WO2006056697A1 - THIENO[2,3-c]PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION - Google Patents

THIENO[2,3-c]PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION Download PDF

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Gilles Doerflinger
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Dominique Barbalat-Damour
François CLERC
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Hervé MINOUX
Claude Barberis
Yves Janin
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Definitions

  • the present invention relates in particular to substituted thieno [2,3-c] pyrazoles, to a process for their preparation, to compositions containing them, and to their use as a medicament.
  • the invention relates to substituted thieno [2,3-c] pyrazoles useful as anticancer agents.
  • 1H-thieno [2,3-c] pyrazoles are known from WO 04/013146 and WO 03/101968. These products are presented as inhibitors of many protein kinases. However, the administration of such products to patients can induce significant side effects, due to their broad spectrum of action. Thus, obtaining inhibitors specific for a selection of proteins, in particular kinases, is sought.
  • Aurora 2 Aurora A
  • 1H-thieno [2,3-c] pyrazoles substituted.
  • the present invention thus relates to the products, characterized in that they correspond to the following general formula (I):
  • R3 is independently selected from the group consisting of - (C1-C6) alkyl, - (C1-C6) alkyl-aryl, - (C1-C6) alkyl-heteroaryl, -aryl, -heteroaryl;
  • R3 is - (C1-C6) alkyl
  • R1 is chosen from aryl, heteroaryl, NHCO (R2) and NH-R4, with R2 being independently selected from group consisting of - (C1-C24) alkyl, - (C3-C9) cycloalkyl, heterocycloalkyl, heterocycloalkylene, aryl, heteroaryl, arylalkyl, heteroarylalkyl and R4 represents aryl, heteroaryl, - (C3-C9) cycloalkyl and heterocycloalkyl,
  • the subject of the present invention is therefore a product of formula (I) as defined above, characterized in that R1 represents NH-R4, with R4 represents aryl, heteroaryl, - (C3-C9) cycloalkyl and heterocycloalkyl,
  • alkyl radical denotes linear and branched radicals containing at most 12 carbon atoms, such as, for example, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl or isopentyl radicals, hexyl, isohexyl and also heptyl, octyl, nonyl and decyl and their linear or branched positional isomers;
  • halogen atom denotes the chlorine, bromine, iodine or fluorine atoms and preferably the chlorine, bromine or fluorine atom;
  • cycloalkyl radical denotes a saturated carbocyclic radical containing 3 to 10 carbon atoms and thus particularly denotes the cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl radicals, and especially the cyclopentyl and cyclohexyl radicals;
  • heterocycloalkyl radical thus denotes a monocyclic or bicyclic carbocyclic radical interrupted by one or more heteroatoms, which may be identical or different, chosen from oxygen, nitrogen or sulfur atoms: mention may be made, for example, of morpholinyl, thiomorpholinyl and aziridyl radicals; , azetidyl, piperazinyl, piperidyl, homopiperazinyl, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydrothienyl, hexahydro
  • a carbocyclic radical containing a -C (O) - linkage is, for example, the tetralone radical;
  • heteroaryl radical thus denotes monocyclic or bicyclic radicals containing 4 to 12 ring members: monocyclic heteroaryl radicals such as, for example, the dioxolane, dioxane, dithiolane, thiooxolane, thiooxane and thienyl radicals such as 2-thienyl and 3-thienyl, furyl such 2-furyl, 3-furyl, pyranyl, pyrrolyl, pyrrolinyl, pyrazolinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl such as 2-pyridyl, 3-pyridyl and 4-pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, oxazolyl, thiazolyl
  • the carboxyl group (s) of the products of formula (I) may be salified or esterified with the various groups known to those skilled in the art, among which may be mentioned, for example:
  • mineral bases such as, for example, one equivalent of sodium, potassium, lithium, calcium, magnesium or ammonium or organic bases such as, for example, methylamine, propylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, N, N-dimethylethanolamine, tris (hydroxymethyl) amino methane, ethanolamine, pyridine, picoline, dicyclohexylamine, morpholine, benzylamine, procaine, lysine , arginine, histidine, N-methylglucamine,
  • the alkyl radicals to form alkoxycarbonyl groups such as, for example, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl or benzyloxycarbonyl, these alkyl radicals being able to be substituted by radicals chosen, for example, from the atoms of halogen, hydroxyl, alkoxy, acyl, acyloxy, alkylthio, amino or aryl radicals such as, for example, in chloromethyl, hydroxypropyl, methoxymethyl, propionyloxymethyl, methylthiomethyl, dimethylaminoethyl, benzyl or phenethyl groups.
  • the addition salts with the inorganic or organic acids of the products of formula (I) can be, for example, the salts formed with hydrochloric, hydrobromic, hydroiodic, nitric, sulfuric, phosphoric, propionic, acetic, trifluoroacetic, formic acids, benzoic, maleic, fumaric, succinic, tartaric, citric, oxalic, glyoxylic, aspartic, ascorbic acid, alkylmonosulphonic acids such as, for example, methanesulphonic acid, ethanesulphonic acid, propanesulphonic acid, alkylsulphonic acids such as, for example, methanedisulphonic acid, alpha, beta-ethanedisulphonic acid, arylmonosulphonic acids such as benzenesulphonic acid and aryldisulphonic acids.
  • stereoisomerism can be defined in its broad sense as the isomerism of compounds having the same developed formulas, but whose different groups are arranged differently in space, such as in particular in monosubstituted cyclohexanes whose substituent can be in axial or equatorial position, and the different possible rotational conformations of the ethane derivatives.
  • stereoisomerism due to the different spatial arrangements of fixed substituents, either on double bonds or on rings, often called geometric isomerism or cis-trans isomerism.
  • the term stereoisomers is used in the present application in its broadest sense and therefore relates to all of the compounds indicated above.
  • the aryl and heteroaryl radicals in particular represent phenyl, pyridyl, indolyl, benzimidazolyl, pyrazolyl and pyrrolyl.
  • a preferred R 3 is preferably selected from aryl or heteroaryl, preferably from phenyl, pyridyl, indolyl, benzimidazolyl, pyrazolyl, and pyrrolyl.
  • Illustrative products of the invention according to its first aspect can be chosen from:
  • the subject of the invention is a process for preparing the products according to its first aspect.
  • R 1 is NHCO (R 2), and wherein R 2 and R 3 are as previously defined, said product of general formula (I) being obtained by:
  • R3 is as defined above, and wherein PG is a protecting group for the free intracyclic NH function of the thieno [2,3- ⁇ yrazole ring, and
  • the amine of general formula (X) is obtained by a protection of the NH function of the pyrazole ring of a product of general formula (IX):
  • alkyl is (C1-C6) alkyl.
  • the invention according to its second aspect also relates to a process for preparing a product of general formula (Ia) or (IIIa) below:
  • R3 and alkyl are as defined above, and wherein PG is a protecting group of the free intracyclic NH function of the thieno [2,3-c] pyrazole ring, and
  • an amine such as ifraAlSO.sub.1, 2-diaminocyclohexane, trans-.beta.-bis (methylamino) cyclohexane or, preferably, N, N'-dimethyl-1,2-diaminoethane, and
  • a base such as tripotassium phosphate or cesium carbonate
  • alkyl mercaptoacetate Alkyl-OCO-CH 2 -SH is cyclized with alkyl mercaptoacetate Alkyl-OCO-CH 2 -SH, in the presence of a base such as sodium carbonate.
  • the product of general formula (Villa) is advantageously obtained by (i) formylation of 3,4,5-tribromo-pyrazole to obtain 3,5-dibromo-4-formyl-pyrazole (VIII), and then (ii) protection of the intracyclic amino function of (VIII).
  • a preferred protection reaction can be carried out in the presence of ethylvinyl ether, and a catalytic amount of an acid such as hydrochloric acid ,.
  • the subject of the present invention is also, as medicaments, the products of formula (I) as defined above, as well as the addition salts with inorganic and organic acids or with the pharmaceutically acceptable inorganic and organic bases of said formula (I).
  • the invention relates to a pharmaceutical composition comprising a product according to its first aspect, in combination with a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the subject of the invention is the use of a product according to its first aspect, as an inhibitor of a protein kinase, preferably chosen from among Aurora2, CDK1, CDK2, CDK4, FAK, KDR, PLK1 and Tie2. .
  • the subject of the invention is the use of a product according to its first aspect, as an inhibitor of a protein kinase, preferably selected from Aurora2, CDK1, CDK2, CDK4, FAK, KDR, and Tie2.
  • a protein kinase preferably selected from Aurora2, CDK1, CDK2, CDK4, FAK, KDR, and Tie2.
  • a particularly preferred kinase is Aurora2.
  • a particularly preferred kinase is PLK1.
  • the invention relates to the use of a product according to its first aspect, for the manufacture of a medicament useful for treating a pathological state, in particular cancer.
  • the compounds of formula (I) may be prepared from the compounds of general formula (II), according to the following general synthesis scheme:
  • Reactions (a) and (d) can be carried out in the presence of a boronic acid derivative of R1 B (OR ') 2 type where R1 has the same meaning as above, of a palladium derivative (0 ) such as tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) or 1,1'-bis (diphenylphosphino) ferrocenedichloro palladium (II), a base such as sodium carbonate or cesium carbonate within an inert solvent such as a mixture of toluene, an alcohol (preferably ethanol) and water or such as dimethylformamide at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium according to general methods described by A. SUZUKI, Pure Appl.
  • a palladium derivative such as tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) or 1,1'-bis (diphenylphosphino) ferrocenedichloro palladium (II)
  • R 1 represents NHCO (R 2)
  • R 2 has the same meaning as above
  • this reaction may be carried out in the presence of an amide of the type (R 2) CONH 2 , iodide copper (I), an amine such as trans-1, 2-diaminocyclohexane, frans-1,2-bis (methylamino) cyclohexane or, and this is one of the aspects of the invention, N, N'-dimethyl-1,2-diaminoethane , and a base such as tripotassium phosphate or cesium carbonate in an inert solvent such as dioxane at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium, according to the general methods described by SL BUCHWALD et al., J. Am. Chem. Soc., 2002, 124, 7421; J. Am. Chem. Soc., 2001, 123, 7727.
  • the reactions (a) and (d) can be carried out in the presence of an amine of the R 4 NH 2 type, copper iodide (I) and a base such as for example cesium carbonate in an inert solvent such as for example dioxane at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium, according to the usual methods known to man of the job.
  • a base such as for example cesium carbonate
  • an inert solvent such as for example dioxane
  • the reactions (b) and (c) can be carried out in the presence of a derivative of R3ONH 2 type where R3 has the same meaning as above and trimethylaluminium in a solvent such as toluene at a temperature between 0 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • the reaction (e) is generally carried out according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule, in particular by applications of the methods described by TW Greene and PGM Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (2nd ed.), A Wiley - Interscience Publication (1991), or by Mc Omie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973) or by Bradford P. Mundy and Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley - Interscience Publication (1988).
  • the reaction (e) can be carried out, for example, in a basic medium, in the presence of potassium hydroxide or sodium hydroxide, in an inert solvent such as a mixture of tetrahydrofuran, water and potassium hydroxide.
  • an alcohol preferably ethanol or methanol
  • an alcohol alone ethanol or methanol from preferably
  • the reaction (f) is preferably carried out in the presence of a R3ONH 2 type derivative in which R3 has the same meaning as above and an O- (1H-benzotriazol-1) tetrafluoroborate type activation agent.
  • yl) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium (TBTU) for example, in the presence of a base (triethylamine or diisopropylethylamine for example) in an inert solvent (acetonitrile or dimethylformamide for example) at a temperature between 0 ° C. and the boiling point of the medium, or according to the well-known methods for coupling peptide chemistry (M.
  • reaction (f) can be carried out generally according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule, in particular by applications of the methods described by Bradford P. Mundy and Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley - Interscience Publication (1988).
  • the reaction (f) can be carried out under an inert atmosphere (for example under nitrogen or under argon) in the presence of oxalyl chloride, in an inert solvent such as dichloromethane, at a temperature of between 0.degree.
  • the deprotection reaction (g) may be carried out in the presence of a mineral acid such as hydrochloric acid, in a solvent such as tetrahydrofuran or water, at a temperature of between 20 ° C. and 20 ° C. boiling temperature of the reaction medium.
  • a mineral acid such as hydrochloric acid
  • a solvent such as tetrahydrofuran or water
  • the reaction (a) can be carried out in the presence of an organolithium such as n-butyllithium, in the presence of dimethylformamide, in an inert solvent such as diethyl ether or tetrahydrofuran at a temperature between -78 ° C and the ambient temperature.
  • organolithium such as n-butyllithium
  • dimethylformamide such as dimethylformamide
  • inert solvent such as diethyl ether or tetrahydrofuran
  • the protective reaction (b) can be carried out in the presence of ethyl vinyl ether in the presence of a catalytic amount of an acid such as hydrochloric acid, in an inert solvent such as toluene at a temperature between 20 ° C. and the boiling temperature of the reaction medium, or according to the well known methods for protecting the amine function (TW GREENE et al in Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience).
  • the reaction (c) can be carried out in the presence of ethyl mercaptoacetate, in the presence of a base such as sodium carbonate, in a solvent inert such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • a base such as sodium carbonate
  • a solvent inert such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • the protection reaction (a) can be carried out (when P represents an iron-butyloxycarbonyl group) using di-tert-butyldicarbonate in the presence of a base such as triethylamine or pyridine and optionally in the presence of N , N-dimethylamino-pyridine, in an inert solvent (dichloromethane for example) at a temperature between -10 0 C and the boiling temperature of the reaction medium, or (when P represents a 1-ethoxy-group) ethyl) in the presence of ethylvinyl ether, in the presence of a catalytic amount of an acid such as hydrochloric acid, in an inert solvent such as toluene at a temperature between 20 ° C and the temperature d boiling of the reaction medium, or according to the well-known methods of protecting the amine function (TW GREENE et al in Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience).
  • R 2 has the same meaning as above in the presence of a base such as triethylamine, pyridine, diisopropylethylamine, potassium carbonate or sodium, in an inert solvent (dimethylformamide, tetrahydrofuran, for example) or in the organic base itself at a temperature between 0 ° C. and the boiling temperature of the reaction medium (DAIDONE et al., Heterocycles, 1996, 43 (11), 2385).
  • a base such as triethylamine, pyridine, diisopropylethylamine, potassium carbonate or sodium
  • an inert solvent dimethylformamide, tetrahydrofuran, for example
  • anhydride (R 2) CO) 2 O where R 2 has the same meaning as above in an inert solvent (dimethylformamide, tetrahydrofuran, dichloromethane for example) or in the anhydride itself at a temperature of between 0 ° C. and the boiling temperature of the reaction medium (F. ALBERICIO, Synth.Commun., 2001, 31 (2), 225, G. PROCTER, Tetrahedron, 1995, 51 (47), 12837) .
  • R2 has the same meaning as above in the presence of an activating agent such as O- (7-aza-benzotriazol-1 hexafluorophosphate -yl) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium (HATU) in the presence of a base (pyridine, diisopropylethylamine or triethylamine for example) in an inert solvent (dimethylformamide for example) at a temperature between 0 ° C. and the boiling temperature of the reaction medium, or according to the well-known methods for coupling peptide chemistry (M. BODANSZKY et al., Principles of Peptide Synthesis, Spinger-Verleg, New York, NY, 1984, 9). -58) or the formation of an amide.
  • an activating agent such as O- (7-aza-benzotriazol-1 hexafluorophosphate -yl) -N, N, N ', N'-tetramethyluron
  • the deprotection reaction (c) can be carried out (when P represents a fert-butyloxycarbonyl group) in the presence of iodotrimethylsilane or in an acid medium (trifluoroacetic acid, or hydrochloric acid in a solvent such as dichloromethane or dioxane, for example ) or in basic medium (potassium carbonate in a solvent such as an alcohol (preferably methanol) at a temperature between 0 ° C.
