WO2008135169A1 - Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes - Google Patents

Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes Download PDF

Info

Publication number
WO2008135169A1
WO2008135169A1 PCT/EP2008/003288 EP2008003288W WO2008135169A1 WO 2008135169 A1 WO2008135169 A1 WO 2008135169A1 EP 2008003288 W EP2008003288 W EP 2008003288W WO 2008135169 A1 WO2008135169 A1 WO 2008135169A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cpg
nucleic acids
pto
preparation according
treatment
Prior art date
Application number
PCT/EP2008/003288
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Stefan Kippenberger
August Bernd
Roland Kaufmann
Andreas Bock
Michael Kock
Annette Dorn
Diamant Thaci
Sabine GRÜDL
Guido Fuhrmann
Melanie Giesen
Original Assignee
Henkel Ag & Co. Kgaa
Phenion Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel Ag & Co. Kgaa, Phenion Gmbh & Co. Kg filed Critical Henkel Ag & Co. Kgaa
Publication of WO2008135169A1 publication Critical patent/WO2008135169A1/de

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q9/00—Preparations for removing hair or for aiding hair removal
    • A61Q9/04—Depilatories

Definitions

  • Nucleic acid-containing cosmetic and / or pharmaceutical preparations for the treatment of epithelial covering tissue are provided.
  • the present invention relates to nucleic acid-containing cosmetic and / or pharmaceutical preparations for the treatment of epithelial covering tissue and the use of nucleic acids as chemosensitizer for the treatment of hyperplasia epithelial covering tissue, for improving the appearance of the skin, for epilation or for the induction of hair loss.
  • Carcinogens and precancerous lesions are among the hyperplastic diseases of the epidermis and are common indications in dermatology with increasing incidence.
  • nucleic acids or nucleic acid-containing mixtures has an apoptosis-promoting effect on keratinocytes.
  • the present invention therefore relates to a cosmetic and / or pharmaceutical preparation for the treatment of epithelial covering tissue, which is characterized in that it contains nucleic acids.
  • the nucleic acids contained in the preparation according to the invention may be of natural or synthetic origin. They can also be hydrolyzed, partially hydrolyzed or denatured available.
  • the nucleic acids are preferably selected from synthetic nucleic acids, nucleic acids of eukaryotic origin and nucleic acids of bacterial origin, in particular from nucleic acids from Escherichia coli and Clostridium perfringens.
  • Preferred nucleic acids present in the preparation according to the invention are selected from high molecular weight bacterial DNA, low molecular weight bacterial DNA, high molecular weight eukaryotic DNA, low molecular weight eukaryotic DNA and oligonucleotides.
  • Oligonucleotides which can be used according to the invention have a length of 5 to 100, in particular 5 to 70, preferably 10 to 50, preferably 10 to 40 and very particularly preferably 12 to 30 nucleotides.
  • the nucleobases of the nucleic acids contained in the preparation according to the invention are not methylated.
  • nucleic acids which can be used according to the invention can be chemically modified completely (all nucleotides) or partially (only a few nucleotides) in a manner known to the person skilled in the art. Preferred modifications are, for example:
  • Particularly preferred according to the invention are phosphorothioate-phosphodiester mixmers.
  • epithelial covering tissue is understood as meaning, on the one hand, the skin covering the outer body surface (consisting of subcutis, corium and epidermis), on the other hand the tissue lining the hollow organs and body cavities, including the epithelia of the uterus and the mouth.
  • the preparation according to the invention can be used in particular for the treatment of hyperplastic diseases of the epithelial covering tissue.
  • the preparation according to the invention can furthermore be employed for the treatment of epithelial covering tissue, in particular for the epilation or induction of hair loss or for improving the appearance of the skin, in particular as an antiaging agent, preferably for the treatment of age spots, calluses or the so-called Landmann's skin.
  • the preparations or nucleic acids according to the invention are used in combination with cosmetic active ingredients (for example AHA (alpha hydroxy acids)), pharmaceutical active substances (for example apoptosis inducers, chemotherapeutic agents), mechanical treatment or UV light.
  • cosmetic active ingredients for example AHA (alpha hydroxy acids)
  • pharmaceutical active substances for example apoptosis inducers, chemotherapeutic agents
  • UV light UV light.
  • the cosmetic or pharmaceutical active ingredients to be combined can be incorporated in the same preparation, or applied before or after the application of the preparations according to the invention containing nucleic acids.
  • a mechanical or UV light treatment can be carried out before or after the application of the preparation according to the invention.
  • combinations of the preparations according to the invention with cosmetic or pharmaceutical active substances and UV light can be used to improve the appearance of the skin.
  • the oligonucleotides of the invention may be used as anti-aging agents, e.g. for the treatment of age spots, calluses or the so-called Landmann's skin (cutis rhomboidalis).
  • hair keratinocytes By the apoptosis sensitization of hair keratinocytes, they can also be used for the epilation or for the induction of hair loss, preferably in combination with cosmetic or pharmaceutical active ingredients, UV light or mechanical treatment. Particularly preferred is a combination with mechanical treatment, since this can lead to the induction of apoptosis in the hair follicle. Especially preferred is the combination with an epilation.
  • the preparation according to the invention can also be used in combination with cosmetic or pharmaceutical active substances, UV light or mechanical treatment, in particular in combination with cosmetic or pharmaceutical active substances, for the treatment of hyperplastic diseases of the epithelial covering tissue.
  • Hyperplastic diseases of the epithelial covering tissue are all those diseases in which an excessive proliferation or reduced apoptosis of the epithelial cells is present. Examples include carcinoses and precancerous lesions and verrucae (warts) called.
  • the preparation of the invention is also suitable for the prophylaxis and treatment of various other diseases or undesirable conditions, in particular for the prophylaxis and treatment of psoriasis (especially of nail psoriasis, which is usually treated with 5-fluorouracil) as well as of cutaneous metastases of epithelial tumors, including the mucosa.
  • psoriasis especially of nail psoriasis, which is usually treated with 5-fluorouracil
  • cutaneous metastases of epithelial tumors including the mucosa.
  • this exfoliation mostly uses AHA (alpha hydroxy acids), PHAs (polyhydroxy acids), TCA (trichloroacetic acid) and glycolic acid.
  • the nucleic acids contained in the preparation according to the invention are present as oligodeoxynucleotides (ODN).
  • ODNs preferably have one, two or more CpG motifs, as described, for example, in WO2004 / 012688 of the Applicant, to which reference is hereby fully made.
  • CpG motifs are distinguished by three major classes of CpG ODN: CpG-A (also CpG-D), CpG-B (also CpG-K) and CpG-C ODN.
  • CpG-A is characterized by a chimeric backbone: the 5 ' and 3 ' ends are phosphorothioate-modified for increased stability against nucleases, while the middle region consists of unmodified phosphodiester. Unmodified phosphodiester oligonucleotides are rapidly degraded in vivo by endogenous nucleases.
  • the so-called phosphorothioate modification one achieves an increased stability of the ODN (oligo-deoxynucleotide) to nucleases.
  • ODN oligo-deoxynucleotide
  • CpG A ODNs usually have only one CpG motif embedded in a palindromic sequence. In addition, at the 5 'and 3' ends, they have sequences of guanines, which are probably important for the uptake of the oligonucleotides and the intracellular localization.
  • CpG-B ODNs have a phosphorothioate backbone and often have multiple CpG motifs. At the 5 'end is often a TCGTCG motif.
  • CpG-C-ODNs are a mixture of CpG-A and CpG-B ODNs. Like the CpG-B ODNs, they have a phosphorothioate backbone, and often have several CpG motifs and are common at the 5'-end a TCGTCG motif. Like the CpG A ODN, they contain a central CpG motif embedded in a palindromic sequence. However, they lack the guanine episodes. Further preferred nucleic acids according to the invention are those which contain C- or T-rich sequences with a content of C or T in the range from 25% to 100%, preferably 50% to 100%, particularly preferably 75% to 100% and very particularly preferably 100%. Very particular preference is given to poly-T homopolymers or poly-C homopolymers. Where C is cytosine and T is thymine.
  • epidermal cells are sensitized for apoptosis (controlled cell death), so that the concentration of 5-fluorouracil or another pro-apoptotic stimulus can be reduced, which considerably reduces the undesired side effects.
  • An additional advantage of the use of nucleic acids according to the invention is that such DNA molecules have an anti-inflammatory effect on skin cells, which can alleviate the side effects of local chemotherapy.
  • Apoptosis describes a physiological process in which a controlled destruction of cells occurs. Disruptions in the regulation of apoptosis often occur in the context of hyperproliferative diseases, e.g. Cancer on.
  • the protein kinase Akt also known as PKB or RAC
  • Akt also known as PKB or RAC
  • deletion mutants of CpG-1-PTO and non-CpG-5-PTO the minimum length of the DNA ODN could be determined, which causes a suppression of Akt (see examples 3 and 4).
  • a length of ⁇ 12 bases could be determined as a minimum length at a concentration of 4 ⁇ M.
  • deletion mutants of non-CpG-5-PTO there was a sudden suppression of Akt from a length of> 12 bases at a concentration of 4 ⁇ M.
  • the applied DNA had no effect on Akt in SZ95 (sebocyte line), Cos-7 (renal epithelial cell line), primary dermal fibroblasts and G361 (melanoma cell line). It can therefore be assumed that the suppression of Akt and the associated effects on apoptosis behavior are a keratinocyte-specific phenomenon.
  • initiator caspases e.g., caspase 8
  • the activated effector caspases can then digest cellular structural proteins, cell cycle proteins and kinases.
  • staurosporine resulted in a concentration-dependent fragmentation of caspase 8 and 3.
  • the DNA ODNs used act as "apoptosis sensitizers" (see Example 7).
  • cytochrome C release The effectiveness of the oligonucleotides used was further confirmed by studies on cytochrome C release (see Example 8). Cytochrome C is found in vital cells mostly in the mitochondria. Only in the context of apoptosis is there an accumulation of cytoplasmic cytochrome C. There cytochrome C acts as an activator of caspase 9 and is thus a very early apoptotic marker. The data presented prove that it By CpG-1-PTO and non-CpG-5-PTO to increased release of cytochrome C in the cytoplasm and thus the entry into apoptosis is facilitated.
  • DNA oligo nucleotides are currently being clinically tested primarily as antisense molecules. Since some of these molecules also contain one or more CpG motifs, it should be tested whether a commercial oligo with these characteristics (G3139, Oblimersen, Genasense) causes a basal apoptosis induction.
  • G3139 is a DNA 18mer with 2 CpG motifs that was originally designed as a bcl-2 antisense molecule to increase apoptosis in malignant cells.
  • HaCaT, A-431 human keratinocytes
  • G3139 PTO without additional pro-apoptotic stimulus - does not lead to any induction of caspases
  • CpG A ODN also known as CpG D ODN
  • CpG B ODN also known as CpG K ODN known and CpG-C-ODN
  • the structure of CpG-A is characterized by a chimeric backbone: the 5 ' and 3 ' ends are phosphorothioate-modified for increased stability against nucleases, while the middle region consists of unmodified phosphodiester. Unmodified phosphodiester oligonucleotides are rapidly degraded in vivo by endogenous nucleases.
  • CpG-A-ODNs usually have only one CpG motif in a palindromic sequence is embedded.
  • sequences of guanines which are probably important for the uptake of the oligonucleotides and the intracellular localization.
  • sequence 1585 (A) was tested.
  • CpG-B ODNs have a phosphorothioate backbone and often have multiple CpG motifs. At the 5 'end is often a TCGTCG motif. As a typical representative of CpG-B-ODN, the already mentioned sequence of CpG-1-PTO was tested.
  • CpG-C-ODNs are a mixture of CpG-A and CpG-B ODNs. Like the CpG-B ODNs, they have a phosphorothioate backbone, and often have several CpG motifs and are common at the 5'-end a TCGTCG motif. Like the CpG A ODN, they contain a central CpG motif embedded in a palindromic sequence. However, they lack the guanine episodes. As a typical representative of CpG-A-ODN, the sequence M-363-C was tested.
  • CpG-1-PTO CpG-B-ODN
  • non-CpG-5-PTO non-CpG-5-PTO
  • n-CpG-3-PTO cause a marked concentration-dependent super-induction of apoptosis in the presence of staurosporine (see Example 14).
  • n-CpG-6-PTO showed an opposite effect, namely a concentration-dependent inhibition of apoptosis in the presence of staurosporine (see Example 15).
  • Programmed cell death plays a crucial role in the hair cycle, as the transition phase (catagen phase) between the growth phase (anagen phase) and the resting phase (telogen phase), after which the hair fails, is an apoptotic process.
  • Caspases also play an important role in the initiation of programmed cell death. An increased activity of caspases (especially caspase-3) thus leads to increased apoptosis and thus to increased hair loss. If the hair root is e.g. The mitochondria of the hair cells are damaged, the caspases are activated and the hair root enters the catagen phase. Afterwards the hair falls out.
  • oligonucleotides as an apoptosis sensitizer was investigated in the reconstructed hair follicle (see Example 17).
  • the activity of caspases 3 and 7 was determined after incubation with the test substances.
  • In combination with the apoptosis inducer staurosporine, however, there was a significantly higher caspase activity than with staurosporine alone.
  • nucleic acids in formulations for use particularly on the skin depends on the availability of the nucleic acids in the living cells of the skin.
  • the penetration of a macromolecule through the stratum corneum (natural barrier of the skin) into the skin is not always guaranteed.
  • liposomal-packaged nucleic acids can penetrate the stratum corneum of skin models.
  • Preparations preferred according to the invention are therefore those which contain the nucleic acids usable in accordance with the invention packed in liposomes.
  • preparations containing other suitable carrier systems for.
  • nanotechnology-based systems or penetration enhancers for example, urea, Azone or DMSO
  • nucleic acids in particular the nucleic acids described in more detail in the above-mentioned preparations, as a chemosensitizer for the treatment of hyperplasia epithelial cover tissue.
  • Another object of the present invention is a process for the preparation of a cosmetic and / or pharmaceutical preparation for the treatment of hyperplasia epithelial covering tissue, characterized in that nucleic acids, in particular those contained in the above-mentioned inventive preparations, in more detail described nucleic acids, as for the inventive Preparations described mixed with pharmacologically suitable and acceptable carriers.
  • nucleic acids in particular the nucleic acids described above, for use in a method for the treatment of epithelial covering tissue, in particular hyperplasia.
  • nucleic acids which can be used according to the invention are preferably incorporated as a component into a cosmetic and / or pharmaceutical preparation.
  • the preparation according to the invention contains the nucleic acids which can be used according to the invention and additionally at least one apoptosis-inducing substance, in particular 5-fluorouracil or an imidazoquinoline, such as, for example, imiquimod.
  • nucleic acids which can be used according to the invention can be used simultaneously or with a time delay with the other substances or forms of therapy.
  • the simultaneous application is preferred.
  • nucleic acids which can be used according to the invention can be adapted and varied in a suitable manner by the person skilled in the art.
  • the cosmetic and / or pharmaceutical preparations according to the invention can, depending on the nature of the formulation, be used as auxiliaries and additives mild surfactants, oil bodies, emulsifiers, superfatting agents, bodying agents, thickeners, polymers, silicone compounds, fats, waxes, stabilizers, biogenic agents, film formers, swelling agents, UV protection factors, antioxidants, hydrotropes, preservatives, solubilizers and the like.
  • Suitable mild, i. particularly skin-compatible surfactants are fatty alcohol polyglycol ether sulfates, monoglyceride sulfates, mono- and / or dialkyl sulfosuccinates, fatty acid isethionates, fatty acid sarcosinates, fatty acid taurides, fatty acid glutamates, ⁇ -olefinsulfonates, ether carboxylic acids, alkyl oligoglucosides, fatty acid glucamides, alkylamidobetaines and / or protein fatty acid condensates, the latter preferably based on wheat proteins.
  • Suitable oil bodies are, for example, Guerbet alcohols based on fatty alcohols having 6 to 18, preferably 8 to 10 carbon atoms, esters of linear C ⁇ -C ⁇ rFettklaren with linear Ce-C 22 fatty alcohols, esters of branched C 6 -C 3 -carboxylic acids with linear C 6 -C 22 -fatty alcohols, such as myristyl myristate, myristyl palmitate, myristyl stearate, Myristylisostearat, myristyl, Myristylbehenat, Myristylerucat, cetyl myristate, cetyl palmitate, cetyl stearate, Cetylisostearat, cetyl oleate, cetyl behenate, Cetylerucat, Stearylmyristat, stearyl palmitate, stearyl stearate, Stearylisostearat, stearyl oleate, ste
  • esters of linear Ce-C ⁇ fatty acids with branched alcohols in particular 2-ethylhexanol
  • esters of hydroxycarboxylic acids with linear or branched C 6 -C 22 fatty alcohols in particular dioctyl malates
  • esters of linear and / or branched fatty acids with polyhydric Alcohols such as propylene glycol, dimerdiol or trimer triol
