WO2006092893A1

WO2006092893A1 - 消化管運動促進化合物

Info

Publication number: WO2006092893A1
Application number: PCT/JP2005/021991
Authority: WO
Inventors: Yoshihide Suwa; Haruo Nukaya
Original assignee: Suntory Limited
Priority date: 2005-03-02
Filing date: 2005-11-30
Publication date: 2006-09-08

Description

明細書

消化管運動促進化合物

技術分野

[0001] 本発明は、新規な消化管運動促進化合物に関する。

背景技術

[0002] 近年、コリン作動性神経系（副交感神経の節前節後線維、交感神経の節前線維、運動神経)を介する調節機構についての研究が進んでいる。コリン作動性神経は、その終末よりアセチルコリン (神経伝達物質)を放出し、そのアセチルコリンが標的となる細胞の細胞膜上に存在するアセチルコリン受容体に結合することにより種々の生理学的反応が仲介される。アセチルコリン受容体は、ニコチン受容体とムスカリン受容体とに分類分けされており、ムスカリン受容体についてはさらに 5つのサブタイプ（ M〜M )が存在することが明らかとなっている。

1 5

[0003] 特に、ムスカリン受容体の 5つのサブタイプの中で、薬理学的に重要な働きをすると考えられている M〜M受容体に関する研究が精力的に進められている。

1 3

例えば、ムスカリン M受容体は、主に神経節や中枢神経系（大脳、海馬など)及び

1

胃粘膜に存在し、脳における学習、記憶機能や、胃における胃酸分泌の調節に関与している。ムスカリン M受容体は、主に心臓、脳幹、小脳、シナプス前部など、特に

2

心筋（心房）に存在しており、心筋収縮の制御に関与している。ムスカリン M受容体

3 は、気道、膀胱及び小腸等の平滑筋や唾液腺等に存在し、平滑筋収縮や唾液分泌促進に関与している。

[0004] また一方で、ビール中に含まれるホルダチン（Hordatine) A及びそのシス体は、ムスカリン M受容体への結合活性を有しており、消化管平滑筋を収縮させて消化管運

3

動を促進させることによりビールのドリンカピリティー（ビールを大量に飲んでもまだおいしく飲める性質)を向上させたり、あるいは消化管運動機能異常が原因で発症する様々な消ィ匕器系疾患（胃アトニー症、神経性消化不良、胃神経症など）を改善し得ることが報告されて、る (特許文献 1参照)。

特許文献 1： PCT WO2004/002978 A1 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0005] 上記特許文献 1に記載されてヽるホルダチン A及びそのシス体は、麦芽 (特に麦芽根）中に多く含まれている。これらは、麦芽根について各種抽出分離操作を実施することによって単離可能であり、図 14に示されるように、その化学構造についても特定されている。尚、前記ホルダチン A及びそのシス体に代表される図 14に示すィ匕学構造を有する化合物類を「ベンゾフランカルボキシアミド誘導体」と称する。

[0006] 図 14からも分力るように、前記べンゾフランカルボキシアミド誘導体は、 2個の不斉炭素を有している。従って、 4種類の異性体 (シス体及びトランス体の各幾何異性体につ、てそれぞれの一対の鏡像異性体 (ェナンチォマー） )が存在し得ると考えられる。し力しながら、麦芽根より単離された天然体については、ホルダチン A及びそのシス体という、 2種類の異性体 (前記各幾何異性体 (シス体及びトランス体）におけるそれぞれ片方のェナンチォマー）しか言及されておらず、残り 2種類の異性体 (以下、非天然体のェナンチォマー（シス体及びトランス体）と称する）については言及されていない。

[0007] また、上述したムスカリン受容体は、生体内リガンドであるアセチルコリンの構造からも予想されるように、そのリガンド認識部位が非常に小さぐ尚且つそのサブタイプ間（M〜M )での相同性 (ホモロジ一)も高い。従って、サブタイプ選択的（例えば、

1 5

ムスカリン M受容体にのみ）に作用し得るァゴ-スト (もしくはアンタゴニスト）の開発

3

は非常に困難であると言われている。それ故、入手可能な選択的ァゴ-スト (もしくはアンタゴニスト）が非常に少ない。

[0008] 本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであって、天然物から入手することが困難であるムスカリン M受容体への結合活性を有する化合物であって、尚且つ、天然

3

体よりも高いムスカリン M受容体への結合活性を有し、且つ医薬品等の開発にも有

3

用な化合物を提供するものである。

課題を解決するための手段

[0009] (構成 1)

本発明に係る化合物の第 1特徴構成は、以下の構造式 (I)： [化 1]

で示される点にある。

[0010] 本発明の第 1特徴構成に記載の化合物は、ビール (麦芽根等)から抽出された既知の化合物（PCT WO2004/002978 A1における活性物質 α；ホルダチン Αのシス体 )の鏡像異性体 (非天然体のェナンチォマー (シス体) )である。本発明の化合物は、入手が容易で安価な原料力大量に合成することも可能であり、そのため麦芽根等の天然物力抽出する場合と比べて、安価で純度も高ぐ品質も安定したものを供給することが可能となる。

[0011] ここで、本発明の化合物は、天然物力入手することが困難なホルダチン Aのシス体の鏡像異性体である。本発明者らによって、上記天然体 (ホルダチン Aのシス体）の有するムスカリン M受容体への結合活性よりも約 7倍高い結合活性を、本発明の

3

化合物が有することが見出されている。

[0012] ムスカリン受容体は、そのサブタイプ間（M〜M )での相同性（ホモロジ一）が高い

1 5

等の理由で、サブタイプ選択的（例えば、ムスカリン M受容体にのみ）に作用し得る

3

ァゴ-スト (もしくはアンタゴ-スト）の開発は非常に困難であると言われている。

し力しながら、本発明の化合物は、上述した発明者らの知見により、ムスカリン M

3 受容体に対する結合選択性が天然体と比べて非常に高くなつている可能性がある。従って、本発明の化合物は、ムスカリン M受容体が関与していると考えられる気道、

3

膀胱及び小腸等の平滑筋収縮や唾液腺の唾液分泌に対して、天然体の有する薬理効果よりもはるかに高い薬理効果を有するァゴ-ストであることが期待される。 [0013] つまり、本発明の化合物は天然体と比べて非常に高い消化管運動促進作用を有することが期待されるので、ビールのドリンカピリティーをより向上させることが可能であり、またあるいは消化管運動機能異常が原因で発症する様々な消化器系疾患（胃アト-一症、神経性消化不良、胃神経症など）を、より効果的に改善し得ることが期待され、その際、他のムスカリン受容体に非選択的に結合することによって引き起こされ得る種々の副作用も少な、有効な治療薬になり得ると考えられる。