  • an acid medium trifluoroacetic acid, or hydrochloric acid in a solvent such as dichloromethane or dioxane, for example
  • basic medium potassium carbonate in a solvent such as an alcohol (preferably methanol) at a temperature between 0 ° C.
  • the compounds of general formula (IX) may be prepared from ethyl 3-amino-4-cyano-5-methylsulfanylthiophene-2-carboxylate, according to the following general scheme:
  • the reaction (a) can be carried out in the presence of isopentyl nitrite, in an inert solvent such as dimethylformamide at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • the oxidation reaction (b) can be carried out in the presence of 3-chloroperoxybenzoic acid, in an inert solvent such as dichloromethane at a temperature of between -20 ° C. and room temperature.
  • the reaction (c) can be carried out in the presence of hydrazine, in an inert solvent such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 ° C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • an inert solvent such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 ° C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • the cyclization reaction (d) can be carried out in the presence of a mineral acid such as concentrated hydrochloric acid or concentrated sulfuric acid, in an inert solvent such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • a mineral acid such as concentrated hydrochloric acid or concentrated sulfuric acid
  • an inert solvent such as an alcohol (preferably ethanol) at a temperature between 20 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • the reaction (e) can be carried out in the presence of a product of R3ONH 2 type where R3 has the same meaning as above, and of trimethylaluminium in a solvent such as toluene, at a temperature between 0 0 C and the boiling temperature of the reaction medium.
  • protective groups of the amine function include 1-ethoxy-ethyl which can be regenerated in the presence in the presence of a mineral acid such as hydrochloric acid (in a solvent such as tetrahydrofuran or water, for example), tert-butyl carbamate which can be regenerated using iodotrimethylsilane or in an acid medium (trifluoroacetic acid, or hydrochloric acid in a solvent such as dichloromethane or dioxane, for example), benzyl carbamate which can be regenerated in the presence of hydrogen or in the presence of a mixture of a thiol (benzenethiol for example) and a Lewis acid (boron trifluoride etherate for example), acetyl which can be regenerated in acidic medium (hydrochloric acid for example), benzoyl which can be regenerated in acidic medium (hydrochloric acid for example), 2-trimethylsilanyl-ethoxymethyl which can be
  • esters methoxymethyl ester, benzyl ester, methyl ester, for example
  • the compounds of formula (I) are isolated and can be purified by the usual known methods, for example by crystallization, chromatography or extraction.
  • the enantiomers and diastereoisomers of the compounds of formula (I) are also part of the invention.
  • the compounds of formula (I) comprising a basic residue may optionally be converted into addition salts with a mineral or organic salt by the action of such an acid in an organic solvent such as an alcohol, a ketone, an ether or a chlorinated solvent.
  • organic solvent such as an alcohol, a ketone, an ether or a chlorinated solvent.
  • the compounds of formula (I) comprising an acidic residue may optionally be converted into metal salts or addition salts with nitrogenous bases according to the methods known per se.
  • These salts can be obtained by the action of a metal base (alkaline or alkaline earth for example), ammonia, an amine or an amine salt on a compound of formula (I), in a solvent.
  • the salt formed is separated by the usual methods.
  • salts can be prepared by reaction between said product and a mineral or organic acid.
  • Pharmaceutically acceptable salts include chlorides, nitrates, sulphates, hydrogen sulphates, pyrosulphates, bisulphates, sulphites, bisulphites, phosphates, monohydrogenphosphates, dihydrogenphosphates, metaphosphates, pyrophosphates, acetates, propionates, acrylates, 4-hydroxybutyrates, caprylates, caproates, decanoates, oxalates, malonates, succinates, glutarates, adipates, pimelates, maleates, fumarates, citrates, tartrates, lactates, phenylacetates, mandelates, sebacates, suberates, benzoates, phthalates, methanesulfonates, propanesulfonates, xylenesulfonates, salicylates,
  • compositions may be prepared by reaction between said product and a mineral or organic base.
  • Pharmaceutically acceptable bases include hydroxides of alkali or alkaline earth metal cations such as Li, Na, K, Mg, Ca 1 of the compounds basic amines such as ammonia, arginine, histidine, piperidine, morpholine, piperazine, triethylamine.
  • the LC / MS analyzes were performed on a Micromass LCT model connected to an HP 1100.
  • the abundance of the products was measured using an HP G1315A diode array detector over a range of 200-600 nm and a Sedex 65 light scattering detector. Mass spectral acquisition was performed over a range of 180 to 800. The data were analyzed using Micromass MassLynx software.
  • the separation was carried out on a Hypersil BDS C18 column, 3 ⁇ m (50 ⁇ 4.6 mm), eluting with a linear gradient of 5 to 90% of acetonitrile containing 0.05% (v / v) of trifluoroacetic acid ( TFA) in water containing 0.05% (v / v) TFA in 3.5 min at a flow rate of 1 mL / min.
  • the total analysis time, including the rebalancing period of the column, is 7 minutes.
  • Purifications by preparative LC-MS were generally performed using a Waters FractionsLynx system consisting of a Waters Model 600 gradient pump, a Waters Model 515 regeneration pump, a Waters Reagent Manager dilution pump, a Waters model 2700 autoinjector, two Rheodyne Model LabPro valves, a Model 996 Waters diode array detector, a Waters Model ZMD mass spectrometer and a Gilson Model 204 fraction collector. controlled by a Waters FractionLynx software.
  • a Waters FractionLynx system consisting of a Waters Model 600 gradient pump, a Waters Model 515 regeneration pump, a Waters Reagent Manager dilution pump, a Waters model 2700 autoinjector, two Rheodyne Model LabPro valves, a Model 996 Waters diode array detector, a Waters Model ZMD mass spectrometer and a Gilson Model 204 fraction collector. controlled by a Waters FractionL
  • the separation was carried out alternately on two Waters Symmetry columns (Ci 8 , 5 ⁇ M, 19 ⁇ 50 mm, catalog number 186000210), a column being regenerated with a water / acetonitrile mixture 95/5 (v / v) containing 0.07. % (v / v) of trifluoroacetic acid, while the other column was being separated. Elution of the columns was performed using a linear gradient of 5-95% acetonitrile containing 0.07% (v / v) trifluoroacetic acid in water containing 0.07% (v / v) d. trifluoroacetic acid at a flow rate of 10 ml / min.
  • the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C., then 1.8 cm 3 (1.8 mmol) of a 1N hydrochloric acid solution are added dropwise at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C. and is then heated at 40 ° C. for 4 hours.
  • the reaction medium is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) to give a residue which is taken up in 30 cm 3 of water, made alkaline with 2 cm 3 (2 mmol) of a solution of 0.1 N soda. There is formation of an insoluble material which is taken up in 50 cm 3 of dichloromethane. After filtration of the insoluble material on a paper filter, 0.079 g of a yellow solid is thus obtained which is purified by flash chromatography on a column of silica gel [(0.04-0.06 mm), eluent: 95/5: dichloromethane / methanol in volumes].
  • reaction mixture is stirred for 30 minutes at a temperature in the region of 20 ° C., then 0.29 g (0.9 mmol) of O- (1H-benzotriazol-1-yl) -N, N, N ', N'- tetramethyluronium tetrafluoroborate (TBTU) and stirred for 15 hours at a temperature of 2O 0 C. then poured 3 cm 3 of dimethylformamide and 1 cm 3 (7.13 mmol) of triethylamine and the reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature of about 2O 0 C and is then taken up in 100 cm 3 of dichloromethane and 50 cm 3 of water.
  • TBTU O- (1H-benzotriazol-1-yl) -N, N, N ', N'- tetramethyluronium tetrafluoroborate
  • Ethyl 1- (1-ethoxy-ethyl) -3- (1H-indol-2-yl) -1H-thieno [2,3-c] pyrazole-5-carboxylate can be prepared in the following manner. next :
  • Ethyl 3-bromo-1- (1-ethoxy-ethyl) -1H-thieno [2,3-c] pyrazole-5-carboxylate can be prepared in the following manner:
  • 3,5-Dibromo-1- (1-ethoxy-ethyl) -1H-pyrazole-4-carboxaldehyde can be prepared in the following manner:
  • 3,5-dibromo-1H-pyrazole-4-carboxaldehyde can be prepared in the following manner:
  • reaction medium is then cooled in an ice-water bath and 1000 cm 3 of water are poured. .
  • aqueous phase is extracted with 500 cm 3 of diethyl ether and 3 times 500 cm 3 of ethyl acetate.
  • the organic phase is dried over magnesium sulphate, concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) and the yellow solid obtained is taken up in 300 cm 3 of water and stirred for 2 hours at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the mixture is then filtered and the solid is washed with twice 50 cm 3 of water, dried under a ventilated hood and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. This gives 51, 3 g of 3,5-dibromo-1H-pyrazole-4-carboxaldehyde as a yellow powder melting at 173 ° C.
  • the aqueous phase is extracted with twice 40 cm 3 of acetate of ethyl and the organic extracts are combined, washed successively with 50 cm 3 of a 5N aqueous hydrochloric acid solution, with 50 cm 3 of water, with 40 cm 3 of a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, then with 50 cm 3 of water, dried over magnesium sulphate, filtered and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • Ethyl 1- (1-ethoxy-ethyl) -3 - ((E) -styryl) -1H-thieno [2,3-c] pyrazole-5-carboxylate can be prepared in the following manner: To a solution of 10.0 g (28.8 mmol) of ethyl 3-bromo-1- (1-ethoxy-ethyl) -1H-thieno [2,3- ⁇ yrazole-5-carboxylate in 300 cm 3 toluene are successively added 1.7 g (1.4 mmol) of tetrakis (triphenylphosphine) palladium [0], a solution of 6.6 g (43.2 mmol) of trans-styreneboronic acid in 40 g.
  • the residue is purified by argon pressure chromatography (80 kPa), on a cartridge containing 330 g of silica gel (particle size 32-63 ⁇ m), eluting with a mixture of cyclohexane / ethyl acetate (90/10 by volume).
  • the fractions containing the expected product are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C. 9.3 g of 1- (1-ethoxy-ethyl) -3 - (- E) -styryl) -1H-thieno [2,3-c] pyrazole-5-carboxylic acid ethyl ester as a yellow solid.
  • Rf 0.70, thin layer chromatography of silica gel, eluent: dichloromethane / methanol (98/2 by volume)).
  • Example 3 3 - [(thiophene-2-carbonyl) amino] -1H-thienor2,3-cipyrazole-5- (N-phenoxycarboxamide) hydrochloride.
  • the reaction medium is stirred at a temperature in the region of 80 ° C. for 0.5 hour, then at a temperature in the region of 20 ° C. for 0.5 hour, and finally at a temperature in the region of 80 ° C. for 0.5 hour.
  • the reaction medium is then brought to a temperature in the region of 20 ° C., poured into a mixture containing 40 cm 3 of brine and 40 cm 3 of ethyl acetate and decanted.
  • the aqueous phase is extracted with twice 40 cm 3 of ethyl acetate, the organic extracts are combined, washed successively with 50 cm 3 of a 2N aqueous solution of hydrochloric acid, with 50 cm 3 of water, with 40 cm 3 of a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and then with 40 cm 3 of water, dried over magnesium sulfate, filtered and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature of 4O 0 C.
  • the residue thus obtained is purified by flash chromatography on a column containing 30 g of silica gel (40-63 ⁇ m), eluting with a dichloromethane / methanol mixture (98/2 by volume), then on a column containing 30 g of silica gel (40-63 ⁇ m), eluting with a cyclohexane / ethyl acetate mixture (70/30 by volume).
  • the fractions containing the expected product are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue is purified by preparative plate chromatography.
  • Ethyl 1- (1-ethoxy-ethyl) -3 - [(thiophene-2-carbonyl) -amino] -1H-thieno [2,3-c] pyrazole-5-carboxylate can be prepared in the following manner. next :
  • the reaction mixture is heated at reflux for 20 hours, then it is cooled to a temperature of 25 ° C and filtered on Clarcel ® .
  • the solid is washed with 2 times 170 cm 3 of ethyl acetate.
  • the filtrate is extracted with 3 times 170 cm 3 of saturated brine and the organic phase is then dried over sodium sulfate, filtered and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the residue is purified by chromatography on a column of approximately 300 g of silica gel (particle size 40-63 ⁇ m), eluting with a mixture of cyclohexane / ethyl acetate (90/10 and 85/15 by volume).
  • the products according to the invention may be in non-chiral, or racemic form, or enriched in a stereoisomer, or enriched in an enantiomer; and may possibly be salified.
  • a product according to the invention may be used for the manufacture of a medicament useful for treating a pathological state, in particular a cancer.
  • the present invention also relates to therapeutic compositions containing a compound according to the invention, in combination with a pharmaceutically acceptable excipient according to the chosen mode of administration.
  • the pharmaceutical composition may be in solid, liquid or liposome form.
  • solid compositions include powders, capsules, tablets.
  • Oral forms may also include solid forms protected from the acidic environment of the stomach.
  • the supports used for the solid forms consist in particular of mineral supports such as phosphates, carbonates or organic supports such as lactose, celluloses, starch or polymers.
  • the liquid forms consist of solutions of suspensions or dispersions. They contain as dispersive carrier either water, or an organic solvent (ethanol, NMP or others) or mixtures of surfactants and solvents or complexing agents and solvents.
  • the liquid forms will preferably be injectable and, therefore, will have an acceptable formulation for such use.
  • Acceptable injection routes of administration include intravenous, intraperitoneal, intramuscular, and subcutaneous routes, with the intravenous route being preferred.
  • the administered dose of the compounds of the invention will be adapted by the practitioner according to the route of administration of the patient and the state of the latter.
  • the compounds of the present invention may be administered alone or in admixture with other anticancer agents.
  • anticancer agents we can mention:
  • Platinum derivatives such as cisplatin, carboplatin or oxaliplatin
  • antibiotic agents such as bleomycin, mitomycin, dactinomycin • antimicrotubule agents such as vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, taxoids (paclitaxel and docetaxel)
  • Anthracyclines such as doxorubicin, daunorubicin, idarubicin, epirubicin, mitoxantrone, losoxantrone
  • Fluoropyrimidines such as 5-fluorouracil, UFT, floxuridine
  • Cytidine analogues such as 5-azacytidine, cytarabine, gemcitabine, 6-mercaptomurine, 6-thioguanine
  • Adenosine analogues such as pentostatin, cytarabine or fludarabine phosphate
  • antivascular agents such as derivatives of combretastatin or colchicine and their prodrugs.
  • CDKs cyclin-dependent kinases
  • endogenous CDK inhibitors that are activated family of INK4 and KIP / CIP
  • INK4 and KIP / CIP endogenous CDK inhibitors
  • Cyclin E activates the Cdk2 kinase which then acts to phosphorylate the pRb protein (retinoblastoma protein) resulting in a commitment to irreversible cell division and a transition to the S phase (PL Toogood, Medicinal Research Reviews (2001), 21 (6)).
  • the CDK2 and CDK3 kinase are required for progression in G1 phase and S phase entry.
  • Cyclin A CDK2 plays a role in the inactivation of E2F and is necessary for the realization of the S phase (TD Davies et al (2001) Structure 9 , 389-3).
  • the CDK1 / cyclin B complex regulates the progression of the cell cycle between the G2 phase and the M phase.
  • the downregulation of the CDK / Cyclin B complex prevents normal cells from entering S phase before the G2 phase has been correctly and completely performed.
  • CAKs cyclin-dependent kinases
  • the present invention relates to novel benzothiazole derivatives. It thus relates to the use of benzothiazole derivatives as kinase inhibition agents and more particularly as anticancer agents. Among these it preferably relates to the sulfonic esters of benzothiazoles. It also relates to the use of said derivatives for the preparation of a medicinal product intended for the treatment of humans.
