WO2007129701A1 - Ｓ-アデノシル－ｌ－メチオニン含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取用組成物 - Google Patents

Ｓ-アデノシル－ｌ－メチオニン含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取用組成物 Download PDF

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adenosyl
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Kentarou Takano
Shinyo Gayama
Toshito Tsuchida
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Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.
Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation
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    • C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing SAMe-containing dry yeast using yeast having the ability to produce S-adenosyl_L_methionine (hereinafter referred to as SAMe) and a composition for oral consumption. More specifically, the present invention relates to a method for easily producing a dry yeast containing SAMe at a high concentration in a high yield and a composition for oral consumption obtained by molding the SAMe-containing dry yeast obtained by the method.
  • SAMe S-adenosyl_L_methionine
  • SAMe is a water-soluble physiologically active substance that plays an important role as a methyl group donor in methylation reactions by various transmethylases in vivo, and is used as a therapeutic agent for depression, liver diseases, arthritis, Or it is widely used as a health food.
  • yeast cells 5'-nucleotides, free amino acids, antioxidative effects, dartathione, which is used as a therapeutic agent for liver diseases, ⁇ -gnolecan and foods that improve immunity and intestinal regulation. It contains many useful ingredients such as fiber and is widely used as health food.
  • An enzymatic synthesis method is known as an alternative to the fermentation method that does not require extraction and purification from bacterial cells. That is, SAMe synthase (methionine adduct) isolated and purified from microorganisms such as yeast. Nosyltransferase) and enzymatically synthesize SAMe using adenosine 5'-triphosphate (ATP) and L-methionine as substrates (see, for example, Patent Document 1 and Non-Patent Documents 5 and 10). .
  • this method has the advantage of not requiring the SA Me extraction operation from cells with a large amount of SAMe accumulated compared to the fermentation method, the preparation of the enzyme is complicated and the activity of the resulting enzyme is low.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 51-125717
  • Non-patent literature l Schlenk F., DePalma REJBiol. Chem., 229, 1037-1050 (1957)
  • Non-patent literature 2 Shiozaki S., et all, Agric. Biol. Chem., 53, 3269-3274 (1989) )
  • Non-Patent Document 3 Schlenk F., DePalma REJBiol. Chem., 229, 1051-1057 (1957)
  • Non-Patent Document 4 Kusakabe, H., Kuuniaka, A. 'Yoshino, H., Agric. , 38, 1669-1
  • Non-Patent Document 5 Mudd SH., Cantoni G, et all J. Biol. Chem., 231, 481-492 (1958)
  • Non-Patent Document 6 Markham GD, et all J. Biol. Chem., 255, 9082-9092 (1980)
  • Non-Patent Document 7 Markham DJ., DeParisis J.J. Biol. Chem., 259, 14505-14507 (1984)
  • Non-Patent Document 8 Shiozaki S., et all J. Biotechnology., 4, 345-354 (1986)
  • Non-Patent Document 9 Thomas D., Surdin_Kerjan YJ Biol. Chem., 262, 16704-16709 (1987)
  • Non-Patent Document 10 Thomas D.'Cherest H., et all, Mol. Cell. Biol., 8, 5132 — 5139 (1988) Disclosure of the invention
  • an object of the present invention is to provide a dry solution containing SAMe at a high concentration as a method for producing the inclusion at a low cost.
  • An object of the present invention is to establish a method for easily producing dry yeast with good yield and to provide a composition for oral consumption obtained by molding dry yeast obtained by the production method.
  • the present inventors used yeast that has SAMe-producing ability and can be taken orally, and synthesized and accumulated SAMe at a high concentration in the bacterial body. After that, the yeast cells were separated from the culture broth by a separation means such as centrifugation, and further subjected to at least one of treatment for adjusting to a specific pH by addition of mineral acid and heat treatment to a specific temperature. Thereafter, by drying, it was found that a dry yeast containing the target SAMe at a high concentration can be easily produced at a low cost with good yield, and the present invention has been completed.
  • a separation means such as centrifugation
  • the present invention provides a method for producing dry yeast containing a high concentration of SAMe shown in the following:! To 9, and a composition for oral consumption obtained by molding the dry yeast. .
  • Yeast cell concentrate isolated from a yeast cell culture medium in a method for producing dry yeast containing S-adenosinore L-methionine-producing yeast and S-adenosinore L-methionine Is dried after at least one of (1) the treatment to adjust the pH to: to 5 by addition of mineral acid and (2) the treatment to be heated to 40 ° C to 85 ° C.
  • a method for producing S-adenosyl-L-methionine-containing dry yeast A method for producing S-adenosyl-L-methionine-containing dry yeast.
  • composition for oral consumption obtained by molding S-adenosinore L-methionine-containing dry yeast produced by the method according to any one of items 1 to 8 above.
  • the yeast used in the present invention is not particularly limited as long as it has the ability to produce SAMe and can be taken orally, for example, yeast belonging to the genus Saccharomyces. Of these, Saccharomyces cerevisiae is more preferred.
  • a carbon source When culturing the yeast, a carbon source, a nitrogen source, various inorganic salts, various additives, and the like are used.