[0014] あるいは、生体を構成している分子には、両鏡像異性体の一方のみが有効に機能して、ることが多く、他方の鏡像異性体は逆の作用を引き起こしてしまうこともある。よって、本発明の化合物は、天然体と比べて非常に高いムスカリン M受容体結合活

3

性を有するが、薬理作用としてはアンタゴ-ストとして機能し得る場合も考えられる。この場合、本発明の化合物は、ムスカリン M受容体選択的拮抗剤として働き、ァセチ

3

ルコリンを介した平滑筋収縮を抑制することで、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、頻尿、尿失禁、過敏性腸症候群などに対する治療薬として有効であると考えられ、さらに、前述のァゴニストと同様に、他のムスカリン受容体に非選択的に結合することによって引き起こされ得る種々の副作用の少ない有効な治療薬になり得ると考えられる。

[0015] このように、本発明の化合物を使用することにより、ムスカリン M受容体に選択的

3

に結合し得るァゴ-スト (もしくはアンタゴニスト）としてさらなる薬理効果を有し得る様々な誘導体を合成することも可能である。さらに、これまでは、入手可能な選択的ァゴニスト (もしくはアンタゴ-スト）が少なかったので、ムスカリン受容体との結合動態に関するデータも少な力つた力それらの様々な誘導体とムスカリン M受容体との結合

3

動態の解析力も多数の有用なデータ (例えば、誘導体のどの部分が、ムスカリン M

3 受容体と選択的に結合するうえで重要であるかなど)を入手することが可能となり、他のムスカリン受容体へ選択的に結合し得る化合物（ァゴ二ストもしくはアンタゴニスト）を合成する際に有用な情報を得ることも可能となる。

[0016] (構成 2)

本発明に係る化合物の第 2特徴構成は、以下の構造式 (Π)：

[化 2]

で示される点にある。

[0017] 本発明の第 2特徴構成に記載の本発明の化合物は、ビール (麦芽根等)から抽出された既知の化合物（PCT WO2004/002978 A1における活性物質 j8；ホルダチン A )の鏡像異性体 (非天然体のェナンチォマー（トランス体) )である。本発明の化合物は、入手が容易で安価な原料力大量に合成することも可能であり、そのため麦芽根等の天然物力抽出する場合と比べて、安価で純度も高ぐ品質も安定したものを供給することが可能となる。

[0018] ここで、本発明の化合物は、天然物力入手することが困難な鏡像異性体である。そして、本発明者らによって、上記天然体 (ホルダチン A)の有するムスカリン M受

3 容体への結合活性よりも約 20倍高い結合活性を、本発明の化合物が有することが見出されている。

[0019] ムスカリン受容体は、そのサブタイプ間（M〜M )での相同性（ホモロジ一）が高い

1 5

3

ァゴ-スト (もしくはアンタゴ-スト）の開発は非常に困難であると言われている。し力しながら、本発明の化合物は、上述した発明者らの知見により、ムスカリン M受

3 容体に対する結合選択性が天然体と比べて非常に高くなつている可能性がある。従つて、本発明の化合物は、ムスカリン M受容体が関与していると考えられる気道、膀

3

胱及び小腸等の平滑筋収縮や唾液腺の唾液分泌に対して、天然体の有する薬理効果よりもはるかに高い薬理効果を有するァゴ-ストであることが期待される。 [0020] つまり、天然体と比べて非常に高い消化管運動促進作用を有することが期待されるので、ビールのドリンカピリティーをより向上させることが可能であり、またあるいは消化管運動機能異常が原因で発症する様々な消化器系疾患（胃アトニー症、神経性消化不良、胃神経症など)を、より効果的に改善し得ることが期待され、その際、他のムスカリン受容体に非選択的に結合することによって引き起こされ得る種々の副作用も少な、有効な治療薬になり得ると考えられる。

[0021] あるいは、生体を構成している分子には、両鏡像異性体の一方のみが有効に機能して、ることが多く、他方の鏡像異性体は逆の作用を引き起こしてしまうこともある。よって、本発明の化合物は、天然体と比べて非常に高いムスカリン M受容体結合活

3

[0022] このように、本発明の化合物を使用することにより、ムスカリン M受容体に選択的に

3

結合し得るァゴニスト (もしくはアンタゴ-スト）としてさらなる薬理効果を有し得る様々な誘導体を合成することも可能である。さらに、これまでは、入手可能な選択的ァゴ- スト (もしくはアンタゴ-スト）が少なかったので、ムスカリン受容体との結合動態に関するデータも少な力つた力それらの様々な誘導体とムスカリン M受容体との結合動

3

態の解析力も多数の有用なデータ (例えば、誘導体のどの部分が、ムスカリン M受

3 容体と選択的に結合するうえで重要であるかなど)を入手することが可能となり、他のムスカリン受容体へ選択的に結合し得る化合物（ァゴ二ストもしくはアンタゴ-スト）を合成する際に有用な情報を得ることも可能となる。

[0023] (構成 3)

本発明に係る経口組成物の第 1特徴構成は、前記化合物を含有する点にある。

[0024] 前記化合物は、経口吸収性がある。そのため、経口組成物として、例えば、飲食品、医薬品、飲食物添加物、あるいは動物用飼料といった形態で用いることで、前記化合物が生理活性を発揮できる。

[0025] (構成 4)

本発明に係る経口組成物の第 2特徴構成は、前記化合物を、 0. Olmg〜： LOOmg の範囲で含有する点にある。

[0026] (構成 5)