  • PLKs Poly-Like Kinases
  • PLKs include PLK1, PLK2, PLK3 and PLK4.
  • PLKs are known for their essential role in mitosis in many species (bacteria, Drosophila, Xenopes for example). RNAi experiments in Drosophila have shown that polio suppression leads to G2 / M cell arrest and apoptosis.
  • PLK1 is the human counterpart of polo. During mitosis, PLK1 has been shown to play a role in centrosome maturation and microtubule dynamics involved in mitotic spindle formation. PLK1 is also involved in the mitosis output of cells. PLK1 probably also has a role in cytokinesis. PLK1 overexpression has also been shown to be a poor prognostic factor in the case of cancer.
  • Tie-2 is a member of a family of tyrosine kinase receptors, specific for endothelial cells.
  • Tie2 is the first tyrosine kinase receptor known to have both the agonist (angiopoietin 1 or Ang1) that stimulates receptor autophosphorylation and cell signaling [S. Davis et al (1996) CeII 87, 1161-1169] and the antagonist (angiopoietin 2 or Ang2) [PC Maisonpierre et al. (1997) Science 277, 55-60].
  • Angiopoietin 1 can synergize with VEGF in the late stages of neoangiogenesis [AsaharaT. Wax. Res (1998) 233-240). Knockout experiments and transgenic manipulations of Tie2 or Ang1 expression lead to animals with vascularization defects [DJ. Dumont et al (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 and C. Suri (1996) CeII 87, 1171-1180].
  • Tie2 inhibitors may be used in situations where neovascularization is inappropriate (ie diabetic retinopathy, chronic inflammation, psoriasis, Kaposi's sarcoma, chronic neovascularization due to macular degeneration, rheumatoid arthritis, infantile hemangioma and cancers).
  • neovascularization is inappropriate (ie diabetic retinopathy, chronic inflammation, psoriasis, Kaposi's sarcoma, chronic neovascularization due to macular degeneration, rheumatoid arthritis, infantile hemangioma and cancers).
  • FAK is a cytoplasmic tyrosine kinase that plays an important role in the transduction of the signal transmitted by integrins, a family of heterodimeric receptors for cell adhesion.
  • FAK and integrins are colocalized in perimembrane structures called adhesion plates. It has been shown in many cell types that the activation of FAK and its phosphorylation on tyrosine residues and in particular its autophosphorylation on tyrosine 397 were dependent on the binding of integrins to their extracellular ligands and therefore induced during cell adhesion [Kornberg L, et al. J. Biol. Chem. 267 (33): 23439-442. (1992)].
  • Activation of FAK can also induce the Jun NH2-terminal kinase (JNK) signaling pathway and result in cell progression to the G1 phase of the cell cycle [Oktay et al., J. CeII. Biol. 145: 1461-1469. 1999].
  • JNK Jun NH2-terminal kinase
  • Phosphatidylinositol-3-OH kinase (PI3-kinase) also binds to FAK on tyrosine 397 and this interaction may be required for PI3-kinase activation [Chen and Guan, Proc. Nat.
  • the FAK / Src complex phosphorylates various substrates such as paxillin and p130CAS in fibroblasts [Vuori et al. Mol. IECI. Biol. 16: 2606-2613. 1996].
  • FAK has also been shown to promote cell migration in vitro.
  • fibroblasts deficient for the expression of FAK knockout mice for FAK
  • FRNK C-terminal domain of FAK
  • KDR Keratinase insert Domain Receptor
  • VEGF-R2 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2
  • VEGF-R2 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2
  • VEGF-R2 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2
  • VEGF-R2 mutants Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol 56, p.1615-1620.
  • the VEGF-R2 receptor appears to have no other function in the adult than that related to the angiogenic activity of VEGF. Therefore, a selective inhibitor of VEGF-R2 kinase activity should demonstrate only low toxicity.
  • the inhibitory effect of compounds on the Aurora2 kinase is determined by a radioactivity scintillation test using nickel chelate.
  • a complete recombinant Aurora2 enzyme whose N-terminus has been labeled with histidine, was expressed in E. coli and purified to near homogeneity.
  • NuMA nuclear protein that associates with the Mitotic Apparatus
  • the NuMA substrate is equilibrated by chromatography on a PD10 Pharmacia column, in a buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl 2 ) added with 10% (v / v) glycerol and 0.05% (w / v) NP40.
  • Aurora2 kinase activity is measured by scintillation with nickel chelate (New England Nuclear, model SMP107). Each well contains 100 ⁇ l of the following solution: 0.02 ⁇ M Aurora2; 0.5 ⁇ M NuMA substrate; 1 ⁇ M of ATP supplemented with 0.5 ⁇ Ci of ATP- [ 33 P]. The solutions are incubated for 30 minutes at 37 ° C. The test buffer is then removed and the wells are rinsed twice with 300 .mu.l of kinase buffer. Radioactivity is measured in each well using a Packard Model Top Count NXT.
  • the background noise is deduced from the radioactivity measurement by two-fold measurement in wells containing radioactive ATP alone containing buffered kinase treated in the same manner as the other samples.
  • the control activity is performed by measuring in duplicate the radioactivity in the complete test mixture (ATP, Aurora2 and NuMA substrate), in the absence of test compound.
  • Inhibition of Aurora2 activity with a compound of the invention is expressed as percent inhibition of control activity in the absence of test compound. Staurosporine is added to each plate as an inhibition control.
  • Two recombinant baculoviruses carrying the human sequences coding respectively for CDK2 and CyclineE are used to co-infect Sf21 insect cells.
  • Two to three days after the start of co-infection the cells are harvested by centrifugation and then stored at -40 ° C. until they are used. After thawing and mechanical lysis of the cells, the complex present in the lysis supernatant is purified by nickel affinity chromatography (IMAC), and stored at -80 ° C.
  • IMAC nickel affinity chromatography
  • a 96-well plate format coated with streptavidin is used to test the activity of the compounds on the kinase activity of CDK2 / Cyclin E.
  • biotinylated peptide substrate, fragment of the pRb protein, (biotinyl-SACPLNLPLQNNHTAADMYLSPVRSPKKKGSTTR-OH) is solubilized at a concentration of 1 mM in kinase buffer (50 mM HEPES / NaOH, 1 mM NaCl, 5 mM MgCl 2 pH 7.5) in order to constitute a stock solution stored at -20 ° C. in the form of 110 ⁇ l aliquots.
  • kinase buffer 50 mM HEPES / NaOH, 1 mM NaCl, 5 mM MgCl 2 pH 7.5
  • the final volume of each well is 100 ⁇ l
  • the final concentration of substrate is 10 ⁇ M
  • the final concentrations of inhibitors are 10 ⁇ M, 3.33 ⁇ M, 1, 11 ⁇ M, 0.37 ⁇ M , 0.123 ⁇ M, 0.041 ⁇ M and 0.014 ⁇ M (depending on the concentration of the intermediate dilution)
  • the final concentration of ATP is 1 ⁇ M
  • the final amount of 33 ⁇ is 1 ⁇ Ci / well
  • the final concentration of complex CDK2 / cyclin E is 20 nM.
  • test plate After the addition of all the reagents, the test plate incubated at 30 ° C. with orbital shaking at 650 rpm.
  • the incorporation of 33 P into the peptide is quantified by scintillation counting with a Packard Topcount.NXT apparatus.
  • the inhibitory activity of the products of the invention is evaluated by measuring the concentration of inhibitor allowing a 50% reduction in enzymatic activity (IC 50).
  • Tie2 The human Tie2 coding sequence corresponding to the amino acids of the 776-1124 intracellular domain was generated by PCR using cDNA isolated from human placenta as a template. This sequence was introduced into a baculovirus expression vector pFastBacGT as a GST fusion protein.
  • the inhibitory effect of the molecules is determined in a Tie2 PLC phosphorylation assay in the presence of GST-Tie2 purified to about 80% homogeneity.
  • the substrate is composed of SH2-SH3 fragments of PLC expressed as GST fusion protein.
  • Tie2 kinase activity was measured in 2mM MOPS buffer pH 7.2, containing 10mM MgCl 2 , 10mM MnCl 2 , 1mM DTT, 10mM glycerophosphate.
  • a reaction mixture composed of 70 .mu.l of kinase buffer containing 100 ng of GST-Tie2 enzyme per well is deposited. Then 10 .mu.l of the test molecule diluted in DMSO at a concentration of 10% maximum are added. For a given concentration, each measurement is made in four copies.
  • the reaction is initiated by adding 20 ⁇ l of solution containing 2 ⁇ g of GST-PLC, 2 ⁇ M of cold ATP and 1 ⁇ Ci of 33 P [ATP]. After 1 hour of incubation at 37 ° C., the reaction is stopped by adding 1 volume (100 ⁇ l) of 200 mM EDTA. After removal of the incubation buffer, the wells are washed three times with 300 ⁇ l of PBS. The radioactivity is measured on a M icroBetai 450 Wallac.
  • Inhibition of Tie2 activity is calculated and expressed as percent inhibition over control activity determined in the absence of compound.

Abstract

Produits de formule (I), dans laquelle R1 représente R2, NHCO(R2), CH=CH-(R2) et NH-R4 avec R2 représente alkyle, cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle et hétéroarylalkyle ; R3 représente alkyle, alkyl-aryle, alkyl-hétéroaryle, -aryle, -hétéroaryle ; R4 représente aryle, hétéroaryle,cycloalkyle, hétérocycloalkyle, tous éventuellement substitués ; ces produits étant sous toutes les formes isomères et les sels ; leur préparation ; à titre de médicaments notamment comme inhibiteurs de protéines kinases; ainsi préparation d'hydroxamates substitués par des hétérocycles condensés, leur procédé de préparation, des compositions les contenant, et leur utilisation comme médicament, en particulier en tant qu'agents anticancéreux.

Description

THIENOf2,3-c1PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION
La présente invention concerne notamment des thiéno[2,3-c]pyrazoles substitués, leur procédé de préparation, des compositions les contenant, et leur utilisation comme médicament.
Plus particulièrement, et selon un premier aspect, l'invention concerne des thiéno[2,3-c]pyrazoles substitués, utiles comme agents anticancéreux.
Des 1 H-thiéno[2,3-c]pyrazoles sont connus de WO 04/013146 et de WO 03/101968. Ces produits sont présentés comme inhibiteurs de nombreuses protéines kinases. Toutefois, l'administration de tels produits à des patients peut induire des effets secondaires importants, en raison de leur large spectre d'action. Ainsi, l'obtention d'inhibiteurs spécifiques d'une sélection de protéines, notamment de kinases, est recherchée.
Contre toute attente, il a été trouvé qu'il est possible d'obtenir des inhibiteurs de la kinase Aurora 2 (Aurora A) et de quelques autres kinases utiles en oncologie, par des 1 H-thiéno[2,3-c]pyrazoles substitués.
La présente invention a ainsi pour objet les produits, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000002_0001
dans laquelle :
(i) R1 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par R2, NHCO(R2), -CH=CH-(R2), NH-R4 dans lequel R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3- C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle ; R3 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par - (C1-C6)alkyle, -(C1-C6)alkyl-aryle, -(C1-C6)alkyl-hétéroaryle, - aryle, -hétéroaryle ;
R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3-C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, les radicaux R2, R3 et R4 étant éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux identiques ou différents choisis parmi les atomes d'halogène et les radicaux hydroxyle, alcoxy, cycloalkyle, NH2, NHAIk, N(Alk)2, alkyle, hydroxyalkyle, hétérocycloalkyle et phényle lui-même éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux identiques ou différents choisis parmi les atomes d'halogène et les radicaux hydroxyle, NH2, alcoxy, alkyle et hydroxyalkyle; sous réserve que, lorsque R3 est -(C1-C6)alkyle, alors R1 n'est pas : aryle, hétéroaryle ou -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est sélectionné dans le groupe constitué par aryle, hétéroaryle,
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I). Ces produits répondent à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000003_0001
dans laquelle :
(i) R1 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par R2, NHCO(R2), -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3-C9)cycloalkyle, hétérocycloalkylθ, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle ;
(ii) R3 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par - (C1-C6)alkyle, -(C1-C6)alkyl-aryle, -(C1-C6)alkyl-hétéroaryle, -aryle, - hétéroaryle ;
sous réserve que, lorsque R3 est -(C1 -C6)alkyle, alors R1 n'est pas : aryle, hétéroaryle ou -CH=CH-(R2) , dans lequel R2 est sélectionné dans le groupe constitué par aryle, hétéroaryle.
La présente invention a ainsi pour objet un produit de formule (I) tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que R1 est choisi parmi aryle, hétéroaryle, NHCO(R2) et NH-R4,.avec R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3-C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle et R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3-C9)cycloalkyle et hétérocycloalkyle,
La présente invention a ainsi pour objet un produit de formule (I) tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que R1 représente NH-R4,.avec R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3-C9)cycloalkyle et hétérocycloalkyle,
Dans les produits de formule (I) et dans ce qui suit:
- le terme radical alkyle désigne les radicaux, linéaires et ramifiés renfermant au plus 12 atomes de carbone, tels que par exemple les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, tert-butyle, pentyle, isopentyle, hexyle, isohexyle et également heptyle, octyle, nonyle et décyle ainsi que leurs isomères de position linéaires ou ramifiés ;
- le terme atome d'halogène désigne les atomes de chlore, de brome, d'iode ou de fluor et de préférence l'atome de chlore, de brome ou de fluor ;
- le terme radical cycloalkyle désigne un radical carbocyclique saturé renfermant 3 à 10 atomes de carbone et désigne ainsi notamment les radicaux cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle et cyclohexyle et tout particulièrement les radicaux cyclopentyle et cyclohexyle ; le terme radical hétérocycloalkyle désigne ainsi un radical carbocyclique monocyclique ou bicyclique interrompu par un ou plusieurs hétéroatomes, identiques ou différents, choisis parmi les atomes d'oxygène, d'azote ou de soufre : on peut citer par exemple les radicaux morpholinyle, thiomorpholinyle, aziridyle, azétidyle, pipérazinyle, pipéridyle, homopipérazinyle, pyrrolidinyle, imidazolidinyle, pyrazolidinyle, tétrahydrofuryle, tétrahydrothiényle, hexahydropyranne, oxodihydropyridazinyle, tous ces radicaux étant éventuellement substitués ; les termes aryle et hétéroaryle désignent des radicaux insaturés ou partiellement insaturés, respectivement carbocycliques et hétérocycliques, monocycliques ou bicycliques, renfermant au plus 12 chaînons, pouvant éventuellement contenir un chaînon -C(O), les radicaux hétérocycliques contenant un ou plusieurs hétéroatomes identiques ou différents choisis parmi O, N, ou S avec N, le cas échéant, éventuellement substitué ; le terme radical aryle désigne ainsi des radicaux monocycliques ou bicycliques renfermant 4 à 12 chaînons tels que par exemple par exemple les radicaux phényle, naphtyle, biphényle, indényle, fluorényle et anthracényle, plus particulièrement les radicaux phényle et naphtyle et encore plus particulièrement le radical phényle. On peut noter qu'un radical carbocyclique contenant un chaînon -C(O) est par exemple le radical tétralone ; le terme radical hétéroaryle désigne ainsi des radicaux monocycliques ou bicycliques renfermant 4 à 12 chaînons : des radicaux hétéroaryles monocycliques tels que par exemple les radicaux dioxolane, dioxane, dithiolane, thiooxolane, thiooxane, thiényle tel que 2-thiényle et 3-thiényle, furyle tel que 2-furyle, 3-furyle, pyrannyle, pyrrolyle, pyrrolinyle, pyrazolinyle, imidazolyle, pyrazolyle, pyridyle tel que 2-pyridyle, 3-pyridyle et 4-pyridyle, pyrazinyle, pyrimidinyle, pyridazinyle, oxazolyle, thiazolyle, isothiazolyle, diazolyle, thiadiazolyle, thiatriazolyle, oxadiazolyle, isoxazolyle tel que 3- ou 4-isoxazolyle, furazannyle, tétrazolyle libre ou salifié, tous ces radicaux étant éventuellement substitués parmi lesquels plus particulièrement les radicaux thiényle tel que 2-thiényle et 3-thiényle, furyle tel que 2-furyle, pyrrolyle, pyrrolinyle, pyrazolinyle, imidazolyle, pyrazolyle, oxazolyle, isoxazolyle, pyridyle, pyridazinyle, ces radicaux étant éventuellement substitués ; des radicaux hétéroaryles bicycliques tels que par exemple les radicaux benzothiényle tel que 3-benzothiényle, benzothiazolyle, quinolyle, isoquinolyle, dihydroquinolyle, quinolone, tétralone, adamentyl, benzofuryle, isobenzofuryle, dihydrobenzofuranne, éthylènedioxyphényle, thianthrényle, benzopyrrolyle, benzimidazolyle, benzoxazolyle, thionaphtyle, indolyle, azaindolyle, indazolyle, purinyle, thiénopyrazolyle, tétrahydroindazolyle, tétrahydrocyclopentapyrazolyle, dihydrofuropyrazolyle, tétrahydropyrrolopyrazolyle, oxotétrahydropyrrolopyrazolyle, tétrahydropyranopyrazolyle, tétrahydropyridinopyrazolyle ou oxodihydropyridino-pyrazolyle, tous ces radicaux étant éventuellement substitués ;
Le ou les radicaux carboxy des produits de formule (I) peuvent être salifiés ou estérifiés par les groupements divers connus de l'homme du métier parmi lesquels on peut citer, par exemple :
- parmi les composés de salification, des bases minérales telles que, par exemple, un équivalent de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium ou des bases organiques telles que, par exemple, la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine, la N,N-diméthyléthanolamine, le tris (hydroxyméthyl) amino méthane, l'éthanolamine, la pyridine, la picoline, la dicyclohexylamine, la morpholine, la benzylamine, la procaïne, la lysine, l'arginine, l'histidine, la N-méthylglucamine,
- parmi les composés d'estérification, les radicaux alkyle pour former des groupes alcoxy carbonyle tel que, par exemple, méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle, tert-butoxycarbonyle ou benzyloxycarbonyle, ces radicaux alkyles pouvant être substitués par des radicaux choisis par exemple parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxyle, alcoxy, acyle, acyloxy, alkylthio, amino ou aryle comme, par exemple, dans les groupements chlorométhyle, hydroxypropyle, méthoxyméthyle, propionyloxyméthyle, méthylthiométhyle, diméthylaminoéthyle, benzyle ou phénéthyle.
