WO2006079334A2 - Verfahren zu nachweis und quantifizierung von proteinen unter verwendung von farbstoffen auf der basis von polymethinen - Google Patents

Verfahren zu nachweis und quantifizierung von proteinen unter verwendung von farbstoffen auf der basis von polymethinen

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    • G01N33/6809—Determination of free amino acids involving fluorescent derivatizing reagents reacting non-specifically with all amino acids

Definitions

  • the present invention describes a method for the detection and quantification of proteins using dyes based on 4-substituted, coumarin or quinolone-based dyes, which change their fluorescence behavior in the presence of proteins. It can be shown in detail that dyes based on polymethines of the general formulas I-III
  • R 1 - R 13 are identical or different and are hydrogen, one or more chlorine and / or bromine atoms, alkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocycloalkyl,
  • Heteroarylmercapto or cyano radicals, one or more hydroxy, one or more alkyl-substituted or cyclic amino functions may be and R 1 and
  • R 2 and / or R 3 and R 4 or R 2 and R 3 and / or R 8 and R 9 and / or R 10 and R 11 further aliphatic or aromatic rings or two adjacent radicals, for example in I or R 12 and R 13 may together form one or more aliphatic or aromatic rings,
  • Z is O, S, NR 14 or CR 15 R 16 where R 14 , R 15 and R 16 may be the same or different as the functions of R 1 -R 13 ,
  • n can take the value 0-4,
  • substituents R 1 - R 13 can represent solubilizing or ionizable or ionized substituents such as SO 3 " , PO 3 2" , CO 2 " , O ⁇ , NR 3 + , cyclodextrin or sugar, which have the hydrophilic properties determine the dyes, these substituents can also be connected via an aliphatic or heteroaliphatic, possibly cyclic spacer group on the actual chromophore, and
  • R 1 - R 13 and a and b identically or differently, represent the values of 0-18 and c represent the values of 1-18, for which fluorescence-based detection and quantification of proteins are suitable.
  • the use of the staining reagents described in this invention has the advantage of compatibility with in the Bioanalytics and medical diagnostics of widely used argon, helium-neon and diode lasers.
  • Dye A solution of DY-500XL in PBS buffer (22 mM, pH 7.2) the concentration of 2 10 "6 mol / l * prepared (Fig. 1).
  • BSA bovine serum albumin
  • solution 5 This sets a protein / dye ratio of 100/1.
  • the value of the fluorescence of this solution was set at a maximum and the following values were referenced thereto.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung beschreibt ein Verfahren zu Nachweis und Quantifizierung von Proteinen unter Verwendung von Farbstoffen auf Basis von 4- substituierten cumarin- bzw. chinolonbasierten Farbstoffen, die ihr Fluoreszenzverhalten in Gegenwart von Proteinen verändern.