本発明に係る経口組成物の第 3特徴構成は、前記化合物を、一日あたりの用量 0. 01mg〜100mgの範囲で含有する点にある。

[0027] 前記第 1又は第 2特徴構成に記載の化合物は、最終的に飲食物に添加されてヒトまたは他の動物が摂取する場合、摂取された化合物が消化管運動を促進する量で提供されればよい。例えば、前記化合物量に換算して、食事ごとに数 mg程度摂取できる形態で提供する。したがって、上記第 2特徴構成に記載の如ぐ飲食物、飲食物添加剤、または動物用飼料の各使用形態により異なるが、好ましくは 1日あたり 0. 01 mg〜： LOOmg、特に好ましくは 1曰あたり 0. 05mg〜50mg、さらに好ましくは、 0. 1 mg〜： LOmg程度摂取されるよう提供されればよい。この場合、上記第 3特徴構成に記載の如ぐ経口組成物（最終製品）を、一日あたりの用量 0. Olmg〜： LOOmgの範囲で前記化合物を含有するように調製してあれば、 1日に好ましいとされる前記化合物量を容易に摂取することができる。

[0028] (構成 6)

本発明に係る飲食品の第 1特徴構成は、前記経口組成物を用いた点にある。

[0029] 上記特徴構成によれば、前記経口組成物を一般的な製造法により加工製造した飲食品 (例えば、一般食品 (健康食品を含む)や保険機能食品 (特定保険用食品又は栄養機能食品）として提供することができる。

[0030] (構成 7)

本発明に係る医薬品の第 1特徴構成は、前記経口組成物を用いた点にある。

[0031] 上記特徴構成によれば、本発明に係る化合物を含む、慣用の製剤技術を用いて製剤化された医薬品 (例えば、カプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤、シロップ剤、注射剤、点滴剤等)を提供することができる。

[0032] (構成 8) 本発明に係る飲食物添加剤の第 1特徴構成は、前記経口組成物を用いた点にある

[0033] 上記特徴構成によれば、本発明に係る化合物を含む、種々の用途の飲食物添加剤 (例えば、調味料、調味液、香料、ふりかけ、食用油、出し汁、栄養強化剤）として提供することができる。

[0034] (構成 9)

本発明に係る動物用飼料の第 1特徴構成は、前記経口組成物を用いた点にある。

[0035] 上記特徴構成によれば、例えば、本発明に係る化合物を含む市販の動物用飼料を提供することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0036] 以下に本発明の実施の形態を説明する。

〔実施形態〕

1.本発明の合成方法

図 1及び図 2は、それぞれ本発明の化合物を合成する全合成スキームを示す。尚、図 1及び図 2中に記載される各矢印（→)の上下に記載されている文言は、各種試薬及び反応条件であり、必ずしもこれらに限定されるものでなぐ本スキームに従って合成することが可能であるならば、使用される試薬の種類や反応条件については任意に採用することができる。また、各符号（1〜16)は、化合物を示す。

1 - 1.本発明の化合物の全合成スキーム

図 1は、ホルダチン A前駆体（9)を中間体として図 14に示されるベンゾフランカルボキシアミド誘導体の各種異性体 (4種類： la〜d)を合成する全合成スキームである。

[0037] 図 1に示す全合成スキームでは、ァシル部分（7及び 15)と、塩基部分（10〜14、 6a)とを、それぞれを別個に合成した後、両者を最終的に縮合させてホルダチン A前駆体（N, Ν' , Ν" , Ν' "— tetra— Boc— Hordatine : 9)を合成している。ここにおいて、 Bocは、 t—ブトキシカルボ-ル基（― COOC (CH )基）を表す。

3 3

[0038] (I)塩基部分の合成については、まず lH— pyrazole—l— carboxamidine hy drochloride (lO)力ら文献（B. Drake et al. , Synthesis, 1994, 579)に記載される方法に従って N, N' -di-Boc - ΙΗ - pyrazole - 1 - carboxamidine ( 11 )を合成する（収率約 74%)。

[0039] また、巿販もされている 1, 4ー &!^1101)1^&116 (12)の1個のァミノ基を図1に記載されるような反応条件下で carbobenzoxy (Cbz)基で保護して 4 - Cbz - aminob utyl— amine hydrocmoride (l3)をネ守る (A. Graham etal. , synthesis, 198 4, 1032)。先に調製した（11)と（13)とを、トリェチルァミンの存在下で反応させると、 4― carbobenzoxyamino— N, N'— di— Boc— agmatine (14)が得られる (収率約 87%)。

[0040] (14)を水素気流中、 5%パラジウム炭素存在下に hydrogenolysis反応に付すと、N, N，— di— Boc— agmatine (6a)が得られる。尚、（6a)については、その塩酸塩が市販されているので、市販品を使用しても良い。

また、脱保護した際の精製の容易さから、ァグマチンを構成するグァ -ジノ基の保護基としては、文献上 Boc基あるいは Cbz基 (カルボベンゾキシ基）が汎用されている力 Boc基で保護することが好ましい。ホルダチンは分子内に二重結合を有するため、接触還元的に脱保護を行う Cbz基は利用できないためである。 Cbz基以外のァミノ基やィミノ基の N— protecting groupの保護基としての利用は理論的には可能と考えられる。

