WO2009019335A2 - Composition thermorésistante pour animaux comprenant un mélange enzymatique - Google Patents

Composition thermorésistante pour animaux comprenant un mélange enzymatique Download PDF

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WO2009019335A2
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fermentation
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Francis Pierre
Nicolas Besse
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    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry

Definitions

  • Thermoresistant composition for animals comprising an enzymatic mixture
  • the present invention relates to a composition in powder form comprising a mixture of enzymes.
  • Enzymes have long been used in a variety of industrial applications, including animal nutrition. In this case, the enzymes improve the digestibility of the plant sources and thus allow the farm animals to digest their food more efficiently.
  • Enzymes are produced by a wide variety of organisms: plants, animals, and especially microorganisms, that is to say any mono or multicellular organism, in particular chosen from bacteria, yeasts and fungi.
  • the patent application EP1007743 describes in particular a mixture of enzymes obtained from Penicillium funiculosum, shaped in liquid form or in powder form and intended for animal feed.
  • Enzymes are added to foods in liquid form by spraying or they are incorporated into food in a mixer and the food is granulated in a press.
  • a large proportion of animal feeds undergo thermal treatment for reasons of hygiene (microbiological quality) or ease of consumption by animals (presentation in the form of crumbs or granules).
  • These heat treatments are based on the use of steam at higher or lower temperature and possibly associated with agglomeration (pellet press).
  • enzymes are proteins that are inherently temperature sensitive. There is a loss of enzymatic activity when high temperatures are used.
  • An object of the present invention is to provide a composition in the form of a powder comprising an enzymatic mixture which is heat-resistant.
  • thermoresistant animal composition in the form of a granular powder
  • a thermoresistant animal composition in the form of a granular powder
  • a support selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and maize cobs
  • a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, fermented gums and starches and derivatives.
  • the liquid mixture of at least two enzymes is obtained from the fermentation of a single microorganism.
  • the mixture in liquid form of at least two enzymes is obtained from the fermentation of two different microorganisms.
  • the mixture in liquid form of at least two enzymes is a filtered and concentrated fermentation broth obtained from at least one microorganism.
  • the composition comprises: a) from 15 to 50% by weight of said mixture of at least two enzymes, b) from 25 to 60% by weight of said support, c) from 25 to 60% by weight of said coating.
  • the at least two enzymes are selected from the group consisting of a xylanase, a ⁇ -glucanase, a cellulase, a pectinase, a phytase and a protease.
  • the at least two enzymes are chosen from the group consisting of phytase, endo-1,4- ⁇ -xylanase, ⁇ -arabinofuranosidase, ⁇ -xylosidase, feruloyl esterase, endo-1, ⁇ -arabinanase, endo-1,3 (4) - ⁇ -glucanase, laminarinase, endo-1,4- ⁇ -glucanase, cellobiohydrolase, ⁇ -glucosidase, polygalacturonase, pectin esterase, rhamnogalacturonase, aspartic protease, metallo protease, endo-1, 4- ⁇ -mannanase, ⁇ -mannosidase and ⁇ -galactosidase.
  • the microorganism is Penicillium funiculosum deposited at I 1 IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) on 24 March 1998 under number IMI 378536.
  • the coating is carboxymethylcellulose or ethylcellulose.
  • the composition can be obtained by the process comprising the following steps: a) cosechage of the following compounds: a support selected from the group consisting of wheat flour, starch , gypsum, maltodextrin and corn cobs, and
  • an intermediate base a mixture in liquid form of at least two enzymes, so as to obtain an intermediate base
  • a coating selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan , sodium alginate, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives
  • the present invention also relates to a nutritional additive for animals in powder form comprising: a) a liquid mixture of at least two enzymes, b) a carrier selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and maize cobs, and (c) a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, fermented gums and starches and derivatives.
  • a nutritional additive for animals in powder form comprising: a) a liquid mixture of at least two enzymes, b) a carrier selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and maize cobs, and (c) a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, fermented gums and starches and derivatives.
  • the present invention also relates to an animal feed characterized in that it comprises a nutritional base for animals and a nutritional additive according to claim 10.
  • the present invention relates to the use of a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives for preparing a nutritional additive for animals comprising a mixture of at least two enzymes obtained from the fermentation of a single microorganism.
  • the coating agent is carboxymethylcellulose.
  • thermoresistant animal composition in the form of a granular powder.
  • heat resistant composition is meant a composition that is heat resistant.
  • One of the important properties of the composition according to the present invention is to be resistant to heat. Indeed, the composition according to the present invention will undergo a heat treatment intended on the one hand to obtain a microbiological quality and on the other hand to shape the composition to be more easily used by farmers and consumable by animals .
  • pelletizing process Pelleting is an agglomeration of food in the form of small granules. These granules are not friable, unlike agglomerates. After pelleting, pellets are obtained. The pellets are granules of size 1.5 to 6 mm in diameter and 1.5 to 4 cm in length.
  • pellitization use is made, for example, of pelletizing machines whose operation is based on the use of steam at higher or lower temperature.
  • the composition is resistant to a temperature greater than 80 ° C., 85 ° C. or 90 ° C.
  • granular powder is meant a powder which has a certain particle size.
  • the granulometric requirements of the composition obtained are as follows:
  • the median diameter of the particles of the product is between 150 and 400 ⁇ m.
  • median diameter is meant the particle size of the product at which 50% of the sample is smaller and 50% of the sample smaller.
  • composition of the present invention is intended for animals.
  • composition according to the present invention is suitable for use in animal nutrition.
  • animal in particular livestock and especially grazing animals (including cattle raised for meat, milk, cheese and leather, sheep raised for meat, wool and cheese).
  • grazing animals including cattle raised for meat, milk, cheese and leather, sheep raised for meat, wool and cheese.
  • composition adapted for use in animal nutrition means a composition whose characteristics are such that it is suitable for animal nutrition.
  • the essential characteristics for use in animal nutrition include the pH and temperature at which the composition comprising the enzyme mixture is active. Indeed, the pH of the digestive system of animals is acidic and it is essential that the enzymes remain active at this pH, in order to maintain their activities. According to one embodiment of the present invention, the composition retains the expected enzymatic activities at an acidic pH, for example less than 7, preferably less than 5.
  • thermoresistant animal composition in the form of a granular powder
  • a thermoresistant animal composition in the form of a granular powder
  • a support selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and corn cobs
  • a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives.
  • Enzymes are produced by a wide variety of organisms: plants, animals, and especially microorganisms.
  • microorganism is meant any mono or multicellular organism, in particular chosen from bacteria, yeasts and fungi.
  • the yeasts are chosen from, for example, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisae, Yarrowia lipolytica and Schwanniomyces occidentalis.
  • the fungi are for example chosen from Aspergillus, Trichoderma and Penicilliums, preferentially from Penicillium funiculosum, Trichoderma reesei, Aspergillus niger, Aspergillus awamori, Aspergillus kawachii and Trichoderma koningii.
  • the liquid mixture of at least two enzymes is obtained from the fermentation of a single microorganism.
  • the mixture in liquid form of at least two enzymes is a filtered and concentrated fermentation broth obtained from a single microorganism.