Les sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques des produits de formule (I) peuvent être, par exemple, les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, iodhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique, propionique, acétique, trifluoroacétique, formique, benzoïque, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique, ascorbique, les acides alcoylmonosulfoniques tels que par exemple l'acide méthanesulfonique, l'acide éthanesulfonique, l'acide propanesulfonique, les acides alcoyldisulfoniques tels que par exemple l'acide méthanedisulfonique, l'acide alpha, bêta-éthanedisulfonique, les acides arylmonosulfoniques tels que l'acide benzènesulfonique et les acides aryldisulfoniques.
On peut rappeler que la stéréoisomérie peut être définie dans son sens large comme l'isomérie de composés ayant les mêmes formules développées, mais dont les différents groupes sont disposés différemment dans l'espace, tels que notamment dans des cyclohexanes monosubstitués dont le substituant peut être en position axiale ou équatoriale, et les différentes conformations rotationnelles possibles des dérivés de l'éthane. Cependant, il existe un autre type de stéréoisomérie, dû aux arrangements spatiaux différents de substituants fixés, soit sur des doubles liaisons, soit sur des cycles, que l'on appelle souvent isomérie géométrique ou isomérie cis-trans. Le terme stéréoisomères est utilisé dans la présente demande dans son sens le plus large et concerne donc l'ensemble des composés indiqués ci-dessus. Les radicaux aryle et hétéroaryle représentent notamment phényle, pyridyle, indolyle, benzimidazolyle, pyrazolyle et pyrrolyle.
Un R1 préféré peut être choisi parmi aryle ; hétéroaryle ; -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est choisi parmi aryle et hétéroaryle ; et NHCO(R2).
Un R3 préféré est avantageusement choisi parmi aryle ou hétéroaryle, de préférence parmi phényle, pyridyle, indolyle, benzimidazolyle, pyrazolyle, et pyrrolyle.
Des produits illustratifs de l'invention selon son premier aspect peuvent être choisis parmi :
3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide),
3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide), et
3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide). Les produits conformes à l'invention peuvent se présenter sous forme non chirale, ou racémique, ou enrichie en un stéréo-isomère, ou enrichie en un énantiomère ; et sont éventuellement salifiés.
Selon un second aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation des produits selon son premier aspect.
En particulier l'invention concerne un procédé de préparation d'un produit de formule générale (I) suivante :
Figure imgf000008_0001
dans laquelle R1 est NHCO(R2), et dans lequel R2 et R3 sont tels que définis précédemment, ledit produit de formule générale (I) étant obtenu par :
(i) couplage entre (i-a) une aminé de formule générale (X) suivante :
R
Figure imgf000008_0002
dans laquelle R3 est tel que défini précédemment, et dans lequel PG est un groupe protecteur de la fonction NH libre intracyclique du noyau thiéno[2,3- φyrazole, et
(i-b) un acide carboxylique R2-COOH en présence d'un agent de couplage, ou un dérivé d'acide carboxylique tel qu'un chlorure d'acide ou un anhydride, en présence d'une base telle qu'une aminé tertiaire ou un carbonate d'un métal alcalin ; puis
(ii) clivage de PG.
Selon un mode de réalisation préféré, l'aminé de formule générale (X) est obtenue par une protection de la fonction NH du noyau pyrazole d'un produit de formule générale (IX):
Figure imgf000009_0001
dans lequel R3 est tel que défini précédemment, le produit de formule générale (IX) étant obtenu par réaction entre :
(i) R3ONH2, en présence de trialkylaluminium, par exemple du triméthylaluminium, et
(ii) un produit de formule générale (XIV):
Alkyl-o
Figure imgf000009_0002
dans lequel alkyl est (C1-C6)alkyl.
L'invention selon son second aspect concerne également un procédé de préparation d'un produit de formule générale (la) ou (Illa) suivante :
Figure imgf000010_0001
dans laquelle R2, R3 sont tels que définis précédemment et alkyl est (C1- C6)alkyl, ledit produit de formule générale (la) ou (Illa) étant obtenu au moyen des étapes suivantes:
(i) couplage entre (i-a) un produit de formule générale (V) ou (lia) suivante :
Figure imgf000010_0002
dans laquelle R3 et alkyl sont tels que définis précédemment, et dans laquelle PG est un groupe protecteur de la fonction NH libre intracyclique du noyau thiéno[2,3-c]pyrazole, et
(i-b) un produit de formule générale (R2)CONH2, en présence :
- d'un catalyseur tel que Tiodure de cuivre (I),
- d'une aminé telle que le ifraA7s-1 ,2-diaminocyclohexane, le trans-"\ ,2- bis(méthylamino)cyclohexane ou, de préférence le N,N'-diméthyl-1 ,2- diaminoéthane, et
- d'une base telle que le phosphate tripotassique ou le carbonate de césium, et
(ii) clivage de PG. L'invention selon son second aspect concerne également un procédé de préparation d'un produit de formule générale (lia) suivante :
Figure imgf000011_0001
dans laquelle Alkyl et PG sont tels que définis précédemment, comprenant une étape dans laquelle un produit de formule générale (Villa):
(Villa)
Figure imgf000011_0002
est cyclisé avec un mercaptoacétate d'alkyle Alkyl-OCO-CH2~SH, en présence d'une base telle que le carbonate de sodium.
Le produit de formule générale (Villa) est avantageusement obtenu par (i) formylation de 3,4,5-tribromo-pyrazole pour l'obtention de 3,5-dibromo-4- formyl-pyrazole (VIII), puis (ii) protection de la fonction aminé intracyclique de (VIII).
une réaction de protection préférée peut s'effectuer en présence d'éthylvinyl éther, et d'une quantité catalytique d'un acide tel que l'acide chlorhydrique,.
La présente invention a également pour objet à titre de médicaments, les produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I). Selon un troisième aspect, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant un produit selon son premier aspect, en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. Selon un quatrième aspect, l'invention a pour objet l'utilisation d'un produit selon son premier aspect, comme inhibiteur d'une protéine kinase, de préférence choisie parmi Aurora2, CDK1 , CDK2, CDK4, FAK, KDR, PLK1 et Tie2.
Ainsi, l'invention a pour objet l'utilisation d'un produit selon son premier aspect, comme inhibiteur d'une protéine kinase, de préférence choisie parmi Aurora2, CDK1 , CDK2, CDK4, FAK, KDR, et Tie2.
Une kinase particulièrement préférée est Aurora2.
Une kinase particulièrement préférée est PLK1.
Selon un cinquième aspect, l'invention pour objet l'utilisation d'un produit selon son premier aspect, pour la fabrication d'un médicament utile pour traiter un état pathologique, en particulier le cancer.
Les composés de formule (I) peuvent être préparés à partir des composés de formule générale (II), selon le schéma de synthèse général suivant:
Figure imgf000013_0001
(g)
Figure imgf000013_0002
Les réactions (a) et (d) peuvent s'effectuer en présence d'un dérivé d'un acide boronique de type R1 B(OR')2 où R1 a la même signification que précédemment, d'un dérivé de palladium (0) tel que le tétrakis(triphényl- phosphine)palladium (0) ou le 1 ,1'-bis-(diphénylphosphino)ferrocènedichloro- palladium (II), d'une base telle que le carbonate de sodium ou le carbonate de césium au sein d'un solvant inerte tel qu'un mélange de toluène, d'un alcool (éthanol de préférence) et d'eau ou tel que le diméthylformamide à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel selon les méthodes générales décrites par A. SUZUKI, Pure Appl. Chem., 1991 , 63, 419, ou bien en présence d'un dérivé de type Sn(RI)4 où R1 a la même signification que précédemment, d'un dérivé de palladium tel que le dichlorobis(triphénylphosphine)palladium (II) au sein d'un solvant inerte tel que le diméthylformamide ou le dioxanne à une température comprise entre 2O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, selon les méthodes générales décrites par J. STILLE, Angew. Chem. Int. Ed., 1986, 25, 508. Alternativement, lorsque R1 représente NHCO(R2) où R2 a la même signification que précédemment, cette réaction peut s'effectuer en présence d'un amide de type (R2)CONH2, d'iodure de cuivre (I), d'une aminé telle que le trans-1 ,2-diaminocyclohexane, le frans-1,2-bis(méthylamino)cyclohexane ou, - et c'est un des aspects de l'invention -, le N,N'-diméthyl-1 ,2- diaminoéthane, et d'une base telle que le phosphate tripotassique ou le carbonate de césium au sein d'un solvant inerte tel que le dioxanne à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, selon les méthodes générales décrites par S. L. BUCHWALD et al., J. Am. Chem. Soc, 2002, 124, 7421 ; J. Am. Chem. Soc, 2001 , 123, 7727.
Alternativement, lorsque R1 représente NHR4 où R4 a la même signification que précédemment, les réactions (a) et (d) peuvent s'effectuer en présence d'un aminé de type R4NH2, d'iodure de cuivre (I) et d'une base telle que par exemple le carbonate de césium au sein d'un solvant inerte tel que par exemple le dioxanne à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, selon les méthodes usuelles connues de l'homme du métier.
Alternativement, lorsque R1 représente NHR4 où R4 a la même signification que précédemment, les réactions (a) et (d) peuvent aussi s'effectuer selon les méthodes usuelles de substitution nucléophile aromatique (SNAr).
Les réactions (b) et (c) peuvent s'effectuer en présence d'un dérivé de type R3ONH2 où R3 a la même signification que précédemment et de triméthylaluminium au sein d'un solvant tel que le toluène à une température comprise entre 00C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
La réaction (e) s'effectue généralement selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la molécule, notamment par applications des méthodes décrites par T. W. Greene et P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (2 ème éd.), A. Wiley - Interscience Publication (1991 ), ou par Mc Omie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press (1973) ou par Bradford P. Mundy et Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley - Interscience Publication (1988). La réaction (e) peut s'effectuer par exemple en milieu basique, en présence d'hydroxyde de potassium ou d'hydroxyde de sodium, au sein d'un solvant inerte tel qu'un mélange de tétrahydrofuranne, d'eau et d'un alcool (éthanol ou méthanol de préférence) ou bien d'un alcool seul (éthanol ou méthanol de préférence), à une température comprise entre 2O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, de préférence à la température de reflux du milieu réactionnel.
La réaction (f) s'effectue de préférence en présence d'un dérivé de type R3ONH2 où R3 a la même signification que précédemment et d'un agent d'activation du type tetrafluoroborate de O-(1 H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'- tetraméthyluronium (TBTU) par exemple, en présence d'une base (triéthylamine ou diisopropyléthylamine par exemple) au sein d'un solvant inerte (acétonitrile ou diméthylformamide par exemple) à une température comprise entre 00C et la température d'ébullition du milieu, ou selon les méthodes bien connues de couplage de la chimie peptidique (M. BODANSZKY et coll., Principles of Peptide Synthesis, Spinger-Verlag, New York, NY, 1984, 9-58) ou de la formation d'un amide. Alternativement, la réaction (f) peut s'effectuer généralement selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la molécule, notamment par applications des méthodes décrites par Bradford P. Mundy et Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley - Interscience Publication (1988). Par exemple la réaction (f) peut s'effectuer sous atmosphère inerte (par exemple sous azote ou sous argon) en présence de chlorure d'oxalyle, au sein d'un solvant inerte tel que du dichlorométhane, à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, de préférence à une température voisine de 200C ou bien en présence de chlorure de sulfinyle, au sein d'un solvant inerte tel que du chloroforme, à une température comprise entre 20°C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, de préférence à la température de reflux du milieu réactionnel, suivi d'une réaction en présence d'un dérivé de type R3ONH2 où R3 a la même signification que précédemment et d'une base telle que la triéthylamine ou la pyridine, au sein d'un solvant inerte tel que le diméthylformamide, à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
La réaction de déprotection (g) peut s'effectuer en présence d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, au sein d'un solvant tel que le tétrahydrofuranne ou l'eau, à une température comprise entre 2O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel. Les composés de formule générale (II) peuvent être préparés à partir du 3,4,5-tribromo-pyrazole, selon le schéma de synthèse général suivant:
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0003
Figure imgf000016_0002
(H) (VIII)
La réaction (a) peut s'effectuer en présence d'un organolithien tel que le n- butyllithium, en présence de diméthylformamide, au sein d'un solvant inerte tel que le diéthyl éther ou le tétrahydrofuranne à une température comprise entre -78°C et la température ambiante.
La réaction de protection (b) peut s'effectuer en présence d'éthylvinyl éther, en présence d'une quantité catalytique d'un acide tel que l'acide chlorhydrique, au sein d'un solvant inerte tel que le toluène à une température comprise entre 2O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, ou selon les méthodes bien connues de protection de la fonction aminé (T. W. GREENE et coll. dans Protective Groups in Organic Synthesis, third édition, 1999, Wiley-lnterscience).