[0041] (Π)ァシル部分の合成については、図 1に記載されるように、例えば市販のパラクマリン酸（7)を用いて、 2%の過酸化水素（酸化補助剤)及びセィヨウヮサビ由来ペルォキシダーゼ（Horseradish Peroxidase)を含有する pH7のリン酸緩衝液中で反応させて、 dehydrodi— p— coumaric acid (15)を得る。なお、この（15)の¹ H— N MRにおけるジヒドロフラン環上の 2個のプロトンは、 7. 2Hzの結合定数を示し、この結果は両プロトンがトランスであることを示唆する。また、上記酵素反応は、リン酸緩衝液 (pH7)中で行うが、反応基質の溶解性がその収率を左右していると考えられる。同様の条件下での反応で、パラクマリン酸は相当するエステル (終夜反応）に比べ非常に早く反応が完結すること (5gスケールで 40分程度)、また、反応終了後は直ちに酵素を失活させないと連続的なカップリング反応が進行することも見出された。尚、本実施形態で得た（ 15)は、相当する Methoxymethyl esterの加水分解で得たものと NMRでの一致を確認した。 [0042] 次いで、得られた（6a)及び（15)を HOBT, WSC存在下にて反応させ Ν, Ν ' , N " , Ν，，，一 tetra— Boc— Hordatine (9)を得る（収率約 80%)。尚、 WSCはぺプチド結合を形成させる縮合剤のひとつであり、 N—ェチル一 N，一3—ジメチルァミノプロピルカルボジイミド ·塩酸塩の慣用名であり WSCI · HC1とも略記される。 WSCの慣用名は、 Water Soluble Carbodiimideに由来している。この縮合剤は単独あるいは 1—ヒドロキシベンゾトリアゾール (HOBT)等の添加剤と組み合わせて用いられる。この HOBTの存在は、縮合剤単独の場合よりも反応が早く進行し、縮合に伴う副反応を防止する働きがある。また、（9)については、 iH— NMRにおいてシス体において認められる 4. 5ppm付近での 9. 5Hzの coupling constantを示すピークが全く認められな力つたことから、トランス体であることが判明している。

[0043] (9)は、トリフルォロ酢酸中、脱保護（脱 Boc化）した後、 4N HClZdioxane溶液を加え減圧下で濃縮する。なお、 Boc基の酸による脱離には、 HClZdioxaneや HC 1/ethyl acetateなども使用されるが、反応基質の溶解性や反応速度に問題が多い。その点、トリフルォロ酢酸 (TFA)は溶解性も高ぐ反応も早いことから、 Boc基の酸による脱離に汎用される。また、 4N HClZdioxane溶液を使用する理由は、 Boc 基は通常トリフルォロ酢酸 (TFA)で脱離させる力この際生成したトリフルォロ酢酸塩を塩酸塩に変換するためである。規定液を用いるのは、化学量論的に処理するため、また、ジォキサン溶液は脱離溶媒 TFAと混和可能 (miscible)なため選択される濃縮後の残渣はべンゾフランカルボキシアミド誘導体の 4種類の異性体 (ィヒ合物 la 〜ld)を含み得、適当な分離条件下において、まず、そのシス体 (ィ匕合物 la及びィ匕合物 lb)とトランス体 (化合物 lc及び化合物 Id)とに分離される。以下に分離条件の一例（ゲルカラムクロマト）を示す力これに限定されるものではなぐシス体とトランス体を分離可能な条件であるならば、任意の分離条件を設定し得る。

[0044] 濃縮後の残渣 (ベンゾフランカルボキシアミド誘導体の 4種類の異性体 (化合物 la 〜d)を含む）を、 high porous stylene polymer MCI GEL CHP20P (75 〜150 ) [Mitsubishi Chem. Corp. ]カラムにチャージし、ポンプカロ圧下で水のみで展開すると、酸性の画分が溶出する。この後、展開溶媒を 20%メタノール Z 水系に換え、溶出展開を継続すると、先ずシス体のラセミ体（la及び lb) (Rf = 0. 2 4)が溶出し、ついでトランス体のラセミ体（lc及び Id) (Rf=0. 33) [TLC plate : Si lica gel F MERCK,展開溶媒；nBuOH :AcOH :H O (4 : l : l) ]が溶出する

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。それぞれの画分を凍結乾燥 (Lyophilization)すると、両者の塩酸塩が白色粉末として得られる（トランス体の収率:約 64%、シス体の収率:約 30%)。シス体およびトランス体のフリー体は、それぞれの塩酸塩のメタノール溶液を、非水系の塩基性イオン交換榭脂 Amberlyst (登録商標) A— 21 (Organo)で処理後、凍結乾燥 (Lyophil ization)して得られる。

最後に、得られたシス体のラセミ体及びトランス体のラセミ体を、それぞれキラルカラム（例えば、ダイセルィ匕学社製の CHIRACELなど）により光学分割して、図 3及び図 4に示されるような 4種類のェナンチォマー (ィ匕合物 la〜d)を分離する。

[0045] 1. 2—本発明の化合物の別の全合成スキーム

図 2は、ホルダチン A前駆体（9a及び 9b)を中間体として、図 14に示されるベンゾフランカルボキシアミド誘導体の各種異性体 (4種類： la〜d)を合成する全合成スキームである。

図 2に示す全合成スキームでは、光学活性なァシル部分を合成した後、塩基部分を縮合させて光学活性なホルダチン A前駆体（N, Ν' , Ν" , Ν' " -tetra-Boc- Hordatine： 9aおよび 9b)を合成し、それらを脱 Boc化することで光学活性なベンゾフランカルボキシアミド誘導体の 4種類の異性体 (ィ匕合物 la〜： Ld)を合成して!/、る。

[0046] (I)塩基部分の合成については、まず 1H— pyrazole— 1 carboxamidine hyd rochloride (lO)力ら文献（B. Drake et al. , Synthesis, 1994, 579)に記載される方法に従って N, N'— di— Boc— 1H— pyrazole— 1— carboxamidine (11) を合成する（収率約 74%)。

また、巿販もされている 1, 4— diaminobutane (12)の 1個のアミノ基を図 2に記載されるような反応条件下で carbobenzoxy (Cbz)基で保護して 4 Cbz aminobut yi— amine nyarochloriae 3)をネ守る (A. uraham etal. , synthesis, 1984, 1032)。先に調製した（11)と（13)とを、トリェチルァミンの存在下で反応させると、 4 — carbobenzoxyamino— N, N，一 di— Boc— agmatine (14)が得られる (収率約 87%) o

(14)を水素気流中、 5%パラジウム炭素存在下に hydrogenolysis反応に付すと、 N, N，— di— Boc— agmatine (6a)が得られる。尚、（6a)については、その塩酸塩が市販されているので、市販品を使用しても良い。

