WO2007009393A1 - Utilisation d'acide chlorogene dans la fabrication de medicaments pour l'accroissement de l'effet de cellules de moelle osseuse - Google Patents

Utilisation d'acide chlorogene dans la fabrication de medicaments pour l'accroissement de l'effet de cellules de moelle osseuse Download PDF

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chlorogenic acid
bone marrow
cells
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medicament
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Jie Zhang
Shu Zhang
Liang Zhang
Xinquan Li
Xiaoping Xu
Zhiquan Yong
Xu Bao
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Jie Zhang
Shu Zhang
Liang Zhang
Xinquan Li
Xiaoping Xu
Zhiquan Yong
Xu Bao
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    • A61P7/06—Antianaemics

Definitions

  • the present invention relates to a novel use of chlorogenic acid, in particular, to the use of chlorogenic acid for the preparation of a medicament having the effect of increasing bone marrow cells.
  • Chlorogenic acid is widely present in various medicinal plants such as honeysuckle, etc. Currently, its chemical structure has been studied. Some people have conducted medicinal research and reported that chlorogenic acid can be used to treat diseases such as tumors.
  • Chlorogenic acid is a kind of phenols isolated from the leaves and fruits of dicotyledonous plants (such as honeysuckle leaves, coffee beans, sunflowers). It is also a compound of many Chinese herbal medicines (such as Eucommia, Honeysuckle, Yinchen, etc.) and Chinese herbal medicine. The main active ingredients of antibacterial, anti-inflammatory, detoxification and detoxification of the preparation have become one of the main indicators for the quality control of Chinese herbal preparations.
  • Chlorogenic acid is a phenylpropanoid compound produced by the plant by the shikimate pathway during aerobic respiration.
  • chlorogenic acid is widely distributed in plants, ranging from higher dicotyledons to ferns, but there are not many plants with high content, mainly in Lonicera and Artemisia plants. Among them, including Eucommia, Honeysuckle, Sunflower, Coffee, Cocoa. Since chlorogenic acid is a polar organic acid, it is easily soluble in alcohol and water, and is insoluble in chloroform and ether. Therefore, chlorogenic acid There are many extraction methods, such as alcohol (melanol, ethanol) dissolution method, water extraction and alcohol precipitation, alcohol extraction and lead precipitation, lime milk precipitation method and polyamide column chromatography.
  • Hyaluronic acid is one of the enzymes that cleave mucopolysaccharide and can catalyze The breakdown of hyaluronic acid (HA) is related to the permeability and inflammatory response of the vascular system.
  • HA is a mucopolysaccharide composed of uronic acid and acetylamino glucose, which has various functions such as healing wounds, moisturizing the skin, lubricating joints and preventing inflammation.
  • chlorogenic acid From the ethyl acetate extract of Echinacea amgustifolia DC root, 3,5-dicaffeoylquinic acid (carbamate) and chlorogenic acid have strong inhibitory effects on HAase activation. Studies in animals have shown that the use of chlorogenic acid can reduce the peak of hyperglycemia caused by the use of glucagon (causal glycolysis). Therefore, chlorogenic acid can lower blood sugar levels and increase the concentration of hepatic glucose-6-phosphate and hepatic glycogen. 2. Free radical scavenging and anti-lipid/peroxidation: Chlorogenic acid inhibits lipoxygenase activity in prostaglandin metabolism, inhibits oxidation of vitamin A, protects adrenaline from oxidation, and resists retinoic acid5.
  • Chlorogenic acid and 3,5-dicaffeoylquinic acid are small molecular compounds that react rapidly with peroxy radicals, so they are potentially important biological antioxidants.
  • the possible antioxidant mechanisms are: The catechols are partially accepted as peroxyl radicals to accept hydrogen donors, which in turn are converted to low activity products. Therefore, they can terminate the chain radical reaction. 3, anti-cancer effect: Chlorogenic acid is an important substance in plant metabolism, and is also an inhibitor of phorbol ester active tumor.
  • Chlorogenic acid is a major phenolic compound in coffee. Daily daily intake of coffee is 0.5-lg. Chlorogenic acid and caffeic acid are antioxidants in vitro and may therefore have an effect on the prevention of cardiovascular disease. 5.
  • Chlorogenic acid and isochlorogenic acid have strong inhibitory and killing effects on various pathogenic bacteria and viruses, as well as choleretic, antihypertensive, anti-inflammatory and significantly increase gastrointestinal motility and promotion. Pharmacological effects such as secretion of gastric juice.
  • chlorogenic acid such as CN200410022438.6, the name of the invention: high-purity chlorogenic acid preparation
  • the invention relates to high-purity chlorogenic acid as raw material to prepare various dosage forms which are pharmaceutically applicable in clinic. Medicines. Using 95% -105% chlorogenic acid to prepare various injections containing 1mg-3g, sterile powder needles, various tablets, capsules, oral liquids, eye drops, ointments, various kinds of slow control Release preparation.
  • chlorogenic acid is a qualitative or quantitative indicator of about 170 kinds of proprietary Chinese medicines.
  • CN02829404.1 entitled “A herbal molecule capable of acting as an anti-leukemia drug” discloses a compound chlorogenic acid isolated from a leaf extract of betel leaf or from any other source.
  • a new use in the treatment of acute and chronic myeloid leukemia and lymphocytic leukemia also provides a combination of drugs for the treatment of acute and chronic myeloid leukemia and lymphocytic leukemia containing chlorogenic acid and a pharmaceutically acceptable additive. , which comprises an effective amount of chlorogenic acid (CA) and/or 3-0-P-coumaroyl quinic acid (PCQ) isolated from any plant part of the leaf of the betel leaf or any other natural or synthetic source. , and pharmaceutically acceptable additives.
  • CA chlorogenic acid
  • PCQ 3-0-P-coumaroyl quinic acid
  • Leukemia is a malignant tumor caused by abnormal proliferation of granulosa cells in the bone marrow. Therefore, it indicates that chlorogenic acid can treat acute and chronic granulocyte leukemia, which is a blood cancer in the usual sense, by inhibiting excessive proliferation of leukocytes. .
  • the technical solution of the present invention is to provide a new use of chlorogenic acid, in particular, to prepare a drug having an effect of increasing bone marrow cells.
  • the present invention provides the use of chlorogenic acid for the preparation of a medicament for increasing the efficacy of bone marrow cells.
  • the chlorogenic acid used in the present invention may be extracted or purified from natural plants or synthesized synthetically.
  • the drug is a drug that promotes proliferation, differentiation, maturation and release of bone marrow cells. Further, the drug is a drug for increasing bone marrow stem cells. Increasing the efficacy of bone marrow cells refers to the effect of increasing the number of cells in the three major systems of the bone marrow through the action of bone marrow stem cells.
  • the medicament is a medicament for increasing bone marrow hematopoietic stem cells.
  • the above-mentioned drug for increasing bone marrow hematopoietic stem cells is a drug for enhancing hematopoietic function for leukopenia; further, the drug is a drug for treating neutropenia.
  • the above-mentioned drugs for increasing bone marrow hematopoietic stem cells are drugs for treating thrombocytopenia and anemia.
  • the anemia is hemorrhagic anemia, hemolytic anemia, giant cell anemia, Aplastic anemia.
  • the bone marrow fibrosis leads to the reduction of cells in the three major systems of the bone marrow (erythroid, granulocyte, giant cell line), erythroid anemia, granulocyte leukopenia, giant Cell line thrombocytopenia.
  • Chlorogenic acid has a normal proliferative effect on leukocytes. It promotes the normal bone marrow stem cells and promotes the normal occurrence of bone marrow cells in the three major systems. It is a normal promoting effect and does not cause hyperproliferation of the granulocyte system.
  • Anemia is caused by various causes of bone marrow redness, which reduces the number of peripheral red blood cells and red blood cell hemoglobin, or the loss of red blood cell damage in peripheral blood caused by various reasons, which reduces the number of peripheral red blood cells and or the red blood cell hemoglobin content.
  • the disease that is produced is also a clinical symptom.
  • the drug is a drug for treating myelofibrosis.
  • the drug is a drug for treating bone marrow infection. After bone marrow infection, the cells in the three major bone marrow systems are also reduced. The role of chlorogenic acid is to promote the whole bone marrow cells.
  • the medicine is a medicine for protecting and repairing damage of spleen hematopoietic stem cells.
  • the drug is a drug for treating hypersplenism.
  • the cells of the three major systems caused by hypersplenism are accelerated in the spleen, shortening the cycle of peripheral blood in the cells, and chlorogenic acid promotes the whole bone marrow cells and accelerates the output.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition having an effect of increasing bone marrow cells, which is prepared by administering an effective amount of chlorogenic acid as an active ingredient together with a pharmaceutically acceptable adjuvant or auxiliary ingredient.
  • the preparation agent contains l-3000 mg of chlorogenic acid per preparation unit.
  • the safe dose for human use is not more than 90 mg/kg. If the body weight is calculated as 50 kg, the human dose should not exceed 4500 mg/day.
  • each of the preparations contains l-3000 mg of chlorogenic acid per preparation unit.
  • the agent is an oral preparation or an injection.
  • chlorogenic acid can increase white blood cells; it can stimulate canine bone marrow cell proliferation, including the increase of normal bone marrow stem cells, and chlorogenic acid has significant protection against 6Q Co- ⁇ -ray-induced spleen hematopoietic stem cell injury in mice. Role, thereby promoting the normal occurrence of bone marrow cells in the three major systems.
  • the process of hematopoiesis is an active process of cell proliferation, differentiation, maturation and release. It is maintained by the self-renewal of pluripotent hematopoietic stem cells to maintain a constant number of pluripotent hematopoietic stem cells
  • the directional progenitor cells of each line are further proliferated, differentiated, and released into the peripheral blood circulation. Drugs can affect the hematopoietic process by affecting the proliferation and differentiation of hematopoietic stem cells and progenitor cells. Therefore, the establishment of in vitro culture techniques of hematopoietic progenitor cells provides a means and method for the action of the medicament of the present invention.
  • the invention demonstrates the effect of chlorogenic acid on hematopoietic function of a 9-month-old mouse as an experimental model and a mouse of the same age as a control by a pharmacodynamic test.
  • the results showed that the proliferation and differentiation ability of mouse CFU-S, CFU-GM, CFU-E and BFU-E and the number of WBC in peripheral blood were significantly lower than those of the same age.
  • chlorogenic acid can increase the number of CFU-S decreased in mice, indicating that chlorogenic acid can stimulate the proliferation of hematopoietic stem cells, while chlorogenic acid can promote the monolayer progenitor cells of mouse bone marrow, early and late erythroid ancestors.
  • the proliferation and differentiation of cells can increase the number of WBC in peripheral blood, which proves that chlorogenic acid can affect the whole process of hematopoiesis in mice. It can be seen that ortho-acid may regulate the hematopoietic regulation system in the body.
  • the results of the determination of mouse serum colony agitation activation indicate that chlorogenic acid can enhance the proliferation and differentiation of progenitor cells by promoting the production of colony stimulating factors in the mouse body. Histological findings further confirm that chlorogenic acid enhances hematopoietic function in mice.
  • chlorogenic acid can treat anemia caused by various causes, and is not limited to hemorrhagic anemia, hemolytic anemia, hematopoietic anemia including giant cell anemia, aplastic anemia and hypersplenism, for various reasons.
  • the caused leukopenia, neutropenia, and agranulocytosis have therapeutic effects, and have therapeutic effects on megakaryotic system changes such as idiopathic thrombocytopenic purpura caused by various causes; bone marrow fibrosis caused by various causes , bone marrow infection has a certain therapeutic effect.
  • chlorogenic acid can be prepared into various pharmaceutical dosage forms such as, but not limited to, oral dosage forms, intravenous administration dosage forms, and external dosage forms, either alone or in combination with other drugs having known efficacy.
  • Chlorogenic acid content 99.56%, formulated with sodium chloride injection to the desired concentration.
