogen and filled with a nitrogen-hydrogen mixture (1: 5 vol), stirring is turned on, the temperature is raised to 40 0 C and the catalyst suspension is kept under these conditions for 1 hour.
  • After completion of the nitrogen-modifying vodorodnvyu syes displaced with nitrogen was charged with 250 g malepnovop acid sealed apparatus was purged with hydrogen and conduct hydrogenation at a hydrogen pressure of 15 atm and a temperature of 100 e C.
  • Example 4 The apparatus described in Example 4 was used; the nickel-palladium catalyst on fibrous asbestos (palladium in the hydroxide form promoted with a nickel salt) was subjected to modification. Modification conditions: 100 ml of water; L035 g of catalyst; 1 g of fumaric acid, stirring at 70 ° C in an atmosphere of helium o-hydrogen mixture (1 ⁇ : 5 vol).
  • the modified catalyst is transferred to a helium purged reactor, where 207.1 g of fumaric acid are pre-suspended in 600 ml of water heated to 80 1 C.
  • the reactor is filled with hydrogen and hydrogenated at a pressure of 25 atm and a temperature of 120 0 C.
  • the crystallization conditions correspond to example 4.
  • the content of the main substance is 99.7% by mass.
  • the yield of succinic acid is 99, 1% of theoretical (after the third cycle of the mother liquor).
  • Example 11 The study of acute toxicity of the obtained samples. The study was conducted on female white rats weighing 220-
  • the first two samples are not lethal and belong to low-hazard substances.
  • the third sample is more toxic.
  • an experiment was carried out according to examples 1 p 2 on similar groups of rats at a dose of UOOOmg / kg body weight (10% succinic acid solution). Not a single animal has died. From the same experiment it can be seen that the toxicological characteristics obtained in Examples 4-10 of the UC are identical to the “natural” acid, Example 12. Investigation of the genotoxicity of the obtained samples and determination of their radioprotective properties.
  • Genotoxicity was assessed on a smear of cells of the erythroid row isolated from the bone marrow of the hind limb of the animal, by the presence of an optically dense formation in the cell - “micronucleus” - micronucleus test. For one animal, 2000 cells were analyzed, the ratio of polychromic and normochromic red blood cells was determined by counting 200 cells.
  • the results are shown in Table 3.
  • the mutation rate is 5.0 + 1.0 micronuclei per 2000 cells. As can be seen from table 3, all samples do not have genotoxicity.
  • the number of mutations 16 + 2 is a critical value for the development of irreversible effects of radiation.
  • the samples in examples 1 and 2 do not have a pronounced radioprotective effect, the sample in example 3 is borderline, while the samples in examples 4-10 and the sample of natural) UC take animals to a safe area, i.e. are pronounced radioprotectors, ensuring the survival of the animal without therapy.
  • Example 13 The study of adaptogenic properties (test on bgy logical activity).
  • stress triad in expanded form:
  • First group animals 10 minutes before immobilization were injected with a probe into the stomach in a volume of 1.5 ml of a 1% starch solution. From 2– ⁇ to the 12th group, animals were injected with a probe into the stomach in a volume of 1.5 ml l ° o in 10 minutes before immobilization with a solution of succinic acid obtained in Examples 1–10 and a “natural” UC. Blood was taken from each tail from each animal at the time of immobilization and after 6 hours to calculate the leukocyte formula using a stained smear. The results are shown in table 5.
  • the cardiotonic activity of the obtained samples was determined by the dynamics of changes in the functional class of heart failure.
  • a specific activity scale is designed to accurately determine the functional class according to indicators of daily life activity.
  • the definition of the functional class patients with heart failure in accordance with the criteria of the New York Heart Association (New Yogk Hert Associathiop - NYHA) are often inaccurate, as the terms “daily physical exercise” are widely used for this purpose. “The download below everyday) are not specific.
  • the authors calculated the metabolic cost scale of each type of vital activity (see Gouldmap L., Nashimoto V., Sokk F. et al.
  • the questionnaire is intended to be filled in by medical personnel interviewing the patient being examined.
  • the functional class of the patient is calculated in accordance with the total criteria of a special activity scale (table N ° 6).
  • a special activity scale (table N ° 6).
  • groups of patients were formed in such a way that the number of people with the same functional class was evenly distributed among the groups. Patients were not allowed to test on the following indicators: IV functional class, the presence of less than 60 days before the examination of a heart attack or stroke, cancer.
  • the division into groups of 20 people was carried out using a random number generator.
  • each subject took 100 mg of the drug twice a day in the morning and in the afternoon after eating for three months against the background of standard drug therapy prescribed by the doctor.
  • One group took a placebo (glucose), the rest - succinic acid preparations according to examples 1-10 and "primary" succinic acid.
  • neither the subjects, nor the doctors and medical staff, nor the test director knew whether they were using the drug or placebo, because and the samples and placebo were encrypted before being transferred to the clinic at random.
  • the functional class of patients was determined before the start of the tests during the formation of groups, after 30 days of admission, after 60 days of admission and after 90 days of admission. Assessment was carried out on a scale of activity (table .Nb 7).

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Catalysts (AREA)

Abstract

Усовершенствованный способ получения янтарной кислоты со стабильно высокой биологической активностью, в том числе адаптогенностью, включающий в себя стадии получения модифицированного палладий-содержащего катализатора, с использованием кислоты и жидкофазного гидрирования ненасыщенных кислотных соединений на полученном модифицированном катализаторе при повышенных температуре и давлении с отделением катализатора после гидрирования и выделением полученной янтарной кислоты, при этом для модификации используют готовый палладий-содержащий катализатор, нанесенный на носитель, в бескислородной атмосфере, и модификацию проводят в водной среде янтарной или малеиновой, или фумаровой кислоте и /или их смеси при масс, соотношении Pd24 ÷ кислота = 1÷1-100, после чего осуществляют на полученном катализаторе жидкофазное гидрирование ненасыщенных кислотных соединений, выбранных из малеиновой, фумаровой кислоты или их ангидридов или их смесей, с выделением получаемой после гидрирования янтарной кислоты кристаллизацией из водного раствора, содержащего 0,001-0,01 мacc.% затравки - янтарной кислоты с высокими биологическими свойствами.