  • the carbon source to be used is not particularly limited as long as it can be assimilated by yeast. Examples thereof include carbohydrates such as gnolecose, sucrose, starch and molasses, alcohols such as ethanol and acetic acid, and organic acids.
  • the nitrogen source is not particularly limited as long as yeast can assimilate, for example, those containing inorganic nitrogen compounds such as ammonia, nitric acid and urea, or organic nitrogen compounds such as yeast extract and malt extract. It is done.
  • Inorganic salts include phosphates, potassium salts, sodium salts, and magnesium, iron, calcium, and zinc.
  • Metal salts such as manganese, cobalt, copper, and molybdenum are used. Furthermore, it can be achieved by adding methionine, adenine, and adenosylribonucleoside, which are part of the SAMe skeleton, and culturing.
  • the culture temperature and the pH of the culture solution vary depending on the type of yeast used, the culture temperature ranges from 20 to 35 ° C, and the culture solution pH ranges from pH 4 to 7. It is preferable to culture aerobically to increase the SAMe content in the microbial cells. Therefore, it is preferable to use a culture tank that can be aerated and can be stirred if necessary. For example, a mechanical stirring culture tank, an air lift culture tank, a bubble column culture tank, or the like can be used.
  • the supply of culture components such as carbon source, nitrogen source, various inorganic salts, and various additives to the culture tank is performed collectively or individually continuously or intermittently.
  • substrates such as sucrose and ethanol May be supplied to the culture tank as a mixture with other medium components, or may be supplied to the culture tank independently of the other medium components.
  • the pH control of the culture solution is performed with an acid or alkali solution.
  • the alkali it is desirable to control the pH using ammonia, urea, or a non-nitrogen base used as a nitrogen source, such as caustic soda or caustic potash.
  • an inorganic acid such as phosphoric acid, sulfuric acid, nitric acid, or an organic acid is used.
  • the pH can also be controlled by using inorganic salts such as phosphate, potassium salt, sodium salt and nitrate.
  • the culture solution is extracted from the culture tank, and then separated to obtain a yeast cell concentrate.
  • the separation method is not particularly limited as long as it can efficiently separate and wash the cells, but a suitable example is an ultrafiltration device using a countercurrent type yeast separator or a separation membrane. It is done.
  • the separated yeast cell concentrate is subjected to at least one of a mineral acid addition treatment such as sulfuric acid and a heat treatment.
  • a mineral acid addition treatment such as sulfuric acid and a heat treatment.
  • the mineral acid to be added is not particularly limited as long as it can be taken orally, but hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like, and particularly preferable examples thereof include sulfuric acid.
  • the amount of mineral acid to be added is required to be ⁇ 1-5, and particularly preferably ⁇ 1-4.
  • the SAMe-degrading enzyme can be inactivated by heat treatment to be sterilized.
  • the heat treatment conditions should be such that the SAMe content obtained is as high as possible.
  • the heat treatment conditions should be 40 ° C to 85 ° C as the power treatment temperature. ° C to 80 ° C force S, preferably 40 ° C to 70 ° C, more preferably S, more preferably 50 ° C to 70 ° C.
  • the heating time varies depending on the heating temperature, it is not generally determined, but 30 to 600 seconds is preferable, and 30 to 60 seconds is more preferable.
  • SAMe degrading enzyme can be inactivated or sterilized. Also, since the penetration of mineral acid radicals is promoted
  • the amount of mineral acid to be added can be saved. On the other hand, by reducing the heating time to 600 seconds or less, a decrease in content due to the decomposition of SAMe can be avoided.
  • the heat treatment can be performed by any method of normal pressure and pressurization. Obtain dry yeast cells with relatively higher SAMe content by heat treatment or mineral acid addition. Can do.
  • the amount of mineral acid to be added can be reduced compared to the case where only the mineral acid addition treatment is performed, and compared with the case where only the heat treatment is carried out. It is more preferable because dry cells having a higher SAMe content can be obtained. That is, the combination of the amount of mineral acid added and the heating temperature is preferably a combination of the amount of mineral acid added and the temperature condition of 40 ° C to 85 ° C, which varies depending on the heating time.
  • the combination of the amount of mineral acid added to 4 and the temperature condition of 40 ° C to 80 ° C is more preferable.
  • the amount of mineral acid added to 4 to 4 and the temperature condition of 40 ° C to 70 ° C Even more preferred is a combination of the amount of mineral acid added so that ⁇ 1-4 and the temperature condition of 50 ° C-70 ° C.
  • the yeast cell concentrate obtained after performing at least one of the mineral acid addition treatment and the heat treatment in this way is subjected to, for example, a spray drying method using a spray dryer and the final shelf plate temperature. Water is evaporated to dry yeast by a drying method such as freeze drying at 25 ° C.
  • the dried yeast is crushed into a powder form, or, if necessary, additives such as other physiologically active ingredients and excipients are added to the powdered dry yeast and then compressed into tablets. It can be made into a tablet-like composition for oral ingestion, and the surface thereof can be coated. In addition, the powder can be granulated, or the granulated granules can be packed and encapsulated.
