MXPA05000629A - Derivados de pirazol heterobiciclico como inhibidores de cinasa. - Google Patents

Derivados de pirazol heterobiciclico como inhibidores de cinasa.

Info

Publication number
MXPA05000629A
MXPA05000629A MXPA05000629A MXPA05000629A MXPA05000629A MX PA05000629 A MXPA05000629 A MX PA05000629A MX PA05000629 A MXPA05000629 A MX PA05000629A MX PA05000629 A MXPA05000629 A MX PA05000629A MX PA05000629 A MXPA05000629 A MX PA05000629A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
formula
compound
amino
pyrazole
thieno
Prior art date
Application number
MXPA05000629A
Other languages
English (en)
Inventor
Anello Matteo D
Original Assignee
Pharmacia Italia Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmacia Italia Spa filed Critical Pharmacia Italia Spa
Publication of MXPA05000629A publication Critical patent/MXPA05000629A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/38—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/42—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms with nitro or nitroso radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)

Abstract

Se describen biciclo-pirazoles de la formula (1) como se definen en la especificacion, y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, un procedimiento para su preparacion y composiciones farmaceuticas que los comprenden; los compuestos de la invencion pueden ser utiles, en terapia, para el tratamiento de enfermedades asociadas con la actividad no regulada de la proteina cinasa, como el cancer.

Description

DERIVADOS DE P1RAZOL HETEROB1CICLICO COMO INHIBIDORES DE CINASA MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a derivados de biclicopirazol novedosos, a un procedimiento para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los comprenden y su uso como agentes terapéuticos, en particular en el tratamiento de enfermedades asociadas a proteína cinasas * des-reguladas. El mal funcionamiento de las proteína cinasas (PKs) es el sello distintivo de numerosas enfermedades. Una gran proporción de los oncogenes y proto-oncogenes implicados en cánceres humanos codifican para PKs. Las actividades mejoradas de las PKs también están implicadas en muchas enfermedades no malignas, tales como hiperplasia benigna de la próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neuro-fibromatosis, psoriasis, proliferación de célula de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis por artritis y estenosis post-quirúrgica y restenosis. Las PKs también están implicadas en condiciones inflamatorias y en la multiplicación de virus y parásitos. Las PKs también pueden desempeñar un papel principal en la patogénesis y desarrollo de trastornos neurodegenerativos.
Para una referencia general con respecto al mal funcionamiento o des-regulación de las PKs véase, por ejemplo, Current Opinión in Chemical Biology 1999, 3, 459-465. Por consiguiente, existe la necesidad de una terapia de compuestos activos para modular la actividad de las proteína cinasas desreguladas. Los presentes inventores han descubierto actualmente que ciertos biciclopirazoles novedosos, de conformidad con la presente invención, son capaces de modular la actividad de la proteína cinasa des-regulada y por * lo tanto son útiles, en terapia, en el tratamiento de enfermedades ocasionadas por y/o asociadas con proteína cinasas des-reguladas. Se conocen en la técnica diversos compuestos heterocíclicos como inhibidores de la proteína cinasa. Como un ejemplo, se han descrito a los 2-carboxamido-pirazoles y 2-ureido-pirazoles, y derivados de los mismos, como inhibidores de la proteína cinasa en las solicitudes de patente internacional WO01/12189, WO 01/12188, WO 02/481 14 y WO 02/70515, todas a nombre del mismo solicitante. Los compuestos bicíclicos fusionados que comprenden porciones pirazol y que poseen actividad inhibidora de la cinasa también se han descrito en WO 00/69846, WO 02/12242 y WO 03/028720 así como en la solicitud de patente de E.U.A. 60/381092 (presentada el 17 de mayo del 2002), todas a nombre del mismo solicitante. La presente invención provee así, como un primer objetivo, un compuesto de biciclopirazol de fórmula (I) en donde X es un grupo seleccionado a partir de NR\ O, S, SO o S02; cada uno de R y R-i, siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R', -COR', -COOR', -CONHR1, -CONR'R", -S02R\ -S02NHR' o -S02NR'R"; en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o un grupo alquilo de C1-C6 de cadena recta o ramificada sustituido adicionalmente de manera opcional, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, arilo, heterociclilo o arilalquilo de C1-C6; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R', -CH2OR' y OR', en donde R' es como se definió anteriormente; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos de fórmula (I), objetivo de la presente invención, pueden tener átomos de carbono asimétricos y por lo tanto pueden existir tanto como isómeros ópticos individuales y como mezclas racémicas de los mismos. Por consiguiente, todos los posibles isómeros particulares, incluyendo isómeros ópticos y geométricos, de los compuestos de fórmula (I) y cualquier mezcla de los mismos también están dentro del alcance de la invención. Además, la presente invención también comprende los metabolitos y los bioprecursores farmacéuticamente aceptables, de otra manera referidos como profármacos, de los compuestos de la fórmula (I). A partir de todo lo anterior, es evidente para la persona experta i; en la técnica que los átomos de nitrógeno no sustituidos en el anillo pirazol condensado de los compuestos de la invención se pueden equilibrar rápidamente, en solución, como mezclas de ambos tautómeros mostrados a * continuación: Por consiguiente, en donde solamente se indica en la presente invención un tautómero de la fórmula (I) o (la), también se pretende que el otro tautómero así como cualquier mezcla de los mismos esté comprendido dentro del alcance de la presente invención, a menos que se mencione específicamente de otra manera. Como se utiliza en la presente invención y a menos que se especifique de otra manera, con el término alquilo de Ci-C6 de cadena recta o ramificada, ya sea como tal o como parte de una porción más compleja (por ejemplo ariialquilo) proponemos un grupo tal como, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, n-pentilo, n-hexilo y los similares. Preferiblemente, dicho alquilo se selecciona a partir de un grupo alquilo de C1-C4 de cadena recta o ramificada. Con el término arilo, ya sea como tal o como parte de una porción más compleja (por ejemplo arilalquilo) proponemos ya sea un mono-, bi- o poli-carbocíclico así como un hidrocarburo heterocíclico, con preferiblemente de 1 a 4 porciones del anillo, ya sea fusionadas o enlazadas entre sí mediante enlaces sencillos, en donde al menos uno de los anillos carbocíclicos o hetrocíclicos es aromático. Por lo tanto los ejemplos no limitantes de grupos arilo de conformidad con la invención son fenilo, ¡ndanilo, bifenilo, a- o ß-naftilo, fluorenilo, 9,10-dihidroantracenilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolilo, imidazolilo, imidazopiridilo, 1 ,2-metilendioxifenilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, pirrolil-fenilo, furilo, fenil-furilo, benzotetrahidrofuranilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, cromenilo, tienilo, benzotienilo, isoindolinilo, benzoimidazolilo, tetrazolilo, tetrazolilfeniio, pirrolidinil-tetrazolilo, isoindolinol-fenilo, quinolinilo, isoquinoiinilo, 2,6-difenil-piridilo, quinoxalinilo, pirazinilo, fenil-quinolinilo, benzofurazanilo, 1 ,2,3-triazolilo,1-fenil-1 ,2,3-triazolilo, y los similares. De conformidad con los significados anteriormente mencionados provistos para R, R1 , R2, R', R", cualesquiera de los grupos anteriormente mencionados pueden estar sustituidos adicionalmente de manera opcional, en cualesquiera de sus posiciones libres, mediante uno o más grupos, por ejemplo 1 a 6 grupos, seleccionados a partir de: grupos halógeno, nitro, oxo (=0), carboxi, ciano, alquilo, alquilo fluorado, alquenilo, alquinilo, cicloaiquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo, grupos amino y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino, ureido, alquilureido o arilureido; grupos carbonilamino y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, grupos formilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, sulfonamido, alquilsulfonamido y arilsulfonamido, hidroxi y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, alcoxi, ariloxi, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, cicloaíqueniloxi o alquilidenaminoxi; grupos carbonilo y derivados de los mismos tales como, por ejemplo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, cicloalquiloxicarbonilo, aminocarbonilo, alquiiaminocarbonüo, dialquilaminocarbonilo; derivados sulfurados tales como, por ejemplo, alquiltio, ariltio, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilsulfinilo, arilsulfinilo, arilsulfoniloxi, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo o dialquilaminosulfonilo. A su vez, siempre que sea apropiado, cada uno de los sustituyentes anteriormente mencionados puede estar adicionalmente sustituido por uno o más de los grupos anteriormente mencionados. A menos que se especifique de otra manera, con el término átomo de halógeno pretendemos incluir flúor, cloro, bromo o yodo. Con el término alquilo fluorado pretendemos incluir cualesquiera de los grupos alquilo de C-i-C6 de cadena recta o ramificada anteriormente mencionados sustituidos adicionalmente por uno o más átomos de flúor tales como, por ejemplo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1 ,2-difluoroeíilo, 1 ,1 ,1 ,3,3,3- hexafluoropropil-2-¡lo, y los similares. Con el término alquenilo o alquinilo pretendemos incluir cualesquiera de los grupos alquilo de C2-C6 de cadena recta o ramificada anteriormente mencionados que comprenden adicionalmente un enlace doble o triple, respectivamente. Los ejemplos no limitantes de los grupos alquenilo o alquinilo son, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, alilo, isopropenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, etinilo, propinilo, butinilo y los similares, Con el término alcoxi pretendemos incluir cualesquiera grupo alcoxi de C1-C6 de cadena recta o ramificada por ejemplo incluyendo metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, ter-butoxi, n-pentiloxi, n-hexiloxi y los similares. Con los términos cicloalquilo o cicloalquenilo pretendemos incluir un grupo carbocíclico de C3-C6 tales como, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y grupos no saturados correspondientes tales como ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo y los similares. A partir de todo lo anterior es evidente para la persona experta en la técnica que el término grupo arilo también abarca a los anillos carbocíclicos aromáticos y heterocíclicos aromáticos, estos últimos también conocidos como grupos heteroarilo, adicionalmente fusionados o enlazados a través de enlaces sencillos a anillos heterocíclicos no aromáticos, típicamente heterociclos de 5 a 7 miembros . Con el término heterociclo de 5 a 7 miembros, por lo tanto abarcando heterociclos aromáticos previamente referidos como grupos arilo, también pretendemos incluir un carbociclo de 5 a 7 miembros saturado o parcialmente ¡nsaturado, en donde uno o más átomos de carbono, por ejemplo 1 a 3 átomos de carbono, están reemplazados por heteroátomos tales como nitrógeno, oxígeno y azufre. Los ejemplos no limitantes de heterociclos de 5 a 7 miembros, opcionalmente benzocondensados o adicionalmente sustituidos, son 1 ,3-dioxolano, pirano, pirrolidina, pirrolina, imidazolidina, pirazolidina, pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano, azabiciclononano y los similares. Evidentemente, cualquier grupo que se identifica a través de un nombre de un compuesto tiene que pretender que se considera a partir de las porciones a partir de las cuales se deriva de conformidad con el sistema de nomenclatura que se adopta convencionalmente en química orgánica. Como un ejemplo, el término halo-heterociciil-alquilo se establece para un grupo alquilo que está sustituido por un grupo heterocíclico que está sustituido, a su vez, por un átomo de halógeno, y en donde alquilo, heterociclilo y halógeno son como se describieron anteriormente. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) son las sales de adición ácida con ácidos inorgánicos y orgánicos, por ejemplo ácido nítrico, clorhídrico, bromhídrico, azufréico, perclórico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, glicolítico, láctico, oxálico, malónico, mélico, maléico, tartárico, cítrico, benzoico, cinnámico, mandélico, metansulfónico, isetiónico y salicílico, así como las sales con bases inorgánicas u orgánicas, por ejemplo metales alcalinos o metales térreos alcalinos, especialmente hidróxidos de sodio, potasio, calcio o magnesio, carbonatos o bicarbonatos, aminas acíclicas o cíclicas, preferiblemente metilamina, etilamina, dietilamina, trietilamina o piperidina. Una clase preferida de compuestos de la invención está representada por los derivados de la fórmula (I) en donde X es S; R es -COR', " -CONHR'; R, es -COR', -CONHR, -CONR'R", -S02NHR' o -S02NR'R", en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se definió anteriormente; y R2 es un átomo de hidrógeno. Incluso más preferidos, dentro de la clase anteriormente mencionada, se encuentran los derivados de fórmula (I) en donde R es -COR', Ri es -CONHR' o -CONR'R", en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se definió anteriormente. Otra clase de compuestos preferidos de la invención está representada por los derivados de la fórmula (I) en donde X es O; R es -COR', -CONHR'; R, es -COR', -CONHR", -CONR'R", -S02NHR' o -S02NR'R", en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se definió anteriormente; y R2 es un átomo de hidrógeno. Incluso más preferidos, dentro de la clase anteriormente mencionada, se encuentran los derivados de fórmula (I) en donde R es -COR', Ri es -CONHR' o -CONR'R", en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se definió anteriormente. Para una referencia de cualquier compuesto específico de fórmula (I) de la invención, opcionalmente en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable véase, como un ejemplo, la siguiente sección experimental y reivindicaciones. De conformidad con un objetivo adicional de la invención, se proveen con la presente invención los compuestos de fórmula (I), y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para uso como un " medicamento. La invención también provee el uso de un compuesto de fórmula (I), y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que padece de una enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada de la actividad de la proteína cinasa, de otra manera referida como una actividad des-regulada. La presente invención también provee un método para tratar a un mamífero, incluyendo humanos, que padecen de una enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada de la actividad de proteína cinasa, de otra manera referida como una actividad des-regulada, dicho método comprende la administración a dicho mamífero que necesite del mismo, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de biciclopirazol de fórmula (I) en donde X es un grupo seleccionado a partir de NR\ O, S, SO o SO2; cada uno de R y Ri , siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido " seleccionado a partir de -R\ -COR', -COO ", -CONHR', -CONR'R", -S02R\ - SO2NHR' o -SO2NR'R"; en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o un grupo alquilo de Ci-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido de manera adicional, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, arilo, heterociclilo o aril-alquilo de C C6; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R', -CH2OR' y OR', en donde R' es como se definió anteriormente; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad preferida del método para tratar a un mamífero como se describió anteriormente, se selecciona la enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada de la proteína cinasa, a partir del grupo que consiste de cáncer, trastornos proliferativos de la célula, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades auto-inmunes y trastornos neurodegenerativos. Los tipos específicos preferidos de cáncer que se pueden tratar incluyen carcinoma, carcinoma de célula escamosa, tumores hematopoiéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantomas, cáncer folicular de la tiroides y sarcoma de Kaposi. En otra modalidad preferida del método para tratar a un mamífero como se describió anteriormente, el trastorno proliferativo de la célula se selecciona a partir del grupo que consiste de hiperplasia benigna de la próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neuro-fibromatosis, psoriasis, proliferación de célula de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis por artritis y estenosis post-quirúrgica y restenosis. Además, el método para tratar a un mamífero objetivo de la presente invención también provee inhibición de la angiogénesis tumoral e inhibición de la formación de metástasis. Los compuestos de la invención son útiles como inhibidores de la Aurora cinasa y también como inhibidores de otras proteína cinasas tales como, por ejemplo, cinasas dependientes de ciclina (cdk), proteína cinasa C en diferentes isoformas, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1 , STLK-2, DDR-2, Aurora 1 , Aurora 2, Bub-1 , PLK, Chk1 , Chk2, HER2, ra l , MEK1 , MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, VEGF-R, PI3K, weel cinasa, Src, Ab1 , Akt, ILK, MK-2, IKK- 2, Cdc7, Nek, y por lo tanto son efectivas en el tratamiento de enfermedades asociadas con otras proteína cinasas. De conformidad con un objetivo adicional de la invención, presentada aquí se provee un procedimiento para preparar a los compuestos de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden obtener mediante un procedimiento que comprende: a) hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (II) en donde R-?, R2 y X son como se describieron anteriormente, con nitrito de sodio y mediante la reacción subsecuente de la sal de diazonio así obtenida con un agente reductor adecuado, de manera que se obtiene un compuesto de fórmula (I) en donde R es un átomo de hidrógeno y R-i, R2 y X son como se describieron anteriormente y, si se desea, b) convertir el compuesto de fórmula (I) así obtenido hacia otro compuesto de fórmula (I) en donde R es diferente a un átomo de hidrógeno; y/o, si se desea c) convertir un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) o hacia una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El procedimiento anterior se puede llevar a cabo de conformidad con los métodos bien conocidos en la técnica. A partir de lo anteriormente mencionado, es evidente para una persona experta en la técnica que si un compuesto de fórmula (I), preparado de conformidad con el procedimiento anteriormente mencionado, se obtiene como una mezcla de isómeros, su separación hacia los isómeros particulares de fórmula (1), que se lleva a cabo de conformidad con las técnicas convencionales, aún está dentro del alcance de la presente invención. De conformidad con el paso a) del procedimiento, la reacción entre un compuesto de fórmula (II) y nitrito de sodio se puede llevar a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, agua, tetrahidrofurano (THF), acetonitrilo (MeCN), dimetilformamida (DMF), dioxano, acetona, metanol o etanol, y bajo condiciones ácidas, por ejemplo en la presencia de ácido clorhídrico, bromhídrico, azufréico, acético, trifluorobórico o trifluoroacético. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -30°C a aproximadamente 5°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 6 horas. La sal de diazonio así obtenida se convierte entonces hacia el compuesto deseado de fórmula (I), sin la necesidad de ser " aislado, mediante tratamiento con un agente reductor adecuado tales como, por ejemplo, hidruro de litio-aluminio, borohidruro de sodio, hidruro de sodio-aluminio, cloruro de zinc o cloruro de estaño. Alternativamente, la reducción también puede ocurrir a través de la hidrogenación catalítica en la presencia de catalizadores convencionales incluyendo, por ejemplo, níquel de Raney o catalizadores de Lindlar. La reacción que produce el compuesto de fórmula (I), en el paso (a), se lleva a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, agua, ácido clorhídrico, éter dietílico, tetrahidrofurano, metanol o etanol, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -30°C a aproximadamente 70°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 48 horas. De conformidad con el paso (b) del procedimiento, los compuestos de fórmula (I) así obtenidos y en donde R es hidrógeno se pueden convertir hacia una variedad de derivados de fórmula (I) en donde R es diferente a un átomo de hidrógeno, mediante procesamiento de conformidad con los métodos convencionales conocidos en la técnica para la funcionalización de los grupos amino por medio de agentes de alquilatación, acilatación, sulfonilación y los similares. Como un ejemplo, un compuesto de fórmula (I) en donde R, es diferente de hidrógeno, se selecciona a partir de -R', -COR', -COOR', -S02R', -S02NHR' y -S02NR'R", en donde R" y R" que tienen los significados anteriormente reportados, se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) en donde R es hidrógeno, con un compuesto correspondiente de fórmula (III) R-Y (III) en donde R es como se definió anteriormente pero es diferente de hidrógeno e Y es un grupo residual adecuado, preferiblemente cloro o bromo. La reacción anteriormente mencionada se puede llevar a cabo de conformidad con los procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica por grupos para acilatación, sulfonilación o alquilatación del amino, por ejemplo en la presencia de una base terciaria, tales como trietilamina, N,N~ düsopropiletilamina o piridina, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo, o N,N- dimetilformamida, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de - aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. A partir de lo precedente, también es evidente para la persona experta en la técnica que la preparación de los compuestos de fórmula (I) que tienen R igual a -S02NR'R" se puede llevar a cabo realmente como se describió anteriormente o, alternativamente, al hacer reaccionar adecuadamente a un compuesto de fórmula (I) que tiene R como -S02NHR' con cualquier porción reactiva adecuada para preparar sulfonamidas disustituidas. De manera similar, un compuesto de fórmula (I) en donde R es un grupo -CONHR' y R' es diferente de hidrógeno, se puede preparar al hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (I) que tiene R como hidrógeno con un compuesto de fórmula (IV) R'NCO (IV) en donde R' es como se definió anteriormente pero es diferente de hidrógeno. Esta reacción se puede llevar a cabo en la presencia de una base terciaria tales como trietilamina, ?,?-diisopropiletilamina o piridina, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo, o ?,?-dimetilformamida, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. Además, un compuesto de fórmula (I) en donde R es un grupo -CONHR' se puede hacer reaccionar opcionalmente de manera adicional con un compuesto de fórmula (V) R"-Y(V) en donde R" es como se definió anteriormente pero es diferente de hidrógeno e Y es un grupo residual adecuado, preferiblemente cloro o bromo, de manera que se obtiene el compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde R es -CONR'R", siendo tanto R' como R" diferentes a los átomos de hidrógeno. La reacción se conoce ampliamente en la técnica y permite la preparación de derivados ureido d ¡-sustituid os (-CONR'R") a partir de los precursores correspondientes monosustituidos (-CONHR'). Alternativamente, y mediante procesamiento adicional de conformidad con los métodos muy bien conocidos, un compuesto de fórmula (I) en donde R es un grupo -CONR'R" y R' y R" tienen los significados anteriormente reportados pero son diferentes de hidrógeno, también se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) que tiene R como hidrógeno con cloroformato de 4-nitrofenilo y, subsecuentemente, con un compuesto de fórmula (VI) R'R'NH (VI) Como un ejemplo adicional, un compuesto de fórmula (I) que tiene R igual a hidrógeno también se puede hacer reaccionar bajo condiciones operativas reductoras con un compuesto de fórmula (VII) R'-CHO (VII) en donde R' es como se definió anteriormente pero es diferente " de hidrógeno, de manera que se obtiene un compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde R es un grupo R'CH2-. Esta reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, ?,?-dimetilformamida, ?,?-dimetilacetamida, cloroformo, diclorometano, tetra h id rofu rano o acetonitrilo, opcionalmente en la presencia de ácido acético, etanol o metanol como co-solventes, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 4 días. Los agentes reductores convencionales en el medio de reacción son, por ejemplo, borohidruro de sodio, borohidruro de triacetoxi sodio, y los similares. A partir de lo precedente, es evidente para una persona experta en la técnica que cualesquiera de los compuestos anteriormente mencionados de fórmula (I) se pueden convertir convenientemente hacia otros derivados de fórmula (I), de conformidad con el paso (c) del procedimiento, al hacer reaccionar de manera adecuada a los grupos funcionales diferentes al grupo R, mediante procesamiento de conformidad con métodos orgánicos sintéticos convencionales. Por lo tanto, como un ejemplo, los compuestos de fórmula (I) en donde R-i es -COOMe se pueden hidrolizar a los compuestos carboxi correspondientes de fórmula (I) en donde Ri es -COOH, mediante tratamiento con una base adecuada, por ejemplo hidróxido de sodio o de potasio, de conformidad con los métodos convencionales. Alternativamente, los compuestos de fórmula (I) en donde Ri es -COOMe se pueden convertir mediante transesterificación hacia los compuestos carboxi correspondientes de fórmula (I) en donde Ri es -COOR' en donde R' es diferente de hidrógeno o metilo. A su vez, los compuestos anteriormente mencionados de fórmula (I) en donde Ri es un grupo COOH se pueden convertir fácilmente hacia otros derivados (I) al hacer reaccionar de manera adecuada el grupo carboxílico. En particular, un compuesto de fórmula (I) en donde Ri es un grupo -CONR'R" y R es diferente de hidrógeno se puede preparar al hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (I) en donde Ri es carboxi con un agente condensador adecuado y, subsecuentemente, con un compuesto de fórmula (VIII) R'R"NH (VIII) en donde R' y R" son como se describieron anteriormente, de conformidad con los métodos conocidos para preparar amidas.
De manera similar, un compuesto de fórmula (I) en donde R-i es - COR' y R es diferente de hidrógeno se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde R-i es un grupo amido de Weinreb CONCH3OCH3 con un compuesto de fórmula (IX) R'Li (IX) en donde R' es diferente de hidrógeno. La reacción se lleva a cabo de conformidad con los métodos convencionales utilizados para preparar cetonas, por ejemplo en la presencia de un solvente adecuado tales como tetrahidrofurano, tolueno, éter dietílico o * hexano, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -78°C a aproximadamente 10°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 72 horas, aplicando métodos protectores del grupo funcional estándares cuando sea necesario. Alternativamente, un compuesto de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -COOR' y R y R' son diferentes de hidrógeno se puede preparar al hacer reaccionar un compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde R1 es un grupo -COOH con un compuesto de fórmula (X) R'OH (X) en donde R' es diferente de hidrógeno, mediante procesamiento de conformidad con los métodos convencionales para preparar ésteres. Como un ejemplo adicional, la preparación de los compuestos de fórmula (I) que tienen R1 igual a -S02NR'R" se puede, de hecho, llevar a cabo al hacer reaccionar de manera adecuada a un compuesto de fórmula (I) que tiene R-i como -S02NHR' con cualquier porción adecuada, por ejemplo una porción para alquilatación, de conformidad con metodologías bien conocidas para preparar sulfonamidas di-sustituidas. A partir de lo precedente, también es evidente para la persona experta en la técnica que cualesquiera de los compuestos anteriormente mencionados de fórmula (I) se pueden convertir convenientemente hacia otros derivados de fórmula (I) también al hacer reaccionar de manera adecuada grupos funcionales diferente a los grupos R y Ri anteriormente mencionados. Como un ejemplo, los compuestos de fórmula (I) que tienen R2 - igual a -CH2OH o -OH y R diferente de hidrógeno se pueden hacer reaccionar con un compuesto de fórmula (XI) R'-Y (XI) en donde R' es como se definió anteriormente pero es diferente de hidrógeno e Y es un grupo residual adecuado, preferiblemente cloro o bromo, de manera que se obtienen los compuestos correspondientes que tienen R2 como -CH2OR' o OR'. Esta última reacción se puede llevar a cabo en la presencia de una base tales como hidruro de sodio, N,N- diisopropiletilamina o piridina, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo o N,N- dimetilformamida, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo. Como un ejemplo adicional, un compuesto de fórmula (I) en donde X es SO y R es diferente de hidrógeno se puede preparar convenientemente mediante el inicio a partir de un compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde X es S, al hacer reaccionar este último con un agente oxidante, de conformidad con los métodos convencionales. La reacción se puede llevar a cabo en la presencia de un agente oxidante tales como, por ejemplo, eterato dietílico de trifluoruro de boro en la presencia de MCPBA, peróxido de hidrógeno en la presencia de TFA y los similares, en un solvente adecuado tales como diclorometano, agua, metanol o etanol, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de * aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas. Las condiciones oxidativas se aplican cuando se preparan compuestos de fórmula (1) que tienen X como S02 al iniciar a partir de los derivados correspondientes (I) que tienen X como S. En este caso, la reacción se puede llevar a cabo en la presencia de un agente oxidante tales como, por ejemplo, MCPBA, dimetildioxirano, oxona, monoperoxiftalato de Mg, en un solvente adecuado tales como, diclorometano, cloroformo, acetona, acetonitrilo, agua, metanol o etanol, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas. En un ejemplo adicional, un compuesto de fórmula (I) en donde X es NR' y R' y R son ambos diferentes de hidrógeno, se puede preparar convenientemente mediante el inicio a partir de un compuesto correspondiente de fórmula (I) en donde X es NH, a través de la reacción con un compuesto de fórmula (XI) R'-Y (XI) en donde R' es como se definió anteriormente pero es diferente de hidrógeno e Y es un grupo residual adecuado, como se reportó anteriormente. Esta última reacción se puede llevar a cabo en la presencia de una base tales como hidruro de sodio, ter-butilato de potasio, carbonato de potasio, hidróxido de potasio y los similares, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, * acetonitrilo, ?,?-dimetilformamida o dimetiisulfóxido, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo. Finalmente, la salificación de un compuesto de fórmula (I), como se establece en el paso (c) o, alternativamente, su conversión hacia el compuesto libre de fórmula (I), se llevan a cabo ambos de conformidad con los métodos bien conocidos, que aún se pretende que estén comprendidos dentro del alcance de la invención. Como se apreciará fácilmente por la persona experta en la técnica, cuando se preparan los compuestos de fórmula (I) objetivos de la invención, los grupos funcionales opcionales dentro de tanto ios materiales iniciales o los intermediarios del mismo y los cuales pueden dar lugar a reacciones laterales no deseadas, necesitan estar protegidos de manera adecuada de conformidad con las técnicas convencionales. De manera similar, la conversión de éstos últimos hacia los compuestos desprotegidos libres se puede llevar a cabo de conformidad con procedimientos conocidos. A este respecto no vale la pena que los subproductos opcionales, por ejemplo que se originan a partir de las reacciones de funcionalización anteriormente mencionadas en el grupo amino también se puedan presentar en los átomos de nitrógeno del pirazol. Por lo tanto, se pueden requerir pasos adicionales para aislar el compuesto deseado de fórmula (I), de conformidad con los métodos bien conocidos en la técnica. Como un ejemplo, los compuestos obtenidos al hacer reaccionar el derivado amino (1) en donde R es hidrógeno con agentes acilatantes, puede * llevar a compuestos en donde la acilatación se presenta tanto en el grupo amino como en el átomo de nitrógeno del pirazol. Estos compuestos se pueden convertir fácilmente hacia los derivados correspondientes de fórmula (I) que son desacilatados en el átomo de nitrógeno del pirazol, a través de hidrólisis selectiva del grupo acilo en esta misma posición. Alternativamente, un compuesto de fórmula (I) que se obtiene de conformidad con el paso (a) del procedimiento se puede proteger inicialmente en el átomo de nitrógeno del pirazol de conformidad con los métodos conocidos, subsecuentemente se puede convertir hacia un derivado deseado de fórmula (I), como mediante el paso (b) y/o (c), y finalmente se puede desproteger. Por lo tanto, un objetivo adicional de la invención se representa por un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos el cual comprende: d) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (I) que se obtiene en el paso (a) con un derivado de clorocarbonato de alquilo de fórmula (XII) R3-0-COCt (XII) en donde R3 es un grupo alquilo inferior, de manera que se obtiene un compuesto de fórmula (XIII) estando protegido en el átomo de nitrógeno del pirazol; e) convertir el compuesto así obtenido de fórmula (XIII) hacia un compuesto de fórmula (XIII) en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno; f) escindir bajo condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XIII) de manera que se elimina el grupo protector -COOR3 y se obtiene el compuesto deseado de fórmula (I); y/o, si se desea, g) convertir un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) o hacia una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
De conformidad con el paso (d) del procedimiento, la reacción con el clorocarbonato de alquilo de fórmula (XII) se puede llevar a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de los mismos, en la presencia de un eliminador de protones conveniente tales como trietilamina o diisopropiletilamina, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -5°C a aproximadamente 35°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. Preferiblemente, dentro de los compuestos de fórmula (XII), R3 · es un grupo alquilo inferior tales como, por ejemplo, un grupo alquilo de Ci-C3 de cadena recta o ramificada. Claramente, cuando se hace referencia a ambos compuestos de fórmula (XIII), se pretende que el grupo protector esté unido a cualesquiera de los átomos de nitrógeno del pirazol, esencialmente como sigue: De conformidad con el paso (f) del procedimiento, el compuesto de fórmula (XIII) se desprotege en el átomo de nitrógeno del pirazol mediante tratamiento bajo condiciones alcalinas, de conformidad con los métodos convencionales, por ejemplo con hidróxidos acuosos de sodio o de potasio en la presencia de un co-solvente adecuado tales como metanol, etanol, dimetilformamida o 1 ,4-dioxano, o mediante tratamiento con una amina terciaria tales como trietilamina o diisopropiletilamina en la presencia de un alcohol inferior como un solvente, típicamente metanol o etanol. La reacción de desprotección puede ocurrir a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente 18°C a temperatura de reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. Claramente, cualquier conversión adicional de un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I), por ejemplo como se reportó en el paso (g) del siguiente procedimiento, por analogía, serán las condiciones operativas anteriormente mencionadas reportadas en el último procedimiento del paso (c). De manera similar, la conversión de un compuesto de fórmula (XIII) en donde R es hidrógeno hacia otro compuesto de fórmula (XIII) en donde R es diferente de hidrógeno, como mediante el paso (e), sigue las condiciones operativas anteriormente mencionadas reportadas en el paso (b) del procedimiento anteriormente mencionado. Alternativamente, de conformidad con un objetivo adicional de la invención, los compuestos de fórmula (I) de la invención en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno, por ejemplo un grupo -COR' o -COOR', y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden preparar mediante un procedimiento que comprende h) . hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (I) que se obtiene en el paso anteriormente mencionado (a) con un exceso de un clorocarbonato o cloruro de acilo adecuado de fórmula R'-O-CO-CI (XlVa) R'-CO-CI (XlVb) en donde R' es como se definió anteriormente, de manera que se obtiene un compuesto de fórmula (XVa) o (XVb), respectivamente i) escindir bajo condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVa) o (XVb) de manera que se elimina el grupo protector en el átomo de nitrógeno del pirazol y, por lo tanto, se obtiene el compuesto deseado de fórmula (I) que contiene R como un grupo -COR' o -COOR"; y, si se desea, j) convertir el compuesto así obtenido de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) o hacia una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. De conformidad con el paso (h) del procedimiento, la reacción entre el compuesto de fórmula (I) y de fórmula (XI Va) o (XlVb) se puede llevar a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, tetrahidrofurano, didorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas de los mismos, en la presencia de un eliminador de protones adecuado tales como trietilamina o diisopropiletilamina, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -5°C a aproximadamente 35°C por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. La hidrólisis selectiva subsecuente del grupo en el átomo de nitrógeno del pirazol, en el paso (i) se lleva a cabo bajo condiciones alcalinas como se reportó anteriormente en el paso (f). Paso (j), comprensión de cualquier variante relacionada con la conversión de un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) siguiendo las condiciones operativas anteriormente mencionadas reportadas para el paso (c). De conformidad con incluso un método alternativo, el compuesto de fórmula (I) que se obtiene en el paso (a) también puede estar apoyado sobre una resina adecuada, en lugar de estar protegido en el átomo de nitrógeno del pirazol, y subsecuentemente se hace reaccionar para producir los compuestos deseados. Por lo tanto, es un objetivo adicional de la invención un procedimiento para preparar los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismo, dicho procedimiento comprende k) hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (I) como se obtiene en el paso (a) con una resina de isocianato poliestirénico de fórmula (XV) Resina de manera que se obtiene una poliestirenmetil urea de fórmula (XVI) Resin en donde X, R-i y R2 son como se describieron anteriormente; 1 ) convertir el compuesto así obtenido de fórmula (XVI) hacia compuesto de fórmula (XVII) Resin en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno; y m) escindir bajo condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVII) de manera que se elimina la resina y se obtiene el compuesto deseado de fórmula (I); y, si se desea, n) convertir el compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) o hacia una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
De conformidad con el paso (k), la reacción entre la resina de isocianatometll poliestirénico de fórmula (XV) y el compuesto de fórmula (I) se puede llevar a cabo en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, acetonitrilo, tolueno o mezclas del mismo, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente 5°C a aproximadamente 35°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 72 horas. De conformidad con el paso (I), la conversión del compuesto de fórmula (XVI) apoyado en la resina hacia el derivado de fórmula (XVII) correspondiente soportado en la resina en donde R es diferente de hidrógeno se puede llevar a cabo como se indicó anteriormente en el paso (b), mediante la operación bajo condiciones moderadas, por ejemplo a temperaturas con un intervalo de aproximadamente 5°C a aproximadamente 60°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 7 días. La escisión subsecuente de la resina, de conformidad con el paso (m) se lleva a cabo bajo condiciones alcalinas, mediante procesamiento de conformidad con técnicas convencionales, por ejemplo en la presencia de hidróxidos acuosos de sodio o de potasio en la presencia de un co-solvente adecuado tales como metanol, etanol, dimetilformamida, 1 ,4-dioxano o acetonitrilo. Cualquier conversión de un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) como mediante el paso (n) sigue las condiciones previamente reportadas para el paso (c).