Description

Cn осоо получения янтарной кислоты
Изобретение относится к усовершенствованному способу получения биологически активной янтарной кислоты tЯК), которая широко используется в медицине, пищевой и косметической промышленности .
Янгарная кислота является одним из незаменимых метаболитов энергетического цикла всех живых организмов, как растений, так и животных. В организмах животных она также обеспечивает ряд сигнальных функций во взаимодействии с орфановыми рецепторами, Лечебные свойства ЯК известны с пятнадцатого века и впервые описаны в фармакопее армянского врача Амасиаци в 1493 г. (см. Амасиаци А. Ненужное для неучей (средневековый эшщклопе диче скип словарь), httр : //libbox.itгfo/book_reading, 91900.html )
[I]- Янтарная кислота обладает целым рядом свойств
<< каталитическими образом способствует активации энергетического обмена, обладает кардиотоническим, радиопротекторным, слабым диуретическим действием.
Однако, как показали исследования, образцы «пpиpoднoй» (полученной из янтаря) и синтезированной различными методами ЯК не идентичны по биологической активности. Синтетические образцы обладают, в основном, выраженными Диуретическими и, в некоторой степени, энерmзирующими свойств ами. Нами отработан ряд тестов, позволяющих достоверно определять биологическую активность янтарной кислоты, в том числе такие, которые позволяют осуществлять технологический контроль получаемой продукции. При этом исследованы более 150 образцов, полученных самыми разными способами. Из-за отсутствия физико-химических методов, позволяющих выявить отличия в образцах, были разработаны и применены биологические тесты, достоверно определяющие биологическую активность .
Известен ряд способов получения янтарной кислоты из различных ЕИДОВ исходного сырья, прежде всего, из малеинового ангидрида, малеиновой кислоты, бутадиеновых каучуков, фурфурола и т.д., при этом авторами изобретений степень биологической активности ЯК, как правило, не декларируется.
Известные способы получения ЯК, "Проявляющей различные виды биологической активности)) (см. патенты RU 223639 S [2] и RU 2098804 [3]). заключаются в окислении фурфурола пероксидом водорода с добавлением щелочного реагента при переменном рН среды (от <4 до 7), с последующей нейтрализацией, упариванием и перекристаллизацией из ацетона и воды для очистки продукта от примесей малеиновой, фумаровой и щавелевой кислот. При очевидной технологической сложности синтеза (много стадийность и использование пожароопасного органического растворителя, требующего особых условий эксплуатации) и необходимости дополнительной стадии перекристаллизации, достигнуть заявленного авторами выхода целевого продукта (90%) практически невозможно. Биологическая активность ЯК, полученной таким способом, ограничена - эта кислота, согласно проведенным тестам, является, в основном, диуретиком. Помимо этого, способ не позволяет получать продукт, отвечающий требованиям по безопасности пищевой iгродукции, так как содержит большое количество вредных примесей.
Известны также многочисленные способы получения ЯК жидкофазным каталитическим восстановлением малеинового ангидрида (малеиновой кислоты) при повышенных температуре и давлении.
Катализаторами в известных способах являются металлы VIII группы периодической системы (никель, рутений, палладий, родий, платм на) в виде скелетного контакта или нанесенных на различные носители t уголь активированный, окись алюминия, кизельгур, асбест и
ДP- ).
Общим недостатком указанных способов является использование контактов, имеющих высокое содержание драгметаллов и низкая производительность в расчете на единицу веса активного компонента.
Данных о биологической активности полученной по указанным способам ЯК в патентах не приводится.
В патенте RU Ne 2129540 [4] гидрирование малеинового ангидрида или малеиновой кислоты в воде проводят в присутствии палладий-содержащего катализатора на носителе, при этом в качестве катализатора используют палладий-никелевый или палладий-железный контакт. Указанный способ позволяет получать ЯК с высоким выходом (до 99,7%), высокой производительностью и хорошим качеством, а именно, с температурой плавления 186,8-187 градусов Цельсия (далее по тексту градусы Цельсия обозначаются как 0C), с содержанием основного вещества до 99;8%; при отсутствии примесей - малеиновой и фумаровой кислот.
Согласно нашим тестам недостатком указанного способа следует считать отличие биологической активности получаемой в результате гидрирования высокочистой ЯК от биологической активности природной ЯК, полученной в результате пиролиза янтарной крошки. Наиболее близким способом к предлагаемому изобретению является способ получения высокочпстон биологически активной ЯК гидрированием малеiшового ангидрида (маленновон кислоты, фумаровой кислоты) в водной среде на гетерогенных катализаторах, активной фазой которых являются комплексные сое дине ния палладия и железа с янтарной, малеиновой или фумаровой кислотами (или их щелочными солями). После гидрирования отделяют катализатор и из раствора выделяют янтарную кислоту охлаждением, вымораживанием или упаркой катализата. При этом способ включает предварительную стадию приготовления модифицированного комплексного палладий- железного катализатора на котором затем проводят гидрирование (см. патент RU 2237056) [5]. Способ приготовления катализатора в виде комплекса включает несколько последовательных стадий смешения его компонентов при соблюдении определенных условий. Получаемые комплексы наносятся на подложку в момент их образования. Янтарная кислота, полученная таким способом, обладает сходными с природной ЯК биологическими свойствами.
Недостатком упомянутого способа является необходимость отдельной предварительной многостадийной процедуры синтеза катализатора:
- приготовление трех-четырех исходных растворов;
- суспендирование носителей;
- последовательная дозировка исходных растворов с контролем рН-среды; - выдержка при определенных температурах после дозировки каждого исходного раствора;
- фильтрация суспензии катализатора;
- промывка катализатора на фильтре; - сушка катализатора до определенной остаточной влажности.
В результате применения этой сложной процедуры возникают проблемы при переходе с лабораторной на промышленную установку, а также нестабильность биологической активности ЯК (см. тестирование по методике, описанной в примере
13 данной заявки ), полученной на различного типа установках.
Биологически активными оказались менее 60% образцов ЯК, синтезированных на лабораторных установках, в то время как протестированные промышленные образцы, полученные на использованном согласно изобретению катализаторе, имели сравнимые показатели биологической активности только в 12% партий.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в создании усовершенствованного способа получения высокочистой янтарной кислоты, стабильно обладающей высокой биологической активностью, в том числе высокой адаптогенностью.