  • polyhydric Alcohols such as propylene glycol, dimerdiol or trimer triol
  • Guerbet alcohols triglycerides based on C 6 -C 10 fatty acids, liquid mono- / di- / Triglyceridmisonne based on C ⁇ -Ci ⁇ fatty acids
  • esters of C 6 -C 22 Fatty alcohols and / or Guerbet alcohols with aromatic carboxylic acids especially benzoic acid, esters of C 2 -C 12 dicarboxylic acids with linear or branched alcohols having 1 to
  • Suitable emulsifiers are nonionic surfactants from at least one of the following groups:
  • alkyl and / or alkenyl mono- and oligoglycosides having 8 to 22 carbon atoms in the alk (en) yl radical and their ethoxylated analogs;
  • Alkyl and / or alkenyl mono- and oligoglycosides their preparation and their use are known in the art. They are prepared, in particular, by reacting glucoses or oligosaccharides with primary alcohols having 8 to 18 carbon atoms.
  • the glycoside radical both monoglycosides in which a cyclic sugar residue is glycosidically linked to the fatty alcohol and oligomeric glycosides having a degree of oligomerization of preferably approximately 8 are suitable.
  • the degree of oligomerization is a statistical mean, which is based on a homolog distribution typical for such technical products.
  • polyglycerol esters are Polyglyceryl-2 Dipolyhydroxystearate (Dehymuls ® PGPH), Polyglycerin-3-Diisostearate (Lameform ® TGI), Polyglyceryl-4 Isostearate (Isolan ® GI 34), Polyglyceryl-3 Oleate, Diisostearoyl Polyglyceryl-3 Diisostearate ( Isolan ® PDI), Polyglyceryl-3 methylglucose Distearate (Tego Care ® 450), Polyglyceryl-3 Beeswax (Cera Bellina ®), Polyglyceryl-4 Caprate (polyglycerol Caprate T2010 / 90), Polyglyceryl-3 Cetyl ether (Chimexane ® NL), Polyglyceryl-3 Distearate (Cremophor ® GS 32) and Polyglyceryl polyricinoleates (Admul ® WOL 1403), polyglyceryl
  • zwitterionic surfactants can be used as emulsifiers.
  • Zwitterionic surfactants are those surface-active compounds which carry at least one quaternary ammonium group and at least one carboxylate and one sulfonate group in the molecule.
  • Particularly suitable zwitterionic surfactants are the so-called betaines such as the N-alkyl-N, N- dimethylammonium glycinates, for example cocoalkyldimethylammonium glycinate, N-acylaminopropyl-N, N-dimethylammonium glycinates, for example cocoacylaminopropyldimethylammonium glycinate, and 2-alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethylimidazolines having in each case 8 to 18 C atoms in the alkyl or acyl group and cocoacylaminoethyl-hydroxyethylcarboxymethylglycinate.
  • betaines such as the N-alkyl-N, N- dimethylammonium glycinates, for example cocoalkyldimethylammonium glycinate, N-acylaminopropyl-N, N-dimethylammonium glycinates, for example coco
  • ampholytic surfactants are N-cocoalkylaminopropionate, cocoacylaminoethylaminopropionate and
  • quaternary emulsifiers are also suitable, with those of the esterquat type, preferably methyl-quaternized difatty acid triethanolamine ester salts, being particularly preferred.
  • substances such as lanolin and lecithin as well as polyethoxylated or acylated lanolin and lecithin derivatives, polyol fatty acid esters, monoglycerides and fatty acid alkanolamides can be used, the latter also serving as foam stabilizers.
  • fatty alcohols or hydroxy fatty alcohols having 12 to 22 and preferably 16 to 18 carbon atoms and in addition partial glycerides, fatty acids or hydroxy fatty acids into consideration. Preference is given to a combination of these substances with alkyl oligoglucosides and / or fatty acid N-methylglucamides of the same chain length and / or polyglycerol poly-12-hydroxystearates.
  • Polyethylene glycol mono- and diesters of fatty acids polyacrylates (for example Carbopol ® of Goodrich or Synthalens ® of Sigma), polyacrylamides, polyvinyl alcohol and polyvinyl pyrrolidone, surfactants such as ethoxylated fatty acid glycerides, esters of fatty acids with polyols for example pentaerythritol or trimethylolpropane, fatty alcohol ethoxylates having a narrowed homolog distribution or alkyl oligoglucosides and electrolytes such as saline and ammonium chloride.
  • surfactants such as ethoxylated fatty acid glycerides, esters of fatty acids with polyols for example pentaerythritol or trimethylolpropane, fatty alcohol ethoxylates having a narrowed homolog distribution or alkyl oligoglucosides and electrolytes such as saline and ammonium
  • Suitable cationic polymers are, for example, cationic cellulose derivatives, such as, for example, a quaternized hydroxyethylcellulose which is obtainable under the name Polymer JR 400® from Amerchol, cationic starch, copolymers of diallylammonium salts and acrylamides, quaternized vinylpyrrolidone / inylimidazole polymers, such as, for example, Luviquat® (BASF) , Condensation products of polyglycols and amines, quaternized collagen polypeptides such as lauryldimonium hydroxypropyl hydrolyzed collagen (Lamequat®L / Grünau), quaternized wheat polypeptides, polyethylenimine, cationic silicone polymers such as amidomethicones, copolymers of adipic acid and dimethylaminohydroxypropyldiethylenetriamine (Cartaretine® / Sandoz), copolymers of Acrylic acid
  • anionic, zwitterionic, amphoteric and nonionic polymers are vinyl acetate / crotonic acid copolymers, vinylpyrrolidone / vinyl acrylate copolymers,
  • Suitable silicone compounds are, for example, dimethylpolysiloxanes,
  • Methylphenylpolysiloxanes cyclic silicones and amino, fatty acid, alcohol, polyether, epoxy, fluorine, glycoside and / or alkyl-modified silicone compounds which may be both liquid and resinous at room temperature.
  • simethicones which are mixtures of dimethicones having an average chain length of from 200 to 300 dimethylsiloxane units and hydrogenated silicates.
  • suitable volatile silicones can also be found in Todd et al. in Cosm.Toil. 91, 27 (1976).
  • fats are glycerides, as waxes include natural waxes, such as candelilla wax, carnauba wax, Japan wax, Espartograswachs, cork wax, guaruma wax, rice germ oil, sugar cane wax, ouricury wax, montan wax, beeswax, shellac wax, spermaceti, lanolin (wool wax), cushioned fat , Ceresin, ozokerite (groundwax), petrolatum, paraffin waxes, microwaxes; chemically modified waxes (hard waxes), such as Montanesterwachse, Sasolwachse, hydrogenated jojoba waxes and synthetic waxes, such as polyalkylene waxes and polyethylene glycol waxes in question.
  • natural waxes such as candelilla wax, carnauba wax, Japan wax, Espartograswachs, cork wax, guaruma wax, rice germ oil, sugar cane wax, ouricur
  • metal salts of fatty acids e.g. Magnesium, aluminum and / or zinc stearate or ricinoleate can be used.
  • Typical film formers are, for example, chitosan, microcrystalline chitosan, quaternized chitosan, polyvinylpyrrolidone, vinylpyrrolidone-vinyl acetate copolymers, polymers of the acrylic acid series, quaternary cellulose derivatives, collagen, hyaluronic acid or salts thereof and similar compounds.
  • Suitable swelling agents for aqueous phases are montmorillonites, clay minerals, pemulen and alkyl-modified carbopol types (Goodrich). Further suitable polymers or swelling agents can be reviewed by R. Lochhead in Cosm.Toil. 108, 95 (1993).
  • UVB filters can be oil-soluble or water-soluble. As oil-soluble substances are e.g. to call:
  • 3-benzylidene camphor or 3-benzylidene norcamphor and its derivatives e.g. 3- (4-methylbenzylidene) camphor as described in EP 0693471 B1;
  • 4-aminobenzoic acid derivatives preferably 4-dimethylamino) benzoic acid 2-ethylhexyl ester, 4- (dimethylamino) benzoic acid 2-octyl ester and 4- (dimethylamino) benzoic acid amyl ester;
  • Esters of cinnamic acid preferably 4-methoxycinnamic acid 2-ethylhexyl ester, 4-methoxycinnamic acid propyl ester, 4-methoxycinnamic acid isoamyl ester 2-cyano-3,3-phenylcinnamic acid 2-ethylhexyl ester (octocrylene);
  • Esters of salicylic acid preferably 2-ethylhexyl salicylate, 4-isopropylbenzyl salicylate, homomenthyl salicylate;
  • benzophenone preferably 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone, 2-hydroxy-4-methoxy-4'-methylbenzophenone, 2,2'-dihydroxy-4-methoxybenzophenone;
  • Esters of benzalmalonic acid preferably di-2-ethylhexyl 4-methoxybenzmalonate; Triazine derivatives such as, for example, 2,4,6-trianilino- (p-carbo-2'-ethyl-1'-hexyloxy) -1,3,5-triazine and octyl triazone, as described in EP 0818450 A1 or dioctyl butamido Triazone (Uvasorb® HEB);
  • Propane-1,3-diones e.g. 1- (4-tert-butylphenyl) -3-4'-methoxyphenyl) propane-1,3-dione;
  • Suitable water-soluble substances are:
  • Sulfonic acid derivatives of benzophenones preferably 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonic acid and its salts;
  • Sulfonic acid derivatives of the 3-benzylidene camphor e.g. 4- (2-oxo-3-bionylidenemethyl) benzenesulfonic acid and 2-methyl-5- (2-oxo-3-bomylidene) -sulfonic acid and its salts.
  • UV-A filter in particular derivatives of benzoylmethane come into question, such as 1- (4'-tert-butylphenyl) -3- (4'-methoxyphenyl) propane-1, 3-dione, 4-tert-butyl -4'-methoxydibenzoylmethane (Parsol 1789), 1-phenyl-3- (4'-isopropylphenyl) -propane-1, 3-dione and enamine compounds, as described in DE 19712033 A1 (BASF).
  • the UV-A and UV-B filters can also be used in mixtures.
  • insoluble photoprotective pigments namely finely dispersed metal oxides or salts
  • suitable metal oxides are in particular zinc oxide and titanium dioxide and, in addition, oxides of iron, zirconium, silicon, manganese, aluminum and cerium and mixtures thereof.
  • salts silicates (talc), barium sulfate or zinc stearate can be used.
  • the oxides and salts are used in the form of the pigments for skin-care and skin-protecting emulsions and decorative cosmetics.
  • the particles should have an average diameter of less than 100 nm, preferably between 5 and 50 nm and in particular between 15 and 30 nm.
  • the pigments may have a spherical shape, but it is also possible to use those particles which have an ellipsoidal or otherwise deviating shape from the spherical shape.
  • the pigments can also be surface treated, i. hydrophilized or hydrophobized. Typical examples are coated titanium dioxides, e.g. Titanium dioxide T 805 (Degussa) or Eusolex® T2000 (Merck). Suitable hydrophobic coating agents are in particular silicones and in particular trialkoxyoctylsilanes or simethicones. In sunscreens, so-called micro- or nanopigments are preferably used. Preferably, micronized zinc oxide is used. Further suitable UV photoprotective filters can be found in the review by P.Finkel in S ⁇ FW-Journal 122, 543 (1996).
  • secondary light stabilizers of the antioxidant type which have the photochemical properties Disrupt the reaction chain, which is triggered when UV radiation penetrates into the skin.
  • Typical examples are amino acids (eg glycine, histidine, tyrosine, tryptophan) and their derivatives, imidazoles (eg urocaninic acid) and their derivatives, peptides such as D, L-carnosine, D-carnosine, L-carnosine and their derivatives (eg anserine) , Chlorogenic acid and its derivatives, lipoic acid and its derivatives (eg dihydrolipoic acid), aurothioglucose, propylthiouracil and other thiols (eg thioredoxin, glutathione, cysteine, cystine, cystamine and their glycosyl, N-acetyl, methyl, ethyl, propyl) , Amyl,
  • PPAR activators peroxisome proliferator-activated receptors
  • Alkylene glycols such as ethylene glycol, diethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, hexylene glycol, and polyethylene glycols having an average molecular weight of 100 to 1,000 daltons;
  • MethyolENSen in particular trimethylolethane, trimethylolpropane, trimethylolbutane, pentaerythritol and dipentaerythritol;
  • Sugar alcohols having 5 to 12 carbon atoms such as sorbitol or mannitol,
  • sugars having 5 to 12 carbon atoms such as glucose or sucrose
  • Suitable preservatives are, for example, phenoxyethanol, formaldehyde solution, parabens, pentanediol or sorbic acid and the other classes of substances listed in Appendix 6, Part A and B of the Cosmetics Regulation.
  • the total amount of auxiliaries and additives may be 1 to 50, preferably 5 to 40 wt .-% - based on the means - amount.
  • the preparation of the cosmetic and / or pharmaceutical preparation can be carried out by conventional cold or hot processes; It is preferable to work according to the phase inversion temperature method.
  • CpG-PTO-1 (5 'TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3) and non-CpG-PTO-5 (5' - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3 ') inhibit the basal Akt activation.
  • HaCaT keratinocytes were incubated with the mentioned DNA ODN for 30 minutes. Subsequently, the cells were lysed, the proteins extracted and separated by SDS-PAGE. Phosphorylation of serine 473 and threonine 308 was detected in the Western blot with phospho-specific antibodies. The uniform sample loading was checked with antibodies to total-Akt (Fig.1).
  • Non-CpG-5 PTO 5 CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC CC -3 'n5A: Non-CpG 5A PTO: 5 CCC CCC CCC CCC CCC CCC CCC CCC 3 ' N5B: non-CpG-PTO 5B: 5 '- CCC CCC CCC CCC CCC CCC C -3' N5C: non-CpG-PTO 5C: 5'-CCC CCC CCC CCC CC -3 'N5D: non-CpG-5D -PTO: 5 ' - CCC CCC CCC CCC -3' n5G: non-CpG 5G PTO: 5'-CCC CCC -3 '
  • E. coli Genomic DNA from Escherichia coli
  • Salm. sp. Genomic DNA from salmon sperm
  • BCG Bacillus Calmette Guerin
  • A-431 (epidermoid carcinoma cell line)
  • HaCaT spontaneous immortalized keratinocyte line
  • Cos-7 kidney epithelial cell line
  • G361 (melanoma cell line)
  • CpG-1 PTO and non-CpG-5 PTO sensitize HaCaT keratinocytes for apoptosis by release of cytochrome C.
  • HaCaT keratinocytes were incubated for 24 h with ascending concentrations of staurosporine (StS, 0.1, 0.5, 1.0 ⁇ M).
  • the cells were additionally incubated with 8 ⁇ M each of CpG-1 PTO or non-CpG-5 PTO. Subsequently, the cells were fractionated by mild lysis with digitonin. The content of cytochrome C in the cytosolic extract was determined in a commercial Cytochrome C immunoassay (R & D Systems, Wiesbaden, Germany).
  • Cytochrome C is found in vital cells mostly in the mitochondria. Only in the context of apoptosis is there an accumulation of cytoplasmic cytochrome C. There cytochrome C acts as an activator of caspase 9 and is thus a very early apoptotic marker.
  • SZ95 cells were incubated for 24 h with ascending concentrations of staurosporine (STS, 0.1, 0.5, 1.0 ⁇ M). Similarly, the cells were additionally incubated with 8 ⁇ M each of CpG-1 PTO or non-CpG-5 PTO. Subsequently, the cells were lysed, the proteins extracted and separated by SDS-PAGE. In Western blot, the proteolytic activation of caspase 3, 8 and 9 was detected. It could be shown no increased effect of staurosporine in combination with the oligonucleotides against staurosporine alone ( Figure 9).
  • CpG-9-PTO short deletion fragment of CpG-1-PTO
  • nCpG-5G-PTO short deletion fragment of non-CpG-5-PTO
  • CpG-PTO-1 5 'TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3
  • CpG-PTO 9 5' - GAC GTT -3 'non-CpG-PTO-5: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CC - 3 'n-CpG-PTO 5G: 5' - CCC CCC -3 '
  • HaCaT keratinocytes were incubated for 24 h with ascending concentrations of staurosporine (StS, 0.1, 0.5, 1.0 ⁇ M). Similarly, the cells were additionally incubated with 8 ⁇ M each of non-CpG-5 PTO or n-CpG-5G-PTO. Subsequently, the cells were fractionated by mild lysis with digitonin. The content of cytochrome C in the cytosolic extract was determined in a commercial Cytochrome C immunoassay (R & D Systems, Wiesbaden, Germany).
  • Cytochrome C is found in vital cells mostly in the mitochondria. Only in the context of apoptosis is there an accumulation of cytoplasmic cytochrome C. There cytochrome C acts as an activator of caspase 9 and is thus a very early apoptotic marker. (Fig. 12)
  • non-CpG-PTO-5 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3 'n-CpG-PTO 5G: 5 - CCC CCC - 3'
  • CpG-1 PTO as a representative of the CpG-B class, non-CpG-5 PTO and n-CpG-3 PTO super-induce concentration-dependent apoptosis in the presence of staurosporine.
  • HaCaT cells were co-stained with staurosporine (Sts) (-, 0.01, 0.02, 0.05 ⁇ M) and ascending concentrations (1, 2, 4, 8, 16 ⁇ M) of CpG-1 PTO ( Figure 14A). , non-CpG-5 PTO ( Figure 14B) and n-CpG-3 PTO ( Figure 14C). After 24 h, the experiment was terminated and the histone-associated DNA fragments were determined in the cytosolic extract using a commercial kit (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany).
  • CpG-PTO-1 5 'TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5' - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3 'n-CpG-3-PTO: 5' - TTT TTT TTT TTT TTT 3 '
  • Example 15 5'TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5' - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3 'n-CpG-3-PTO: 5' - TTT TTT TTT TTT TTT TTT 3 '
  • Example 15 5'TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5' - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3 'n-CpG-3-PTO: 5' - TTT TTT TTT TTT TTT 3 '
  • Example 15
  • HaCaT cells were co-administered with staurosporine (Sts) (-, 0.01, 0.02, 0.05 ⁇ M) and ascending concentrations (1, 2, 4, 8, 16 ⁇ M) of (Fig. 15A) n-CpG-6 -PTO and (Fig. 15B) M-362-C. After 24 h, the experiment was terminated and the histone-associated DNA fragments were determined in the cytosolic extract using a commercial kit (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany).
  • n-CpG-6-PTO 5'-GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GG -3 '
  • M-362-C 5 ' -TCG tcg tcg ttc gaa cga cgt TGA T-3 ' (represent uppercase letters
  • HaCaT cells were treated concomitantly with staurosporine (Sts) (-, 0.01, 0.02, 0.05 ⁇ M) and ascending concentrations (1, 2, 4, 8, 16 ⁇ M) of 1585 (A). After 24 h, the experiment was terminated and the histone-associated DNA fragments were determined in the cytosolic extract using a commercial kit (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany).
  • CpG-1-PTO sensitizes hair follicle cells for apoptosis by caspase activation.
  • Reconstructed hair follicle models of keratinocytes, fibroblasts and pseudopapillae from microcarriers covered with dermal papilla cells were used, as described in EP1455854. After completion of the models, the substances were applied systemically in the respective concentration.
  • Caspase activity was determined after 24 hours of incubation. The models were lysed for this purpose, the homogenate was centrifuged off and in the supernatant the activity of caspases 3 and 7 was determined by means of caspase-Glo 3/7 assay (Promega). The effect of staurosporine on the activity of the two caspases is enhanced in the presence of oligonucleotides ( Figure 17).