  • Positive control drug recombinant human granulocyte colony-stimulating factor injection, 300ug/d, 1.2ml/branche.
  • SPF grade ICR mice weighing 22 ⁇ 30g, 240. According to body weight and sex, they were randomly divided into high, medium and low dose groups of chlorogenic acid, positive control group, model control group and normal control group, 40 in each group, half male and half female. All animals except the normal control group were irradiated with 6G CO Y-rays at a dose of 4 Gy (dose rate was 256 Gy/h, and the irradiation time was 2 min).
  • each group was given the corresponding test substance according to Table 1.
  • the model group was given a volume of sodium chloride injection) once a day for 14 days.
  • 20ul of tail vein blood was quantitatively taken, and the blood was slowly blown into a test tube supplemented with 500ul of diluent to mix the blood and the diluent, and the peripheral blood was detected by an automatic blood cell counter. Blood.
  • 10 animals were randomly selected from each group (minimum no less than 8 and try to keep the male and female half).
  • Table 2 and Table 3 show that the peripheral blood leukocytes and platelets of the model animals decreased significantly after modeling, which was significantly different from the normal control group (PO.01).
  • the animals in the high, medium and low dose groups after 7 days of treatment administration The white blood cells showed a significant upward trend.
  • the high dose group was significantly different from the model control group on the 11th day of administration (P ⁇ 0.05).
  • the results of Tables 5 to 18 show that the total number of granulocytes in the irradiated animals decreased to varying degrees after modeling, and there was significant or very significant difference compared with the normal control group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01).
  • the rod and granulocyte were lower than the normal control group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01).
  • the total number of erythroid cells and the young and young erythrocytes in the irradiated group were higher than the normal control group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01), the rest of the classification of certain cells tended to increase, than red tablets were significantly lower than the control group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01 ) after o therapeutic administration, the high drug dose groups
  • the total number of granulocytes was significantly increased, which was significantly different from the model control group (PO.01).
  • the young, rod-shaped and granulocyte-like cells in the high- and medium-dose groups showed an increasing trend compared with the model group, and some of them were detected. There were significant or very significant differences between the values and the model group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01).
  • the group was significantly or significantly more significant than the model group (P ⁇ 0.05 or P ⁇ 0.01).
  • Chlorogenic acid content 99.56%
  • positive control drug licorubicin tablets, 20mg/tablet, three times a day (3 tablets), cyclophosphamide for injection (referred to as CY), white powder, 200mg/ampule, 5pcs/ Boxed.
  • Beagle dogs, 36 male and female
  • the dosage design is shown in Table 19.
  • the other 5 groups of dogs were intravenously injected with 8 mg/ml cyclophosphamide 0.8 ml/kg (8 mg/kg) once daily for 5 consecutive days.
  • each test drug was administered according to Table 19, and the model control group and the normal control group were given physiological saline for 13 consecutive days.
  • Peripheral blood was taken from the peripheral blood before and after modeling, 2, 4, 6, 8, 10, 12, and 14 days after treatment.
  • the white blood cells of each animal were examined before the modeling (injection of cyclophosphamide) and the end of modeling (on day 5 of injection of cyclophosphamide), on the 7th day and the 14th day of treatment, the canine side was bent down, the upper humerus was inserted into the bone marrow, and the smear was stained with Wright's dye solution. Under the microscope Rows are counted, granulocytes, erythrocytes, megakaryocytes, monocyte systems, and the like. Count 200 cells. The total number of megakaryocytes was counted, and the platelet count was 25 (mature platelet formation and maturation-free platelet formation), and the results were statistically processed.
  • CY was injected once a day, and the treatment was administered once every 1, 2, 3, 4, 6, 7, 9, 11 and 15 days. Take the venous blood of the forefoot of the fasting dog for peripheral blood test.
  • CY6 days were injected, and once every 7th and 14th days of the administration. For bone marrow testing. The results were statistically processed.
  • Bone marrow hyperplasia was divided into 6 grades, 1 was extremely active, 2 was markedly active, 3 was active, 4 was reduced, 5 was significantly reduced, and 6 was extremely low. Level level
  • I Number of animals (only) ⁇ Before modeling + 5 days of treatment for 7 days Treatment of 14 days of high-dose group of chlorogenic acid 6 3 grade 2 middle dose group of chlorogenic acid grade 6 grade 5 cases Grade 3, 1 case, grade 2, grade 3 low-dose group, chlorogenic acid, 6 3 cases, grade 3, 3 cases, grade 2, grade 3, grade 3, grade 3, grade 4 positive drug group, 63, grade 3, grade 3, grade 2, grade 5, grade 3 1 case of 4th level model control group 6 2 cases, 3, 3, 4, 4, 3, 1, 4, 4, 2, 2, 2
  • Neutrophils are predominantly rod-shaped, accounting for 45-50% of the total number of whole films, followed by young, young, and lobulated cells. Occasionally, eosinophils, no primitive, promyelocytes. No young and late granulocytes were seen.
  • Erythrocyte system mainly young red blood cells, accounting for about 25 ⁇ 30% of the whole film, followed by young and middle red blood cells, no red, early red, early giant, medium giant, late giant red blood cells.
  • Lymphatic system Mainly mature lymphocytes (about 10 ⁇ 12%), no primitive and naive lymphocytes.
  • Mononuclear system There were no primitive, naive, and monocytes in each group.
  • Megakaryocytes It is mainly composed of mature platelets, followed by mature non-platelet formation, and no immature megakaryocytes. Other cells: no plasma cells, no reticulum, endothelium, phagocytosis, parasites, giant cells, unidentified cells, and special cells. There was no significant difference in the ratio of granulocyte system to erythrocyte system between the groups ( ⁇ >0.05). Normal bone marrow cell examination before the experiment (% X ⁇
  • the granules of the granules are red and red, and the night and evening are divided into thin and single. There are no cells, late red, red, red, red, and fine.
  • Late red blood cells 25.17 ⁇ 0.69 25.25 ⁇ 0.42 16.2 ⁇ 8.73 22.00 ⁇ 6.40 19.90 ⁇ 5.85: 24.33 ⁇ 0.61
  • Early giant red blood cells 0 0 0 0 0 0 0 0
  • Medium giant red blood cells 0 0 0 0 0 0 0
  • Tables 25 and 26 showed that the injection of CY decreased the white blood cell count (WBC), and the decreased WBC count was significantly increased after the drug treatment.
  • the three test groups showed that the drug had an elevated effect, and the high dose group 0 was at the 12th. After the day, the middle dose group was slightly obvious after the 8th day, and the positive control group and the model group were not obvious.
  • the normal control group fluctuated within the normal range.
  • chlorogenic acid has a significant effect on the proliferation of bone marrow cells for bone marrow suppression caused by both physical and chemical factors.
  • mice Sixty healthy C 57 mice were randomly divided into 5 groups according to gender. Dosing separately by group, negative The rats in each group were intraperitoneally injected with normal saline 0.4ml/20g body weight, and the positive group (granulocyte colony-stimulating factor) were intraperitoneally injected with 0.4ml/20g body weight (2ug/kg), and the other three groups were 0.1%, 0.05% and 0.025 respectively. % of the chlorogenic acid solution was intraperitoneally injected into each group of 0.4 ml/20 g body weight (dose 20, 10 and 5 mg/kg). Each of the above 5 groups was administered once a day for 7 consecutive days, and the 7th day was called the body weight of the surviving animals, 1 hour after the last administration.
  • mice in each group were sacrificed by cervical dislocation on the 9th day after the whole body irradiation.
  • the spleen was removed, the adhesion fat was removed, and then fixed in Bouins solution for 3 min.
  • the endoscopic spleen nodule count (CFU-S) was observed with a magnifying glass.
  • BMNC bone marrow mononuclear cell count
  • Model control group 12 23.6 ⁇ 1 ⁇ 7 21 ⁇ 3.51 Positive group 0.025 12 78.2+12.2*** 88.6 + 12.9*** Chlorogenic acid 20 12 82. 8+5.3*** 89.8 ⁇ 13;7*** Green Ortho acid 10 12 72.4 ⁇ 12.6** 69.2 ⁇ 6.8** Chlorogenic acid 5 12 53.10 ⁇ 8.2* 51.2 ⁇ U.2* Comparison with model control group *** P ⁇ 0.001 ** P ⁇ 0.01 * P ⁇ 0.05
  • BMC Bone Marrow Cells
  • CFU-S mouse bone marrow hematopoietic stem cells
  • CFU-GM bone marrow monosomic progenitor cells
  • BFU-E early and late erythroid progenitor cells
  • the culture system was formulated into a final concentration of 10% bone marrow cell suspension (5 x 104 ml), 200 g L horse serum, 100 g/L calf serum white.
  • mice Determination of peripheral blood of mice The blood was collected from the tail vein of a mouse and counted by a Coulter blood cell counter. Histological observation of mouse bone marrow The intact left femur was taken from euthanized mice, fixed in Hellyps solution, embedded in paraffin, HE stained, and histological changes were observed under light microscope.
  • the number of CFU-S in C57 mice after chlorogenic acid was 20.667 ⁇ 2.103 and 23.250 ⁇ 2.379, respectively, suggesting that chlorogenic acid causes bone marrow hematopoiesis in C57 mice.
  • the proliferation and differentiation of stem cells have a certain stimulating effect.
  • Model control group 12 9. 583 ⁇ 1. 084 chlorogenic acid 20 12 20. 667 ⁇ 2. 103** chlorogenic acid 10 12 23. 250 ⁇ 2. 379** compared with the model control group *** P ⁇ 0 . 001 ** P ⁇ 0. 01 * P ⁇ 0. 05
  • the animals were grouped and administered as before.
  • the mice were euthanized on the 9th day of administration, and the BMC suspension was aseptically prepared as described above.
  • the results showed that the proliferative capacity of bone marrow hematopoietic progenitor cells in C57 mice was significantly lower than that in C57 mice, and there was a significant difference between the two.
  • chlorogenic acid can significantly increase the proliferation of granulocyte-derived hematopoietic progenitor cells and early and late erythroid progenitor cells in C57 mice.
  • Table 29 Chlorogenic acid on mouse bone marrow hematopoietic progenitor cell proliferation CFU-E
  • Model control group 12 1. 533 ⁇ 0. 331 Chlorogenic acid 20 12 6. 625 ⁇ 0. 669** Chlorogenic acid 10 12 7. 025 ⁇ 0. 703** Compared with model control group *** P ⁇ 0 . 001 ** P ⁇ 0. 01 * P ⁇ 0. 05
  • mice in each group were collected from the heart, serum was prepared by static centrifugation, and the lung condition stimulating solution (CSF-GM) was replaced with serum to observe the effect on CFU-GM proliferation, and the CFU-GM yield represented CSA.
  • the CFU-GM of 10, 20 mg/kg C57 mice was significantly increased after chlorogenic acid administration (CFU-GM was 173.000 ⁇ 14.283 and 201.833 ⁇ 18.065, respectively), which was significantly different from that of C57 group, suggesting that chlorogenic acid was obvious.
  • the histological study showed that the hematopoietic progenitor cells in the bone marrow cavity of the mice were abundant, and all the cells were visible, and the morphology was good, the proliferation was strong, and the sinusoids were more.
  • the hematopoietic cells in the bone marrow cavity of C57 mice of the same month were obviously reduced, and the proliferation was inactive.
  • the middle and late myelocytes were the main cells, and even the hematopoietic cells were partially absent.
  • the fibrous connective tissue proliferated and the sinusoids were less.
  • C57 mice given chlorogenic acid showed significantly increased hematopoietic cells in the bone marrow cavity, active hyperplasia, and more sinusoids, but less bone marrow hematopoietic cells and sinusoids than C57 mice. This result indicates that chlorogenic acid can significantly improve the hematopoietic function of bone marrow in C57 mice.