Технический результат достигается за счет разработки нового способа получения янтарной кислоты со стабильно высокой биологической активностью, в том числе адаптогенностью, включающего в себя стадии получения модифицированного палладий- со держащего катализатора с использованием кислоты и жидкофазного гидрирования ненасыщенных кислотных соединений на полученном модифицированном катализаторе при повышенных температуре и давлении с отделением катализатора после гидрирования и выделением полученной янтарной кислоты, при этом отличительные признаки заявляемого способа состоят в том, что модификации подвергают готовый палладий-со держащий катализатор, нанесенный на носитель, в бескислородной атмосфере, в водной среде янтарной или малеиновой, или фjзiаровой кислот и/или их смеси при масс соотношении PcT+ ÷ кислота = l÷ 1-100 и затем проводят жидкофазное гидрирование ненасыщенных кислотных соединений, выбранных из малеиновой, фумаровой кислоты или их ангидридов или их смесей, а выделение получаемого после гидрирования продета осуществляют кристаллизацией из водного раствора, содержащего 0,001-0,01 масс? 6 затравки - янтарной кислоты с высокими биологическими свойствами.
Получаемая кислота имеет высокую степень чистоты (99%), не отличается по качеств)' от используемой затравки и не содержит примесей фумаровой и ыаленновой кислоты, а также имеет стабильную высокую биологическую активность. Способ по технологии и осуществлению проще, чем ранее известный ближайший аналог и позволяет использовать обширную номенклатуру известных палладий- со держащих катализаторов на носителе. При этом исключается многостадийный и трудоемкий синтез комплексного катализатора с его предварительным выделением. Использование в процессе кристаллизации продукта «зaтρaвки» в виде янтарной кислоты с высокой биологической активностью позволяет улучшить качество и биологическую стабильность получаемой янтарной кислоты.
Как показали проведенные эксперименты, катализатор, активный и селективный в гидрировании малеинового ангидрида (малеиновой и фумаровой кислот или их смеси) до ЯК, сравнимой по биологической активности с <шρиpoднoй» и даже превосходящей ее, может быть получен предварительным (непосредственно перед гидрированием) модифицированием малеиновой, фумаровой или янтарной кислотами любого палладий-еодержащего катализатора на носителе. M о ди фицир ОБ ани б и а лл а д лев ы к кат аzиз атор о в указанными кислотами проводят в водных растворах этих кислот в бескислородной атмосфере. При этом концентрация суспензии катализатора в водном растворе варьируется в пределах 0, 1-4, 5% ыасс, а соотношение палладий/кислота выдерживается в пределах l÷ 1-400. Можно использовать и более высокое соотношение кислота/палладий, однако при этом не только не достигается дополнительный положительный эффект, но и возникает вероятность перехода палладия с поверхности катализатора в раствор, что может привести к снижению активности катализатора. Концентрация палладия на носителе по данному изобретению варьировалась в пределах 0Л-
1,0% масс, а концентрация раствора кислот-модификаторов, в зависимости от концентрации палладия на носителе и выбранного соотношения палладий/кислота, в пределах 0.01 -0, 7%. Продолжительность модифицирования 0,5-2 часа
Процесс модифицирования предпочтительно проводить непосредственно в реакторе гидрирования в бескислородной атмосфере при постоянном перемешивании в широком интервале температур от 5 до 70° С (оптимальный рекомендуемый диапазон 15- 4O0C).
После окончания процесса модифицирования в реактор загружают малеиновый ангидрид (малеиновую или фумаровую кислоты), продувают систему водородом, устанавливают необходимые температурный режим и давление водорода. Процесс ведз'т при температуре 100- 1200C и давлении не выше 25 атм. Более высокое давление не дает положительного дополнительного эффекта. После окончания поглощения водорода и выдержки катализатор отделяют «гopячeй» фильтрацией, а катализ ат (водный раствор янтарной кислоты) с температурой SO-IOO0C подают в обогреваемый кристаллизатор, куда предварительно вносится так называемая '-<зaтpaвкa» - эталонная кислота природного происхождения или идентичная ей по биологической активности. Кристаллизация проводится при регулируемом снижении температуры: сначала со скоростью 3-4°C в минуту (до 45°C ). далее 1-20C в минуту (до 25 'C) и на завершающей стадии 0,3-0,50C в минуту (до 5- 15° С). В результате образу ется мелкокристаллический осадок янтарной кислоты, который отфильтровывается и подвергается сушке при температуре не выше 1000C.
Полученная в результате (после отделения маточника и сушки) янтарная кислота имеет высокую степень чистоты (содержание основного вещества не менее 99,0%. малеиновая и фумаровая кислоты отсутствуют) и не отличается по своей биологической активности от кислоты, примененной в качестве «зaтpaвки» при кристаллизации.
Преимущества предлагаемого способа очевидны, т.к. при его воплощении значительно упрощается и удешевляется весь технологический процесс получения янтарной кислоты (включая синтез катализатора), при этом полученная кислота, как показало тестирование, отличается высокой биологической активностью, не уступающей прототипу, а в отдельных случаях, его превосходящей. Отличительной особенностью ЯК, полученной по предлагаемому способ}?, является стабильность параметров ее биологической активности, которые не зависят от масштабов производства и подтверждены тестированием образцов в соответствии с методикой по примеру 13. Тестирование биологической активности полученных по этой схеме образцов показало их соответствие требованиям в 92% случаев независимо от их получения в условиях лабораторных или промышленных установок.
Предлагаемый способ позволяет, кроме того, использовать при практическом: осуществлении процесса обширную номенклатуру известных Е настоящее время катализаторов на носителе, активной фазой которых является палладий.
Практическая реализация заявляемого изобретения иллюстрируется нижеследующими примерами 1 - 14 и прилагаемыми Таблицами 1 - S.. В примерах 1. 2 и 3 воспроизведены данные по аналогам и прототип)'. Примеры 4- 10 иллюстрируют заявляемое изобретение. В качестве контроля использована «пρиpoднaя» ЯК. полученная пиролизом янтарной крошки. Примеры 11- 14 соответствуют тестам на биологическую активность полученных по примерам 1-10 образцов в сравнении с <шρиpoднoй» ЯК. Пример 1 (способ по [2]). Процесс получения янтарной кислоты окислением фурфурола проводят на лабораторной установке (колба с мешалкой и обратным холодильником, погруженная в кипящую водяную баню). В колбу помещают 200 см3 30%-нoй перекиси водорода. 250 cмJ воды и 48 г фурфурола. При перемешивании добавляют концентрированный раствор гидроокиси натрия таким образом, чтобы в течение 45 мин рН среды поддерживалось на уровне 2-4. после чего рН доводят до 7.