La réaction (c) peut s'effectuer en présence de mercaptoacétate d'éthyle, en présence d'une base telle que le carbonate de sodium, au sein d'un solvant inerte tel qu'un alcool (éthanol de préférence) à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
Alternativement, lorsque R1 représente NHCO(R2) où R2 a la même signification que précédemment, les composés de formule (I) peuvent être préparés à partir des composés de formule générale (IX), selon le schéma de synthèse général suivant:
Figure imgf000017_0001
(b)
Figure imgf000017_0002
La réaction de protection (a) peut s'effectuer (lorsque P représente un groupement ferf-butyloxycarbonyle) à l'aide de di-ferî-butyldicarbonate en présence d'une base telle que la triéthylamine ou la pyridine et éventuellement en présence de N,N-diméthylamino-pyridine, au sein d'un solvant inerte (dichlorométhane par exemple) à une température comprise entre -1O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, ou bien (lorsque P représente un groupement 1 -éthoxy-éthyle) en présence d'éthylvinyl éther, en présence d'une quantité catalytique d'un acide tel que l'acide chlorhydrique, au sein d'un solvant inerte tel que le toluène à une température comprise entre 20°C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, ou selon les méthodes bien connues de protection de la fonction aminé (T. W. GREENE et coll. dans Protective Groups in Organic Synthesis, third édition, 1999, Wiley-lnterscience). La réaction (b) peut s'effectuer:
-à l'aide d'un chlorure d'acide (R2)C(O)CI où R2 a la même signification que précédemment en présence d'une base comme la triéthylamine, la pyridine, la diisopropyléthylamine, le carbonate de potassium ou de sodium, au sein d'un solvant inerte (diméthylformamide, tétrahydrofuranne par exemple) ou dans la base organique elle-même à une température comprise entre O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel (G . DAIDONE et coll, Heterocycles, 1996, 43(11 ), 2385).
-à l'aide d'un anhydride ((R2)CO)2O où R2 a la même signification que précédemment au sein d'un solvant inerte (diméthylformamide, tétrahydrofuranne, dichlorométhane par exemple) ou dans l'anhydride lui- même à une température comprise entre 00C et la température d'ébullition du milieu réactionnel (F. ALBERlCIO, Synth. Commun., 2001 , 31 (2), 225, G. PROCTER, Tetrahedron, 1995, 51 (47), 12837).
-à l'aide d'un acide (R2)C(O)OH où R2 a la même signification que précédemment en présence d'un agent d'activation tel que l'hexafluorophosphate de O-(7-aza-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'- tétraméthyluronium (HATU) en présence d'une base (pyridine, diisopropyléthylamine ou triéthylamine par exemple) au sein d'un solvant inerte (diméthylformamide par exemple) à une température comprise entre O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, ou selon les méthodes bien connues de couplage de la chimie peptidique (M. BODANSZKY et coll., Principles of Peptide Synthesis, Spinger-Verleg, New York, NY, 1984, 9-58) ou de la formation d'un amide.
La réaction de déprotection (c) peut s'effectuer (lorsque P représente un groupement fert-butyloxycarbonyle) en présence d'iodotriméthylsilane.ou en milieu acide (acide trifluoroacétique, ou acide chlorhydrique dans un solvant tel que le dichlorométhane ou le dioxanne par exemple), ou en milieu basique (carbonate de potassium au sein d'un solvant tel qu'un alcool (méthanol de préférence) à une température comprise entre 00C et la température d'ébullition du milieu réactionnel et éventuellement sous irradiation par des micro-ondes), ou bien (lorsque P représente un groupement 1-éthoxy-éthyle) en présence d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique, au sein d'un solvant tel que le tétrahydrofuranne ou l'eau, à une température comprise entre 2O0C et la température d'ébullition du milieu réactionnel, ou encore selon les méthodes bien connues de déprotection de la fonction aminé (T. W. GREENE et coll. dans Protective Groups in Organic Synthesis, third édition, 1999, Wiley-lnterscience.
Les composés de formule générale (IX) peuvent être préparés à partir du 3- amino-4-cyano-5-méthylsulfanylthiophène-2-carboxylate d'éthyle, selon le schéma de synthèse général suivant:
Figure imgf000019_0001
(XIII)
La réaction (a) peut s'effectuer en présence de nitrite d'isopentyle, au sein d'un solvant inerte tel que le diméthylformamide à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
La réaction d'oxydation (b) peut s'effectuer en présence d'acide 3-chloro- peroxybenzoïque, au sein d'un solvant inerte tel que le dichlorométhane à une température comprise entre -2O0C et la température ambiante.
La réaction (c) peut s'effectuer en présence d'hydrazine, au sein d'un solvant inerte tel qu'un alcool (éthanol de préférence) à une température comprise entre 20°C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
La réaction de cyclisation (d) peut s'effectuer en présence d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique concentré ou l'acide sulfurique concentré, au sein d'un solvant inerte tel qu'un alcool (éthanol de préférence) à une température comprise entre 200C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
La réaction (e) peut s'effectuer en présence d'un produit de type R3ONH2 où R3 a la même signification que précédemment, et de triméthylaluminium au sein d'un solvant tel que le toluène, à une température comprise entre 00C et la température d'ébullition du milieu réactionnel.
Il est entendu pour l'homme du métier que, pour la mise en œuvre des procédés selon l'invention décrits précédemment, il peut être nécessaire d'introduire des groupements protecteurs des fonctions aminé et carboxyle afin d'éviter des réactions secondaires. Ces groupes sont ceux qui permettent d'être éliminés sans toucher au reste de la molécule. Comme exemples de groupes protecteurs de la fonction aminé, on peut citer le 1 -éthoxy-éthyle qui peut être régénéré en présence en présence d'un acide minéral tel que l'acide chlorhydrique (au sein d'un solvant tel que le tétrahydrofuranne ou l'eau par exemple), le carbamate de fe/t-butyle qui peut être régénéré au moyen d'iodotriméthylsilane ou en milieu acide (acide trifluoroacétique, ou acide chlorhydrique dans un solvant tel que le dichlorométhane ou le dioxanne par exemple), le carbamate de benzyle qui peut être régénéré en présence d'hydrogène ou en présence d'un mélange d'un thiol (benzènethiol par exemple) et d'un acide de Lewis (éthérate de trifluorure de bore par exemple), l'acétyle qui peut être régénéré en milieu acide (acide chlorhydrique par exemple), le benzoyle qui peut être régénéré en milieu acide (acide chlorhydrique par exemple), le 2-triméthylsilanyl-éthoxyméthyle qui peut être régénéré en présence de fluorure de tétrabutylammonium ou en milieu acide par exemple (acide chlorhydrique par exemple). Comme groupes protecteurs de la fonction carboxyle, on peut citer les esters (méthoxyméthylester, benzylester, méthylester par exemple) qui peuvent être régénérés par les méthodes décrites par T. W. GREENE et coll. dans Protective Groups in Organic Synthesis, third édition, 1999, Wiley- Interscience.
Les composés de formule (I) sont isolés et peuvent être purifiés par les méthodes connues habituelles, par exemple par cristallisation, chromatographie ou extraction. Les énantiomères, diastéréoisomères des composés de formule (I) font également partie de l'invention.
Les composés de formule (I) comportant un reste basique peuvent être éventuellement transformés en sels d'addition avec un sel minéral ou organique par action d'un tel acide au sein d'un solvant organique tel un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré.
Les composés de formule (I) comportant un reste acide peuvent être éventuellement transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec des bases azotées selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique (alcaline ou alcalinoterreuse par exemple), de l'ammoniac, d'une aminé ou d'un sel d'aminé sur un composé de formule (I), dans un solvant. Le sel formé est séparé par les méthodes habituelles.
Ces sels font également partie de l'invention.
Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction basique libre, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par réaction entre ledit produit et un acide minéral ou organique. Des sels pharmaceutiquement acceptables incluent les chlorures, nitrates, sulfates, hydrogénosulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, phosphates, monohydrogénophosphates, dihydrogénophosphates, métaphosphates, pyrophosphates, acétates, propionates, acrylates, 4-hydroxybutyrates, caprylates, caproates, décanoates, oxalates, malonates, succinates, glutarates, adipates, pimélates, maléates, fumarates, citrates, tartrates, lactates, phénylacétates, mandélates, sébacates, subérates, benzoates, phtalates, méthanesulfonates, propanesulfonates, xylènesulfonates, salicylates, cinnamates, glutamates, aspartates, glucuronates, galacturonates.
Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction acide libre, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par réaction entre ledit produit et une base minérale ou organique. Des bases pharmaceutiquement acceptables incluent des hydroxydes de cations de métaux alcalins ou alcalino-terreux tels que Li, Na, K, Mg, Ca1 des composés aminés basiques tels qu'ammoniac, arginine, histidine, pipéridine, morpholine, pipérazine, triéthylamine.
L'invention est également décrite par les exemples suivants, donnés à titre d'illustration de l'invention.
Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits a été mesurée à l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde de 200-600 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65. L'acquisition des spectres de masses a été réalisée sur une gamme de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil BDS C18, 3 μm (50 x 4.6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90% d'acétonitrile contenant 0,05% (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans l'eau contenant 0,05% (v/v) de TFA en 3,5 mn à un débit de 1 mL/mn. Le temps total d'analyse, incluant la période de rééquilibrage de la colonne, est de 7 mn.
Les purifications par LC-MS préparative ont été généralement réalisées en utilisant un système Waters FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une pompe de régénération Waters modèle 515, d'une pompe de dilution Waters Reagent Manager, d'un auto-injecteur Waters modèle 2700, de deux vannes Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters modèle 996, d'un spectromètre de masse Waters modèle ZMD et d'un collecteur de fractions Gilson modèle 204. Le système était contrôlé par un logiciel Waters FractionLynx. La séparation a été effectuée alternativement sur deux colonnes Waters Symmetry (Ci8, 5μM, 19x50 mm, référence catalogue 186000210), une colonne étant en cours de régénération par un mélange eau / acétonitrile 95/5 (v/v) contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique, pendant que l'autre colonne était en cours de séparation. L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5 à 95% d'acétonitrile contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mL/mn. A la sortie de la colonne de séparation, un millième de l'effluent a été séparé par un LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mL/mn et envoyé vers les détecteurs, à raison de 75% vers le détecteur à barrette de diodes, et les 25% restants vers le spectromètre de masse. Le reste de l'effluent (999/1000) a été envoyé vers le collecteur de fractions où le flux a été éliminé tant que la masse du produit attendu n'était pas détectée par le logiciel FractionLynx. Les formules moléculaires des produits attendus ont été fournies au logiciel FractionLynx qui a déclenché la collecte du produit quand le signal de masse détecté correspondait à l'ion [M+H]+ et/ou au [M+Na]+. Dans certains cas, dépendant des résultats de LC/MS analytique, quand un ion intense correspondant à [M+2H]++ a été détecté, la valeur correspondant à la moitié de la masse moléculaire calculée (MW/2) a été aussi fournie au logiciel FractionLynx. Dans ces conditions, la collecte a aussi été déclenchée quand le signal de masse de l'ion [M+2H]++ et/ou [M+Na+H]++ ont été détectés.
Exemple 1 : 3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiénor2,3-c1pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide):
Figure imgf000023_0001
Dans 20 cm3 de tétrahydrofuranne à une température voisine de 2O0C est dissout sous agitation 0.165g (0.37 mmol) de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol- 2-yl)-1H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide), dans lequel on ajoute goutte à goutte à 200C 18 cm3 (1.8 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique 0.1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 2O0C, puis on rajoute goutte à goutte à une température voisine de 200C 1 ,8 cm3 (1.8 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique 1 N. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 200C, puis il est porté à 400C pendant 4 heures. On coule ensuite à une température voisine de 20°C 2 cm3 (2 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique 1 N et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 4O0C. Le milieu réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) pour donner un résidu qui est repris dans 30 cm3 d'eau, alcalinisé par 2 cm3 (2mmol) d'une solution de soude 0.1 N. II y a formation d'un insoluble qui est repris par 50 cm3 de dichlorométhane. Après filtration de l'insoluble sur filtre papier, on obtient ainsi 0.079 g d'un solide jaune qui est purifié par chromatographie-flash sur une colonne de gel de silice [(0.04-0.06 mm), éluant :95/5 : dichlorométhane/ méthanol en volumes]. Après concentration des fractions contenant le produit attendu à sec sous pression réduite (2,7 kPa), on obtient 0.026 g de 3-(1H- indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide) sous forme d'un solide jaune (pureté LC/MS analytique DAD-TIC: 40%), que l'on purifie par LC/MS préparative. Après concentration des fractions contenant le produit attendu à sec sous pression réduite (2,7 kPa), on obtient 0.003g de 3- (1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide) sous forme d'un solide jaune (pureté LC/MS analytique DAD-TIC: 77%) fondant à 1710C. Analyse LC/MS: masse : M+=374, t (rétention) =3.67min.
Le 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N- phénoxy-carboxamide) peut-être préparé de la manière suivante:
Dans 15 cm3 d'acétonitrile sous argon à une température voisine de 200C est dissout sous agitation 0.35 g (0.914 mmol) d'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-(1 H- indol-2-yl)-1H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylique auquel sont ajoutés 0.266 g (1.83 mmol) de chlorhydrate de O-phénylhydroxylamine et 0.77 cm3 (5.5 mmol) de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes à une température voisine de 200C, puis on ajoute 0.29 g (0.9 mmol) de O- (1 H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetraméthyluronium tetrafluoroborate (TBTU) et l'on agite pendant 15 heures à une température voisine de 2O0C. On coule ensuite 3 cm3 de diméthylformamide et 1 cm3 (7.13 mmol) de triéthylamine et le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 2O0C, puis il est repris par 100 cm3 de dichlorométhane et 50 cm3 d'eau. La phase organique est décantée, lavée avec une solution saturée de d'hydrogénocarbonate de potassium, séchée sur sulfate de magnésium, puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi 0.47 g d'une huile pâteuse marron qui est purifiée par chromatographie-flash sur une colonne de gel de silice [(0.04-0.06 mm), éluant : 98/2 dichlorométhane/méthanol en volumes]. Après concentration à sec des fractions contenant le produit attendu sous pression réduite (2,7 kPa), on obtient 0.165g de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamiciθ), sous forme d'une meringue jaune fondant à 950C.
L'acide 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3~c]pyrazole-5- carboxylique peut-être préparé de la manière suivante:
Dans 40 cm3 d'éthanol à une température voisine de 2O0C est dissout sous agitation 0.53 g (1.38 mmol) de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-(1H-indol-2-yl)-1H- thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle. On coule ensuite 2,8 cm3 (2.8 mmol) d'une solution de soude 1 N, puis la solution résultante est portée à reflux pendant 2 heures. Le milieu réactionnel est ensuite concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) et le résidu est repris dans 30 cm3 d'eau dans lesquel est ajouté 0,17 g d'acide citrique. Le mélange est extrait par 2 fois 50 cm3 de dichlorométhane, et l'on continue d'acidifier la phase aqueuse par addition d'acide citrique jusqu'à pH=2 puis l'on poursuit l'extraction par 2 fois 50 cm3 de dichlorométhane. Les différentes phases organiques sont réunies, séchées, puis évaporées à sec sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi 0.46 g d'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol-2-y!)-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-carboxylique sous forme d'un solide jaune fondant à 2040C.