  • the chlorogenic acid can be prepared as a pharmaceutically conventional preparation under the novel use of the present invention by way of specific examples, but the amount of chlorogenic acid is not limited to the scope of the examples.
  • Tannic acid l.Og Tannic acid l.Og
  • Stabilizers for preventing chlorogenic acid hydrolysis such as cyclodextrin inclusion complexes, surfactants (anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, nonionic surfactants)
  • Antioxidants sodium sulfite, sodium bisulfite, sodium metabisulfite, sodium thiosulfate, ascorbic acid, cysteine.
  • Physiologically useful pH modifiers citric acid, fumaric acid, glutamic acid, L-aspartic acid, lactic acid, lactobionic acid, galacturonic acid, glucuronic acid, ascorbic acid, hydrochloric acid, acetic acid.
  • Sodium Chloride Sterile Powder 18g According to the routine operation of the powder-free injection, a total of 1000 ml of 2 ml powder injections were prepared, each containing 1 gram of chlorogenic acid.
  • Example 1 Each of the formulated products of Example 1 was freeze-dried by a lyophilization apparatus to obtain a sterile lyophilized powder injection of chlorogenic acid sodium chloride.
  • Chlorogenic acid (purity greater than 95%) 1500g
  • Chlorogenic acid (purity greater than 95%) 3000g
  • the purity of chlorogenic acid is greater than 95%.
  • Stabilizers for preventing chlorogenic acid hydrolysis such as cyclodextrin inclusion complexes, surfactants (anionic surfactants, cationic surfactants, zwitterionic surfactants, nonionic surfactants)
  • Antioxidants sodium citrate, sodium hydrogen citrate, sodium pyroantimonate, sodium thiosulfate, ascorbic acid, cysteine.
  • Physiologically useful pH modifiers citric acid, fumaric acid, glutamic acid, L-aspartic acid, lactic acid, lactobionic acid, galacturonic acid, glucuronic acid, ascorbic acid, hydrochloric acid, acetic acid.
  • Chlorogenic acid (purity greater than 95%) 100.00g
  • Chlorogenic acid (purity greater than 95%) 300.00g
  • the purity of chlorogenic acid is greater than 95%.
  • Fillers such as starch, dextrin, powdered sugar, pregelatinized starch, lactose, glucose, microcrystalline cellulose, calcium carbonate, calcium sulfate, calcium bicarbonate.
  • Binders such as hydroxypropionin, povidone, starch syrup, dextrins, syrup, glue, sodium alginate, polyethylene glycol, peach gum, gum arabic.
  • Disintegrators such as croscarmellose sodium, crospovidone, sodium carboxymethyl starch, hydroxypropyl starch, low-substituted hydroxypropyl cellulose, citric acid, tartaric acid, acid anhydride, sodium hydrogencarbonate, carbonic acid sodium.
  • Lubricants such as magnesium stearate, talc, micronized silica gel, liquid paraffin, polyethylene glycol.
  • Each capsule contains
  • Prescription 3 Chlorogenic acid (purity greater than 95%) 300.00g
  • Fillers such as starch, dextrin, powdered sugar, pregelatinized starch, lactose, glucose, microcrystalline cellulose, calcium carbonate, calcium sulfate, calcium bicarbonate.
  • Binders such as hypromellose, povidone, starch syrup, dextrins, syrup, glue, sodium alginate, polyethylene glycol, peach gum, gum arabic.
  • Lubricants such as magnesium stearate, talc, micronized silica gel, liquid paraffin, polyethylene glycol. Industrial applicability
  • the present invention not only provides a new use of chlorogenic acid in the preparation of a medicament for increasing the efficacy of bone marrow cells.
  • a pharmaceutical preparation containing chlorogenic acid as an active ingredient is also provided. Since chlorogenic acid is mostly derived from natural plants, the cost is low, the toxicity is extremely low, and the overall function of the body can be improved. Therefore, the preparation containing chlorogenic acid as an active ingredient is particularly suitable for various anemia, hypersplenism, bone marrow infection, etc. Diseases that require long-term therapeutic use are cost-effective, safe, and effective in providing clinically new drug options.

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Description

绿原酸在制备具有增加骨髓细胞功效的药物中的用途 技术领域
本发明涉及绿原酸的新用途， 具体来说， 是绿原酸在制备具有增加骨髓细 胞功效的药物中的用途。
Figure imgf000002_0001
绿原酸广泛存在于各种药用植物如金银花等中，目前对它的化学结构研究 已经清楚， 已有人对其进行药用研究，报道了绿原酸可以应用于治疗肿瘤等疾 病。
绿原酸（chlorogenic acid )是一种从双子叶植物（如忍冬叶、 咖啡豆、 向 日葵）的叶和果实分离得到的酚类， 也是许多中草药（如杜仲、金银花、 茵陈 等）及中药复方制剂抗菌消炎、 清热解毒的主要活性成分， 目前已成为中草药 制剂质量控制的主要指标之一。绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途 径产生的一种苯丙素类化合物。 它是一种由咖啡酸 (caffeic acid)与奎尼酸 (鸡纳 酸， quinic acid, 即 1-羟基六氢没食子酸)缩合而成的缩酚酸， 异名咖啡鞣酸, 化学名 3-0-咖啡酰奎尼酸 (3-O-caffeoylquinic acid), 分子式为 C16H1809, 分子 量： 345.30, 半水合物为针状晶体， 时变为无水化合物， 易溶于水、 乙醇、 丙 酮， 微溶于乙酸乙酯， 常温下呈淡黄色固体。 绿原酸的结构式如下：
Figure imgf000002_0002
植物中绿原酸的生物合成包括了一系列的酶促反应。 在酶的催化下， 葡萄 糖转化成莽草酸 (shikimic acid),后者再转化成苯丙氨酸，最后经合成酶作用得 绿原酸。 绿原酸在植物中分布广泛， 从高等双子叶植物到蕨类植物均有报道， 但含量较高的植物不多， 主要存在于忍冬科忍冬属 (Lonicera)、 菊科蒿属 (Artemisia)植物中， 其中包括杜仲、 金银花、 向日葵、 咖啡、 可可树。 由于绿 原酸是极性较强的有机酸， 易溶于醇、 水， 难溶于氯仿、 乙醚,因此绿原酸的 提取方法较多， 有醇（曱醇、 乙醇）溶法、 水提醇沉、 醇提铅沉、 石灰乳沉淀 法及聚酰胺柱层析法等。
现有文献报道的绿原酸的药理作用有： 1、 对透明质酸酶及葡萄糖 -6-麟酸 酶的抑制作用： 透明质酸梅 (HAase)是裂解粘多糖的酶之一， 可催化透明质酸 (HA)的分解， 关系到血管系统的通透性和炎症反应。 HA是由糖醛酸和乙酰氨 基葡萄糖组成的一种粘多糖， 具有多种功能， 如治愈创伤， 使皮肤润湿健康， 润滑关节和防止炎症等。 从狭叶紫锥花（ Echinacea amgustifolia DC )根的乙酸 乙酯提取物中发现 3，5-二咖啡酰奎尼酸 (朝鲜蓟酸)和绿原酸有较强的抑制 HAase激活的作用。动物体内的研究证明，使用绿原酸可以降低由使用胰高血 糖素引起的（肝糖分解造成的）高血糖峰值。 因此，绿原酸可以降低血糖水平， 提高肝脏葡萄糖 -6-磷酸和肝糖原的浓度。 2、 自由基的清除及抗脂^过氧化作 用： 绿原酸抑制前列腺素代谢中脂氧化酶活性， 抑制维生素 A的氧化， 保护 肾上腺素免受氧化， 抗维生素 A酸 (retinoic acid)5,6-环氧化的生物活性， 绿原 酸甲酯和二咖啡酰奎尼酸可抑制线粒体和微粒体脂质过氧化。 绿原酸和 3,5- 二咖啡酰奎尼酸属于小分子化合物， 能与过氧自由基快速反应， 因此它们是潜 在重要的生物抗氧化剂。 其可能的抗氧化机制为： 儿茶酚类 (catechols)部分作 为过氧自由基接受氢原子供体，继而转化成低活性产物。 因此， 它们可终止链 自由基反应。 3、 抗癌变作用： 绿原酸是植物代谢中的一种重要物质， 也是促 佛波醇酯活性肿瘤的抑制剂。近来， 日本学者研究了杜仲茶的变异原性抑制作 用（Antimutagenicity)与杜仲叶所含的绿原酸、 京尼平甙、 京尼平甙酸等抗变异 原性成分有关， 揭示了杜仲茶对肿瘤的预防具有重要意义。 4、 预防心血管疾 病： 绿原酸是咖啡中一种主要的酚类化合物。 日常引用咖啡的人每日摄取量为 0.5— lg。 绿原酸和咖啡酸在体外是抗氧化剂， 因此可能对预防心血管疾病有 作用。 5、 抗菌、 抗病毒作用： 绿原酸和异绿原酸对多种致病菌和病毒有较强 的抑制和杀灭作用， 还有利胆、 降压、 消炎及显著增加胃肠蠕动和促进胃液分 泌等药理作用。
目前， 关于绿原酸的制药用途有相关报道， 如 CN200410022438.6, 发明 名称： 高纯度绿原酸制剂，该发明涉及高纯度绿原酸为原料制备成药学上可应 用于临床的各种剂型的药品。 采用含量 95 % -105 %的绿原酸制成含 lmg-3g的 各种注射液、 无菌粉针、 各种片剂、 胶嚢、 口服液、 滴眼液、 软膏、 各种緩控 释制剂。绿原酸作为一种有效的中药成分，是大约 170余种中成药的定性或者 定量指标。 公开的申请号为 CN02829404.1 , 发明名称： "能作为抗白血病药 物的草药分子"的专利申请中，该发明公开了从萎叶叶提取物中或从任何其它 来源分离到的化合物绿原酸在治疗急性和慢性髓细胞性白血病和淋巴细胞性 白血病中新的用途，还提供了含有绿原酸和可药用添加剂的用于治疗急性和慢 性髓细胞性白血病和淋巴细胞性白血病的药物组合物， 它包含有效量的、从萎 叶叶的任何植物部分或任何其它天然或合成来源分离到的绿原酸 (CA)和 /或 3-0-P-香豆酰奎尼酸 (PCQ),和可药用添加剂。白血病是骨髓的粒系统细胞异常 增生而致的一种恶性肿瘤，因此，说明绿原酸可以通过抑制白细胞的过度增生， 从而对急性和慢性粒细胞性白血病即通常意义上的血癌有治疗的作用。
有些疾病， 如： 血小板减少症、 贫血、 白细胞减少症等， 与骨髓细胞功能 低下有关。增强骨髓细胞功效实质是通过对骨髓干细胞的作用，治疗或纠正血 小板减少症、 贫血、 白细胞減少症。 而在现有技术中， 尚未发现绿原酸对骨髓 功效具有影响的相关报道。 发明内容
本发明的技术方案是提供绿原酸的新用途， 具体地， 是在制备具有增加骨 髓细胞功效药物的用途。
本发明提供了绿原酸 Chlorogenic acid在制备增加骨髓细胞功效的药物中 的用途。
本发明采用的绿原酸可以是来自于天然植物提取、精制，也可采用合成方 式合成。
其中， 所述的药物是促进骨髓细胞增殖、 分化、 成熟与释放功能的药物。 进一步地，所述的药物是用于增加骨髓干细胞的药物。增加骨髓细胞功效实质 是指通过对骨髓干细胞的作用， 增加骨髓三大系统细胞的数量的作用。
进一步地， 所述的药物是用于增加骨髓造血干细胞的药物。
进一步地，上述用于增加骨髓造血干细胞的药物是用于增强造血功能，用 于白细胞减少症的药物； 更进一步地， 所述药物是治疗粒细胞减少症的药物。
或者，上述用于增加骨髓造血干细胞的药物是用于治疗血小板减少症、贫 血的药物。更进一步地，所述的贫血是失血性贫血、溶血性贫血、 巨细胞贫血、 再生障碍性贫血。