Todos los compuestos de fórmula a partir de (II) a (XII), (XlVa), (XlVb) y (XV) de conformidad con los procedimientos objetivos de la presente invención se conocen y, si no están comercialmente disponibles per se, se pueden obtener de conformidad con métodos bien conocidos. El intermediario clave de fórmula (II), en particular, se puede preparar mediante la reducción de un compuesto de fórmula (XVIII) 0~ (XVIII) de conformidad con los métodos convencionales reportados en la literatura. Como un ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en la presencia de un agente reductor adecuado tales como, por ejemplo, polvo de hierro, polvo de estaño, cloruro de estaño, cloruro de titanio o a través de la hidrogenación catalítica en la presencia de níquel de Raney o catalizadores de Lindlar, en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, tolueno, dimetilformamida, acetonitrilo, metanol, etanol, agua, acético ácido o clorhídrico ácido, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -5°C a 90°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 4 días. A su vez, los compuestos de fórmula (XVI II) se pueden preparar mediante procesamiento de manera análoga al reportado por El Kassmi A. et al. en Synth. Comm. 1994, 24 (1 ), 95-101 , iniciando a partir de un compuesto de fórmula (XIX) Los compuestos de fórmula (XIX) en donde Ri es un grupo -COOEt, X es S, y R2 es hidrógeno se pueden preparar de conformidad con el procedimiento descrito por Dell'Erba C. et al. en Tetr. 1965, 21 , 1061-1066. Por analogía, este mismo procedimiento permite obtener los compuestos correspondientes de fórmula (XIX) en donde R1 es un grupo -R', - COOR', -S02R\ -SO2NHR' o 3?2?^", R\ R", R2 y X son como se definieron anteriormente, mediante el inicio a partir de un compuesto de fórmula (XX) Los compuestos de fórmula (XIX), en donde R1 es -SO2NHR' y R', R2 y X son como se describieron anteriormente, se pueden obtener convenientemente a partir de un compuesto correspondiente de fórmula (XX) en donde R1 es -S02CI, al hacerlo reaccionar con un compuesto de fórmula (VI) R'R"NH (VI) en donde R' y R", que son como se definieron anteriormente no son ambos al mismo tiempo hidrógeno. Esta última reacción se puede llevar a cabo en la presencia de una base terciaria tales como trietilamina, N,N- düsopropiletilamina o piridina, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo, o N,N-dimetilformamida, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. A partir de lo precedente es evidente para una persona experta en la técnica que la preparación de los compuestos de fórmula (XX) que tienen R-i igual a -S02NR'R" se puede llevar a cabo realmente como se describió previamente o, alternativamente, al hacer reaccionar de manera adecuada a un compuesto de fórmula (XX) que tiene Ri como -SO2NHR' con cualquier porción adecuada (por ejemplo una porción para alquilatación) para preparar sulfonamidas di-sustituidas. Los compuestos de fórmula (XX), en donde ambos R2 y R1 son diferentes de hidrógeno se pueden obtener de manera conveniente iniciando a partir de un compuesto de fórmula (XXI) a través de la brominación con un reactivo apropiado. Como un ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en la presencia de un agente para brominación tales como bromina, N-bromosuccinimida y los similares, en un solvente adecuado tales como tolueno, diclorometano, cloroformo, éter dietílico, tetrahidrofurano, acetonitrilo o ?,?-dimetilformamida, a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente -10°C a reflujo y por un tiempo que varía de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. Finalmente, de conformidad con una modalidad de la invención incluso más preferida, los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden preparar mediante un procedimiento que comprende: i) convertir mediante una reacción apropiada un compuesto de fórmula (XXII) en donde R-i, R2 y X son como se describieron anteriormente, y Hal es un átomo de halógeno, hacia el derivado ciano correspondiente; opcionalmente separando el isómero deseado si R-i en la fórmula (XXII) anteriormente mencionada también es un residuo CHO; ii) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXII) así obtenido: (XXIIf) en donde R-i, R2, X y Hal son como se describieron anteriormente, con un derivado de hidrazona de fórmula (XXIV): RaRbC=N-NH2, en donde Ra y Rb son un grupo alquilo de C C6 de cadena recta o ramificada, arilo, arilalquilo de C C6 o, tomándolos junto con el átomo de carbono al cual están unidos, forman un grupo heterociclo opcionalmente fusionado o un grupo cicloalquilo de C5-C7, bajo atmósfera inerte en la presencia de un catalizador de Pd, un ligando y una base; iii) tratar el compuesto resultante de fórmula (XXV) en donde R-i, R2, X, Ra y Rb son como se describieron anteriormente, con un ácido en un solvente adecuado, de manera que se obtiene un compuesto de fórmula (I) en donde R es un átomo de hidrógeno y R-i , 2 y X son como se describieron anteriormente y, si se desea, convertir el compuesto así obtenido de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno; y/o, si se desea, convertir un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) o hacia una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se describió anteriormente bajo los pasos b) y c): d), e), f) y g); h), i), j) o k), I), m), n). Como un ejemplo, un compuesto hidrolizado resultante en donde R1 es un grupo COOH que se puede hacer reaccionar entonces con un compuesto de fórmula (X) como se definió anteriormente, mediante procesamiento de conformidad con métodos convencionales para preparar ésteres, de manera que se obtiene otro compuesto de fórmula (I) en donde R1 es COOR'.
De conformidad con el paso i) del procedimiento, se puede llevar a cabo la conversión del grupo CHO hacia un residuo CN de conformidad con los métodos convencionales reportados en la literatura. Como un ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en la presencia de hidroxilamina o un derivado del mismo, en la presencia de una base semejante a piridina, trietilamina, ?,?-diisopropiletilamina, acetato de sodio o los similares; en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, agua, tetrahidrofurano (THF), acetonitrilo ( eCN), dimetilformamida (DMF), dioxano, metanol o etanol. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que tiene un intervalo de · aproximadamente 0°C a aproximadamente 40°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 6 horas. La oxima así obtenida se convierte entonces hacia el compuesto deseado de fórmula (XXIII), sin la necesidad de ser aislado, mediante tratamiento con un agente deshidratador adecuado tales como, por ejemplo, anhídrido trifluoroacético. Como en el paso ii) del procedimiento, la reacción con un derivado de hidrazona se lleva a cabo bajo atmósfera inerte tales como atmósfera de nitrógeno o de argón, en la presencia de un catalizador de Pd, semejante a Pd(AcO)2PdCI2, Pd2(dba)3, una base tales como Cs2C03, K2C03 o K3P04, y un ligando de difosfina semejante a 2,2'-b¡s(difenilfosfino)-1 ,1'- binaftils(BINAP), 1 ,1 ,-bis(difenilfosfino)ferroceno (DPPF), 10,1 1-dihidro-4,5- bis(difenilfosfino)dibenzo[b,f]oxepina (HomoXantphos), bis(2- (difenilfosfino)fenil)éter (DPEphos), 9,9-dimetil-4,6-bis(difeniifosfina)xanteno (Xantphos), (o-bifenil)P(t-Bu)2, (o-bifenil) PCy2 o los similares, o un ligando de dialquilfosfinobifenilo funcionalizado tales como 2-diciclohexilfosfino-2'-dimetilaminobifenilo y los similares (véase J. Org. Chem. , 65 (17), pp. 5338-5341 , 2000). El solvente adecuado es, por ejemplo, tolueno, MeCN, DMF, o dioxano, y la reacción se lleva a cabo a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente 70°C a aproximadamente 130°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 72 horas. Como para el derivado de hidrazona de fórmula (XXIV), cuando Ra y Rb, se toman junto con el átomo de carbono al cual están unidos, forman un heterociclo opcionalmente fusionado, éste puede ser por ejemplo un xanteno o un tioxanteno o los similares; cuando forman un grupo cicloalquilo de C5-C7, éste puede ser por ejemplo un anillo ciclohexano o los similares. Otros derivados de hidrazona que se pueden utilizar en este paso se describen en la literatura, véase por ejemplo J. Am. Chem. Soc. , 120 (26), pp. 6621-6622, 1998. La reacción del paso iii) que produce el compuesto de fórmula (I) se lleva a cabo con un ácido tales como ácido p-toluensulfónico, ácido metansulfónico, ácido azufréico, ácido clorhídrico, ácido trifluoroacético, ácido perclórico y los similares, en un solvente adecuado tales como, por ejemplo, agua, un alcohol semejante a metanol, etanol, propanol, butanol, ter-butanol o los similares, o una mezcla del mismo, opcionalmente mezclada con otro solvente semejante a tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano, DMA, NMP. La reacción se lleva a cabo a una temperatura que tiene un intervalo de aproximadamente 20°C a aproximadamente 120°C y por un tiempo que varía de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 12 horas. En este paso iii), el tratamiento ácido también puede convertir el grupo R-i hacia un grupo diferente, por ejemplo mediante hidrólisis, por ejemplo a partir de COOR' a COOH, o mediante transesterificación, por ejemplo a partir de COOR" a COOR', en donde el grupo R' resultante es diferente del grupo inicial, dependiendo del solvente alcohólico empleado. Se conocen todos los compuestos de fórmula (XXII) y (XXIV) de conformidad con los procedimientos objetivos de la presente invención y, si no están comerciaimente disponibles per se, se pueden obtener de conformidad con métodos bien conocidos. El intermediario clave de fórmula (XXII), en particular, se puede preparar iniciando a partir de un compuesto de fórmula (XXVI) en donde Ri, R2, X y Hal son como se describieron anteriormente, de conformidad con los métodos convencionales reportados en la literatura. Como un ejemplo, la reacción se puede llevar a cabo en la presencia de un derivado de litio, seguido por tratamiento en dimetilformamida y luego con un ácido, de manera análoga al método reportado por Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1997), 45 (5), 799-806 o por J. Org. Chem. , 67 (12), 4177-4185; 2002. Como un ejemplo adiciona!, la reacción se puede llevar a cabo bajo condiciones moderadas con un compuesto de alquil magnesio de manera análoga al método reportado por J. Org. Chem. , 65 (15), 4618-4185; 2000. El compuesto inicial de fórmula (XXVI) son compuestos conocidos o se pueden preparar fácilmente mediante halogenación de un compuesto de fórmula (XXI) como de definió anteriormente, seguido por esterificación cuando R-i es C02H. Los compuestos intermediarios de la fórmula (XXIII) y (XXV) son compuestos novedosos y por lo tanto son un objetivo adicional de la presente invención. A partir de lo anteriormente mencionado, es evidente para una persona experta en la técnica que se pueden preparar los compuestos de fórmula (I) de la invención, preferiblemente, al llevar a cabo las reacciones anteriormente descritas de manera combinatorial. Como un ejemplo, los compuestos de fórmula (XVI) y (XVII) que están apoyados sobre partículas de resina, por ejemplo de resina poliestirénica e incluso más preferiblemente de resina poliestirénica de metilisocianato, y que se prepara como se describió anteriormente, se puede hacer reaccionar en una variedad de formas como se reportó anteriormente, de manera que lleva a una variedad de compuestos de fórmula (I), por ejemplo que consiste de miles de compuestos diferentes de fórmula (I), de conformidad con los métodos de química combinatorial. Por lo tanto es un objetivo adicional de la invención una librería de química combinatorial que comprende una pluralidad de compuestos de fórmula (I) en donde X es un grupo seleccionado a partir de NR\ O, S, SO o SO2; cada uno de R y R-i, siendo los mismos o diferentes, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R', -COR', -COOR', -- CONHR', - CONR'R", -SO2R', -SO2NHR' o -S02NR'R"; en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, se selecciona independientemente a partir de hidrógeno o un grupo alquilo de C1-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido de manera adicional, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, arilo, heterociclilo o arilalquilo de C-1-C6; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R\ -ChbOR' y OR', en donde R' es como se definió anteriormente; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Farmacología Los compuestos de fórmula (I) son activos como inhibidores de la proteína cinasa y por lo tanto son útiles, por ejemplo, para restringir la proliferación des-regulada de células tumorales. En terapia, éstos se pueden utilizar en el tratamiento de diversos tumores, tales como aquellos anteriormente reportados, así como en el tratamiento de otros trastornos proliferativos de la célula tales como psoriasis, proliferación de célula de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis y estenosis post-quirúrgica y restenosis y en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. La actividad inhibidora de los inhibidores putativos de cdk/ciclina y la potencia de los compuestos seleccionados se determinó a través de un método de ensayo basado en el uso de la tecnología de SPA (Amersham Pharmacia Biotech). El ensayo consiste de la transferencia de la porción fosfato marcado con radioactividad por la cinasa hacia un sustrato biotinilado. El producto biotinilado resultante marcado con 33P se deja unir a lechos de SPA revestidos con estreptavidina (capacidad de biotina 130 pmoles/mg), y la emisión de luz se midió en un contador de centelleo.
Ensayo de la inhibición de la actividad de la cdk2/Ciclina A Reacción de la cinasa: 4 µ? de sustrato de histona H1 biotinilada en casa (Sigma # H-5505), 10 µ? de ATP (0.1 microCiP^y-ATP), 1.1 nM del complejo Ciclina A/CDK2, inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgCI2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml de BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 00 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ? , 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 1 10 µ?_ de la suspensión y se transfirieron dentro de OPTIPLATEs de 96 pozos que contenían 100 µ? de CsCI 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radioactividad Packard TOP-Count Determinación de 1C50: Los inhibidores se evaluaron a concentraciones diferentes con un intervalo a partir de 0.0015 a 10 µ?. Los datos experimentales se analizaron mediante el programa de cómputo GraphPad Prizm utilizando la ecuación logística de cuatro parámetros: y = parte inferior+ (parte superior-parte ¡nferior)/(1 +10A ((loglC50-x)*pendiente)) en donde x es el logaritmo de la concentración del inhibidor, y es la respuesta; e inicia en la parte inferior y va hacia arriba con una curva sigmoide.
Cálculo de Ki; Método experimental: La reacción se llevó a cabo en un regulador de pH (Tris 10 mM, pH 7.5, MgCI2 10 mM, 0.2 mg/ml de BSA, DTT 7.5 mM) que contiene enzima 3.7 nM, histona y ATP (relación constante de ATP frío/marcado 1/3000). La reacción se detuvo con EDTA y el sustrato se capturó sobre fosfomembrana (placas de 96 pozos para selección múltiple a partir de Millipore). Después de un lavado extensivo, las placas para selección múltiple se leyeron en un contador de mesa. Se midió el control (tiempo cero) para cada concentración de ATP y de histona.
Diseño experimental: Las velocidades de la reacción se midieron a cuatro concentraciones de ATP, substrato (histona) e inhibidor. Una matriz de concentración de 80 puntos se diseñó alrededor de los valores respectivos de ATP y de la Km del sustrato, y de los valores IC50 del inhibidor (0.3, 1 , 3, 9 veces la Km o los valores IC50). Un experimento de curso de tiempo preliminar en la ausencia del inhibidor y a las diferentes concentraciones de ATP y del sustrato permite la selección de un punto de tiempo terminal particular (10 minutos) en el intervalo lineal de la reacción para el experimento de determinación de Ki.
