WO2009024707A2 - Utilisation d'un extrait de radamaea montana pour la preparation d'une composition cosmetique - Google Patents

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WO2009024707A2
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Gilles Comte
Cédric BERTRAND
Alias : Djoudi Roukia Xxx
Antoine Rabesa Zafera
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Universite Claude Bernard Lyon I
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Definitions

  • the subject of the present invention is the technical field of cosmetic, dermatological and pharmaceutical compositions comprising an antioxidant.
  • Plants of the genus Radamaea have the following botanical position: branching: Angiosperms; class: Magnoliopsida; subclass: Aste ⁇ dae; order: Scrofuiariales; family: Scrofulariaceae.
  • the montana species can be identified by some general morphological traits: perennial shrub, with slightly pubescent twigs; elliptical green leaves, entire, with rounded, apiculated toes, attenuated base.
  • the plants belonging to the species Radamaea montana belong to the genus Radamaea, a genus endemic to Madagascar and dedicated to Radama 1 st by Bentham, an English botanist.
  • the genus includes 5 species: Radamaea latifolia (Bonati), Radamaea montana (Benth) Radamaea perrieri (Bonati), Radamaea prostrata (Benth) and Radamaea r ⁇ pestris (Bonati). Rabesa et al.
  • the invention more particularly relates to a composition suitable for topical application, anti-radical activity, antioxidant, in terms of skin protection or prevention of skin aging using an extract of Radamaea montana or one or more active ingredients contained in such an extract.
  • an extract of Radamaea montana or one or more active ingredients contained in such an extract.
  • the inventors have demonstrated that the extracts of Radamaea montana had anti-radical properties and thus antioxidant properties.
  • the subject of the present invention is the use of an extract of Radamaea montana for the preparation of a cosmetic, dermatological or pharmaceutical composition, the extract of Radamaea montana being used as an antioxidant.
  • the invention also relates to cosmetic, dermatological or pharmaceutical compositions comprising an extract of Radamaea montana used as an antioxidant.
  • tyrosinase is known to be a key enzyme in the biosynthesis of melanin, it is even involved in various dermatological pathologies, such as the appearance of age spots, marks due to acne, hyperpigmentation, or still in the natural tanning process ⁇ Y.-J. Kima and H. Uyamab; Tyrosinase inhibitors from natural and synthetic sources: structure, inhibition mechanism and perspective for the future, CeII. Mol. Life ScL 62 (2005) 1707-1723).
  • this enzyme has broad applications in dermatology or cosmetics, which makes natural compounds or plant extracts that inhibit tyrosinase particularly interesting.
  • This enzyme is therefore involved in an enzymatic oxidation process resulting in the polymerization of melanin and thus the appearance of natural or pathological pigmentation (Jung-Hee Hwang and Byung Mu Lee; Inhibitors of Tyrosinase and Melanin Synthesis. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A, 70: 393-407, 2007).
  • compositions according to the invention are therefore carried out with an antioxidant or a tyrosinase inhibitor agent obtained by extraction from a plant Radamaea montana.
  • the invention therefore relates to the use of a Radamaea montana plant for the preparation of a cosmetic, dermatological or pharmaceutical composition, an antioxidant or a tyrosinase inhibitor.
  • the compositions according to the invention are, inter alia, intended for skin treatments, inter alia for combating aging, for obtaining a repairing or protective effect, for combating the appearance of age spots, brands due to acne, or to fight against hyperpigmentation, or in whitening compositions.
  • the cellular extract of Radamaea montana makes it possible to combat the oxidation of lipids in the skin.
  • the cosmetic, dermatological or pharmaceutical compositions according to the invention may especially be anti-radical compositions, compositions for preventing skin aging, compositions for sun protection, care compositions after sun exposure, radical repair shampoos, hair masks, protective day creams, creams to fight or mitigate hyperpigmentation of the skin or creams to achieve whitening or lightening of the skin.
  • the invention therefore aims to use an extract of Radamaea montana, as an antioxidant, and optionally as a tyrosinase inhibitor, in cosmetic, pharmaceutical or dermatological compositions, or else formulated differently.
  • compositions may, for example, be used to prevent skin aging, for sunscreen, to fight or mitigate hyperpigmentation phenomena of the skin or to obtain a whitening or lightening of the skin.
  • sunscreen to fight or mitigate hyperpigmentation phenomena of the skin or to obtain a whitening or lightening of the skin.
  • Radamaea montana could be used to produce antioxidants, tyrosinase inhibitors, agents for the preparation of cosmetic compositions. Indeed, such antioxidants, tyrosinase inhibitors are present in the plant extracts Radamaea montana.
  • the subject of the present invention is therefore also the use of a Radamaea montana plant for the preparation of a cosmetic, dermatological or pharmaceutical composition, for the production of an antioxidant, or for the production of an inhibitor of tyrosinase.
  • the extract used is a cellular extract of the plant which can be prepared according to any method known to those skilled in the art for extracting compounds from plant tissues.
  • the extract can be obtained from roots, leaves, stems, fruits, seeds and / or flowers.
  • the extract will be derived from leaves or seeds, the use of which does not result in the death of the plant from which they are extracted.
  • the extracts of the leaves or seeds are particularly active.
  • extraction methods mention may be made of conventional methods of hot or cold solvent extraction, maceration, leaching, cryoextraction, extractions with supercritical CO 2 , alone or in admixture with co-solvent extractions using wave radiation, such as microwaves or ultrasounds. These methods can be combined with a subsequent purification, filtration, concentration and / or drying step.
  • the extract used is obtained by extraction with a solvent chosen from water, alcohols, alkanes, ketones, esters, ethers, polyols, chlorinated solvents and mixtures of at least two solvents mentioned above.
  • the extraction may be carried out using a solvent, such as an alcoholic solvent selected from ethanol or methanol or else polyethylene glycol or chloroform.
  • a solvent as mentioned above is particularly preferred for extraction from seeds and / or leaves of the plant.
  • a solvent extraction for example, one can proceed as follows: the part of the selected plant is harvested.
  • This part of the plant whose extract is desired which may be in fresh or dry form, is ground and / or shredded in the selected solvent, then left to macerate, preferably with stirring, in the solvent, preferably during 1 hour to 30 days.
  • a mass ratio of the plant part to solvent of between 1/1 and 1/10 (m / m).
  • the extraction can be carried out at a temperature of between -10 and 70 ° C., and especially between 18 and 60 ° C. or at reflux of the extraction solvent used.
  • the extraction can also be carried out by leaching.
  • the extract obtained can then be concentrated or dried, for example by evaporation or lyophilization.
  • the extract obtained can be incorporated as such in the composition or be purified, treated or fractionated, so as to enrich the active ingredient sought.
  • the extract used will be rich in flavonoids and derivatives and / or in xantones and derivatives and / or apocarotenoids.
  • the leaf extracts obtained contain a significant proportion of flavonoids and xanthones.
  • the following compounds are generally present in the leaves and stems:
  • 6-C-glucosyl-apigenin (isovitexine, CAS: 38953-85-4) of formula (I):
  • the extract used is obtained from the stems and leaves of Radamaea montana and comprises at least or at least two or all of the compounds (I) to (IX) above.
  • the root or seed extracts obtained contain a significant proportion of apocarotenoids.
  • the following compounds are generally present in the roots and in the seeds: 13- (1,2-dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohexyl) -2,7,1-trimethyl (2E, 4E, 6E) acid , 8E, 10E, 12E) -tridecahexanoic acid (CAS: 64803-86-7) of formula (X):
  • the extract used is obtained from the roots and / or seeds of Radamaea montana and comprises at least or at least two or all of the compounds (X) to (XIII) above.
  • the invention also relates to cosmetic, dermatological or pharmaceutical compositions comprising one or more of the compounds (III), (V) to (XIII) listed above, obtained by chemical synthesis or by isolation from an organic extract of Radamaea montana.
