TWI284645B

TWI284645B - Heterobicyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors

Info

Publication number: TWI284645B
Application number: TW092119120A
Authority: TW
Inventors: Roberto Tonani; Simona Bindi; Daniele Fancelli; Valeria Pittala; Anello Matteo D
Original assignee: Pharmacia Italia Spa
Priority date: 2002-07-17
Filing date: 2003-07-14
Publication date: 2007-08-01
Also published as: BR0312722A; AU2003254337A1; CA2492673A1; TW200413389A; ES2304531T3; WO2004007504A1; DE60320560D1; AR040580A1; DE60320560T2; EP1534716B1; MXPA05000629A; ATE393159T1; EP1534716A1; JP2006501191A

Description

1284645 玖、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係有關新穎雙環吼唑衍生物、其製備方法、包含該等化合物之醫藥組成物及其用作為治療劑，特別用於治療蛋白質激酶失調關聯疾病之用途。【先前技術】蛋白質激酶（PKs)功能異常是多種疾病的標記。牽涉人類癌症的腫瘤基因以及原-腫瘤基因之編碼有相當大比例為P K s。P K s活性提升也牽涉多種非惡性疾病例如良性攝護腺肥大、家族性腺瘤病、息肉、神經纖維瘤病、乾癬、動脈粥狀硬化相關之血管平滑肌增生、肺纖維硬化、關節炎、腎絲球體腎炎以及術後血管狹窄及血管再狹窄。 P K s也牽涉發炎疾病以及病毒之寄生蟲的繁殖。P K s也於神經退化病症之病因及發展上扮演要角。有關PKs功能異常或失調可參考例如Current Opinion in Chemical Biology 1999， 3， 459-465° 如此，需要有對失調之蛋白質激酶活性調節上具有活性之化合物之療法。今日發明人發現根據本發明之某些新穎二環吼唑類可調節失調之蛋白質激酶活性，如此可用於治療因蛋白質激酶失調所引起的及/或關聯的疾病。若干雜環化合物為業界已知之蛋白質激酶抑制劑。例如 2 -羧醯胺基吼唑及2 -脲基-吼唑及其衍生物曾經揭示作為蛋白質激酶抑制劑，其係揭示於國際專利申請案W 0 0 1 / 5 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 因此可呈個別光學異構物及其外消旋混合物存在。如此，式（I )化合物之全部可能之單一異構物包括光學異構物及幾何異構物及其任一種混合物皆屬於本發明之範圍。此外，本發明也包含式（I )化合物之代謝物及醫藥上可接受之生物前驅物，也稱作為前驅藥。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知本發明之縮合咄唑環之未經取代之氮原子可於溶液中呈兩種互變異構物之混合物快速平衡如後：