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung epithelialen Deckgewebes sowie die Verwendung von Nukleinsäuren als Chemosensitizer zur Behandlung von Hyperplasien epithelialen Deckgewebes, zur Verbesserung des Hautbildes, zur Epilation oder zur Induktion von Haarausfall.

Description

Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung epithelialen Deckgewebes
Beschreibung:
Die vorliegende Erfindung betrifft nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung epithelialen Deckgewebes sowie die Verwendung von Nukleinsäuren als Chemosensitizer zur Behandlung von Hyperplasien epithelialen Deckgewebes, zur Verbesserung des Hautbildes, zur Epilation oder zur Induktion von Haarausfall.
Kanzerosen und Präkanzerosen zählen zu den hyperplastischen Erkrankungen der Epidermis und sind häufige Indikationen in der Dermatologie mit steigender Inzidenz.
Verantwortlich hierfür sind neben individuellen genetischen Faktoren verschiedene Umweltfaktoren. Neben viralen und chemischen Einflüssen ist die chronische Sonnenlichteinwirkung das Hauptrisiko. Präkanzerosen sind typisch erweise präinvasive Vorgängerläsionen des Plattenepithelkarzinoms. Die häufigste Präkanzerose ist die aktinische Keratose (auch senile Keratose), die meist multipel in UV-belasteten Arealen (Glatze, Stirn, Nasenrücken, Lippen, Handrücken) auftritt. An diesen Prädilektionsstellen kann es ebenfalls zum gehäuften Auftreten von Basaliomen kommen. Bei multiplem Auftreten von Präkanzerosen und Basaliomen ist eine chirurgische Exzision der Hautläsionen sowohl aus kosmetischen als auch aus pragmatischen Gründen ungünstig.
Bisherige Methoden der Wahl sind die Kryotherapie, die lokale Chemotherapie mit 5-Fluorouracil und die topische Behandlung mit Imiquimod, einem so genannten immune response modifier. Besonders bei den beiden Letztgenannten ist eine über mehrere Wochen dauernde Therapie notwendig, bei der es zu schmerzhaften und entzündlichen Prozessen kommt. Dies ist ein häufiger Grund dafür, dass die Therapie vorzeitig abgebrochen wird und in der Folge Rezidive auftreten.
Eine Alternative zu den genannten Therapieoptionen ist daher wünschenswert.
Überraschenderweise wurde gefunden, dass sich der Einsatz von Nukleinsäuren bzw. nukleinsäurehaltigen Gemischen apoptosefördernd auf Keratinozyten auswirkt.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher eine kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung epithelialen Deckgewebes, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie Nukleinsäuren enthält.
Die in der erfindungsgemäßen Zubereitung enthaltenen Nukleinsäuren können natürlichen oder synthetischen Ursprungs sein. Sie können auch hydrolysiert, teilhydrolysiert oder denaturiert vorliegen. Vorzugsweise sind die Nukleinsäuren ausgewählt unter synthetischen Nukleinsäuren, Nukleinsäuren eukaryotischen Ursprungs und Nukleinsäuren bakteriellen Ursprungs, insbesondere unter Nukleinsäuren aus Escherichia coli und Clostridium perfringens.
Bevorzugte in der erfindungsgemäßen Zubereitung enthaltene Nukleinsäuren sind ausgewählt unter hochmolekularer bakterieller DNA, niedermolekularer bakterieller DNA, hochmolekularer eukaryontischer DNA, niedermolekularer eukaryontischer DNA sowie unter Oligonukleotiden.
Erfindungsgemäß einsetzbare Oligonukleotide weisen eine Länge von 5 bis 100, insbesondere 5 bis 70, vorzugsweise 10 bis 50, bevorzugt 10 bis 40 und ganz besonders bevorzugt von 12 bis 30 Nukleotiden auf.
Vorzugsweise sind die Nukleobasen der in der erfindungsgemäßen Zubereitung enthaltenen Nukleinsäuren nicht methyliert.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren können in dem Fachmann bekannter Weise vollständig (alle Nukleotide) oder teilweise (nur einige Nukleotide) chemisch modifiziert sein. Bevorzugte Modifikationen sind beispielsweise:
a) Veränderung der Internukleosidbrücken: Austausch von Phosphodiestern gegen Methylphosphonate, Phosphoramidate, Phosphorothioate (PTO) oder Hydroxylamine;
b) Veränderung der Zuckerkomponenten: Austausch der Ribose gegen diverse Hexo- bzw. Pentopyranosen oder 3'-5'-carbocyclisch verbrückte Derivate der 2'-Deoxyribose
c) Austausch des Strangrückgrats: Austausch der Polyesterketten auf Basis von Zucker-Phosphat- Einheiten gegen Carboxamidketten auf Basis von Aminosäurederivaten wie N-(2-Aminoethyl)- glycin-Einheiten;
Erfindungsgemäß besonders bevorzugt sind Phosphorothioat-Phosphodiester-Mixmere.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird unter epithelialem Deckgewebe zum einen die die äußere Körperoberfläche bedeckende Haut (bestehend aus Subkutis, Korium und Epidermis) verstanden, zum anderen das die Hohlorgane und Körperhöhlen auskleidende Gewebe, einschließlich der Epithelien der Gebärmutter und des Mundes.
Die erfindungsgemäße Zubereitung ist insbesondere zur Behandlung von hyperplastischen Erkrankungen des epithelialen Deckgewebes einsetzbar. Die erfindungsgemäße Zubereitung ist weiterhin zur Behandlung epithelialen Deckgewebes, insbesondere zur Epilation oder Induktion von Haarausfall oder zur Verbesserung des Hautbildes, insbesondere als Anti-Aging-Wirkstoff, bevorzugt zur Behandlung von Altersflecken, Schwielen oder der sogenannten Landmann's Haut, einsetzbar.
Insbesondere werden die erfindungsgemäßen Zubereitungen bzw. Nukleinsäuren in Kombination mit kosmetischen Wirkstoffen (z. B. AHA (Alphahydroxysäuren)), pharmazeutischen Wirkstoffen (z.B. Apoptoseinduktoren, Chemotherapeutika), mechanischer Behandlung oder UV-Licht eingesetzt. Diese Kombination kann die apoptosefördernde Wirkung erhöhen und ggf. geringere Einsatzkonzentrationen der Nukleinsäuren (und/oder ggf. der kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffe) möglich machen bzw. die Wirkung deutlich verbessern.
Die zu kombinierenden kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffe können in die gleiche Zubereitung eingearbeitet sein, oder vor bzw. nach der Applikation der erfindungsgemäßen Zubereitungen, enthaltend Nukleinsäuren, aufgebracht werden.
Ebenso kann eine mechanische oder UV-Licht Behandlung vor oder nach dem Auftrag der erfindungsgemäßen Zubereitung erfolgen.
Insbesondere sind Kombinationen der erfindungsgemäßen Zubereitungen mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen sowie UV-Licht zur Verbesserung des Hautbildes einsetzbar. Insbesondere können die erfindungsgemäßen Oligonukleotide aufgrund ihrer Apoptose- sensibilisierenden Wirkung in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, mechanischer Behandlung oder UV-Licht als Anti-Aging-Wirkstoffe, z.B. zur Behandlung von Altersflecken, Schwielen oder der sogenannten Landmann's Haut (Cutis rhomboidalis), verwendet werden.
Durch die Apoptose-Sensibilisierung von Haarkeratinozyten können sie zudem zur Epilation bzw. zur Induktion von Haarausfall eingesetzt, bevorzugt in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, UV-Licht oder mechanischer Behandlung. Besonders bevorzugt ist eine Kombination mit mechanischer Behandlung, da diese zur Induktion von Apoptose im Haarfollikel führen kann. Insbesondere bevorzugt ist die Kombination mit einer Epilation.
Die erfindungsgemäße Zubereitung ist ebenfalls in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, UV-Licht oder mechanischer Behandlung, insbesondere in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, zur Behandlung von hyperplastischen Erkrankungen des epithelialen Deckgewebes einsetzbar.
Hyperplastische Erkrankungen des epithelialen Deckgewebes sind all jene Erkrankungen, bei denen eine überschießende Proliferation bzw. verminderte Apoptose der epithelialen Zellen vorliegt. Beispielhaft seien hierfür Kanzerosen und Präkanzerosen sowie Verrucae (Warzen) genannt.
Die erfindungsgemäße Zubereitung ist außerdem zur Prophylaxe und Behandlung verschiedener anderer Erkrankungen oder unerwünschter Zustände geeignet, insbesondere zur Prophylaxe und Behandlung von Psoriasis (besonders von Nagelpsoriasis, die üblicherweise mit 5-Fluorouracil behandelt wird) sowie von kutanen Metastasen epithelialer Tumoren, auch der Schleimhaut.
Weiterhin geeignet ist die erfindungsgemäße Zubereitung z.B. in Kombination mit dem sog. „chemischen Peeling", um Unebenheiten der Haut zu egalisieren, beispielsweise Schwielen oder andere Verdickungen der Haut. Bei diesem Peeling werden meistens AHA (Alphahydroxysäuren), PHAs (Polyhydroxysäuren), TCA (Trichloressigsäure) und Glykolsäure verwendet.
Bevorzugtermaßen liegen die in der erfindungsgemäßen Zubereitung enthaltenen Nukleinsäuren als Oligodesoxynukleotide (ODN) vor. Diese ODN weisen vorzugsweise ein, zwei oder mehrere CpG -Motive auf, wie sie beispielsweise in der WO2004/012688 der Anmelderin beschrieben werden, auf die hiermit in vollem Umfang Bezug genommen wird.
CpG-Motive werden nach drei Hauptklassen von CpG-ODN unterschieden: CpG-A- (auch CpG-D), CpG-B- (auch CpG-K) und CpG-C-ODN.
Die Struktur von CpG-A ist durch ein chimäres Rückgrat gekennzeichnet: Die 5' und 3' Enden sind zur erhöhten Stabilität gegen Nukleasen phosphorothioat-modifiziert, während die mittlere Region aus unmodifizierten Phosphodiestern besteht. Unmodifizierte Phosphodiester-Oligonukleotide werden in vivo durch körpereigene Nukleasen sehr rasch abgebaut. Durch chemische Modifikation des Phosphodiester-Rückgrats, die sogenannte Phosphorothioat-Modifikation, erreicht man eine erhöhte Stabilität des ODN (Oligo-.Desoxynukleotid) gegenüber Nukleasen. In der Phosphorothioat- Modifikation ist ein nicht an der Bindung beteiligtes Sauerstoffatom der Phosphatgruppe durch ein Schwefelatom ersetzt.
CpG-A-ODN besitzen meist nur ein CpG-Motiv, das in eine palindromische Sequenz eingebettet ist. Zusätzlich weisen sie am 5'- und am 3'-Ende Folgen von Guaninen auf, die wohl für die Aufnahme der Oligonukleotide und die intrazelluläre Lokalisation von Bedeutung sind. CpG-B-ODN weisen ein Phosphorothioat-Rückgrat auf und besitzen häufig mehrere CpG-Motive. Am 5'-Ende befindet sich oft ein TCGTCG-Motiv.
CpG-C-ODN stellen quasi eine Mischung aus CpG-A- und CpG-B-ODN dar. Sie weisen wie die CpG-B-ODN ein Phosphorothioat-Rückgrat auf, besitzen häufig mehrere CpG-Motive und am 5'- Ende häufig ein TCGTCG-Motiv. Wie die CpG-A-ODN beinhalten sie ein zentrales CpG-Motiv, das in eine palindromische Sequenz eingebettet ist. Ihnen fehlen allerdings die Guanin-Folgen. Weiterhin erfindungsgemäß bevorzugte Nukleinsäuren sind solche, die C-,oder T-reiche Sequenzen mit einem Gehalt von C oder T im Bereich von 25 % bis 100 %, bevorzugt 50 % bis 100 %, besonders bevorzugt 75 % bis 100 % und ganz besonders bevorzugt 100 % aufweisen. In ganz besonderem Maße bevorzugt sind poly-T-Homopolymere oder poly-C-Homopolymere. Hierbei steht C für Cytosin und T für Thymin.
Vorteilhafterweise werden durch die Gabe von DNA-Oligonukleotiden bzw. DNA bakteriellen Ursprungs epidermale Zellen für Apoptose (kontrollierter Zelltod) sensibilisiert, so dass die Konzentration von 5-Fluorouracil oder einem anderen pro-apoptotischen Stimulus verringert werden kann, was die unerwünschten Nebenwirkungen erheblich reduziert. Ein zusätzlicher Vorteil des erfindungsgemäßen Einsatzes von Nukleinsäuren besteht darin, dass derartige DNA-Moleküle eine anti-inflammatorische Wirkung auf Hautzellen haben, was die Nebenwirkungen lokaler Chemotherapie lindern kann.
Apoptose beschreibt einen physiologischen Vorgang, bei dem es zu einem kontrollierten Untergang von Zellen kommt. Störungen in der Regulation von Apoptose treten häufig im Rahmen von hyperproliferativen Erkrankungen wie z.B. Krebs auf. Die Proteinkinase Akt (auch PKB od. RAC) spielt hierbei häufig eine zentrale Rolle, da sie pro-apoptotische Signalwege, in deren Folge es z.B. zur Aktivierung von Caspasen kommt, hemmt. Bei verschiedenen Krebsarten konnte eine konstitutive Aktivierung von Akt beobachtet werden. Eine Suppression der Akt-Aktivität ist hier wünschenswert, um Zellen den Eintritt in die Apoptose zu ermöglichen.
Überraschenderweise konnte die Anmelderin zeigen, dass ganz unterschiedliche DNA-Spezies zellspezifisch bei epidermalen Keratinozyten die Akt-Aktivität hemmen. Sowohl CpG-Motiv-haltige (CpG-1-PTO) als auch DNA-Oligonukleotide ohne CpG-Motiv (non-CpG-5-PTO) zeigen hier eine konzentrations-abhängige Hemmung der basalen Phosphorylierung der beiden funktionellen Phosphorylierungsstellen von Akt (Serin 473, Threonin 308) nach einer Inkubation von 30 Minuten (s. Beispiel 1). Weiter konnte gezeigt werden, dass 4μM CpG-1-PTO zu einer dauerhaften Hemmung von Akt von mindestens 24h führt (s. Beispiel 2). Dies ist therapeutisch interessant, da hierdurch ein relativ langes Zeitfenster der Akt-Hemmung gegeben ist.