Le 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle peut-être préparé de la manière suivante :
Dans 20 cm3 de diméthylformamide à une température voisine de 200C est dissout sous agitation 1 g (2.88 mmol) de 3-bromo-1-(1~éthoxy-éthyl)-1 H- thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle, que l'on dégaze par bullage d'argon. On ajoute ensuite 1 g (3.83 mmol) d'acide N-Boc-indole-2-boronique, 0.94 g (2,88 mmol) de carbonate de césium et 0.2 g (0.27 mmol) de 1 ,1 '-bis- (diphénylphosphino)ferrocènedichloro-palladium (II); dichlorométhane et l'on continue le dégazage pendant 5 minutes puis l'on porte le mélange à reflux pendant 15 heures. Le milieu réactionnel est ensuite concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) et le résidu est repris dans 100 cm3 d'eau et 200 cm3 de dichlorométhane. Le mélange est filtré sur Celite® et décanté. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) pour donner 1,8 g d'une huile noire qui est purifiée par chromatographie-flash sur une colonne de gel de silice [(20-45μm), éluant : 90/10 cyclohexane/ acétate d'éthyle en volumes]. Après concentration des fractions contenant le produit attendu à sec sous pression réduite (2,7 kPa), on obtient 0.147g de 1-(1-éthoxy-éthyl)- 3-(1H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle sous forme d'un produit pâteux jaune. Spectre R.M.N. 1 H (300 MHz, (CD3)2SO dβ, δ en ppm) : 1 ,16 (t, J = 7 Hz : 3H) ; 1 ,37 (t, J = 7,5 Hz : 3H) ; 1 ,68 (d, J = 6,5 Hz : 3H) ; 3,44 (mt : 1 H) ; 3,64 (mt : 1 H) ; 4,38 (q , J = 7,5 Hz : 2H) ; 5,85 (q, J = 6,5 Hz : 1H) ; 7,04 (t dédoublé, J = 7,5 et 1 Hz : 1H) ; 7,15 (t dédoublé, J = 7,5 et 1 ,5 Hz : 1 H) ; 7,20 (d, J = 1 ,5 Hz : 1 H) ; 7,47 (d large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 7,59 (d large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 8,38 (s : 1 H) ; 11 ,57 (s large : 1 H).
Le 3-bromo-1-(1-éthoxy-éthyl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle peut être préparé de la manière suivante :
Dans 50 cm3 d'éthanol sous atmosphère d'argon à une température voisine de 200C, on introduit sous agitation 1 ,19 g (3.81 mmol) de 3,5-dibromo-1-(1- éthoxy-éthyl)-1 H-pyrazole-4-carboxaldéhyde, puis l'on ajoute 0,4 g (3.81 mmol) de carbonate de sodium et 0.42 cm3 (3.81 mmol) de 2- mercaptoacétate d'éthyle. Le mélange réactionnel est ensuite porté à reflux pendant 2 heures, puis il est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa). Le résidu est repris dans 60 cm3 d'eau et 60 cm3 de dichlorométhane et décanté. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi 1 ,17 g de 3-bromo-1 -(1 -éthoxy-éthyl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle sous forme d'une huile jaune claire qui cristallise donnant des cristaux crèmes fondant à 690C.
Le 3,5-dibromo-1-(1-éthoxy-éthyl)-1 H-pyrazole-4-carboxaldéhyde peut être préparée de la manière suivante :
Dans 30 cm3 de toluène à une température voisine de 200C, on introduit sous agitation 1 g (3,94 mmol) de 3,5-dibromo-1 H-pyrazole-4- carboxaldéhyde, 1 ,5 cm3 (16 mmol) d'éthylvinyl éther et 3 gouttes d'acide chlorhydrique concentré 12N. Le mélange réactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 200C, puis l'on coule 1 ,5 cm3 (16 mmol) d'éthylvinyl éther et l'agitation est poursuivie pendant 15 heures à une température voisine de 200C. Le mélange réactionnel est ensuite dilué par 20 cm3 de toluène et lavé par 2 fois 30 cm3 d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) pour donner 1 ,19 g de 3,5-dibromo-1-(1-éthoxy-éthyl)-1 H-pyrazole-4- carboxaldéhyde sous forme d'une huile jaune. Spectre R.M.N. "Η (300 MHz, (CDg)2SO d6, δ en ppm) : 1 ,10 (t, J = 7,5 Hz : 3H) ; 1 ,64 (d, J = 6,5 Hz : 3H) ; 3,31 (mt : 1 H) ; 3,51 (mt : 1 H) ; 5,88 (q, J = 6,5 Hz : 1 H) ; 9,73 (s : 1 H).
Le 3,5-dibromo-1 H-pyrazole-4-carboxaldéhyde peut-être préparée de la manière suivante :
Dans 1500 cm3 d'éther diéthylique à une température voisine de 200C et sous atmosphère d'argon, on introduit sous agitation 81 ,7 g (0,268 mol) de 3,4,5- tribromopyrazole. Le mélange est refroidi à une température voisine de - 780C, puis sont coulés goutte à goutte 335 cm3 (0,536 mol) de π-butyllithium à 1 ,6 mol/l en 3h15. Le mélange réactionnel est agité pendant 1 ,5 heures à une température voisine de -750C, puis on coule au goutte à goutte 100 cm3 (1 ,34 mol) de diméthylformamide en maintenant la température inférieure à - 700C. On laisse encore agiter pendant 2 heures à une température voisine de -750C, puis pendant 15 heures à une température voisine de 2O0C. Le milieu réactionnel est ensuite refroidi dans un bain glace-eau et on coule 1000 cm3 d'eau. Après décantation, la phase aqueuse est extraite par 500 cm3 d'éther diéthylique et par 3 fois 500 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est ensuite acidifiée par une solution d'acide citrique à pH=3 (on observe la formation d'un précipité) et extraite par 2 fois 1000 cm3 d'éther diéthylique. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) et le solide jaune obtenu est repris par 300 cm3 d'eau et agité pendant 2 heures à une température voisine de 2O0C. Le mélange est ensuite filtré et le solide est lavé par 2 fois 50 cm3 d'eau, séché sous hotte ventilée, puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 4O0C. On obtient ainsi 51 ,3 g de 3,5-dibromo-1 H- pyrazole-4-carboxaldéhyde sous forme d'une poudre jaune fondant à 173°C.
Exemple 2j 3-((E)-styryl-1 H-thiénor2,3-clpyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide :
Figure imgf000028_0001
A une solution de 0,083 g (0,191 mmol) de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-((E)-styryl)- 1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide) dans 5 cm3 de tetrahydrofuranne sont ajoutés 1 ,5 cm3 (3,0 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique 2N, et la solution ainsi obtenue est agitée à une température voisine de 25° C pendant 48 heures. Le milieu réactionnel est alors concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C et le résidu ainsi obtenu est purifié par LC-MS préparative. Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu est séché à une température voisine de 2O0C sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi 0,030 g de 3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide) sous forme d'un solide blanc cassé fondant à 142°C. Spectre de masse (IE) : m/z 361 [M+], m/z 318 et m/z 94 (pic de base).
Le 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-((E)-styryl)-1H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide) peut être préparé de la manière suivante:
A une solution contenant 0,20 g (0,58 mmol) d'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-((E)- styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylique dans 10 cm3 d'acétonitrile et agitée sous argon à une température voisine de 25°C, sont ajoutés successivement : 0,118 g (1 ,17 mmol) de triéthylamine, 0,089 g (0,61 mmol) de chlorhydrate de O-phénylhydroxylamine, puis 0,197 g (0,61 mmol) de O- (1 H~benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate. Le milieu réactionnel est agité à une température voisine de 2O0C pendant 24 heures, puis chauffé à une température voisine de 8O0C pendant 3,5 heures. Le milieu réactionnel est ensuite ramené à une température voisine de 200C, jeté dans un mélange contenant 40 cm3 de saumure et 40 cm3 d'acétate d'éthyle et décanté. La phase aqueuse est extraite par 2 fois 40 cm3 d'acétate d'éthyle θt les extraits organiques sont réunis, lavés successivement par 50 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 5N, par 50 cm3 d'eau, par 40 cm3 d'une solution aqueuse saturée en hydrogénocarbonate de sodium, puis par 50 cm3 d'eau, séchés sur sulfate de magnésium, filtrés puis concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu ainsi obtenu est purifié par chromatographie flash sur une cartouche contenant 40 g de gel de silice (20 μm sphérique) en éluant par un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (75/25 en volumes). Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2 kPa) à une température voisine de 400C. On obtient ainsi 0,094 g de 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-((E)~styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide) sous forme d'un solide rouge. Spectre de masse : IE: m/z 433 [M+], m/z 339: 433-PhO m/z 267 (pic de base): 339- C2H5-OCH-CH3 m/z 94 : PhO+
L'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5- carboxylique peut être préparé de la manière suivante :
A une solution de 2,0 g (5,4 mmol) de 1-(1-éthoxy~éthyl)-3-((E)-styryl)-1H- thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle dans 15 cm3 de tetrahydrofuranne sont ajoutés successivement, sous agitation, 2 cm3 d'éthanol, 2 cm3 d'eau et 0,60 g (10,8 mmol) d'hydroxyde de potassium. Le milieu réactionnel est chauffé à une température voisine de 85° C pendant 5 heures, puis il est refroidi à une température voisine de 25°C et concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu est mis en solution dans 150 cm3 d'eau et extrait par 2 fois 100 cm3 d'éther diéthylique. La phase aqueuse est acidifiée jusqu'à un pH d'environ 5 par l'ajout d'acide citrique solide, puis extraite par 3 fois 100 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 4O0C. On obtient ainsi 1 ,8 g d'acide 1-(1-éthoxy- éthyl)-3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylique sous forme d'un solide jaune pâle fondant à 160° C. Spectre de masse (IE) : m/z 342 [M+] , 270 (pic de base) .-[M+J-C2H5-O-CH-CH3.
Le 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle peut être préparé de la manière suivante: A une solution de 10,0 g (28,8 mmol) de 3-bromo-1-(1-éthoxy-éthyl)-1 H- thiéno[2,3-φyrazole-5- carboxylate d'éthyle dans 300 cm3 de toluène sont ajoutés successivement 1 ,7 g (1 ,4 mmol) de tétrakis(triphényl~ phosphine)palladium [0], une solution de 6,6 g (43,2 mmol) d'acide trans- jbefe-styrèneboronique dans 40 cm3 d'éthanol, puis une solution de 9,2 g (86,4 mmol) de carbonate de sodium dans 40 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est chauffé à une température voisine de 82°C pendant 2,5 heures, puis il est refroidi à une température voisine de 25°C et dilué avec 500 cm3 d'eau et 300 cm3 d'acétate d'éthyle. Après décantation, la phase organique est lavée successivement avec 2 fois 300 cm3 d'eau puis 300 cm3 de saumure saturée. La phase organique est ensuite séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu est purifié par chromatographie sous pression d'argon (80 kPa), sur une cartouche contenant 330 g de gel de silice (granulométrie 32-63 μm), en éluant par un mélange de cyclohexane/acétate d'éthyle (90/10 en volumes). Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2 kPa) à une température voisine de 400C. On obtient ainsi 9,3 g de 1-(1- éthoxy-éthyl)-3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle sous forme d'un solide jaune. (Rf = 0,70, chromatographie sur couche mince de gel de silice, éluant : dichlorométhane/méthanol (98/2 en volumes)).
Le 3-bromo-1 -(1 -éthoxy-éthyl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle est décrit à l'exemple 1.
Exemple3: Chlorhydrate de 3-f(thiophène-2-carbonyl)-amino1-1 H-thiénor2.3- cipyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamideV.
Figure imgf000030_0001
A une solution de 0,037 g (0,081 mmol) de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2- carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxannide) dans 1 ,7 cm3 de tetrahydrofuranne, est ajouté 0,66 cm3 (1 ,32 mmol) d'acide chlorhydrique 2N. Le mélange réactionnel est agité à une température voisine de 25°C pendant 18 heures, puis 0.2 cm3 d'acide chlorhydrique 2N est rajouté. Après 1 ,5 heures, le mélange réactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 4O0C puis repris dans le THF et reconcentré à sec (opération répétée 2 fois). Le résidu est séché à une température voisine de 200C sous pression réduite (2,7 kPa). On obtient ainsi 34 mg de chlorhydrate de 3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H- thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide) sous forme d'un solide amorphe verdâtre. (Rf = 0,37, chromatographie sur couche mince de gel de silice, éluant : dichlorométhane/méthanol (90/10 en volumes)). Spectre de masse (IE): m/z 384 [M+], m/z 341 , m/z 111 (pic de base), et m/z 94.
Le 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide) peut être préparé de la manière suivante :
A une solution contenant 0,22 g (0,59 mmol) d'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3- [(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylique dans 11 cm3 d'acétonitrile et agitée sous argon à une température voisine de 25°C, sont ajoutés successivement : 0,119 g (1 ,18 mmol) de triéthylamine, 0,090 g (0,62 mmol) de chlorhydrate de O-phénylhydroxylamine, puis 0,198 g (0,62 mmol) de O-O H-benzotriazol-i-yO-N.N.N'.N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate. Le milieu réactionnel est agité à une température voisine de 8O0C pendant 0,5 heure, puis à une température voisine de 200C pendant 0,5 heure, et enfin à une température voisine de 80° C pendant 0,5 heure. Le milieu réactionnel est ensuite ramené à une température voisine de 200C, jeté dans un mélange contenant 40 cm3 de saumure et 40 cm3 d'acétate d'éthyle et décanté. La phase aqueuse est extraite par 2 fois 40 cm3 d'acétate d'éthyle, les extraits organiques sont réunis, lavés successivement par 50 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 2N, par 50 cm3 d'eau, par 40 cm3 d'une solution aqueuse saturée en hydrogénocarbonate de sodium, puis par 40 cm3 d'eau, séchés sur sulfate de magnésium, filtrés puis concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 4O0C. Le résidu ainsi obtenu est purifié par chromatographie flash sur une colonne contenant 30 g de gel de silice (40-63 μm) en éluant par un mélange dichlorométhane/méthanol (98/2 en volumes), puis sur une colonne contenant 30 g de gel de silice (40-63 μm) en éluant par un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (70/30 en volumes). Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu est purifié par chromatographie sur plaques préparatives. On obtient ainsi 0,040 g de 1-(1- éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N- phénoxy-carboxamide) sous forme d'un solide jaune. (Rf = 0,56, chromatographie sur couche mince de gel de silice, éluant : cyclohexane/acétate d'éthyle (50/50 en volumes)).
L'acide 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3~[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-carboxylique peut être préparé de la manière suivante : lot P- 32079-158-1
A une solution de 1 ,0 g (2,3 mmol) de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2- carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle dans 8 cm3 de tetrahydrofuranne sont ajoutés successivement, sous agitation, 1 cm3 d'éthanol, 1 cm3 d'eau et 0,29 g (5,1 mmol) d'hydroxyde de potassium. Le milieu réactionnel est chauffé à une température voisine de 85° C pendant 2 heures, puis il est refroidi à une température voisine de 25°C et concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. Le résidu est mis en solution dans l'eau et extrait par de Pether diéthylique. La phase aqueuse est acidifiée jusqu'à un pH d'environ 5-6 par l'ajout d'acide citrique solide, puis extraite 3 fois par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 400C. On obtient ainsi 0,25 g d'acide 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2- carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylique sous forme d'un solide jaunâtre. L'acidification de la phase aqueuse à un pH d'environ 3-4, suivie du même traitement permet d'obtenir une deuxième fraction de 0,25 g d'acide 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-carboxylique sous forme d'un solide jaunâtre. (Rf = 0,15, chromatographie sur couche mince de gel de silice, éluant : dichlorométhane/méthanol (90/10 en volumes)). Le 1 -(1 -éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3- c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle peut être préparé de la manière suivante :
A une solution de 10,0 g (28,8 mmol) de 3-bromo-1-(1-éthoxy-éthyl)-1H- thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle dans 167 cm3 de dioxanne agitée à une température voisine de 250C sous argon, sont ajoutés successivement 1 ,1 g (5,8 mmol) d'iodure de cuivre (I), 0,69 cm3 (5,8 mmol) de transi , 2- diamino-cyclohexane, 4,4 g (34,6 mmol) de 2-thiophène carboxamide, puis 12,2 g (57,6 mmol) de phosphate tripotassique. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 20 heures, puis il est refroidi à une température voisine de 25°C et filtré sur Clarcel®. Le solide est lavé avec 2 fois 170 cm3 d'acétate d'éthyle. Le filtrat est extrait avec 3 fois 170 cm3 de saumure saturée et la phase organique est ensuite séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 350C. Le résidu est purifié par chromatographie sur une colonne d'environ 300 g de gel de silice (granulométrie 40-63 μm), en éluant par un mélange de cyclohexane/acétate d'éthyle (90/10 puis 85/15 en volumes). Les fractions contenant le produit attendu sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (2 kPa) à une température voisine de 4O0C. On obtient ainsi 2,9 g de 1-(1-éthoxy-éthyl)-3-[(thiophène-2- carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle sous forme d'un solide jaune. (Rf = 0,18, chromatographie sur couche mince de gel de silice, éluant : cyclohexane/acétate d'éthyle (80/20 en volumes)).