由于绿原酸可对整个骨髓细胞有促进作用 ,骨髓纤维化致整个骨髓三大系 统（红系、 粒系、 巨细胞系）的细胞减少， 出现红系的贫血， 粒系的白细胞减 少， 巨细胞系的血小板减少。
绿原酸对白细胞有正常增生作用， 是通过对正常的骨髓干细胞的促进作 用， 从而促进三大系统的骨髓细胞正常发生， 因为属于正常促进作用， 不会对 粒系统产生增生过度的作用。
贫血系各种原因致骨髓红系统增生障碍，使外周血红细胞数量和或红细胞 血红蛋白含量减少，或各种原因致外周血的红细胞破坏丟失过多，使外周血红 细胞数量和或红细胞血红蛋白含量减少而产生的疾病、 也是一种临床症状。
其中， 所述的药物是治疗骨髓纤维化的药物。
其中，所述的药物是治疗骨髓感染的药物。骨髓感染后也造成骨髓三大系 统的细胞減少， 绿原酸的作用是对整个骨髓细胞有促进作用。
其中， 所述的药物是对脾脏造血干细胞损伤有保护、修复作用的药物。 进 一步地，所述的药物是治疗脾功能亢进的药物。脾功能亢进致三大系统的细胞 在脾脏破坏加速，使细胞在外周血的周期缩短，绿原酸对整个骨髓细胞有促进 作用， 加快产出。
本发明还提供了一种具有增加骨髓细胞功效的药物組合物， 它是以有效 量的绿原酸为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药 剂。
其中， 所述的药剂中每制剂单位含有绿原酸 l-3000mg。 根据绿原酸动物 安全性试验（长期毒性试验）结果（160mg/kg )推算人用安全剂量为不大于 90mg/kg, 若人体体重按 50kg计算， 人用剂量不超过 4500mg/日。
进一步地， 所述的药剂中每制剂单位含有绿原酸 l-3000mg。
其中， 所述的药剂是口服制剂或注射剂。
经过实验， 发现绿原酸可升高白细胞； 可刺激犬骨髓细胞增生， 包括对正 常的骨髓干细胞的增加作用，并且绿原酸对 6QCo— γ射线致小鼠脾脏造血干细 胞损伤有显著地保护作用， 从而促进三大系统的骨髓细胞正常发生。
机体的造血过程是一个活跃的细胞增殖、 分化、 成熟与释放的过程。 它是 由多潜能造血干细胞的自我更新维持其数量的恒定， 并由多潜能造血干细胞 到各系定向祖细胞，再进一步增殖、 分化、 释放到外周血循环。 药物可通过影 响造血干细胞、 祖细胞的增殖分化等多种环节影响造血过程。 因此，造血祖细 胞体外培养技术的建立为本发明药物的作用提供了手段和方法。
本发明通过药效试验，对 9 月龄小鼠为实验模型并以同月龄的小鼠为对照 说明了绿原酸对其造血功能的影响。 研究结果显示小鼠 CFU-S、 CFU-GM、 CFU-E和 BFU-E的增殖分化能力和外周血 WBC数明显低于同月龄的小鼠。 而绿原酸可使小鼠降低的 CFU-S数明显增加，说明绿原酸可刺激造血干细胞 的增殖，同时绿原酸可明显促进小鼠骨髓粒单系祖细胞，早期、 晚期红系祖细 胞的增殖分化， 并可使其外周血 WBC数升高，证明绿原酸可影响小鼠造血的 整个过程，可知原酸可能调节机体内造血调控系统。通过小鼠血清集落刺激活 力的测定结果说明绿原酸可通过促进小鼠机体产生集落刺激因子来增强其祖 细胞的增殖分化。组织学的研究结果则进一步证实了绿原酸能增强小鼠的造血 功能。
由此， 绿原酸可治疗各种原因引起的贫血， 且不仅仅限于失血性贫血、 溶 血性贫血，造血不良性贫血包括巨细胞性贫血、再生障碍性贫血和脾功能亢进， 对各种原因引起的白细胞减少状态、粒细胞减少症、粒细胞缺乏症有治疗作用， 对各种原因引起的巨核系统改变如特发性血小板减少性紫癜等有治疗作用；对 各种原因引起的骨髓纤维化， 骨髓感染有一定治疗作用。
基于上述发现，绿原酸可以单独或与其他具有已知功效的药物一起采用各 种制药技术制备成各种药用剂型如但不仅仅限于口服剂型、静脉给药剂型和外 用剂型。
以下通过实验对绿原酸所具有的上述功效加以证实。应该理解的是，本发 明的实验例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本 发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。 发明的具体实施方式
以下通过具体的药效学试验证明本发明的有益效果。
【实验例 11绿原酸对小鼠物理因素所致骨髓抑制的作用
绿原酸， 含量 99.56%, 用氯化钠注射液配制成所需浓度。 阳性对照药： 重组人粒细胞集落刺激因子注射液， 300ug/支， 1.2ml/支。 SPF级 ICR小鼠， 体重 22 ~ 30g, 240只。 根据体重和性别随机分为绿原 酸高、 中、 低剂量组和阳性对照组、 模型对照组及正常对照组， 每组 40只， 雌雄各半。 除正常对照组外其余动物均用 6GCO Y射线全身照射， 照射剂量为 4Gy (剂量率为 256Gy/h, 照射时间为 2min )， 照射后各组根据表 1给予相应 的受试物（对照組和模型組给予体积的氯化钠注射液）， 每天一次， 连续给药 14天。 在给药第 4、 7、 11、 14天， 定量取尾静脉血 20ul, 将血液緩慢吹入加 有 500ul稀释液的试管内， 使血液与稀释液混匀， 用全自动血球计数仪检测 外周血象。 每次采完血后每组随机抽取 10只动物（最少不低于 8只， 尽量保 持雌雄各半）， 动物安乐死后立即取股骨作骨髓推片， 瑞氏染色， 镜下检查骨 髓象。 取骨髓的同时， 取脾脏称重并计算脾脏指数。 结果用 SPSS13.0统计软 件进行单因素方差统计分析。 脾脏指数-脾 量 .1000
体重
表 1 分组与给药剂量
Figure imgf000007_0001
原酸治疗性给药对辐照小鼠白细胞数的影响 (X 109/L)
辐照后给药
组别 辐照时 -
4d 7d lid 14d 样本数 (n) 40 40 30 20 10 模型组 9.78 ±2.31 1.48±0.77** 1.93 ±0.50** 2.66±0.77** 4.90 ± 1.09** 低剂量组 9.16±2.00 1.24±0.35** 2.14±0.59** 2.81 ± 1.16** 4.79+2.00** 中剂量组 9.87 ± 1.80 1.10±0.22** 2.08 ±0.70** 3.40± 1.37A** 5·08±1.44** 高剂量组 11.32±2.30** 1.20 + 0.33** 2.41 ± 1.00** 3.52±0.71**a 5.33 ± 1.93** 阳性对照组 9.84±3.19 1.16±0.49** 2.78±0.83**b 4.16± 1.07A**b 6.36 ±2.62 正常对照组 9.59±2.78 7·97±2·55 8.01 ± 1.67 6·64± 1·40 9.18± 1.81 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ； 与模型对照组比较： aP<0.05，bP<0.01 ;
表 3 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠血小板数的影响 （X 109/L)
辐照后给药
组别 辐照时
4d 7d l id 14d 样本数 (n) 40 40 30 20 10 模型组 931.75±201.96 1379.3 ±303.71* 456.6+ 109.98** 660.2±214.15** 912.0± 159.1** 低剂量组 999.05±258.49 1288.7±257.51* 372.5± 115.71** 507.9 ±254.29** 778.0±209.5** 中剂量组 1008.08±221.25 1252.7±318.53** 406.7± 150.35** 459.9±203.58A** 890.7±342.9* 高剂量组 959.40±339.23 1288.9±367.54** 447.9± 122.70** 661.0±261.63** 1043.1 ±478.6 阳'性对照组 1029.48 ±270.78 958.7±318.40**b 257.0 ±96.64**b 636.5 ± 169.35A** 1017.5± 168.7** 正常对照组 1010.78 ±287.54 1535.6±250.56 1349.2+255.75 1436.3 +290.95 1375.2±178.7
与正常对照组比较： *P<0.05,**PO.01 ; 与模型对照组比较： bP<0.01。
表 4 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠脾指数的影响 (g/kg) ίΜ fill 辖照后给药
4d 7d l id 14d 样本数 (n) 40 30 20 10 模型组 1.672 ±0.620** 2.965± 1·311** 3.293 ±0.892 4.489 ± 1.079 低剂量组 2.001 ±0.637** 3.352 ± 1.272* 4·015± 1.185 7.779士 2.254**b 中剂量组 2.085 + 0.723** 2.413±0駕** 4.568 ± 1.099Δ 6.940±2.368**a 高剂量组 2.452±0.738**b 3.092± 1.098** 4.690 ± 1.031 6.459 ± 1.662*a 阳性对照组 2.108±0.516** 3.308±0.830* 10.326±2.569Δ** 10.474 ±2.752**b 正常对照组 3.393 ±0.395 4.374 ±0.763 3.546±0·593 3.992± 1.315 注： "Δ"表示样本数 η = 19。
表 5 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统- -总数的影响 （％)
辐照后给药
mm
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 45.60±9.78** 44.20 + 7.55** 38.20±9.73** 43.10±5.72** 低剂量组 47.30±4.72** 45.60+5.21** 39.10±2.56** 44.30±6·22** 中剂量组 57.20±5.51** 5U0±5.40b** 43.78±6.76l!l!* 52.40 ±7.76b* 高剂量组 62.70 ± 1.57b 61.40±4.20b** 51.50±4.48b** 56.80 ±4.37b 阳性对照组 59.60 ±2.68a** 52.70±3.23b** 43.00i8.791** 47.60 ±3.44** 正常对照组 67.00±3.65 70.00 ±4.90 64.10± 11.54 59.00±5.10 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01 ; " I "
Figure imgf000008_0001
表 6 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一原始粒的影响 （％)
4：0 fill 辐照后给药
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 1.60±0.84** 2.10±0.99 1.70 ± 1.64 2.50 ±0.97 低剂量组 4.10± 1.20b* 2.40 ± 1.08 3.40± 1.35b* 1.20±0.92b** 中剂量组 2.60±0.97a 0.90 ±0.74 0.60±0.70b** 髙剂量组 3.70±0.95b 1.10±0.57 0.90 ±0.74* 1.60±0.97a* 阳性对照组 2.70±0.82a 4.60± 1.71a* 1.70 ±0.95* 正常对照组 3.10±0.74 l.S i l^S1 2.10+ 1.37 2.60 ±0.84 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01 ; " 1 " n=9。
表 7 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一早幼粒的影响 （％)
辐照后给药
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 6.40± 1.90** 4.20±2.35 4,70±0.82 5.30±0.82 低剂量组 3.90±1.20b 4.40 ±1.08 5.70 ±1.42 4.40+1.26 中剂量组 7.00±1.56** 4.40+0.97 iUS1 3.30±1.42b* 高剂量组 10.90±0.88b** 2.00 ±0.67** 4.40 ±0.97 5.40 ±2.55 阳性对照组 4.60 ±1.5 lb 7.90±1.52a* 4.33 ±2.45】 5.00 ±1.70 正常对照组 3.80 ±1.03 4.70 ±0.82 4·50±0.71 4.80 ±1.03 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01; "1" n=9。
表 8 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一中幼的影响 （％)
辐照后给药
mm
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 6.70 ±3.06 6.50±2.01** 7.80±3.22 9.10+1.10* 低剂量组 8.80±1.75a* 7.50±1.58** 7.60 ±1.95 8.80±4.39 中剂量组 8.80±1.93a* 5.30±1.42** 6.60±1.43b 髙剂量组 10.10±0.57b** 5.00±0.82a** 5.30±1.42a** 8.10 + 1.60 阳性对照组 11.70±2.36b 8.70±1.89b 6.22±2·11'* 6.30土 1.70b 正常对照组 6.70 ±1.25 9·80±1.55 8.90±2·38 6.60±1.58 与正常对照组比较 ·. *Ρ<0.05,**Ρ<0.01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01 ·, "1"
Figure imgf000009_0001
表 9 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一晚幼的影响 （％) i Oil 辐照后给药
f别
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 14.00±3.59 14.60±2.72 6.70±3.34** 8.30±2.21** 低剂量组 13.10±2.64 15.30+3.23 7.40 ±1.51** 12.50+2.92b 中剂量组 13.60±2.22 15·50±2.84 15.00±3.28lb 15.70士 3.62b** 高剂量组 17.00±2.36a 16.80±1.75 15.50±2.84b 16.80±2.30b** 阳性对照组 20.80 ±2.44b** 14.90±3.25 13.78±3.07lb 8.20 ±2.49** 正常对照组 14.90 ±1.60 15.00±2.16 14.00 ±2.94 12.10±3.04 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0,01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01; "1" n=9。
表 10 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一杆状的影响 （％)
La m 辐照后给药
¾Ε¾ϋ