  • the microorganism used is derived from a genetically unmodified isolated microorgansime strain producing at least two enzyme activities.
  • it may be a host organism transformed with a polynucleotide, an expression cassette and / or a vector.
  • the microrganism is a strain of Penicillium funiculosum in which an enzyme is expressed or overexpressed.
  • the host organism is a strain of Debaryomyces castellii in which one expresses or over- expresses an enzyme.
  • the host organism is a strain of Ruminococcus gnavus in which an enzyme is expressed or over-expressed.
  • the microorganism is Penicillium funiculosum deposited at I 1 IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) March 24, 1998 under the number IMI 378536.
  • the composition comprises from 15 to 50% by weight of said mixture of at least two enzymes, preferably from 20 to 40% by weight.
  • the thermoresistant animal composition in the form of a granular powder comprises a liquid mixture of at least three enzymes, four enzymes, eight enzymes or ten enzymes.
  • the at least two enzymes are selected from the group consisting of a xylanase, a ⁇ -glucanase, a cellulase, a pectinase, a phytase and a protease.
  • the at least two enzymes are chosen from the group consisting of phytase, endo-1,4- ⁇ -xylanase, ⁇ -arabinofuranosidase, ⁇ -xylosidase, feruloyl esterase, endo-1, ⁇ -arabinanase, endo-1,3 (4) - ⁇ -glucanase, laminarinase, endo-1,4- ⁇ -glucanase, cellobiohydrolase, ⁇ -glucosidase, polygalacturonase, pectin esterase, rhamnogalacturonase, aspartic protease, metallo protease, endo-1, 4- ⁇ -mannanase, ⁇ -mannosidase and ⁇ -galactosidase.
  • the present composition also comprises a support.
  • the carrier is selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and corn stalks.
  • the support is present in the composition at a content of between 25 and 60% by weight of the heat-resistant composition in the form of a granular powder.
  • the present composition finally comprises an enrobant.
  • the coating agent is chosen from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives. Vegetable gums are exudates of plants that solidify by desiccation. As an indication of the gums that can be used in the present invention, mention may be made of gums: gum arabic, gum karaya, gum tragacanth, guar gum, xanthan gum.
  • starches and derivatives are meant any polysaccharide formed from the combination of two polymers: amylose and amylopectin.
  • the starch can be in the form of powder or in the form of pits. As an indication, it may be native wheat starch, native corn starch, native rice starch or potato starch. It can also be the same physically treated starches, for example pregelatinized.
  • the coating is carboxymethylcellulose or ethylcellulose.
  • the coating is present in the heat-resistant composition in the form of a granular powder at a content of between 25 and 60% by weight, preferably between 30 and 58% by weight.
  • the composition can be obtained by the process comprising the following steps: a) cosechage of the following compounds:
  • a support selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and corn stalks, and
  • an intermediate base a mixture in liquid form of at least two enzymes, so as to obtain an intermediate base
  • a coating selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan , sodium alginate, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives
  • the coating identical or different, is used during two successive stages of the process.
  • the composition in powder form has good flowability.
  • An example of a measurement protocol to evaluate the flowability of the powder is the determination of the angle of repose. This method is based on the determination of the angle at the base of the falling cone obtained by passing the sample through a special funnel placed at a conventional height, above a perfectly flat and horizontal plate. This method requires the following equipment: glassware and laboratory equipment, stainless steel funnel, whose base has a diameter (d) inside of 6 mm (the funnel is fixed on the support), stainless steel plate engraved with 4 straight lines forming an angle of 45 ° between them and passing directly above the center of the funnel, stainless steel support fixed to the plate.
  • the method consists in adjusting the height (H) between the plate and the base of the funnel to 40 mm, check the plumb center of the funnel with the cross point of the engraved lines, pour the powder in the funnel , stop the feed when the top of the cone touches the base of the funnel, draw on each engraved line, a line at the base of the formed silica cone, remove the silica and measure the distance separating two lines of the same line for each of them.
  • the composition in powder form has an angle of repose of between 20 ° and 50 °, preferably between 20 ° and 45 °.
  • the composition in powder form has a compressibility index of between 0 and 40%, preferably between 0 and 20%.
  • the powder compositions of the present invention may further comprise an active ingredient different from the enzyme mixture or more than one active ingredient.
  • active ingredient is intended to mean any substance having an established physiological activity in the animal, especially in the category of active ingredient according to the invention, food supplements, etc.
  • Food supplements for animals are products intended to be ingested, in addition to of the current diet, in order to overcome the insufficiency of the daily contributions of certain compounds It is for example known, generally speaking, to supplement the food rations of the farm animals with active ingredients, so as to increase the performance zootechnics of raised animals, which may include vitamins, mineral salts, amino acids, trace elements, hormones or antibiotics.
  • the process for the preparation of the aforementioned composition comprises the following steps: a) cosechage of the following compounds: at least one support selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and corn stalks , and
  • a coating agent selected from the group consisting of cellulose; and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, fermented gums and starches and derivatives
  • the first step of the process therefore consists of a co-drying of the enzyme mixture which is in liquid form with the support according to the invention.
  • This step can be carried out continuously on a spray drying tower. The caging takes place at a non-degrading temperature.
  • the powder must be kept at a temperature below 45 ° C. This step leads to a significant portion of the enzymatic mixture in liquid form being retained on the support. A microgranulated powder with a size of between 50 and 250 ⁇ m is obtained. The moisture of the powder is less than 20%.
  • the second stage of the process consists of a granulation by impregnation of the intermediate base with a coating selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives.
  • a coating selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives.
  • it is a wet granulation which consists in carrying out in a mixer, also called a granulator, equipped with a liquid addition system, densification of the particles associated with granulation to give the particles cohesion. .
  • This step can be carried out continuously or discontinuously.
  • the third step of the process consists in depositing a sufficient film of a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives.
  • a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, vegetable gums, gums obtained by fermentation and starches and derivatives.
  • This coating may be the same as that used during the granulation step or it may be different.
  • This step can be carried out continuously or discontinuously, for example on a fluidized bed dryer. The amount of coating depends on the final particle size of the desired product.
  • the fourth step is to dry the final product. This drying can be carried out continuously on a fluidized bed or in batch, so that the water content of the product is less than 10%, preferably 8%.
  • This step consists of drying the granulated powder continuously or discontinuously. It is also possible to add a sieving step between the second and the third step or after the optional step of drying the granulated powder.
  • the pelletization process comprises the following steps: a) the heat-resistant composition in the form of a granular powder and, on the other hand, the nutritional base are fed into a feeder, b) the mixture is heated to a temperature of between 60 and 100 ° C., preferably between 70 ° C. and 100 ° C. C. and 90.degree. C., c) the said composition is pelletized in a pelletizing machine, and d) the pellets obtained are cut to the desired length, e) the pellet obtained in step d) is dried and cooled.
  • the present invention also relates to a nutritional additive in powder form comprising: a) a liquid mixture of at least two enzymes, b) a support selected from the group consisting of wheat flour, starch, gypsum, maltodextrin and corn cobs, and c) a coating agent selected from the group consisting of cellulose and its derivatives, chitin, carrageenan, sodium alginate, vegetable gums, fermented gums and starches and derivatives.