Estimaciones de parámetros cinéticos: Los parámetros cinéticos se estimaron mediante regresión simultánea no lineal de mínimos cuadrados utilizando [la ecuación 1] (inhibidor competitivo con respecto al ATP, mecanismo al azar) utilizando la serie de datos completos (80 puntos): Vm» A * B [Ecuación 1] Ka B Ki p en donde A=[ATP], B=[sustrato], l=[inhibidor], Vm= velocidad máxima, Ka, Kb, Ki las constantes de disociación del ATP, sustrato e inhibidor respectivamente, y ß el factor de cooperatividad entre el sustrato y la unión al ATP y el sustrato y el inhibidor de unión respectivamente. Además los compuestos seleccionados se caracterizan sobre un panel de ser/tre cinasas estrictamente relacionado con el ciclo celular (cdk2/ciclina E, cdkl/ciclina B1 , cdk5/p25, cdk4/ciciina D1 ), y también para especificidad sobre MAPK, PKA, EGFR, IGF1-R, Aurora-2 y Cdc 7 Ensayo de inhibición de la actividad de la cdk2/Ciclina E Reacción de la cinasa: 10 µ? en sustrato de histona H1 biotinilado en casa (Sigma # H-5505), ATP 30 µ? (0.3 microCiP3VATP), 4 ng de complejo GST-Ciclina E/CDK2, inhibidor en un volumen final de 30 µ? del regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgCI2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml de BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 60 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? del regulador de pH PBS que contiene EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ?, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 10 µ? de la suspensión y se transfirieron dentro de OPTIPLATEs de 96 pozos que contenían 100 µ? de CsCI 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radioactividad Packard TOP-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la cdkl/Ciclina B1 Reacción de la cinasa: sustrato de histona H1 biotinilada en casa 4 uM (Sigma # H-5505), ATP 20 µ? (0.2 microCi ?33?-???), 3 ng del complejo de Ciclina B/CDK1 , inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 0 mM pH 7.5, MgCI2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml de BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de una incubación de 20 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante 100 µ? de PBS + EDTA 32 mM + 0.1 % de Tritón X-100 + ATP 500M, que contenía 1 mg de lechos de SPA. Luego se transfirió un volumen de110 µ? a Optiplate. Después de una incubación de 20 minutos para la captura del sustrato, se añadieron 100 µ? de CsCI 5M para permitir la estratificación de los lechos hasta la parte superior de la Optiplate y se dejaron reposar 4 horas antes de contar la radioactividad en el instrumento Top-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la cdk5/p25 El ensayo de inhibición de la actividad de la cdk5/p25 se llevó a cabo de conformidad con el siguiente protocolo. Reacción de la cinasa: sustrato de histona H1 biotinilada 10 uM (Sigma # H-5505), 30 µ? ATP (0.3 microCi ?33?-???), 15 ng del complejo CDK5/p25, inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgC½ 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ?, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 1 0 ? de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenía 100 µ? de CsCI 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radioactividad Packard Top-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la cdk4/Ciclina D1 Reacción de la cinasa: sustrato de GST-Rb de ratón 0,4 uM (# sc-4112 a partir de Santa Cruz), ATP 10 µ? (0.5 µ?? ?33?-???), 100 ng del baculovirus que expresa GST-cdk4/GST-Ciclina D1 , concentraciones adecuadas del inhibidor en un volumen final de 50 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgCI2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 40 minutos a 37°C, la reacción se detuvo mediante la adición de 20 µ? de EDTA 120 mM.
Captura: 60 µ? se transfirieron a partir de capa pozo a una placa de selección múltiple, para permitir que el sustrato se una a un filtro de fosfocelulosa. Luego las placas se lavaron 3 veces con 150 µ?/???? de PBS libre de Ca++/Mg++ y se filtraron mediante un sistema de filtración para selección múltiple.
Detección: Los filtros se dejaron secar a 37°C, luego se añadieron 100 µ?/???? de solución para centelleo y se detectó el fragmento Rb marcado con 33P mediante conteo de radioactividad en el instrumento Top-Count. Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la MAPK Reacción de la cinasa: sustrato MBP biotinilado en casa 10 µ? (Sigma # M-1891 ), ATP 15 µ? (0.15 microCi ?33?-???), 30 ng de GST-MAPK (Upstate Biothecnology # 14-173), inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgCI2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ?, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 1 10 µ? de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenia 100 µ? de CsCI 5 . Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radioactividad Packard TOP-Count.
Determinación de IC5Q: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la PKA Reacción de la cinasa: sustrato de histona H1 biotinilada en casa 10 µ? (Sigma # H-5505), ATP 10 µ? (0.2 microM ?33?-???), 0.45 U de PKA (Sigma # 2645), inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (TRIS HCI 10 mM pH 7.5, MgC½ 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo forma de U. Después de la incubación por 90 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ?, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 1 0 µ?_ de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenía 100 µ? de 5M CsCI. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radiactividad Packard TOP-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la EGFR Reacción de la cinasa: sustrato MBP biotinilado en casa 0 µ? (Sigma # M-1891 ), ATP 2 µ? (0.04 microCi ?33?-???), 36 ng de GST-EGFR expresado en célula de insecto, inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (Hepes 50 mM pH 7.5, MgCI2 3 mM, MnCI2 3 mM, DTT 1 mM, NaV03 3 µ?, + 0.2 mg/ml BSA) se añadieron a cada pozo de una placa en 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 20 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP 500 µ? frío, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 110 µ? de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenía 100 µ? de 5M CsCI. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radioactividad Packard TOP-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad del IGF1-R El Ensayo de inhibición de la actividad del IGF1-R se llevó a cabo de conformidad con el siguiente protocolo. Activación de la enzima: IGF1 -R se debe activar mediante auto-fosforilación antes de iniciar el experimento. Justo antes del ensayo, se incubó una solución de enzima concentrada (694 nM) por media hora a 28°C en la presencia de ATP 100 µ? y luego se llevó a la dilución de trabajo en el regulador de pH indicado. Reacción de la cinasa: péptido IRS1 biotinilado 10 µ? (PRIMM) sustrato, inhibidor 0-20 µ?, ATP 6 µ?, 1 microCi 33P-ATP, y GST-IGF1-R 6 nM (pre-incubado por 30 minutos a temperatura ambiente con ATP frío 60 µ?) en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (HEPES 50 mM pH 7.9, MnCI2 3 mM, DTT 1 mM, NaV03 3 M) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de la incubación por 35 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de 100 µ? de regulador de pH PBS que contenía EDTA 32 mM, ATP frío 500 µ?, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 1 10 µ?_ de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenía 100 µ? de 5M CsCI. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radiactividad Packard TOP-Count.
Ensayo de inhibición de la actividad de Aurora-2 Reacción de la cinasa: péptido biotinilado 8 µ? (4 repetidos de LRRWSLG), ATP 10 µ? (0.5 uCi ?33?-???), 7.5 ng de Aurora 2, inhibidor en un volumen final de 30 µ? de regulador de pH (HEPES 50 mM pH 7.0, MgCI2 10 mM, DTT 1 mM, 0.2 mg/ml de BSA, ortovanadato 3 µ?) se añadieron a cada pozo de una placa de 96 pozos con fondo en forma de U. Después de 60 minutos de incubación a temperatura ambiente, la reacción se detuvo y el péptido biotinilado se capturó mediante la adición de 100 µ? de lechos en suspensión.
Estratificación : 100 µ? de CsCI2 5 M se añadieron a cada pozo y se dejaron reposar por 4 horas antes de que se contara la radiactividad en el instrumento Top-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente Ensayo de inhibición de la actividad de la Cdc7/dbf4 El Ensayo de inhibición de la actividad de la Cdc7/dbf4 se llevó a cabo de conformidad con el siguiente protocolo. El sustrato Biotina-MCM2 se trans-fosforiló mediante el complejo Cdc7/Dbf4 en la presencia de ATP seguido con ?33-???. El sustrato Biotina-MCM2 fosforilado se capturó entonces mediante lechos de SPA revestidos con estreptavidina y se evaluó el grado de fosforilado mediante conteo de ß. El ensayo de inhibición de la actividad de la Cdc7/dbf4 se llevó a cabo en una placa de 96 pozos de conformidad con el siguiente protocolo. A cada pozo de las placas se les añadieron: - 10 µ? del sustrato (biotinilado MCM2, concentración final de 6 µ?) - 10 µ? de enzima (Cdc7/Dbf4, concentración final de 17.9 nM) - 10 µ? del compuesto prueba (12 concentraciones en incremento en el intervalo de nM a µ? para generar una curva dosis respuesta) - 10 µ? de una mezcla de ATP frío (concentración final de 2 µ?) y entonces se utilizó ATP radiactivo (relación molar 1/5000 con ATP frío) para iniciar la reacción la cual se dejó que tomara lugar a 37°C. El sustrato, la enzima y el ATP se diluyeron en HEPES 50 mM pH 7.9 que contenía MgCI2 15 mM, DTT 2 mM, NaV03 3 µ?, glicerofosfato 2 mM y 0.2 mg/ml de BSA. El solvente para los compuestos prueba también contenía 10% de DMSO. Después de la incubación por 60 minutos, la reacción se detuvo mediante la adición a cada pozo de 100 µ? de PBS pH 7.4 que contenía EDTA 50 mM, ATP 1 mM frío, 0.1 % de Tritón X100 y 10 mg/ml de lechos de SPA revestidos de estreptavidina. Después de 20 minutos de incubación, se retiraron 110 µ?_ de la suspensión y se transfirieron dentro de una placa de 96 pozos OPTIPLATEs que contenía 100 µ? de CsCI 5M. Después de 4 horas, las placas se leyeron por 2 minutos en un lector de radiactividad Packard TOP-Count.
Determinación de IC50: véase anteriormente. Los compuestos de la invención pueden ser útiles en terapia, por ejemplo, para restringir la proliferación des-regulada de células tumorales. Más específicamente, los biciclopirazoles de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres incluyendo, pero limitados a carcinoma de diversos órganos, tejidos y glándulas tales como de vejiga, de mama, de colon, de riñon, de hígado, de pulmón, incluyendo cáncer pulmonar de células pequeñas, de esófago, de vesícula biliar, de ovario, de páncreas, estómago, de cérvix, de tiroide, de próstata, y de piel, incluyendo carcinoma de célula escamosa; tumores hematopoiéticos del linaje linfoide, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de célula B, linfoma de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de célula pilosa y linfoma de Burquett; tumores hematopoiéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielogenosas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimatoso, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentosum, queratoxantomas, cáncer folicular de la tiroides y sarcoma de Kaposi. Debido al papel clave de · las PKs en la regulación de la proliferación celular, los biciclopirazoles de la invención también pueden ser útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos proliferativos de la célula tales como, por ejemplo, híperplasia benigna de la próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neuro-fibromatosls, psoriasis, proliferación de célula de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis por artritis y estenosis y restenosis post-quirúrgica. Los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, como se sugiere por el hecho de que la cdk5 está implicada en la fosforilación de la proteína tau (J. Biochem. , 1 17, 741-749, 1995). Los compuestos de la invención, como moduladores de la apoptosis, también pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer, infecciones virales, prevención del desarrollo del SIDA en individuos infectados con VIH, enfermedades autoinmunes y trastornos neurodegenerativos. Los compuestos de la invención pueden ser útiles para inhibir la angiogénesis tumoral y la formación de metástasis. Los compuestos de la invención son adecuados para la administración a un mamífero, por ejemplo a humanos, mediante las rutas usuales. El nivel de dosis depende como es usual de la edad, peso, condiciones del paciente y la ruta de administración. Por ejemplo, una dosis adecuada adoptada para administración oral de los compuestos de la invención, por ejemplo, N-bencil-3-{[4-(4-etiIpiperazin-1 -il)benzo¡l]amino}-1 H-tieno[3,2-c]plrazoi-5-carboxamida, puede tener un intervalo de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg por dosis, a partir de 1 a 5 veces al día. Los compuestos de la invención se pueden administrar en una variedad de forma de dosis, por ejemplo oralmente, en la forma de tabletas, cápsulas, tabletas revestidas con azúcar o con películas, soluciones líquidas o suspensiones; rectalmente en la forma de supositorios; parenteralmente, por ejemplo intramuscularmente, mediante inyección intravenosa y/o intratecal y/o intraespinal o infusión; o mediante administración transdermal. Además, los compuestos de la invención se pueden administrar ya sea como agentes particulares o, alternativamente, en un método de terapia de combinación que comprende tratamientos anticancerosos adicionales tales como terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos, agentes tipo antibiótico, agentes para alquilatación, agentes antimetabolito, agentes hormonales, agentes inmunológicos, agentes tipo interferón, inhibidores de la ciclooxigenasa (por ejemplo inhibidores de la COX-2, en particular celecoxib, rofecoxib, parecoxib y valdecoxib), inhibidores de la metaloproteasa de matriz, inhibidores de la telomerasa, inhibidores de la tirosina cinasa, agentes antireceptor del factor de crecimiento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes anti-angiogénesis, inhibidores de la farnesil transferasa, inhibidores de la ruta de transducción de la señal ras-raf, inhibidores del ciclo celular, otros inhibidores de la cdks, agentes para unión a tubulina, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II, y los similares. Si se formulan como una dosis fija, dichos productos de « combinación emplean los compuestos de esta invención dentro del intervalo de dosis anteriormente descrito y el otro agente farmacéuticamente activo dentro del intervalo de dosis aprobado. Los compuestos de fórmula (I) se pueden utilizar secuencialmente con agentes anticancerosos conocidos cuando es inapropiada una formulación de combinación. Por lo tanto, la invención, también provee un método para tratar a un mamífero, incluyendo humanos, que padece de una enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada (des-regulada) de la proteína cinasa, que comprende la administración a dicho mamífero que necesita del mismo, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de biciclopirazol de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a la vez que se llevan a cabo tratamientos anticancerosos simultáneos, separados o secuenciales.
Un objetivo adicional de la invención es el uso de un compuesto de fórmula (I), o a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de un medicamento para tratar una enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada de la proteína cinasa, en un paciente que se somete de manera simultánea, separada o secuencia! a tratamientos anticancerosos. La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en asociación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, el cual puede ser un vehículo o un diluyente. Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención usualmente se preparan siguiendo los métodos convencionales y se administran en una forma farmacéuticamente adecuada. Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, sucrosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, por ejemplo sílice, talco, esteárico, estearato de magnesio o de calcio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, por ejemplo almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes para desagregación, por ejemplo un almidón, algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes; materias colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. Dichas preparaciones farmacéuticas se pueden elaborar de manera conocida, por ejemplo, por medio de mezclado, granulación, formación de tabletas, procedimientos de revestimiento con azúcar, o de revestimiento con película. Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser por ejemplo jarabes, emulsiones y suspensiones. Los jarabes pueden contener un vehículo, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o mannitol y/o sorbitol. Las suspensiones y ias emulsiones pueden contener un vehículo, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, o alcohol polivinílico. Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo agua estéril, aceite de olivo, oleato de etilo, glicoles, por ejemplo propilenglicol, y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. Las soluciones para inyecciones intravenosas o infusiones pueden contener como vehículo, por ejemplo, agua estéril o preferiblemente pueden estar en la forma de soluciones salinas estériles, acuosas, isotónicas o pueden contener como un vehículo propilenglicol. Los supositorios pueden contener junto con el compuesto activo un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo mantequilla de cocoa, polietilenglicol, un agente tensioactivo de éster graso de polioxietilen sorbitano o lecitina. Los siguientes ejemplos se pretenden en la presente invención para ilustrar, sin representar ninguna limitación a, la presente invención.
EJEMPLOS SINTÉTICOS Los siguientes métodos CLAR se utilizaron en el análisis de los compuestos como se especifica en los ejemplos sintéticos establecidos a continuación. Como se utiliza en la presente invención, el término "Rt" se refiere al tiempo de retención para el compuesto utilizando el método CLAR especificado.