また、脱保護した際のホルダチン精製の容易さから、ァグマチンを構成するグァ- ジノ基の保護基としては、文献上 Boc基あるいは Cbz基 (カルボベンゾキシ基）が汎用されている力 Boc基で保護することが好ましい。ホルダチンは分子内に二重結合を有するため、接触還元的に脱保護を行う Cbz基は利用できないためである。 Cbz基以外のアミノ基ゃィミノ基の N— protecting groupの保護基としての利用は理論的には可能と考えられる。

(Π)ァシル部分の合成については、 lZl5mMリン酸緩衝液（pH7. 3) /dioxane 中に、 p—クマリン酸（7)、セィヨウヮサビ由来ペルォキシダーゼ（horseradish— per oxidase)をカ卩える。室温下で撹拌しつつ、 0. 5時間かけて 1M 過酸化水素水溶液を滴下させる。

反応の進行を TLC (CHC1： MeOH :AcOH = 9 : l : 0. 2)により確認し、反応液に

3

酢酸ェチル、クェン酸を加え撹拌した後、酢酸ェチルにて 3回抽出を行う。酢酸ェチル層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで脱水し濃縮乾固した。得られた黄色残渣をメタノールに溶解させ、 Sephadex (登録商標） LH20 (メタノール）、 S ephadex LH20 (80%メタノール）、および Sephadex (登録商標） G15 (80%メタノール）カラムクロマトグラフィーで順次精製し、 dehydrodi— p— coumaric acid (l 5)を得る。

キラルカラム CHIRALPAK (登録商標） OJ— RH [直径 2. Ocm X長さ 15cm、溶媒： 30%MeCN 0. 1%TFA、流速： 5. OmlZmin、波長： 280nm]により、 dehyd rodi—p— coumaric acid (15)力ら光'ギ 7舌'性な ¾]— aehydroai— p— couma ric acid、16a)および [R, R」一dehydrodi— p— coumaric acid (丄り b)を分取する。

次、で、得られた（16a)及び（16b)をジメチルホルムアミドに溶解し、 WSCおよび HOBtをカ卩えて、室温下撹拌する。その後、（6a)をジメチルホルムアミドに溶解し反応液に加え、さらに 1時間攪拌する。反応の進行を TLC(CHC1： MeOH:AcOH =

3

9:1:0. 2)で確認し、反応液に水を加え酢酸ェチルで 3回抽出し、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。得られた残查を SiO カラムクロマトグラフ法 [直径 1. 5X長さ 10cm, Hexane:AcOEt=3:7から 1:4へ

2

のグラジェント]にて精製し、 [S, S]— N, Ν', Ν", Ν" ' -tetra-Boc-Hordati ne(9a)および [R, R]— Ν, Ν', N", N，， '一 tetra— Boc— Hordatine (9b)を得る（収率約 80%)。夾雑物を含むフラクションは更に SiO (球状、中性)カラムクロマト

2

グラフ法 [CHC1： MeOH = 99:1力も 98 :2へのグラジェント]によって精製を行う。

3

この縮合剤は単独ある、は 1—ヒドロキシベンゾトリアゾール (HOBT)等の添加剤と組み合わせて用いられる。この HOBTの存在は、縮合剤単独の場合よりも反応が早く進行し、縮合に伴う副反応を防止する働きがある。

[0048] (9a)および（9b)にトリフルォロ酢酸 (TFA)をカ卩え、脱保護 (脱 Boc化）した後、 1N

HC1溶液をカ卩ぇ減圧下で濃縮する。なお、トリフルォロ酢酸 (TFA)、 IN HC1溶液および規定液を使用する理由は、前掲の他方の全合成スキームの場合と同じである上述のようにして、濃縮後に得られた 2つの残渣には、それぞれ 2種類の異性体が含まれ得る（9a由来の残渣には化合物 lb及び ld、 9b由来の残渣には化合物 la及び lc)。各残渣を Sephadex G— 15(直径 1. 6cmX長さ 30cm, solvent =0.01 N HC1, Vt=58cm³, Vi=29cm³, Vg=ll.6cm³, Vo = 17.4cm³, flow rate =

collection volume = 2. 5mlZfraction)カラムにかけて、 2種類の異性体を分離溶出させて、各溶出画分を採取して凍結乾燥することで、図 3及び図 4に示されるような 4種類のェナンチォマー（ィ匕合物 la〜d)を得ることができる。なお、化合物 la〜dは、塩としての形態で得ることもでき、そのような塩としては、塩酸塩など、特に限定されるものではない。

[0049] 2.経口組成物

本発明の化合物は、適当な担体と共に本発明の有効成分を含有する経口組成物を提供する。経口組成物は、飲食物添加剤、飲食品、医薬品、あるいは動物用飼料といった形態に用いることができる。 [0050] 3.飲食物添加剤

本発明が提供する飲食物添加剤の態様には、種々の用途の飲食物用製品、例えば、調味料、調味液、香料、ふりかけ、食用油、出し汁、栄養強化剤の一成分として消化管運動促進成分を含有する消化管運動促進性の飲食物添加剤も包含される。

[0051] 4.飲食品

本発明の化合物、その含有組成物もしくはそれらの混合物は、食品原料とともに、一般の製造法により飲食物、健康食品、特別用途食品として加工製造することができる。

なお、本発明の化合物が消化管運動促進効果を有する場合には、本発明を含む組成物として製造することもできる。この場合、最終製品当たり 20mg〜200gZkg、当該活性物質の含量として、最終製品当たり 0. Olmg〜： LOOmg/kg程度であることが好ましい。ここで、使用者 (摂取者)の利便性を考慮して、一日あたりの用量 0. 0 lmg〜： LOOmgの範囲で前記化合物を含有するように調製した飲食品を個包装した形態で提供することも、本発明の実施形態として好ましヽ。