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 7.60±2.01** 7.50±2.92** 7·50±3·47** 7.50±3.69** 低剂量组 6.70 ±1.77** 7.40 ±2.07** 7.20±1.62** 7.70±3.65** 中剂量组 10.10±1.91b** 10.00±1.63a** 6.75±1.75l!|:* 10.70±4.35a 高剂量组 8.40±2.07** 16.30±1.64b 10.20±1.48a** 9.90+2.47* 阳性对照组 8.90±1.91** 8.10±2.23** 7.56±3.051:t!* 10.90+2.023 正常对照组 17.50±2.07 17.50±3.34 15.30+3.92 13.60±3.89 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01; "1" n=9。
表 11 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠粒细胞系统一分叶的影响 （％)
辐照后给药
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 9.30±4.32** 9.30+2.95** 9.80±3.88** 10.20±3.85** 低剂量组 10.70 ±3.59** 8.60±2.12** 7.80± 1.14** 9.40+5.28** 中剂量组 15.10±2.64b** 15.00±2.06b** 8.33±2.061；11* 15.30i4.55 高剂量组 12.20±3.58a** 20.00 ± 1.25b 15.20±2.04b** 15.00 ±3.71 阳性对照组 10.90± 1.73** 8.50 ± 1.27** 8.89士 3.221** 15.10± 1.20a 正常对照组 20.80±2.82 20.80±2·44 19.30±4.57 18.60±3.13 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05，bP<0.01 : i " 1 "
Figure imgf000010_0001
表 12 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠红细胞系统- -总数的影响 （％) ιπιΐ 辐照后给药
¾1力
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 46.10± 10.09** 43.20 + 8.78 41.40±9.19** 36.60±8.37** 低剂量组 33.40±4.65b** 41.80±7.68** 19.00±4.67b 27.50 ±5.32 中剂量组 32.60±6.31b** 35.70±5.96** 27.22+9.39lb** 24.50 ± 3.75a 高剂量组 29.10±6.32b** 20.40 ± 4.12b 38.40±8.41** 19.60±4.14b 阳性对照组 23.60±5.52b* 23.80士 1.62b** 31.67±7.86lb** 16.30±5.95b 正常对照组 17.70±4.14 15.60±3.13 17.70±4.14 20.80 ±3.08 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05，bP<0.01 ; " 1 " n=9。
表 13 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠红细胞系统一原红的影响 （％)
辐照后给药
sa力1 j
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 3.20± 1.48** 2.50± 1·51 2.70 ± 1.64 2.00 ± 1.25 低剂量组 1.40+ 1.17b 2.10+ 1.60 1.00±0.67b 2.40 ± 1.26 中剂量组 1.90±0.99b 2·30±0.68* S^i l.Ol1** 1.30± 1.57 高剂量组 1.00±0.94b 0·70±0.68 2.00± 1.56 1.80 ± 1.03 阳性对照组 0.60±0.52b* 3.20 ±0.92** lJSi lJO1 0.30±0.48a** 正常对照组 1.80±0.79 0.90+0.99 1.80 + 0.79 1.60+0.70 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01 ; " 1 " n=9。
表 14 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠红细胞系统 早幼的影响 （％)
Oil 辐照后给药
mm
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 18.70±4.78** 16.00±3.83** 15.00±4.14 14.00±5.16 低剂量组 14.20 ±2.49b** 15.40±2.99** 8.10±2.23 10.40±2.22 中剂量组 14.20±3J4b** 11.60 ±2.76** 10.44i3.321 9.60± 1.51 高剂量组 12.70 ±4.27b** 8.50±2.07b 13.70±2.83 7.10± 1.73a 阳性对照组 10.40±2.88b* 9.40±0.84b 6.20士 2.25a 正常对照组 6.40 ± 1.90 6.90 ± 1.97 6.40 ± 1.90 8.70+2.41 与正常对照组比较： *P<0.05，**P<0.01 ; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01 ; " 1 " n=9。
表 15 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠红细胞系统一中幼的影响 （％)
辐照后给药
班别
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 6.10±1.60** 7.70± 2.63** 6.70士 1.95** 4.80±1.69** 低高中 5.50 ±1.35** 6.30 ±2.21** 2.70±1.49b 2.60±1.26b
5.40±2.46** 9.80±2.10** S.SSi iB1 2.90±1.45b fi ¾ ¾ ¾f 4.10±3.38a 2.80±1.48b* 5.90±2.77** 2.40±1.26b 阳性对照组 3.40±1.35b 2.10±0.74b** 8.33±3.64li!: U0±1.20b* 正常对照组 2.70±1.06 0.50±0.762 2.70±1.06 2.60±0.84 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01; "l" n=9。
绿原酸治疗性给药对辐照小鼠红细胞系统一晚幼的影响 （％)
Mil 辐照后给药
组力1 J
3d 7d 10d 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 18.10±4.20** 17.00 ±3.74** 17.00±3·23** 15.80±2.82** 低剂量组 12.30 ±4.24b** 18.00±4.30** 7.20±2.15b 12.10+2.60** 中剂量组 12.33±2.65lb** 12.00土 3.20* 10.33±3.87V 10.70±2.58b 高剂量组 11.30±2.11b** 8.40±1.96b 16.80±4.89** 8.30±1.42b 阳性对照组 9.20±2.00b 9.10±1.37b 11.00±3.04lb** 8.70±3.02b 正常对照组 6.80 ±2.20 7.40 ±2.22 6.80+ 2.20b 7.90±0.88 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： aP<0.05,bP<0.01; "\" n=9» 表 17 绿原酸性治疗给药对辐照小鼠淋巴的影响 （％)
辐照后给药
¾HTJU
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 8.20±3.68** 12·60±4.20 20.40 ±10.68 19.80 ±7.70 低剂量组 19.30±5.66b 12.50土 4.93 41.90±4.63b** 27.50±3.92b** 中剂量组 10.20 + 3.26* 13.20土 4.10 29.00il3.251* 22.80 ±5.45 高剂量组 8.10±6.10 18.10±2.85b* 10.10± 12.32 23.30土 5.50 阳性对照组 16.80±4.16b 22.90±4.04b** 25.33 iM.O?1 35.70±7.54b** 正常对照组 15.10±1.29 14.20 + 3.29 18.20 ±11.92 20.20 ±4.89 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： bP<0.01; " I"
Figure imgf000011_0001
表 18 绿原酸治疗性给药对辐照小鼠骨髓粒红比的影响 （％)
infill 辐照后给药
m
3d 7d lOd 14d 样本数 (n) 10 10 10 10 模型组 1.07±0.49** 1·09±0·40** 0.99±0.40** 1.24土 0.37** 低剂量组 1.43 ±0.25** 1.13±0.33** 2.16±0.53b* 1.71 ±0.54** 中剂量组 1.83±0.50a** 1.49±0.35** 1.69±0.37la** 2.23±0.61b* 髙剂量组 2.25±0.58b** 3.14±0.73b 1.41 ±0.26** 3.01±0.61b 阳性对照组 2.64±0.64b 2.21±0.18b* 3,23 ±U0b 正常对照组 4·00±1.06 4.83 ±1.98 3.82±1.33 2.92 ±0.70 与正常对照组比较： *P<0.05,**P<0.01; 与模型对照组比较： bP<0.01; "I"
Figure imgf000011_0002
表 2、 表 3结果显示造模后， 模型动物外周血白细胞和血小板明显下降， 与正常对照组比较有非常显著差异（PO.01), 治疗给药 7天后药物高、 中、 低剂量組动物的白细胞均呈明显上升趋势， 给药第 11天时高剂量组与模型对 照組比较有显著差异（P<0.05)。 表 5 ~ 18结果显示造模后，各辐照组动物的粒细胞总数均不同程度地下降， 与正常对照组比较有显著或非常显著差异（P<0.05 or P<0.01 )， 模型组动物的 杆状和分叶粒细胞均不同程度地低于正常对照组（P<0.05 or P<0.01 ), 各辐照 组动物红细胞系总数及中幼、 晚幼红细胞均高于正常对照组 （P<0.05 or P<0.01 ), 其余各分类细胞有一定的升高趋势， 粒红比均明显低于正常对照組 ( P<0.05 or P<0.01 )o 治疗给药后， 药物高、 中剂量组的粒细胞总数明显升高， 与模型对照组比较差别有非常显著意义（PO.01 ), 高、 中剂量組的晚幼、 杆 状和分叶粒细胞与模型组比较有增高趋势，且部分检测值与模型組比较有显著 或非常显著差异（P<0.05 or P<0.01 ), 高、 中、低剂量组的红细胞总数和早幼、 中幼、晚幼红细胞不同程度地低于模型组，且部分检测值与模型組比较有显著 或非常显著差异（P<0.05 or P<0.01 ), 高静静静静静口、 中、 低剂量组的粒红比均高于模型 滴滴滴服滴滴
组， 与模型组比较有显著或非常显著意义（P<0.05 or P<0.01 )。
【实验例 2】 绿原酸对犬化学因素所致骨髓抑制的作用
绿原酸，含量 99.56%, 阳性对照药：利可君片， 20mg/片，一日三次 (3片）， 注射用环磷酰胺 (简称 CY), 白色粉末， 200mg/安瓿装， 5支 /盒装。 Beagle犬, 36只 （雌雄各半）， 正常、 健康、 体重均一、 雌性未孕， 体重 6 ~ 7kg, 年龄 6 月龄。
剂量设计见表 19。
表 19 剂量设计
Π|| 动物 剂 量 给药 给药体积 相当于临床拟定
"& Μ (只） (mg/kg-d"1) 途径 ml/kg 成人日用量倍数
20 10 20
10 10 10
10 5
10 20m| 10 生理盐水 10
生理盐水 10
除正常对照组外， 其它 5 組犬静脉注射 8mg/ml 的环磷酰胺 0.8ml/kg ( 8mg/kg ), 每日一次， 连续 5天。 第 6天开始按表 19给与各受试药， 模型对 照組和正常对照组给生理盐水， 连续 13天。 在造模前、 造模后每天、 治疗后 的 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14天分别取外周血检查各动物的白细胞； 造模前 (注 射环磷酰胺)、 造模结束（注射环磷酰胺第 5天）、 治疗第 7天和第 14天， 分 别取犬侧卧弯腰， 髂骨上脊穿刺抽取骨髓， 涂片， 瑞氏染液染色。 显微镜下进 行分类计数、粒细胞、 红细胞、 巨核细胞、单核细胞系统等。计数 200个细胞。 巨核细胞全片计数总和，血小板计数 25个 (成熟有血小板形成和成熟无血小板 形成)， 结果进行统计学处理。
给药前 1次， 注射 CY每天 1次， 治疗给药第 1、 2、 3、 4、 6、 7、 9、 11 天、 15天各 1次。 取空腹犬前肢静脉血， 作外周血检测。 给药前 1次， 注射 CY6天， 治疗给药第 7、 14天各 1次。 作骨髓检测。 结果进行统计学处理。
骨髓像增生情况分 6级， 1极度活跃， 2明显活跃， 3活跃， 4减低， 5明 显減低， 6极度低下。 级级级级级级
表 20 各组动物骨髓细胞增生情况
I ~~ 动物数 （只) ~~造模前 ~造模 5天 治疗 7天 治疗 14天 大剂量组绿原酸 6 3级 2级 中剂量组绿原酸 6 级级级级级级 5例 3级、 1例 2级 3级 小剂量组绿原酸 6 3例 3级、 3例 2级 3例 3级 3例 4级 阳性药组 6 3例 3级、 3例 2级 5例 3级 1例 4级 模型对照组 6
Figure imgf000013_0001
2例 3级 3例 4级 4例 3级 1例 4级 正常对照组 6 2级 2级
表 20结果显示： 注射环磷酰胺后， 各组犬骨髓增生均减低， 绿原酸各剂 量组给药第 7天均明显可看见犬骨髓细胞增生， 其大、 中剂量组略见明显， 阳 性药组和模型组作用效果略差，模型组死亡 1只犬， 第 14天药物组恢复较好, 模型组仍有 1例处于增生低下， 正常对照組未见异常。
中性粒细胞杆状为主， 占全片总数 45 ~ 50%, 其次为中幼、 晚幼、 分叶细 胞。 偶见嗜酸粒细胞， 未见原始、 早幼粒细胞。 未见中幼和晚幼粒细胞。 红细 胞系统：以晚幼红细胞为主，约占全片计数 25 ~ 30%左右，其次为中幼红细胞， 全片镜下未见原红、 早幼红、 早巨、 中巨、 晚巨红细胞。 淋巴系统： 以成熟淋 巴细胞为主 (约占 10 ~ 12%), 未见原始和幼稚淋巴细胞。 单核系统： 各组各犬 未见有原始、 幼稚、 单核细胞。 巨核细胞： 以成熟有血小板形成为主， 成熟无 血小板形成次之， 未见幼稚巨核细胞。 其它细胞： 未见浆细胞， 未见网状、 内 皮、 吞噬、 寄生虫、 组织巨细胞、 不明细胞以及特殊细胞。 粒细胞系统与红细 胞系统之比各组间比较均无统计学差异（Ρ>0.05 )。 实验前正常骨髓细胞检查（％ X±
早早嗜嗜嗜嗜粒全成浆原嗜嗜嗜嗜原早幼淋幼成裸吞组退中中晚晚原原幼单原不中中中中网内 标 中剂量 低剂量 模型组 阳性组 正常照 幼性酸酸酸硷硷硷始始幼性性酸硷幼始稚状细织幼幼系稚始稚片始核皮噬化熟熟巨巨巨明巴
Figure imgf000014_0001
亥粒杆分杆粒粒杆红红淋晚晚分分淋细单有无细胞晚红红红红红单细细细细细中中：巨巨巨巨
状状细幼幼状细细核胞细细叶幼幼幼细细细细细红胞核核血血胞胞胞细胞胞叶叶核核巴巴¾ 0 0 0 0 0 ¾胞胞粒粒核粒粒粒粒胞粒粒粒粒胞胞胞胞胞细胞胞系细细细细胞细细小小
0 0 0 0 0 0
5.25±0.82
S ■ 5.42±0.58 5.25±0.52 5.25±0.61 4.75±0.52 5.50±0.71 包包包包包 S包.