Description

Verfahren zu Nachweis und Quantifizierung von Proteinen
Stand der Technik
Die Quantifizierung von Proteinen ist ein wichtiges Werkzeug der Bioanalytik. Sowohl in Lösungen als auch in Gelen werden Proteinmengen mittels ihrer Interaktion mit Fluoreszenzfarbstoffen bestimmt. Beispiele dafür sind das auf einer Cyaninstruktur beruhende Albumin-Blue (Wolfbeis et al., US5182214), Merocyanine (Haugland et al. US5616502) oder SYPRO Ruby (Haugland et al., Handbook of Fluorescent Probes and Research Products, 9th Edition, auch http://www.probes.com), welches sich von einem Metall-Liganden-Komplex ableitet. Durch das Anlagern der Verbindungen an die Oberfläche von Proteinen kommt es unter anderem zu einer Versteifung der molekularen Struktur des Chromophors, was zu einem drastischen Anstieg der Quantenausbeute führt. Auch die Ausbildung von Wasserstoff-Brückenbindungen und das Abschirmen gegenüber Löschung der Emission durch gelösten Sauerstoff spielen beim Anstieg des Fluoreszenzsignals eine Rolle.
Czerney et al. (EP 1318177 und im dazugehörigen Recherchebericht genannte Dokumente) beschreiben und beanspruchen reaktive Marker unter anderem auf der
Basis von Cumarin- bzw. chinolonbasierten Farbstoffen, die zum kovalenten
Markieren von Biomolekülen geeignet sind. Dabei werden auch 4- hydroxysubstituierte Cumarinfarbstoffe offengelegt, die mit einer reaktiven Funktion versehen sind. Auf nichtkovalente Wechselwirkungen zwischen offengelegten Verbindungen und Proteinen sowie damit einhergehende Änderungen der spektralen Eigenschaften der Farbstoffe wird in jenem Dokument nicht eingegangen.
Details der Erfindung
Die vorliegende Erfindung beschreibt ein Verfahren zu Nachweis und Quantifizierung von Proteinen unter Verwendung von Farbstoffen auf Basis von 4- substituierten, Cumarin- bzw. chinolonbasierten Farbstoffen, die ihr Fluoreszenzverhalten in Gegenwart von Proteinen verändern. Im Detail kann gezeigt werden, dass Farbstoffe auf der Basis von Polymethinen der allgemeinen Formeln I - III
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Il
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wobei R1 - R13 gleich oder unterschiedlich sind und Wasserstoff, ein oder mehrere Chlor- und/oder Bromatome, Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl-, Cycloalkyl-, Heterocycloalkyl-,
Alkyloxy-, Alkylmercapto-, Aryloxy-, Arylmercapto-, Heteroaryloxy-,
Heteroarylmercapto- oder Cyano-Reste, eine oder mehrere Hydroxy-, eine oder mehrere alkylsubstituierte oder cyclische Aminofunktionen sein können und R1 und
R2 und/oder R3 und R4 oder R2 und R3 und/oder R8 und R9 und/oder R10 und R11 weitere aliphatische oder aromatische Ringe bzw. zwei benachbarte Reste, z.B. in I bzw. Il R12 und R13 zusammen einen oder mehrere aliphatische oder aromatische Ringe bilden können,
• X-Y zusammen für ein Element aus der Gruppe O, S, Se, Te, oder das Strukturelement (CR2)m, NR oder SO2, wobei R gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 einnehmen kann und m für 1 - 4, stehen können,
• X-Y für die Strukturelemente -CR2-O-, -0-CR2-, -CO-O-, -O-CO-, -CO-NR- oder - NR-CO- wobei R gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 einnehmen, stehen können,
• Z für O, S, NR14 oder CR15R16 wobei R14, R15 und R16 gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 stehen kann,
• n den Wert von 0 - 4 einnehmen kann,
• einer oder mehrere der Substituenten R1 - R13 solubilisierende bzw. ionisierbare bzw. ionisierte Substituenten wie SO3 ", PO3 2", CO2 ", O~, NR3 +, Cyclodextrin oder Zucker darstellen können, die die hydrophilen Eigenschaften der Farbstoffe bestimmen, wobei diese Substituenten auch über eine aliphatische oder heteroaliphatische, möglicherweise zyklische Spacergruppe am eigentlichen Chromophor angebunden sein können und
• die aliphatische oder heteroaliphatische Spacergruppe aus einem Strukturelement -[(CH2)a-Y-(CH2)b]c-, worin Y gleich oder verschieden eine CR2-, O-, S-, SO2, SO2NH-, NR-, CO2- oder CONR- Funktion sein kann, wobei R die
Funktionen von R1 - R13 einnehmen kann und a und b gleich oder verschieden die Werte von 0 - 18 und c die Werte von 1- 18 darstellen, für den fluoreszenzbasierten Nachweis und die Quantifizierung von Proteinen geeignet sind.
Insbesondere die Quantifizierung von Proteinen in Lösung (wässriger Puffer) und die
Visualisierung von Proteinen in Gelen ist mit der vorliegenden Erfindung beabsichtigt.
Ein erheblicher Vorteil gegenüber herkömmlicher, auf der Verwendung von Metall- Ligand-Komlexen beruhender Visualisierung von Proteinen ist die Vermeidung des
Einsatzes von schwermetallhaltigen Reagenzien.
Gegenüber dem Albumin-Blau hat die Verwendung der in dieser Erfindung beschriebenen Anfärbereagenzien den Vorteil der Kompatibilität mit in der Bioanalytik und medizinischen Diagnostik weit verbreitetem Argon-, Helium-Neon- und Dioden-Lasern.
Beispiele für einige im Rahmen der Erfindung synthetisierte Farbstoffe zum fluoreszenzbasierten Nachweis und der Quantifizierung von Proteinen sind in der nachfolgenden Tabelle 1 aufgeführt. Die Absorptions- und Emissionsmaxima wurden in Methanol gemessen.
Tabelle 1 :
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000006_0001
Die folgenden Ausführungsbeispiele demonstrieren den Gebrauch der Erfindung.
Ausführungsbeispiel 1
Zur Bestimmung der Fluoreszenz von Protein-Farbstoff-Lösungen mit unterschiedlichen Protein-Farbstoff-Verhältnissen wurden Lösungen mit folgenden Konzentrationen eingesetzt:
Farbstoff: Es wurde eine Lösung von DY-500XL (Fig. 1) in PBS-Puffer (22 mM, pH 7,2) der Konzentration 2*10"6 mol/l hergestellt.
Protein: Es wurden 5 verschiedene Lösungen von Rinderserumalbumin (BSA) in PBS-Puffer (siehe oben) mit folgenden Konzentrationen hergestellt:
1. 2*1 CT6 mol/l 2. 1*1 (T5 mol/l
3. 2*10"5 mol/l
4. 1*1 O^ mol/I
5. 2*10^ mol/l
Zur Messung der Fluoreszenz wurden jeweils 1 ,5 ml der Farbstofflösung und 1 ,5 ml der entsprechenden Protein-Lösung gemischt.
Begonnen wurde mit der höchsten Proteinkonzentration (Lösung 5). Damit wird ein Protein/ Farbstoff-Verhältnis von 100/1 eingestellt. Der Wert der Fluoreszenz dieser Lösung wurde als Maximum gesetzt und die nachfolgenden Werte wurden darauf bezogen.
Wie zu sehen ist (Fig. 2), zeigt der Farbstoff DY-500XL in Abwesenheit vom Protein nahezu keine Fluoreszenz. In Anwesenheit vom Protein (hier als Beispiel BSA) ist eine drastische Steigerung der Fluoreszenz zu beobachten.
Ausführungsbeispiel 2
Mit dem Farbstoff DY-600XL (Struktur in Fig. 3) wurde analog zum Ausführungsbeispiel 1 verfahren. Die entsprechenden Fluoreszenzspektren sind in Fig. 4 dargestellt.