Le 3-bromo-1 -(1 -éthoxy-éthyl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-carboxylate d'éthyle est décrit à l'exemple 1.
Les produits selon l'invention peuvent être sous forme non chirale, ou racémique, ou enrichie en un stéréo-isomère, ou enrichie en un énantiomère ; et peuvent éventuellement être salifiés.
Un produit conforme à l'invention pourra être utilisé pour la fabrication d'un médicament utile pour traiter un état pathologique, en particulier un cancer.
La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques contenant un composé selon l'invention, en association avec un excipient pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou de liposomes.
Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les comprimés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose, les celluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents complexants et de solvants.
Les formes liquides seront de préférence injectables et, de ce fait, auront une formulation acceptable pour une telle utilisation.
Des voies d'administration par injection acceptables incluent les voies intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, et sous cutanée, la voie intraveineuse étant préférée.
La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le praticien en fonction de la voie d'administration du patient et de l'état de ce dernier.
Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on peut citer :
• les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le melphalan, l'ifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa, la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la procarbazine et l'hexaméthylmélamine
• les dérivés du platine comme notamment le cisplatine, le carboplatine ou l'oxaliplatine
• les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la mitomycine, la dactinomycine • les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, les taxoides (paclitaxel et docétaxel)
• les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la daunorubicine, l'idarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, Ia losoxantrone
• les agents inhibiteurs de topoisomérases des groupes I et II telles que l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan et le tomudex
• les fluoropyrimidines telles que le 5-fluorouracile, l'UFT, la floxuridine
• les analogues de cytidine telles que la 5-azacytidine, la cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6-thioguanine
• les analogues d'adénosine telles que la pentostatine, la cytarabine ou le phosphate de fludarabine
• le méthotrexate et l'acide folinique
• les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi que les hormones oestrogéniques, androgéniques
• les agents antivasculaires tels que les dérivés de la combretastatine ou de la colchicine et leurs prodrogues.
Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention un traitement par des radiations. Ces traitements peuvent être administrés simultanément, séparément, séquentiellement. Le traitement sera adapté par le praticien en fonction du malade à traiter.
La progression du cycle cellulaire est souvent gérée par des kinases cycline dépendantes (CDK) qui sont activées par une interaction avec des protéines appartenant à la famille des cyclines, activation qui se termine par la phosphorylation de substrats et finalement par la division cellulaire. En plus les inhibiteurs endogènes des CDK qui sont activés (famille des INK4 et des KIP/CIP) régulent de façon négative l'activité des CDK. La croissance des cellules normales est due à une balance entre les activateurs des CDK (les cyclines) et les inhibiteurs endogènes des CDK. Dans plusieurs types de cancers, l'expression ou l'activité aberrante de plusieurs de ces régulateurs du cycle cellulaire a été décrite.
La cycline E active la kinase Cdk2 qui agit ensuite pour phosphoryler la protéine pRb (protéine du rétinoblastome) résultant en un engagement dans la division cellulaire irréversible et une transition vers la phase S (PL Toogood, Médicinal Research Reviews (2001), 21(6) ; 487-498. La kinase CDK2 et peut être CDK3 sont nécessaires pour la progression dans la phase G1 et l'entrée en phase S. Lors de la formation de complexe avec la cycline E, elles maintiennent l'hyperphosphorylation de pRb pour aider la progression de la phase G1 en phase S. Dans les complexes avec la Cycline A, CDK2 joue un rôle dans l'inactivation de E2F et est nécessaire pour la réalisation de la phase S (TD. Davies et al. (2001) Structure 9, 389-3).
Le complexe CDK1 /cycline B régule la progression du cycle cellulaire entre la phase G2 et la phase M. La régulation négative du complexe CDK/Cycline B empêche les cellules normale d'entrer en phase S avant que la phase G2 ait été correctement et complètement réalisée. (K.K. Roy and E.A. Sausville Current Pharmaceutical Design, 2001, 7, 1669-1687.
Un niveau de régulation de l'activité des CDK existe. Les activateurs de cycline dépendantes kinases (CAK) ont une action positive de régulation des CDK. CAK phosphoryle les CDK sur le résidu thréonine pour rendre l'enzyme cible totalement active.
La présence de défauts dans les molécules intervenant sur le cycle cellulaire entraîne l'activation des CDK et la progression du cycle, il est normal de vouloir inhiber l'activité des enzymes CDK pour bloquer la croissance cellulaire des cellules cancéreuses.
De nombreuses protéines impliquées dans la ségrégation des chromosomes et l'assemblage du fuseau ont été identifiées dans la levure et la drosophile. La désorganisation de ces protéines conduit à la non ségrégation des chromosomes et à des fuseaux monopolaires ou désorganisés. Parmi ces protéines, certaines kinases, dont Aurora et IpH , provenant respectivement de drosophile et de S. cerevisiae, sont nécessaires pour la ségrégation des chromosomes et la séparation du centrosome. Un analogue humain de IpM de levure a été récemment clone et caractérisé par différents laboratoires. Cette kinase, nommée aurora2, STK15 ou BTAK appartient à la famille des kinases à sérine/thréonine. Bischoff et al. ont montré que Aurora2 est oncogène, et est amplifié dans les cancers colorectaux humains (EMBO J, 1998, 17, 3052-3065). Cela a également été exemplifié dans des cancers impliquant des tumeurs épithéliales telles que le cancer du sein.
La présente invention concerne de nouveaux dérivés des benzothiazoles. Elle concerne ainsi l'utilisation des dérivés des benzothiazoles comme agents d'inhibition des kinases et plus particulièrement comme agent anticancéreux. Parmi ceux ci elle concerne préférentiellement les esters sulfoniques des benzothiazoles. Elle concerne également l'utilisation desdits dérivés pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de l'homme.
PLK
Les « Polo-Like Kinases » ou « PLKs » appartiennent à la famille des sérine/thréonine kinases, et jouent un rôle essentiel dans la régulation du cycle cellulaire, notamment dans les phases d'entrée et de sortie de mitose. Les PLKs incluent PLK1 , PLK2, PLK3 et PLK4.
Les PLKs sont connues pour leur rôle essentiel dans la mitose dans de nombreuses espèces (bactéries, Drosophile, Xenopes par exemple). Des expériences de RNAi chez la Drosophile ont démontré que la suppression de polo conduisait à un arrêt cellulaire en phase G2/M et à de l'apoptose. PLK1 est l'homologue humain de polo. Durant la mitose, il a été démontré que PLK1 jouait un rôle dans la maturation des centrosomes et dans la dynamique des microtubules impliquées dans la formation du fuseau mitotique. PLK1 est également impliqués dans la sortie de mitose des cellules. PLK1 a probablement également un rôle dans la cytokinèse. Il a été démontré également que la sur-expression de PLK1 était un facteur de mauvais pronostic dans le cas de cancers.
Toutes ces études permettent de penser qu'un inhibiteur de l'activité kinase de PLK1 , peut permettre d'inhiber la prolifération cellulaire anarchique dans le domaine de l'oncologie.
La présente demande concerne ainsi particulièrement de nouveaux inhibiteurs du récepteur PLK1 pouvant être utilisés notamment pour le traitement de prolifération anormale de cellules notamment en oncologie. Tie-2 (TEK) est un membre d'une famille de récepteurs à tyrosine kinase, spécifique des cellules endothéliales. Tie2 est le premier récepteur à activité tyrosine kinase dont on connaît à la fois l'agoniste (angiopoïetine 1 ou Ang1 ) qui stimule l'autophosphorylation du récepteur et la signalisation cellulaire [S. Davis et al (1996) CeII 87, 1161-1169] et l'antagoniste (angiopoïetine 2 ou Ang2) [P.C. Maisonpierre ét al. (1997) Science 277, 55-60]. L'angiopoïetine 1 peut synergiser avec le VEGF dans les derniers stades de la néo- angiogénèse [AsaharaT. Cire. Res.(1998) 233-240]. Les expériences de knock-out et les manipulations transgéniques de l'expression de Tie2 ou de Ang1 conduisent à des animaux qui présentent des défauts de vascularisation [DJ. Dumont et al (1994) Gènes Dev. 8, 1897-1909 et C. Suri (1996) CeII 87, 1171-1180]. La liaison d'Angi à son récepteur conduit à l'autophosphorylation du domaine kinase de Tie2 qui est essentielle pour la néovascularisation ainsi que pour le recrutement et l'interaction des vaisseaux avec les péricytes et les cellules musculaires lisses ; ces phénomènes contribuent à la maturation et la stabilité des vaisseaux nouvellement formés [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 et Lin P. (1998) PNAS 95, 8829-8834, ont montré une inhibition de la croissance et de la vascularisation tumorale, ainsi qu'une diminution des métastases de poumon, lors d'infections adénovirales ou d'injections du domaine extracellulaire de Tie-2 (Tek) dans des modèles de xénogreffes de tumeur du sein et de mélanome. Les inhibiteurs de Tie2 peuvent être utilisés dans les situations où une néovascularisation se fait de façon inappropriée (c'est-à-dire dans la rétinopathie diabétique, l'inflammation chronique, le psoriasis, le sarcome de Kaposi, la néovascularisation chronique due à la dégénération maculaire, l'arthrite rhumatoïde, l'hémoangiome infantile et les cancers).
FAK est une tyrosine kinase cytoplasmique jouant un rôle important dans la transduction du signal transmis par les intégrines, famille de récepteurs hétérodimériques de l'adhésion cellulaire. FAK et les intégrines sont colocalisés dans des structures périmembranaires appelées plaques d'adhérence. Il a été montré dans de nombreux types cellulaires que l'activation de FAK ainsi que sa phosphorylation sur des résidus tyrosine et en particulier son autophosphorylation sur la tyrosine 397 étaient dépendantes de la liaison des intégrines à leurs ligands extracellulaires et donc induites lors de l'adhésion cellulaire [Kornberg L, et al. J. Biol. Chem. 267(33): 23439-442. (1992)]. L'autophosphorylation sur la tyrosine 397 de FAK représente un site de liaison pour une autre tyrosine kinase, Src, via son domaine SH2 [Schaller et al. Mol. CeII. Biol. 14 :1680-1688. 1994; Xing et al. Mol. CeII. Biol. 5 :413-421. 1994]. Src peut alors phosphoryler FAK sur la tyrosine 925, recrutant ainsi la protéine adaptatrice Grb2 et induisant dans certaines cellules l'activation de la voie ras et MAP Kinase impliquée dans le contrôle de la prolifération cellulaire [Schlaepfer et al. Nature; 372:786-791. 1994; Schlaepfer et al. Prog. Biophy. Mol. Biol. 71 :435-478. 1999; Schlaepfer and Hunter, J. Biol. Chem. 272:13189-13195. 1997]. L'activation de FAK peut aussi induire la voie de signalisation jun NH2-terminal kinase (JNK) et résulter dans la progression des cellules vers la phase G1 du cycle cellulaire [Oktay et al., J. CeII. Biol.145 :1461-1469. 1999]. Phosphatidylinositol-3-OH kinase (PI3-kinase) se lie aussi à FAK sur la tyrosine 397 et cette interaction pourrait être nécessaire à l'activation de PI3-kinase [Chen and Guan, Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 91 : 10148-10152. 1994; Ling et al. J. CeII. Biochem. 73 :533-544. 1999]. Le complexe FAK/Src phosphoryle différents substrats comme la paxilline et p130CAS dans les fibroblastes [Vuori et al. Mol. CeII. Biol. 16: 2606-2613. 1996].
Les résultats de nombreuses études soutiennent l'hypothèse que les inhibiteurs de FAK pourraient être utiles dans le traitement du cancer. Des études ont suggéré que FAK puisse jouer un rôle important dans la prolifération et/ou la survie cellulaire in vitro. Par exemple, dans les cellules CHO, certains auteurs ont démontré que la surexpression de p125FAK conduit à une accélération de la transition G1 à S, suggérant que p125FAK favorise la prolifération cellulaire [Zhao J.-H et al. J. CeII Biol. 143:1997-2008. 1998]. D'autres auteurs ont montré que des cellules tumorales traitées avec des oligonucléotides anti-sens de FAK perdent leur adhésion et entrent en apoptose (Xu et al, CeII Growth Differ. 4:413-418. 1996). Il a également été démontré que FAK promeut la migration des cellules in vitro. Ainsi, des fibroblastes déficients pour l'expression de FAK (souris « knockout » pour FAK) présentent une morphologie arrondie, des déficiences de migration cellulaire en réponse à des signaux chimiotactiques et ces défauts sont supprimés par une réexpression de FAK [DJ. Sieg et al., J. CeII Science. 112:2677-91. 1999]. La surexpression du domaine C-terminal de FAK (FRNK) bloque l'étirement des cellules adhérentes et réduit la migration cellulaire in vitro [Richardson A. and Parsons JT. Nature. 380:538-540. 1996]. La surexpression de FAK dans des cellules CHO, COS ou dans des cellules d'astrocytome humain favorise la migration des cellules. L'implication de FAK dans la promotion de la prolifération et de la migration des cellules dans de nombreux types cellulaires in vitro, suggère le rôle potentiel de FAK dans les processus néoplasiques. Une étude récente a effectivement démontré l'augmentation de la prolifération des cellules tumorales in vivo après induction de l'expression de FAK dans des cellules d'astrocytome humain [Cary L.A. ét al. J. CeII Sci. 109:1787-94. 1996; Wang D ét al. J. CeII Sci. 113:4221-4230. 2000]. De plus, des études immunohistochimiques de biopsies humaines ont démontré que FAK était surexprimé dans les cancers de la prostate, du sein, de la thyroïde, du colon, du mélanome, du cerveau et du poumon, le niveau d'expression de FAK étant directement corrélé aux tumeurs présentant le phénotype le plus agressif [Weiner TM, et al. Lancet. 342(8878):1024-1025. 1993 ; Owens et al. Cancer Research. 55:2752-2755. 1995; Maung K. et al. Oncogene. 18:6824-6828. 1999; Wang D et al. J. CeII Sci. 113:4221-4230. 2000].
KDR (Kinase insert Domain Receptor) aussi appelée VEGF-R2 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2), est exprimé uniquement dans les cellules endothéliales. Ce récepteur se fixe au facteur de croissance angiogénique VEGF, et sert ainsi de médiateur à un signal transductionnel via l'activation de son domaine kinase intracellulaire. L'inhibition directe de l'activité kinase de VEGF-R2 permet de réduire le phénomène d'angiogénèse en présence de VEGF exogène (Vascular Endothelial Growth Factor : facteur de croissance vasculaire endothelial) (Strawn et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.3540-3545). Ce processus a été démontré notamment à l'aide de mutants VEGF-R2 (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.1615- 1620). Le récepteur VEGF-R2 semble n'avoir aucune autre fonction chez l'adulte que celle liée à l'activité angiogénique du VEGF. Par conséquent, un inhibiteur sélectif de l'activité kinase du VEGF-R2 ne devrait démontrer que peu de toxicité.