胞 3.33±0.41 3.33±0.52 3.83±0.68 3.58±0.38 3.75±0.52 3.33±0.41 胞 50.50±1.00 50.75±0.27 50.42±0.92 50.50±0.63 50.58±0.97 50.67±0.61 胞 2.92±0.58 2.67±0.61 3.00±1.18 3.00±0.71 2.92±0.58 3.00土0.63
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
25.42±0.92 25.08±0.74 25.33±0.52 25.25±0.76 25.33±0.61 25.42±0.38 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
[： E) 2.40±0.13 2.43±0.10 2.42±0.05 2.42±0.08 2.40±0.06 2.43±0.05
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
12.58±0.58 12.75±0.61 12.17±0.41 12.50±1.05 12.67±1.17 12.08±0.49 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 总数 104.0±23.9 120.0±28.7 127.7±14.7 126.5±50.2 133.2±23.8 135.8±32.0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 形成 20.8±1.7 20.3±1.2 21.0±1.7 20.0±1.3 20.5±1.9 20.3±1.2 形成 4.2±1.7 4.7±1.2 4.0±1.7 5.0±1.3 4.5±1.9 4.7±1.2
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 CY造模 6天骨髓细胞检查（ % x±
指 标 高剂量 中剂量 低剂量 模型组 阳性组 正常照
(n=6) (n=6) (n=6) (n=6) (n=6) (n=6) 原始血细胞 0 0 0 0 0 0 原始粒细胞 0 0 0 0 0 0 早幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 中幼粒细胞 1.42±1.39 1.67±0.41 1.42±0.38 1.08±0.74 1.67±1.66 5.42±0.58 中性晚幼粒细胞 1.25±0.94 1.00±0.32 0.67±0.26 0.50±1.21 1.00±1.14 3.42±0.74 中性杆状粒细胞 25.67±10.9 24.25±5.82 24.25±1.64 21.75±2.07 22.17±1.69 49.25±0.61 中性分叶核粒细 34.08±4.85 37.25±1.92 36.42±2.11 37.25±1.33 35.83±3.59 4.75±0.61 嗜酸中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 原始红细胞 0 0 0 0 0 0 早幼红细胞 0 0 0 0 0 0 中幼红细胞 0 0 0 0 0 0 晚幼红细胞 2.50±2.21 1.71±0.98 1.25±0.76 2.08±1.24 7.92±6.21 25.08±0.80 早巨红细胞 0 0 0 0 0 0 中巨红细胞 0 0 0 0 0 0 晚巨红细胞 0 0 0 0 0 0 粒系： 红系 (M: E) 38.7±55.9 26.1±21.7 33.6±27.9 22.3±13.7 11.5±6.6 2.50±0.06 原始淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 淋巴细胞 36.33±6.89 36.42±2.01 36.0±1.87 36.75±2.34 31.33±6.15 12.08±0.58 原始单核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚单核细胞 0 0 0 0 0 0 单核 细 胞 0 0 0 0 0 0 全片巨核细胞总数 4.5±4.6 0.5±0.8 8.7±14.1 1.8±1.6 5.8±8.7 46.2±13.0 原始巨核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚巨核细胞 0 0 0 0 0 0 成熟有血小板形成 1.33±1.75 0 0 0 2.3±3.6 19.2±1.2 成熟无血小板形成 3.17±2.93 0 0 0 3.2±5.0 5.8±1.2 裸核细胞 0 0 0 0 0 0 网状细胞 0 0 0 0 0 0 内皮细胞 0 0 0 0 0 0 吞噬细胞 0 0 0 0 0 0 浆细胞 0 0 0 0 0 0 组织巨细胞 0 0 0 0 0 0 不明细胞 0 0 0 0 0 0 退化细胞 0 0 0 0 0 0 表 22结果： 除正常对照组外， 其余各组犬骨髓像增生明显受到抑制， 粒： 红比严重异常， 非造血细胞淋巴细胞增多， 粒系细胞， 红系细胞， 巨核细胞总 数减少， 未见成熟有血小板形成和成熟无血小板形成。正常骨髓像各细胞计数 平均数标准差增大，
表明注射 CY8mg/kg4天， 粒细胞系统明显受到抑制， 造模是成功的。 绿原酸治疗第 7天骨髓细胞变化
指 标 高剂量 中剂量 低剂量 模型组 阳性组 正常照
(n=6) (n=6) (ιν=6) (n=5) (n=6) 原始血细胞 0 0 0 0 0 0 原始粒细胞 0 0 0 0 0 0 早幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 中幼粒细胞 5.08±0.92 4.83±0.93 5.42±0.66 5.67±0.61 2廉 2.27 4.67±0.93 中性晚幼粒细胞 3.25±0.61 4.00±0.45 3.58±0.20 3.50±0.45 1.60±1.56 3.50±0.55 中性杆状粒细胞 50.5±0.63 50.25±0.61 50.25±0.82 50.08±0.86 34.0±14.85 50.33±0.61 中性分叶核粒细胞 3.67±1.08 3.58±0.58 3.75±0.76 3.42±0.74 24.40±19.1 3.17±0.61 嗜酸中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 原始红细胞 0 0 0 0 0 0 早幼红细胞 0 0 0 0 0 0 中幼红细胞 0 0 0 0 0 0 晚幼红细胞 24.75±0.69 25.42±0.74 25.08±0.66 25.42±0.80 10.10±13.6 25.33±0.75 早巨红细胞 0 0 0 0 0 0 中巨红细胞 0 0 0 0 0 0 晚巨红细胞 0 0 0 0 0 0 粒系： 红系 (M: E) 2.48±0.12 2.43±0.08 2.45±0.08 2.43±0.10 26.1±55.8 2.40±0.09 原始淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 淋巴细胞 12.75±1.17 11.92±0.97 12.08±1.07 11.83±0.61 27.6±13.1 13.0±0.89 原始单核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚单核细胞 0 0 0 0 0 0 单核 细 胞 0 0 0 0 0 0 全片巨核细胞总数 43.8±42.2 46.8±10.8 52.2±15.5 57.3±13.5 8.40±11.2 53.5±18.9 原始巨核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚巨核细胞 0 0 0 0 0 0 成熟有血小板形成 8.67±9.7 19.0±1.4 20.7±1.2 20.2±1.5 6.2±0.1 20.2±1.3 成熟无血小板形成 3.2±3.5 6.0±1.4 4.3±1.2 4.8±1.5 2.4±3.4 4.8±1.3 裸核细胞 0 0 0 0 0 0 网状细胞 0 0 0 0 0 0 内皮细胞 0 0 0 0 0 0 吞噬细胞 0 0 0 0 0 0 浆细胞 0 0 0 0 0 0 组织巨细胞 0 0 0 0 0 0 不明细胞 0 0 0 0 0 0 退化细胞 0 0 0 0 0 0
表 23: 治疗第 7天药物組各犬骨髓像增生基本恢复正常， 粒细胞系， 红 细胞系，淋巴细胞系， 巨核细胞总数，成熟有血小板形成和成熟无血小板形成， 镜下计数与正常对照组相差不大。 而模型对照组 2只动物增生仍低下， 非造血 细胞淋巴细胞增多， 淋系减少。 结果表明药物组犬骨髓像受 CY急性抑制， 比 模型对照组恢复快， 药物对白细胞下降有升高的作用。
表 24 绿原酸治疗结朿（14'天)骨髓细胞检查（％ 士 s ) 指 标 髙剂量 中剂量 低剂量 模型组 阳性组 正常照
(n=6) (n=6) (n=6) (n=5) (n=6) (n=6) 原始血细胞 0 0 0 0 0 0 原始粒细胞 0 0 0 0 0 0 早幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 中幼粒细胞 4.58±0.86 4.67±0.98 1.83±2.14 3.42±2.18 3.00±2.03 4.75±0.52 中性晚幼粒细胞 3.25±0.52 3.25±0.27 1.92±1.53 2.58±1.32 2.00±1.27 3.08±0.3S 中性杆状粒细胞 50.2±1.21 50.08±0.66 38.33±13.8 44.75±11.2 43.3± 11.75 48.83±0.68 中性分叶核粒细胞 3.50±1.52 3.50±1.05 18.92±16.2 9.83±14.1 12.0±13.9 3.75±0.52 嗜酸中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜酸分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷中幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷晚幼粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷杆状粒细胞 0 0 0 0 0 0 嗜硷分叶粒细胞 0 0 0 0 0 0 原始红细胞 0 0 0 0 0 0 早幼红细胞 0 0 0 0 0 0 中幼红细胞 0 0 0 0 0 0