  • Non-Patent Document 8 In accordance with the above-mentioned known culture method [Shiozaki S., et all, J. Biotechnology, 4, 345-354 (1986) (Non-Patent Document 8)] was cultured. Medium components are 10% by mass of sucrose as a carbon source, 1% by mass of yeast ester, 1.8% by mass of urea as a nitrogen source, 1% by mass of methionine, 0.2% by mass of darisylglycine, 0.4% by mass of KH PO , MgSO ⁇ 7 ⁇ ⁇ 0. 01 mass 0/0,
  • Biochin 2 / ig / mL mixed minerals 0.2 mass 0/0 (mixing mineral composition is as follows , CaCl ⁇ 2Ita_ ⁇ 2.0 mass 0/0, MnSO ⁇ 5 ⁇ ⁇ 0. 05 mass 0/0, FeSO ⁇ 7 ⁇ O 0. 0
  • SAMe content was increased by sequentially adding soot. As a result, a bacterial cell concentration of 3.5% by mass, a SAMe content of 205 mgZg-yeast yeast cell culture solution of 18 L was obtained.
  • the above yeast cell culture solution 18L was treated with a continuous rotary centrifuge (Hitachi HIMAC CEN TRIFUGE CR10B2) to obtain 3. 49 kg of liquid yeast cell concentrate with a bacterial concentration equivalent to 18% by mass in terms of dry matter. It was.
  • the SAMe content in dry powder yeast is determined by a known method using perchloric acid from SAMe-containing dry yeast (eg, Shiozaki S., et all, Agric. Biol. Chem., 48, 2293-2300 (1984)). ) And SAMe was extracted and quantified by liquid chromatography. The following analysis conditions were used for the liquid chromatograph.
  • Example 1 Except for not adding sulfuric acid to the yeast cell concentrate, treatment was carried out in the same manner as in Example 1 to obtain 581 g of spray-dried powder-dried yeast.
  • the SAMe content in the obtained powdered dry yeast was 136 mgZg_dry yeast. The results are shown in Table 1.
  • Table 1 Relationship between pH after mineral acid addition to yeast cell concentrate and SAMe content of powder-dried yeast obtained by spray drying when only mineral acid addition treatment is performed (no heat treatment)
  • the operations from (a) to (c) were carried out in the same manner as in Example 1, and 3.71 kg of yeast cell concentrate made pHI was obtained by adding sulfuric acid.
  • the yeast cells are poured into a stainless steel tray for freeze-drying in an lyophilizer (manufactured by Nippon Vacuum Technology Co., Ltd.) without heating—freeze at 50 ° C, and then freeze for 36 hours at a final shelf temperature of 25 ° C. Dried.
  • the obtained freeze-dried yeast was further pulverized to obtain 612 g of powder-dried yeast.
  • the SAMe content in the obtained powder dry fermentation mother was 170 mg / g-dry yeast. The results are shown in Table 2.
  • Example 5 The treatment was performed in the same manner as in Example 5 except that the pH was adjusted to 2, 3, or 4 by adding sulfuric acid to the yeast cell concentrate, and the relationship between the pH after addition of sulfuric acid and the SAMe content after lyophilization was examined. The results are shown in Table 2.
  • Comparative Example 2 Except for not adding sulfuric acid to the yeast cell concentrate, the same treatment as in Example 5 was performed to obtain 609 g of freeze-dried and pulverized powder-dried yeast. The SAMe content in the obtained powdered dry yeast was 136 mg / g-dry yeast. The results are shown in Table 2.
  • the sulfuric acid added to the yeast cell concentrate was changed to hydrochloric acid, nitric acid or phosphoric acid (the pH of the yeast cell concentrate after addition: 1).
  • the relationship with the SAMe content after lyophilization was investigated. The results are shown in Table 3.
  • Example 2 In the same manner as in Example 1, the operations from (a) to (b) were performed, and this yeast cell concentrate was heated to 40 ° C using a glass beaker, a magnetic stirrer and a heated water bath. Heat treatment was performed at 50 ° C, 60 ° C, 70 ° C, or 90 ° C, and the heat treatment time was 60, 300, or 600 hours, and then cooled to 25 ° C in a water bath. . This was freeze-dried (Japan Vacuum Technology Co., Ltd.
  • the operations from (a) to (c) were carried out in the same manner as in Example 1 to obtain 3.71 kg of yeast cell concentrate adjusted to pH 3 with sulfated koji.
  • This yeast cell concentrate was heated at 40 ° C, 50 ° C, 70 ° C or 90 ° C using a glass beaker, magnet type stirrer, or heated water bath, and heat treatment time 60 seconds, 300 seconds or 600 After heat treatment for 2 seconds, it was cooled to 25 ° C in a water bath. This was poured into a freeze-dried stainless steel tray of a freeze dryer (manufactured by Nippon Vacuum Technology Co., Ltd.), frozen at 50 ° C under zero, and then freeze-dried for 36 hours at a final shelf temperature of 25 ° C.
  • the SAMe content of the obtained powdered yeast was as shown in Table 6 below.