如此，除非特別另行註明，否則若於此處只指示一種式 (I )或（I a)之互變異構物，則另一種互變異構物及其任一種混合物預期也涵蓋於本發明之範圍。除非另行規定，否則如此處使用，直鏈或分支C! - C 6烷基一詞就此或構成更複雜之部分（例如芳基-烷基）之一部分，預期該基團例如為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、正己基等。較佳烷基係選自直鏈或分支C丨-C4烷基。芳基一詞就此或構成複成更複雜的部分（例如芳基-烷基）之一部分，意圖表示一、二-或多碳環烴及雜環烴，較佳含1至4個環部分，藉單鍵而彼此稠合或鍵聯，其中碳環或雜環中之至少一環為芳香環。 7 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 根據本發明之芳基之非限制性範例如此為苯基、四氫_ 基、聯苯基、α -或/3 -萘基、芴基、9，1 0 -二氫蔥基、吼啶基、吼畊基、嘧咬基、嗒畊基、叫丨哚基、咪β坐基、咪唑并吡啶基、1，2 -亞甲基二氧基苯基、噻唑基、異噻唑基、咄咯基、咄咯-苯基、呋喃基、苯基_呋喃基、苯并四氫呋喃基、#唑基、異 < 唑基、咄唑基、苯并吼喃基、噻吩基、苯并嗔吩基、異吲哚琳基、苯并咪唾基、四唾基、四σ坐基苯基、吼洛σ定基-四唑基、異叫|哚啉基-苯基、喹啉基、異喳啉基、2，6 -二苯基-咄啶基、喳巧啉基、咄畊基、苯基-喳啉基、苯基呋贊基、1，2, 3-三唑基、1-苯基-1,2, 3 -三唑基等。根據前述R、R!、R2、R，、R”之定義，前述任一基團可於任一個自由位置進一步選擇性經以一或多個例如1至6個選自下列之基團取代：鹵原子、硝基、酮基（=0 )、羧基、氰基、烷基、氟化烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基、胺基及其衍生物，例如烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基、脲基、烷基脲基或芳基脲基；羰基胺基及其衍生物例如甲醯胺基、烷基羰基胺基、婦基幾基胺基、芳基幾基胺基、烧氧基幾基胺基、績酿胺基、烷基磺醯胺基及芳基磺醯胺基；羥基及其衍生物例如烷氧基、芳氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、環烯基氧基或亞烷基胺基氧基；羰基及其衍生物例如烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、環烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基；硫化衍生物例 8 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 如烷硫基、芳硫基、烷基磺醯基、芳基磺醯基、烷基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、芳基磺醯氧基、胺基磺醯基、烷基胺基磺醯基或二烷基胺基磺醯基。於適當時，前述各個取代基又可進一步經以一或多個前述基團取代。除非另行規定，否則鹵原子一詞意圖表示氟、氣、溴或峨。氟化烧基一詞表示前述任一直鏈或分支Ci-Ce烧基進一步經以一或多個氟原子取代，例如三氟甲基、2，2，2 -三氟乙基、1，2 -二氟乙基、1，1，1，3，3，3 -六氟丙-2-基等。稀基或快基一詞表示前述任一直鍵或分支C2-C6烧基進一步分別包含以雙鍵或一參鍵。烯基或炔基之非限制性範例包括乙烯基、1_丙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、乙炔基、丙炔基、丁炔基等。烧氧基一詞表示任何直鍵或分支C 1 - C 6烧氧基，例如包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。環烷基或環烯基等詞表示碳環C 3 - C 6基團，如環丙基、環丁基、環戊基、環己基及對應之未飽和基團如環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基、環己烯基等。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知芳基一詞也涵蓋芳香族碳環系環及芳香族雜環系環，後者也稱作雜芳基，進一步透過單鍵而稠合或鍵聯至非芳香族雜環系環，典型為 5至7員雜環。 9 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 5至7員雜環一詞，涵蓋前述為芳基之芳香族雜環，也表示飽和或部分飽和5至7員碳環，其中一或多個碳原子如1至3個碳原子，經以雜原子如氮、氧及硫置換。 5至7員雜環選擇性經苯并稠合或進一步經取代之5至 7員雜環之非限制例為1，3 -二氧戊環、吼喃、吼咯啶、0比口各琳、°米°坐σ定、吼〇坐〇定、吼σ坐琳、旅咬、旅0井、嗎琳、四氫呋喃、氮雜雙環壬烷等。顯然任何經由複合名稱識別之基團係由有機化學界習知採用之命名系統以其衍生自其中之該部分表示。例如、鹵-雜環基-烷基表示烷基係由雜環基取代，而雜環基本身又由i原子取代，其中烷基、雜環基及齒原子定義如前。式（I )化合物之醫藥上可接受之鹽為與無機酸或有機酸生成之酸加成鹽，無機酸或有機酸例如為硝酸、氫氣酸、氫溴酸、硫酸、過氣酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯曱酸、桂皮酸、扁桃酸、甲烷磺酸、羥基乙基磺酸及水楊酸；以及與下列無機鹼或有機鹼生成之鹽，例如鹼金屬或驗土金屬特別鈉、钟、妈或鎂氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽、無環或環狀胺類、較佳為甲基胺、乙基胺、二乙基胺、三乙基胺或哌啶。較佳本發明化合物之類別係以式（I )衍生物表示，其中X 為 S;R 為-COIT'-CONHR’iR!為-COR’、-CONHR’、-CONR，R” 、 -SChNHR’或-SChNR’R” ；其中R’及R”為相同或相異，且定義如前；以及R 2為氫原子。 10 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 又更佳於前述類別包含式（I )衍生物，其中R為-COR’， 1^為_(：0關1?’或-CONR’R’’，其中R’及R”為相同或相異，且各自定義如前。較佳另一類本發明化合物係以式（I )衍生物表示，其中X 為 0; R 為- COR，、- CONHR’； Ri 為-COR，、- CONHR’、- CONR’R” 、 -SO2NHR’或- S〇2NR’R”，其中R’及R”各自為相同或相異，且定義如前；以及R2為氫原子。又更佳前述類別包含式（I)衍生物，其中R為-COR’，Ri 為-C0NHR’或- CONR’R”，其中R’及R”各自為相同或相異，且定義如前。當述及任何特定本發明之式（I )化合物，選擇性呈醫藥上可接受之鹽形式，例如可參考下列實驗乙節及申請專利範圍。根據本發明之另一目的，於此處提供式（I )化合物及其醫藥上可接受之鹽用作為藥物。本發明也提供式（I)化合物及其醫藥上可接受之鹽用於製造藥物之用途，該藥物係用於治療患有因蛋白質激酶活性變更或稱作為失調所引起的及/或關聯的疾病病人。