. 晚幼红细胞 25.17±0.69 25.25±0.42 16.2±8.73 22.00±6.40 19.90±5.85 ： 24.33±0.61 早巨红细胞 0 0 0 0 0 0 中巨红细胞 0 0 0 0 0 0 晚巨红细胞 0 0 0 0 0 0 粒系： 红系 (M: E) 2.40±0.09 2.38±0.08 3.15±1.24 2.42±0.15 2.90±0.93 2.43±0.05 原始淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚淋巴细胞 0 0 0 0 0 0 淋巴细胞 13.33±1.33 13.25±1.13 22.83±10.06 17.50±6.60 19.20±6.66 15.3±0.94 原始单核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚单核细胞 0 0 0 0 0 0 单 核 细 胞 0 0 0 0 0 0 全片巨核细胞总数 11.3±1.3 12.7±9.1 3.2士6.0 1.83±2.7 2.8±2.0 2.5±1.1 原始巨核细胞 0 0 0 0 0 0 幼稚巨核细胞 0 0 0 0 0 0 成熟有血小板形成 5.50±8.6 7.3±8.2 1.7±4.1 0 0 0 成熟无血小板形成 2.3±3.6 3.8±4.5 1.0±2.5 0 0 0 裸核细胞 0 0 0 0 0 0 网状细胞 0 0 0 0 0 0 内皮细胞 0 0 0 0 0 0 吞噬细胞 0 0 0 0 0 0 浆细胞 0 0 0 0 0 0 组织巨细胞 0 0 0 0 0 0 不明细胞 0 0 0 0 0 0 退化细胞 0 0 0 0 0 0 治疗第 14天， 低剂量组 2只犬， 模型组 1只犬骨髓象增生低下， 非造血 细胞淋巴细胞增多， 粒系细胞， 红细胞系统减少， 骨髓增生未能恢复， 其余各 犬骨髓细胞增生活跃， 恢复正常。 造模后 (i.vCY)动物白细胞明显下降，与对照组和自身造模前有非常显著性 差异（PO.01 ), 治疗 6天后药物组和对照组白细胞均升高， 但組间比较无明 显差异 (P>0.05)。 结果见表 25、 26。
表 25 不同时间各组动物的白细胞 (X107L ± S) 指 标 大 剂 量 中 剂 量 小剂量 (n=6) 阳性对照 模型对照 空 白 对照
(n=6) (n=6) (n=6) (n=6) (n=6)
造模前正常 11.98±3.39 16.70±2.96 16.92±4.09 12.95±1.73 13.03±2.57 17.93±3.89 造模第一天 10.95±2.28 15.93±3.22 11.37±2.60 12.08±2.10 11.58±3.27 17.55±2.72 造模第二天 8.13±0.89 9.18±2.58 13.85±8.54 8.25±1.55 6.90±1.77 17.57±4.59 造模第三天 7.12±0.40 7.97±1.66 8.73±3.32 9.08±2.92 6.53±0.41 15.73±3.25 造模第四天 5.18±1.19 6.03±1.40 8.20±3.23 6.55±1.40 5.05±0.97 13.32±2.43 造模第五天 3.97±1.21 4.95±2.42 5.25±2.53 5.33±2.67 4.30±1.44 13.22±2.10 治疗第二天 2.75±2.22 3.05±1.96 4.25±1.93 2.43±0.44 2.48±0.65 14.70±1.20 治疗第四天 1.35±0.67 1.13±0.66 1.62±1.01 1.82±0.85 1.30±0.44 13.42±1.31 治疗第六天 3.80±1.55 4.98±0.79 6.33±1.68 7.65±5.43 7.48±4.45 14.57±2.16 治疗第八天 5.93±3.19 5.65±2.06 12.73±2.88 6.88±0.22 7.18±5.36 16.78±2.48 治疗第十天 5.03±1.68 8.50±4.26 13.52±3.14 8.10±2.48 7.88±6.33 12.80±2.55 治疗第十二天 9.82±0.82 12.13±5.60 12.57±4.55 9.45±9.18 10.24±3.78 13.90±1.84 治疗第十四天 12.27±5.99 13.93±1.59 12.47±5.25 11.58±4.16 10.98±2.97 12.37±1.63
5 注： 第 6天起模型组动物数为 5只
表 26 治疗后动物白细胞的变化率 (治疗后-造模第 5天) /造模第 5天 （％， ± s) 指 标 大剂量 (n=6) 中剂量 (n=6) 小剂量 (n=6) 阳性对照 模型对照 对照 (n=6)
(n=6) (n=6)
造模第五天 3.97±1.21 4.95±2.42 5.25±2.53 5.33±2.67 4.30±1.44 13.22±2.10 治疗第二天 -39.30±38.57 -30.57±22.87 -28.52±32.49 -35.58±15.14 -36.20±19.27 15.99±5.95 治疗第四天 -66.31±10.40 -76.22±16.35 -72.57±9.11 -61.52±19.07 -58.02±29.53 3.68±15.10 治疗第六天 -3.75±21.81 58.50±121.6 28.47±51.84 28.07±47.26 56.71±52.37 12.52±9.98 治疗第八天 49.07±55.12 168.10±331.4 111.11±133.7 50.51±51.81 102.48± 195.2 36.43±15.83 治疗第十天 35.55±55.09 232.49±319.6 135.25±143.2 57.14±72.32 126.14±221.6 -1.40± 17.71 治疗第十二天 173.16±102.9 247.33±217.3 143.20±85.92 52.36±48.73 99.43±98.41 10.63±8.29 治疗第十四天 256.42±264.7 245.07±138.4 123.71±112.0 134.51±56.70 134.26± 114.7 2.28±12.82
. 注： 第 6天起模型组动物数为 5只
表 25、 26结果表明， 注射 CY使白细胞计数（WBC )下降， 药物治疗后 使下降的 WBC计数明显升高， 三个受试药组均显示药物有升高作用， 大剂量0 组在第 12天后， 中剂量组在第 8天后略显明显， 阳性对照组与模型组不明显。
正常对照组在正常值范围内波动。
由此可见， 绿原酸对无论是物理还是化学因素所致的骨髓抑制， 均有明显 促进骨髓细胞增生的作用。
【实验例 3】绿原酸对 60Co— γ射线致小鼠脾脏造血干细胞损伤的保护作用5 1、 实验方法
取健康 C57小鼠 60只， 依性别体重随机分成 5组。 按分组分别给药， 阴性 组各鼠腹腔注射生理盐水 0.4ml/20g体重， 阳性组（粒细胞集落刺激因子）各 鼠腹腔注射给予 0.4ml/20g体重（2ug/kg), 其余三组分别以 0.1%、 0.05%和 0.025%的绿原酸药液给各组各鼠腹腔注射 0.4ml/20g体重（剂量 20、 10 和 5mg/kg)。 以上 5组各鼠均每日给药一次， 连续 7日， 第 7日称存活动物体重， 末次给药后 1小时。各组小鼠全身一次照射后第 9天颈推脱臼处死，取出脾脏， 除去粘连的脂肪， 然后置于 Bouins液中固定 3min, 用放大镜观察并进行内源 性脾结节计数 ( CFU-S )，骨髓单个核细胞计数 ( BMNC )。 组间比较显著差异。
2、 实验结果
表 27 绿原酸对 6°Co— y射线致小鼠脾脏造血干细胞损伤的保护作用
L (mg/kg) 动物数 （只） CFU-S
组 别 剂遷
(10'Vspleen)
模型对照组 12 23.6±1·7 21±3.51 阳性组 0.025 12 78.2+12.2*** 88.6 + 12.9*** 绿原酸 20 12 82. 8+5.3*** 89.8±13;7*** 绿原酸 10 12 72.4±12.6** 69.2 ±6.8** 绿原酸 5 12 53.10±8.2* 51.2±U.2* 与模型对照组比较 *** P<0.001 ** P<0.01 * P<0.05
3、 结论
表 27的结果表明，绿原酸 20、 10和 5mg/kg给小鼠腹腔注射，每日一次， 连续 7日， 对 6°Co- γ射线致小鼠脾脏造血干细胞损伤有较强的保护作用。 【实验例 4】绿原酸对小鼠造血功能的影响
1、 实验方法
骨髓细胞 (BMC)的制备 将 C57动物安乐死后， 酒精消毒， 无菌剥取一侧 股骨， 用 RPMI-1640液通过 6号针头反复冲洗骨髓腔数次，再将冲出的骨髓细 胞液通过 4号针头制备成单细胞悬液。
小鼠骨髓造血干细胞 (CFU-S)的测定 C57小鼠， 无菌制备 BMC 悬液，计 数有核细胞后配成每亳升 5 X 104个细胞， 给经 8.0Gy60Go照射后小鼠尾静脉 输注 0.2 ml 细胞悬液， 第 9天安乐死受体鼠，取脾用 Bouin液固定 24h后计数 表面结节数。
骨髓粒单系祖细胞 (CFU-GM) 的测定 将定量 (1 X 105 ) 的骨髓细胞悬 液加马血清与 RPMI- 1640培养液在 37°C水浴中保温 10~20min,加入 30g/L 琼脂后混匀，转入含有 0.2ml 鼠肺条件刺激液的琼脂培养 中，于 37°C,0.05% C02饱和湿度的培养箱中培养 5 ~ 7天， 置低倍镜下计数含 50个细胞以上的集 落 (CFU-GM)数。
骨髓早期、 晚期红系祖细胞 (BFU-E、 CFUE)的测定 将培养体系配成终 浓度为 10%骨髓细胞悬液 (5 x 104 ml),200g L马血清 ,100g/L小牛血清白蛋白， 1 X 10-5 mol L二巯基乙醇、 10%爆式集落促进活性 (BPA)， 0.8%甲基纤维素及每 亳升 1 U EPO等充分混合后，加 10 μ ΐ至微孔塑料培养板中，置培养箱中培养 3 天，用联苯胺染色后在倒置显微镜下计数 8个以上染色阳性细胞集落计为红系 集落形成单位 (CFU-E)，培养 8天计数含 50个以上联苯胺染色阳性细胞集落为 爆式红系集落形成单位 (BFU-E)。
小鼠外周血象的测定 小鼠尾静脉采血， Coulter血细胞计数仪计数。 小鼠骨髓组织学观察 安乐死小鼠取完整左侧股骨，入 Hellyps液固定， 石蜡包埋切片 , HE 染色， 光镜下观察组织学变化。
2、 实验结果
( 1 )绿原酸小鼠骨髓造血干细胞的影响
将 C57 小鼠随机分为 3 組： 1组为 C57对照組，2、 3 组为绿原酸 10, 20m g/kg/天 x 8 天，静脉注射。 另取同月龄 C57对照組，每天给予生理盐水。 9 天 安乐死各组小鼠， 制备 BMC悬液，按前述方法输注给受体鼠。 9天安乐死取脾 固定观察结果， 结果显示模型对照组 C57 小鼠 CFU-S数 9.583 ± 1.084 ( n = 12)。 与给予绿原酸后 C57 小鼠相比较 CFU-S数明显减少， 予绿原酸后 C57 小鼠 CFU-S数分别为 20.667 ± 2.103 和 23.250 ± 2.379结果提示绿原酸对 C57小鼠 骨髓造血干细胞的增殖分化有一定刺激作用。
表 28 绿原酸对 60Co— γ射线致小鼠脾脏造血干细胞损伤的 CFU-S
Ί (mg/kg) 动物数 （只） CFU-S
组 别 Λ
模型对照组 12 9. 583 ± 1. 084 绿原酸 20 12 20. 667 ±2. 103** 绿原酸 10 12 23. 250 ±2. 379** 与模型对照组比较 *** P<0. 001 ** P<0. 01 * P<0. 05
( 2 )绿原酸对小鼠骨髓造血祖细胞增殖的影响
动物分组， 给药与前相同， 于给药第 9天安乐死小鼠， 无菌制备 BMC悬液 按前述方法进行实验。 结果表明 C57 小鼠骨髓造血祖细胞的增殖能力明显低 于 C57小鼠，二者之间有明显差异。而绿原酸则可使 C57小鼠的粒单系造血祖细 胞，早期及晚期红系祖细胞的增殖能力均明显增。 表 29 绿原酸对小鼠骨髓造血祖细胞增殖 CFU - E