  • the present invention also relates to an animal feed characterized in that it comprises a nutritional base for animals and a nutritional additive as defined above.
  • the nutritional base includes, for example, a mixture of wheat, soybean meal, extruded soybeans, palm oil, calcium carbonate, dicalcium phosphate, salt, a premix containing methionine.
  • An object of the present invention also relates to the use of carboxymethylcellulose for preparing a nutritional additive for animals comprising a mixture of at least two enzymes obtained from the fermentation of a single microorganism.
  • Another object of the present invention is the use of carboxymethylcellulose to prepare a nutritional additive for animals intended to improve the growth performance of the animals, for example to improve the consumption index.
  • Figure 1 shows the respective particle sizes of a powder of the prior art and a powder according to the present invention; on the abscissa, the diameter in ⁇ m; on the ordinate, the percentage in the product.
  • a composition according to the invention has been prepared according to the process of the present invention. It is in the form of a powder and contains 55% of carboxyl methylcellulose, 25% of wheat flour and 20% of concentrated filtered fermentation mash obtained from the fermentation of Penicillium funiculosum IMI 378536 which contains 19 enzymatic activities.
  • the micro granulated powder obtained at this stage has a finely powdered character less than 63 microns, which makes it a product capable of being handled in a second phase.
  • the average particle size in D (v, 0.5) is 117 microns and the moisture is 7.5%.
  • the product obtained at the end of this first stage is called the intermediate base.
  • the objective of this step is to obtain particles of the order of 150 to 200 ⁇ m on average, with a humidity of 14%, while maintaining the product at less than 45 ° C so as not to deteriorate the enzyme activities .
  • the product is dried on a fluid bed dryer at a temperature of 55 ° C at the inlet and a temperature of 25 ° C at the outlet, so as not to deteriorate the enzyme activities.
  • the intermediate base before coating is then at 7 or 8% humidity.
  • the amount of solution deposited is 0.25 kg of CMC solids per kg of solids content of the product to be coated.
  • the powder obtained at this stage has an average particle size of 300 to 400 ⁇ m and a humidity of 10 to 11%.
  • the final product is then dried continuously on a fluidized bed or in batch, the object in this case is to reduce the product to a water content of less than 10% and preferably less than 8%.
  • the final product obtained has a water content of 7.6% and a density of 450 g / l.
  • the particle size was measured respectively for the following compositions:
  • the first composition is the product ROVABIO TM EXCEL AP which is in powder form.
  • the second composition was prepared according to the method described above. It is therefore a composition according to the invention which contains 55% of carboxyl methylcellulose, 25% of wheat flour and 20% of concentrated filtered fermentation must obtained from the fermentation of Penicillium funiculosum IMI 378536.
  • the particle size of the second composition has the advantage of having a smaller amount of particles than the product ROVABIO TM EXCEL AP (composition in the form of granular powder of the prior art). This small amount of small particles avoids the problems of product loss, cross-contamination between the production system and the products themselves, the use of filtration and ventilation systems and adverse health effects. See Figure 1.
  • the compressibility of the ROVABIO TM EXCEL AP product is 22.1%, while the compressibility of the second composition is 3.4%.
  • the aim is to test to granulation four enzyme preparations added in a growing poultry food base.
  • the test item is the product ROVABIO TM EXCEL AP which is in powder form and contains 19 enzymatic activities. This product consists of 20% wheat flour and 80% concentrated filtered fermentation must obtained from the fermentation of Penicillium funiculosum IMI 378536 which contains 19 enzymatic activities.
  • the second composition was prepared according to the process described in Example 1.
  • the third composition was prepared according to the process described in Example 1. It is in the form of the powder of particle size mentioned above and contains 35% of carboxyl methylcellulose, 45% of wheat flour and 20% of filtered fermentation wort. concentrate obtained from the fermentation of Penicillium funiculosum IMI 378536 which contains 19 enzymatic activities.
  • the fourth composition was prepared according to the method described in Example 1. 17
  • Two mixtures of 60 kg of poultry feed are prepared using a horizontal-axis blade mixer running at 60 rpm. The duration of each mixture is 2 minutes. Each mixed batch is drained into a rectangular tray before bagging. A representative sample of about 1 kg of each mixture is taken by grouping 20 samples obtained by quartering in the rectangular tray. See the table of blends below.
  • the granulation tests are carried out on a flat-die laboratory press (KAHL 14-175 press of 3 kW).
  • the press die chosen for testing will have channels of 4 mm in diameter and 24 mm in thickness (compression ratio: 6). 4. Drying - Cooling
  • a laboratory chiller dryer is used to dry and cool hot pellet samples collected at the die outlet.
  • the cooling drying time is at least 5 minutes for a hot granular charge of about 3.5 kg per cooler. A sample of about 500g representative of each production is taken.
  • the measurements of humidity and residence time in the die are made from samples taken during the stabilized phase of each test.
  • the test is based on the enzymatic hydrolysis of ⁇ -glucan in barley, a ⁇ -1, 3 (4) -glucan.
  • the products of the reaction are colorimetrically determined by measuring the increase of the reducing groups with 3,5-acid.
  • the enzymatic reaction is stopped by the addition of 2 ml of a DNS solution (1% (w / v) 3,5-dinitrosalicylic acid, 1.6% (w / v) NaOH, 30% ( m / V) of potassium tartrate and sodium (+) in distilled water).
  • a DNS solution 1% (w / v) 3,5-dinitrosalicylic acid, 1.6% (w / v) NaOH, 30% ( m / V) of potassium tartrate and sodium (+) in distilled water.
  • the solution is homogenized and then placed in a water bath boiling at 95 ° C minimum and then cooled in a bath at room temperature (for 5 minutes).
  • a unit of endo-1,3 (4) - ⁇ -glucanase activity is defined as the amount of enzyme that produces 1 ⁇ mol glucose equivalent per minute per gram of product, under the conditions of the test (pH 5.0 and 50 0 C).
  • the test is based on the enzymatic hydrolysis of birch xylan, a xylose polymer containing ⁇ -D-1, 4 bridges.
  • the products of the reaction are colorimetrically determined by measuring the increase of the reducing groups with 3,5-dinitrosalicylic acid.
  • the reducing sugar concentration available after enzymatic hydrolysis is determined using a standard xylose curve whose absorbance is measured at 540 nm. The calculated enzymatic activity is then expressed in xylose equivalents.
  • a solution containing 1 ml of 1% (w / v) birch xylan solution in 0.1 M sodium acetate buffer at pH 5.0 and 1 ml of the appropriate dilution solution of the enzyme is incubated at 50 0 C for 10 minutes.
  • the enzymatic reaction is stopped by the addition of 2 ml of a solution of DNS (1% (w / v) 3,5-dinitrosalicylic acid, 1, 6% (w / v) NaOH, 30% ( m / V) of potassium tartrate and sodium (+) in distilled water).
  • DNS 1% (w / v) 3,5-dinitrosalicylic acid, 1, 6% (w / v) NaOH, 30% ( m / V) of potassium tartrate and sodium (+) in distilled water.