  • Compounds (XI) and (XIII) above are new and form an integral part of the invention. They may be used for their anti-free radical and antioxidant properties, which can be obtained by chemical synthesis or by isolation from an organic extract above.
  • the extract of Radamaea montana is introduced into a physiologically acceptable medium containing a carrier or at least one physiologically acceptable excipient.
  • the support may consist of water and / or at least one organic solvent in the appropriate proportions.
  • Physiologically acceptable excipients are defined in particular by the European Pharmacopoeia. They can, for example, facilitate the penetration of the extract at the level of the skin.
  • the composition according to the invention preferably comprises from 0.00001% to 10% (w / w) preferably from 0.0001% to 1% (w / w) of Radamaea montana extract. percentage corresponding to a given mass percentage in dry extract equivalent.
  • the composition comprises in place of an extract of Radamaea montana, one or more of the compounds (III), (V) to (XIII) listed above, obtained by chemical synthesis, the active compound or the whole of these active compounds is preferably from 0.00001% to 10% (w / w), preferably from 0.0001% to 1% (w / w) of the composition.
  • the composition is in a galenical form chosen from two-phase oil-in-water emulsions, water in oils, triphasic emulsions, lotions, milks, gels, hydrogels, creams, ointments, soaps, shampoos, ointments and sprays.
  • the Radamaea montana extract may, in particular, be incorporated into the composition in dry form obtained by evaporation, atomization or lyophilization, in liquid form or in encapsulated form or combined with vectors selected from liposomes, macro-, micro- and nanoparticles, macro-, micro- and nanocapsules, talcs, bentonites and other mineral supports.
  • the extract of Radamaea montana can be combined with one or more additives selected from lipids, thickeners, surfactants, emulsifiers, gelling agents, viscosifiers, preservatives, plant extracts, tissue extracts, moisturizing agents, pigmenting or depigmenting agents, emollients, marine extracts, active ingredients of synthetic origin.
  • additives selected from lipids, thickeners, surfactants, emulsifiers, gelling agents, viscosifiers, preservatives, plant extracts, tissue extracts, moisturizing agents, pigmenting or depigmenting agents, emollients, marine extracts, active ingredients of synthetic origin.
  • cetyl alcohol cetyl palmitate or cetostearyl alcohols such as C7 stenol or Sipol C16, C18, C7,
  • emulsifiers glycerol stearate, sucrose sesquistearate, Polysorbate 60, Arlace! 60, Arlacel 165, Tween 60, Span 60, PEG 20, Methyl glucose sesquistearate, PEG 20 oleyl ether,
  • the composition may also comprise other ingredients commonly used for the formulation of cosmetic products, for example a vehicle such as liquid petrolatum, or oleic sunflower oil, a humectant such as glycerine or butylene glycol, a neutralizer such as triethanolamine, a complexing agent such as disodium and trisodium EDTA or a consistency agent such as glycol stearate.
  • a vehicle such as liquid petrolatum, or oleic sunflower oil
  • a humectant such as glycerine or butylene glycol
  • a neutralizer such as triethanolamine
  • a complexing agent such as disodium and trisodium EDTA or a consistency agent such as glycol stearate.
  • the other active ingredient (s) that may be contained in the composition are chosen according to the desired application for the composition under consideration.
  • These additional active ingredients may be, in particular, chosen from draining agents such as a climbing ivy extract, firming agents such as an extract of Kigelia Africana, anti-irritant agents such as glycerrhetinic stearate, UV-screening agents. such as alkylbenzoates of 12 to 15 carbon atoms, octyl-methoxycinnamic acid, octylsalicylic acid or butyl-methoxydibenzoyl-methane, anti-inflammatories such as ⁇ -bisabolol.
  • the composition may contain an extract obtained from the leaves, stems, seeds or roots of a plant of the species Radamaea montana, associated with sesame seeds, peanut or coconut milk.
  • Figures 1 and 11 schematically show extraction protocols.
  • Figures 2 to 10 and 12 to 15 give the data in tabular form.
  • HPLC analyzes are carried out using a Waters (600E) system coupled with an iodine array (Waters 991), using a reverse phase in Ci ⁇ and applying the following experimental conditions:
  • Cis a "reverse phase (lipophilic stationary phase) Cis" column: silica particles (diameter 5 ⁇ m) grafted with Cis hydrocarbon chains; inside diameter 4.6 mm, length 25 cm;
  • Solvent B acetonitrile (CH 3 CN) / H 2 O 8/2 + 2% acetic acid
  • UV detection max ⁇ set at 340nm
  • the elution program is as follows
  • the MPLC is performed on a B ⁇ chi system equipped with a B-688 pump coupled to a B-687 gradient programmer, with a column (46 x 2.6 cm) and a pre-column (11 x 1.5 cm) .
  • the stationary phase used is the phase
  • Lichroprep RP18 (15-25 ⁇ m; Merck), with a gradient of MeOH in water and / or
  • Mass spectra were obtained on a Hewlett-Parkard 1100MSD spectrometer.
  • the ionization technique used is electrospray (in positive mode most often).
  • the ID and 2D NMR spectra (HSQC, HSQC-TOCSY, HMBC) are carried out in DMSO, using a Bruker Advence DRX 500 NMR spectrometer.
  • UV spectral series are carried out using a spectrophotometer
  • Each of the two types of extract is brought to dryness and taken up by a small volume of methanol.
  • UV fluorescence at 365nm Brown-violet
  • UV fluorescence at 365nm Brown-violet
  • UV fluorescence Bright Yellow
  • the amentoflavo ⁇ e compound (4 mg) was obtained from fraction 22 and 23 after TLC polyamide DC6 in toluene-MeOH-methyl ethyl ketone (2-4-4) with 15 polyamide plates.
  • UV fluorescence at 365 nm Brown-violet Rf on polyamide DC6 in toluene-MeOH-methyl ethyl ketone (2-4-4):
  • UV fluorescence Bright Yellow
  • UV fluorescence at 365nm Brown-violet
  • UV fluorescence at 365 nm Brown-violet Rf on polyamide DC6 in toluene-MeOH-methyl ethyl ketone (2-4-4)
  • the 6 "- (2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl) ameoflavone compound was in fractions 14 to 18 (82mg) in a column of LH20 sephadex (30 x 2cm) in MeOH and was further purified. by TLC polyamide DC6 in toluene-MeOH-methyl ethyl ketone (2-4-4) with 35 plates.
  • Each of the two types of extract is brought to dryness and taken up by a small volume of methanol.
  • the set of two extracts (42.937 g) was fractionated by a Ci 8 VLC (15-25 ⁇ m) successively in Hexane, in ACOET and in MeOH. This VLC allowed fractionation of the block into 27 fractions pooled as follows, after control in HPLC and TLC in 15 fractions.
  • the evaluation of the antioxidant power was carried out with two tests: an ABTS organic radical reduction test and a CUPRAC metal ion reduction test.
  • the ABTS test used is based on the original description of Re et al. in 1999 (Free Radical Biology and Medicine, 26, 1231-1237), as modified by Arts et al. in 2002 (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 50, 7970-7981).
  • the CUPRAC test used is the test that was described by Apak et al. (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2004, 52, 7970-7981).
  • the antioxidant activities of the main compounds of Radamaea montana present in the leaf extract, in Trolox equivalent in CUPRAC and in ABTS are given below:
  • L-DOPA L-3,4-Dihydroxyphenylalanine
  • IC50 Concentration required in ⁇ g / ml of product tested to obtain 50% inhibition of tyrosinase.