[0052] 飲食物の種類、形態は特に限定されず、例えば固形、あるいは液状の食品なヽしは嗜好品、例えばパン、麵類、ごはん、菓子類 (ビスケット、ケーキ、キャンデー、チョコレート、和菓子、グミ、チュウインガム）、豆腐およびその加工品などの農産食品、みりん、食酢、醤油、味噌、ドレッシングなどの調味料、ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソ一セージ、マヨネーズなどの畜農食品、力まぼこやノヽンペン等の水産練り製品、果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、コーヒー飲料、茶飲料、炭酸飲料などの飲料、さらにはべビーミルク、コーヒー用ミルク等の粉乳や乳製品等の形態にすることができる。

[0053] 健康食品の種類、形態も特に限定されず、例えば、錠剤、カプセル品、固形、あるいは液状などが挙げられる。

特別用途食品としては、病弱者用食品、妊産婦 Z授乳婦用粉乳、乳児用調整粉乳、高齢者用食品、保健機能食品 (栄養機能食品、特定保健用食品)を挙げることができる。

本発明の化合物を含有させた飲食品に対して、機能に関する表示を付すことができる。本発明でいう機能に関する表示とは、例えば、特定の保健の目的が期待できる旨の表示、保険の用途の表示、あるいは用途、効果または効能に関する表示をいうまた、本発明における化合物は、ビール、発泡酒、低アルコール麦芽発酵飲料等の麦芽発酵飲料、ワイン、清酒、薬用酒などの醸造酒に添加して消化管運動促進作用 Zドリンカピリティー促進作用が増強されたアルコール飲料として、また、ウィスキー、ブランデー、焼酎などの蒸溜酒に添加して消化管運動促進作用 Zドリンカピリティ一促進作用が付与された食前 ·食中酒として摂取できる形態にあるアルコール飲料として加工製造されてもよ!ヽ。

[0054] 5.医薬品

本発明はさらに、本発明の化合物を含有する医薬品を提供するものでもある。このような医薬品は、慣用の製剤技術を用いて、たとえば、カプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤、シロップ剤、注射剤、点滴剤等の形態に製剤化することができる。これらは、主として食前、食中に消化管運動促進を高める目的で用いることができ、あるいは嗜好品などとして適宜摂取することも可能である。さらに、健常者の消化管運動促進を高める目的以外にも、術後、加齢、疲労、疾病、傷害等における消化管運動能力の低下を回復させる目的で、又は、抗ガン剤の投与による食欲不振などを改善する目的で用いることもできる。あるいは、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、頻尿、尿失禁、過敏性腸症候群などに対する治療薬としても使用され得る。ここにおいても、使用者 (摂取者)の利便性を考慮して、一日あたりの用量 0. Olmg〜： LOOmgの範囲で前記化合物を含有するように製剤化することが、本発明の実施形態として好ましい。

[0055] 6.動物用飼料

また、本発明の化合物を含有させた動物用飼料は、例えば市販の動物用飼料に本発明の有効成分を添加混合することで得ることができる。

[0056] 7.添加量

本発明が提供するムスカリン M受容体に作用する化合物が、消化管運動を促進さ

3

せるような機能を有する場合、最終的に飲食物に添加されてヒトまたは他の動物が摂取するときに、摂取された有効成分が消化管運動を促進する量で提供されればよい。例えば、活性物質に換算して、食事ごとに数 mg程度摂取できる形態で提供される。したがって、飲食物、飲食物添加剤、消化管運動促進成分または動物用飼料の各使用形態により異なる力それぞれ、好ましくは 1日あたり 0. Olmg〜： LOOmg、特に好ましくは 1日あたり 0. 05mg〜50mg、さらに好ましくは、 0. lmg〜： LOmg程度摂取されるよう提供されればよい。例えば、使用者 (摂取者)の利便性を考慮して、一日あたりの用量 0. 0 lmg〜： LOOmgの範囲で前記化合物を含有するように調製 '個包装して提供する。これにより、消化管運動の低下によって生じる食欲不振、消化不良、食後の腹部膨満感、胃のもたれ、悪心、嘔吐、上腹部痛などの消化器症状に悩む対象に対し、消化管運動促進効果およびドリンカピリティー促進効果によって、食欲およびドリンカピリティーを増進することができる。

実施例 1

[0057] 〔構造解析〕

上記実施形態にて合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体のシス体 (ィ匕合物 1 a及び lb)及びトランス体 (化合物 lc及び Id)について、核磁気共鳴スペクトルデータ、質量分析スペクトル測定による解析を行った。

[0058] 1.核磁気共鳴（^H— NMR ¹³C— NMR)スペクトル

上記シス体 (塩酸塩)及びトランス体 (塩酸塩）について、その核磁気共鳴 ( — N MR、 ¹³C— NMR)スペクトル解析を行った。溶媒として DMSO— dを用い、測定は、

6

Bruker Biospin社 DMX- 750 ( — NMR)または DMX- 500 (¹³C— NMR)で行った。上記シス体及びトランス体の¹ H— NMRスペクトル解析データをそれぞれ第 5図（シス体)および第 6図（トランス体）に、また¹³ C— NMR ^ベクトル解析データをそれぞれ第 7図（シス体)および第 8図（トランス体）に示した。その結果、天然体 (ホルダチン A

(トランス体)及びそのシス体）とほぼ同じスペクトルを示した。

[0059] 2.質量分析スペクトル

次に、上記シス体について、その質量分析を行った（図 9)。

シス体を 3— -トロベンジルアルコールに溶解して、質量分析を行った結果を第 9図として示した。その結果、分子イオンとして、質量 Z電荷 (mZz)が、 551 (M+H)+となり、分子量は 550を有するものであることが判明した。 [0060] 3.構造の決定

以上のように、合成したィ匕合物について、核磁気共鳴スペクトルデータ、及び質量分析による解析の結果、それぞれの立体構造は、シス体については図 3の化合物 la 及びィ匕合物 lb、またトランス体については図 4の化合物 lc及びィ匕合物 Idで示される化学構造式を有するものであることが判明した。尚、化合物 lc及び化合物 laは、それぞれ天然体のホルダチン A (トランス体)及びそのシス体と同じ化学構造式を有するものであり、化合物 lb及び化合物 Idが、上述の非天然体のェナンチォマー（シス体及びトランス体)である。