  • the solution is homogenized and then placed in a water bath boiling at 95 ° C minimum and then cooled in a bath at room temperature (for 5 minutes).
  • a unit of endo-1, 4- ⁇ -xylanase activity is defined as the amount of enzyme that produces 1 ⁇ mol xylose equivalent per minute per gram of product, under the conditions of the test (pH 5). , 0 and 50 0 C). 6.3 Xylanase by the viscometry method
  • Endo-1,4- ⁇ -xylanase hydrolyzes the xyloside bridges of xylan.
  • the assay is based on the enzymatic hydrolysis of the xylose bridges of a wheat arabinose solution, ⁇ -1, 4-xylan polysaccharide substituted with arabinose.
  • the enzymatic activity is proportional to the viscosity reduction of a wheat arabinoxylan solution in the presence of the enzyme to be assayed.
  • a unit of endo-1, 4- ⁇ -xylanase activity is defined as the amount of enzyme that will hydrolyze the substrate, reducing the viscosity of the solution, to give a change in the relative fluidity of 1 unit without dimensions. minute under the conditions of the analysis: pH 5.5 and 30 0 C.
  • the regulation instructions of the press are as follows: Flow rate: about 41 kg / h
  • the animals used are male chicks of Ross PM3 strain.
  • test items contain enzymatic activities potentially capable of improving the digestibility of a wheat and corn feed in chicken.
  • Feeding plan The feeding plan was the following during the test period.
  • compositions according to the invention Inv 1, Inv 2 and Inv 3
  • the Rovabio TM Excel AP compositions AP1, AP2 and AP3

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Abstract

La présente invention concerne une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe, consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.

Description

Composition Thermorésistante pour animaux comprenant un mélange enzymatique
La présente invention concerne une composition sous forme de poudre comprenant un mélange d'enzymes.
Les enzymes sont utilisées depuis longtemps dans diverses applications industrielles, et notamment en nutrition animale. Dans ce cas, les enzymes améliorent la digestibilité des sources végétales et donc permettent aux animaux d'élevage de digérer leurs aliments plus efficacement.
Les enzymes sont produites par une grande variété d'organismes : plantes, animaux, et surtout microorganismes, c'est-à-dire tout organisme mono ou pluricellulaire, en particulier choisi parmi les bactéries, les levures et les champignons. La demande de brevet EP1007743 décrit notamment un mélange d'enzymes obtenues à partir de Pénicillium funiculosum, mis en forme sous forme liquide ou sous forme de poudre et destiné à l'alimentation animale.
Les enzymes sont ajoutées aux aliments sous forme liquide par pulvérisation ou elles sont incorporées dans les aliments en mélangeuse puis les aliments sont granulés dans une presse. Une partie importante des aliments pour animaux subissent un -traitement thermique pour des raisons d'hygiène (qualité microbiologique) ou de facilité de consommation par les animaux (présentation sous forme de miette ou en granulé). Ces traitement thermiques reposent sur l'utilisation de vapeur à température plus ou moins élevée et associée éventuellement à une agglomération (presse à granuler).
Il s'avère néanmoins que les enzymes sont des protéines qui sont par nature sensibles à la température. On constate une perte d'activité enzymatique lorsque des hautes températures sont utilisées.
Un objet de la présente invention est de proposer une composition sous forme de poudre comprenant un mélange enzymatique qui soit thermorésistante. Description de l'invention
La présente invention concerne une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.
Selon un mode de réalisation, le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Selon un autre mode de réalisation le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation de deux microorganismes différents. Avantageusement le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré et concentré obtenu à partir d'au moins un microorganisme.
Selon un autre mode de réalisation la composition comprend : a) de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, b) de 25 à 60 % en poids dudit support, c) de 25 à 60 % en poids dudit enrobant.
Selon un mode de réalisation, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une β-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase. Avantageusement, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1 ,4-β- xylanase, l'α-arabinofuranosidase, la β-xylosidase, la feruloyl estérase, l'endo- 1 ,5 α-arabinanase, l'endo-1 ,3(4)-β-glucanase, la laminarinase, l'endo-1 ,4-β- glucanase, la cellobiohydrolase, la β-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1 ,4-β-mannanase, la β-mannosidase et l'α-galactosidase.
Selon un mode de réalisation de l'invention, le microorganisme est Pénicillium funiculosum déposé à I1IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536.
Selon un mode de réalisation de l'invention, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose.
Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition est susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants : - un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et
- un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d). séchage.
La présente invention concerne également un additif nutritionnel pour animaux sous forme de poudre comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.
La présente invention concerne aussi un aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel selon la revendication 10. Enfin, la présente invention concerne l'utilisation d'un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés pour préparer un additif nutritionnel pour animaux comprenant un mélange d'au moins deux enzymes obtenues à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Avantageusement, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose.
Composition La présente invention concerne donc une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse.
Par "composition thermorésistante", on entend une composition qui résiste à la chaleur. Une des propriétés importantes de la composition selon la présente invention est d'être résistante à la chaleur. En effet, la composition selon la présente invention va subir un traitement thermique destiné d'une part à obtenir une qualité microbiologique et d'autre part à mettre en forme la composition afin d'être plus facililement utilisable par les éleveurs et consommable par les animaux. On parle de procédé de pelletisation. La pelletisation est une agglomération d'aliments ss forme de petits granulés. Ces granulés ne sont pas friables, à la différence des agglomérats. Après pelletisation, on obtient des pellets. Les pellets sont des granulés de taille de 1 ,5 à 6 mm de diamètre et de 1 ,5 à 4 cm de longueur. Pour la pellitisation, on utilise par exemple des presses à granuler dont le fonctionnement est basé sur l'utilisation de vapeur à température plus ou moins élevée. Par exemple, la composition résiste à une température supérieure à 800C, 85°C ou 900C.
Par "poudre granuleuse", on entend une poudre qui présente une certaine granulométrie.
Selon la présente invention, les exigences granulométriques de la composition obtenue sont les suivantes :
Figure imgf000007_0001
De manière avantageuse, le diamètre médian des particules du produit se situe entre 150 et 400 μm. Par "diamètre médian", on entend la taille des particules du produit à laquelle 50 % de l'échantillon a une taille inférieure et 50 % de l'échantillon à une taille inférieure.
La composition de la présente invention est destinée aux animaux. Autrement dit, la composition selon la présente invention est adaptée à l'utilisation en nutrition animale.
Par "animal", on entend plus particulièrement les animaux d'élevage et notamment les animaux de pacage (notamment les bovins élevés pour la viande, le lait, le fromage et le cuir ; les ovins élevés pour la viande, la laine et le fromage ; les caprins ; les porcins), les lapins, les volailles (les poulets, les poules, les dindes, les canards, les oies et autres), les animaux aquatiques (par exemple les poissons, les crevettes, les huîtres et les moules), les animaux de loisir et de compagnie (notamment le cheval, le chien, le chat ).
Les bovins, ou bovines, constituent une sous-famille des bovidés, mammifères ruminants polygastriques, qui comprend plusieurs espèces importantes d'animaux d'élevage (races laitières, races à viande et races mixtes).