Durch Deletionsmutanten von CpG-1-PTO und non-CpG-5-PTO konnte die Mindestlänge der DNA- ODN ermittelt werden, die eine Suppression von Akt bewirken (s. Beispiel 3 und 4). Für Deletionsmutanten von CpG-1-PTO konnte eine Länge von ≥ 12 Basen als Minimallänge bei einer Konzentration von 4μM ermittelt werden. Für Deletionsmutanten von non-CpG-5-PTO ergab sich eine sprunghafte Suppression von Akt ab einer Länge von > 12 Basen bei einer Konzentration von 4μM.
Neben synthetischen DNA-ODN wurden auch natürliche DNAs und DNA-haltige Produkte hinsichtlich der Akt-Suppression in Hautkeratinozyten untersucht (s. Beispiel 5). Es konnte gezeigt werden, dass hochmolekulare DNA aus Escherichia coli (Fa. ICN) und Clostridium perfringens (Fa. ICN) die basale Akt-Aktivität unterdrückt. Bereits 3.2μg/ml DNA aus C. perfringens sind ausreichend für eine vollständige Suppression, DNA aus E.coli zeigte bei 3.2μg/ml eine partielle Suppression der Phosphorylierung von Akt.
Niedermolekulare DNA aus Lachssperma (Fa. ICN) zeigte keinen Effekt auf Akt. Ebenso wirkungslos in diesem Zusammenhang war ein Autolysat aus Enterokokken (Symbio Flor 1 , SymbioPharm GmbH, Herborn) und der mycobakterielle Extrakt BCG (Bacillus Calmette Guerin, BCG-medac, Medac GmbH, Hamburg).
Weiter wurde untersucht, inwieweit die Suppression von Akt durch DNA ein generelles Prinzip ist oder ob es zellspezifische Effekte gibt. Hierzu wurden verschiedene Zellspezies mit jeweils 4μM CpG-1-PTO oder non-CpG-5-PTO für 30 Minuten inkubiert. Überraschenderweise zeigte sich, dass lediglich epidermale Keratinozyten (NHK = normal human keratinocytes - nicht gezeigt, HaCaT, A- 431) mit einer Suppression von Akt auf die Gabe der Oligonukleotide reagieren (s. Beispiel 6). Die applizierte DNA hatte keinen Effekt auf Akt in SZ95 (Sebozytenlinie), Cos-7 (Nierenepithelzelllinie), primären Hautfibroblasten und G361 (Melanomzelllinie). Es ist daher anzunehmen, dass die Suppression von Akt und die damit verbundenen Effekte auf das Apoptoseverhalten ein Keratinozyten-spezifisches Phänomen sind.
Weiter wurde überprüft, ob Keratinozyten durch die DNA-vermittelte Suppression von Akt für die Apoptose sensibilisiert werden. Hierzu wurden HaCaT- Keratinozyten mit CpG-1-PTO oder non- CpG-5-PTO und einem etablierten Apoptoseinduktor (Staurosporin) für 24h inkubiert. Anschließend wurden im Western blot die Caspasen 3 und 8, sowie deren Abbauprodukte nachgewiesen. Caspasen bilden eine Familie von Proteasen, die im Rahmen der Apoptose zu einer gerichteten Proteolyse von Zellproteinen führen. Einmal aktiviert schneiden sog. Initiatorcaspasen (z.B. Caspase 8) die stromabwärts gelegenen Effektorcaspasen (z.B. Caspase 3) und aktivieren sie damit. Die aktivierten Effektorcaspasen können dann zelluläre Strukturproteine, Zellzyklusproteine und Kinasen verdauen. In diesem Beispiel führt die Zugabe von Staurosporin zu einer konzentrations-abhängigen Fragmentierung von Caspase 8 und 3. Wenn die Zellen gleichzeitig mit CpG-1-PTO oder non-CpG-5-PTO inkubiert wurden, wird der apoptotische Effekt von Staurosporin verstärkt. Insofern wirken die verwendeten DNA-ODN als „Apoptose-Sensitizer" (s. Beispiel 7).
Die Wirksamkeit der verwendeten Oligonukleotide wurde weiter durch Untersuchungen hinsichtlich der Cytochrom C-Freisetzung erhärtet (s. Beispiel 8). Cytochrom C befindet sich bei vitalen Zellen zum größten Teil in den Mitochrondrien. Erst im Rahmen der Apoptose kommt es zu einer Anreicherung von zytoplasmatischem Cytochrom C. Dort fungiert Cytochrom C als Aktivator der Caspase 9 und ist somit ein sehr früher Apoptosemarker. Die vorgelegten Daten belegen, dass es durch CpG-1-PTO und non-CpG-5-PTO zu einer verstärkten Freisetzung von Cytochrom C ins Zytoplasma kommt und somit der Eintritt in die Apoptose erleichtert wird.
Die Wirksamkeit der Oligonukleotide hinsichtlich der Apoptose ist zellspezifisch, weder humane Sebozyten (s. Beispiel 9) noch Fibroblasten (s. Beispiel 10) zeigen einen erhöhten Abbau von Caspasen durch die Verwendung von Oligonukleotide.
Wie in den Beispielen 3 und 4 gezeigt, ist die Suppression von Akt abhängig von der Kettenlänge der verwendeten Oligonukleotide. Um zu zeigen, dass dieser Parameter ebenfalls entscheidend ist für die Wirkung als 'Apoptose-Sensitizer' wurde die Aktivität von Caspase 8 nach Anwendung von kurzen Deletionsmutanten (Hexamere) von CpG-1-PTO und non-CpG-5-PTO untersucht. Es konnte gezeigt werden, dass nur die langen Polymere mit einer Kettenlänge von 20 Nukleotiden (CpG-1-PTO, non-CpG-5-PTO) den Abbau von Caspase 8 verstärken, während die Hexamere (CpG-9-PTO, n-CpG-5G-PTO) zu keiner verstärkten Apoptose führen (s. Beispiel 1 1).
Um auch hier das Bild zu komplettieren, wurde ebenfalls der Gehalt an zytoplasmatischem Cytochrom C bestimmt. Bestätigend wurde gefunden, dass n-CpG-5-PTO die Apoptose verstärkt, während das kurze n-CpG-5G-PTO keinen signifikanten Einfluss auf Cytochrom C ausübt (s. Beispiel 12).
DNA-Oligo-Nukleotide werden klinisch derzeit vorwiegend als Antisense Moleküle getestet. Da diese Moleküle zum Teil auch ein oder mehrere CpG-Motive beinhalten, sollte getested werden, ob ein kommerzielles Oligo mit diesen Merkmalen (G3139, Oblimersen, Genasense) eine basale Apoptoseinduktion bewirkt. G3139 ist ein DNA-18mer mit 2 CpG-Motiven, das ursprünglich als bcl- 2 Antisense-Molekül konzipiert wurde und so die Apoptose in malignen Zellen erhöhen sollte. Wir konnten zeigen, dass eine Behandlung von humanen Keratinozyten (HaCaT, A-431) mit G3139- PTO - ohne zusätzlichen pro-apoptotischen Stimulus - zu keinerlei Induktion von Caspasen führt (s. Beispiel 13).
Um die Wirkung von Oligonukleotiden als Apoptose-Sensitizer weiter zu charakterisieren, wurden drei verschiedene Klassen von CpG-ODN (CpG-A-ODN, auch als CpG-D-ODN bekannt, CpG-B- ODN, auch als CpG-K-ODN bekannt und CpG-C-ODN) untersucht. Die Struktur von CpG-A ist durch ein chimäres Rückgrat gekennzeichnet: Die 5' und 3' Enden sind zur erhöhten Stabilität gegen Nukleasen Phosphorothioat-modifiziert, während die mittlere Region aus unmodifizierten Phosphodiestern besteht. Unmodifizierte Phosphodiester-Oligonukleotide werden in vivo durch körpereigene Nukleasen sehr rasch abgebaut. Durch chemische Modifikation des Phosphodiester- Rückgrats, die sogenannte Phosphorothioat-Modifikation, erreicht man eine erhöhte Stabilität des ODN (Oligo-Desoxynukleotid) gegenüber Nukleasen. In der Phosphorothioat-Modifikation ist ein nicht an der Bindung beteiligtes Sauerstoffatom der Phosphatgruppe durch ein Schwefelatom ersetzt. CpG-A-ODN besitzen meist nur ein CpG-Motiv, das in eine palindromische Sequenz eingebettet ist. Zusätzlich weisen sie am 5'- und am 3'-Ende Folgen von Guaninen auf, die wohl für die Aufnahme der Oligonukleotide und die intrazelluläre Lokalisation von Bedeutung sind. Als typischer Vertreter von CpG-A-ODN wurde die Sequenz 1585(A) getestet.
CpG-B-ODN weisen ein Phosphorothioat-Rückgrat auf und besitzen häufig mehrere CpG-Motive. Am 5'-Ende befindet sich oft ein TCGTCG-Motiv. Als typischer Vertreter von CpG-B-ODN wurde die schon oben erwähnte Sequenz von CpG-1-PTO getested.
CpG-C-ODN stellen quasi eine Mischung aus CpG-A- und CpG-B-ODN dar. Sie weisen wie die CpG-B-ODN ein Phosphorothioat-Rückgrat auf, besitzen häufig mehrere CpG-Motive und am 5'- Ende häufig ein TCGTCG-Motiv. Wie die CpG-A-ODN beinhalten sie ein zentrales CpG-Motiv, das in eine palindromische Sequenz eingebettet ist. Ihnen fehlen allerdings die Guanin-Folgen. Als typischer Vertreter von CpG-A-ODN wurde die Sequenz M-363-C getestet. Zur weiteren Charakerisierung der ODN-Wirkung wurden 20-mere aus poly-G (n-CpG-6-PTO), poly-T (n-CpG-3-PTO), und als Kontrolle das oben bereits erwähnte poly-C (non-CpG-5-PTO) getestet. Die genannten ODN-PTO wurden konzentrationsabhängig hinsichtlich ihrer Wirkung als Apoptose-Sensitizer untersucht. Dabei wurde ein später Apoptosemarker, der Nachweis Histon- assozierter DNA-Fragmente betrachtet. Es konnte gefunden werden, dass CpG-1-PTO (=CpG-B- ODN), non-CpG-5-PTO, n-CpG-3-PTO eine deutliche konzentrationsabhängige Super-Induktion der Apoptose in Gegenwart von Staurosporin bewirken (siehe Beispiel 14). n-CpG-6-PTO zeigte eine gegenteilige Wirkung, nämlich eine konzentrationsabhängige Hemmung der Apoptose in Gegenwart von Staurosporin (siehe Beispiel 15). M-362-C als Vertreter der CpG-C-ODN zeigte keine Wirkung hinsichtlich der Apoptoseinduktion (siehe Beispiel 15) während, 1585(A) (=CpG-A- ODN) eine zweigeteilte Wirkung zeigte: bei niedrigen Konzentrationen (1-4μM) wurde die Apoptose superinduziert, hohe Konzentrationen 8 und 16μM bewirkten ähnlich wie n-CpG-6-PTO eine Hemmung der Apoptose (s. Beispiel 16).
Der programmierte Zelltod spielt im Haarzyklus eine entscheidende Rolle, da die Übergangsphase (Katagenphase) zwischen der Wachstumsphase (anagene Phase) und der Ruhephase (Telogenphase), nach der das Haar ausfällt, ein von Apoptose geprägter Prozess ist. Bei der Einleitung des programmierten Zelltodes spielen auch hierbei Caspasen eine wichtige Rolle. Eine erhöhte Aktivität von Caspasen (insbesondere Caspase-3) führt somit zu verstärkter Apoptose und damit zu erhöhtem Haarausfall. Wird die Haarwurzel z.B. schädigenden Einflüssen ausgesetzt, so werden die Mitochondrien der Haarzellen beschädigt, die Caspasen aktiviert und die Haarwurzel tritt in die Katagenphase ein. Im Anschluss fällt das Haar aus.
Die Wirkung von Oligonukleotiden als Apoptose-Sensitizer wurde im rekonstruierten Haarfollikel untersucht (s. Beispiel 17). Die Aktivität der Caspasen 3 und 7 nach Inkubation mit den Testsubstanzen ermittelt. Die alleinige Behandlung mit CpG-1-PTO, einem CpG-B-ODN, zeigte keinen Effekt auf die Aktivität der beiden Caspasen. In Kombination mit dem Apoptose-Induktor Staurosporin kam es jedoch zu einer deutlich höheren Caspase-Aktivität als mit Staurosporin allein. Diese Ergebnisse zeigen, dass CpG-1-PTO allein keine Apoptose induziert, die Zellen jedoch für die Apoptose sensibilisiert (Beispiel 17). Durch diese Apoptose-Sensibilisierung kann eine erfindungsgemäße Zubereitung mit Oligonukleotiden somit zur Epilation bzw. zur Induktion von Haarausfall eingesetzt werden.
Die Wirksamkeit von Nukleinsäuren in Formulierungen zur Anwendung insbesondere auf der Haut hängt von der Verfügbarkeit der Nukleinsäuren in den lebenden Zellen der Haut ab. Das Eindringen eines Makromoleküls durch das Stratum Corneum (natürliche Barriere der Haut) in die Haut ist nicht immer gewährleistet. In Liposomen verpackte Nukleinsäuren können jedoch das Stratum Corneum von Hautmodellen penetrieren. Erfindungsgemäß bevorzugte Zubereitungen sind daher solche, die die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren in Liposomen verpackt enthalten. Gleichermaßen bevorzugt sind Zubereitungen, die andere geeignete Carrier-Systeme, z. B. Nanotechnologie-basierte Systeme oder Penetrationsenhancer (beispielsweise Harnstoff, Azone oder DMSO) enthalten.
Besonders bevorzugt erfolgt die Herstellung geeigneter Liposomen wie in der DE-A-197 40 092 beschrieben, auf die hiermit in vollem Umfang Bezug genommen wird.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung von Nukleinsäuren, insbesondere den in den vorstehend erwähnten Zubereitungen enthaltenen, näher beschriebenen Nukleinsäuren, als Chemosensitizer zur Behandlung von Hyperplasien epithelialen Deckgewebes.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen und/oder pharmazeutischen Zubereitung zur Behandlung von Hyperplasien epithelialen Deckgewebes, dadurch gekennzeichnet, dass man Nukleinsäuren, insbesondere die in den vorstehend erwähnten erfindungsgemäßen Zubereitungen enthaltenen, näher beschriebenen Nukleinsäuren, wie für die erfindungsgemäßen Zubereitungen beschrieben, mit pharmakologisch geeigneten und verträglichen Trägern vermischt.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Nukleinsäuren, insbesondere die vorstehend beschriebenen Nukleinsäuren, zur Anwendung in einem Verfahren zur Behandlung epithelialen Deckgewebes, insbesondere von Hyperplasien.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren werden im Sinne der vorliegenden Erfindung vorzugsweise als Komponente in eine kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitung eingearbeitet.