Método A El CLAR/EM se llevó a cabo en una columna Waters X Terra RP 8 (4.6 x 50 mm, 3.5 µ??) utilizando un sistema Waters 2790 CLAR equipado con un detector 996 Waters PDA y un espectrómetro de masas modelo ZQ de quadrupolo particular, equipado con una fuente de iones mediante electroaspersión (ESI). La fase móvil A fue regulador de pH de acetato de amonio 5 mM (pH 5.5 con ácido acético/acetonitrilo 95: 5), y la fase móvil B fue H20/acetonitrilo (5:95). Gradiente a partir de 10 a 90% de B en 8 minutos, mantenido al 90% de B por 2 minutos. La detección por UV fue a 220 nm y 254 nm. Velocidad de flujo 1 ml/minuto. Volumen de inyección 10 µ?. Registro total, intervalo de masa a partir de 100 a 800 amu. El voltaje capilar fue de 2.5 KV; la temperatura de la fuente fue de 120°C; el cono fue de 10 V. Los tiempos de retención (CLAR a temperatura ambiente) se proporcionan en minutos a 220 nm o 254 nm. Las masas se proporcionan como la relación m/z. Método B El CLAR/EM se llevó a cabo en una columna hypersil C18 BDS (2 x 50 mm, 5 µ??) utilizando un sistema Hewlett Packard 1312A CLAR equipado con un detector de polímero de Labs PL1000 para difracción evaporativa de luz y un espectrómetro de masas icromass ZMD, equipado con una fuente de iones mediante electroaspersión (ESI). La fase móvil A fue solución acuosa de ácido trifluoroacético (0.1 % v/v), y la fase móvil B fue solución de acetonitrilo de ácido trifluoroacético (0.1 % v/v). Gradiente a partir de 0 a 95% de B en 1.8 minutos, mantenido al 95% de B por 0.3 minutos. Velocidad de flujo 1 ml/minuto. Volumen de inyección 3 µ?. Registro total, intervalo de masa a partir de 150 a 800 amu. La temperatura de la fuente fue de 140°C; el cono fue de 25 V. Los tiempos de retención (CLAR a temperatura ambiente) se proporcionan en minutos. Las masas se proporcionan como relaciones m/z.
EJEMPLO 1 Preparación de metil 5-ciano^-nitro-tiofen-2-carboxilato (1) A una solución de metil éster del ácido 5-bromo-4-nitro-tiofen-2-carboxílico (0.30 moles, 80.0 g), en dimetilformamida anhidra (100 mL), agitada bajo argón, se le añadió cianuro de cobre seco (0.36 moles, 32.2 g). La mezcla se calentó a 80°C, por 3 horas, y se vertió dentro de una solución de FeCI3. 6 H2O (0.45 moles, 121.6. g) en agua (170 mL) y ácido clorhídrico 10 N (35 mL). Después de 20 minutos de calentamiento a 60°C, el medio de reacción se enfrió y se extrajo con diclorometano (6x200 mL). La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 6 N (2x200 mL), agua (2x250 mL) y agua saturada con NaHCC>3 (150 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo para producir un sólido rojo, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea, sobre gel de sílice, utilizando hexano/acetato de etilo (35:15) como eluyente, para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (36.3 g, 57%). P:f. 83-85°C. (M+H)+ =213 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 8.3(s); 3.9(s). De manera análoga, al utilizar etil éster del ácido 5-bromo-4-nitro-tiofen-2-carboxílico (2), se preparó: Etil 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato, p.f. 94-96°C. (M + H)+ = 227, 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 8.3(s); 4.4(q); 1.3(t).
EJEMPLO 2 Preparación de metil 4-amino-5-ciano-tiofen-2-carboxilato (3) Una suspensión de metil 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato (0.17 moles, 36 g) y polvo de hierro (0.51 moles, 28.5 g) en ácido acético glacial 68 mL (1.2 moles) se sometió a reflujo por 3 horas. El producto sin purificar se concentró bajo vacío y se neutralizó con amoniaco diluido. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x250 mL) y se secó sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo para producir un sólido amarillo, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando hexano/acetato de etilo (38:12) como eluyente, para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo (21.4 g, 69%). P.f. 187-189°C. (M + H)+ = 183 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 7.1(s); 6.7(s); 3.7(s). De manera análoga, mediante la utilización del etil éster apropiado descrito en el ejemplo 1 , se preparó: Etil 4-amino-5-c¡ano-tiofen-2-carboxilato (4). P.f. 38- 40°C. (M + H)+ = 197. H-RMN (DMSO-d6) d ppm 7.2(s); 6.6(s); 4. 3(q); 1.3(t).
EJEMPLO 3 Preparación de metil 3-amino-1H-tienof3,2-c1pirazoI-5-carboxilato (5) A una suspensión enfriada con hielo de metil 5-ciano-4-nitro-tiofen-2-carboxilato (0.10 moles, 21.0 g) en 120 mL de ácido clorhídrico al 37% se le añadió, gota a gota, una solución de nitrito de sodio (0.12 moles, 8.3 g) en 12 mL de agua. Después de 1.5 horas, la suspensión fría se añadió gota a gota a una solución preformada de cloruro de estaño (0.80 moles, 5 .7 g) en 120 mL de ácido clorhídrico al 37%, a 5°C. Después de 3 horas, la suspensión fría se filtró y el sólido húmedo se trató con 350 mL de agua en ebullición, por 30 minutos. La solución opaca caliente se aclaró mediante filtración a través de un filtro de tela. Los licores se enfriaron con hielo y se trataron, gota a gota, con 180 mL de hidróxido de sodio al 17%. El sólido obtenido se filtró y se secó, bajo vacío, a 50°C, para producir 7.3 g del compuesto del título como un sólido amarillo (rendimiento del 37%). P.f. 218-220°C. (M + H)+ = 198 1 H-RMN (D SO-d6) d ppm 11.7(s); 7.6(s); 5.2(s); 3.8(s). De manera análoga, mediante la utilización del etil éster apropiado descrito en el ejemplo 2, se preparó: Etil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato (6), P.f. 231-233°C. (M + H)+ = 212. 1 H-RMN (DMS0-d6) d ppm 1 1.8(s); 7.5(s); 5.2(s); 4.3(q); 1.3(t).
EJEMPLO 4 Preparación de 1 -etil 5-metil 3-amino-1H-tienof3,2-c1pirazol-1 ,5- dicarboxilato (7) A una suspensión enfriada con hielo de metil áster del ácido 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxíl¡co (35.5 milimoles, 7.0 g) y ?,?'-diisopropiletilamina (0.21 moles, 36.5 mL) en 71 mL de tetrahidrofurano se les añadió, gota a gota, 3.5 mL de cloroformato de etilo (36.6 milimoles). Después de 1.5 horas, la suspensión fría se concentró bajo vacío y se diluyó con diclorometano. La fase orgánica se lavó con regulador de pH, pH 4, hidróxido de sodio 1 N, salmuera y se secó sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo y se trituró con diclorometano para producir 6 g de 1-etil 5-metil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato (7) Sólido amarillo, Método cromatográfico A Rt 3.7 (M + H)+ = 270. 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 7.95 (amplio s 1 H); 4.51 (q 2H); 3.93 (s 3H); 1.47 (d 3H). De manera análoga, mediante la utilización del etil éster apropiado descrito en el ejemplo 3, se preparó: Dietil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-1 ,5-dicarboxilato (8) (M + H)+ = 284 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 7.7(s); 6.3(s); 4.4(q); 4.2(q); 1.3(m).
EJEMPLO 5 Preparación de Dietíl 3-f(4-fluorobenzoil)aminol-1H-t¡enor3,2-c1pirazol- 1 ,5-dicarboxilato (9) Una solución de cloruro de 4-fluorobenzoilo (0.106 moles, 12.7 mL) en 50 mi de diclorometano anhidro se añadió gota a gota a una suspensión de 1-etil 5-metil 3-amino-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato (0.071 moles, 19.1 g) enfriada en hielo en 100 mL de diclorometano anhidro y 1 14.0 mL de piridina (1.412 moles). La suspensión resultante se agitó a 5°C, por 5 horas. El producto sin purificar se concentró bajo vacío y se diluyó con diclorometano. La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico 1 N, hidróxido de sodio 1 N, salmuera y se secó sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo para producir un sólido amarillo, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea, sobre gel de sílice, utilizando hexano/acetato de etilo (4:1 ) como eluyente, para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo claro ( 9.6 g, 68%). Método cromatográfico A Rt 6.59 (M + H)+ = 392 De manera análoga, al hacer reaccionar 1-etil 5-met¡l 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato (7) con el cloruro de acilo apropiado, se prepararon los siguientes compuestos: (10) 1-etil 5-metil 3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (1 1 ) 1 -etil 5-metil 3-[(4-terbutilbenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2- c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (12) 1-etil 5-metil 3-[(3-fenoxibenzoil)amino]- H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (13) 1-etil 5-metil 3-[(4-trifluorometoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (14) 1-etil 5-metil 3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (15) 1-etil 5-metil 3-[2-furoiIamino]-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-1 ,5-dicarboxilato; (16) 1 -etil 5-metil 3-[(1 ,3-benzodioxol-5-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (17) 1-etil 5-metil 3-{[5-(morfoIin-4-ilmetil)-2-furoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (18) 1-etil 5-metil 3-[(4-isopropoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (19) 1-etil 5-metil 3-[(3-cianobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (20) 1-etil 5-metil 3-(pentanoilamino)- H-tieno[3,2-c]pirazol- ,5-dicarboxilato; (21) 1-etil 5-metil 3-(ciclopropilcarbonilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (22) 1-etil 5-metil 3-(ciclobutilcarbonilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato.
EJEMPLO 6 Preparación de 1 -etil 5-metil 3-(^f(4-fluorobencil)amino1carbon¡l>amino)-1 H-tienof3,2-c1pirazol-1 ,5 ¦dicarboxilato (23) 4-Fluorobencilisocianato (0.130 mi, 1.02 milimoles) se añadió a una solución de 1 -etil 5-metil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato (85 mg, 0.32 milimoles) en diclorometano anhidro (5 mi). Después de agitar por 96 horas a temperatura ambiente, el solvente se removió bajo presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (eluyente diclorometano 50; alcohol metílico 0.5; 6% de amoniaco acuoso 0.1 ) para producir 80 mg del compuesto del título como un sólido blanco. Método cromatográfico A, Rt 6.1 , [M+H]+ 62 . De manera análoga, al hacer reaccionar 1 -etil 5-metil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-1 ,5-dicarbox¡lato con el isocianato apropiado, se prepararon los siguientes compuestos: (24) 1 -etil 5-metil 3-{[(bencilamino)carbonil]amino}- H-tieno[3,2-c]pírazol-1 ,5-dicarboxilato; (25) 1 -etil 5-metil 3-{[(proptlamino)carbonil]amino}- H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (26) 1-etil 5-metil 3-{[(ter-butilamino)carbonil]amino}- H-t¡eno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato; (27) 1-etil 5-metil 3-[({[3- (dimetilamino)propil]amino}carbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5- dicarboxilato.
EJEMPLO 7 Preparación de metil 1-(4-morfolin- -ilbenzoil)-3-r(4-morfolin-4- ilbenzo¡l)amino1-1 H-t¡enoí3,2-c1pirazol-5-carboxilato (28) Se añadió cloruro de oxalilo (19.2. 2 mi, 0.22 moles) a una suspensión de ácido 4-morfolin-4-ilbenzóico (7.56 g, 36.5 milimoles) en DCM * (210 mi) y DMF (0.34 mi). Después de someter a reflujo la muestra por 6.5 . horas, los elementos volátiles se removieron bajo presión reducida (tomando el residuo tres veces con tolueno). El clorhidrato de cloruro de 4-morfolin-4- benzoilo resultante se le añadió porción a porción (-0.5 horas) a una suspensión de metil éster del ácido 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5- carboxílico (2 g, 10.1 milimoles) en DCM seco (240 mi) y piridina (12.2 mi, 0.152 milimoles) bajo agitación a 5°C. La suspensión resultante se agitó por 72 horas a temperatura ambiente. Luego se añadieron 200 mi de bicarbonato de sodio acuoso a la mezcla de reacción, y después de agitar por 2 horas el residuo sólido se separó mediante filtración. Luego se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó para producir un sólido café. Las dos porciones sólidas se unieron, se trituraron con una mezcla de éter etílico y diclorometano (1 :5 v/v), se filtraron, se secaron bajo vacío a 40°C para producir 4.45 g de un polvo amarillo claro.
LC-EM, Método cromatográfico A, Rt 7.14, [M+H]+ 576. De manera análoga al hacer reaccionar metil éster del ácido 3-amino-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico con el cloruro de acilo apropiado, se prepararon los siguientes compuestos: (29) metil 1-[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; Método A, Rt 3.69; (30) metilo 1-[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{[4-(4-et¡lpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (31 ) metilo 1-[3-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{[3-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (32) metilo 1 -{4-[(1 -metilpiperidin-4-il)oxi]benzoil}-3-((4-[(1 -metilpiperidin-4-il)oxi]benzoil}amino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato.
EJEMPLO 8 Preparación de ácido 3-f4-Fluorobenzoilamino)-1 H-tienor3,2-c1pirazol-5- carboxílico (33) Una suspensión de 1 -etil 5-metil 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilato (46.9 mílimoles, 19 g) en 40 mL de NaOH/H20 (1 : 1 ) y 100 mL de etanol se calentó a 70°C, por 3 horas. Luego el producto sin purificar se concentró y el pH de la suspensión obtenida se ajustó a pH=4 al utilizar ácido clorhídrico al 37% y regulador de pH, pH 4. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x250 mL). Las capas orgánicas recolectadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo para producir 13.5 g de sólido blanco, el cual se utilizó en el siguiente paso sin ninguna purificación adicional (rendimiento del 94%). (M + H)+ = 306 Método A, Rt 2.00; De manera análoga, se prepararon los siguientes compuestos mediante la utilización de los 1 -etilo 5-metilo 3-(acilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-1 ,5-dicarboxilatos a partir de los ejemplos 5 y 6: (34) ácido 3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (35) ácido 3-[(4-terbutilbenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (36) ácido 3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (37) ácido 3-[(4-trifluorometox¡benzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; Método A, Rt 3. 61 ; (38) ácido 3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (39) ácido 3-[2-furoilamino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (40) ácido 3-[(1 ,3-benzodioxol-5-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (41 ) ácido 3-{[5-(morfolin-4-ilmetil)-2-furoil]amino}-1 H-tieno[3,2- c]pirazol-5-carboxílico; (42) ácido 3-[(4-¡sopropoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol- 5-carboxílico; (43) ácido 3-[(3-cianobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (44) ácido 3-(pentano¡lamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (45) ácido 3-(ciclopropilcarbonilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (46) ácido 3-(ciclobutilcarbon¡lamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (47) ácido 3-({((4-fluorobenzil)amino]carbonil}amino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxíl¡co; (48) ácido 3-{[(benzilamino)carboniI]amino}-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (49) ácido 3-{[(propilamino)carbonil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carbóxílico; (50) ácido 3-{[(ter-butilamino)carbonil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (51 ) ácido 3-[({[3-(dimetilamino)propil]amino}carbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico.
EJEMPLO 9 Preparación de metil 3-r(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino1-1 H-t¡enor3,2- clpirazol-5-carboxilato (52) Una mezcla de metil 1-(4-morfolin-4-ilbenzoil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato (4:3 g, 7.5 milimoles) en MeOH (200 mi) y Et3N (20 mi) se sometió a reflujo por 8 horas. Después del enfriamiento el precipitado se separó mediante filtración y se trituró con alcohol metílico caliente. Después de filtración y secado a 40°C bajo vacío se obtuvieron 2.4 g del compuesto del título. LC-EM, Método cromatográfico A, Rt 4.52, [M+H]+ 387. Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga: (53) metil 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; Método A, Rt 6.37; [M+ f 400; (54) metil 3-{[4-(4-etilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (55) metil 3-{[3-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxilato; Método A, Rt 3.20; (56) metil 3-({4-[(1-metilpiperidin-4-il)oxi]-benzoil}amino)-1 H-tieno[3,2c]pirazol-5-carboxilato; [M+H]+ 415.
EJEMPLO 10 Preparación de ácido 3-(4-morfoHn- -ilbenzoil)aminol-1 H-tienor3,2- clpirazol-5-carboxílico (57) Una mezcla de metil 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato (2.3 g, 6 milimoles) e hidróxido de sodio acuoso (12.5 mi de una solución 2N) en MeOH (50 mi) se calentó por 8 horas a 50°C. Después de enfriamiento el metanol se removió mediante evaporación ~ bajo presión reducida, se le añadió agua (5 mi), y el pH se ajustó a 7 mediante la adición de ácido clorhídrico acuoso. El precipitado se separó mediante filtración, se lavó con agua y etil éter, y se secó a 50°C bajo vacío. Se obtuvieron 2.2 g del compuesto del título. LC-EM, Método cromatográfico A, Rt 2.06, [M+H]+ 373. Los siguientes compuestos se prepararon de manera análoga: (58) ácido 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; Método A, Rt 4.14; [M+H]+ 386; (59) ácido 3-{[4-(4-etilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2- c]pirazol-5-carboxílico; (60) ácido 3-{[3-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (61 ) ácido 3-{4-[(1 -metilpiperidin-4-il)oxi]-benzo¡l}amino)-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 401.