On entend par "composition adaptée à l'utilisation en la nutrition animale", une composition dont les caractéristiques sont telles qu'elle convient pour la nutrition animale. Les caractéristiques essentielles à une utilisation en nutrition animale sont notamment le pH et la température auxquels la composition comprenant le mélange d'enzymes est active. En effet, le pH du système digestif des animaux est acide et il est donc essentiel que les enzymes reste active à ce pH, ce afin de conserver leurs activités. Selon un mode de réalisation de la présente invention, la composition conserve les activités enzymatiques attendues à un pH acide, par exemple inférieur à 7, de préférence inférieur à 5.
La présente invention concerne donc une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.
Les enzymes sont produites par une grande variété d'organismes : plantes, animaux, et surtout microorganismes. Par "microorganisme", on entend tout organisme mono ou pluricellulaire, en particulier choisi parmi les bactéries, les levures et les champignons. De manière avantageuse, les levures sont choisies parmi par exemple Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisae, Yarrowia lipolytica et Schwanniomyces occidentalis. Les champignons sont par exemple choisis parmi les Aspergillus, les Trichoderma et les Pénicilliums, préférentiellement parmi Pénicillium funiculosum, Trichoderma reesei, Aspergillus niger, Aspergillus awamori, Aspergillus kawachii et Trichoderma koningii.
Selon un mode de réalisation, le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Avantageusement le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré et concentré obtenu à partir d'un seul microorganisme.
Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, le microorganisme utilisé provient d'une souche de microorgansime à l'état isolée non modifiée génétiquement produisant au moins deux activités enzymatiques. Alternativement, il peut s'agir d'un organisme hôte transformé avec un polynucléotide, une cassette d'expression et/ou un vecteur.
Dans un mode de réalisation de l'invention, le microrganisme est une souche de Pénicillium funiculosum dans laquelle on exprime ou sur- exprime une enzyme. Dans un autre mode de réalisation, l'organisme hôte est une souche de Debaryomyces castellii dans laquelle on exprime ou sur- exprime une enzyme. Dans un autre mode encore de réalisation, l'organisme hôte est une souche de Ruminococcus gnavus dans laquelle on exprime ou sur-exprime une enzyme.
Selon un mode de réalisation de l'invention, le microorganisme est Pénicillium funiculosum déposé à I1IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536.
Selon un autre mode de réalisation, la composition comprend de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, préférentiellement de 20 à 40% en poids.
Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, la composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprend un mélange sous forme liquide d'au moins trois enzymes, quatre enzymes, huit enzymes ou dix enzymes. Selon un mode de réalisation, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une β-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase. Avantageusement, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1 ,4-β-xylanase, l'α-arabinofuranosidase, la β-xylosidase, la feruloyl estérase, l'endo-1 ,5 α-arabinanase, l'endo-1 ,3(4)-β-glucanase, la laminarinase, l'endo-1 ,4-β-glucanase, la cellobiohydrolase, la β-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1 ,4-β-mannanase, la β-mannosidase et l'α-galactosidase. La présente composition comprend également un support. Le support est choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs. Le support est présent dans la composition à une teneur comprise entre 25 et 60 % en poids de la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse. La présente composition comprend enfin un enrobant. L'enrobant est choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Les gommes végétales sont des exsudats de plantes qui se solidifient par dessiccation. A titre indicatif des gommes pouvant être utilisées dans la présente invention, on peut citer les gommes suivantes : gomme arabique, gomme Karaya, gomme adragante, gomme guar, gomme xanthane.
Par "amidons et dérivés", on entend tout polysaccharide formé de l'association de deux polymères : l'amylose et l'amylopectine. Selon la présente invention, l'amidon peut se trouver sous forme de poudre ou sous forme d'empois. A titre indicatif, il peut s'agir d'amidon natif de blé, d'amidon natif de maïs, d'amidon natif de riz ou de fécule de pomme de terre. Il peut également s'agir des mêmes amidons traités physiquement, par exemple prégélatinisés.
Selon un mode de réalisation de l'invention, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose.
L'enrobant est présent dans la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse à une teneur comprise entre 25 et 60 % en poids, de préférence entre 30 et 58% en poids.
Selon un autre objet de la présente invention, la composition est susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants :
- un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et
- un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage. L'enrobant, identique ou différent, est utilisé au cours de deux étapes successives du procédé. Ceci conduit à une poudre présentant un aspect nouveau, dans laquelle l'enrobant se trouve à la fois à l'intérieur et à l'extérieur de la poudre granuleuse. Ceci confère à la poudre des propriétés avantageuses. La composition sous forme de poudre présente une bonne coulabilité. Un exemple de protocole de mesure permettant d'évaluer la coulabilité de la poudre est la détermination de l'angle de talus. Cette méthode repose sur la détermination de l'angle à la base du cône d'éboulement obtenu en faisant passer l'échantillon à travers un entonnoir spécial placé à une hauteur conventionnelle, au-dessus d'une plaque parfaitement plane et horizontale. Cette méthode nécessite l'appareillage suivant : verrerie et matériel de laboratoire, entonnoir en acier inoxydable, dont la base a un diamètre (d) intérieur de 6 mm (l'entonnoir se fixant sur le support), plaque en acier inoxydable gravée de 4 droites formant entre elles un angle de 45° et passant à l'aplomb du centre de l'entonnoir, support en acier inoxydable fixé à la plaque. La méthode consiste à ajuster la hauteur (H) entre la plaque et la base de l'entonnoir à 40 mm, vérifier l'aplomb de centre de l'entonnoir avec le point de croisement des droites gravées, verser la poudre dans l'entonnoir, arrêter l'alimentation quand le sommet du cône touche la base de l'entonnoir, tracer sur chaque ligne gravée, un trait à la base du cône de silice formé, éliminer la silice et mesurer la distance séparant deux traits d'une même ligne pour chacune d'elles. L'angle du Talus d'éboulement exprimé en degrés est donné par la formule :
Figure imgf000011_0001
dans laquelle : H : la hauteur du cône en mm (H = 40) d : diamètre intérieur de la base de l'entonnoir en mm (d = 6 mm) D : moyenne arithmétique des 4 mesures en mm α : angle de Talus en degré.
Selon la présente invention, la composition sous forme de poudre présente un angle de repos compris entre 20° et 50°, de préférence entre 20° et 45°.
Un autre exemple de protocole de mesure permettant d'évaluer la coulabilité de la poudre est la mesure de la compressibilité, selon la formule suivante : Compressibilité = %(densité tassée - densité non tassée) densité tassée
Selon la présente invention, la composition sous forme de poudre présente un index de compressibilité compris entre 0 et 40%, de préférence entre 0 et 20%. Les compositions sous forme de poudre de la présente invention peuvent en outre comprendre un principe actif différent du mélange d'enzymes ou plusieurs principes actifs.