In einer bevorzugten Ausführungsform enthält die erfindungsgemäße Zubereitung die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren sowie zusätzlich mindestens eine Apoptose- induzierende Substanz, insbesondere 5-Fluorouracil oder ein Imidazoquinoline, wie z.B. Imiquimod. Die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren können auch in Kombination mit weiteren Substanzen oder Therapieformen eingesetzt werden, insbesondere mit solchen, die ausgewählt sind unter: Kohleteeren, Phototherapie, photodynamischer Therapie (insbesondere mit 5- Aminolevulinsäure = ALA), Anthralin, Kryotherapie und Retinoiden (ATRA = all-trans-retinoic acid, Acitretin, Tazarotene)
Die erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren können zeitgleich oder zeitversetzt mit den anderen Substanzen oder Therapieformen zur Anwendung kommen. Bevorzugt ist die zeitgleiche Anwendung.
Die Dosierung und Anwendungsdauer der erfindungsgemäß einsetzbaren Nukleinsäuren kann durch den Fachmann in geeigneter Weise angepaßt und variiert werden.
Die erfindungsgemäßen kosmetischen und/oder pharmazeutischen Zubereitungen, wie beispielsweise Cremes, Gele, Lotionen, alkoholische und wäßrig/alkoholische Lösungen, Emulsionen, Wachs/ Fett-Massen, Stiftpräparate, Puder oder Salben können - je nach Art der Formulierung - als Hilfs- und Zusatzstoffe milde Tenside, Ölkörper, Emulgatoren, Überfettungsmittel, Konsistenzgeber, Verdickungsmittel, Polymere, Siliconverbindungen, Fette, Wachse, Stabilisatoren, biogene Wirkstoffe, Filmbildner, Quellmittel, UV-Lichtschutzfaktoren, Antioxidantien, Hydrotrope, Konservierungsmittel, Solubilisatoren und dergleichen enthalten.
Typische Beispiele für geeignete milde, d.h. besonders hautverträgliche Tenside sind Fettalkoholpolyglycolethersulfate, Monoglyceridsulfate, Mono- und/oder Dialkylsulfosuccinate, Fettsäureisethionate, Fettsäuresarcosinate, Fettsäuretauride, Fettsäureglutamate, α- Olefinsulfonate, Ethercarbonsäuren, Alkyloligoglucoside, Fettsäureglucamide, Alkylamidobetaine und/oder Proteinfettsäurekondensate, letztere vorzugsweise auf Basis von Weizenproteinen.
Als Ölkörper kommen beispielsweise Guerbetalkohole auf Basis von Fettalkoholen mit 6 bis 18, vorzugsweise 8 bis 10 Kohlenstoffatomen, Ester von linearen Cβ-C∑rFettsäuren mit linearen Ce- C22-Fettalkoholen, Ester von verzweigten C6-Ci3-Carbonsäuren mit linearen C6-C22-Fettalkoholen, wie z.B. Myristylmyristat, Myristylpalmitat, Myristylstearat, Myristylisostearat, Myristyloleat, Myristylbehenat, Myristylerucat, Cetylmyristat, Cetylpalmitat, Cetylstearat, Cetylisostearat, Cetyloleat, Cetylbehenat, Cetylerucat, Stearylmyristat, Stearylpalmitat, Stearylstearat, Stearylisostearat, Stearyloleat, Stearylbehenat, Stearylerucat, Isostearylmyristat, Isostearylpalmitat, Isostearylstearat, Isostearylisostearat, Isostearyloleat, Isostearylbehenat, Isostearyloleat, Oleylmyristat, Oleylpalmitat, Oleylstearat, Oleylisostearat, Oleyloleat, Oleylbehenat, Oleylerucat, Behenylmyristat, Behenylpalmitat, Behenylstearat, Behenylisostearat, Behenyloleat, Behenylbehenat, Behenylerucat, Erucylmyristat, Erucylpalmitat, Erucylstearat, Erucylisostearat, Erucyloleat, Erucylbehenat und Erucylerucat in Betracht. Daneben eignen sich Ester von linearen Ce-C^-Fettsäuren mit verzweigten Alkoholen, insbesondere 2-Ethylhexanol, Ester von Hydroxycarbonsäuren mit linearen oder verzweigten C6-C22- Fettalkoholen, insbesondere Dioctyl Malate, Ester von linearen und/oder verzweigten Fettsäuren mit mehrwertigen Alkoholen (wie z.B. Propylenglycol, Dimerdiol oder Trimertriol) und/oder Guerbetalkoholen, Triglyceride auf Basis C6-C10-Fettsäuren, flüssige Mono-/Di- /Triglyceridmischungen auf Basis von Cβ-Ciβ-Fettsäuren, Ester von C6-C22-Fettalkoholen und/oder Guerbetalkoholen mit aromatischen Carbonsäuren, insbesondere Benzoesäure, Ester von C2-C12- Dicarbonsäuren mit linearen oder verzweigten Alkoholen mit 1 bis 22 Kohlenstoffatomen oder Polyolen mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen und 2 bis 6 Hydroxylgruppen, pflanzliche Öle, verzweigte primäre Alkohole, substituierte Cyclohexane, lineare und verzweigte C6-C22-Fettalkoholcarbonate, Guerbetcarbonate, Ester der Benzoesäure mit linearen und/oder verzweigten C6-C22-Alkoholen (z.B. Finsolv® TN), lineare oder verzweigte, symmetrische oder unsymmetrische Dialkylether mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen pro Alkylgruppe, Ringöffnungsprodukte von epoxidierten Fettsäureestern mit Polyolen, Siliconöle und/oder aliphatische bzw. naphthenische Kohlenwasserstoffe, wie z. B. Squalan, Squalen oder Dialkylcyclohexane.
Als Emulgatoren kommen beispielsweise nichtionogene Tenside aus mindestens einer der folgenden Gruppen in Frage:
(1) Anlagerungsprodukte von 2 bis 30 Mol Ethylenoxid und/ oder 0 bis 5 Mol Propylenoxid an lineare Fettalkohole mit 8 bis 22 C-Atomen, an Fettsäuren mit 12 bis 22 C-Atomen, an Alkylphe- nole mit 8 bis 15 C-Atomen in der Alkylgruppe sowie Alkylamine mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen im Alkylrest;
(2) C12/i8-Fettsäuremono- und -diester von Anlagerungsprodukten von 1 bis 30 Mol Ethylenoxid an Glycerin;
(3) Glycerinmono- und -diester und Sorbitanmono- und -diester von gesättigten und ungesättigten Fettsäuren mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen und deren Ethylenoxidanlagerungsprodukte;
(4) Alkyl- und/oder Alkenylmono- und -oligoglycoside mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen im Alk(en)ylrest und deren ethoxylierte Analoga;
(5) Anlagerungsprodukte von 15 bis 60 Mol Ethylenoxid an Ricinusöl und/oder gehärtetes Ricinusöl;
(6) Polyol- und insbesondere Polyglycerinester;
(7) Anlagerungsprodukte von 2 bis 15 Mol Ethylenoxid an Ricinusöl und/oder gehärtetes Ricinusöl;
(8) Partialester auf Basis linearer, verzweigter, ungesättigter bzw. gesättigter C6/22-F ettsäuren, Ricinolsäure sowie 12-Hydroxystearinsäure und Glycerin, Polyglycerin, Pentaerythrit, Dipentae- rythrit, Zuckeralkohole (z.B. Sorbit), Alkylglucoside (z.B. Methylglucosid, Butylglucosid, Laurylglu- cosid) sowie Polyglucoside (z.B. Cellulose); (9) Mono-, Di- und Trialkylphosphate sowie Mono-, Di- und/oder Tri-PEG-alkylphosphate und deren Salze;
(10) Wollwachsalkohole;
(11) Polysiloxan-Polyalkyl-Polyether-Copolymere bzw. entsprechende Derivate;
(12) Mischester aus Pentaerythrit, Fettsäuren, Citronensäure und Fettalkohol und/oder Mischester von Fettsäuren mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, Methylglucose und Polyolen, vorzugsweise Glycerin oder Polyglycerin,
(13) Polyalkylenglycole sowie
(14) Glycerincarbonat.
Die Anlagerungsprodukte von Ethylenoxid und/oder von Propylenoxid an Fettalkohole, Fettsäuren, Alkylphenole, Glycerinmono- und -diester sowie Sorbitanmono- und -diester von Fettsäuren oder an Ricinusöl stellen bekannte, im Handel erhältliche Produkte dar.
Es handelt sich dabei um Homologengemische, deren mittlerer Alkoxylierungsgrad dem Verhältnis der Stoffmengen von Ethylenoxid und/ oder Propylenoxid und Substrat, mit denen die Anlagerungsreaktion durchgeführt wird, entspricht. C12/i8-Fettsäuremono- und -diester von Anlagerungsprodukten von Ethylenoxid an Glycerin sind aus DE 2024051 PS als Rückfet- tungsmittel für kosmetische Zubereitungen bekannt.
Alkyl- und/oder Alkenylmono- und -oligoglycoside, ihre Herstellung und ihre Verwendung sind aus dem Stand der Technik bekannt. Ihre Herstellung erfolgt insbesondere durch Umsetzung von GIu- cose oder Oligosacchariden mit primären Alkoholen mit 8 bis 18 C-Atomen. Bezüglich des Glycosidrestes gilt, dass sowohl Monoglycoside, bei denen ein cyclischer Zuckerrest glycosidisch an den Fettalkohol gebunden ist, als auch oligomere Glycoside mit einem Oligomerisationsgrad bis vorzugsweise etwa 8 geeignet sind. Der Oligomerisierungsgrad ist dabei ein statistischer Mittelwert, dem eine für solche technischen Produkte übliche Homologenverteilung zugrunde liegt.
Typische Beispiele für geeignete Polyglycerin ester sind Polyglyceryl-2 Dipolyhydroxystearate (Dehymuls® PGPH), Polyglycerin-3-Diisostearate (Lameform® TGI), Polyglyceryl-4 Isostearate (Isolan® Gl 34), Polyglyceryl-3 Oleate, Diisostearoyl Polyglyceryl-3 Diisostearate (Isolan® PDI), Polyglyceryl-3 Methylglucose Distearate (Tego Care® 450), Polyglyceryl-3 Beeswax (Cera Bellina®), Polyglyceryl-4 Caprate (Polyglycerol Caprate T2010/90), Polyglyceryl-3 Cetyl Ether (Chimexane® NL), Polyglyceryl-3 Distearate (Cremophor® GS 32) und Polyglyceryl Polyricinoleate (Admul® WOL 1403), Polyglyceryl Dimerate Isostearate sowie deren Gemische.
Weiterhin können als Emulgatoren zwitterionische Tenside verwendet werden. Als zwitterionische Tenside werden solche oberflächenaktiven Verbindungen bezeichnet, die im Molekül mindestens eine quartäre Ammoniumgruppe und mindestens eine Carboxylat- und eine Sulfonatgruppe tragen. Besonders geeignete zwitterionische Tenside sind die sogenannten Betaine wie die N-Alkyl-N,N- dimethylammoniumglycinate, beispielsweise das Kokosalkyldimethylammoniumglycinat, N-Acyl- aminopropyl-N,N-dimethylammoniumglycinate, beispielsweise das Kokosacyl- aminopropyldimethylammoniumglycinat, und 2-Alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethylimidazoline mit jeweils 8 bis 18 C-Atomen in der Alkyl- oder Acylgruppe sowie das Kokosacylaminoethyl- hydroxyethylcarboxymethylglycinat. Besonders bevorzugt ist das unter der CTFA-Bezeichnung Cocamidopropyl Betaine bekannte Fettsäureamid-Derivat. Ebenfalls geeignete Emulgatoren sind ampholytische Tenside. Unter ampholytischen Tensiden werden solche oberflächenaktiven Verbindungen verstanden, die außer einer C8/i8-Alkyl- oder -Acylgruppe im Molekül mindestens eine freie Aminogruppe und mindestens eine -COOH- oder -SO3H-Gruppe enthalten und zur Ausbildung innerer Salze befähigt sind. Beispiele für geeignete ampholytische Tenside sind N- Alkylglycine, N-Alkylpropionsäuren, N-Alkylaminobuttersäuren, N-Alkyliminodipropionsäuren, N-Hy- droxyethyl-N-alkylamidopropylglycine, N-Alkyltaurine, N-Alkylsarcosine, 2-Alkylaminopropion- säuren und Alkylaminoessigsäuren mit jeweils etwa 8 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe. Besonders bevorzugte ampholytische Tenside sind das N-Kokosalkylaminopropionat, das Kokosacylaminoethylaminopropionat und das
Figure imgf000014_0001
Neben den ampholytischen kommen auch quartäre Emulgatoren in Betracht, wobei solche vom Typ der Esterquats, vorzugsweise methylquaternierte Difettsäuretriethanolaminester-Salze, besonders bevorzugt sind.
Als Überfettungsmittel können Substanzen wie beispielsweise Lanolin und Lecithin sowie polyethoxylierte oder acylierte Lanolin- und Lecithinderivate, Polyolfettsäureester, Monoglyceride und Fettsäurealkanolamide verwendet werden, wobei die letzteren gleichzeitig als Schaumstabilisatoren dienen.
Als Konsistenzgeber kommen in erster Linie Fettalkohole oder Hydroxyfettalkohole mit 12 bis 22 und vorzugsweise 16 bis 18 Kohlenstoffatomen und daneben Partialglyceride, Fettsäuren oder Hydroxyfettsäuren in Betracht. Bevorzugt ist eine Kombination dieser Stoffe mit Alkyloligoglucosiden und/oder Fettsäure-N-methylglucamiden gleicher Kettenlänge und/oder Polyglycerinpoly-12-hydroxystearaten.
Geeignete Verdickungsmittel sind beispielsweise Aerosil-Typen (hydrophile Kieselsäuren), Polysaccharide, insbesondere Xanthan-Gum, Guar-Guar, Agar-Agar, Alginate und Tylosen, Carboxymethylcellulose und Hydroxyethylcellulose, ferner höhermolekulare
Polyethylenglycolmono- und -diester von Fettsäuren, Polyacrylate, (z.B. Carbopole® von Goodrich oder Synthalene® von Sigma), Polyacrylamide, Polyvinylalkohol und Polyvinylpyrrolidon, Tenside wie beispielsweise ethoxylierte Fettsäureglyceride, Ester von Fettsäuren mit Polyolen wie beispielsweise Pentaerythrit oder Trimethylolpropan, Fettalkoholethoxylate mit eingeengter Homologenverteilung oder Alkyloligoglucoside sowie Elektrolyte wie Kochsalz und Ammoniumchlorid. Geeignete kationische Polymere sind beispielsweise kationische Cellulosederivate, wie z.B. eine quaternierte Hydroxyethylcellulose, die unter der Bezeichnung Polymer JR 400® von Amerchol erhältlich ist, kationische Stärke, Copolymere von Diallylammoniumsalzen und Acrylamiden, quaternierte VinylpyrrolidonΛ/inylimidazol-Polymere, wie z.B. Luviquat® (BASF), Kondensationsprodukte von Polyglycolen und Aminen, quaternierte Kollagenpolypeptide, wie beispielsweise Lauryldimonium hydroxypropyl hydrolyzed collagen (Lamequat®L/Grünau), quaternierte Weizenpolypeptide, Polyethylenimin, kationische Siliconpolymere, wie z.B. Amidomethicone, Copolymere der Adipinsäure und Dimethylaminohydroxypropyldiethylentriamin (Cartaretine®/Sandoz), Copolymere der Acrylsäure mit Dimethyldiallylammoniumchlorid (Merquat® 550/Chemviron), Polyaminopolyamide, wie z.B. beschrieben in der FR 2252840 A sowie deren vernetzte wasserlöslichen Polymere, kationische Chitinderivate wie beispielsweise quaterniertes Chitosan, gegebenenfalls mikrokristallin verteilt, Kondensationsprodukte aus Dihalogenalkylen, wie z.B. Dibrombutan mit Bisdialkylaminen, wie z.B. Bis-Dimethylamino-1 ,3-pro- pan, kationischer Guar-Gum, wie z.B. Jaguar® CBS, Jaguar® C-17, Jaguar® C-16 der Firma Celanese, quaternierte Ammoniumsalz-Polymere, wie z.B. Mirapol® A-15, Mirapol® AD-1 , Mirapol® AZ- 1 der Firma Miranol.