EJEMPLO 11 Preparación de 3-r(4-fluorobenzoil)amino1-N-isopropil-1 H-tienor3,2- dpirazol-5-carboxamída (62) A una suspensión de ácido 3-(4-fluoro-benzoilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico (50.0 mg, 0.164 milimoles) enfriada en hielo y ?,?'-diisopropiletilamina (1.476 milimoles, 0.253 mL) en 0.3 mL de diclorometano seco se le añadió, gota a gota, 0.078 mL de etilcloroformato (0.492 milimoles). Después de 20 minutos, se añadieron 0.083 mL de isopropilamina (0.984 milimoles) a la solución obtenida y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 3 horas, se añadieron 0.2 mL de metanol y 0.1 mL de ?,?'-diisopropiletilamina y la mezcla de reacción se calentó a 40°C por 4 horas. El producto sin purificar se concentró bajo vacío y se diluyó con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con regulador de pH, pH 4, hidróxido de sodio 1 N, salmuera y se secó sobre Na2S04. El filtrado se evaporó hasta secarlo para producir un sólido amarillo, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea, sobre gel de sílice, utilizando diclorometano/metanol (48:2) como eluyente, para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (20.5 mg, 36%). (M + H)+ = 347 1 H-RMN (DMSO-d6) d ppm 12.8(s); 11.3(s); 8.3(d); 8.1 (m); 7.6(s); 7.3(m); 4.0(m); 4.2(q); 1.1 (m). De manera análoga, se prepararon los siguientes compuestos mediante la utilización del ácido 3-(acilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico apropiado y la amina apropiada: (63) 4-fluoro-N-5-[(4-metilpiperazin-1 -il)carbonil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}benzamida; Método A, Rt 3.10; [M+H]+ 388; (64) N-benzil-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 1.27; [M+H]+ 395; (65) N-benzil-3-[(3,5-difluorobenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 1.33; [M+H]+ 413; (66) 3-[(4-ter-butilbenzoil)amino]-N-etil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; [M+H]+ 371 ; (67) 3-[(3-cianobenzoil)amino]-N-(2-metoxietil)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 1.02; [M+H]+ 370; (68) N-benzil-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.51 ; [M+H]+ 469; (69) N-[(1 R)-1-feniletil]-3-{[4-(tr¡fluorometoxi)benzo¡l]am¡no}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.27; [M+H]+ 475; (70) N-(2, 6-dietilfenil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 7.13; [M+H]+ 503; (71 ) N-[(1 R)-1 -fenilpropil]-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.88; [M+H]+ 489; (72) N-(3,5-dimetox¡fenil)-3-{[4-(tnfluorometoxi)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.82; [M+H]+ 507; (73) N-(3-isopropoxipropil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}- 1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.85; [M+H]+ 471 ; (74) N-(2-morfolin-4-¡l-1 -feniletil)-3-{[4- (tr¡fluorometoxi)benzoil]amino}-1 H-t¡eno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.00; [M+Hf 560; (75) 3-(2-furo¡lamino)-N-2-feniletil)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.19; [M+H]+ 381 ; (76) N-butil-3-(2-furoilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.09; [M+H]+ 333; (77) N-[5-(pirrolidin-1 -ilcarbonil)-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-3-il]-2-furamida; Método B, Rt 1.17; [M+Hf 331 ; (78) N-(4-metilbenzil)-3-[(tien-2-ilcarbon¡l)amino]-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.31 ; [M+H]+ 397; (79) N-butil-3-[(t¡en-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.19; [M+H]+ 349; (80) N,N-dietil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol- 5-carboxamida; Método B, Rt 1.14; [M+H]+ 349; (81 ) 3-[(1 ,3-benzod¡oxol-5-¡lcarbonil)amino]-N-[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.32; [M+Hf 435; (82) 3-{[5-(morfol¡n-4-ilmet¡l)-2-furoil]amino}-N-[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.01 ; [M+H]+ 480; (83) 3-[(4-isopropoxibenzoil)amino]-N-[(1 R)-1 -fenilet¡l]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 6.34; [M+H]+ 449; (84) N-butil-3-(pentanoilamino)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5- carboxamida; Método B,Rt 1. 19; [M+H]+ 323; (85) N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.05; [M+H]+ 307; (86) N-butil-3-[(ciclopropilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método B, Rt 0.92; [M+H]+ 323; (87) N-alil-3-{[(bencilamino)carbonil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método B, Rt 1.09; [M+H]+ 356; (88) N-(2-feniletil)-3-{[(propilamino)carbonil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método B, Rt 1.17; [M+H]+ 372; (89) 3-{[4-(4-etilpiperazin-1-ii)benzoil]amino}-N-isopropil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; [M+H]+ 441 ; (90) N-etil-3-{[4-(4-etilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 2.58; [M+Hf 427; (91 ) N-bencil-3-{[4-(4-metilpiperaz¡n-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.70; [M+H]+ 475; (92) N-isopropil-3-{[4-(4-met¡lp¡perazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 2.90; [M+H]+ 427; (93) diclorhidrato de N-etil-3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 2.41 ; [M+H]+ 413; (94) N-(3-fluorobenzil)-3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.07; [M+H]+ 493; (95) N-(4-fluorobencii)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino)- 1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.04; [M+H]+ 493; (96) N-(3-clorobencil)-3-{[4-(4-metilp¡perazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.26; [M+H]+ 510; (97) N-(4-clorobencil)-3-{[4-(4-metiIpiperazin-1 -¡l)benzoil]am¡no}-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.27; [M+H]+ 510; (98) 3-{[4-(4-metilpiperaz¡n-1-¡l)benzo¡l]am¡no}-N-fenil-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.23; [M+Hf 461 ; (99) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-N-(1 -feniletil)-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.22; [M+H]+ 489; (100) 3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}-N-(1-fenilprop¡l)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 4.43; [M+H]+ 503; (101 ) N-(2-fluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.02; [M+H]+ 493; (102) N-(2,4-difluorobencil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.36; [M+H]+ 51 1 ; (103) N-(4-metox¡bencil)-3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.06; [M+H]+ 505; (104) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-N-[4-(trifluoromet¡l)bencil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.88; [M+Hf 543; (105) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-¡l)benzo¡l]amino}-N-[4- (trifluorometoxi)bencil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.98; [M+H]+ 559; (106) N-(2-clorobencil)-3-{[4-(4-metilp¡peraz¡n-1 -il)benzoil]amino}- 1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.51 ; [M+H]+ 510; (107) N-(2,6-dietilfenil)-3-{[4-(4-metilp¡perazin-1 -il)benzo¡l]amino}- 1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.72; [M+H]+ 517; ( 08) N-(2,6-d¡metilfenil)-3-{[4-(4-met¡lp¡perazin-1 -* il)benzo¡l]amino}-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 4.12; s [M+H]+ 489; (109) N-(2-cloro-6-metilfenil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1 - il)benzoil]am¡no}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.30; [M+H]+ 510; (1 10) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]annino}-N-[(1 S)-1- feniletil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.25; [M+H]+ 489; (1 11 ) 3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-¡l)benzoil]am¡no}-N-[(1 R)-1- feniletil]-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.25; [M+H]+ 489; (1 2) N-bencidr¡l-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.07; [M+H]+ 551 ; (113) N-bencil-N-met¡l-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzo¡l]am¡no}- 1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 3.99; [M+H]+ 489; (114) N-(2-furilmetil)-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-¡l)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.60; [M+H]+ 465; (115) 3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-il)benzoil]amino}-N-(tien-2-ilmetil)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.61 ; [M+H]+481 ; (116) N-2,3-dihidro-1 H-inden-1 -il-3-{[4-(4-metiIpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.47; [M+H]+ 501 ; (117) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzo¡l]amino}-N-1 ,2,3,4-tetrahidronaftalen-1-¡l-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.39; [M+H]+ 515; (118) 3-{[4-(4-met¡lp¡perazin-1-¡l)benzoil]am¡no}-N-[(1 S)-1-fenilpropi[]- H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.35; [M+H]+ 503; (119) 3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}-N-[(1 R)-1-fen¡lprop¡l]-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.35; [M+H]+ 503; (120) 3-{[4-(4-met¡lp¡perazin-1-il)benzoil]amino}-N-(2-morfolin-4- ¡l-1-feniletil)-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.64; [M+H]+ 574; (121 ) 3-{[4-(4-metilpiperaz¡n-1-il)benzoil]amino}-N-[(1 R)-1-fen¡letil]-1 H-tieno[2,3-c]p¡razol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.27; [M+H]+ 489; (122) bis (trifluoroacetato) de N-(2-cloro-6-metilbencil)-3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-i[)benzoil]am¡no}-1 H-t¡eno[3,2-c]p¡razol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 4.52; [M+H]+ 523; (123) 3-{[4-(4-metilp¡perazin-1-il)benzoil]amino}-N-[(1 -met¡l-1 H- pirrol-2-il)metil]-1 H-t¡eno[3,2-c]p¡razol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 3.41 ; [M+H]+ 478; (124) N-(3-furilmet¡l)-3-{[4-(4-met¡lpiperazin-1-il)benzoil]am¡no}- 1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.23; [M+H]+ 465; (125) N-benc¡l-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2- c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.80; [M+H]+ 462; (126) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzo¡l)am¡no]-N-[(1 R)-1-fen¡Iet¡l]-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 5.06; [M+H]+ 476; (127) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1 S)-1 -feniletil]-1 H-, tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.04; [M+H]+ 476; (128) N-bencidril-3-[(4-morfolin-4-ilbenzo¡l)amino]-1 H-tieno[3,2- c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 6.03; [M+H]+ 538; (129) N-[(1 S)-2-metox¡-1 -feniletil]-3-[(4-morfol¡n-4- ilbenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.79; [M+Hf 506; (130) N-[1-(4-clorofenil)et¡l]-3-[(4-morfolin-4-¡lbenzoil)amino]-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.61 ; [M+H]+ 511 ; (131 ) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1 R)-1 -fenilpropil]-1 H- t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 5.38; [M+H]+ 489; (132) N-(3-fluorobencil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzo¡l)am¡no]-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.04; [M+Hf 480; (133) N-(4-fluorob6ncil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1 H- tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 5.01 ; [M+Hf 480; (134) N-(4-clorobencil)-3-[(4-morfolin-4-iibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.43; [M+H]+ 496; (135) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1 S)-2-morfolin-4-il-1 -feniletil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 4.42; [M+H]+ 561 ; (136) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-N-[(1 S)-1-fenil-2-pirrolidin-1 -¡letil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.68; [M+H]+ 545; (137) 3-{[4-(4-met¡lpiperaz¡n-1-¡l)benzoil]am¡no}-N-[(1 S)-1-fen¡l-2-p¡rrolidin-1-¡letil]-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxannida; Método A, Rt 2.46; [M+H]+ 558; (138) N-isopropil-3-[(3-fenox¡benzo¡l)amino]-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.84; [M+H]+ 421 ; (139) N-etil-3-[(3-fenoxibenzoil)am¡no]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.47; [M+H]+ 407; (140) N-{5-[(4-metilp¡peraz¡n-1 -il)carbonil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}-3-fenoxibenzamida; Método A, Rt 4.45; [M+H]+ 462; (141 ) 4-fluoro-N-(5-{[4-(2-h¡droxietil)p¡peraz¡n-1-il]carbonil}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il)benzamida; Método A, Rt 3.00; [M+H]+ 418; (142) 3-(4-metilp¡perazin-1 -il)-N-{5-[(4-metilp¡perazin-1 -il)carbonil]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}benzam¡da; Método A, Rt 2.04; [M+H]+ 468; (143) N-(2-morfolin-4-ilbencil)-3-{[4-(trifluorometoxi)benzoil]amino}-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.1 1 ; [M+H]+ 546; (144) 4-fluoro-N-{6-metil-5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1H-t¡eno[3,2-c]pirazol-3-il}benzamida; Método A, Rt 3.50; [M+H]+ 402; (145) 3-[(4-fluorobenzoil)am¡no]-N-(4-fluorobencil)-6-metil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.60; [M+Hf 427; (146) N-(4-f[uorobencil)-6-met¡l-3-[(tien-2-ilcarbonü)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.40; [M+H]+ 415; (147) N-{6-met¡l-5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonii]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}t¡ofen-2-carboxamida; Método A, 2.69; [M+Hf 390; (148) N-{6-metil-5-[(4-metilpiperazin-1-¡l)carbonii]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-3-il}-3-fenoxibenzamida; Método A, Rt 4.76; [M+Hf 460; (149) N-(4-fluorobencil)-6-met¡l-3-[(3-fenox¡benzo¡l)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 6.40; [M+Hf 501.
EJEMPLO 12 Preparación de metil 3-amino-6-metil-1H-tieno[3,2-c1pirazol-5- carboxilato150) Paso 1 Metil 4,5-d¡bromo-3-metiltiofen-2-carboxilato. Bromo (20 mL, 389 milimoles) se añadió gota a gota a una solución de metil 3-metiltiofen-2-carboxilato (14.0 g, 89.6 milimoles) en 350 mL de ácido acético. Después de agitar a temperatura ambiente por 16 horas, la mezcla de reacción se añadió gota a gota a una solución acuosa al 10% (p/v) de sulfito ácido de sodio. El precipitado se separó mediante filtración, se lavó con sulfito ácido de sodio acuoso y agua, y finalmente se secó bajo vacío a 70°C para producir 27.8 g del compuesto del título utilizado en el siguiente paso sin purificación adicional. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 2.55 (s, 3H), 3.84 (s, 3H).
Paso 2 Metil 4-bromo-5-formil-3-metiltiofen-2-carboxilato. Cloruro de isopropilmagnesio (solución de THF 2M, 41 mL) se añadió gota a gota a una solución de metil 4,5-dibromo-3-metiltiofen-2-carboxilato (23.5 gr, 74.8 milimoles) en tetrahidrofurano (250 mL) a -40°C bajo nitrógeno. Después de agitar a -40°C por 3 horas, se le añadió dimetilformamida (17.5 mL, 224 milimoles) y la solución se dejó alcanzar temperatura ambiente. Luego la mezcla de reacción se vertió dentro de acetato de etilo y de ácido clorhídrico acuoso. La capa orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El material sin purificar resultante se trituró con n-hexano para producir 17.6 g del compuesto del título, utilizado en el siguiente paso sin purificación adicional. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 2.54 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 10.01 (s, 1 H).
Paso 3 Metil 4-bromo-5-ciano-3-metiltiofen-2-carbox¡lato. El hidrocloruro de hidroxilamina (5 g, 72 milimoles) se añadió a una solución de metil 4-bromo-5-formil-3-metiltiofen-2-carboxilato (16.5 g, 63 milimoies) en acetonitrilo (175 mL) y piridina (30 mL). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente por 2 horas, luego se añadió anhídrido trifluoroacético (21.3 mL, 153 milimoies). Después de 3 horas la mezcla de reacción se vertió dentro de acetato de etilo y ácido clorhídrico acuoso. La capa orgánica se separó, se lavó con ácido clorhídrico y agua, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El material sin purificar resultante se trituró con 90 mL de una mezcla de agua/alcohol etílico (1 :1 ) y se secó bajo vacío para ' producir 15 g del compuesto del título, utilizado en el siguiente paso sin . purificación adicional. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 2.53 (s, 3H), 3.90 (s, 3H).
Paso 4 Metil 5-ciano-4-f2-(difenilmetilen hidrazinol-3-metiltiofen- 2-carboxilato. Una solución de metil 4-bromo-5-ciano-3-metiltiofen-2-carboxilato (13 g, 50 milimoies) y benzofenona hidrazona ( 1.8 g, 60 milimoies) en tolueno (390 mL) se añadió a una suspensión de carbonato de cesio (26 g, 80 milimoies); acetato de paladio (365 mg, 1.6 milimoies) y 1 , '-bis (difenilfosfino)ferroceno en tolueno (120 mL) bajo nitrógeno.
La mezcla resultante se agitó a 1 10°C por 16 horas. Después de ¿ enfriamiento a 50°C la mezcla se filtró y el tolueno se evaporó. El material sin purificar resultante se trituró con acetato de etilo y se secó bajo vacío para producir 13.2 g del compuesto del título, utilizado en el siguiente paso sin purificación adicional. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 2.17 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 7.37-7. 70 (m, 10 H), 8.61 (s, 1 H).
Paso 5 Metil 3-amino-6-metil-1 H-t¡eno2-c1pirazol-5-carboxilato Í150I Una mezcla de ácido clorhídrico acuoso (180 mL, solución al 37%), metil 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]-3-metiltiofen-2-carboxilato (13 g, 34.6 milimoles), alcohol metílico (140 mL) y tetrahidrofurano (100 mL) se agitó a 80°C por 0 horas. Después de que el solvente se removió bajo presión reducida, la suspensión resultante se filtró y el residuo se lavó con dimetoxietano. El sólido se disolvió en alcohol metílico (100 mL), y se trató con ácido azufréico al 96% (2.5 mL). La solución resultante se agitó a 75°C por 16 horas. Después de enfriamiento la solución se evaporó a un volumen pequeño bajo presión reducida, y se extrajo con una mezcla de éter dietílico/n-hexano (1 :1). La capa acuosa se diluyó con 5% de amoniaco acuoso y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía (eluyente diclorometano, alcohol metílico, 5% de amoniaco acuoso 100:75:5) para producir 4.4 g del compuesto del título.