Par "principe actif, on entend toutes substances possédant une activité physiologique établie chez l'animal. Entrent notamment dans la catégorie de principe actif selon l'invention les compléments alimentaires. Les compléments alimentaires pour animaux sont des produits destinés à être ingérés, en complément de l'alimentation courante, afin de pallier l'insuffisance des apports journaliers en certains composés. Il est par exemple connu, de manière générale, de complémenter les rations alimentaires des animaux d'élevage avec des principes actifs, de manière à augmenter la performance zootechnique des animaux élevés. Il peut notamment s'agir de vitamines, de sels minéraux, d'acides aminés, d'oligo-éléments, d'hormones ou d'antibiotiques.
Procédé de préparation de la composition sous forme de poudre granuleuse
Le procédé de préparation de la composition susmentionnée comprend les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants : - au moins un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et
- au moins un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes obtenues à partir d'un seul microorganisme moyennant quoi on obtient une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage.
La première étape du procédé consiste donc en un coséchage du mélange enzymatique qui se trouve sous forme liquide avec le support selon l'invention. Cette étape peut être réalisée en continu, sur une tour de séchage par atomisation. Le coséchage se déroule à une température non dégradante. La poudre doit être maintenue à une température inférieure à 45°C. Cette étape conduit à ce qu'une partie importante du mélange enzymatique sous forme liquide soit retenue sur le support. On obtient une poudre microgranulée de dimension comprise entre 50 et 250μm. L'humidité de la poudre est inférieure à 20%.
La deuxième étape du procédé consiste en une granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Il s'agit en l'espèce d'une granulation humide qui consiste à effectuer dans un mélangeur, également appelé granulateur, équipé d'un système d'addition de liquide, une densification des particules associée à une granulation pour donner la cohésion aux particules. Cette étape peut être réalisée en continu ou en discontinu.
La troisième étape du procédé consiste à déposer un film suffisant d'un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Cet enrobant peut être le même que celui utilisé lors de l'étape de granulation ou il peut être différent. Cette étape peut être réalisée en en continu ou en discontinu, par exemple sur un sécheur à lit fluidisé. La quantité d'enrobant dépend de la granulométrie finale du produit souhaitée.
La quatrième étape consiste à sécher le produit final. Ce séchage peut être réalisé en continu sur un lit fluidisé ou en batch, de manière à ce que la teneur en eau du produit soit inférieure à 10%, préférentiellement à 8%.
Il est possible d'ajouter une étape intermédiaire entre la deuxième et la troisième étape. Cette étape consiste à sécher la poudre granulée de manière continue ou de manière discontinue. II est également possible d'ajouter une étape de tamisage entre la deuxième et la troisième étape ou après l'étape optionnelle de séchage de la poudre granulée.
Procédé de pelletisation Selon la présente invention, le procédé de pelletisation comprend les étapes suivantes : a) on alimente d'une part la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse et d'autre part la base nutritionnelle dans un alimentateur, b) on chauffe le mélange à une température comprise entre 60 et 1000C, de préférence entre 700C et 90°C, c) on pelletise ladite composition dans une presse à granuler, et d) les pellets obtenus sont coupés à la longueur désirée, e) on procède au séchage et refroidissement des pellets obtenus à l'étape d).
Additif nutritionnel pour animaux
La présente invention concerne également un additif nutritionnel sous forme de poudre comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.
Aliment pour animaux
La présente invention concerne également un aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel tel que ci-dessus défini. La base nutritionnelle comprend par exemple un mélange de blé, du tourteau de soja, des graines de soja extrudées, de l'huile de palme, du carbonate de calcium, du phosphate bicalcique, du sel, un prémix contenant de la méthionine.
Utilisation
Un objet de la présente invention concerne également l'utilisation de la carboxyméthylcellulose pour préparer un additif nutritionnel pour animaux comprenant un mélange d'au moins deux enzymes obtenues à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Un autre objet de la présente invention est l'utilisation de la carboxyméthylcellulose pour préparer un additif nutritionnel pour animaux destinée à améliorer les performances de croissance des animaux, par exemple améliorer l'indice de consommation.
Description des figures
La figure 1 représente les granulométries respectives d'une poudre de l'art antérieur et d'une poudre selon la présente invention; en abscisses, le diamètre en μm; en ordonnées, le pourcentage dans le produit.
Exemple 1
Une composition selon l'invention a été préparée selon le procédé de la présente invention. Elle se présente sous forme de poudre et contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques.
1. Coséchage
475 kg/h de solution enzymatique à 28,7% MS (matière sèche) sont pulvérisés à 165 bars et coséchés en continu sur farine à raison de 113 kg/h à basse température. La - répartition dans l'extrait sec est donc la suivante : 55% enzyme pur et 45 % du support, en l'espèce de la farine. - 146°C : température air entrée
- 49 0C : température air sortie
- 40 0C : température air du lit statique
- 35 0C : température air du vibro fluidiseur (première section)
- 27 0C : température air du vibro fluidiseur (deuxième section) La poudre micro granulée obtenue à ce stade présente un caractère de poudre sans fines inférieur à 63 μm, ce qui en fait un produit apte à être manipulé dans une deuxième phase.
La granulométrie moyenne en D(v, 0,5) est 117 microns et l'humidité de 7,5%.
Le produit obtenu en fin de cette première étape est appelé base intermédiaire. 2. Granulation par imprégnation
Elle est faite dans un mélangeur de la façon suivante :
- 30 secondes de mélange préalable des ingrédients, c'est-à-dire de 0,77 kg d'extrait sec de CMC par kg d'extrait sec de base intermédiaire, - 120 secondes d'addition d'eau à raison de 0,18 kg d'eau par kg d'extrait sec et base intermédiaire, sous agitation, - 120 secondes de mélange terminal.
L'objectif de cette étape est d'obtenir des particules de l'ordre de 150 à 200 μm en moyenne, avec une humidité de 14%, tout en maintenant le produit à moins de 45°C afin de ne pas détériorer les activités enzymes.
3. Séchage intermédiaire sur lit fluidisé
On sèche le produit sur sécheur à lit fluidisé à une température de 55°C en entrée et une température de 25°C en sortie, afin de ne pas détériorer les activités enzymes. La base intermédiaire avant enrobage est alors à 7 ou 8% d'humidité.
4. Enrobage
On pulvérise entre 7 et 7,5% d'une solution de CMC de basse viscosité réchauffée avant pulvérisation à une température variant entre 60 et 700C.
La quantité de solution déposée est de 0,25 kg d'extrait sec de CMC par kg d'extrait sec de produit à enrober.
La poudre obtenue à ce stade a une granulométrie moyenne de 300 à 400 μm et une humidité de 10 à 11 %. Le produit final est alors sécher en continu sur un lit fluidisé ou en batch, l'objet dans ce cas est de ramener le produit à une teneur en eau inférieure à 10% et préférentiellement à inférieure 8%.
Le produit final obtenu a une teneur en eau de 7,6% et une densité de 450 g/l.
5. Mesure de granulométrie
La granulométrie a été mesurée respectivement pour les compositions suivantes :
La première composition est le produit ROVABIO™ EXCEL AP qui se présente sous forme de poudre. La seconde composition a été préparée selon le procédé décrit ci-dessus. Il s'agit donc d'une composition selon l'invention qui contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536.