Als anionische, zwitterionische, amphotere und nichtionische Polymere kommen beispielsweise Vinylacetat/Crotonsäure-Copolymere, Vinylpyrrolidon/Vinylacrylat-Copolymere,
Vinylacetat/Butylmaleat/ Isobornylacrylat-Copolymere, Methylvinylether/Maleinsäureanhydrid- Copolymere und deren Ester, unvernetzte und mit Polyolen vernetzte Polyacrylsäuren, Acrylamido- propyltrimethylammoniumchlorid/Acrylat-Copolymere, Octylacrylamid/Methylmethacry- lat/tert.ButylaminoethylmethacrylatΩ-Hydroxyproyl-methacrylat-Copolymere, Polyvinylpyrrolidon, Vinylpyrrolidon/Vinylacetat-Copolymere, Vinylpyrrolidon/ DimethylaminoethylmethacrylatΛ/inyl- caprolactam-Teφolymere sowie gegebenenfalls derivatisierte Celluloseether und Silicone in Frage.
Geeignete Siliconverbindungen sind beispielsweise Dimethylpolysiloxane,
Methylphenylpolysiloxane, cyclische Silicone sowie amino-, fettsäure-, alkohol-, polyether-, epoxy-, fluor-, glykosid- und/oder alkyl modifizierte Siliconverbindungen, die bei Raumtemperatur sowohl flüssig als auch harzförmig vorliegen können. Weiterhin geeignet sind Simethicone, bei denen es sich um Mischungen aus Dimethiconen mit einer durchschnittlichen Kettenlänge von 200 bis 300 Dimethylsiloxan-Einheiten und hydrierten Silicaten handelt. Eine detaillierte Übersicht über geeignete flüchtige Silicone findet sich zudem von Todd et al. in Cosm.Toil. 91, 27 (1976).
Typische Beispiele für Fette sind Glyceride, als Wachse kommen u.a. natürliche Wachse, wie z.B. Candelillawachs, Carnaubawachs, Japanwachs, Espartograswachs, Korkwachs, Guarumawachs, Reis-keimölwachs, Zuckerrohrwachs, Ouricurywachs, Montanwachs, Bienenwachs, Schellackwachs, Walrat, Lanolin (Wollwachs), Bürzelfett, Ceresin, Ozokerit (Erdwachs), Petrolatum, Paraffinwachse, Mikrowachse; chemisch modifizierte Wachse (Hartwachse), wie z.B. Montanesterwachse, Sasolwachse, hydrierte Jojobawachse sowie synthetische Wachse, wie z.B. Polyalkylenwachse und Polyethylenglycolwachse in Frage.
Als Stabilisatoren können Metallsalze von Fettsäuren, wie z.B. Magnesium-, Aluminium- und/oder Zinkstearat bzw. -ricinoleat eingesetzt werden.
Unter biogenen Wirkstoffen sind beispielsweise Tocopherol, Tocopherolacetat, Tocopherolpalmitat, Ascorbinsäure, Desoxyribonucleinsäure, Retinol, Bisabolol, Allantoin, Phytantriol, Panthenol, AHA- Säuren, Aminosäuren, Ceramide, Pseudoceramide, essentielle Öle, Pflanzenextrakte und Vitaminkomplexe zu verstehen.
Gebräuchliche Filmbildner sind beispielsweise Chitosan, mikrokristallines Chitosan, quaterniertes Chitosan, Polyvinylpyrrolidon, Vinylpyrrolidon-Vinylacetat-Copolymerisate, Polymere der Acrylsäurereihe, quatemäre Cellulose-Derivate, Kollagen, Hyaluronsäure bzw. deren Salze und ähnliche Verbindungen.
Als Quellmittel für wäßrige Phasen können Montmorillonite, Clay Mineralstoffe, Pemulen sowie alkylmodifizierte Carbopoltypen (Goodrich) dienen. Weitere geeignete Polymere bzw. Quellmittel können der Übersicht von R.Lochhead in Cosm.Toil. 108, 95 (1993) entnommen werden.
Unter UV-Lichtschutzfaktoren sind beispielsweise bei Raumtemperatur flüssig oder kristallin vorliegende organische Substanzen (Lichtschutzfilter) zu verstehen, die in der Lage sind, ultraviolette Strahlen zu absorbieren und die aufgenommene Energie in Form längerwelliger Strahlung, z.B. Wärme wieder abzugeben. UVB-Filter können öllöslich oder wasserlöslich sein. Als öllösliche Substanzen sind z.B. zu nennen:
• 3-Benzylidencampher bzw. 3-Benzylidennorcampher und dessen Derivate, z.B. 3-(4- Methylbenzyliden)campher wie in der EP 0693471 B1 beschrieben;
• 4-Aminobenzoesäurederivate, vorzugsweise 4-Dimethylamino)benzoesäure-2-ethylhexylester, 4-(Dimethylamino)benzoesäure-2-octylester und 4-(Dimethylamino)benzoesäureamylester;
• Ester der Zimtsäure, vorzugsweise 4-Methoxyzimtsäure-2-ethylhexylester, 4- Methoxyzimtsäurepropylester, 4-Methoxyzimtsäureisoamylester 2-Cyano-3,3-phenylzimtsäure- 2-ethylhexylester (Octocrylene);
• Ester der Salicylsäure, vorzugsweise Salicylsäure-2-ethylhexylester, Salicylsäure-4- isopropylbenzylester, Salicylsäurehomomenthylester;
• Derivate des Benzophenons, vorzugsweise 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon, 2-Hydroxy-4- methoxy-4'-methylbenzophenon, 2,2'-Dihydroxy-4-methoxybenzophenon;
• Ester der Benzalmalonsäure, vorzugsweise 4-Methoxybenzmalonsäuredi-2-ethylhexylester; • Triazinderivate, wie z.B. 2,4,6-Trianilino-(p-carbo-2'-ethyl-1 '-hexyloxy)-1 ,3,5-triazin und Octyl Triazon, wie in der EP 0818450 A1 beschrieben oder Dioctyl Butamido Triazone (Uvasorb® HEB);
• Propan-1 ,3-dione, wie z.B. 1-(4-tert.Butylphenyl)-3-4'methoxyphenyl)propan-1 ,3-dion;
• Ketotricyclo(5.2.1.0)decan-Derivate, wie in der EP 0694521 B1 beschrieben.
Als wasserlösliche Substanzen kommen in Frage:
• 2-Phenylbenzimidazol-5-sulfonsäure und deren Alkali-, Erdalkali-, Ammonium-, Alkylammonium-, Alkanolammonium- und Glucammoniumsalze;
• Sulfonsäurederivate von Benzophenonen, vorzugsweise 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon-5- sulfonsäure und ihre Salze;
• Sulfonsäurederivate des 3-Benzylidencamphers, wie z.B. 4-(2-Oxo-3-bornylidenme- thyl)benzolsulfonsäure und 2-Methyl-5-(2-oxo-3-bornyliden)sulfonsäure und deren Salze.
Als typische UV-A-Filter kommen insbesondere Derivate des Benzoylmethans in Frage, wie beispielsweise 1-(4'-tert.Butylphenyl)-3-(4'-methoxyphenyl)propan-1 ,3-dion, 4-tert.-Butyl-4'- methoxydibenzoylmethan (Parsol 1789), 1 -Phenyl-3-(4'-isopropylphenyl)-propan-1 ,3-dion sowie Enaminverbindungen, wie beschrieben in der DE 19712033 A1 (BASF). Die UV-A und UV-B-Filter können selbstverständlich auch in Mischungen eingesetzt werden. Neben den genannten löslichen Stoffen kommen für diesen Zweck auch unlösliche Lichtschutzpigmente, nämlich feindisperse Metalloxide bzw. Salze in Frage. Beispiele für geeignete Metalloxide sind insbesondere Zinkoxid und Titandioxid und daneben Oxide des Eisens, Zirkoniums, Siliciums, Mangans, Aluminiums und Cers sowie deren Gemische. Als Salze können Silicate (Talk), Bariumsulfat oder Zinkstearat eingesetzt werden. Die Oxide und Salze werden in Form der Pigmente für hautpflegende und hautschützende Emulsionen und dekorative Kosmetik verwendet. Die Partikel sollten dabei einen mittleren Durchmesser von weniger als 100 nm, vorzugsweise zwischen 5 und 50 nm und insbesondere zwischen 15 und 30 nm aufweisen. Sie können eine sphärische Form aufweisen, es können jedoch auch solche Partikel zum Einsatz kommen, die eine ellipsoide oder in sonstiger Weise von der sphärischen Gestalt abweichende Form besitzen. Die Pigmente können auch oberflächenbehandelt, d.h. hydrophilisiert oder hydrophobiert vorliegen. Typische Beispiele sind gecoatete Titandioxide, wie z.B. Titandioxid T 805 (Degussa) oder Eusolex® T2000 (Merck). Als hydrophobe Coatingmittel kommen dabei vor allem Silicone und dabei speziell Trialkoxyoctylsilane oder Simethicone in Frage. In Sonnenschutzmitteln werden bevorzugt sogenannte Mikro- oder Nanopigmente eingesetzt. Vorzugsweise wird mikronisiertes Zinkoxid verwendet. Weitere geeignete UV-Lichtschutzfilter sind der Übersicht von P.Finkel in SÖFW-Journal 122, 543 (1996) zu entnehmen.
Neben den beiden vorgenannten Gruppen primärer Lichtschutzstoffe können auch sekundäre Lichtschutzmittel vom Typ der Antioxidantien eingesetzt werden, die die photochemische Reaktionskette unterbrechen, welche ausgelöst wird, wenn UV-Strahlung in die Haut eindringt. Typische Beispiele hierfür sind Aminosäuren (z.B. Glycin, Histidin, Tyrosin, Tryptophan) und deren Derivate, Imidazole (z.B. Urocaninsäure) und deren Derivate, Peptide wie D,L-Carnosin, D- Carnosin, L-Carnosin und deren Derivate (z.B. Anserin), Chlorogensäure und deren Derivate, Liponsäure und deren Derivate (z.B. Dihydroliponsäure), Aurothioglucose, Propylthiouracil und andere Thiole (z.B. Thioredoxin, Glutathion, Cystein, Cystin, Cystamin und deren Glycosyl-, N- Acetyl-, Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Amyl-, Butyl- und Lauryl-, Palmitoyl-, Oleyl-, γ-Linoleyl-, Cholesteryl- und Glycerylester) sowie deren Salze, Dilaurylthiodipropionat, Distearylthiodipropionat, Thiodipropionsäure und deren Derivate (Ester, Ether, Peptide, Lipide, Nukleotide, Nukleoside und Salze) sowie Sulfoximinverbindungen (z.B. Buthioninsulfoximine, Homocysteinsulfoximin, Bu- tioninsulfone, Penta-, Hexa-, Heptathioninsulfoximin) in sehr geringen verträglichen Dosierungen (z.B. pmol bis μmol/kg), ferner (Metall)-Chelatoren (z.B. α-Hydroxyfettsäuren, Palmitinsäure, Phytinsäure, Lactoferrin), α-Hydroxysäuren (z.B. Citronensäure, Milchsäure, Äpfelsäure), Huminsäure, Gallensäure, Gallenextrakte, Bilirubin, Biliverdin, EDTA, EGTA und deren Derivate, ungesättigte Fettsäuren und deren Derivate (z.B. y-Linolensäure, Linolsäure, Ölsäure), Folsäure und deren Derivate, Ubichinon und Ubichinol und deren Derivate, Vitamin C und Derivate (z.B. Ascorbylpalmitat, Mg-Ascorbylphosphat, Ascorbylacetat), Tocopherole und Derivate (z.B. Vitamin- E-acetat), Vitamin A und Derivate (Vitamin-A-palmitat) sowie Koniferylbenzoat des Benzoeharzes, Rutinsäure und deren Derivate, α-Glycosylrutin, Ferulasäure, Furfurylidenglucitol, Carnosin, Butylhydroxytoluol, Butylhydroxyanisol, Nordihydroguajakharzsäure, Nordihydroguajaretsäure, Trihydroxybutyrophenon, Harnsäure und deren Derivate, Mannose und deren Derivate, Superoxid- Dismutase, Zink und dessen Derivate (z.B. ZnO, ZnSO4) Selen und dessen Derivate (z.B. Selen- Methionin), Stilbene und deren Derivate (z.B. Stilbenoxid, trans-Stilbenoxid) und die erfindungsgemäß geeigneten Derivate (Salze, Ester, Ether, Zucker, Nukleotide, Nukleoside, Peptide und Lipide) dieser genannten Wirkstoffe.
Außerdem können erfindungsgemäß Verbindungen zur Unterdrückung oder Minderung von Hautstörungen zugesetzt werden, die durch UV-Strahlung induziert werden, insbesondere Aktivatoren von Peroxisom-Proliferator-Aktivierten Rezeptoren (PPAR-Aktivatoren), wie in der WO 02/38150 beschrieben, auf die hiermit in vollem Umfang Bezug genommen wird.
Zur Verbesserung des Fließverhaltens können ferner Hydrotrope, wie beispielsweise Ethanol, Isopropylalkohol, oder Polyole eingesetzt werden. Polyole, die hier in Betracht kommen, besitzen vorzugsweise 2 bis 15 Kohlenstoffatome und mindestens zwei Hydroxylgruppen. Die Polyole können noch weitere funktionelle Gruppen, insbesondere Aminogruppen, enthalten bzw. mit Stickstoff modifiziert sein. Typische Beispiele sind • Glycerin;
• Alkylenglycole, wie beispielsweise Ethylenglycol, Diethylenglycol, Propylenglycol, Butylenglycol, Hexylenglycol sowie Polyethylenglycole mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 100 bis 1.000 Dalton;
• technische Oligoglyceringemische mit einem Eigenkondensationsgrad von 1 ,5 bis 10 wie etwa technische Diglyceringemische mit einem Diglyceringehalt von 40 bis 50 Gew.-%;
• Methyolverbindungen, wie insbesondere Trimethylolethan, Trimethylolpropan, Trimethylolbutan, Pentaerythrit und Dipentaerythrit;
• Niedrigalkylglucoside, insbesondere solche mit 1 bis 8 Kohlenstoffen im Alkylrest, wie beispielsweise Methyl- und Butylglucosid;
• Zuckeralkohole mit 5 bis 12 Kohlenstoffatomen, wie beispielsweise Sorbit oder Mannit,
• Zucker mit 5 bis 12 Kohlenstoffatomen, wie beispielsweise Glucose oder Saccharose;
• Aminozucker, wie beispielsweise Glucamin;
• Dialkoholamine, wie Diethanolamin oder 2-Amino-1 ,3-propandiol.
Als Konservierungsmittel eignen sich beispielsweise Phenoxyethanol, Formaldehydlösung, Parabene, Pentandiol oder Sorbinsäure sowie die in Anlage 6, Teil A und B der Kosmetikverordnung aufgeführten weiteren Stoffklassen.