После разложения остаточных пероксидов к реакционной массе добавляют 100 cмJ 30%-нoй соляной кислоты и упаривают почти досуха. Остаток последовательно перекристаллизовывают из ацетона и воды. Получают янтарную кислоту с температурой плавления 182,5- 183,5°C и с выходом 74% теоретического. Пример 2 (способ [4]) Гидрирование малеиновой кислоты ведз'т на з'становке периодического действия, состоящей из реактора гидрирования, обогреваемого фильтра для отделения катализатора, кристаллизатора с рубашкой для охлаждения и мешалкой, фильтра для выделения янтарной кислоты (или ее солей) и сушилки с подогревом паром. В реактор загружают 12 л воды. 4 кг малеиновой кислоты и 32 г никелъ-пашiадиевøго катализатора (содержание палладия 0,2% масс, никеля 0,2% масс). Процесс гидрирования ведзт при постоянном давлении водорода 10 атм в пошrгермическом режиме (Tнaч - 25-30°C. T10n - 95-105°C). Поглощение водорода заканчивается за 100 мин. После продувки реактора азотом п отделения катализатора на обогреваемом фильтре в результате кристаллизации и фильтрации, выделяют янтарную кислоту с выходом (после трех циклов) 99,5% от теоретического; Tпл янтарной кислоты -186.0- 186, 5°C. Пример 3 (способ - прототип Г5] j
Воспроизведение примера 2A.
Пример 2 А. Приготовление катализатора с расчетным содержанием палладия 0,1% и железа 0,1% (в расчете на массу сухого носителя - угля ОУ-Б) на установке, включающей четыре емкости с мешалками для приготовления исходных растворов, реактор синтеза и мешочный фильтр.
Раствор (1 N) гидроокиси натрия готовят в емкости V=5 дм3, загружая 3,25 дм3 дистиллированной воды и 135,5 г гидроокиси натрия (содержание основного вещества 99,0%). Хлорид железа (FeCl3 .6H2O) в количестве 18,4 г растворяют при перемешивании в 0,9 дм дистиллированной воды в емкости V=2 дмJ .
В емкости (V= 0,5 дмJ) с регулируемым обогревом, снабженной мешалкой и обратным холодильником, готовят раствор комплексной соли палладия (хлорпднъш комплекс палладия), последовательно, при постоянном перемешивании загружая: 2 дм дистиллированной воды; 0,5 см концентрированной соляной кислоты; 2.2 г хлорида натрия и (порциями) 6,78 г хлорида палладия (содержание Pd - 59% масс).
Реакционную массу нагревают до 60-700C и перемешивают до получения раствора хлоридного комплекса палладия, который затем после охлаждения до 30-400C гидролизуют, медленно дозируя в раствор -55мл IN раствора гидроокиси натрия с последующей двухчасовой выдержкой.
В реактор синтеза загружают 40 дмJ воды, 37,0 г малеинового ангидрида или 43,8 г малеиновой кислоты при включенной мешалке, затем 4 кг (в расчете на сухой) осветляющего угля березового марки угля ОУ-Б, подают в рубашку реактора пар и нагревают реакционную массу до 50±2°C. В подогретую суспензию дозируют раствор гидроокиси натрия до рН 9, затем (медленно) раствор комплекса палладия и 0,9 дмJ раствора хлорида железа поддерживая рН суспензии на уровне 9-9,5. По окончании дозировки всех компонентов проводят выдержку в течение 0,5 часа и охлаждают суспензию до 30-400C, после чего азотом (0,2-0,3 МПа) передавливают через мешочный фильтр, где катализатор отделяется от фильтрата направляемого в сборник.
Катализатор на фильтре промывают порциями 120 дм3 воды, промывную воду также направляют в сборник. Промытый катализатор сушат на фильтре азотом до остаточной влажности -55% и выгружают катализатор в виде влажной пасты в количестве -3,8 кг (в пересчете на сухой).
По данным атомно- адсорбционного спектр о фотометрического анεлиза катализатор в расчете на сухую массу содержит 0, 11% палладия и 0, 15% железа.
Гидрирование мεлеiшовсто ангидрида в присутствии полученного палладий-железного катализатора проводят на опытной установке периодического действия, включающего суспензатор и реактор гидрирования емкостью 100 дм ' каждый, обогреваемый друк-фильтр для отделения катализатора, кристаллизатор и нутч- фильтр для отделения продукта.
Процесс осуществляют при температуре 40- 1050C. избыточном давлении 15 атм „ при этом получена янтарная кислота (после отделения катализатора горячей фильтрацией и кристаллизации продукта охлаждением катализ ата гидрирования от 90 до 10°C) с выходом 80% от теоретического - по I циклу п 95,8% от теоретического - по III циклу рецикла маточника. Качественные показатели янтарной кислоты высокие (Tпл = 187-187, 5°C содержание основного вещества 99.6%, непредельные кислоты — отсутствуют). Далее представлены примеры, иллюстрирующие заявляемое изобретение. Для «зaтpaвки» при кристаллизации используется ЯК с предварительно проверенной биологической активностью, при этом применяется ЯК, полученная как синтетическим способом, так и <шρиρoднaя». Тестируют ЯК на крысах, прошедших иммобилизационный стресс. По мазку крови, отобранному из хвостовой вены животного, определяют лимфощrгарный состав крови (до и после стресса). Если доля эозинофилов составит более 0, 5%, а лучше 1% (25% и 50% от исходного фона соответственно) - кислота пригодна для использования в процессе кристаллизации. Детальное описание метода тестирования приведено в примере 13. Пример 4 Модифицирование катализатора проводят в емкости с мешалкой (V=O, 3 дм3), куда загружают 100 мл 0,5%-нoгo раствора маленновоή кислоты. Из аппарата воздух вытесняют аргоном, затем вносят навеску (4,6 г) катализатора НПФ- L активной фазой которого (согласно спецификации) является палладий в виде полихлоргидроксокомплексов, промотированных соединениями никеля и железа. Содержание палладия - 0,2% масс, никеля -0,2% масс, железа - 0,07% масс. Суспензию катализатора в водном растворе малеиновоή кислоты перемешивают при комнатной температуре (-200C) в течение 1 часа. Затем суспензию модифицированного катализатора давлением аргона переводят в автоклав емкостью 1, 0 дм3 , куда предварительно загружают 600 мл раствора малеиновой кислоты (концентрация кислоты 27, 7% масс ). После продувки реактора (последовательно аргоном и водородом) он герметизируется, в его рубашку подают теплоноситель. Давление водорода в аппарате повышают до 20 атм и включают перемешивание. Гидрирование (поглощение водорода) начинается практически сразу после включения мешалки. Процесс ведут при температуре <90-100°C, после завершения поглощения водорода и выдержки при 90- 1000C суспензию катализатора в растворе янтарной кислоты через обогреваемый фильтр передавливают в кристаллизатор (температура >S0°C\ куда вводится 0,5 мл раствора, содержащего 0,07 г янтарной кислоты, выделенной из природного янтаря. Кристаллизацию янтарной кислоты из раствора ведут с регулируемой скоростью охлаждения: 1 стадия (до 45°C) со скоростью 3°C в минуту;
2 стадия (до 25°C) со скоростью 1°C в минуту;
3 стадия (до 100C) со скоростью 0,30C в минуту.
После отделения от маточника выпавшего осадка и его сушки выход янтарной кислоты составил 81,2% теоретического. Содержание основного вещества в продукте 99,95% масс, непредельные соединения (малеиноъая, фумаровая кислоты) отсутствуют.
После трехкратного возврата маточника в рецикл выход янтарной кислоты аналогичного качества увеличивается до 99.5% теоретического . Пример 5