La granulométrie des compositions est reprise dans le tableau ci-dessous :
Figure imgf000017_0001
On constate que la granulométrie de la deuxième composition présente l'avantage de comporter une quantité de petites particules inférieure à celle du produit ROVABIO™ EXCEL AP (composition sous forme de poudre granuleuse de l'art antérieur). Cette faible quantité de petites particules évite les problèmes de perte de produits, de cross-contamination entre le système de production et les produits eux-mêmes, d'utilisation de systèmes de filtration et de ventilation et d'effets indésirables sur la santé. Voir figure 1.
6. Autres mesures
La compressibilité du produit ROVABIO™ EXCEL AP est de 22,1%, alors que la compressibilité de la seconde composition est de 3,4%.
Exemple 2
Objectif
L'objectif est de tester à la granulation quatre préparations enzymatiques ajoutées dans une base d'aliment volaille croissance.
3 températures de traitement en sortie de conditionneur (80, 85 et 900C) sont appliquées pour chaque préparation enzymatique.
Matériels et Méthodes 1. Aliment et enzymes
180 kg d'aliment farine volaille croissance sont utilisés pour réaliser ces essais. Quatre compositions sous forme de poudre sont testées. Chaque compositions répondant ou non aux critères de la composition selon la présente invention est appelé item d'essai. La première composition est le produit ROVABIO™ EXCEL AP qui se présente sous forme de poudre et contient 19 activités enzymatiques. Ce produit se compose de 20% de farine de blé et de 80% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La seconde composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La troisième composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 35% de carboxylméthylcellulose, 45% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La quatrième composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. 17
Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 35% de carboxylméthylcellulose, 45% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Pénicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques.
2. Mélanges
Deux mélanges de 60 kg d'aliment volaille croissance sont préparés à l'aide d'une mélangeuse à pâles à axe horizontal tournant à 60 tr/mn. La durée de chaque mélange est de 2 minutes. Chaque lot mélangé est vidangé dans un bac rectangulaire avant sa mise en sacs. Un échantillon d'environ 1 kg représentatif de chaque mélange est prélevé par regroupement de 20 échantillons obtenus par quartage dans le bac rectangulaire. Voir le tableau des mélanges ci-dessous.
Figure imgf000019_0001
3. Granulation
Les essais de granulation sont réalisés sur une presse de laboratoire à filière plate (Presse KAHL 14-175 de 3 kW).
Pour un d'aliment farine poulet de chair croissance, la filière de presse choisie pour les essais aura des canaux de 4 mm de diamètre et de 24 mm d'épaisseur (taux de compression: 6). 4. Séchage - Refroidissement
Pour chaque essai de granulation, un sécheur refroidisseur de laboratoire est utilisé pour sécher et refroidir les échantillons de granulés chauds recueillis en sortie de filière.
5 Le temps de séchage refroidissement est au minimum de 5 minutes pour une charge en granulés chauds d'environ 3.5 kg par refroidisseur. Un échantillon d'environ 500g représentatif de chaque fabrication est prélevé.
5. Mesures et prélèvements destinés au contrôle de la granulation
10 Les mesures et les prélèvements sont réalisés pendant le régime stabilisé de la presse (débit constant, Puissance Electrique Consommée et Températures stables).
Les mesures d'humidités et de temps de séjour en filière sont réalisées à partir d'échantillons prélevés pendant la phase stabilisée de chaque essai.
15 Les caractérisations et paramètres de conduite de pressage sont relevés et enregistrés pendant les essais.
6. Méthodes analytiques
6.1 β-glucanase par la méthode au DNS
20 L'essai se base sur l'hydrolyse enzymatique de β-glucane de l'orge, un β- 1 ,3(4)-glucane. Les produits de la réaction sont déterminés par colorimétrie en mesurant l'augmentation des groupes réducteurs à l'aide d'acide 3,5-
•** dinitrosalicylique (DNS). La concentration en sucre réducteur disponible après hydrolyse enzymatique est déterminée à l'aide une courbe de glucose étalon
25 dont l'absorbance est mesurée à 540 nm. L'activité enzymatique calculée est ensuite exprimée en équivalents glucose.
Une solution contenant 1 ml d'une solution de β-glucane de l'ordre à 1 % (m/V) dans un tampon acétate de sodium 0,1 M à pH 5,0 et 1 ml de solution de l'enzyme à la dilution appropriée est incubée à 500C pendant 10 minutes. La
30 réaction enzymatique est stoppée par l'ajout de 2 ml d'une solution de DNS (1 % (m/V) d'acide 3,5-dinitrosalicylique, 1 ,6% (m/V) de NaOH, 30% (m/V) de tartrate de potassium et sodium (+) dans de l'eau distillée). La solution est homogénéisée puis placée dans un bain-marie bouillant à 95°C minimum et ensuite refroidie dans un bain à la température ambiante (pendant 5 minutes).
35 Dix ml d'eau ultrapure sont ajoutés à la solution et l'absorbance est mesurée à 540 nm dans une cellule en verre ayant une longueur de trajet optique de 1 cm. L'absorbance est corrigée avec celle obtenue pour une solution de référence à laquelle le DNS est ajouté avant la solution enzymatique. Les résultats sont convertis en μmoles de sucre réducteur par comparaison avec une gamme de solutions étalons allant de 0,00 à 0,04% (m/V) de glucose, traitées au DNS comme dans le cas des essais.
Une unité d'activité d'endo-1 ,3(4)-β-glucanase est définie comme la quantité d'enzyme qui produit 1 μmole d'équivalent glucose par minute et par gramme de produit, dans les conditions de l'essai (pH 5,0 et 500C).
6.2 Xylanase par la méthode au DNS
L'essai se base sur l'hydrolyse enzymatique de xylane de bouleau, un polymère de xylose contenant des ponts β-D-1 ,4. Les produits de la réaction sont déterminés par colorimétrie en mesurant l'augmentation des groupes réducteurs à l'aide d'acide 3,5-dinitrosalicylique. La concentration en sucre réducteur disponible après hydrolyse enzymatique est déterminée à l'aide d'une courbe de xylose étalon dont l'absorbance est mesurée à 540 nm. L'activité enzymatique calculée est ensuite exprimée en équivalents xylose. Une solution contenant 1 ml d'une solution de xylane de bouleau à 1 % (m/V) dans un tampon acétate de sodium 0,1 M à pH 5,0 et 1 ml de solution de l'enzyme à la dilution appropriée est incubée à 500C pendant 10 minutes. La réaction enzymatique est stoppée par l'ajout de 2 ml d'une solution de DNS (1 % (m/V) d'acide 3,5-dinitrosalicylique, 1 ,6% (m/V) de NaOH, 30% (m/V) de tartrate de potassium et sodium (+) dans de l'eau distillée). La solution est homogénéisée puis placée dans un bain-marie bouillant à 95°C minimum et ensuite refroidie dans un bain à la température ambiante (pendant 5 minutes). Dix ml d'eau ultrapure sont ajoutés à la solution et l'absorbance est mesurée à 540 nm dans une cellule en verre ayant une longueur de trajet optique de 1 cm. L'absorbance est corrigée avec celle obtenue pour une solution de référence à laquelle le DNS est ajouté avant la solution enzymatique. Les résultats sont convertis en μmoles de sucre réducteur par comparaison avec un gamme de solutions étalons allant de 0,00 à 0,04% (m/V) de xylose, traitées au DNS comme dans le cas des essais.