  • Glyceryl stearate and Polyethylene glycol-100 of 2 to 5%, preferably 3.25% Mineral oils and vegetable oils of 10 to 20%, preferably 13.50%
  • Acrylic gelling agent 0.1 to 1%, preferably 0.40%
  • Gelling agent for example of the SEPIGEL type marketed by the Company
  • SEPPIC from 0.1 to 2%, preferably 0.70%
  • Radamaea montana dry extract from 0.0001% to 0.05%, preferably 0.001%
  • Titanium dioxide 0.1 to 2%, preferably 0.20%
  • Sorbitoid 0.5 to 5% preferably 1% Triethanolamine 0.1 to 1% preferably 0.30%
  • Glycerine stearate and polyethylene glycol-100 of 1 to 5% preferably 2%
  • Glyceryl stearate 0.1 to 1%, preferably 0.30%
  • Stearic acid 0.5 to 5% preferably 1% Vegetable oils and mineral oils 5 to 15% preferably 8%
  • Solar filter (cinnamate) from 0.5 to 10% preferably 5%
  • Antioxidant from 0.01 to 0.1% preferably 0.07%
  • Acrylic gelling agent 0 , 1 to 1% preferably 0.10% antimicrobial preservative 0.5 to 1% preferably 0.80% Perfume 0.1 to 1% preferably 0.40% Radamaea montana (solids) of 0.0001 % to 0.05%, preferably 0.001%
  • Radamaea montana dry extract
  • Radamaea montana dry extract

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Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, l'extrait de Radamaea montana étant utilisé en tant qu'agent anti-oxydant.

Description

UTILISATION D'UN EXTRAIT DE RADAMAEA MONTANA POUR LA PREPARATION D'UNE COMPOSITION COSMETIQUE
La présente invention a pour objet le domaine technique des compositions cosmétiques, dermatologiques et pharmaceutiques comprenant un agent anti- oxydant.
Les plantes du genre Radamaea ont le positionnement botanique suivant : embranchement : Angiospermes ; classe: Magnoliopsida ; sous classe : Asteήdae ; ordre : Scrofuiariales ; famille : Scrofυlariaceae. Au sein du genre Radamaea, l'espèce montana peut être identifiée grâce à certains traits morphologiques généraux: arbrisseau vivace, à rameaux légèrement pubescents ; feuilles vertes elliptiques, entières, à sommet arrondi et apiculé, à base atténuée.
Les plantes appartenant à l'espèce Radamaea montana appartiennent au genre Radamaea, genre endémique de Madagascar et dédié à Radama 1er par Bentham, botaniste anglais. Le genre comprend 5 espèces : Radamaea latifolia (Bonati), Radamaea montana (Benth) Radamaea perrieri (Bonati), Radamaea prostrata (Benth) et Radamaea rυpestris (Bonati). Rabesa et collaborateurs (1993) soulignent dans la pharmacopée de l'Ambongo et du Boina « PATROA AMIN'NY TAREHIN'NY MANANGY » que la poudre de la racine, en macération, est utilisée sous forme de masque facial par les femmes. La pharmacopée a été éditée par le Centre d'information et de Documentation Scientifique et Technique d'Antananarivo page 500. Néanmoins, l'activité de tels extraits n'a jamais été mise en évidence. De plus, la forme sous laquelle l'extrait est utilisé est totalement inappropriée et même incompatible avec un usage cosmétique normal. En effet, le produit de macération obtenu présente une coloration marron foncé pour les feuilles et jaune marron foncé pour les graines et les racines et une forte odeur d'extrait végétal dans tous les cas. La concentration de l'extrait présent dans le produit de macération présente une couleur trop intense, non acceptable pour un produit cosmétique.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition adaptée à une application topique, à activité anti-radicalaire, antioxydante, en matière de protection de la peau ou de prévention du vieillissement cutané qui utilise un extrait de Radamaea montana ou un ou plusieurs principes actifs contenus dans un tel extrait. Dans le cadre de l'invention, les inventeurs ont mis en évidence que les extraits de Radamaea montana présentaient des propriétés anti-radicalaires et de ce fait des propriétés anti-oxydantes.
Dans ce contexte, la présente invention a pour objet l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, l'extrait de Radamaea montana étant utilisé en tant qu'agent anti-oxydant.
L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques comprenant un extrait de Radamaea montana utilisé en tant qu'agent anti-oxydant.
Dans le cadre de l'invention, les inventeurs ont également mis en évidence que les extraits de Radamaea montana présentaient une activité inhibitrice de la tyrosinase. Or, la tyrosinase est connue pour être une enzyme clé de la biosynthèse de la mélanine, elle est même impliquée dans différentes pathologies dermatologiques, comme l'apparition de taches de vieillesse, de marques dues à l'acné, de l'hyperpigmentation, ou encore dans le processus naturel de bronzage { Y.-J. Kima and H. Uyamab ; Tyrosinase inhibitors from natυral and synthetic sources: structure, inhibition mechanism and perspective for the future ;, CeII. Mol. Life ScL 62 (2005) 1707-1723). Autant dire que l'inhibition de cette enzyme a de vastes applications en dermatologie ou en cosmétique ce qui rend particulièrement intéressant les composés naturels ou d'extraits végétaux inhibiteurs de la tyrosinase. Cette enzyme est donc impliquée dans un processus d'oxydation enzymatique entraînant Ja polymérisation de la mélanine et donc l'apparition d'une pigmentation naturelle ou pathologique {Jung-Hee Hwang and Byung Mu Lee ; Inhibitors of Tyrosinase and Melanin Synthesis. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A, 70: 393-407, 2007).
La préparation des compositions selon l'invention est donc réalisée avec un agent anti-oxydant ou un agent inhibiteur de la tyrosinase obtenu par extraction à partir d'une plante Radamaea montana. L'invention concerne donc l'utilisation d'une plante Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, d'un agent anti-oxydant ou d'un inhibiteur de la tyrosinase. Les compositions selon l'invention sont, entre autres, destinées à des traitements de la peau, entre autres pour lutter contre son vieillissement, pour l'obtention d'un effet réparateur ou protecteur, pour lutter contre l'apparition de taches de vieillesse, de marques dues à l'acné, ou pour lutter contre l'hyperpigmentation, ou encore dans des compositions blanchissantes. En particulier, l'extrait cellulaire de Radamaea montana permet de lutter contre l'oxydation des lipides de la peau. Les compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques selon l'invention peuvent notamment être des compositions anti-radicalaires, des compositions pour prévenir ie vieillissement cutané, des compositions pour la protection solaire, des compositions de soin après exposition solaire, des shampoings réparateurs anti-radicalaires, des masques capillaires, des crèmes de jour protectrices, des crèmes pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou des crèmes pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau. L'invention vise donc l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana, en tant qu'agent anti-oxydant, et éventuellement en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase, dans des compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou dermatologiques, ou encore, formulée autrement l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana, pour la fabrication de compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou dermatologiques anti-oxydantes, et éventuellement destinée à inhiber l'activité de la tyrosinase. De telles compositions peuvent, par exemple, être utilisées pour prévenir le vieillissement cutané, pour la protection solaire, pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou encore pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau. Dans le cadre de l'invention, il a été mis en évidence que les plantes
Radamaea montana pouvaient être utilisées pour produire des agents antioxydants, inhibiteurs de la tyrosinase, agents servant à la préparation de compositions cosmétiques. En effet, de tels agents anti-oxydants, inhibiteurs de la tyrosinase sont présents dans les extraits des plantes Radamaea montana. La présente invention a donc également pour objet l'utilisation d'une plante Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, pour la production d'un agent anti-oxydant, ou pour la production d'un inhibiteur de la tyrosinase. L'extrait utilisé est un extrait cellulaire de la plante qui peut être préparé selon toute méthode connue de l'homme du métier pour extraire des composés des tissus végétaux. L'extrait peut être obtenu à partir des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs. De façon avantageuse, l'extrait sera issu des feuilles ou des graines, dont l'utilisation n'entraîne pas la mort de la plante dont elles sont extraites. De plus, les extraits des feuilles ou graines sont particulièrement actifs.
A titre d'exemples de méthodes d'extraction, on peut citer les méthodes classiques d'extraction en solvant à chaud ou à froid, la macération, la lixiviation, la cryoextraction, les extractions par le CO2 supercritique, seul ou en mélange avec un co-solvant les extractions utilisant un rayonnement ondulatoire, tel que les micro-ondes ou les ultrasons. Ces méthodes peuvent être combinées à une étape ultérieure de purification, filtration, concentration et/ou séchage.