В с успею агоре готовится раствор 20 кг малеiшового ангидрида в 40 л воды, В реактор (V = 100 дм3 ) загружают 20 л воды, подкисленной янтарной кислотой. Концентрация кислоты в воде 0,012% масс. Реактор продувают азотом, затем заполняют азото-во дородной смесью ( l÷ l об.), после чего загружают катализатор марки ПOУБ-08 (300 г в расчете на сух^то массу), активной фазой которого, согласно спецификации. является палладий в восстановленной форме. Суспензию катализатора в разбавленном водном растворе янтарной кислоты выдерживают при постоянном перемешивании в течение 30-40 мин. при этом температуру реактора постепенно повышают до 40-500C.
После завершения модифицирования катализатора из суспензатора в реактор азотом передавливают водный раствор малеинового ангидрида (малеиновой кислоты). Азото-во дородную смесь в реакторе вытесняют водородом и ведут гидрирование при давлении 10- 15 атм в политермическом режиме (за счет тепла реакции температзφа повышается до 1200C). После завершения поглощения водорода и часовой выдержки реакционной массы в тех же условиях (перемешивание, давление водорода 10-15 атм, 100-1200C) водород из реактора вытесняют азотом, катализат передавливают через друк-фильтр в обогреваемый (90- 100°C) кристаллизатор, куда затем вносят 20 мл раствора iсзатравкiгw ( синтетическую янтарную кислоту, полученную по примеру 4, с подтвержденной биологической активностью). Концентрация «зaтρaвxи» в общей массе составляет 0.001%. Процесс кристаллизации ведут, снижая температуру с переменной скоростью. Скорость охлаждения регулируется таким образом, чтобы через 13- 17 мин из раствора выпала примерно половина янтарной кислоты. Затем скорость охлаждения снижается так чтобы через 35-40 мин от начала охлаждения закристаллизовалось около 70% всей янтарной кислоты. Охлаждение ведут до 8- 100C (весь процесс кристаллизации завершается через 1,5-2 часа), полученный осадок отделяют на нутч- фильтре от маточника, который возвращают в рецикл. Маточник используют как для приготовления исходного раствора малеинового ангидрида, так и для модифицирования «cвeжeгo» катализатора. Кислот)? сушат в полочной c^iniDiKe при температуре 90-950C. Полученная после сушки с выходом около 80% от теоретического янтарная кислота имеет высокие качественные показатели: содержание основного вещества 100%, температура плавления 187- 187,5°C, отсутствуют непредельные кислоты. После трехкратного рецикла маточника выход янтарной кислоты достигает 99, 7% теоретического . Пример б
Процедуру модифицирования осуществляют в реакторе гадрирования (V=630 дат) с перемешивающим устройством (2500 об/мин). В аппарат загружают 240 л воды, 210 г янтарной кислоты, 210 г малеiшовой кислоты и 4200 г (на сухую массу) катализатора ПФ, активной фазой которого (согласно спецификации) являются полихлоргидроксокомплексы палладия, промотированные солями железа. Из аппарата воздух вытесняют азотом, который затем замещают водородом. После герметизации реактора его содержимое нагревают до 300C и проводят модифицирование катализатора в течение 1.5 часов при постоянном перемешивании.
После завершения модифицирования в реактор передавливают азотом подогретый до 50° С раствор 120 кг малеинового ангидрида (малеиновой кислоты) в 120 л воды. Азото-водородную смесь из реактора вытесняют водородом и создают давление 20 атм . включают перемешивание и обогрев. Гидрирование проходит при 15-20 атм и температуре 50- 1100C в течение 40 мин. После получасовой выдержки и продувки азотом содержимое реактора передавливают через обогреваемый друк-фильтр для отделения катализатора. В кристаллизатор в качестве «зaтpaвки» вносится раствор янтарной кислоты, полученный по примеру 4, Концентрация «зaтpaвки» в общей массе 0,01%, Кристаллизацию ведут с регулируемой скоростью охлаждения
(см. пример 5).
Получена янтарная кислота с содержанием основного вещества 99,92 % (непредельные соединения отсутствуют). Выход (после трех циклов возврата маточников) 99,2% теоретического. Пример 7
Для гидрирования малеинового ангидрида используют катализатор «пaллaдий на Cибyнитe», полученный нанесением гидроксокомплексов палладия на пироуглерод. Катализатор модифицирован кислотами: малеиновой и фумаровой в соотношении 5: 1. Модифицирование проводят в аппарате с мешалкой и рубашкой V=O, 75 дм3 , куда загружают 300 мл воды, 0,05 г смеси кислот и 5, 1 г катализатора. Аппарат продувают азото-аргоновой смесью ( 10: 1 об). В рубашку аппарата подают захоложенную воду с температурой 5°C и в течешiе 2 часов при постоянном перемешивании ведут модифицирование.
В автоклав емкостью 1 дьг' загружают 300 мл воды и 2o5 г малеинового ангидрида, после чего аппарат продувают азотом н подогревают при перемешивании его содержимое до 30-4G0C до полного растворения, В аппарат передавливают азотом суспензию модифицированного катализатора и ведут гидрирование при температуре 90 °C и давлении водорода 10 атм .
После отделения катализатора горячей фильтрацией раствор янтарной кислоты поступает в кристаллизатор, куда вносят раствор <лзaтpaEки» - смеси янтарной кислоты, полученной по примеру 6 (50%), и «пpиpoднoй» янтарной кислоты (50%). Концентрация «зaтpaвки» в общей массе 0; 008% масс. Кристаллизацию ведут при ступенчатом охлаждении (см. пример 5). Получена янтарная кислота с выходом 98,8% теоретического
(после трехкратного рецикла маточника) и отличными качественными показателями (содержание основного вещества 100%, Tпл==187,9-188°C).
Пример 8
Модифицирование катализатора Еsсаt- lб (0,5% палладия в восстановленной форме на кокосовом угле) проводят непосредственно в реакторе гидрирования (V=I дм:' ).
Катализатор (7,5 г) предварительно измельчают до размера частиц основной фракции в пределах 63- 100 мкм и помещают в автоклав, куда загружают 650 мл 0,06%-нoгo водного раствора янтарной кислоты. Реактор продувают азотом и заполняют азото- во дородной смесью ( 1:5 об), включают перемешивание, поднимают температуру до 400C и выдерживают суспензию катализатора в этих условиях в течение 1 часа. После завершения модифицирования азото-водороднvю сыесь вытесняют азотом, загружают 250 г малепновоп кислоты, герметизируют аппарат, продувают его водородом и ведут гидрирование при давлении водорода 15 атм и температуре 100е С. По окончании поглощения водорода катализ ат выдерживают около часа в условиях гидрирования, затем, заменив водород на азот и отделив катализатор на обогреваемом фильтре, направляют полученный раствор в подогретый до 90°C кристаллизатор.
Кристаллизация янтарной кислоты ведется так, как описано в примере 5. В качестве «зaтpaвки» использована янтарная кислота, полученная пиролизом янтарной крошки. Концентрация «зaтρaвки» в общей массе -0,001%.
В описанных условиях с выходами 80,2% теоретического (I цикл); 90,8% теоретического (II цикл J; 99, 1% теоретического (III цикл) получена янтарная кислота с содержанием основного вещества не менее 99.9% теоретического, посторонние примеси отсутствуют. Пример 9