Une unité d'activité d'endo-1 ,4-β-xylanase est définie comme la quantité d'enzyme qui produit 1 μmole d'équivalent xylose par minute et par gramme de produit, dans les conditions de l'essai (pH 5,0 et 500C). 6.3 Xylanase par la méthode viscosimétrie
Cette méthode est spécifique à la détermination de l'activité endo-1 ,4-β- xylanase dans les aliments. L'endo-1 ,4-β-xylanase hydrolyse les ponts xylosidiques du xylan. L'essai est basé sur l'hydrolyse enzymatique des ponts xylosiques d'une solution d'arabinose de blé, polysaccharide de β-1 ,4-xylan substitué avec de l'arabinose. L'activité enzymatique est proportionnelle à la réduction de viscosité d'une solution d'arabinoxylan de blé en présence de l'enzyme à doser.
Une unité d'activité d'endo-1 ,4-β-xylanase est définie comme la quantité d'enzyme qui hydrolysera le substrat, réduisant la viscosité de la solution, pour donner un changement de la fluidité relative de 1 unité sans dimensions par minute dans les conditions de l'analyse : pH 5,5 et 30 0C.
Résultats des essais
1. Consignes de réglages
Les consignes de régulation de la presse sont les suivantes: Débit : environ 41 kg/h
Températures de traitement en sortie conditionneur : 80, 85 et 900C Températures subies en sortie de filière Pression de vapeur : 1.6 bars Réglage de la hauteur de coupe des couteaux : 10 mm
2. Bilan des activités enzymatiques
Figure imgf000022_0001
Tableau : activité enzymatique (unités/g)
On constate que les différentes formulations permettent de préserver les principales activités enzymatiques de référence du concentré enzymatique initial. 3. Taux de récupération en activité xylanase mesurée par viscosimétrie sur les aliments après passage en presse à différentes températures
Figure imgf000023_0001
On constate que l'activité xylanase du produit standard (A) est affectée par la montée en température des conditions de granulation (jusqu'à 46% de pertes à 900C). Les différentes formulations testées permettent de limiter la perte d'activité à moins de 20%.
Exemple 3
Objectif
Etude de l'effet nutritionnel de Rovabio™ Excel AP et d'une composition selon la présente invention sur la valeur d'EMAN (Energie métabolisable apparente avec correction azotée, ou AMEN) d'un aliment à base de blé chez le poulet entre 12 et 22 jours
Matériel et méthodes
1. Schéma expérimental
Les animaux utilisés sont des poussins mâles de souche Ross PM3.
7 régimes de 12 répétitions de 1 poulet par cage soit 84 cages au total
Les essais sont réalisés en randomisation aléatoire contrôlée
Les items d'essai contiennent des activités enzymatiques potentiellement capables d'améliorer la digestibilité d'un aliment à base de blé et de maïs chez le poulet.
Figure imgf000024_0001
Tableau : schéma expérimental
2. Plan d'alimentation Le plan d'alimentation a été le suivant pendant la durée de l'essai.
Figure imgf000024_0002
Tableau : aliments utilisés au cours de l'étude 3. Déroulement de l'expérience
La chronologie des principales interventions est présentée ci-dessous :
De J12 à J17 J18 J19 J20 J21 J22
Ad libitum Ad libitum Adaptation Bilan
15h30 8h00 8h00 8h00 15h30 8h00
Figure imgf000025_0001
Pesée des animaux et aliments Pesée des animaux et refu
Résultats 1. Aliments
Figure imgf000025_0002
Tableau : Analyse de récupération enzymatique xylanase mesurée sur les aliments expérimentaux
Les valeurs d'activité enzymatique xylanase visco sont supérieures à la recommandation de 1100 U/kg d'aliment pour les aliments sauf pour le régime 2.
Figure imgf000026_0001
Tableau : Résultats de digestion de l'énergie par régime * : Energie matabolisable apparente
Tous les items testés ont permis d'améliorer la digestibilité de l'énergie de l'aliment testé mais avec des efficacités variables
Les améliorations d'AMEn sont d'un niveau modéré, atteignant +105 kcal/kg
MS environ pour la composition 2 selon l'invention.
Les deux types de compositions ont eu le même effet sur l'AME mesurée. Une seconde analyse a donc été réalisée par produit.
Figure imgf000026_0002
Tableau : Résultats de digestion de l'énergie par produit Cette seconde analyse montre que globalement les items T-Flex ont amélioré la digestibilité de l'énergie de l'aliment testé. Par contre l'amélioration obtenue avec les items Excel AP est non significative malgré une tendance forte (p=0.06).
3. Performances de croissance
Figure imgf000027_0001
Tableau : Résultats de croissance de J12 à J22 * : Indice de Consommation
Contrairement à ce qui a été observé pour la digestibilité de l'énergie, les items testés ont pratiquement tous eu un effet significatif sur les performances de croissance (indice de consommation) sur la période totale d'étude (12 à 22 jours). Les compositions selon l'invention (Inv 1 , Inv 2 et Inv 3) et les compositions Rovabio ™ Excel AP (AP1 , AP2 et AP3) ont apporté pratiquement la même amélioration d'indice. 5. Conclusion
L'ensemble des items testés sur aliment à base de blé a eu un effet sur I1AME de l'aliment testé. Les améliorations obtenues sont modérées. Globalement les produits selon l'invention ont significativement amélioré l'AME de l'aliment. Les performances de croissance et notamment sur l'indice de consommation sur la période globale (J12-J22) ont été fortement et significativement améliorées par tous les produits.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition thermorésistante susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants :
- un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et
- un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage.
2. Composition thermorésistante selon la revendication 1 , dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme.
3. Composition thermorésistante selon la revendication 1 , dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation de deux microorganismes différents.
4. Composition thermorésistante selon la revendication 1 , comprenant : a) de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, b) de 25 à 60 % en poids dudit support, c) de 25 à 60 % en poids dudit enrobant.
5. Composition thermorésistante selon la revendication 1 , selon laquelle l'enrobant est la carboxyméthylcellulose.
6. Composition thermorésistante selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation d'au moins un microorganisme.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une β-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1 ,4-β-xylanase, l'α-arabinofuranosidase, la β-xylosidase, la feruloyl estérase, l'endo-1 ,5 α-arabinanase, l'endo-1 ,3(4)-β-glucanase, la laminarinase, l'endo-1 ,4-β-glucanase, la cellobiohydrolase, la β-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1 ,4-β-mannanase, la β-mannosidase et l'α-galactosidase.
- 9. Composition selon Tune quelconque des revendications précédentes dans laquelle un microorganisme est Pénicillium funiculosum déposé à I1IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536.
10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose.
11. Aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et une composition selon l'une revendications précédentes.
12. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la préparation d'un additif nutritionnel pour animaux sous forme de poudre granuleuse.
13. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications précédentes pour la préparation d'un aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel.
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