実施例 2

[0061] 〔キラル分析〕

天然体 (ホルダチン A (トランス体)及びそのシス体)並びに合成した非天然体 (上記化合物 la〜d)について、キラルカラムを用いて高速液体クロマトグラフィー（HPLC) 分析を実施した。分析試料としては、天然体として（1)ホルダチン Aのシス体及び（2) ホルダチン A (トランス体)を用意し、合成した非天然体として（3)シス体のラセミ体 (ィ匕合物 la、 lb)及び (4)トランス体のラセミ体 (ィ匕合物 lc、 Id)を用意した。上記分析試料 (1)及び (3)、並びに上記分析試料 (2)及び (4)をそれぞれ共射出し、分析を行つた。 HPLCの分析条件は、カラム： CHIRALCEL (登録商標） OD-RH、カラムサイズ：内部直径 0. 46cm X長さ 15cm、移動相： 25%MeCNを含有する 0. 5M NaCIO

4 の水溶液、流速： 0.8mlZmin、測定波長： 280nm、チャートスピード： 15cm/hである。結果を図 10 (分析試料 ( 1)及び (3) )及び図 11 (分析試料 (2)及び (4) )に示す。尚、それぞれの図において、（ィ）は天然体のみを、（口）は非天然体のみを、（ハ）は天然体と非天然体との混合物を分析に供したものである。この結果から、キラルカラムを使用することにより、合成したシス体のラセミ体及びトランス体のラセミ体はそれぞれ単一のェナンチォマーに分離することが可能であり、その一方のェナンチォマーが天然体と同じものであると判断される。

実施例 3

[0062] 〔ムスカリン M受容体結合性試験〕

3

ムスカリン M受容体結合性試験法は、次の通りである。ヒトのムスカリン M受容体を発現させた組換えチャイニーズノ、ムスター卵巣細胞

3

株の膜標品の懸濁液に、検体 (ビール乾燥物およびその分画物）と、リガンド: 0. 2n Mの [³H]4— DAMP (ジフエ-ルァセトキシ N—メチルビペリジンメチオダイド）を添加し、 22°Cで 60分間インキュベートした。反応液をガラス繊維フィルター（GFZB ： Packard社製）にて吸引濾過して反応を停止させ、氷冷した緩衝液で数回洗浄した。フィルターにシンチレーシヨンカクテル（Microscint 0： Packard社製）を加え、フィルター上に残存する放射活性を液体シンチレーシヨンカウンター（Topcount: Packa rd社製)で計測した。 [ ] 4— DAMPの特異的結合量は、 [ ]4— DAMPの全結合量から 1 μ Μアト口ピン存在下の非特異的結合量を差し引くことにより算出した。

[0063] 非天然体 (ィ匕合物 lb (シス体)及びィ匕合物 Id (トランス体)）を第 1図又は第 2図に示す方法で化学合成し、得られたそれぞれの非天然体について、上記のムスカリン M受容体結合性試験を行い、用量一作用曲線を求め、天然体 (ホルダチン A及び

3

そのシス体）と it較した。

その結果を、第 12図（ホルダチン Aのシス体、化合物 lb)及び第 13図（ホルダチン A、化合物 Id)に示した。図中に示した結果から明らかなように、非天然体には天然体と同様の用量依存性が確認され、その IC はそれぞれ、シス体では 0. 08 X 10" g

50

ZmL、トランス体では 0. 11 X 10—⁶gZmLであった。天然体と比較したところ、合成品のムスカリン M受容体結合作用の強さは、化合物 lb (シス体)で天然体の約 7倍、

3

化合物 Id (トランス体)で天然体の約 20倍に相当した。

実施例 4

[0064] 〔製造例 1 (医薬品)〕

上述の実施形態記載の方法で合成した非天然体 (化合物 lb及び Id)を用いて、各種医薬品を調製した。

錠剤：

以下に示す方法により、医薬品（錠剤および顆粒剤）を製造した。

化合物 IdO. lgを結晶セルロース 66. 6g、乳糖 132. Ogおよびステアリン酸マグネシゥム 1. 3gとともに混合し、単発式打錠機にて打錠することにより、直径 8mm、重量

200mgの錠剤を製造した。化合物 lbについても同様に錠剤を製造した。

顆粒剤：

化合物 IdO. 2gに、乳糖 70. 0g、コーンスターチ 29. 3gとステアリン酸マグネシゥム 0. 5gを加え、圧縮、粉砕、整粒し、篩別して 20〜50メッシュの顆粒剤を得た。化合物 lbについても同様に顆粒剤を製造した。

実施例 5

[0065] 〔製造例 2 (飲食品)〕

以下に示す組成にて、各種飲食品を調製した。

(化合物 lb (シス体)を用いた製造例）

飴：

(組成）（重量部）

粉末ソルビトール 99. 7

香料 0. 2

化合物 lb 0. 05

ソルビトールシード 0. 05

全量 100. 00

[0066] ガム：

(組成）（重量部）

ガムベース 20. 0

炭酸カルシウム 2. 0

ステピオサイド 0. 1

化合物 lb 0. 05

乳糖 76. 85

k L_Q_

全量 100. 00

[0067] ゼリー（コーヒーゼリー）：

(組成）（重量部）

グラニュー糖 15. 0 ゼラチン 1. 0 コーヒーエキス 5. 0 水 78. 93

化合物 lb _ 0. 07 全量 100. 00

[0068] ジュース：

(組成）（重量部) 冷凍濃縮温州みかん果汁果糖ブドウ糖液糖 11. 0 クェン酸 0. 2

L ァスコノレビン酸 0. 02 化合物 lb 0. 05 香料 0. 2 色素 0. 1

Zt 83 43 全量 100.