Эксперимент проводят, как описано в примере 7, только для модифшщрования использован катализатор палладий (в окисной форме) на силикагеле (марка ACM, дробленый, размер основной фракции 60- 100 мкм). При 250C в течение 1,5 часов 9,2 г катализатора перемешивают в 300 мл водного раствора янтарной кислоты (концентрация янтарной кислоты 0.03% масс) в атмосфере смеси азота и водорода (5÷1 об). Все дальнейшие процедуры осуществляют точно по примеру 7, концентрация «зaтpaвки» в процессе кристаллизации в общей массе 0,001%. Янтарная кислота, использованная для «зaтρaвки», синтетическая с подтвержденной биологической активностью. Выход янтарной кислоты от первого к третьему цикл)? возврата маточника возрастает до 98.9% теоретического, при этом качество кислоты остается высоким (отсутствуют непредельные кислоты, содержание ОСНОВРIОIО вещества не менее 99,9% масс). Пример 10
Использована установка, описанная в примере 4, модифицированию подвергают катализатор никель -палладн ев ый на волокнистом асбесте (палладий в гндроокисной форме, промотированный солью никеля). Условия моддфiщирования: 100 мл воды; L035 г катализатора; 1 г фумаровой кислоты, перемешивание при 70 °C в атмосфер е г е лиев о -водородной смеси ( 1÷:5 об).
Модифицированный катализатор передавливают в реактор, продутый гелием, где предварительно суспендировано 207, 1 г фумаровой кислоты в 600 мл воды, подогретой до 80 1C. Реактор заполняют водородом и ведут гидрирование при давлении 25 атм и температуре 1200C.
Условия кристаллизации соответствуют примеру 4. В полученном продукте отсутствуют малеиновая и фумаровая кислоты, содержание основного вещества 99,7% масс. Выход янтарной кислоты 99, 1% теоретического (после III рецикла маточника).
Дополнительная информация к примерам 4-10 приведена в таблице 1.
Пример 11. Исследование острой токсичности полученных образцов. Исследование проводили на самках белых крыс массой 220-
250г. В течение 14 дней им вводили зондом в желудок 5% раствор янтарной кислоты 1 раз в день по 2,2-2,5 мл в дозе 5000 мг/кг массы тела. Группа животных по каждому примеру -10 штук. Результаты приведены в таблице 2:
Как видно из таблицы 2 первые два образпа не обладают летальным действием и относятся к малоопасным веществам. Третий образец является более токсичным. Для дополнительной проверки был сделан эксперимент по примерам 1 п 2 на аналогичных группах крыс при дозе ЮОООмг/кг массы тела (10% раствор янтарной кислоты). Ни одно животное не погибло. Из этого же эксперимента видно, что токсикологические характеристики полученной по примерам 4-10 ЯК идентичны «пpиpoднoй» кислоте, Пример 12. Исследование генотоксичности подученных образцов и определение их радиопротекторных свойств.
Анализ генотоксичности выполнен на лабораторных белых мышах
- молодых самцах ( 18-20 г), по 6 животных в группе. Эксперимент проводился в две стадии: сначала определяли собственно мутагенные свойства образцов янтарной кислоты. Для этого контрольную группу животных поили водой. В каждой экспериментальной группе к стандартной пище добавляли янтарную кислоту по примерам 1-10 и
<шpиpoднyю» ЯК из расчета 20мг/кг массы тела. На следующей стадии исследовали радиопротекторные свойства образцов. Для этого все группы животных облучали дозой l.ЗГр и в течение 48 часов к стандартной пище добавляли янтарную кислоту по примерам 1- 10 и
«пpиρoднyю» ЯК из расчета 20мг/кг массы тела. В качестве позитивного контроля брали одну из групп животных через 48 часов после облучения. Эта контрольная группа янтарную кислоту не получала.
Генотоксичность оценивали на мазке клеток эритроидного ряда, выделенных из костного мозга задней конечности животного, по наличию в клетке оптически плотного образования - «микpoядpa» — микроядерный тест. Для одного животного анализировалось 2000 клеток, отношение полихромных и нормохромных эритроцитов определялось при подсчете 200 клеток.
Результаты приведены в таблице 3 Нормой мутации является 5.0+1.0 микроядер на 2000 клеток. Как видно iс таблицы 3 все образцы не обладают генотокснчностью.
Число мутаций 16+2 является критической величиной для развития необратм мых последствий облучения. Как видно из таблицы 4 образцы по примерам 1 и 2 не обладают выраженным радиопротекторным действием, образец по примеру 3 является пограничным, тогда как образцы по примерам 4- 10 и образец ^природного) ЯК выводят животных в безопасную зону, т.е. являются выраженными радиопротекторами, обеспечивающими выживание животного без терапии. Пример 13. Исследование адаптогенных свойств (тест на бгю логическую активность).
Исследовали влияние 6 часового иммобилизационного стресса на крыс -самцов линии Wistаr массой 200-250 г. Животных привязывали за лапки, лежа на спине. О развитии острого стресса свидетельствовало характерное изменение формулы периферической крови (кровь брали из хвостовой вены в объеме 10 мкл для подсчета форменных элементов и 20 мкл для мазка с последующей окраской по Романовскому -Г имза). Содержание лейкоцитов в мкл повышалось с 5600±600 до 8800±800 (п=8, p<0.02), причем доля нейтрофильных с егменто -ядерных лейкоцитов возрастала с 24+4% до 37±5%, а содержание лимфоцитов, напротив значимо снижалось с 75+7 до 61+6, полностью исчезали из кровотока эозинофильноокрашенные лейкоциты. При забое у животных стрессовой группы через 6 часов иммобилизации обнаруживалась стрессовая триада в развернутом виде:
- } всех без исключения крыс наблюдались множественные кровоизлияния в слизистой желудка к тонкой кишке, - снижение веса тимуса с 400+50 мг (у контрольных животных) до 100+50 мг (у животных, перенесших стресс), увеличение массы надпочечников с 16+3 мг до 25+4 мг.
Параллельно на полученной модели острого стресса провели испытание полученных по примерам 1- 10 и «пpиρoднoгo» образцов янтарной кислоты, без забоя животных, ориентируясь на характерные изменения формулы периферической крови. Было исследовано 12 групп животных по 9 крыс-самцов линии Wistаr массой
200-250 г. Первая группа: животным за 10 минут до иммобилизации вводили зондом в желудок в объеме 1,5 мл 1% раствор крахмала. Со 2- ή по 12-ю группы животным за 10 минут до иммобилизации вводили зондом в желудок в объеме 1.5 мл l°o раствор янтарной кислоты, полученной по примерам 1- 10 и «пpиpoднyю» ЯК. У каждого животного брали кровь из хвоста в момент иммобилизации и через б часов для подсчета лейкоцитарной формулы по окрашенному мазку. Результаты приведены в таблице 5.
Как видно из таблицы Ks 5 образцы янтарной кислоты по примерам 1 и 2 обладают слабовыраженными адаптогенными свойствами, образец по примеру 3 является пограничным, тогда как образцы по примерам 4- 10 и образец «пpиpo днoй» кислоты являются выраженными адаптогенами, почти полностью компенсирующими последствия иммобилизационного стресса. Именно этот тест оказался наиболее информативен, дешев и воспроизводим для обеспечения контроля качества техно логического процесса. Полученная кислота является относительно годной в том случае, когда доля эозинофилев составляет не менее 0,5% ( 25° - от исходного фона). Реально для < зaтρaвки» процесса кристаллизации применяют партии ЯК, обеспечивающих сохранение доли эозикофилов на уровне 1,0%" ( 50% от исходного фона) и более. Этим же методом проводят разбраковку наработанных образцов и промышленных партий янтарной кислоты. При переходе на животных, получаемых из другого питомника или на другую линию крыс, проводится контрольный опыт иммобилизационного стресса с забоем животных для того, чтобы удостовериться, что выбранные условия обеспечивают появление стрессовой картины периферической крови и классическое разворачивание стрессовой триады: лейокцитоз с лимфопенией. регресс тимуса и гипертрофию надпочечников. Таким образом, уточняют фоновые параметры. Пример 14. Исследование кардпотонических свойств образцов.