  • Table 6 Relationship between heating temperature and SAMe content of powdered dry yeast obtained by freeze-drying in yeast concentrate obtained by both mineral acid addition and heat treatment (yeast cell before heating) Concentrate pH 3)
  • Comparative example 8 90 600 81 Industrial applicability
  • a dry yeast containing SAMe at a high concentration can be easily produced at a low cost and with a high yield.
  • the composition for ingestion formed by molding dry yeast containing SAMe can be widely used as a therapeutic agent for depression, liver disease, arthritis, etc., or as a health food.

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Abstract

Ｓ－アデノシル－Ｌ－メチオニン生産能を有する酵母を用い、Ｓ－アデノシル－Ｌ－メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物を、（１）鉱酸添加によりｐＨを１～５に調整する処理、及び（２）４０°C～８５°Cに加熱する処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に、乾燥させるＳ－アデノシル－Ｌ－メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法、及び該製造方法で得られた乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物である。水溶性の生理活性物質として有用なＳ－アデノシル－Ｌ－メチオニンを高濃度に含む乾燥酵母菌体を低いコストで収率よく簡便に製造する方法、及び該製造方法によって得られた乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物を提供することができる。

Description

明 細 書
S-アデノシノレ一 L一メチォニン含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取 用組成物
技術分野
[0001] 本発明は、 S-アデノシル _L_メチォニン (以下、 SAMeと記す）生産能を有する 酵母を用いた SAMe含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取用組成物に関する。さ らに詳しくは、 SAMeを高濃度に含有する乾燥酵母を、収率良く簡便に製造する方 法及び該方法によって得られた SAMe含有乾燥酵母を成型した経口摂取用組成物 に関する。
背景技術
[0002] SAMeは、生体内における種々のトランスメチラーゼによるメチル化反応のメチル 基供与体として重要な役割を演じている水溶性の生理活性物質であり、鬱病、肝臓 疾患及び関節炎等の治療薬、或いは健康食品として広く利用されている。また、酵 母菌体については、 5'—ヌクレオチド、遊離アミノ酸、抗酸化作用が有り肝疾患の治 療薬として利用されているダルタチオン、免疫力の向上作用や整腸作用を有する β —グノレカンや食物繊維などの有用成分が多く含まれ、健康食品として広く利用され ている。
[0003] 従来、 SAMeの製造方法としては、前駆物質である L メチォニンを含有させた培 地を用いて醱酵生産する方法 (例えば、非特許文献 1 , 2参照）により、菌体内に蓄積 した SAMeを抽出した後、クロマトグラフィーによる精製を行レ、、硫酸や p—トルエンス ノレフォン酸との塩、又はブタンジスルフォン酸との塩とすることにより安定な SAMe塩 を得る方法が一般的であった (例えば、非特許文献 3, 4参照）。し力 ながら、このよ うな従来の製造方法においては、菌体内に蓄積された SAMeの抽出精製に多大な 手間と費用が掛カるため、治療薬や健康食品として重要な SAMeを安価に製造し提 供することは極めて困難なことであった。
[0004] 菌体からの抽出精製を要しない、醱酵法に代る方法として酵素的合成法が知られ ている。即ち、酵母などの微生物より単離精製した SAMe合成酵素 (メチォニンアデ ノシルトランスフェラーゼ）を用い、アデノシン 5 '—三リン酸 (ATP)と L—メチォニンを 基質として SAMeを酵素的に合成する方法である (例えば、特許文献 1、非特許文 献 5、 10参照）。この方法は、醱酵法と比べ、 SAMeの蓄積量が多ぐ菌体からの SA Me抽出操作が必要ないなどの利点はあるものの、酵素の調製が煩雑であること、得 られる酵素の活性が微弱であること、 ATP分解活性などの妨害酵素活性を除去する 必要があること、さらには、基質である ATPが極めて高価であるなど様々な問題を有 し、必ずしも実用的な方法とは成り得なかった。また、近年の遺伝子工学の発展によ り、クローン化した SAMe合成酵素遺伝子を用いることによって該酵素の調製がより 簡便になり（例えば、非特許文献 6〜9参照）、酵素調製の問題は解決されつつある ものの、依然として高価な ATPを基質として使用する必要があるなど、他の実用上の 問題は解決されていない。
[0005] 特許文献 1 :特開昭 51-125717号公報
非特許文献 l : Schlenk F.,DePalma R.E.J.Biol.Chem. , 229, 1037-1050(1957) 非特許文献 2： Shiozaki S.,et all,Agric.Biol.Chem., 53, 3269-3274(1989)