组 另^] 齐量 (mg/kg) 动物数 （只） CFU-E 模型对照组 12 59. 000±7. 520 绿原酸 20 12 102. 167± 5. 149** 绿原酸 10 12 104. 750± 6. 917** 与模型对照组比较 *** P<0. 001 ** P<0. 01 * p<0. 05 表 30 绿原酸对小鼠骨髓造血祖细胞增殖 BFU - E 组 别 剂量 （mg/kg) 动物数 （只） BFU-E 模型对照组 12 37. 167± 5. 797 绿原酸 20 12 81. 833 ± 5. 306** 绿原酸 10 12 85. 250± 7. 569** 与模型对照组比较 *** P<0. 001 ** P<0. 01 * P<0. 05
( 3) 绿原酸对小鼠外周血象的影响 表 31 绿原酸对小鼠外周血象 WBC
组 别 剂量 （mg/kg) 动物数 （只） WBC
( 108个）
模型对照组 12 1. 533±0. 331 绿原酸 20 12 6. 625 ±0. 669** 绿原酸 10 12 7. 025 ±0. 703** 与模型对照组比较 *** P<0. 001 ** P<0. 01 * P<0. 05
结果表明 C57小鼠外周血象中，其 WBC数明显低于同月龄小鼠。 绿原酸
10,20mg/kg则可明显使其 TOC数增加。
( 4 )绿原酸对小鼠血清 CSA的影响
将各组小鼠分别心脏采血，静止离心制备血清，以血清取代肺条件刺激液 (CSF-GM), 观察其对 CFU-GM增殖的影响， 以 CFU-GM 的产率代表 CSA。 结 果证明 C57 小鼠血清的 CFU-GM的产率 77.333士 6.706明显低于给予绿原酸后 C57 小鼠 CFU-GM 173.000 ± 14.283 和 201.833 ± 18.065 (n=12,P <0.01)。 而给 予绿原酸后 10, 20 mg/kg C57 小鼠的 CFU-GM明显增加 (CFU-GM分别为 173.000 ± 14.283 和 201.833 ± 18.065)与 C57組相比有显著差异，提示绿原酸 可明显增强 C57 小鼠体内的 CSA,促进 C57 小鼠骨髓造血祖细胞的增殖分化。
表 32 绿原酸对小鼠骨髓造血祖细胞增殖 CFU-GM
剂量 (mg/kg) 动物数 （只） CFU-GM
组 别
模型对照组 12 77. 333±6. 706 绿原酸 20 12 173. 000± 14. 283** 绿原酸 10 12 201. 833± 18. 065** 与模型对照组比较 *** P<0. 001 ** P<0. 01 * P<0. 05 ( 5 )绿原酸对小鼠骨髓组织学的影响
组织学研究结果显示小鼠骨髓腔内造血祖细胞丰富，各系细胞均可见到， 并且形态良好，增殖旺盛，血窦较多。 而同月龄 C57 小鼠骨髓腔内造血细胞明 显减少，增生不活跃，以中晚幼粒细胞为主，甚至局部缺少造血细胞，纤维结締 组织增生，血窦较少。给予绿原酸后的 C57小鼠与未用药 C57小鼠相比其骨髓腔 内造血细胞明显增多，增生活跃，血窦较多，但较 C57小鼠骨髓造血细胞及血 窦为少。 这一结果说明绿原酸可明显改善 C57小鼠骨髓造血功能。
以下通过具体实施例说明绿原酸在本发明的新用途下，可制备成药学上常 规的制剂， 但绿原酸的用量并不仅仅限于所述的实施例的范围内。
实施例 1 制备氯化钠 0.9%的静脉注射用注射液 处方一：
纯度大于 95%的绿原酸 lg
枸橼酸 l.Og
枸橼酸钠 0.5g
氯化钠 18g
注射用水 2000ml
按注射剂的常规操作共制成 2 ml的注射剂 1000支，每支含绿 原酸 1毫克
处方二：
纯度大于 95%的绿原酸 3000g
氯化钠 2250g
注射用水 2000， 000ml
按注射剂的常规操作共制成 1000 ml的注射剂 1000瓶，每瓶含绿原 酸 3克
防止绿原酸水解的稳定剂： 如环糊精包合物、表面活性剂（阴离子表面活 性剂、 阳离子表面活性剂、 两性离子表面活性剂、 非离子表面活性剂）
抗氧化剂： 亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、 焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、 半胱氨酸。
生理可用的 pH值调节剂： 柠檬酸、 富马酸、 谷氨酸、 L-天冬氨酸、 乳酸、 乳糖酸、 半乳糖醛酸、 葡萄糖醛酸、 抗坏血酸、 盐酸、 醋酸。
实施例 2含氯化钠的无菌粉针剂
处方一：
纯度大于 95%的绿原酸无菌粉 lg
氯化钠无菌粉 18g 按无茵粉针剂的常规操作共制成 2ml粉针剂 1000支， 每支含绿原 酸 1亳克
处方二：
纯度大于 95%的绿原酸无菌粉 3000g
按无菌粉针剂的常规操作共制成 5ml粉针剂 1000支， 每支含绿原 酸 3克
将实施例 1 各配方产品经冻干设备冷冻干燥制得绿原酸氯化钠的无菌冻 干粉针剂。
实施例 3 绿原酸的 5%葡萄糖静脉注射用注射液及滴眼剂： 处方一：
Figure imgf000023_0001
处方二:
绿原酸（纯度大于 95% ) 1500g
葡萄糖 1000g
注射用水 20000ml
按注射剂的常规操作共制成 20 ml的注射剂 1000支，每支含绿原酸 1.5克
处方三：
绿原酸 （纯度大于 95% ) 3000g
葡萄糖 100g
注射用水 1000ml
按注射剂的常规操作共制成 1000 ml的注射剂 1000瓶，每瓶含绿原 酸 3克
绿原酸的纯度大于 95%。
防止绿原酸水解的稳定剂： 如环糊精包合物、表面活性剂（阴离子表面活 性剂、 阳离子表面活性剂、 两性离子表面活性剂、 非离子表面活性剂）
抗氧化剂： 亚 υ酸钠、亚 υ酸氢钠、 焦亚充酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、 半胱氨酸。
生理可用的 ρΗ值调节剂： 柠檬酸、 富马酸、 谷氨酸、 L-天冬氨酸、 乳酸、 乳糖酸、 半乳糖醛酸、 葡萄糖醛酸、 抗坏血酸、 盐酸、 醋酸。 实施例 4 绿原酸片剂：
处方一：
绿原酸（纯度大于 95% ) l.OOg
填 L润绿填黏充剂 180.00g
崩解合滑原充剂 lO.OOg
黏合剂酸剂剂剂 6.00g
润滑剂 3.00g
共计 200.00g
按片剂常规方法制备，共制成 1000片，每片含绿原酸 lmg。
处方二：
绿原酸（纯度大于 95% ) 100.00g
填充剂 170.00g
崩解剂 15.00g
黏合剂 10.00g
润滑剂 5.00g
共计 3Q0.00g
按片剂常规方法制备， 共制成 1000 片， 每片含绿原酸
lOOmgo
处方三：
绿原酸（纯度大于 95% ) 300.00g
填充剂 155.00g
崩解剂 20.00g
黏合剂 15.00g
润滑剂 10.00g
共计 500.00g
按片剂常规方法制备， 共制成 1000 片， 每片含绿原酸
300mgo
绿原酸的纯度大于 95%。
填充剂： 如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、 乳糖、 葡萄糖、微晶纤维素、 碳酸钙、 硫酸钙、 碳酸氢钙。
黏合剂： 如羟丙曱纤维素、 聚维酮、 淀粉浆、 糊精浆、 糖浆、 胶浆、 海藻 酸钠、 聚乙二醇、 桃胶、 阿拉伯胶。
崩解剂：如交联羧曱基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲淀粉钠、羟丙基淀粉、 低取代羟丙基纤维素、 柠檬酸、 酒石酸、 酸酐、 碳酸氢钠、 碳酸钠。
润滑剂： 如硬脂酸镁、 滑石粉、 微粉硅胶、 液体石蜡、 聚乙二醇。
实施例 5 绿原酸胶彙剂：
(纯度大于 95% ) l.OOg
184.00g
5.00g
lO.OOg 共计 200.00g
按胶囊剂常规方法制备， 共制成 1000粒胶囊 每粒胶囊含
绿原酸 lmg。
填黏润共
合充滑计
齐齐齐
Figure imgf000025_0001
绿原酸 100mg。 处方三: 绿原酸 （纯度大于 95 % ) 300.00g
85.00g
5.00g
10.00g
400. OOg
按胶囊剂常规方法制备， 共制成 1000粒囊， 每粒胶囊含绿
原酸 300mg。 绿原酸的纯度大于 95%。
填充剂： 如淀粉、 糊精、糖粉、预胶化淀粉、 乳糖、 葡萄糖、微晶纤维素、 碳酸钙、 硫酸钙、 碳酸氢钙。
黏合剂： 如羟丙甲纤维素、 聚维酮、 淀粉浆、 糊精浆、 糖浆、 胶浆、 海藻 酸钠、 聚乙二醇、 桃胶、 阿拉伯胶。
润滑剂： 如硬脂酸镁、 滑石粉、 微粉硅胶、 液体石蜡、 聚乙二醇。 工业应用性
本发明不仅提供了绿原酸在制备增加骨髓细胞功效的药物中的新用途。还 提供了以绿原酸为活性成分的药物制剂。 由于绿原酸多来源于天然植物，成本 低廉， 毒性极低， 且可以改善机体的整体机能， 因此， 以绿原酸为活性成分的 制剂特别适于各种贫血、 脾功能亢进、 骨髓感染等需要长期治疗用药的疾病， 其价廉、 安全、 疗效显著为临床提供了新的用药选择。

Claims

权利要求书
1、 綠原酸 Chlorogenic acid在制备增加骨髓细胞功效的药物中的用途。
2、 根据权利要求 1所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是促进骨髓细 胞增殖、 分化、 成熟与释放功能的药物。
3、 根据权利要求 2所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是用于增加骨 髓干细胞的药物。
4、 根据权利要求 3所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是用于增加骨 髓造血干细胞的药物。
5根据权利要求 4所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是用于增强造血 功能； 用于治疗白细胞减少症的药物。
6、 根据权利要求 5所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是用于增强造 血功能； 用于治疗粒细胞减少症的药物。
7、 根据权利要求 4所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是用于治疗血 小板减少症、 贫血的药物。
.
8、根据权利要求 7所述的用途， 其特征在于： 所述的贫血是失血性贫血、 溶血性贫血、 巨细胞贫血、 再生障碍性贫血。
9、 根据权利要求 1所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是治疗骨髓纤 维化的药物。
10、根据权利要求 1所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是治疗骨髓感 染的药物。
11、根据权利要求 1所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是对脾脏造血 干细胞损伤有保护、 修复作用的药物。
12、 根据权利要求 11所述的用途， 其特征在于： 所述的药物是治疗脾功 能亢进的药物。
13、一种具有增加骨髓细胞功效的药物组合物， 它是以有效量的绿原酸为 活性成分， 加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
14、 根据权利要求 13所述的药物组合物， 其特征在于： 所述的药剂中每 制剂单位含有绿原酸 l-3000mg。
15、 根据权利要求 13 - 14任意一项所述的药物组合物， 其特征在于： 所 述的药剂是口服制剂、 注射剂。
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