Первоначально различия в биологической активности янтарной кислоты выявились в процессе терапии кардиологических больных. При переходе с «пpиpoднoй» ЯК на синтетическую больные стали отмечать существенное падение или отсутствие эффективности ЯК, но не на всех партиях препарата. Выявление такого эффекта потребовало разработки технологии получения ЯК, обеспечивающей ее высокую биологическую активность.
Определение кардиотонической активности полученных образцов осуществлялось по динамике изменения функционального класса сердечной недостаточности. Специфическая шкала активности предназначена для достаточно точного определения функционального класса по показателям повседневной жизненной активности. По мнению авторов методики, определение фз'нкциональноrо класса больных сердечной недостаточностью в соответствии с критериями Нью-Йоркской ассоциации сердца (Nеw Yогk Неаrt Аssосiаtiоп - NYHA) зачастую неточно, так как широко применяемые с этой целью термины «пoвceднeвнaя физическая нaгρyзкa». «нaгpyзкa ниже повседневною) не являются конкретными. Авторами с помощью многократных исследований больных с физической нагрузкой на тредмиле была рассчитана шкала метаболической стоимости каждого вида жизненной активности (см. Gоldmап L., Наshimоtо В., Сооk F. еt аl. Соmрагаtivе rерrоduсibilitу аиd vаliditу оf зуsiеrris fог аssеssiпg саrdiоvаsсιιlаr fшiсtiопаl сlаss: аdvаtitаgеs оf а пеw sресifiс асtivitу sсаlе // Сiтсulаtiоп. 1981; 64 (б): 1227-34) [б]. Опросник предназначен для заполнения его медицинским персоналом, интервьюирующим обследуемого больного. После определения суммы возможных энергетических затрат вычисляется функциональный класс больного в соответствии с суммарными критериями специальной шкалы активности (таблица N° 6 ). Для проведения исследования были сформированы группы пациентов таким образом, что количество людей с одинаковым функциональным классом равномерно распределилось по группам. К испытаниям не допускались пациенты по следующим показателям: IV функциональный класс, наличие менее чем 60 суток до обследования инфаркта или инсульта, онкологические заболевания. Разбиение на группы по 20 человек проводилось с помощью генератора случайных чисел. Испытания проводились следующим образом: каждый испытуемый принимал два раза в день утром и днем после еды по 100 мг препарата в течение трех месяцев на фоне назначенной врачом стандартной лекарственной терапии. Одна группа принимала плацебо (глюкозу), остальные - препараты янтарной кислоты по примерам 1-10 и «пρiφoднyю» янтарную кислоту. При этом ни испытуемые, ни врачи и медперсонал, ни руководитель испытаний не знали, препарат или плацебо они используют, т.к. и образцы и плацебо были зашифрованы перед передачей в клинику случайным образом. Функциональный класс больных определялся перед началом испытаний при формировании групп, через 30 дней приема, через 60 дней приема и через 90 дней приема. Оценку проводили по шкале активности (таблица .Nb 7).
Динамика изменения функционального класса после расшифровки представлена в таблице Ne 8
Как видно из Таблицы Jfе S положительная динамика слабо выражена в образцах по примеру 1 и 2, у образца 3 динамика заметна, но принципиально уступает образцам 4- 10 и «пpиρoднoй» кислоте, проявивших высокие кардиотонические свойства. Как видно из биологических тестов по примерам 11- 14, образцы янтарной кислоты, полученные по примерам 1 и 2, не обладают высокой биологической активностью. Образец по примеру 3 проявил более высокие свойства, однако он не сопоставим с активностью «пpиpoднoй» янтарной кислоты. Образцы по примерам 4-10 полностью соответствуют «пpiфoднoй» кислоте. Одновременно показано, что применение биологически активной кислоты в качестве «зaтpaвки» обеспечивает стабильное получение янтарной кислоты с высокой биологической активностью, в том числе с выраженными адаптогенными свойствами.
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1, Способ получения янтарной кислоты со стабильно высокой биологической активностью, в том числе адшттогенностъкх включающий стадии получения модифицированного палладнй- со держащего катализатора с использованием кислоты и жидкофазного гидрирования ненасыщенных кислотных соединений на полученном модифицированном катализаторе при повышенных температуре и давлении с отделением катализатора после гидрирования и выделением полученной янтарной кислоты, отличающийся тем, что модификации подвергают готовый палдадпй-со держащий катализатор, нанесенный на носитель, в бескислородной атмосфере, в водной среде янтарной или мапеиновой, или фумаровой кислот и/или их смеси при массовом соотношении Pd2+÷киcлoтa = l÷ 1-100 и затем проводят жидкофазное гидрирование ненасыщенных кислотных соединений, выбранных из малеиновой, фумаровой кислоты или их ангидридов или их смесей, а выделение получаемого после гидрирования продукта осуществляют кристаллизацией из водного раствора, содержащего 0,001-0.01 мacc.% затравки - янтарной кислоты с высокими биологическими свойствами.
2, Способ по п. I5 отличающийся тем, что в качестве бескислородной атмосферы используют азот, водород, аргон, гелий и/или их смесь и модифiщировашiе ведут в температурном диапазоне от 5 до 70 градусов Цельсия при концентрации в водной среде катализатора в пределах от 0 Л до 1,5% масс.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что модифицирование ведут при температуре, выбранной из диапазона от 15 до 40 градусов Цельсия при концентрации в водной среде катализатора в пределах от 0, 1 до 1,0% масс, и концентрации раствора модифицирующего кислотного соединения в пределах от 0,01 до 0,7%.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве затравки при кристаллизации используют янтарную кислоту природного происхождения.
5. Способ по п. 1, оτжшающинся тем, что в качестве затравки при кристаллизации используют янтарную кислоту синтетического происхождения. б. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве затравки при кристаллизации используют смесь янтарной кислоты природного и синтетического происхождения.
PCT/RU2009/000427 2008-08-28 2009-08-24 Cпособ получения янтарной кислоты WO2010041977A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200980134050.6A CN102177128B (zh) 2008-08-28 2009-08-24 制备琥珀酸的方法
US13/061,147 US8546611B2 (en) 2008-08-28 2009-08-24 Method for preparing succinic acid
DE112009002089T DE112009002089T5 (de) 2008-08-28 2009-08-24 Verfahren zur Herstellung von Ammoniumsalzen der Fumar- oder Bernsteinsäure