De façon avantageuse, l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les alcanes, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités. En particulier, l'extraction pourra être réalisée à l'aide d'un solvant, tel qu'un solvant alcoolique choisi parmi l'éthanol ou le méthanol ou encore le polyéthylène glycol ou le chloroforme. Un solvant tel que précédemment cités est particulièrement préféré pour l'extraction à partir des graines et/ou des feuilles de la plante. Dans le cas d'une extraction par solvant, par exemple, on peut procéder de la façon suivante : la partie de la plante sélectionnée est récoltée. Cette partie de la plante dont l'extrait est souhaitée, qui peut se trouver sous forme fraîche ou sèche, est broyée et/ou déchiquetée dans le solvant sélectionné, puis laissée à macérer, de préférence sous agitation, dans le solvant, de préférence pendant 1 heure à 30 jours. De façon avantageuse, on utilisera un rapport massique partie de la plante sur solvant compris entre 1/1 et 1/10 (m/m). L'extraction peut être réalisée à une température comprise entre -10 et 7O0C, et notamment entre 18 et 6O0C ou à reflux du solvant d'extraction utilisé. L'extraction peut également être réalisée par lixiviation.
L'extrait obtenu peut alors être concentré, ou séché, par exemple par évaporation ou lyophilisation. L'extrait obtenu peut être incorporé tel quel à la composition ou bien être purifié, traité ou fractionné, de façon à enrichir en principe actif recherché. En particulier, l'extrait utilisé sera riche en flavonoïdes et dérivés et/ou en xantones et dérivés et/ou apocaroténoides.
Les extraits de feuilles obtenus contiennent une proportion importante de flavonoïdes et xanthones. En particulier les composés suivants sont généralement présents dans les feuilles et les tiges :
- 6-C-glucosyl-apigénine (isovitexine, CAS : 38953-85-4) de formule (I) :
Figure imgf000006_0001
(D
8-C-glucosyl-apigénine (vitexine, CAS : 3681-93-4) de formule (II)
Figure imgf000006_0002
2-C-β-D-glucopyranosyl-l,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine, CAS : 4773-96-0) de formule (III) :
Figure imgf000006_0003
(III)
1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (CAS : 3542-72-1) de formule (IV)
Figure imgf000007_0001
(IV)
amentoflavone (CAS : 1617-53-4) de formule (V)
Figure imgf000007_0002
(V)
- l,3,6,7-tétrahydroxγ-8-prénylxanthone (CAS : 70786-45-7) de formule (VI) :
Figure imgf000007_0003
13 14 (VI)
pyranoamentoflavone (CAS : 145701-10-6) de formule (VII)
Figure imgf000008_0001
(VII)
- 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone, CAS : 2608-21-1) de formule
Figure imgf000008_0002
(VIII)
6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone (CAS : 199181-95-8) de formule (IX) :
Figure imgf000008_0003
12" 13"
(IX) De façon préférée, l'extrait utilisé est obtenu à partir des tiges etyou feuilles de Radamaea montana et comprend au moins ou au moins deux, voire tous les composé (I) à (IX) ci-dessus.
Les extraits de racines ou de graines obtenus contiennent une proportion importante d'apocaroténoides. En particulier, les composés suivants sont généralement présents dans les racines et dans les graines : acide 13-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,7,l 1-triméthyl (2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexanoique (CAS : 64803-86-7) de formule (X) :
Figure imgf000009_0001
- acide 17-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,i4E,16E)-heptadecahexanoique (composé nouveau) de formule (XI) :
Figure imgf000009_0002
- 13[(lR,2R)]-l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl]-2,7,ll-triméthyl (2E,4E,6E,8E/10E,12E)-tridecahexaenal (CAS : 57951-41-4) de formule (XII) :
Figure imgf000009_0003
(XII)
- acide 17-(l,2,4-trihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique (composé nouveau) de formule (XIII) :
Figure imgf000010_0001
De façon préférée, l'extrait utilisé est obtenu à partir des racines et/ou graines de Radamaea montana et comprend au moins ou au moins deux, voire tous les composés (X) à (XIII) ci-dessus. Selon un autre de ses aspects, l'invention a également pour objet les compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques comprenant un ou plusieurs des composés (III), (V) à (XIII) listés précédemment, obtenu par synthèse chimique ou par isolement à partir d'un extrait organique de Radamaea montana. Les composés (XI) et (XIII) ci-dessus sont nouveaux et font partie intégrante de l'invention. Ils pourront être utilisés pour leurs propriétés anti-radicalaires et a nti -oxydantes, leur obtention pouvant se faire par synthèse chimique ou par isolement à partir d'un extrait organique ci-dessus.
Pour former la composition selon l'invention, l'extrait de Radamaea montana est introduit dans un milieu physiologiquement acceptable contenant un support ou au moins un excipient physiologiquement acceptable. Le support peut être constitué d'eau et/ou d'au moins un solvant organique dans les proportions adéquates. Les excipients physiologiquement acceptables sont notamment définis par la pharmacopée européenne. Ils peuvent, par exemple faciliter la pénétration de l'extrait au niveau de la peau.
De façon avantageuse, la composition selon l'invention comprend, de préférence, de 0,00001% à 10% (m/m) préférentiellement de 0,0001% à 1% (m/m) d'extrait de Radamaea montana, ce pourcentage correspondant à un pourcentage massique donné en équivalent d'extrait sec. Dans le cas, où la composition comprend à la place d'un extrait de Radamaea montana, un ou plusieurs des composés (III), (V) à (XIII) listés précédemment, obtenu par synthèse chimique, le composé actif ou l'ensemble de ces composés actifs représente, de préférence, de 0,00001% à 10% (m/m), préférentiellement de 0,0001% à 1% (m/m) de la composition. En particulier, la composition se présente sous une forme galénique choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les shampoings, les onguents et les produits à pulvériser. L'extrait Radamaea montana peut, notamment, être incorporé à la composition sous forme sèche obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux. Dans les compositions selon l'invention, l'extrait de Radamaea montana peut être combiné à un ou plusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique. On peut citer :
- parmi les gélifiants, la gomme xanthane, les carboxyvinyt polymères tel que l'Ultrez 10TM ou leurs sels de triéthanolamine comme le Carbomer - TEATM,
- parmi les épaississants, l'alcool cétylique, le palmitate de cétyle ou les alcools cétostéaryliques comme le Sténol C7 ou le Sipol C16, C18, C7,
- parmi les conservateurs, le phénoxyéthanol, le méthyl-paraben, le propyl- paraben, I1EDTA trisodique, le benzoate de sodium,
- parmi les émulsifiants, le stéarate de glycérol, le sucrose sesquistéarate, le Polysorbate 60, le Arlace! 60, Arlacel 165, Tween 60, Span 60, PEG 20, Méthyl- glucose sesquistéarate, PEG 20 oleyl éther,
- parmi les émollients, les triglycérides capriques et capryliques, le méthyl polysiloxane, l'octyl dodécanol, l'isononyl isononanoate. La composition peut encore comprendre d'autres ingrédients communément utilisés pour la formulation des produits cosmétiques, par exemple un véhicule tel que l'huile de vaseline, ou l'huile de tournesol oléique, un agent humectant tel que la glycérine ou le butylène glycol, un neutralisant tel que la triéthanolamine, un complexant tel que l'EDTA disodique et trisodique ou encore un agent de consistance tel que le stéarate de glycol. Le ou les autres principes actifs qui peuvent être contenus dans la composition, sont choisis en fonction de l'application recherchée pour la composition considérée. Ces principes actifs complémentaires peuvent être, en particulier, choisis parmi les agents drainants tel qu'un extrait de Lierre grimpant, les agents raffermissants tel qu'un extrait de Kigelia Africana, les agents antiirritants tel que le stéarate glycerrhétinique, les filtres anti-UV tels que les alkylbenzoate de 12 à 15 atomes de carbones, l'acide octyl-méthoxycinnamique, l'acide octylsalicylique ou le butyl-méthoxydibenzoyl-méthane, les antiinflammatoires comme l'α-bisabolol. La composition pourra contenir un extrait obtenu à partir des feuilles, des tiges, des graines ou des racines d'une plante de l'espèce Radamaea montana, associé avec des graines de sésames, de l'arachide ou du lait de coco.