非特許文献 3： Schlenk F.,DePalma R.E.J.Biol.Chem. , 229, 1051-1057(1957) 非特許文献 4： Kusakabe, H.,Kuninaka, A. 'Yoshino, H. ,Agric.Biol.Chem.,38, 1669-1
672(1974)
非特許文献 5 : Mudd SH.,Cantoni Gし， et allJ.Biol.Chem., 231, 481-492(1958) 非特許文献 6 : Markham G.D.,et allJ.Biol.Chem. , 255, 9082-9092(1980)
非特許文献 7 : Markham DJ.,DeParisis J.J.Biol.Chem. , 259, 14505-14507(1984) 非特許文献 8 : Shiozaki S.,et allJ.Biotechnology.，4,345-354(1986)
非特許文献 9 : Thomas D.,Surdin_Kerjan Y.J.Biol.Chem., 262, 16704-16709(1987) 非特許文献 10 : Thomas D.'Cherest H.，et all,Mol.Cell.Biol. ,8, 5132— 5139(1988) 発明の開示
[0006] 上述のように、従来の微生物を用いた醱酵法では抽出，精製に、酵素的合成法で は合成に、多大な労力と費用を要するため、経口摂取が可能な SAMe含有物を低 レ、コストで製造することは極めて困難であった。したがって、本発明の目的は、該含 有物を低いコストで製造できるようにする方法として、 SAMeを高濃度に含有する乾 燥酵母を収率よく簡便に製造できる方法を確立するとともに、該製造方法で得られた 乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物を提供することにある。
[0007] 本発明者等は、上記の目的を達成すベぐ鋭意検討した結果、 SAMe生産能を有 し且つ経口摂取が可能な酵母を用レ、て菌体内に SAMeを高濃度に合成蓄積させた 後、培養液より遠心分離等の分離手段で酵母菌体を分離し、さらに鉱酸添加により 特定の pHに調整する処理及び特定温度への加熱処理の少なくともいずれか一方の 処理を行った後、乾燥させることによって、 目的とする SAMeを高濃度に含有する乾 燥酵母を低いコストで、簡便に収率良く製造できることを見出し、本発明を完成する に至った。
[0008] 即ち、本発明は、以下の:!〜 9に示す SAMeを高濃度に含有する乾燥酵母の製造 方法、及び該乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物を提供するものである。 1. S—アデノシノレ一 L—メチォニン生産能を有する酵母を用レ、、 S—アデノシノレ一L メチォニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より 分離した酵母菌体濃縮物を、（1)鉱酸添加により pHを:!〜 5に調整する処理、及び（ 2) 40°C〜85°Cに加熱する処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に、乾 燥させることを特徴とする、 S アデノシルー L メチォニン含有乾燥酵母の製造方 法。
2. S—アデノシノレ L—メチォニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に 属する酵母を用いる、上記項 1の S アデノシノレ L メチォニン含有乾燥酵母の製 造方法。
3.サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス 'セレビジェである、上記項 2 の S _アデノシノレ _L_メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
4. (1)鉱酸添加処理で使用する鉱酸が硫酸である、上記項 1の S—アデノシルー L 一メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
5. (1)鉱酸添加処理を行う場合において、 pHを 1〜4に調整する、上記項 1の S—ァ デノシル -L-メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
6. (2)加熱処理を行う場合において、 40°C〜80°Cに加熱する、上記項 1の S _アデ ノシル -L-メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。 7. (1)鉱酸添加処理及び（2)加熱処理の両方を行う、上記項 1の S アデノシルー L メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
8.凍結乾燥法又は噴霧乾燥法により乾燥する、上記項 1の S アデノシルー Lーメ チォニン含有乾燥酵母の製造方法。
9.上記項 1〜8の何れかの方法によって製造された S—アデノシノレ一 L メチォニン 含有乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物。
発明を実施するための最良の形態
[0009] 本発明に使用される酵母の種類は、 SAMe生産能を有し、かつ経口摂取可能なも のであればよぐ例えばサッカロマイセス属に属する酵母が好適に挙げられる。このう ち、サッカロマイセス 'セレビジェがより好適である。
[0010] 上記酵母を培養する際には、炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等を使 用する。使用する炭素源としては、酵母が資化し得るものであれば特に制限はなぐ 例えば、グノレコース、蔗糖、澱粉、廃糖蜜等の炭水化物、エタノールや酢酸等のアル コールや有機酸が挙げられる。窒素源としても、酵母が資化し得るものであれば特に 制限はなぐ例えば、アンモニア、硝酸、尿素等の無機体窒素化合物、又は酵母ェ キス、麦芽エキス等の有機体窒素化合物を含むものが挙げられる。また、無機塩類と しては、リン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、及びマグネシウム、鉄、カルシウム、亜鉛