Claims

Patentansprüche
1. Ein Verfahren zum fluoreszenzoptischen Nachweis von Poly(Aminosäuren) dadurch gekennzeichnet, dass eine wässrige Mischung, die aus den nachzuweisenden Poly(Aminosäuren), verschiedenen Detergentien und aus einem oder mehreren Marker-Farbstoffen auf der Basis von Polymethinen der allgemeinen Formeln I - IiI
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Figure imgf000008_0002
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III • wobei R1 - R13 gleich oder unterschiedlich sind und Wasserstoff, ein oder mehrere Chlor- und/oder Bromatome, Alkyl-, Aryl-, Heteroaryl-, Cycloalkyl-, Heterocycloalkyl-, Alkyloxy-, Alkylmercapto-, Aryloxy-, Arylmercapto-, Heteroaryloxy-, Heteroarylmercapto- oder Cyano-Reste, eine oder mehrere
Hydroxy-, eine oder mehrere alkylsubstituierte oder cyclische Aminofunktionen sein können und R1 und R2 und/oder R3 und R4 oder R2 und R3 und/oder R8 und R9 und/oder R10 und R11 weitere aliphatische oder aromatische Ringe bzw. zwei benachbarte Reste, z.B. in I bzw. Il R12 und R13 zusammen einen oder mehrere aliphatische oder aromatische Ringe bilden können,
• X-Y zusammen für ein Element aus der Gruppe O, S, Se, Te, oder das Strukturelement (CR2)m, NR oder SO2, wobei R gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 einnehmen kann und m für 1 - 4, stehen können,
• X-Y für die Struktureiemente -CR2-O-, -0-CR2-, -CO-O-, -O-CO-, -CO-NR- oder -NR-CO- wobei R gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 einnehmen, stehen können,
. Z in I für O, S, NR14 oder CR15R16, wobei R14, R15 und R16 gleich oder unterschiedlich die Funktionen von R1 - R13 einnehmen können, stehen kann und
• n den Wert von 0 - 4 einnehmen kann und/oder
• dass einer oder mehrere der Substituenten R1 - R13 solubilisierende bzw. ionisierbare bzw. ionisierte Substituenten wie SO3 ", PO3 2", CO2 ", O~, NR3 +, Cyclodextrin oder Zucker darstellen können, die die hydrophilen
Eigenschaften der Farbstoffe bestimmen, wobei diese Substituenten auch über eine aliphatische oder heteroaliphatische, möglicherweise zyklische Spacergruppe am eigentlichen Chromophor angebunden sein können und
• sich dadurch auszeichnen, dass die aliphatische oder heteroaliphatische
Spacergruppe aus einem Strukturelement -[(CH2)a-Y-(CH2)b]c-, worin Y gleich oder verschieden eine CR2-, O-, S-, SO2, SO2NH-, NR-, CO2- oder CONR- Funktion sein kann, wobei R die Funktionen von R1 - R13 einnehmen kann und a und b gleich oder verschieden die Werte von 0 - 18 und c die Werte von 1- 18 darstellen, besteht, verwendet wird.
2. Ein Verfahren nach Anspruch 1 , bei der sich nach dem Zusammenbringen der Markerfarbstoffe vom Typ I - III mit der Poly(Aminosäure) eine Marker- Poly(Aminosäure)-Komplex ausbildet, der mit Hilfe fluoreszenzoptischer Verfahren detektiert werden kann.
3. Ein Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2, bei der zum Nachweis von Poly(Aminosäuren) wenigstens einer der Verbindungen Nr. 1 - 8 mit folgenden
Formeln eingesetzt werden:
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2442544A (en) * 2006-06-02 2008-04-09 Pierce Biotechnology Inc Protein detection and quantitation using hydroxyquinolone dyes
EP1842059A4 (de) * 2005-01-26 2010-05-26 Bio Rad Laboratories Cyaninfarbstoffe auf cumarinbasis für nichtspezifische proteinbindung
US8723017B2 (en) 2008-03-07 2014-05-13 Basf Se Dye sensitised solar cell
WO2016127100A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
CN112147113A (zh) * 2019-06-26 2020-12-29 西南交通大学 香豆素衍生物在二氧化硫定量检测中的应用
CN112442020A (zh) * 2019-09-03 2021-03-05 南京大学 一种可超分辨示踪线粒体-溶酶体相互作用的荧光探针
CN114507223A (zh) * 2022-02-28 2022-05-17 吕梁学院 一种吲哚盐-香豆素衍生物及其制备方法和应用、比率检测亚硫酸根的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5182214A (en) 1989-08-17 1993-01-26 Manfred Kessler Method for detection and determination of human serum albumin
US5616502A (en) 1995-05-19 1997-04-01 Molecular Probes, Inc. Non-specific protein staining using merocyanine dyes
EP1318177A2 (de) 2001-12-05 2003-06-11 Dyomics GmbH Verbindung, insbesondere Marker-Farbstoff, auf der Basis von Polymethinen