Método cromatográfico A, 2.77, [M+H]+ 212. 1H-RMN (DMSO-d6): ppm 2.52 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 5.35 (bs, 2H), 12.0 (bs, 1 H).
EJEMPLO 13 Preparación de metil 1-acil-3-f(acinamino1-6-metil-1 H-tienof3,2-c1pirazol- 5-carboxilatos Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 7, metil 3-amino-6-metil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carbox¡lato preparado en el ejemplo previo se hizo reaccionar con los cloruros de acilo adecuados para preparar los siguientes 1-acil-3-[(acil)amino]-6-metil-1 H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos: (151 ) metil 1-(4-fluorobenzoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6-metil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (152) metil 6-metil-1-(tien-2-ilcarbonil)-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (153) metil 6-metil-1 -(3-fenoxibenzoil)-3-[(3-fenoxibenzo¡l)amino]- H-t¡eno[3,2-c]pirazol-5-carboxilato.
EJEMPLO 14 Preparación de ácidos 3-r(acil)amino1-6-metil-1 H-tienor3,2-clpirazol-5- carboxílicos Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 8,1-acil-3-[(acil)amino]-6-metil-1 H-tieno[3,2-c]p¡razol-5-carboxilatos a partir del ejemplo 13 se convirtieron hacia los ácidos 3-[(acil)amino]-6-metil-1H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos correspondientes: (154) ácido 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-6-metil-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; (155) ácido 6-metil-3-[(tien-2-ilcarbonil)amino]-1 H-tieno[3,2-c] pi razol -5-ca rbox íl i co ; (156) ácido 6-metil-3-[(3-fenoxibenzoil)amino]-1 H-tieno[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; Método A, Rt 3.90; [M+H]+ 394.
EJEMPL0 15 Preparación de propil 3-amino-1 H-furor3,2-c1pirazol-5-carboxilato (157) Paso 1 Metil 4,5-dibromo-2-furoato. A una solución de 69.91 g (0.259 moles) de ácido 4,5-dibromo-2-furóico en 700 mL de metanol se le añadieron cuidadosamente 42.4 mL (0.777 moles) de ácido sulfúrico al 98% a temperatura ambiente. La mezcla se sometió a reflujo por 7 horas. La solución resultante se concentró a una pasta aguada bajo presión reducida y se diluyó con 0.5 L de MTBE. A esta solución de 0.5 L enfriada en hielo se le añadió lentamente citrato de trisodio al 30% y 0.25 L de NaOH 2N, bajo agitación vigorosa. La capa acuosa (pH=6) se separó y se extrajo de nuevo con 300 mL de MTBE. Algunos sólidos insolubles (materia prima residual) se removieron a partir de los extractos orgánicos mediante filtración. Los extractos claros se secaron sobre Na2S04 luego se concentraron hasta secarlos para obtener un sólido café claro que se purificó mediante cristalización con 30 mL de MTBE caliente y 60 mL de n- heptano. La mezcla se enfrió a 0/+4°C, se dejó envejecer por 1 hora luego se ' filtró para producir 57.13 g del producto color crema. A partir de los licores . madre se pudo recuperar una cantidad adicional de 12.65 g del producto mediante cromatografía (eluyente: acetato de etilo/ciclohexano 5:95). Por lo tanto, la cantidad general del producto aislado fue de 69.78 g. Rendimiento = 94.8%. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.84 (s, 3H), 7.65 (s, 1 H). p.f. =56- 57°C. Paso 2 Metil 4-bromo-5-formil-2-furoato. Una solución de 69.65 g (0.246 moles) de metil 4,5-dibromo-2- furoato en 700 mL de THF seco se enfrió a -45°C bajo argón. A esta solución se le añadieron lentamente 141.5 mL (0.282 moles) de cloruro de isopropil magnesio 2M (Aldrich) durante 45 minutos a -43/-48°C y la mezcla se agitó por una hora adicional. La suspensión resultante se trató gota a gota con 56.8 mL (0.737 moles) de DMF anhidro (Aldrich, H20 < 0.005%) durante 30 minutos a -45°C y se agitó por 15 minutos a la misma temperatura. La mezcla de reacción se calentó lentamente a +20°C, se agitó por 1 hora y luego se vertió lentamente en una mezcla de 1.2 L de HCI 1 y 1.0 L de MTBE. La capa acuosa se separó y se extrajo dos veces con 1.0 L y 0.5 L de MTBE. Los extractos orgánicos combinados se concentraron hasta secarlos produciendo 57.81 g del material sin purificar, el cual se cristalizó a partir de 120 mL de tolueno caliente y 230 mL de n-heptano. La pasta aguada resultante se enfrió a +4°C, se dejó envejecer por 2 horas y se filtró para producir 46.55 g de un sólido color café claro. Rendimiento = 81.3%. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.90 (s, 3H), 7.78 (s, 1 H), 9.76 (s, 1 H). P.f. = 83-84°C.
Paso 3 Metil 4-bromo-5-ciano-2-furoato. A una solución de 46.55 g (0,20 moles) de metil 4-bromo-5-formil-2-furoato en 465 mL de acetonitrilo se le añadieron 15.28 g (0.22 moles) de clorhidrato de hidroxilamina. A esta suspensión se le añadieron 96.6 mL (1.2 moles) de piridina gota a gota durante un periodo de 35 minutos, a 20-25°C. Después de 90 minutos de agitación se vertió gota a gota anhídrido trifluoroacético puro (67.72 mL, 0.48 moles) durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de 2.5 horas de agitación la masa de la reacción se vertió en una mezcla de HCI 1 M (0.75 L) y acetato de etilo (0.75 L); la capa acuosa se extrajo de nuevo con 0.45 L de acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron con 0.45 L de 2 M HCI y la capa acuosa se extrajo de nuevo con 0.3 L de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se concentraron bajo presión reducida hasta secarlos. Este material sin purificar se disolvió en 100 mL de etanol 95° y se trató gota a gota con 150 mL de agua bajo agitación eficiente a 40-45°C. La suspensión resultante se enfrió a 0/+4°C por 1 hora luego se filtró para producir, después del secado, 44.2 g del producto como un sólido color crema claro. Rendimiento = 96.2%. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.90 (s, 3H), 7.88 (s, 1 H). P.f. =75-78°C.
Paso 4 Metil 5-ciano-4-r2-(difenilmetilen)hidrazino1-2-furoato. El acetato de paladio (2.098 g; 9. 347 milimoles), DPPF (10.36 g; 18.69 milimoles) y carbonato de cesio (85.27 g; 0.262 milimoles) se cargaron en una botella de reacción seca bajo argón. Una solución seca preformada de metil 4-bromo-5-ciano-2-furoato (43.00 g, 0.187 moles) y benzofenona hidrazona (44.02 g, 0.224 moles) en 1.2 L de tolueno se transfirió mediante una cánula dentro de la botella de reacción. La suspensión resultante se agitó vigorosamente a 100-104°C por 45 horas bajo argón. La mezcla de reacción se enfrió a aproximadamente 70°C, se añadió con 65 g de Dicalite® y se filtró; el panel se lavó dos veces con tolueno caliente (400 mL). El filtrado se concentró bajo vacío hasta un volumen pequeño y se mantuvo a +4°C por 18 horas. El sólido se recolectó mediante filtración y se lavó con 60 mL de tolueno para producir 53.52 g de producto amarillento. Rendimiento = 82.8%. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.84 (s, 3H), 7.09 (s, 1 H), 7.34-7. 68 (m, 10H), 9.60 (s, 1 H). P.f. =206-208°C descomposición Paso 5 Propil 3-amino-1 H-furof3,2-c1pirazol-5-carboxilato (157). A una solución de 56.01 g (0.1624 moles) de metil 5-ciano-4-[2-" (difenilmetilen)hidrazino]-2-furoato en 1.12 L de n-propanol se le añadieron lentamente 115 mL (2.1 moles) de ácido sulfúrico al 98%. La mezcla resultante se sometió a reflujo por 2 horas obteniendo una solución café claro. La masa de reacción se concentró bajo presión reducida hasta un volumen pequeño, se enfrió a 0/+4°C y se diluyó lentamente con 1.1 L de solución de dihidrato de trisodio citrato al 25% durante un periodo de 90 minutos bajo agitación eficiente. La mezcla (pH=4) se extrajo tres veces con 600 mL de ciclohexano. Los extractos orgánicos se desecharon mientras que la capa acuosa se enfrió a 0/+4°C y se llevó a pH 6-7 mediante la adición cuidadosa de 1 L de bicarbonato de sodio acuoso al 10% y, finalmente, 82 mL de N- metilmorfolina. La suspensión resultante se dejó envejecer por 4 horas a 0/+2°C y luego se filtró y se lavó extensivamente con agua produciendo, después del secado, 21.35 g del producto como un sólido café claro. Rendimiento = 62.8%. Método cromatográfico A RT=3.6 minutos. [M+H]+ = 210. 1 H-RMN (DMS0-d6): ppm 0.97 (t, 3H), 1.67-1. 76 (m, 2H), 4.24 (t, 2H), 5.13 (s, 2H), 7.31 (s, 1 H), 1 .34 (bs, 1 H). P.f. = 147-149°C descomposición.
EJEMPLO 16 Preparación de Propil 1-acil-3-(acilamino)-1 H-furor3,2-c1pirazol-5- carboxilatos Mediante el tratamiento de propil 3-amino-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato con el cloruro de acilo apropiado, de manera análoga con el procedimiento descrito en el ejemplo 7, se prepararon los siguientes propil 1-acil-3-(acilamino)-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilatos: (158) propil 1 -(4-morfolin-4-ilbenzoil)-3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]- H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (159) propil 1 -[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]-3-{[4-(4-metilpiperazin-1-il)benzoil]amino}-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato; (160) propil 1-(4-fluorobenzoil)-3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxilato.
EJEMPLO 17 Preparación de ácidos 3-(acilamino)-1 H-furof3,2-clpirazol-5-carboxílicos Los propil 1-acil-3-(acilamino)-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5- carboxilatos preparados en el ejemplo previo se hidrolizaron siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 8, para producir los ácidos 3-(acilamino)- 1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos correspondientes: (161 ) ácido 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)amino]-1 H-furo[3,2-" c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 357; . (162) ácido 3-{[4-(4-metilpiperazin-1 -il)benzoil]amino}-1 H- furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílico; [M+H]+ 370; (163) ácido 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5- carboxílico; Método A, Rt 2. 18; [M+H]+ 370.
EJEMPL0 18 Preparación de 3-(aciiamino)-1 H-furor3,2-c1pirazol-5-carboxamidas Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 1 , los ácidos 3-(acilamino)-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxílicos del ejemplo 17 se hicieron reaccionar con las aminas adecuadas para producir los siguientes compuestos: (164) 3-[(4-morfolin-4-ilbenzoil)am¡no]-N-[-1-fen¡lpropil]-1 H- furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 5.40; [M+H]+ 474; (165) 3-{[4-(4-met¡lpiperaz¡n-1-il)benzoil]am¡no}-N-[1-fen¡Iprop¡l]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxamida; Método A, Rt 3.48; [M+H]+ 487; (166) 3-[(4-fluorobenzo¡l)amino]-N-[(1 -fenilpropil]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 5.48; [M+H]+ 407; (167) 4-fluoro-N-{5-[(4-metilpiperazin-1 -il)carbonil]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-3-il}benzamida; Método A, Rt 2.19; [M+H]+ 372; (168) 3-[(4-fluorobenzoil)amino]-N-[2-morfolin-4-il-1 -feniletil]-1 H-furo[3,2-c]pirazol-5-carboxam¡da; Método A, Rt 4.43; [M+Hf 372.
EJEMPLO 19 Preparación de metil 3-amino-1 H-tieno[3,2-c1pirazol-5-carboxHato (5) Paso 1 Preparación de metil 4,5-d¡bromo-2-tiofencarbox¡lato. A una suspensión de 23.75 g (83.06 milimoles) de ácido 4,5-dibromo-2-tiofencarboxílico en 235 mL de metanol se le añadieron lentamente 15.5 mL (284 moles) de ácido sulfúrico al 98% a temperatura ambiente. La mezcla se sometió a reflujo por 23 horas. La solución resultante se concentró a una pasta aguada espesa bajo presión reducida y se diluyó con 240 mL de diclorometano. A esta solución enfriada en hielo se le añadieron lentamente 190 mL de NaOH al 17%, bajo agitación vigorosa. La capa acuosa se separó y se extrajo de nuevo con 120 mL de diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04 luego se concentraron hasta secarlos para producir 24.02 g del producto como un sólido blancuzco.
Rendimiento = 96.4% 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.81 (s, 3H), 7.79 (s, 1 H) P.f. =79-80°C.
Paso 2 Preparación de 4-bromo-5-formiltiofen-2-carboxilato. Una solución de 23.45 g (78.17 milimoles) de metil 4,5-dibromo- 2-tiofencarboxilato en 190 mL de THF seco se enfrió a -35/-40°C bajo argón. A esta solución se le añadieron 43 mL (86 milimoles) de cloruro de isopropil • magnesio 2 (Aldrich) gota a gota durante 1 hora a -35/-40°C y la mezcla se . agitó por una hora adicional. La solución resultante café claro se trató gota a gota con 17.14 g (18.0 mL; 234.5 moles) de DMF anhidro durante 30 minutos a -35/-40°C y se agitó por 15 minutos a esta temperatura. Luego la mezcla de reacción se calentó lentamente a +20°C y se agitó por 1 hora adicional a esta temperatura. La masa de reacción se vertió lentamente en una mezcla de 230 mL de HCI 1 M y de 230 mL de MTBE bajo agitación vigorosa; la capa acuosa se separó y se extrajo de nuevo con 200 mL de MTBE. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2S04 y se concentraron hasta secarlos para producir 20.14 g del producto sin purificar. Este se trató con 80 mL de n-hexano bajo agitación por 3 horas. El producto puro (16.5 g) se aisló mediante succión como un sólido blancuzco. Rendimiento = 84.5%. 1 H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.86 (s, 3H), 7.98 (s, 1 H), 9.90 (s, 1 H).
P.f. =92-93°C.
Paso 3 Preparación de metil 4-bromo-5-c¡anotiofen-2-carboxilato A una solución de 16.48 g (66.17 milimoles) de metil 4-bromo-5- formiltiofen-2-carboxilato en 165 mL de acetonitrilo se le añadieron 5.06 g (72.78 milimoles) de clorhidrato de hidroxilamina. A esta suspensión se le añadieron 32.05 mL (397 milimoles) de piridina gota a gota durante un periodo de 20 minutos a 20-25°C. Después de 90 minutos en agitación, se vertió el * anhídrido trifluoroacético puro (22.5 mL, 158.8 milimoles) gota a gota durante . 30 minutos a temperatura ambiente. Después de 2.5 horas de agitación, la masa de reacción se vertió en una mezcla de HCI 0.5 M (200 mL) y acetato de etilo (150 mL); la capa acuosa se extrajo de nuevo con 150 mL de acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se concentraron bajo presión reducida y se lavaron de nuevo con 120 mL de HCI 1 M. La capa orgánica se concentró bajo vacío para producir un producto sólido sin purificar. Este material sin purificar se tomó en 75 mL de etanol y se trató con 75 mL de agua bajo agitación eficiente. La suspensión resultante se enfrió a 0/+4°C, luego se filtró para producir 15.4 g del producto como un sólido color crema claro. Rendimiento = 94.8%; 1H-R N (DMSO-d6): ppm 3.88 (s, 3H), 8.02 (s, 1 H), P.f.= 102-103X.
Paso 4 Preparación de metil 5-ciano-4-r2-(difenilmetilenlhidrazinoltiofen^ carboxilato. Una botella cargada con acetato de paladio (375 mg; 1.67 milimoles), DPPF (1.85 g; 3.34 milimoles) y carbonato de cesio (27.2 g; 83.5 milimoles) se evacuó y se llenó de nuevo con argón 3 veces, luego se añadieron 70 mL de tolueno vía una cánula bajo agitación. Después de 15 minutos una solución seca preformada de metil 4-bromo-5-cianotiofen-2-carboxilato (13.70 g, 55.67 milimoles) y benzofenona hidrazona (13.1 1 g, 66.8 milimoles) en 470 mL de tolueno se transfirió vía cánula en la botella y la suspensión resultante se agitó a 100°C por 16 horas bajo argón. La mezcla de reacción se enfrió a 60°C, se filtró, y el panel se lavó dos veces con tolueno caliente. El filtrado se concentró bajo vacío para producir un sólido amarillo-café. Este material sin purificar se agitó con 70 mL de acetato de etilo por 1 hora a temperatura ambiente, y luego el sólido se filtró produciendo 16.78 g del compuesto del título. Rendimiento = 83.4%, 1H-RMN (DMSO-d6): ppm 3.82 (s, 3H), 7.30-7. 65 (m, 11 H), 10.02 (s, 1 H), P.f. = 178-180°C.