、マンガン、コバルト、銅、モリブデン等の金属塩が用いられる。さらには、 SAMeの 骨格構成にあずかるメチォニン、アデニン、アデノシルリボヌクレオシドを添カ卩し培養 することちでさる。
[0011] 培養温度及び培養液の pHは使用する酵母の種類よつて異なるが、培養温度とし ては 20〜35°Cの範囲を、培養液の pHとしては pH4〜7の範囲を挙げることができる 菌体内の SAMe含量を高めるには、好気的に培養することが好ましい。従って、培 養槽は、通気可能で必要に応じ攪拌できるものが好ましぐ例えば、機械的攪拌培養 槽、エアーリフト式培養槽及び気泡塔型培養槽等を利用することができる。
培養槽への炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等の培養成分の供給は 、一括又は個別に連続的若しくは間欠的に行う。例えば、蔗糖、エタノール等の基質 は他の培地成分との混合物として培養槽に供給してもよぐまた他の培地成分とは別 に独立して培養槽に供給してもよい。培養液の pH制御は、酸、アルカリ溶液によって 行われる。アルカリとしては窒素源として使用されるアンモニア、尿素、又は非窒素系 塩基、例えば、苛性ソーダ、苛性カリ等を用いて pH制御するのが望ましい。酸として は無機酸、例えば、リン酸、硫酸、硝酸、又は有機酸が用いられる。無機塩類であるリ ン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、硝酸塩等を用いて pH制御することもできる。
[0012] このような条件で培養し、 目標量の SAMeが酵母菌体中に蓄積された段階で培養 液を培養槽から抜き出した後、分離し酵母菌体濃縮物となす。分離方法としては、菌 体の分離と洗浄が効率的に行える方法であれば特に制限はないが、向流型のィー ストセパレーターや分離膜を用いた限外濾過装置が好適な例として挙げられる。
[0013] さらに、分離した酵母菌体濃縮物に、硫酸等の鉱酸添加処理、及び加熱処理の少 なくともいずれか一方の処理を行う。鉱酸添加処理を行うことにより、 SAMeの安定性 が増し歩留まりを高めることが可能となる。添加する鉱酸としては、経口摂取が可能な ものであれば特に制限はないが、塩酸、硫酸、リン酸等、特にその好適な例として硫 酸が挙げられる。鉱酸の添加量は、 ρΗ1〜5となる量が必要であり、特に、 ρΗ1〜4と なる量が好ましい。
[0014] また、加熱処理を行うことにより SAMe分解酵素の失活ゃ滅菌を行うことができる。
加熱処理は得られる SAMe含量ができる限り高くなる条件を採用すれば良ぐ加熱 処理条件は、処理時間にもよる力 処理温度として、 40°C〜85°Cであることが必要 であり、 40°C〜80°C力 S好ましく、 40°C〜70°Cであること力 Sより好ましく、 50°C〜70°C であることが更に好ましい。
加熱時間は、加熱温度によっても変わるので一概には決められなレ、が、 30-600 秒が好ましぐ 30〜60秒がより好ましい。 30秒以上加熱処理することにより、 SAMe 分解酵素の失活ゃ殺菌等を行うことができる。また、鉱酸根の浸透が促進されるので
、添加する鉱酸量を節減することができる。一方、加熱時間を 600秒以下とすること により SAMeの分解による含量の低下を回避することができる。
なお、加熱処理は、常圧、加圧何れの方法でも実施できる。加熱処理を行うこと、或 いは鉱酸添加を行うことで、相対的により高い SAMe含量の乾燥酵母菌体を得ること ができる。
[0015] また、鉱酸添加処理及び加熱処理を併せて行うことにより、鉱酸添加処理のみを行 つた場合に比べ添加する鉱酸量を節減でき、また、加熱処理のみを行った場合に比 ベてさらに高い SAMe含量の乾燥菌体が得られるのでより好ましい。即ち、鉱酸添加 量と加熱温度の組み合わせとしては、加熱時間によっても異なる力 ρΗ1〜5となる 鉱酸添カ卩量と 40°C〜85°Cの温度条件の組み合わせが好ましぐ ρΗ1〜4となる鉱 酸添カ卩量と 40°C〜80°Cの温度条件の組み合わせがより好ましぐ ρΗ1〜4となる鉱 酸添カ卩量と 40°C〜70°Cの温度条件の組み合わせが更に好ましぐ ρΗ1〜4となる鉱 酸添カ卩量と 50°C〜70°Cの温度条件の組み合わせが更により好ましい。
[0016] このようにして鉱酸添加処理及び加熱処理の少なくともいずれか一方の処理を行つ た後に得られた酵母菌体濃縮物を、例えば、スプレードライヤによる噴霧乾燥法ゃ最 終棚段温度を 25°Cとした凍結乾燥等の乾燥方法により水分を蒸発させて乾燥酵母 となす。
[0017] 次いで、この乾燥酵母を破砕して粉末状にしたり、粉末状の乾燥酵母に必要に応 じて他の生理活性成分や賦形剤等の添加剤をカ卩えた後に圧縮打錠し錠剤状の経口 摂取用組成物となし、更にその表面を被覆したりすることもできる。また、粉体を顆粒 状に造粒することや、造粒した顆粒を詰めてカプセル化することもできる。
実施例
[0018] 以下、本発明を実施例及び比較例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこ れらの例によって限定されるものではない。
[0019] 実施例 1
(a)酵母菌体の培養
前述した公知の培養法〔Shiozaki S.,et all，J.Biotechnology,4,345-354(1986)(非特 許文献 8)〕に従って、丸菱バイオエンジニアリング社製の 30Lジャー培養槽を用いて 酵母菌体の培養を行った。培地成分は、炭素源としてスクロース 10質量％、酵母ェ キス 1質量％、窒素源として尿素 1. 8質量％、し メチォニン 1質量％、 ダリ シルグリシン 0. 2質量％、 KH PO 0. 4質量％、 MgSO · 7Η Ο 0. 01質量0 /0、
2 4 4 2
ビォチン 2 /i g/mL、混合ミネラル 0. 2質量0 /0 (混合ミネラル組成は以下のとおり 、 CaCl · 2Η〇 2. 0質量0 /0、 MnSO · 5Η Ο 0. 05質量0 /0、 FeSO · 7Η O 0. 0
5質量0 /0、 ZnSO · 7Η Ο 0. 1質量0 /0、 CuSO · 5Η O 0. 001質量0 /0、 CoCl · 6
H O 0. 001質量0 /0、 H BO 0. 001質量0 /0、 Na MoO 0. 001質量0 /0、 KI 0.