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3912046B4 (de) * 1988-09-02 2004-03-25 Carnegie Mellon University Verfahren zum Markieren einer Komponente einer wäßrigen Flüssigkeit und lumineszenzphotostabiles Reaktionsprodukt
DE10025820C2 (de) * 2000-05-23 2003-06-26 Dyomics Gmbh Stabile NIR-Marker-Farbstoffe auf der Basis von Benzopyrylium-Polymethinen
DE10159078A1 (de) * 2001-11-27 2003-06-05 Dyomics Gmbh Neue Marker-Farbstoffe auf der Basis von Polymethinen
DE10356130A1 (de) * 2003-11-28 2005-06-23 Dyomics Gmbh Neue Polymethinfarbstoffe auf Cumarin-Basis mit einstellbarem Stokes-Shift
US7563907B2 (en) * 2002-12-05 2009-07-21 Dyomics Gmbh Compounds based on polymethines
US7625758B2 (en) * 2005-01-26 2009-12-01 Berkelman Thomas R Coumarin-based cyanine dyes for non-specific protein binding

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5182214A (en) 1989-08-17 1993-01-26 Manfred Kessler Method for detection and determination of human serum albumin
US5616502A (en) 1995-05-19 1997-04-01 Molecular Probes, Inc. Non-specific protein staining using merocyanine dyes
EP1318177A2 (de) 2001-12-05 2003-06-11 Dyomics GmbH Verbindung, insbesondere Marker-Farbstoff, auf der Basis von Polymethinen

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1842059A4 (de) * 2005-01-26 2010-05-26 Bio Rad Laboratories Cyaninfarbstoffe auf cumarinbasis für nichtspezifische proteinbindung
GB2442544A (en) * 2006-06-02 2008-04-09 Pierce Biotechnology Inc Protein detection and quantitation using hydroxyquinolone dyes
GB2442544B (en) * 2006-06-02 2011-04-20 Pierce Biotechnology Inc Protein detection and quantitation using hydroxyquinolone dyes
US7947506B2 (en) 2006-06-02 2011-05-24 Pierce Biotechnology, Inc. Protein detection and quantitation using hydroxyquinolone dyes
US8723017B2 (en) 2008-03-07 2014-05-13 Basf Se Dye sensitised solar cell
US10571471B2 (en) 2015-02-05 2020-02-25 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
WO2016127100A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
US10928400B2 (en) 2015-02-05 2021-02-23 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
US11567083B2 (en) 2015-02-05 2023-01-31 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
US11899021B2 (en) 2015-02-05 2024-02-13 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
EP4455668A2 (de) 2015-02-05 2024-10-30 Promega Corporation Auf luciferase basierende wärmeverschiebungsassays
CN112147113A (zh) * 2019-06-26 2020-12-29 西南交通大学 香豆素衍生物在二氧化硫定量检测中的应用
CN112442020A (zh) * 2019-09-03 2021-03-05 南京大学 一种可超分辨示踪线粒体-溶酶体相互作用的荧光探针
CN112442020B (zh) * 2019-09-03 2022-06-14 南京大学 一种可超分辨示踪线粒体-溶酶体相互作用的荧光探针
CN114507223A (zh) * 2022-02-28 2022-05-17 吕梁学院 一种吲哚盐-香豆素衍生物及其制备方法和应用、比率检测亚硫酸根的方法

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