[0069] 乳酸菌飲料：

(組成）：部）乳固形分 21%発酵乳 14. 76 果糖ブドウ糖液糖 13. 31 ぺクチン 0. 5 クェン酸 0. 08 香料 0. 15 水 71. 14 化合物 lb _ 0. 06

100. 00

[0070] コーヒー飲料:

(組成) (重量部) グラニュー糖 8. 0 脱脂粉乳 5. 0 カラメノレ 0. 2 コーヒー抽出物 2. 0 香料 0. 1 ポリグリセリン脂肪酸エステル 0. 05 食塩 0. 05 水 84. 56

化合物 lb 0. 04 全量 100. 00

[0071] アルコール飲料：

(組成）（重量部）

50容量⁰ /。エタノール 32. 0 砂糖 8. 4

果汁 2. 4

化合物 lb 0. 05

精製水 57. 15 全量 100. 0

[0072] (化合物 Id (トランス体)を用いた製造例）飴：

(組成）（重量部）粉末ソルビトール 99. 7 香料 0. 2

化合物 Id 0. 05

ソルビトールシード 0. 05 全量 100. 00

[0073] ガム：

(組成）（重量部）ガムベース 20. 0 炭酸カルシウム 2. 0 ステピオサイド 0. 1 化合物 Id

乳糖

呑料 11. 0

〇〇—

全量 100. 0 00 〇〇0 〇

[0074] ゼリー（コーヒー -ゼリー）：

(組成） (重量部) グラニュー糖

ゼラチン 1. 0 コーヒーエキス 5. 0 水 78. 93

100. 00

[0075] ジュース:

(組成） (重量部) 冷凍濃縮温州みかん果汁 5. 0 果糖ブドウ糖液糖 11. 0 クェン酸 0. 2

L ァスコノレビン酸 0. 02 化合物 Id 0. 05 香料 0. 2 色素 0. 1

83. 43

100. 00

[0076] 乳酸菌飲料:

(組成） β) 乳固形分 21%発酵乳 14. 76 果糖ブドウ糖液糖 13. 31 ぺクチン 0. 5 クェン酸 0. 08 香料 0. 15 水 71. 14

化合物 Id 0. 06 全量 100. 00

[0077] コーヒー飲料：

(組成）（重量部）グラニュー糖 8. 0 脱脂粉乳 5. 0 カラメル 0. 2 コーヒー抽出物 2. 0 香料 0. 1 ポリグリセリン脂肪酸エステル 0. 05 食塩 0. 05 水 84. 56 化合物 Id 0. 04 全量 100. 00

[0078] アルコール飲料：

(組成）（重量部）

50容量⁰ /。エタノール 32. 0 砂糖 8. 4 果汁 2. 4 化合物 Id 0. 05 精製水 57. 15 全量 100. 0 実施例 6

[0079] 〔製造例 3 (健康食品)〕

飲食品の好ま、様態である健康食品 (錠剤)を調製した。

ィ匕合物 lb 0. Olgに、結晶セノレ口一ノレ 66. 69g、孚 L糖 132. Ogおよびステアジン酸マグネシウム 1. 3gとともに混合し、単発式打錠機にて打錠することにより、直径 8mm 、重量 200mgの錠剤を製造した。

得られた 30錠剤をガラス瓶に入れ、「消化管運動促進吸収促進する旨」または「ドリンカピリディー促進する旨」の表示のあるラベルを付した。

同様にィ匕合物 Id 0. Olgに、結晶セノレ P—ノレ 66. 69g、孚 L糖 132. Ogおよびステリン酸マグネシウム 1. 3gとともに混合し、単発式打錠機にて打錠することにより、直径 8mm、重量 200mgの錠剤を製造した。

産業上の利用可能性

[0080] 本発明は、ムスカリン受容体が関わる種々の疾病を治療するための医薬品の研究開発 (医薬品の製造販売業)や医療業にお!、て特に有用であり、そのような産業のさらなる発展に寄与し得るものである。

図面の簡単な説明

[0081] [図 1]本発明の化合物の全合成スキームを示す図

[図 2]本発明の化合物の別の全合成スキームを示す図

[図 3]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体 (シス体)の化学構造式を示す図 [図 4]合成した合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体 (トランス体)の化学構造式を示す図

[図 5]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体 (シス体）に関する¹ H— NMRスぺタトル解析データを示す図

[図 6]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体（トランス体）に関する¹ H— NMR スペクトル解析データを示す図

[図 7]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体 (シス体）に関する¹³ C— NMR^ ベクトル解析データを示す図

[図 8]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体（トランス体）に関する¹³ C— NMR スペクトル解析データを示す図

[図 9]合成したベンゾフランカルボキシアミド誘導体 (シス体）につヽての質量分析スベクトル解析データを示す図

[図 10]天然体 (ホルダチン Aのシス体）と非天然体 (シス体のラセミ体）に対してキラルカラムを用いて HPLCを実施したクロマトグラムを示す図

[図 11]天然体 (ホルダチン A)と非天然体（トランス体のラセミ体）に対してキラルカラムを用いて HPLCを実施したクロマトグラムを示す図

[図 12]天然体 (ホルダチン Aのシス体)及び非天然体 (化合物 lb)のムスカリン M受

3 容体結合性試験結果を示す図

[図 13]天然体 (ホルダチン A)及び非天然体 (化合物 Id)のムスカリン M受容体結合

3 性試験結果を示す図

[図 14]ベンゾフランカルボキシアミド誘導体の化学構造式を示す図

符号の説明

6a ァグマチン誘導体

9 ホルダチン A前駆体

15 パラクマリン酸二量体

Claims

請求の範囲 [1] 以下の構造式 (I)

[化 1]

で示される化合物。

以下の構造式 (II) :

[化 2]

で示される化合物。

[3] 請求項 1又は 2に記載の化合物を含有する経口組成物。

[4] 請求項 1又は 2に記載の化合物を、 0. Olmg〜： LOOmgの範囲で含有する経口組成物。

[5] 請求項 1又は 2に記載の化合物を、一日あたりの用量 0. Olmg〜： LOOmgの範囲で含有する経口組成物。

[6] 請求項 3に記載の経口組成物を用いた飲食品。

[7] 請求項 3に記載の経口組成物を用いた医薬品。

[8] 請求項 3に記載の経口組成物を用いた飲食物添加剤。

[9] 請求項 3に記載の経口組成物を用いた動物用飼料。