001質量％)含有培地にサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス.セレビジ ェ IF02346を接種し、培養温度 27〜29°C、 150rpmの攪拌速度にて好気的に通 気しながら 6日間培養した。また、培養途中に不足となったエタノール、 MgSO · 7Η
Οを逐次添加することにより SAMe含有量を高めた。その結果、菌体濃度 3. 5質量 % , SAMe含量 205mgZg -乾燥酵母の酵母菌体培養液 18Lを得た。
(b)酵母菌体の集菌
上記の酵母菌体培養液 18Lを連続ロータリー型遠心分離器 (日立 HIMAC CEN TRIFUGE CR10B2)で処理し、乾物換算で 18質量％に相当する菌濃度の液状 の酵母菌体濃縮物 3. 49kgを得た。
(c)酵母菌体濃縮物への鉱酸添カロ
上記の酵母菌体濃縮物 3. 49kgに 95質量％硫酸を 224g添加することにより、 pH 1の酵母菌体濃縮物 3. 71kgを得た。
(d)乾燥酵母の製造
上記の pHlの酵母菌体濃縮物 3. 71kgを微粒子化装置としてロータリーアトマイザ (回転円盤）を有するスプレードライヤ（NIPRO社製）を用いて、乾燥室の入口温度 1 95〜205°C、出口温度 80〜90°C、通液速度 38g/分の条件にて噴霧乾燥し、粉末 乾燥酵母 570gを得た。得られた粉末乾燥酵母中の SAMe含量は 174mg/g -乾 燥酵母であった。
なお、粉末乾燥酵母中の SAMe含量は、 SAMe含有乾燥酵母より過塩素酸を用 いた公知の方法（例えば、 Shiozaki S.，et all,Agric.Biol.Chem., 48, 2293-2300(1984)) で SAMeを抽出し、液体クロマトグラフィーによって定量した。なお、液体クロマトダラ フィ一には以下の分析条件を用いた。
カラム：ナカライ（nacalai tesque) COSMOSIL 4.6 φ X 100mm
溶離液： 0. 2M KH PO水溶液/メタノール = 95Z5 (体積比）
流速： 0. 7mL/min、検出器： UV (260nm)、 SAMe保持時間：約 150秒 [0020] 実施例 2〜4
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによって pH2、 3又は 4とした以外は実施例
1と同様に処理して、硫酸添加後の pHと噴霧乾燥後の SAMe含量との関係を調べ た。結果を表 1に示す。
[0021] 比較例 1
酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例 1と同様に処理して、噴霧 乾燥した粉末乾燥酵母 581gを得た。得られた粉末乾燥酵母中の SAMe含量は 13 6mgZg_乾燥酵母であった。結果を表 1に示す。
[0022] 表 1.鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後の pHと 噴霧乾燥によって得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (加熱処理無し）
[0023] [表 1]
Figure imgf000009_0001
[0024] 実施例 5
実施例 1と同様にして（a)から（c)までの操作を行い、硫酸を添加することによって p HIとした酵母菌体濃縮物 3. 71kgを得た。この酵母菌体を未加熱のまま凍結乾燥 器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ステンレストレーに流し込み— 50°Cで 凍結した後、最終棚段温度 25°Cの条件で 36時間凍結乾燥した。得られた凍結乾燥 酵母をさらに粉砕することによって粉末乾燥酵母 612gを得た。得られた粉末乾燥酵 母中の SAMe含量は 170mg/g -乾燥酵母であつた。結果を表 2に示す。
[0025] 実施例 6〜8
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによって pH2、 3又は 4とした以外は実施例 5と同様に処理して、硫酸添加後の pHと凍結乾燥後の SAMe含量との関係を調べ た。結果を表 2に示す。
[0026] 比較例 2 酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例 5と同様に処理して、凍結 乾燥し粉砕した粉末乾燥酵母 609gを得た。得られた粉末乾燥酵母中の SAMe含量 は 136mg/g -乾燥酵母であつた。結果を表 2に示す。
[0027] 表 2.鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後の pHと 凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (加熱処理無し）
[0028] [表 2]
Figure imgf000010_0001
[0029] 実施例 9〜： 11
酵母菌体濃縮物に添加した硫酸を、塩酸、硝酸又は燐酸に変えた (添加後の酵母 菌体濃縮物の pH : 1)以外は実施例 5と同様に処理して、鉱酸添加量と凍結乾燥後 の SAMe含量との関係を調べた。結果を表 3に示す。
[0030] 表 3.鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後の pHと 凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (加熱処理無し） [0031] [表 3]
Figure imgf000010_0002
実施例 12〜 23及び比較例 3〜 5
実施例 1と同様にして (a)から (b)までの操作を行レ、、この酵母菌体濃縮物をガラス 製ビーカー、マグネット式攪拌機及び加熱水浴槽を用いて加熱温度を 40°C、 50°C、 60°C、 70°C又は 90°Cとし，カロ熱処理時間を 60禾少、 300禾少又は 600禾少とした条件で 加熱処理した後、水槽にて 25°Cまで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株 式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下 50°Cで凍結した後、最 終棚段温度 25°Cの条件で 36時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母の SAMe 含量を表 4に示す。
[0033] 表 4.加熱処理のみ行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結乾燥によって得 られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (硫酸添加無し）