Les quantités de ces différents additifs et adjuvants sont celles classiquement utilisées et seront adaptées en fonction de la composition cosmétique souhaitée et de sa forme galénique.
A titre illustratif et non limitatif, sont décrits ci-après, en référence aux Figures annexées, différents procédés pouvant être mis en oeuvre pour la réalisation de différents extraits de plantes de l'espèce Radamaea montana.
Les Figures 1 et 11 montrent schématiquement des protocoles d'extraction. Les Figures 2 à 10 et 12 à 15 donnent sous la forme de tableau les données
RMN 1H ou 13C de différents composés isolés à partir d'extraits de Radamaea montana.
Les analyses HPLC sont réalisées grâce à un système Waters (600E) couplé avec une barrette d'iode (Waters 991), en utilisant une phase inverse en Ciβ et en appliquant les conditions expérimentales suivantes:
- une colonne "phase inverse (phase stationnaire lipophile) Cis": particules de silice (diamètre 5μm) greffées par des chaînes hydrocarbures en Cis ; diamètre intérieur 4,6 mm, longueur 25 cm;
- un éluant de lipophilie croissante: mélange de: Solvant A : H2O + 2% d'acide acétique
Solvant B : acétonitrile (CH3CN) /H2O 8/2 + 2% d'acide acétique
Débit : ImI /min
Détection UV: λ max fixé à 340nm Le programme d'élution est le suivant
Figure imgf000013_0001
La MPLC est effectuée sur un système de Bϋchi équipé d'une pompe B-688 couplée à un programmeur du gradient B-687, avec une colonne (46 x 2,6 cm) et une pré-colonne (11 x 1,5cm). La phase stationnaire utilisée est la phase
Lichroprep RP18 (15-25μm; Merck), avec un gradient de MeOH dans l'eau et/ou
Acétonitrile dans l'eau.
Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectromètre de Hewlett- Parkard 1100MSD. La technique d'ionisation utilisée est l'electrospray (en mode de positif le plus souvent).
Les spectres RMN ID et 2D (HSQC, HSQC-TOCSY, HMBC) sont réalisés dans le DMSO, à l'aide d'un spectromètre RMN de Bruker Advence DRX 500.
Les séries spectrales UV, sont réalisées à l'aide d'un spectrophotomètre
UV/Vis, Agilent 8453, et selon les protocoles publiés par Mabry et al., en 1970 pour l'indentification des flavonoïdes. (Mabry, TJ. M., Markham, K.R., Thomas,
M.B., 1970. The systematic identification of flavonoïds. Springer Verlag, Berlin &
New York). I- Extraction et Isolement des composés de feuille
I-1-Extraction
Figure imgf000014_0001
Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible volume de méthanol.
I-2-Méthodes préparatives d'isolement des composés présents dans l'extrait de feuille
La purification et la détermination structurale des composés présents dans l'extrait ont été effectuées selon un protocole expérimental classique d'extraction, de séparation et de purification dont les étapes sont résumées à la Figure 1.
I-2-l-Séparation préliminaire
Seul l'extrait éthanolique a été purifié.
I-2-l-l-Fractionnement sur colonne Un fractionnement de l'extrait éthanolique 80% de feuille (6g) a été réalisé par chromatographie sur colonne ouverte de sephadex LH20 (69 x 4 cm) dans le MeOH.
26 fractions ont été récupérées selon leur fluorescence en lumière de Wood. Après contrôle en HPLC et CCM sont sélectionnées les fractions 9 à 16 et 22 à 23. I-2-l-l-a-Rechromatographie et purification finale
Fractions 9 à 11:
Par CCM de polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthyicétone (2-4-4) avec 10 plaques, 14 mg de composé 8-C-glucosyl-apigénine et 1 mg du composé 6-C-glucosyl-apigénine ont été récupérés. U 6-C-GLUCOSYL-APIGENINE (ISOVITEXINE) DE FORMULE (I) :
Figure imgf000015_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) : Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ciβ à 340nm : 18,54'
Série spectrale UV :MeoH 271nm, 336nm AICI3 262nm, 278nm, 352nm, 382nm
AlCb+HCI 260nm, 280nm, 344nm, 380nm NaOAc 279nm, 303nm, 385nm
NaOAc +H3BO3 274nm, 346nm, 408nm NaOH 278nm, 329nm, 398nm
MS m/z :433 [M+H]+
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 1 Figure 2.
La 8-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) :
Figure imgf000015_0002
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ciβ à 340nm : 18,54' Série spectrale UV :MeoH 270nm, 336nm AICI3 277nm, 305nm, 350nm, 386nm
AICI3+HCI 278nm, 303nm, 343nm, 383nm NaOAc 280nm, 30OnFn, 379nm
NaOAc +H3BO3 271nm, 329nm, 344nm NaOH 279nm, 329nm, 395nm
MS m/z :433 [M+Hf
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 2 Figure 3.
Fractions 12 et 13 : (225mg)
Après chromatographie sur une colonne de MPLC C18 15-25μm (46 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH danslΗ2O), le composé 2-C-0-D- glucopyranosyl-l,3,6,7-tetrahydroxyxanthone a été récupéré par cristallisation dans la fraction 10 (6mg) et dans la fraction ll(4mg).
La 2-C-/?-D-glucopyranosyl-l,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) :
Figure imgf000016_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification :
Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4)
0,16
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ciβ à 340nm : 14,69'
Série spectrale UV :MeoH 241nm, 257nm, 315nm, 366nm AICI3 236nm, 265nm, 357nm, 388nm
AlCb+HCI 237nm, 266nm, 345nm, 413nm NaOAc 240nm, 380nm
NaOAc +H3BO3 260nm, 312nm, 372nm
NaOH 240nm, 271nm, 304nm, 390nm
MS m/z : 423 [M+H]+ Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 3 Figure 4.
Fraction 16 :(153mg) Par CCM de polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-
4) avec 20 plaques de polyamide, lOmg du composé 1,3,6,7- tétrahydroxyxanthone ont été récupérés dont la purification est achevée sur colonne MPLC C18 15-25μm (23 x 1,5cm) avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans I1H2O) dans les fractions 1 à 13 (3mg). La 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) :
Figure imgf000017_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,30
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Cis à 340nm : 24,29' MS m/z : 261 [M+H] + Les données RMM du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 4 Figure 5.
Fractions 22 et 13 : (123mg)
Le composé amentoflavoπe (4mg) a été obtenu de la fraction 22 et 23 après CCM de polyamide DC6 dans le toluène-MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) avec 15 plaques de polyamide. L'amentoflavone de formule (V)
Figure imgf000018_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification :
Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) :
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Cie à 340nm: 31,15'
MS m/z : 539 [M+H] +
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 5 Figure 6 I-2-l-2-Partage liquide-liquide
Le 84 g restant de l'extrait éthanolique 80% a été dissout dans 100 ml de MeOH puis additionné avec 900 ml d'H2O, ce qui nous a donné 1000 ml d'extrait. Ce dernier a été fractionné par un partage liquide-liquide. Cet extrait a été dans un premier temps partagé avec une phase apolaire Hexane, ensuite une autre phase apolaire CHCb, puis une phase peu polaire ACOEt et enfin une phase polaire BuOH. Après évaporation des solvants, ce partage a permis d'obtenir quatre fractions de polarité croissante: Hexane, CHCb, ACOET et BuOH.