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008134835 2008-08-28
RU2008134835/04A RU2008134835A (ru) 2008-08-28 2008-08-28 Способ получения янтарной кислоты, обладающей высокой биологической активностью, в том числе адаптогенностью

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010041977A1 true WO2010041977A1 (ru) 2010-04-15

Family

ID=42100768

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2009/000427 WO2010041977A1 (ru) 2008-08-28 2009-08-24 Cпособ получения янтарной кислоты

Country Status (5)

Country Link
US (1) US8546611B2 (ru)
CN (1) CN102177128B (ru)
DE (1) DE112009002089T5 (ru)
RU (1) RU2008134835A (ru)
WO (1) WO2010041977A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101844976A (zh) * 2010-04-27 2010-09-29 湖南长岭石化科技开发有限公司 一种催化加氢制备丁二酸的方法
CN102311332A (zh) * 2010-07-07 2012-01-11 中国石油化工股份有限公司 一种生产丁二酸的方法

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140186903A1 (en) * 2012-12-28 2014-07-03 Api Intellectual Property Holdings, Llc Processes and apparatus for producing furfural, levulinic acid, and other sugar-derived products from biomass
CN111286015B (zh) * 2018-12-10 2023-07-04 中国科学院大连化学物理研究所 一种聚环氧琥珀酸盐的合成方法
CN112806492A (zh) * 2021-02-04 2021-05-18 成都大帝汉克生物科技有限公司 用于提高仔猪饲料消化能力的复合酸化剂及其得到的仔猪饲料
CN115245806A (zh) * 2022-07-28 2022-10-28 侯长建 顺丁烯二酸酐加氢制备丁二酸酐系统及方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2198153A (en) * 1936-03-13 1940-04-23 Nat Aniline & Chem Co Inc Hydrogenation of maleic anhydride
RU2098804C1 (ru) * 1996-01-05 1997-12-10 Кубанский государственный технологический университет Способ определения примесных количеств малеиновой, фумаровой и щавелевой кислот в кристаллической янтарной кислоте
RU2129540C1 (ru) * 1997-04-01 1999-04-27 Акционерное общество открытого типа "Научно-исследовательский и проектный институт мономеров с опытным заводом" Способ получения янтарной кислоты или ее солей
RU2237056C1 (ru) * 2003-03-18 2004-09-27 ЗАО "НПО ПЦ Биофизика" Способ получения янтарной кислоты

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2236398C1 (ru) 2003-03-31 2004-09-20 Кубанский государственный технологический университет Способ получения янтарной кислоты

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2198153A (en) * 1936-03-13 1940-04-23 Nat Aniline & Chem Co Inc Hydrogenation of maleic anhydride
RU2098804C1 (ru) * 1996-01-05 1997-12-10 Кубанский государственный технологический университет Способ определения примесных количеств малеиновой, фумаровой и щавелевой кислот в кристаллической янтарной кислоте
RU2129540C1 (ru) * 1997-04-01 1999-04-27 Акционерное общество открытого типа "Научно-исследовательский и проектный институт мономеров с опытным заводом" Способ получения янтарной кислоты или ее солей
RU2237056C1 (ru) * 2003-03-18 2004-09-27 ЗАО "НПО ПЦ Биофизика" Способ получения янтарной кислоты

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MALLIN DZH. U. KRISTALLIZATSIYA, IZDATELSTVO ''METALLURGIYA'', 1965, pages 151 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101844976A (zh) * 2010-04-27 2010-09-29 湖南长岭石化科技开发有限公司 一种催化加氢制备丁二酸的方法
CN101844976B (zh) * 2010-04-27 2013-04-03 湖南长岭石化科技开发有限公司 一种催化加氢制备丁二酸的方法
CN102311332A (zh) * 2010-07-07 2012-01-11 中国石油化工股份有限公司 一种生产丁二酸的方法
CN102311332B (zh) * 2010-07-07 2013-11-20 中国石油化工股份有限公司 一种生产丁二酸的方法

Also Published As

Publication number Publication date
US8546611B2 (en) 2013-10-01
CN102177128A (zh) 2011-09-07
US20110213183A1 (en) 2011-09-01
CN102177128B (zh) 2014-06-18
DE112009002089T5 (de) 2011-07-21
RU2008134835A (ru) 2010-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2010041977A1 (ru) Cпособ получения янтарной кислоты
TWI375555B (en) Pharmaceutical-grade ferric organic compounds, uses thereof and methods of making same
CN1131229C (zh) 萘啶羧酸衍生物的盐
EP2522653A2 (en) Biguanide derivative, a preparation method thereof and a pharmaceutical composition containing the biguanide derivative as an active ingredient
TW200524936A (en) Novel cyanopyrrolidides, process for their preparation and their use as medicaments
FI62055B (fi) Foerfarande foer framstaellning av aminer som stimulerar hjaertats beta-receptorer
WO2023109877A1 (zh) 一种玻色因及其生产方法和用途
CN113717060B (zh) 一种去甲肾上腺素及其重酒石酸盐的合成方法
CN101317850B (zh) 蔗糖吸收抑制剂
JPS6028836B2 (ja) ５−メチル−イソフラボン誘導体の製造方法
GB2084018A (en) Pyridoxine -ketoglutarate and compositions containing same for use in the prophylaxis of hyperlacticacidaemia and methods for producing such compositions
CN103421011B (zh) 一种制备磷酸西他列汀无水晶型i的方法
CN1763030A (zh) 葛根素衍生物及其医学用途
CN114349700B (zh) 一种氧化异阿朴菲生物碱衍生物及其制备方法和抗抑郁用途
DE60103867T2 (de) Spezielle Salzformen von Triphenylethylenderivaten als selektive Östrogenrezeptor-Modulatoren
JP2008280300A (ja) 環状アルキレンイミンの製造方法
CN107216241B (zh) 光学活性1,5-戊二醇衍生物及其合成方法和应用
CN114057676A (zh) 穿心莲内酯类化合物及其应用、药物组合物
RU2501797C1 (ru) Способ получения морфолиний 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетата
CN111484503B (zh) 一种薇甘菊内酯衍生物及其制备方法和应用
DE3486237T2 (de) Herstellung von Diacetoxybenzylidendiacetaten.
RU2544503C2 (ru) Способ получения кальциевых солей оптически активной [d] или рацемической [d, l] гомопантотеновой кислот
RU2813148C1 (ru) Применение n′-{ 1-[6-метил-3-(тиетан-3-ил)-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2н)-ил]пропан-2-илиден} изоникотиногидразида в качестве средства, стимулирующего регенерацию тканей
RU2237056C1 (ru) Способ получения янтарной кислоты
CN106928132A (zh) 一种羟基吡啶酮配体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980134050.6

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09819446

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13061147

Country of ref document: US

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09819446

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1