[0034] [表 4]
Figure imgf000011_0001
実施例 24〜32
実施例 1と同様にして（a)から（c)までの操作を行レ、、硫酸添カ卩により ρΗ1、 2又は 3 に調整した酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機、加熱水浴槽 を用いて加熱温度 60°C，加熱処理時間 60秒， 300秒又は 600秒の条件で加熱処 理した後、水槽にて 25°Cまで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社 製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下 50°Cで凍結した後、最終棚段 温度 25°Cの条件で 36時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量は 表 5に示す。 [0036] 表 5.鉱酸添加と加熱処理の両方を行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結 乾燥によって得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (加熱前の酵母菌体濃 縮物の ρΗ1、 2、 3)
[0037] [表 5]
Figure imgf000012_0001
[0038] 実施例 33〜41及び比較例 6〜8
実施例 1と同様にして（a)から（c)までの操作を行い、硫酸添カ卩により pH3に調整し た酵母菌体濃縮物 3. 71kgを得た。この酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグ ネット式攪拌機、加熱水浴槽を用いて加熱温度 40°C、 50°C、 70°C又は 90°C,加熱 処理時間 60秒、 300秒又は 600秒の条件で加熱処理した後、水槽にて 25°Cまで冷 却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製)の凍結乾燥用のステンレスト レーに流し込み零下 50°Cで凍結した後、最終棚段温度 25°Cの条件で 36時間凍結 乾燥した。得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量は下表 6の通りであった。
[0039] 表 6.鉱酸添加と加熱処理の両方を行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結 乾燥によって得られた粉末乾燥酵母の SAMe含量との関係 (加熱前の酵母菌体濃 縮物の pH3)
[0040] [表 6] 硫酸添加
(加熱前の酵母菌体濃縮物の pH 3 )
加熱 加熱 粉末乾燥酵母中の
温度 時間 SAMe含量
例 (。C) (秒） (mg/g-乾燥酵母） 実施例 7 未加熱 154
実施例 33 40 60 154
実施例 34 40 300 157
実施例 35 40 600 155
実施例 36 50 60 1 54
実施例 37 50 300 164
実施例 38 50 600 162
実施例 30 60 60 1 76
実施例 31 60 300 179
実施例 32 60 600 173
実施例 39 70 60 172
実施例 40 70 300 163
実施例 41 70 600 155
比較例 6 90 60 140
比較例 7 90 300 1 1 8
比較例 8 90 600 81 産業上の利用可能性
本発明によれば、 SAMeを高濃度に含有する乾燥酵母を、低いコストで収率良く簡 便に製造することができる。該 SAMeを含有する乾燥酵母を成型してなる経口摂取 用組成物は、鬱病、肝臓疾患及び関節炎等の治療薬、或いは健康食品として広く利 用すること力 Sできる。

Claims

請求の範囲
[1] S—アデノシノレ一 L_メチォニン生産能を有する酵母を用レ、、 S—アデノシノレ一 L— メチォニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分 離した酵母菌体濃縮物を、（1)鉱酸添加により pHを:!〜 5に調整する処理、及び（2) 40°C〜85°Cに加熱する処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に、乾燥 させることを特徴とする、 S—アデノシル _L_メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[2] S アデノシノレ一 L—メチォニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に 属する酵母を用いる、請求項 1に記載の S アデノシルー L メチォニン含有乾燥酵 母の製造方法。
[3] サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス 'セレビジェである、請求項 2に 記載の S アデノシノレ L メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[4] (1)鉱酸添加処理で使用する鉱酸が硫酸である、請求項 1に記載の S アデノシノレ
-L-メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[5] (1)鉱酸添加処理を行う場合において、 pHを 1〜4に調整する、請求項 1に記載の
S アデノシノレ L メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[6] (2)加熱処理を行う場合において、 40°C〜80°Cに加熱する、請求項 1に記載の S
—アデノシル _L_メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[7] (1)鉱酸添加処理及び（2)加熱処理の両方を行う、請求項 1に記載の S—アデノシ ルー L一メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[8] 凍結乾燥法又は噴霧乾燥法により乾燥する、請求項 1に記載の S_アデノシル _L 一メチォニン含有乾燥酵母の製造方法。
[9] 請求項 1〜8の何れかに記載した方法によって製造された S—アデノシノレ一 L—メ チォニン含有乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物。
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