Figure imgf000018_0002
I-2-l-2-a-Séparation par fractionnement
L'exploration des extraits hexanique, chloroformique et butanolique n'a révélé aucun composé intéressant, et seul l'extrait d'AcOEt soumis à des expérimentations supplémentaires. Les 4 g du résidu de la phase d'AcOEt ont été fractionné sur colonne NIPLC
Ci8 15-25μm avec un gradient de 50% à 100% de MeOH dans le CHcI3. 42 fractions ont été récupérées selon leur fluorescence en lumière de Wood. Après contrôle en HPLC et CCM sont sélectionnées les fractions 13 à 18.
I-2-l-2-b-Rechromatographie et purification finale Fraction 13 : (17mg)
Par CCM de polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-
4) sur 16 plaques, nous avons récupéré 17mg du composé 1,3,6,7- tetrahydroxyxanthone-8-C-prénylxanthone dont la purification est enfin obtenue sur colonne de MPLC C18 15-25μm (46 x 1,5cm avec gradient de 30% à 100% de MeOH dans H2O) dans la fraction 5 de celle-ci (2mg).
La l,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prenylxanthone de formule (VI) :
Figure imgf000019_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,52
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Cis à 340nm : 39,03' MS m/z : 329 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 6 Figure 7. Fractions 14 et 15:(2g)
Après CCM de polyamide DC6 dans le toluène-MeOH-méthyléthylcétone (2-4- 4) sur 21 plaques, sont récupérés 67mg du composé pyranoamentoflavone, dont la purification s'est poursuivie sur colonne de sephadex LH20 (23 x 1,5) dans le MeOH.
Pyranoamentoflavone se retrouvant dans les fractions 10 et ll(22mg) de celle-ci, sa purification ultime est enfin achevée sur colonne de MPLC Ciβ 15-25 μm (23 x 1,5cm avec un gradient de 30% à 100% de MeOH dans H2O) dans les fractions 14, 15 et 16(6mg). La pyranoamentoflavone de formule (VII) :
Figure imgf000020_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,81
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ciβ à 340nm : 42,69' Série spectrale UV :MeoH 272nm, 310nm, 342nm
AICI3 260nm, 299nm, 327nm, 377nm
AlCb+HCI 260nm, 300nm, 327nm, 370nm NaOAc 278nm, 293nm, 361nm
NaOAc +H3BO3 275nm, 310, 346nmnm NaOH 276nm, 315nm, 395nm
MS m/z : 605 [M+H]+
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 7 Figure 8. Fraction 16 : (337mg)
Lors d'une chromatographie sur colonne de sephadex LH20 (30 x 2cm) dans le MeOH, le composé 7"-0-Methylamentoflavone (sotetsuflavone) était resté sur la colonne (il ne se dissolvait pas dans le MeOH). Après récupération du résidu sur la colonne (182mg), la purification est faite sur colonne MPLC C18 15- 25μm (23 x 1,5cm avec gradient de 30% à 100% de MeOH dans H2O). Le composé 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) s'est retrouvé dans toutes les fractions (45mg).
La 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII) :
Figure imgf000021_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4)
0,81
Temps de rétention en HPLC sur une colonne de à 340nm : 35,28'
Série spectrale UV :MeoH 271nm, 339nm AICI3 278nm, 299nm, 348nm, 389nm
AlCb+HCI 281nm, 300nm, 343nm, 388nm NaOAc 272nm, 382nm
NaOAc +H3BO3 273nm, 393nm NaOH 273nm, 393nm NaOH après 51
MS m/z : 553 [M+H] +
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 8 Figure 9 Fractions 17 et 18 :( 244mg)
Par une colonne de sephadex LH20 (30 x 2cm) dans le MeOH, le composé 6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butényl) amentoflavone se trouvait dans les fractions 14 à 18 (82mg). Sa purification est poursuivie par CCM de polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) avec 35 plaques.
Nous avons récupéré 17mg dont la purification est enfin achevée sur colonne MPLC Ci8 15-25μm (23 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans H2O dans les fractions 9 à 16(3mg).
La 6"-{2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl) amentoflavone de formule (IX) :
Figure imgf000022_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification :
Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet
Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) : 0.21
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ci8 à 340nm : 37,93'
MS m/z : 623 [M +H] +
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 9 Figure 10.
II- Extraction et Isolement des composés de racine
II-1-Extraction (lixiviation)
Figure imgf000022_0002
Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible volume de méthanol.
II-2-Méthodes préparatives d'isolement des apocarotenoïdes La purification et la détermination structurale des apocarotenoïdes ont été effectuées d'après le protocole expérimental présenté sur Figure 11.
II-2-l-Séparation préliminaire
Après contrôle en HPLC et CCM, il ressort que les 2 extraits (dichlorométhanique et méthanolique) ont les mêmes contenus et ont été réunis, pour donner un extrait de 42,937g.
II-2-l-l-Séparation par fractionnement
L'ensemble de deux extraits (42,937g) a été fractionné par une VLC Ci8 (15- 25μm) successivement dans l'Hexane, dans l'ACOET et dans le MeOH. Cette VLC a permis un fractionnement du bloc en 27 fractions regroupées de la façon suivante, après contrôle en HPLC et CCM en 15 fractions.
Figure imgf000023_0001
II-2-l-l-a-Rechromatograρhie et purification finale
Fraction J (2,619g):
Après chromatographie sur une colonne de MPLC Ci8 15-25μm (46x1, 5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans IΗ2O) l'acide 13-(l,2-dihydroxy- 2/6,6-triméthylcyclohexyl)-2,7,ll-triméthyl(2E/4E/6E,8E,10E,12E) tridecahexanoique ( formule X) (777mg) a cristallisé dans la fraction 42 et l'acide 17-(l/2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E) heptadecahexanoique (formule XI) (69,84 mg) dans les fractions 60 à 65.
L'acidel3-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,7,ll- triméthyl(2E,4E,6E,8E/10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) :
Figure imgf000024_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence : Jaune -orange
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Cis à 254nm, 300nm et 400nm : 20.61'
MS m/z : 401 [M+H]
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 10 Figure 12.
L'addel7-(l,2-dihydroxy-2,6,6H:riméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) :
Figure imgf000024_0002
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence : Rouge -orange
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Cis à 254nm, 300nm et 400nm 23,71' MS m/z : 467 [M+H]+
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 11 Figure 13.
Un autre composé nommé RP8, présent dans les fractions 50 à 53 a été purifié en MPLC Ci8 15-25μm (46 x 1,5cm avec gradient de 50% à 100% d'acétonitrile dans IΗ2O) l,63mg ont été récupérés dans les fractions 13 à 16.
Fraction <7(753mg) :
Une chromatographie sur colonne de MPLC Ciβ 15-25μm (46x1, 5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans I1H2O) a permis de récupérer 3mg de 13[(lR,2R)]-l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl]-2,7/ll- triméthyl(2E,4E,6E,8E,10E,12E) tridecahexaenal dans la fraction 14.
Le 13[(lR,2R)-l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcydohexyl]-2,7,l 1- triméthyl(2E,4E,6E/8E,10E,12E)-tridecahexaenal, de formule (XII) :
Figure imgf000025_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence : Jaune -orange
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ci8 à 254nm, 300nm et 400nm : 7,16' MS m/z : 385 [M+H] +
Les données RMN du proton et du carbone X3C sont présentées dans le tableau 12 Figure 14.
Fraction N (3,001g): Après une chromatographie sur colonne de MPLC Cis 15-25μm (46 x 1,5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans I1H2O) un composé nommé RPlO a été présent dans la fraction 23. Sa purification a été poursuivie sur une colonne ouverte de cellulose microcristalline (36 x 2,5cm avec gradient de chloroforme 50% à 100% dans l'éther de pétrole), le composé RPlO se retrouvant dans les fractions 5 et 6 de celle-ci. La purification est enfin achevée sur colonne MPLC Ciβ 15-25μm (23 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans H2O dans les fractions 9 à 10 (5mg).