Paso 5 Preparación de metilo 3-amino-1 H-t¡enor3,2-c1pirazol-5-carboxilato (5). A una solución de 18.41 g (50.94 milimoles) de metil 5-ciano-4-[2-(difenilmetilen)hidrazino]tiofen-2-carboxilato en 312 mi de THF y 1 10 mL de metano!, se le añadieron lentamente 110 ml_ de ácido clorhídrico al 37%. La mezcla resultante se sometió a reflujo por 14 horas obteniendo una solución amarilla clara. Una parte relevante del producto estuvo presente como ácido libre, aproximadamente 30% del producto general. La masa de reacción se concentró bajo vacío para remover los solventes orgánicos; la suspensión resultante se mantuvo a +4°C por 18 horas y luego se filtró produciendo 10.10 g de un producto cristalino que contiene una mezcla de metiléster y ácido libre. Este sólido se disolvió en 150 mL de metanol, se trató con 3.5 mL de ácido sulfúrico concentrado y se sometió a reflujo por 24 horas. La mezcla se concentró hasta un volumen pequeño obteniendo una suspensión, la cual se diluyó con 130 mi de agua y se trató cuidadosamente con trietilamina (14 mL) bajo agitación vigorosa hasta que se alcanzó un pH = 7-8. La mezcla se mantuvo a +4°C por 18 horas, luego éste se filtró y el panel se lavó con agua produciendo 7.63 g de producto puro como un sólido amarillento. Rendimiento = 76.0%, Método cromatográfico A, RT= 2.8 minutos. Los datos fisico-químicos fueron los mismos del compuesto preparado con el método del ejemplo 3.
EJEMPLO DE ENSAYO BIOLOGICO 1 Se muestra que los siguientes compuestos, seleccionados de conformidad con los métodos descritos en la sección de farmacología anteriormente mencionada, tienen valores IC50 para la inhibición de Aurora-2 ¦ por debajo de 100 nM: 52; 57; 66; 79; 82; 91 ; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 99; 100; 101 ; 102; 104; 106; 107; 108; 109; 110; 111 ; 1 12; 113; 1 14; 115; 1 16; 117; 1 18; 119; * 120; 121 ; 122; 123; 124; 125; 126; 127; 128; 129; 130; 131 ; 132; 133; 134; . 135; 136; 137; 146; 161 ; 162; 163; 164; 165.
EJEMPLO DE ENSAYO BIOLOGICO 2 Se muestra que los siguientes compuestos, seleccionados de conformidad con los métodos descritos en la sección de farmacología anteriormente mencionada, tienen valores IC50 para la inhibición de cdk2/Ciclina A por debajo de 500 nM: 57; 63; 65; 79; 84; 85; 86; 87; 93; 114; 1 19; 121 ; 124; 145; 146; 161 ; 164; 165; 167.
EJEMPLO DE ENSAYO BIOLOGICO 3 Se muestra que los siguientes compuestos, seleccionados de conformidad con los métodos descritos en la sección de farmacología anteriormente mencionada, tienen valores IC50 para la inhibición de cdc7 por debajo de 1000 nM: 52; 57; 92; 93; 95; 101 ; 102; 114; 1 15; 121 ; 123; 124; 137; 161 ; 162; 165.
EJEMPLO DE ENSAYO BIOLOGICO 4 Se muestra que los siguientes compuestos, seleccionados de conformidad con los métodos descritos en la sección de farmacología anteriormente mencionada, tienen valores IC50 para la inhibición de PAK4 por debajo de 500 nM: 52; 91 ; 93; 95; 96; 99; 100; 101 ; 102; 11 1 ; 114; 115; 119; 121 ; 125; 129; 131 ; 132; 133; 137; 163; 164.

Claims (1)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto biciclopirazol de fórmula (I): en donde X es un grupo seleccionado a partir de NR', O, S, SO o S02; cada uno de R y R-t, siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o de un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R\ -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R", -S02R\ -S02NHR' o -S02NR'R"; en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o de un grupo alquilo de C-i-C6 de cadena recta o ramificada opcionalmente sustituido de manera adicional, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, arilo, heterociclilo o arilalquilo de Ci-C6; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R', -CH2OR' y OR', en donde R' es como se definió anteriormente; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. 2.- El compuesto de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es S; R es COR', -CONHR'; Ri es -COR', -CONHR', -CONR'R", -S02NHR' o -S02NR'R", en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se define en la reivindicación 1 ; y R2 es un átomo de hidrógeno. 3. - El compuesto de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R es COR', Ri es -CONHR' o - CONR'R". 4. - El compuesto de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es O; R es COR', -CONHR'; R-, es -COR', -CONHR', -CONR'R", -S02NHR' o -S02NR'R", en donde cada * uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, es como se define en la , reivindicación 1 ; y R2 es un átomo de hidrógeno. 5. - El compuesto de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque R es COR', -R-i es -CONHR' o - CONR'R". 6. - El compuesto de fórmula (I) o a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en la reivindicación 1 , para su uso como un medicamento. 7 - El uso de un compuesto de fórmula (I) o a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como el que se reclama en la reivindicación 1 , en la elaboración de un medicamento para tratar a un paciente que padece de una enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada (des-regulada) de proteína cinasa. 8 - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde la enfermedad ocasionada por y/o asociada con una actividad alterada de la proteína cinasa se selecciona a partir del grupo que consiste de cáncer, trastornos proliferativos de la célula, enfermedad de Alzheimer, infecciones virales, enfermedades auto-inmunes y trastornos neurodegenerativos. 9. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste de carcinoma, carcinoma de célula escamosa, tumores hematopoiéticos de linaje mieloide o linfoide, tumores de origen mesenquimatoso, tumores del sistema nervioso central y periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma « pigmentosum, queratoxantomas, cáncer folicular de la tiroides y sarcoma de , Kaposi. 10. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el trastorno proliferativo de la célula se selecciona a partir del grupo que consiste de hiperplasia benigna de la próstata, adenomatosis familiar, poliposis, neuro- fibromatosis, psoriasis, proliferación de célula de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis por artritis y estenosis post-quirúrgica y restenosis. 11. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde se provee inhibición de la angiogénesis tumoral y de la formación de metástasis así como tratamiento de rechazo de transplante de órganos y enfermedad de hospedero contra injerto. 12. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde se provee tratamiento o prevención de alopecia inducida por radioterapia o alopecia inducida por quimioterapia. 13. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde una terapia de radiación o régimen de quimioterapia en combinación con al menos un agente citostático o citotóxico también es aplicable. 14. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el mamífero que necesita del mismo, es un humano. 15. - Un método para la inhibición de la actividad de la proteína cinasa el cual comprende poner en contacto a dicha proteína cinasa con una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I) como se define en la * reivindicación 1. j 16.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable, como se define en la reivindicación 1 , y al menos un excipiente, vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. 17. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque comprende adicionalmente uno o más agentes quimioterapéuticos. 18. - Un producto o equipo que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define en la reivindicación 1 , y uno o más agentes quimioterapéuticos, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencia! en terapia anticáncer. 19. - Una librería de química combinatorial que comprende una pluralidad de compuestos de fórmula (I) en donde X es un grupo seleccionado a partir de NR', O, S, SO o S02; cada uno de R y R-i, siendo el mismo o diferente, se seleccionó independientemente a partir de hidrógeno o de un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R\ -COR', -COOR', -CONHR', -CONR'R", -} S02R\ -S02NHR' o -S02NR'R"; en donde cada uno de R' y R", siendo el mismo o diferente, se selecciona independientemente a partir de hidrógeno o de un grupo alquilo de C C6 de cadena recta o ramificada, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, arilo, heterociclilo o arilalquilo de C1-C6 opcionalmente sustituidos de manera adicional; R2 es un grupo opcionalmente sustituido seleccionado a partir de -R\ -CH2OR' y OR', en donde R' es como se definió anteriormente; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. 20. - Cualquier compuesto específico de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, como se define en la reivindicación 1 , que se reportan en los ejemplos de ensayo biológico a partir de 1 a 4. 21. - Un procedimiento para preparar un compuesto de biciclopirazol de fórmula (I): en donde X, R y R-t y R2 son como se definieron en la reivindicación 1 , o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, dicho procedimiento comprende: i) convertir mediante una reacción apropiada un compuesto de fórmula (XXII) en donde Ri, R2 y X son como se describieron anteriormente, y Hal es un átomo de halógeno, dentro del derivado ciano correspondiente; opcionalmente separar el isómero deseado si Ri en la fórmula (XXII) anteriormente mencionado es también un residuo CHO; ii) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (XXIII) así obtenido : (XXIII) en donde R-i, R2, X y Hal son como se describieron anteriormente, con un derivado de hidrazona de fórmula (XXIV): RaRbC=N-NH2, en donde Ra y Rb son un grupo alquilo de C1-C6 de cadena recta o ramificada, arilo, arilalquilo de C C6 o, tomándolos junto con el átomo de carbono al cual están unidos, forman un grupo heterociclo opcionalmente fusionado o un cicloalquilo de C5- C7, bajo atmósfera inerte en la presencia de un catalizador de Pd, un ligando y una base; iii) tratar el compuesto resultante de fórmula (XXV) ^ en donde Ri, R2, X, Ra y R son como se describieron anteriormente, con un ácido en un solvente adecuado, de manera que se obtiene un compuesto de fórmula (I) en donde R es un átomo de hidrógeno y R-?, R2 y X son como se describieron anteriormente y, si se desea, convertir el compuesto así obtenido de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno; y/o, si se desea, convertir un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 22.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque la conversión del compuesto obtenido de fórmula (I) en donde R es un átomo de hidrógeno en otro compuesto de fórmula (I) en donde R es diferente de un átomo de hidrógeno, y/o la conversión de un compuesto de fórmula (I) hacia otro compuesto de fórmula (I) se hace mediante: k) hacer reaccionar a un compuesto de fórmula (I) como se obtiene en el paso ¡ii) de conformidad con la reivindicación 23 con una resina de isocianato poliestirénico de fórmula (XV) Resina de manera que se obtiene una polistirenmetil urea de fórmula (XVI) en donde X, R, y R2 son como se definieron en la reivindicación 23; I) convertir el compuesto así obtenido de fórmula (XVI) hacia un compuesto de fórmula (XV") Resin donde R es diferente de un átomo de hidrógeno; y m) escindir bajo condiciones alcalinas el compuesto de fórmula (XVI) de manera que se elimina la resina y para obtener el compuesto deseado de fórmula (I), y, si se desea, n) convertir el compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I) o en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 23.- Un compuesto de fórmula (XXIII) o (XXV): donde R-, , R2, X, Hal, Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación
MXPA05000629A 2002-07-17 2003-07-11 Derivados de pirazol heterobiciclico como inhibidores de cinasa. MXPA05000629A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39617402P 2002-07-17 2002-07-17
PCT/EP2003/007529 WO2004007504A1 (en) 2002-07-17 2003-07-11 Heterobicyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA05000629A true MXPA05000629A (es) 2005-04-25

Family

ID=30115981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05000629A MXPA05000629A (es) 2002-07-17 2003-07-11 Derivados de pirazol heterobiciclico como inhibidores de cinasa.

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP1534716B1 (es)
JP (1) JP2006501191A (es)
AR (1) AR040580A1 (es)
AT (1) ATE393159T1 (es)
AU (1) AU2003254337A1 (es)
BR (1) BR0312722A (es)
CA (1) CA2492673A1 (es)
DE (1) DE60320560T2 (es)
ES (1) ES2304531T3 (es)
MX (1) MXPA05000629A (es)
TW (1) TWI284645B (es)
WO (1) WO2004007504A1 (es)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200526204A (en) * 2004-02-03 2005-08-16 Pharmacia Italia Spa 1h-thieno[2,3-c]pyrazole derivatives useful as kinase inhibitors
EP1812439B2 (en) 2004-10-15 2017-12-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
FR2878442B1 (fr) 2004-11-29 2008-10-24 Aventis Pharma Sa THIENO(2,3-c)PYRAZOLES SUBSTITUES, PROCEDE DE PREPARATION, COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION
FR2882751B1 (fr) * 2005-03-04 2007-09-14 Aventis Pharma Sa Hydrazinocarbonyl-thieno[2,3-c]pyrazoles, procede de preparation, compositions les contenant et utilisation
ES2439918T3 (es) 2005-07-19 2014-01-27 Nerviano Medical Sciences S.R.L. Compuestos de 1H-tieno[2,3-c]-pirazol útiles como inhibidores de cinasas
US8119655B2 (en) 2005-10-07 2012-02-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
ATE524177T1 (de) * 2006-03-30 2011-09-15 Nerviano Medical Sciences Srl Verwendung eines kinasehemmers zur behandlung von bestimmten resistenten tumoren
RU2008145225A (ru) 2006-04-19 2010-05-27 Новартис АГ (CH) Соединения индазола и способы ингибирования cd7
WO2007138017A1 (en) * 2006-05-31 2007-12-06 Nerviano Medical Sciences S.R.L. 1h-furo[3,2-c] pyrazole compounds useful as kinase inhibitors
US20100120717A1 (en) 2006-10-09 2010-05-13 Brown Jason W Kinase inhibitors
KR101559597B1 (ko) 2007-09-28 2015-10-12 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 ５―원 헤테로시클릭 화합물
EP2058315A1 (en) 2007-10-30 2009-05-13 Nerviano Medical Sciences S.r.l. 1H-Furo[3,2-C]Pyrazoles active as aurora kinase inhibitors
USRE48140E1 (en) 2011-03-31 2020-08-04 Carna Biosciences, Inc. Furanone derivative
RU2014141018A (ru) 2012-03-16 2016-05-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способы лечения меланомы ингибиторами рак1
WO2015008234A1 (en) * 2013-07-17 2015-01-22 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Bicyclic heterocyclic compounds as ror gamma modulators
US9974795B2 (en) 2014-01-31 2018-05-22 Carna Biosciences, Inc. Anticancer agent composition
WO2017144546A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of nasopharyngeal carcinoma
WO2019024809A1 (zh) * 2017-08-01 2019-02-07 正大天晴药业集团股份有限公司 作为RORγ抑制剂的双环化合物
WO2020212484A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treatment of nlrp3 inflammasome mediated il-1beta dependent disorders
WO2021198511A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treatment of sars-cov-2 infection
WO2022008597A1 (en) 2020-07-08 2022-01-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of infectious diseases
CN113072562B (zh) * 2021-04-06 2022-01-14 山东大学 一种GSK-3β抑制剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4140785A (en) * 1978-05-08 1979-02-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company N-(benzothienopyrazol)amide antirhinoviral agents
US4420476A (en) * 1982-05-24 1983-12-13 Averst McKenna & Harrison, Inc. Benzofuro[3,2-c]pyrazol-3-amine derivatives
AU2001287654B2 (en) * 2000-08-10 2006-12-14 Pfizer Italia S.R.I. Bicyclo-pyrazoles active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
BR0113574A (pt) * 2000-08-31 2003-07-22 Pfizer Prod Inc Derivados de pirazol e uso dos mesmos como inibidores de proteìna quinase
HUP0302173A2 (hu) * 2000-09-15 2003-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Protein kináz inhibitorokként alkalmazható pirazolvegyületek
AU2002353186A1 (en) * 2001-12-19 2003-06-30 Smithkline Beecham P.L.C. (1-h-indazol-3-yl) -amide derivatives as gsk-3 inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
BR0312722A (pt) 2005-05-10
AU2003254337A1 (en) 2004-02-02
EP1534716A1 (en) 2005-06-01
AR040580A1 (es) 2005-04-13
ES2304531T3 (es) 2008-10-16
TW200413389A (en) 2004-08-01
WO2004007504A1 (en) 2004-01-22
EP1534716B1 (en) 2008-04-23
DE60320560T2 (de) 2008-12-11
JP2006501191A (ja) 2006-01-12
TWI284645B (en) 2007-08-01
DE60320560D1 (de) 2008-06-05
CA2492673A1 (en) 2004-01-22
ATE393159T1 (de) 2008-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MXPA05000629A (es) Derivados de pirazol heterobiciclico como inhibidores de cinasa.
US8017643B2 (en) Condensed heterocyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors
EP1701956B1 (en) Pyrrolo[2,3-b]pyridine derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
EP1704147B1 (en) PYRROLO[2,3-b] PYRIDINE DERIVATIVES ACTIVE AS KINASE INHIBITORS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING THEM
TWI327470B (en) Substituted pyrrolo-pyrazole derivatives as kinase inhibitors
JP2009501126A (ja) キナーゼ阻害剤として活性なピラゾリル−インドール誘導体、それらの製造方法、およびそれらを含む医薬組成物
JP2005537290A (ja) キナーゼ阻害剤として活性なビシクロピラゾール類、その製造方法、およびそれを含有する薬学的組成物
TW200526204A (en) 1h-thieno[2,3-c]pyrazole derivatives useful as kinase inhibitors
JP2007505091A (ja) 抗ウイルス薬としてのチエノピロール
EP0640606A1 (en) Thienopyrimidine derivatives, their production and use
US20060264493A1 (en) Tetracyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
US7485661B2 (en) Heterobicyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
FA Abandonment or withdrawal