Der Gesamtanteil der Hilfs- und Zusatzstoffe kann 1 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40 Gew.-% - bezogen auf die Mittel - betragen. Die Herstellung der kosmetischen und/oder pharmazeutischen Zubereitung kann durch übliche Kalt - oder Heißprozesse erfolgen; vorzugsweise arbeitet man nach der Phaseninversionstemperatur-Methode.
Die folgenden Beispiele beschreiben die Erfindung, ohne sie jedoch darauf einzuschränken:
Beispiel 1
CpG-1-PTO (5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3) und non-CpG-5-PTO (5'- CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3') hemmen die basale Akt-Aktivierung. HaCaT Keratinozyten wurden mit den genannten DNA-ODN für 30 Minuten inkubiert. Anschließend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurde mit phospho- spezifischen Antikörpern die Phosphorylierungen am Serin 473 und Threonin 308 nachgewiesen. Die gleichmäßige Probenbeladung wurde mit Antikörpern gegen gesamt-Akt überprüft (Fig.1).
Beispiel 2:
Dauerhafte Hemmung von Akt durch Gabe von 4μM CpG-1-PTO (5'-TCC ATG ACG. TTC CTG ACG.TT-3) in HaCaT Zellen (Fig.2). Proteinextraktion und Nachweis siehe Beispiel 1.
Beispiel 3:
Längenabhängige Suppression von Akt durch CpG-1-PTO Deletionsmutanten. HaCaT Zellen wurden mit 4μM der unten genannten Deletionsmutanten von CpG-1-PTO für 30 Minuten inkubiert. In der Abbildung wurden der Übersichtlichkeit wegen die unten gelisteten Abkürzungen für die Oligonukleotide verwendet (Fig. 3). Proteinextraktion und Nachweis siehe Beispiel 1.
1 : CpG-1 -PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3
9: CpG-9-PTO: 5'-GAC GTT-3'
12: CpG-12-PTO: 5'-CAT GAC GTT CCT-3'
13: CpG-13-PTO: 5'-CC ATG ACG TTC CTG-3'
14: CpG-14-PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG A-3'
16: CpG-16-PTO: 5'- TCC ATG ACG TTC CTG ACG-3'
Beispiel 4:
Längenabhängige Suppression von Akt durch non-CpG-5-PTO Deletionsmutanten. HaCaT Zellen wurden mit 4μM der unten genannten Deletionsmutanten von non-CpG-5-PTO für 30 Minuten inkubiert. In der Abbildung wurden der Übersichtlichkeit wegen die unten gelisteten Abkürzungen für die Oligonukleotide verwendet (Fig.4). Proteinextraktion und Nachweis siehe Beispiel 1.
n5: non-CpG-5-PTO: 5- CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3' n5A: non-CpG-5A-PTO: 5- CCC CCC CCC CCC CCC CCC -3' n5B: non-CpG-5B-PTO: 5'- CCC CCC CCC CCC CCC C -3' n5C: non-CpG-5C-PTO: 5'- CCC CCC CCC CCC CC -3' n5D: non-CpG-5D-PTO: 5'- CCC CCC CCC CCC -3' n5G: non-CpG-5G-PTO: 5'- CCC CCC -3'
Beispiel 5:
Hemmung von Akt durch natürliche DNA bzw. DNA-haltige Produkte. HaCaT Keratinozyten wurden für 60 Minuten mit untenstehenden Substanzen in den angegeben Konzentrationen inkubiert (Fig.5). Proteinextraktion und Nachweis siehe Beispiel 1.
E.coli = Genomische DNA aus Escherichia coli
C. perfr. = Genomische DNA aus Clostridium perfringens
Salm. sp. = Genomische DNA aus Lachssperma
Symb. = Symbioflor
BCG = Bacillus Calmette Guerin
CpG-1 -PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3
Beispiel 6:
Zellspezies-spezifische Effekte von CpG-1-PTO (5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3) und non- CpG-5-PTO (5'- CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3') auf Akt. Verschiedene Zelllinien wurden für 30 Minuten mit jeweils 4μM CpG-1-PTO bzw. non-CpG-5-PTO inkubiert (Fig. 6). Proteinextraktion und Nachweis siehe Beispiel 1.
A-431 (epidermoide Karzinomzelllinie)
HaCaT (spontan immortalisierte Keratinozytenlinie)
SZ (SZ95, Sebozytenlinie)
Cos-7 (Nierenepithelzelllinie)
Fib (primäre Hautfibroblasten)
G361 (Melanomzelllinie)
Beispiel 7:
CpG-1-PTO und non-CpG-5-PTO sensibilisieren HaCaT Keratinozyten für die Apoptose durch Caspaseaktivierung. HaCaT Keratinozyten wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (STS, 0.1 , 0.5, 1.OμM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 4μM CpG-1-PTO oder non-CpG-5-PTO inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurden die unverdauten und geschnittenen (CIv. = cleaved) Formen von Caspase 8 und 3 nachgewiesen. Der Effekt von Staurosporin auf die proteolytische Aktivierung von Caspase 8 und 3 wird in Anwesenheit von Oligonukleotiden verstärkt. Links stehendes Schema (Fig. 7) verdeutlicht die Beteiligung von Caspase 8 und 3 im Rahmen der Apoptose.
CpG-1 -PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3'
Beispiel 8:
CpG-1-PTO und non-CpG-5-PTO sensibilisieren HaCaT Keratinozyten für die Apoptose durch Freisetzung von Cytochrom C. HaCaT Keratinozyten wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (StS, 0.1 , 0.5, 1.0μM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 8μM CpG-1-PTO oder non-CpG-5-PTO inkubiert. Anschließend wurden die Zellen durch eine milde Lyse mit Digitonin fraktioniert. Der Gehalt an Cytochrom C im zytosolischen Extrakt wurde in einem kommerziellen Cytochrome C Immunoassay (R&D Systems, Wiesbaden, Germany) bestimmt.
Der Effekt von Staurosporin auf den Gehalt an zytosolischem Cytochrom C wird in Anwesenheit der Oligonukleotide verstärkt.
Cytochrom C befindet sich bei vitalen Zellen zum größten Teil in den Mitochrondrien. Erst im Rahmen der Apoptose kommt es zu einer Anreicherung von zytoplasmatischem Cytochrom C. Dort fungiert Cytochrom C als Aktivator der Caspase 9 und ist somit ein sehr früher Apoptosemarker.
Beispiel 9:
Keine Sensibilisierung zur Apoptose in Sebozyten der Haut (SZ95) durch CpG-1-PTO und non- CpG-5-PTO.
SZ95 Zellen wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (STS, 0.1 , 0.5, 1.0μM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 8μM CpG-1-PTO oder non- CpG-5-PTO inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurde die proteolytische Aktivierung von Caspase 3, 8 und 9 nachgewiesen. Es konnte keine verstärkte Wirkung von Staurosporin in Kombination mit den Oligonukleotiden gegenüber Staurosporin allein gezeigt werden (Fig.9).
CpG-1 -PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3'
Beispiel 10:
Keine Sensibilisierung zur Apoptose in primären Fibroblasten der Haut durch CpG-1-PTO und non- CpG-5-PTO. Fibroblasten wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (STS, 0.1 , 0.5, 1.0μM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 8μM CpG-1-PTO oder non- CpG-5-PTO inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurde die proteolytische Aktivierung von Caspase 3 und 9 nachgewiesen. Caspase 8 war nicht nachweisbar. Es konnte keine verstärkte Wirkung von Staurosporin in Kombination mit den Oligonukleotiden gegenüber Staurosporin allein gezeigt werden (Fig. 10).
CpG-1 -PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3'
Beispiel 11 :
Keine Sensibilisierung zur Apoptose durch CpG-9-PTO (=kurzes Deletionsfragment von CpG-1- PTO) und nCpG-5G-PTO (=kurzes Deletionsfragment von non-CpG-5-PTO) in HaCaT.
Zellen wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (STS, 0.1 , 0.5, 1.OμM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 8μM CpG-1-PTO, CpG-9-PTO, non- CpG-5-PTO oder nCpG-5G-PTO inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurde die proteolytische Aktivierung von Caspase 8 nachgewiesen. CpG-1-PTO und n-CpG5-PTO als Positivkontrollen führten zu einem verstärkten Abbau der Caspase, CpG-9-PTO und nCpG-5G-PTO zeigten keine Wirkung (Fig.11).
CpG-1-PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 CpG-9-PTO: 5'- GAC GTT -3' non-CpG-5-PTO: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3' n-CpG-5G-PTO: 5'- CCC CCC -3'
Beispiel 12:
non-CpG-5-PTO sensibilisiert HaCaT Keratinozyten für die Apoptose durch Freisetzung von Cytochrom C - keine Wirkung von n-CpG-5G-PTO (= kurzes Deletionsfragment non-CpG-5-PTO).
HaCaT Keratinozyten wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von Staurosporin (StS, 0.1 , 0.5, 1.0μM) inkubiert. Analog dazu wurden die Zellen zusätzlich mit jeweils 8μM non-CpG-5- PTO oder n-CpG-5G-PTO inkubiert. Anschließend wurden die Zellen durch eine milde Lyse mit Digitonin fraktioniert. Der Gehalt an Cytochrom C im zytosolische Extrakt wurde in einem kommerziellen Cytochrome C Immunoassay (R&D Systems, Wiesbaden, Germany) bestimmt.
Der Effekt von Staurosporin auf den Gehalt an zytosolischem Cytochrom C wird in Anwesenheit von non-CpG-5-PTO verstärkt, das kurze Fragment n-CpG-5G-PTO zeigt keine Wirkung,
Cytochrom C befindet sich bei vitalen Zellen zum größten Teil in den Mitochrondrien. Erst im Rahmen der Apoptose kommt es zu einer Anreicherung von zytoplasmatischem Cytochrom C. Dort fungiert Cytochrom C als Aktivator der Caspase 9 und ist somit ein sehr früher Apoptosemarker. (Fig. 12)
non-CpG-5-PTO: 5 - CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3' n-CpG-5G-PTO: 5 - CCC CCC - 3'
Beispiel 13:
Keine Sensibilisierung zur Apoptose durch G3139 (Oblimersen, Genasense) in HaCaT und A431 Keratinozyten. Zellen wurden für 24h mit aufsteigenden Konzentrationen von G3139-PTO (2, 4, 8, 16, 32μM) inkubiert. Anschließend wurden die Zellen lysiert, die Proteine extrahiert und mittels SDS-PAGE separiert. Im Western blot wurden Caspase 3, 8 und 9 nachgewiesen. Es konnte keine proteolytische Aktivierung unter dem Einfluss von G3139-PTO gezeigt werden. In A431 Keratinozyten gab es keine Caspase 8 Immunreaktivität (Fig. 13).
G3139-PTO: 5'-TCTCCCAG CGTG CGCCAT-3'
Beispiel 14:
CpG-1-PTO als Vertreter der CpG-B-Klasse, non-CpG-5-PTO und n-CpG-3-PTO super-induzieren konzentrationsabhängig Apoptose in Gegenwart von Staurosporin.
HaCaT Zellen wurden zeitgleich mit Staurosporin (Sts) (-, 0,01 , 0,02, 0,05μM) und aufsteigenden Konzentrationen (1 , 2, 4, 8, 16μM) von CpG-1-PTO (Fig. 14 A), non-CpG-5-PTO (Fig. 14 B) und n-CpG-3-PTO (Fig. 14C) behandelt. Nach 24h wurde der Versuch terminiert und die Histon- assoziierten DNA-Fragmente im zytosolischen Extrakt mit Hilfe eines kommerziellen Kits (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Deutschland) bestimmt.
CpG-1-PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3 non-CpG-5-PTO: 5'- CCC CCC CCC CCC CCC CCC CC -3' n-CpG-3-PTO: 5'- TTT TTT TTT TTT TTT TTT TT-3' Beispiel 15:
n-CpG-6-PTO hemmt und M-362-C (=CpG-C-Klasse) hat keinen Einfluss auf die Staurosporin- induzierte Apoptose.
HaCaT Zellen wurden zeitgleich mit Staurosporin (Sts) (-, 0,01 , 0,02, 0,05μM) und aufsteigenden Konzentrationen (1 , 2, 4, 8, 16μM) von (Fig. 15 A) n-CpG-6-PTO und (Fig. 15 B) M-362-C behandelt. Nach 24h wurde der Versuch terminiert und die Histon-assoziierten DNA-Fragmente im zytosolischen Extrakt mit Hilfe eines kommerziellen Kits (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Deutschland) bestimmt.
n-CpG-6-PTO: 5'- GGG GGG GGG GGG GGG GGG GG -3'
M-362-C: 5'-TCG tcg tcg ttc gaa cga cgt TGA T-3' (Großbuchstaben repräsentieren
Phosphorothioat-Verknüpfungen, Kleinbuchstaben repräsentieren Phosphodiester-Verknüpfungen)
Beispiel 16:
1585(A) als Vertreter der CpG-Klasse A zeigt einen biphasischen Einfluss auf die Staurosporin- induzierte Apoptose: kleine Konzentrationen (1 , 2 und 4μM) haben einen superinduzierenden, hohe Konzentrationen (8 und 16μM) haben einen supprimierenden Effekt (Fig. 16).
HaCaT Zellen wurden zeitgleich mit Staurosporin (Sts) (-, 0,01 , 0,02, 0,05μM) und aufsteigenden Konzentrationen (1 , 2, 4, 8, 16μM) von 1585(A) behandelt. Nach 24h wurde der Versuch terminiert und die Histon-assoziierten DNA-Fragmente im zytosolischen Extrakt mit Hilfe eines kommerziellen Kits (Cell Death enzyme-linked immunosorbent assay, Boehringer Mannheim, Mannheim, Deutschland) bestimmt.
1585(A): 5'-GGg gtc aac gtt gaG GGG Gg-3' (Großbuchstaben repräsentieren Phosphorothioat- Verknüpfungen, Kleinbuchstaben repräsentieren Phosphodiester-Verknüpfungen)
Beispiel 17:
CpG-1-PTO sensibilisiert Haarfollikelzellen für die Apoptose durch Caspaseaktivierung. Eingesetzt wurden rekonstruierte Haarfollikelmodelle aus Keratin ozyten, Fibroblasten und Pseudopapillen aus mit dermalen Papillenzellen bewachsenen Microcarriern, wie in EP1455854 beschrieben. Nach Fertigstellung der Modelle wurden die Substanzen in der jeweiligen Konzentration systemisch appliziert. Die Caspaseaktivität wurde nach 24stündiger Inkubation bestimmt. Die Modelle wurden dafür lysiert, das Homogenisat abzentrifugiert und im Überstand die Aktivität der Caspasen 3 und 7 mittels Caspase-Glo 3/7 Assay (Promega) bestimmt. Der Effekt von Staurosporin auf die Aktivität der beiden Caspasen wird in Anwesenheit von Oligonukleotiden verstärkt (Fig. 17).
CpG-1-PTO: 5'-TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT-3