Après deux chromatographies sur colonnes ouvertes de Cellulose microcristalline (36x2,5cm avec gradient de Chloroforme 50% à 100% dans l'EP) de la fraction 25, un composé nommé RP9 (7mg) a été obtenu.
Après une chromatographie sur colonne de MPLC Ciβ 15-25 μm (46xl,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans I1H2O) 18mg d'acide 17-( 1,2,4- trihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E) heptadecahexanoique ont été purifiés dans les fractions 27 et 28.
L'acide 17-(l,2/4-trihydroxy-2,6,6-triméthylcydohexyl)-2,6,ll,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)heptadecahexanoique de formule (XIII) :
Figure imgf000026_0001
présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification :
Temps de rétention en HPLC sur une colonne Ciβ à 254nm, 300nm et 400nm : 14,88'
MS m/z : 483 [M+ H] +
Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 13 Figure 15.
Un composé nommé RP6 se trouvant dans les fractions 20 et 21 (31mg) a été purifié sur une deuxième colonne MPLC Ciβ 15-25μm (avec gradient de 0% à 100% MeOH dans H2O) où 3,3mg de composé pur ont été récupérés dans les fractions 15 et 16. Fraction O (23,44g):
Après une VLC Ci8 15-25μm (avec gradient de 0% à 100% MeOH dans I1H2O), un composé RP7, se trouvant dans la fraction méthanolique 80%(728mg), a été obtenu.
Sa purification s'est poursuivie par une chromatographie sur une colonne de MPLC Ci8 40-63μm (50x4,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans I1H2O), le composé RP7 se retrouvant dans les fractions 17àl9(18mg) de celle-ci. Une colonne de sephadex LH20 dans le MeOH a permis finalement de récupérer 4mg de composé RP7 dans les fractions 6 et 7.
III- Extraction et Isolement des composés de graine
III-1-Extraction (lixiviation)
Figure imgf000027_0001
Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible volume de méthanol. III-2- Méthodes préparatives d'isolement des apocarotenoïdes
La purification et la détermination structurale des apocarotenoïdes ont été effectuées d'après un protocole expérimental analogue à celui de la Figure 11.
III-2-l-Séparation préliminaire
Seul l'extrait méthanolique a été analysé. III-2-l-l-Séparation par fractionnement
130,5g a été fractionné par une VLC de silice (15-40μm) dans le MeOH /H2O, 10 fractions ont été obtenues. Après une purification et une co-chromatographie de chaque composé avec les composés des racines, il s'avère que les extraits de graines contiennent les mêmes composés que ceux des racines. IV- Activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana et de l'extrait de feuille, racine et de graine
L'évaluation du pouvoir antioxydant a été effectuée avec deux tests : un test de réduction d'un radical organique ABTS et un test de réduction d'un ion métallique CUPRAC. Le test ABTS utilisé est basé sur la description originale de Re et al. en 1999 (Free Radical Biology and Médecine, 26, 1231-1237), avec les modifications apportées par Arts et al. en 2002 (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 50, 7970-7981). Le test CUPRAC utilisé est le test qui a été décrit par Apak et al. (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2004, 52, 7970-7981). Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana présents dans l'extrait de feuille, en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après :
Figure imgf000028_0001
Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana présents dans l'extrait de graine et de racine, en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après :
Figure imgf000028_0002
Les activités antioxydantes des extraits organiques de feuille, racine et graine de Radamaea montana en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après :
Figure imgf000029_0001
L'évaluation du pouvoir antioxydant a également été effectuée avec un test d'action de réduction de la tyrosine par la tyrosinase {inhibition de cette action avec des produits antioxydants). Ce test a été développé et optimisé à partir des descriptions de V. J. HEARING Jr (Methods in Enzymology, 1987, vol. 42, 154- 165), de Y.-J. KIM, H. UYAMA (Cellular and Molecular Life Sciences 2005, 62, 1707-1723) et de T. SABUDAK et al. (Natural Product Research, 2006, vol. 20, n°. 7, 665-670). La tyrosinase, est une enzyme-clé présente chez les plantes et les animaux dans la biosynthèse de la mélanine. Elle catalyse l'oxydation des monophénols, diphénols et quinones. Les antioxydants inhibent donc l'action de la tyrosinase. Cette inhibition peut être suivie en temps réel grâce à la vitesse de l'apparition et à l'intensité de sa coloration du milieu réactionnel (formation du complexe L-DOPA-quinone) mesurable en spectrométrie.
Tyrosinace
L-Tyrosine + O2 L -DOPA
L -DOPA Tyrosinace L-DOPA-quinone + H2O
L-DOPA= L-3,4- Dihydroxyphenylalanine
Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana présents dans les extraits de feuilles, racine et graine, sont donnés sous forme d'IC5o* dans le tableau ci-dessous : NOM Réf. IC50* en μg/ml
Epicatechine gallate (témoin actif dans la
Epicatechi G. 55,8 littérature) Acide kojique (témoin actif dans la littérature) Kojic acid 57,0 l,3,6,7-tetrahydroxy-8-prénylxanthone RF4bis 126,2 Extrait éthanolique de racine de Radamaea
Rada racine 145,2 montana l,3,6,7-tetrahydroxy-8-3,3-
RF4 153,8 (diméthylallyl)xanthone mangiférine RF3 154,5 Extrait éthanolique de feuille de Radamaea
Rada feuille 188,0 montana Radamanine A RP2 214,9
6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butényl)-
RF7 264,7 amentoflavone
Amentoflavone RF5 283,6
Sotetsuflavone RF6 337,7
Extrait éthanolique de graine de Radamaea
Rada graine 644,4 montana Apigénine-8-C-glucoside RFl 2134,9
*IC5o= Concentration nécessaire en μg/ml de produit testé pour obtenir 50% d'inhibition de la tyrosinase.