En plus de ce rôle central dans le processus dynamique angiogénique, des résultats récents suggèrent que l'expression de VEGF contribue à la survie des cellules tumorales après des chimio- et radio-thérapies, soulignant la synergie potentielle d'inhibiteurs de KDR avec d'autres agents (Lee et al. Cancer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570).
Protocoles expérimentaux sur les tests biochimiques
1. Aurora2
L'effet inhibiteur de composés vis-à-vis de la kinase Aurora2 est déterminé par un test de scintillation par radioactivité utilisant du nickel chélate.
Une enzyme Aurora2 recombinante complète, dont l'extrémité N-terminale a été marquée à l'histidine, a été exprimée dans E. coli et purifiée jusqu'à une qualité proche de l'homogénéité.
Le fragment C-terminal (Q1687-H2101) d'une NuMA (protéine Nucléaire qui s'associe avec l'Appareil Mitotique) exprimé dans E. coli, et dont l'extrémité N-terminale a été marquée à l'histidine, a été purifié par chromatographie au nickel chélate et utilisé comme substrat dans le test de la kinase Aurora2.
Pour déterminer l'activité kinase, le substrat NuMA est équilibré par chromatographie sur une colonne PD10 Pharmacia, dans un tampon (50 mM Tris-HCI, pH7.5, 50 mM NaCI , 10 mM MgCI2) additionné de 10 % (v/v) de glycérol et de 0.05 % (w/v) de NP40.
L'activité kinase d'Aurora2 est mesurée par scintillation avec du nickel chélate (New England Nuclear, modèle SMP107). Chaque puits contient 100 μl de la solution suivante : 0.02 μM d'Aurora2 ; 0.5 μM de substrat NuMA ; 1 μM d'ATP additionné de 0.5 μCi d'ATP-[33P]. Les solutions sont incubées pendant 30 minutes à 37°C. Le tampon du test est ensuite éliminé et les puits sont rincés deux fois avec 300 μl de tampon kinase. La radioactivité est mesurée dans chaque puits à l'aide d'un appareil Packard Model Top Count NXT.
Le bruit de fond est déduit de la mesure de radioactivité par mesure en double exemplaire dans des puits contenant de l'ATP radioactif seul contenant de la kinase tamponnée traitée de la même manière que les autres échantillons. L'activité du contrôle est effectuée en mesurant en double exemplaire la radioactivité dans le mélange complet du test (ATP, Aurora2 et le substrat NuMA), en l'absence de composé test.
L'inhibition de l'activité de Aurora2 avec un composé de l'invention est exprimée en pourcentage d'inhibition de l'activité de contrôle en l'absence de composé test. De la staurosporine est ajoutée dans chaque plaque comme contrôle d'inhibition.
2. CDK2/cycline E :
Purification du complexe CDK2/CvclineE-(His)β par IMAC (Immobilized Métal Affinity Chromatographv) :
Deux baculovirus recombinants portant les séquences humaines codant respectivement pour CDK2 et la CyclineE (cette dernière comportant un tag hexa-histidine en C terminal) sont utilisés pour co-infecter des cellules d'insecte Sf21. Deux à trois jours après le début de la co-infection, les cellules sont récoltées par centrifugation, puis conservées à -400C jusqu'à leur utilisation. Après décongélation et lyse mécanique des cellules, le complexe présent dans le surnageant de lyse est purifié par chromatographie d'affinité sur Nickel (IMAC), et conservé à -800C.
Essai Flashplate CDK2/CvclinE en format 96 puits.
Un format en plaques 96 puits coatés à la streptavidine est utilisé pour tester l'activité des composés sur l'activité kinase de CDK2/Cycline E.
Pour réaliser cet essai, le substrat peptidique biotynilé, fragment de la protéine pRb, (biotinyl-SACPLNLPLQNNHTAADMYLSPVRSPKKKGSTTR- OH) est solubilisé à la concentration de 1 mM dans du tampon kinase (HEPES/ NaOH 50 mM, NaCI 1 mM, MgCI2 5 mM, pH 7.5) afin de constituer une solution-stock conservée à -2O0C sous forme d'aliquots de 110 μl. Le jour de l'expérience, un aliquot de cette solution est décongelé et dilué dans du tampon kinase contenant 1 mM de Dithiothréitol, ajouté au tampon extemporanément, afin d'obtenir une concentration de 14.3 μM. 70 μl de cette solution sont ajoutés dans chaque puits de la Flashplate afin d'obtenir une concentration finale en substrat de 10 μM lors de la réaction enzymatique conduite dans un volume final du milieu réactionnel de 100 μl (cf. ci-après).
Des dilutions intermédiaires d'inhibiteurs (produits de l'invention) à différentes concentrations sont préparées dans le DMSO à partir de solutions stock à 10 mM dans des tubes séparés. On réalise ainsi des dilutions à 1000 μM, 333.3 μM, 111.1 μM, 37.03 μM, 12.35 μM, 4.11 μM et 1.37 μM. Un μl de chacune de ces solutions (ou 1 μl de DMSO pour les contrôles) est transferré dans les puits de la plaque de test.
Dans chaque puits, sont ensuite ajoutés 19 μl d'une solution d'un mélange d'adénosinetriphosphate (ATP) et d'ATPy33P dans le tampon kinase à la concentration de 5,26 μM d'ATP total et de 52,6 μCi/ml de 33P. La réaction enzymatique est déclenchée par addition de 10 μl par puits d 'une solution de CDK2/Cycline E à 200 nM dans le tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol (ou 10μl de tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol pour les blancs réactionnels).
Après addition de chacun des réactifs, le volume final de chaque puits est de 100μl, la concentration finale de substrat est de 10 μM, les concentrations finales en inhibiteurs sont de10 μM, 3,33 μM, 1 ,11 μM, 0,37 μM, 0,123 μM, 0,041 μM et 0,014 μM (selon la concentration de la dilution intermédiaire), la concentration finale en ATP est de 1 μM, la quantité finale de 33P est de 1 μCi/puits, la concentration finale de complexe CDK2/Cycline E est de 20 nM.
Après l'addition de tous les réactifs, la plaque de test incubée à 30 0C sous agitation orbitale à 650 rpm.
Lorsque l'incubation est terminée, la plaque est lavée trois fois par 300 μl par puits de PBS (Phosphate Buffered Saline, pH=7,4 sans calcium ni magnésium, référence 10010-015, Gibco BRL). L'incorporation de 33P au peptide est quantifiée par comptage par scintillation avec un appareil Packard Topcount.NXT. L'activité inhibitrice des produits de l'invention est évaluée par mesure de la concentration d'inhibiteur permettant une diminution de l'activité enzymatique de 50 % (CI50).
3. Tie2 La séquence codante de Tie2 humain correspondant aux acides aminés du domaine intracellulaire 776-1124 a été générée par PCR en utilisant le cDNA isolé de placenta humain comme modèle. Cette séquence a été introduite dans un vecteur d'expression baculovirus pFastBacGT sous forme de protéine de fusion GST.
L'effet inhibiteur des molécules est déterminé dans un test de phosphorylation de PLC par Tie2 en présence de GST-Tie2 purifiée à environ 80 % d'homogénéité. Le substrat est composé des fragments SH2-SH3 de la PLC exprimée sous forme de protéine de fusion GST.
L'activité kinase de Tie2 est mesurée dans un tampon MOPS 2OmM pH 7.2, contenant 10 mM MgCI2, 10 mM MnCI2, 1 mM DTT, 10 mM de glycérophosphate. Dans une plaque 96 puits FlashPIate maintenue sur glace, on dépose un mélange réactionnel composé de 70 μl de tampon kinase contenant 100 ng d'enzyme GST-Tie2 par puits. Ensuite 10 μl de la molécule à tester diluée dans du DMSO à une concentration de 10 % maximum sont ajoutés. Pour une concentration donnée, chaque mesure est effectuée en quatre exemplaires. La réaction est initiée en ajoutant 20 μl de solution contenant 2 μg de GST-PLC, 2 μM d'ATP froid et 1 μCi d'33P[ATP]. Après 1 heure d'incubation à 370C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume (100 μl) d'EDTA à 200 mM. Après élimination du tampon d'incubation, les puits sont lavés trois fois avec 300 μl de PBS. La radioactivité est mesurée sur un M icroBetai 450 Wallac.
L'inhibition de l'activité Tie2 est calculée et exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport à l'activité contrôle déterminée en l'absence de composé.
Activité des produits préparés:
L'activité des produits a été déterminée par mesure de l'inhibition de l'activité de Aurora2. Les résultats sont donnés dans le tableau 1 , ci-après (IC50, nM):
Figure imgf000045_0001
- Tableau 1 -

Claims

REVENDICATIONS
1 Produits, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale (I) suivante :
Figure imgf000046_0001
dans laquelle :
(i) R1 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par R2, NHCO(R2), -CH=CH-(R2), NH-R4 dans lequel R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3- C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle ;
(ii) R3 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1 - C6)alkyle, -(C1 -C6)alkyl-aryle, -(C1-C6)alkyl-hétéroaryle, -aryle, -hétéroaryle ;
(iii) R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3-C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, les radicaux R2, R3 et R4 étant éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux identiques ou différents choisis parmi les atomes d'halogène et les radicaux hydroxyle, alcoxy, cycloalkyle, NH2, NHAIk, N(Alk)2, alkyle, hydroxyalkyle, hétérocycloalkyle et phényle lui-même éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux identiques ou différents choisis parmi les atomes d'halogène et les radicaux hydroxyle, NH2, alcoxy, alkyle et hydroxyalkyle; sous réserve que, lorsque R3 est -(C1 -C6)alkyle, alors R1 n'est pas : aryle, hétéroaryle ou -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est sélectionné dans le groupe constitué par aryle, hétéroaryle, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).
2 Produit, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (I) selon la revendication 1 dans laquelle :
(i) R1 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par R2, NHCO(R2), -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3-C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle ;
(ii) R3 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1- C6)alkyle, -(C1 -C6)alkyl-aryle, -(C1-C6)alkyl-hétéroaryle, -aryle, -hétéroaryle ;
sous réserve que, lorsque R3 est -(C1-C6)alkyle, alors R1 n'est pas : aryle, hétéroaryle ou -CH=CH-(R2), dans lequel R2 est sélectionné dans le groupe constitué par aryle, hétéroaryle.
3. Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R1 est choisi parmi aryle, hétéroaryle, NHCO(R2) et NH-R4,.avec R2 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par -(C1-C24)alkyle, -(C3- C9)cycloalkyle, hétérocycloalkyle, hétérocycloalkylène, aryle, hétéroaryle, arylalkyle, hétéroarylalkyle et R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3- C9)cycloalkyle et hétérocycloalkyle,
4 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R1 représente NH-R4,.avec R4 représente aryle, hétéroaryle, -(C3-C9)cycloalkyle et hétérocycloalkyle,
5 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R1 est choisi parmi aryle et hétéroaryle.
6 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R1 est - CH=CH-(R2), dans lequel R2 est choisi parmi aryle et hétéroaryle. 7 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R1 est NHCO(R2).
8 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce que R3 est aryle ou hétéroaryle.
9 Produit selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que aryle et hétéroaryle sont chacun indépendamment choisis parmi phényle, pyridyle, indolyle, benzimidazolyle, pyrazolyle, et pyrrolyle.
10 Produit selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il est choisi parmi :
3-(1 H-indol-2-yl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide),
3-((E)-styryl)-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy-carboxamide), et
3-[(thiophène-2-carbonyl)-amino]-1 H-thiéno[2,3-c]pyrazole-5-(N-phénoxy- carboxamide).
11 Produit selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est sous forme :
1 ) non chirale, ou
2) racémique, ou
3) enrichie en un stéréo-isomère, ou
4) enrichie en un énantiomère ;
et en ce qu'il est éventuellement salifié.
12 Procédé de préparation d'un produit de formule générale (I) suivante :
(I)
Figure imgf000048_0001
dans laquelle R1 est NHCO(R2), et dans lequel R2 et R3 sont tels que définis précédemment, caractérisé en ce qu'il est obtenu par :
(i) couplage entre (i-a) une aminé de formule générale (X) suivante :
Figure imgf000049_0001
dans laquelle R3 est tel que défini précédemment, et dans lequel PG est un groupe protecteur de la fonction NH libre intracyclique du noyau thiéno[2,3- cjpyrazole, et
(i-b) un acide carboxylique R2-COOH en présence d'un agent de couplage, ou un dérivé d'acide carboxylique tel qu'un chlorure d'acide ou un anhydride, en présence d'une base telle qu'une aminé tertiaire ou un carbonate d'un métal alcalin ; puis
(ii) clivage de PG.
13 Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'aminé de formule générale (X) est obtenue par une protection de la fonction NH du noyau pyrazole d'un produit de formule générale (IX):
Figure imgf000049_0002
dans lequel R3 est tel que défini précédemment. 14 Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le produit de formule générale (IX) est obtenu par réaction entre :
(i) R3ONH2, où R3 a Ia même signification que précédemment, en présence de trialkylaluminium, par exemple du triméthylaluminium, et
(ii) un produit de formule générale (XIV):
Figure imgf000050_0001
dans lequel alkyl est (C1-C6)alkyl.
15 Procédé de préparation d'un produit de formule générale (la) ou (Illa) suivante :
Figure imgf000050_0002
dans laquelle R2, R3 sont tels que définis précédemment et alkyl est (C1- C6)alkyl, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de :
(i) couplage entre (i-a) un produit de formule générale (V) ou (lia) suivante :
Figure imgf000050_0003
dans laquelle R3 et alkyl sont tels que définis précédemment, et dans laquelle PG est un groupe protecteur de la fonction NH libre intracyclique du noyau thiéno[2,3-c]pyrazole, et
(i-b) un produit de formule générale (R2)CONH2, en présence :
- d'un catalyseur tel que Tiodure de cuivre (I),
- d'une aminé telle que le trans-i ,2-diaminocyclohexane, le trans-î ,2- bis(méthylamino)cyclohexane ou le N,N'-diméthyl-1 ,2-diaminoéthane, et
- d'une base telle que le phosphate tripotassique ou le carbonate de césium, et
(ii) clivage de PG.
16 Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'aminé est le N,N'-diméthyl-1 ,2-diaminoéthane.
17 Procédé de préparation d'un produit de formule générale (Ma) suivante :
Figure imgf000051_0001
dans laquelle Alkyl et PG sont tels que définis précédemment, caractérisé en ce qu'il comprend une étape dans laquelle un produit de formule générale (Villa): (Villa)
Figure imgf000052_0001
est cyclisé avec un mercaptoacétate d'alkyle : Alkyl-OCO-CH2-SH, en présence d'une base telle que le carbonate de sodium.
18 Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que le produit de formule générale (Villa) est obtenu par (i) formylation de 3,4,5-tribromo- pyrazole pour l'obtention de 3,5-dibromo-4-formyI-pyrazole (VIII), puis (ii) protection de la fonction aminé intracyclique de (VIII).
19 Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que la réaction de protection s'effectue en présence d'éthylvinyl éther, et d'une quantité catalytique d'un acide tel que l'acide chlorhydrique.
20 A titre de médicaments, les produits de formule (I) telle que définie aux revendications 1 à 11 ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I)
21 Composition pharmaceutique comprenant un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable.
22 Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, comme inhibiteur d'une protéine kinase.
23 Utilisation selon la revendication 22, caractérisée en ce que la kinase est choisie parmi Aurora2, CDK1 , CDK2, CDK4, FAK, KDR, PLK1 et Tie2.
24 Utilisation selon la revendication 22, caractérisée en ce que la kinase est choisie parmi Aurora2, CDK1 , CDK2, CDK4, FAK, KDR, et Tie2.
25 Utilisation selon la revendication 24, caractérisée en ce que la kinase est Aurora2. Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à , pour la fabrication d'un médicament utile pour traiter un état pathologique, particulier le cancer.
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