Claims

Patentansprüche:
1. Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung epithelialen Deckgewebes, dadurch gekennzeichnet, dass sie Nukleinsäuren enthält.
2. Zubereitung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Behandlung epithelialen Deckgewebes insbesondere gegen hyperplastische Erkrankungen epithelialen Deckgewebes gerichtet ist.
3. Zubereitung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Behandlung epithelialen Deckgewebes insbesondere auf die Epilation oder die Induktion von Haarausfall oder die Verbesserung des Hautbildes, insbesondere als Anti-Aging-Wirkstoff, bevorzugt zur Behandlung von Altersflecken, Schwielen oder der sogenannten Landmann's Haut, gerichtet ist.
4. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, einer mechanischen Behandlung oder UV-Licht erfolgt
5. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich mindestens eine Apoptose-induzierende Substanz, insbesondere 5-Fluorouracil oder Imiquimod enthält.
6. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren ausgewählt sind unter synthetischen Nukleinsäuren, Nukleinsäuren eukaryotischen Ursprungs und Nukleinsäuren bakteriellen Ursprungs, insbesondere unter Nukleinsäuren aus Escherichia coli und Clostridium perfringens.
7. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren ausgewählt sind unter hochmolekularer bakterieller DNA, niedermolekularer bakterieller DNA, hochmolekularer eukaryontischer DNA, niedermolekularer eukaryontischer DNA sowie unter Oligonukleotiden, wobei die Oligonukleotide bevorzugt eine Länge von 5 bis 100, insbesondere 5 bis 70, vorzugsweise 10 bis 50, bevorzugt 10 bis 40 und ganz besonders bevorzugt von 12 bis 30 Nukleotiden aufweisen.
8. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren vollständig oder teilweise chemisch modifiziert sind.
9. Zubereitung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die chemische Modifikation ausgewählt ist unter a) Veränderung der Internukleosidbrücken, insbesondere Austausch von Phosphodiestern gegen Methylphosphonate, Phosphoramidate, Phosphorothioate oder Hydroxylamine; b) Veränderung der Zuckerkomponenten, insbesondere Austausch der Ribose gegen diverse Hexo- bzw. Pentopyranosen oder 3'-5'-carbocyclisch verbrückte Derivate der 2'-Deoxyribose; oder c) Austausch des Strangrückgrats, insbesondere Austausch der Polyesterketten auf Basis von Zucker-Phosphat-Einheiten gegen Carboxamidketten auf Basis von Aminosäurederivaten, wie N-(2-Aminoethyl)-glycin-Einheiten, wobei der unter a) genannte Austausch von Phosphodiestern gegen Phosphorothioate besonders bevorzugt ist.
10. Zubereitung nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren Phosphorothioate-Phosphodiester-Mixmere aufweisen.
11. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass sie die Nukleinsäuren in Liposomen verpackt enthält.
12. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die hyperplastischen Erkrankungen des epithelialen Deckgewebes ausgewählt sind unter Kanzerosen und Präkanzerosen sowie Verrucae.
13. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren als Oligonukleotide vorliegen, die ein, zwei oder mehrere CpG-Motive, bevorzugt.
14. Zubereitung nach Anspruch 13 dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren als Oligonukleotide vorliegen, die mindestens ein CpG-Motiv aufweisen und zur CpG-A oder insbesondere zur CpG-B Klasse gehören.
15. Zubereitung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleinsäuren ausgewählt sind unter Thymin-reichen oder Cytosin-reichen Sequenzen mit einem Thymin- oder Cytosin-Gehalt von 25 % bis 100 %, bevorzugt 50 % bis 100 %, besonders bevorzugt 75 % bis 100 % und ganz besonders bevorzugt 100 %.
16. Verwendung von Nukleinsäuren als Chemosensitizer zur Behandlung von Hyperplasien epithelialen Deckgewebes, zur Verbesserung des Hautbildes, zur Epilation oder zur Induktion von Haarausfall.
17. Verwendung nach Anspruch 16 in Kombination mit kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen, mechanischer Behandlung oder UV-Licht, zur Epilation oder Induktion von Haarausfall oder als Anti-Aging-Wirkstoff, insbesondere zur Behandlung von Altersflecken, Schwielen oder der sogenannten Landmann's Haut.
18. Verwendung nach Anspruch 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass sie in Kombination mit weiteren Substanzen oder Therapieformen erfolgt, insbesondere mit solchen, die ausgewählt sind unter:
a) Kohleteeren, b) Phototherapie, c) photodynamischer Therapie, bevorzugtermaßen mit 5-Aminolevulinsäure, d) Anthralin, e) Kryotherapie und f) Retinoiden, vorzugsweise ATRA, Acitretin und Tazarotene
PCT/EP2008/003288 2007-04-27 2008-04-24 Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes WO2008135169A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102007020554A DE102007020554A1 (de) 2007-04-27 2007-04-27 Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung epithelialen Deckgewebes
DE102007020554.8 2007-04-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2008135169A1 true WO2008135169A1 (de) 2008-11-13

Family

ID=39689473

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2008/003288 WO2008135169A1 (de) 2007-04-27 2008-04-24 Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes

Country Status (2)

Country Link
DE (1) DE102007020554A1 (de)
WO (1) WO2008135169A1 (de)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037183A2 (de) * 2007-09-14 2009-03-26 Henkel Ag & Co. Kgaa Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitung zur induktion antimikrobieller peptide in epithelialen deckgeweben
WO2011009756A3 (de) * 2009-07-23 2012-05-31 Henkel Ag & Co. Kgaa Verwendung mindestens einer nukleinsäure zur beeinflussung des natürlichen pigmentierungsprozesses
WO2011009758A3 (de) * 2009-07-23 2012-06-07 Henkel Ag & Co. Kgaa Verwendung von purin und/oder einem purinderivat und mindestens einem oligonukleotid zur beeinflussung des natürlichen pigmentierungsprozesses

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102010007562A1 (de) 2010-02-10 2011-08-11 sterna biologicals GmbH & Co KG, 35043 Dermatologische, pharmazeutische Zusammensetzung geeignet für Oligonukleotide
EP2608762B2 (de) 2010-08-27 2020-05-13 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Zusammensetzungen und verfahren für gezielte wärmemodulation
US9572880B2 (en) 2010-08-27 2017-02-21 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Ultrasound delivery of nanoparticles
AU2013329450B2 (en) 2012-10-11 2017-06-22 Coronado Aesthetics, Llc Silver nanoplate compositions and methods

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002017852A2 (en) * 2000-08-25 2002-03-07 Genta Incorporated Methods of treatment of a bcl-2 disorder using bcl-2 antisense oligomers
WO2004012688A2 (de) * 2002-07-25 2004-02-12 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische zubereitungen enthaltend nukleinsäuren auf der basis nicht-methylierter cpg-motive
DE10238298A1 (de) * 2002-08-21 2004-03-04 Beiersdorf Ag Verwendung von Antisense-Oligonucleotiden zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen
FR2864540A1 (fr) * 2005-02-22 2005-07-01 Lvmh Rech Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase-related-protein 1 comme agents depigmentants
WO2005105157A2 (en) * 2004-04-23 2005-11-10 The Trustees Of Columbia University In The City Ofnew York INHIBITION OF HAIRLESS PROTEIN mRNA
DE202005001952U1 (de) * 2005-02-06 2006-08-31 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen enthaltend Nukleinsäuren, die zur Ausbildung von stem-loop-Sekundärstrukturen geeignete Sequenzen umfassen
WO2007026009A1 (fr) * 2005-09-01 2007-03-08 L V M H Recherche Nouveaux oligonucléotides anti-gènes spécifiques de la tyrosinase comme agents dépigmentants

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1165574B (de) 1960-08-08 1964-03-19 Dehydag Gmbh Verfahren zur Herstellung von als Emulgiermittel fuer Salbengrundlagen dienenden Mischestern
DE2024051C3 (de) 1970-05-16 1986-05-07 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Verwendung der Veresterungsprodukte von Glycerin-Äthylenoxid-Addukten mit Fettsäuren als Rückfettungsmittel in kosmetischen Zubereitungen
LU68901A1 (de) 1973-11-30 1975-08-20
DE4426215A1 (de) 1994-07-23 1996-01-25 Merck Patent Gmbh Ketotricyclo [5.2.1.0] decan-Derivate
DE4426216A1 (de) 1994-07-23 1996-01-25 Merck Patent Gmbh Benzyliden-Norcampher-Derivate
ES2188883T3 (es) 1996-07-08 2003-07-01 Ciba Sc Holding Ag Derivados de triazina como filtro uv en productos antisolares.
DE19712033A1 (de) 1997-03-21 1998-09-24 Basf Ag Photostabile UV-Filter enthaltende kosmetische und pharmazeutische Zubereitungen
DE19740092A1 (de) 1997-09-12 1999-03-18 Ulrich Dr Med Hengge Liposomen und Verfahren zur Transfektion von Zellen
JP2002515514A (ja) * 1998-05-21 2002-05-28 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド オリゴヌクレオチドの局所送逹のための組成物及び方法
EP1331934B1 (de) 2000-11-09 2006-03-29 Phenion GmbH & Co KG Ppar-alpha,beta-aktivatoren zur behandlung von alopecia areata und vitiligo
DE10361502A1 (de) 2003-12-23 2005-07-28 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen enthaltend Superstruktur-bildende Nukleinsäure-Sequenzen
DE102005026357A1 (de) * 2005-06-07 2006-12-28 Henkel Kgaa Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen zur Behandlung reifer oder lichtgeschädigter Haut

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002017852A2 (en) * 2000-08-25 2002-03-07 Genta Incorporated Methods of treatment of a bcl-2 disorder using bcl-2 antisense oligomers
WO2004012688A2 (de) * 2002-07-25 2004-02-12 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische zubereitungen enthaltend nukleinsäuren auf der basis nicht-methylierter cpg-motive
DE10238298A1 (de) * 2002-08-21 2004-03-04 Beiersdorf Ag Verwendung von Antisense-Oligonucleotiden zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen
WO2005105157A2 (en) * 2004-04-23 2005-11-10 The Trustees Of Columbia University In The City Ofnew York INHIBITION OF HAIRLESS PROTEIN mRNA
DE202005001952U1 (de) * 2005-02-06 2006-08-31 Phenion Gmbh & Co. Kg Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen enthaltend Nukleinsäuren, die zur Ausbildung von stem-loop-Sekundärstrukturen geeignete Sequenzen umfassen
FR2864540A1 (fr) * 2005-02-22 2005-07-01 Lvmh Rech Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase-related-protein 1 comme agents depigmentants
WO2007026009A1 (fr) * 2005-09-01 2007-03-08 L V M H Recherche Nouveaux oligonucléotides anti-gènes spécifiques de la tyrosinase comme agents dépigmentants

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BALLAS ET AL.: "Divergent Therapeutic and Immunologic Effects ...", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 167, no. 9, 1 November 2001 (2001-11-01), pages 4878 - 4886, XP002267234 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037183A2 (de) * 2007-09-14 2009-03-26 Henkel Ag & Co. Kgaa Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitung zur induktion antimikrobieller peptide in epithelialen deckgeweben
WO2009037183A3 (de) * 2007-09-14 2009-06-11 Henkel Ag & Co Kgaa Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitung zur induktion antimikrobieller peptide in epithelialen deckgeweben
WO2011009756A3 (de) * 2009-07-23 2012-05-31 Henkel Ag & Co. Kgaa Verwendung mindestens einer nukleinsäure zur beeinflussung des natürlichen pigmentierungsprozesses
WO2011009758A3 (de) * 2009-07-23 2012-06-07 Henkel Ag & Co. Kgaa Verwendung von purin und/oder einem purinderivat und mindestens einem oligonukleotid zur beeinflussung des natürlichen pigmentierungsprozesses

Also Published As

Publication number Publication date
DE102007020554A1 (de) 2008-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2008135169A1 (de) Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes
DE60123580T2 (de) Oligonukleotide und deren verwendung um die expression der tyrosinase, die in der synthese von melanischen pigmenten beteiligt ist, zu modulieren
JP2003530419A (ja) 化粧品製剤の製造における天然物質の使用
KR20070018120A (ko) Ｐｔｈ 단편 함유 화장품 제제
FR2813195A1 (fr) Utilisation d'extraits de la plante cassia alata dans des produits de soin
EP1343468A1 (de) Verfahren zum schutz der haut gegen die alterung
EP1455749A2 (de) Neue verwendungen von apfelkernextrakten in kosmetischen oder pharmazeutischen zusammensetzungen
WO2009037183A2 (de) Nukleinsäurehaltige kosmetische und/oder pharmazeutische zubereitung zur induktion antimikrobieller peptide in epithelialen deckgeweben
JP2003531844A (ja) 植物Ａｒｇａｎｉａｓｐｉｎｏｓａの抽出物を含有する化粧品製剤および／または医薬製剤
DE19911053B4 (de) Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen
US20050209183A1 (en) Cosmetic or pharmaceutical preparations comprising nucleic acids based on non-methylated CPG motifs
EP1539128B1 (de) Verwendung von substanzen zum schutz der haut
DE202005001952U1 (de) Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen enthaltend Nukleinsäuren, die zur Ausbildung von stem-loop-Sekundärstrukturen geeignete Sequenzen umfassen
CN114423400A (zh) 含有石墨烯量子点作为有效成分的化妆品组合物
EP1261310A1 (de) Kosmetische und pharmazeutische zubereitungen zur behandlung der cellulite
WO2002031496A2 (de) Verfahren zur in vitro bestimmung der hautalterung
EP1524985B1 (de) Kosmetische oder pharmazeutische zubereitungen enthaltend nukleinsäuren auf der basis nicht-methylierter cpg-motive
WO2002015916A1 (de) Verwendung von dihydroboswelliasäuren oder hydrierten extrakten aus boswellia zur prophylaktischen und/oder therapeutischen behandlung
DE10259966A1 (de) Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitung zur Verbesserung der Sauerstoffaufnahme bei Menschen oder Tieren
WO2005063300A2 (de) Kosmetische oder pharmazeutische zubereitungen enthaltend superstrukturbildende nukleinsäure-sequenzen
EP1844146A2 (de) Gpc-odn (oligodeoxynukleotide) mit stem-loop und flankierenden sequenzen, ohne cpg-motif, zur behandlung von hauterkrankungen
WO2005034900A1 (de) Oligo- und/oder polysaccharide enthaltende kosmetische oder pharmazeutische zubereitungen zur behandlung epithelialen deckgewebes
EP1292278A2 (de) Zubereitungen enthaltend einen extrakt der pflanze pistia stratiotes
DE202014100736U1 (de) Kosmetische oder pharmazeutische Zubereitungen zur Prävention und Behandlung der Cellulite
DE10340684A1 (de) Neue Verwendungen von Vitamin B6 in kosmetischen oder pharmazeutischen Zusammensetzungen

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08749087

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 08749087

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1