Les données ont par ailleurs été validées en introduisant dans les expérimentations d'évaluation de l'effet biologique deux témoins réputés actifs l'Epicatechine gallate et l'acide kojique. Les valeurs relevées pour ces deux témoins sont tout à fait en accord avec celles retrouvées dans la littérature (Y.-J. KIM, H. UYAMA (Cellular and Molecular Life Sciences 2005, 62, 1707-1723), J-H HWANG and B M LEE (Journal of Toxicology and Environmental Health, part A, 2007, 70, 393-407)). Dans cette même littérature, les extraits de plantes sont considérés comme actifs lorsque les IC5O sont inférieurs à 500 μg/ml. V- Exemples de compositions
Gel après soleil
Eau déminéralisée QSP 100 % Glycérine de 1 à 5% de préférence 3, 00 % Gélifiant acrylique de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 % Triéthanolamine de 0,1 à 1% de préférence 0,50 % Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 % de préférence 0,55 % Huile végétale ou huile minérale de 1 à 5 % de préférence 2 % Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,15 % Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 %, de préférence 0,001%
Crème anti-radicalaire
Stéarate de sorbitol de 1 à 2 % de préférence 1,50 %
Stéarate de glycéryl et Polyéthylène glycol-100 de 2 à 5 % de préférence 3,25 % Huiles minérales et huiles végétales de 10 à 20 % de préférence 13,50 %
Eau déminéralisée QSP 100 %
Propylène glycol de 1 à 5 % de préférence 2,50 %
Gélifiant acrylique de 0,1 à 1% de préférence 0,40 %
Triéthanolamine de 0,1 à 1 % de préférence 0,40 % Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 % de préférence 0,80 %
Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,15 %
Gélifiant (par exemple du type SEPIGEL, commercialisé par la Société
SEPPIC) de 0,1 à 2 % de préférence 0,70 %
Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 %, de préférence 0,001%
Lait solaire
Eau déminéralisée QSP 100 %
Dioxyde de titane de 0,1 à 2 % de préférence 0,20 %
Sorbitolde 0, 5 à 5 % de préférence 1 % Triéthanolamine de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 %
Stéarate de glycéry! et Polyéthylène glycol-100 de 1 à 5% de préférence 2 %
Stéarate de glycéryl de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 %
Acide stéarique de 0,5 à 5 % de préférence 1% Huiles végétales et huiles minérales de 5 à 15% de préférence 8 % Filtre solaire (cinnamate) de 0,5 à 10 % de préférence 5 % Antioxydant de 0,01 à 0,1 % de préférence 0,07 % Gélifiant acrylique de 0,1 à 1% de préférence 0,10 % Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 % de préférence 0,80 % Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,40 % Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 %, de préférence 0,001%
Shampooing réparateur antiradicalaire Eau QSP 100 %
Cocamidopropyl bétaïne 15 à 20 %
Alkyl éther sulfates 10 à 15 %
Caprypyl/Capryl glucoside 2 à 10 %
Cocamide DEA 2 à 4 % Glycérine 1 à 5 %
PEG-120 Méthyl Glucose Dioléate 1 à 5 %
Parfum 0,2 à 1 %
Conservateur 0,05 à 0,8 %
EDTA 0,05 à 0,1 % Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 % Masque capillaire
Eau QSP 100 %
PEG-6 Stéarate + Ceteth-20 + Glycéryl stéarate + Steareth-20 5 à 10 %
Alcool cétylique 2 à 5 % Quaternium-80 1 à 5 %
Beurre de Karité 1 à 5 %
Huiles minérales et esters émollients 1 à 5 %
Glycérine 1 à 5 %
Diméthicone copolyol 1 à 3 % Parfum 0,1 à 1 %
Conservateur 0,1 à 0,7 %
Carbomer 0,05 à 0,5 % Triéthanolamine 0,05 à 0,5 %
Radamaea montana {extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 %
Crème de jour protectrice Eau QSP 100 %
Esters émollieπts 10 à 15 %
Glycéryl stéarate et PEG-100 stéarate 4 à 6 %
Butylène Glycol 2 à 5 %
Huile de germes de Blé 2 à 5 % Alcool cétylique 1 à 5 %
Diméthicone 1 à 4 %
Polyméthyl méthacrylate 0,5 à 2 %
Parfum 0,3 à 1 %
Conservateur 0,1 à 0,8 % Carbomer 0,05 à 0,5 %
Triéthanolamine 0,05 à 0,5 %
Butyl Hydroxy Toluène 0,05 à 0,1 %
Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 %

Claims

REVENDICATIONS
1 - Utilisation d'un extrait de Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, l'extrait de
Radamaea montana étant utilisé en tant qu'agent anti-oxydant.
2 - Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est également utilisé en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase.
3 - Utilisation selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs.
4 - Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des feuilles ou des graines.
5 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités.
6 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en flavonoides et dérivés. 7 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en xantones et dérivés.
8 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'extrait utilisé comprend au moins un composé choisi parmi : - 6-C-giucosyl-apigénine (isovitexine) de formule (I) :
Figure imgf000034_0001
(I) 8-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) :
Figure imgf000035_0001
2-C-β-D-glucopyranosyl-l,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) :
Figure imgf000035_0002
- 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) :
Figure imgf000035_0003
amentoflavone de formule (V) :
Figure imgf000035_0004
l,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prénylxanthone de formule (VI)
Figure imgf000035_0005
13 14 (VI) - pyranoamentoflavone de formule (VII)
Figure imgf000036_0001
- 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII) :
Figure imgf000036_0002
6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone de formule (IX)
Figure imgf000036_0003
12" 13"
(IX) acide 13-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,7,ll- triméthyl(2E/4E,6E/8E,10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) :
Figure imgf000036_0004
acide 17-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15- tetraméthyl(4E/6E,8E,10E/12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) :
Figure imgf000037_0001
- 13[(lR,2R)]-l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl]-2,7,ll-triméthyl ,(2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexaenal de formule (XII) :
Figure imgf000037_0002
acide 17-(l,2,4-trihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll,15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) :
Figure imgf000037_0003
9 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l'extrait représente de 0,00001% et 10% (m/m), préférentiellement entre 0,0001% et 1% (m/m) de la composition.
10 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme galénique choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les shampoings, les onguents et les produits à pulvériser.
11 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'extrait est incorporé à la composition sous forme sèche obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux.
12 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est combiné à un ou plusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique.
13 - Composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique comprenant un extrait de Radamaea montana utilisé en tant qu'agent antioxydant.
14 - Composition selon la revendication 13 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est également utilisé en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase.
15 - Composition selon la revendication 13 ou 14 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs. 16 - Composition selon la revendication 15 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des feuilles ou des graines.
17 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 16, caractérisée en ce l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités.
18 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 17, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en flavonoides et dérivés.
19 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 18, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en xantones et dérivés. 20 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, caractérisée en ce que l'extrait utilisé comprend au moins un composé choisi parmi :
- 6-C-glucosyl-apigénine (isovitexine) de formule (I) :
Figure imgf000038_0001
(I) - 8-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) :
Figure imgf000039_0001
- 2-C-β-D-glucopyranosyl-l,3,6/7-tétrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) :
Figure imgf000039_0002
- 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) :
Figure imgf000039_0003
amentoflavone de formule (V) :
Figure imgf000039_0004
- l,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prénylxanthone de formule (VI)
Figure imgf000039_0005
1 3 14 (VI) - pyranoamentoflavone de formule (VII)
Figure imgf000040_0001
- 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII)
Figure imgf000040_0002
- 6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone de formule (IX) :
Figure imgf000040_0003
12" 13
(IX) acide ^-(l^-dihydroxy-Σ^^-triméthylcyclohexyl)^,?,!!- triméthyl(2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) :
Figure imgf000040_0004
acide îy-tl^^Tihydroxy^^βHriméthylcyclohexyO^AllΛS- tetraméthyl(4E/6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) :
Figure imgf000041_0001
- 13[(lR,2R)]-l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcydohexyl]-2,7,ll-triméthyl ,(2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexaenal de formule (XII) :
Figure imgf000041_0002
acide ^-(l^-trihydroxy^ΛβHriméthylcyclohexyO^ΛlMS- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) :
Figure imgf000041_0003
21 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 20, caractérisée en ce que l'extrait représente de 0,00001% et 10% (m/m), préférentiellement entre 0,0001% et 1% (m/m) de la composition.
22 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 21, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme galénique choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les onguents et les produits à pulvériser.
23 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 22, caractérisée en ce que l'extrait est incorporé à la composition sous forme sèche obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux.
24 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 23 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est combiné à un ou plusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique.
25 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 24 caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une composition anti- radicalaire, d'une composition pour prévenir le vieillissement cutané, d'une composition pour la protection solaire, d'une composition de soin après exposition solaire, d'un shampoing réparateur aπti-radicalaire, d'un masque capillaire, d'une crème de jour protectrice, d'une crème pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou d'une crème pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau.
26 - Composé choisi parmi : l'acide 17-(l,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2/6,ll,15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E/14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) :
Figure imgf000042_0001
l'acide 17-(l,2,4-trihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,ll/15- tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) :
Figure imgf000042_0002
27 - Utilisation d'un composé selon la revendication 26 pour la préparation d'un médicament ou d'une composition cosmétique ou dermatologique.
28 - Utilisation d'un composé selon la revendication 27 caractérisé en ce que le composé est utilisé en tant qu'agent anti-oxydant.
29 - Utilisation d'un composé selon la revendication 27 caractérisé en ce que le composé est utilisé en tant qu'inhibiteurs de la tyrosinase. 30 - Médicament, composition cosmétique ou dermatologique comprenant un composé selon la revendication 26.
31 - Utilisation d'une plante Radamaea montaπa pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique.
32 - Utilisation d'une plante Radamaea montana pour la production d'un agent anti-oxydant.
33 - Utilisation d'une plante Radamaea montana pour la production d'un inhibiteur de la tyrosinase.
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