本發明也提供一種治療患有由蛋白質激酶活性改變或稱作為失調所引起的及/或關聯的疾病之哺乳類包括人類之方法，該方法包含對有需要之哺乳類投予治療有效量之式（I )雙環吼唑化合物 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 血管再狹窄組成的組群。此外，本發明之治療哺乳類之方法目的也提供腫瘤血管新生及轉移抑制。本發明化合物可用作為奥羅拉（A u r 〇 r a )激酶抑制劑以及用作為其它蛋白質激酶抑制劑例如下列蛋白質激酶，週期素（cyclin)依賴型激酶（cdk)、不同同質異形體之蛋白質激酶 C 、 Met 、 PAK-4 、 PAK-5 、 ZC-l 、 STLK-2 、 DDR-2 、奥羅拉 1、奥羅拉 2、Bub-1、PLK、Chkl、Chk2、HER2、rail、 MEK卜 MAPK、 EGF-R、 PDGF-R、 FGF-R、 IGF-R、 VEGF-R、 PI3K、威爾（weel)激酶、Src、Ab 卜 Akt、ILK、MK-2、IKK-2、Cdc7、 N e k，如此可有效用於治療其它蛋白質激酶之相關疾病。根據本發明之又一目的，此處提供一種製備本發明化合物及其醫藥上可接受之鹽之方法。因此，式（I)化合物及其醫藥上可接受之鹽可經由一種方法獲得，該方法包含： a ) —種式（I I )化合物

其中R !、R 2及X定義如前，與亞硝酸鈉反應，隨後如此所得重氮錄鹽與適當還原劑反應，因而獲得式（I )化合物其中 R為氫原子以及Ri、R2及X定義如前，以及若有所需， b )將如此所得式（I )化合物轉成另一種式（I )化合物，其中 R非為氫原子；及/或若有所需 13 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 c)將式（I)化合物轉成另一種式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。前述方法根據業界眾所周知之方法進行。由前文說明，顯然若根據前述方法製備之式（I )化合物係呈異構物混合物，則其根據習知技術分離成為單一式（I ) 異構物仍然屬於本發明之範圍。根據方法步驟a )，式（I I )化合物與亞硝酸鈉之反應係於適當溶劑如水、四氫呋喃（T H F )、乙腈（M e C N )、二甲基曱醯胺（D M F )、二氧己烷、丙酮、甲醇或乙醇，以及於酸性條件下進行，例如於氫氣酸、氫溴酸、硫酸、乙酸、氟硼酸或三氟乙酸存在下進行。反應係於約_ 3 0 °C至約5 °C進行約1 〇分鐘至約6小時時間。然後如此所得重氮®翁鹽無需分離而經由使用適當還原劑處理，轉成所需式（I )化合物，還原劑例如為紹氫化鐘、棚氫化納、紹氫化納、氣化鋅或氯化錫。另外，反應可透過催化氫化，於習知催化劑包括例如阮尼錄或林達催化劑（L i n d 1 a r c a t a 1 y s t s )進行。步驟（a )，獲得式（I )化合物之反應係於適當溶劑如水、鹽酸、乙醚、四氫呋喃、甲醇或乙醇，於約-3 0 °C至約7 0 °C之溫度進行約1 0分鐘至約4 8小時時間。根據方法步驟（b)，如此所得式（I )化合物，其中R為氫可經由根據業界習知方法，利用烧化劑、醯化劑、石黃醢化劑等官能化胺基後續處理，而轉成其中R非為氫原子之多種式（I )衍生物。舉例言之，其中R非為氫之式（I )化合物係選自-R ’、 14 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 -COR’、-COOR’、-SChR，、-S〇2NHR，及- SChNR’R”，其中 R’及 R”具有前文報告之定義，可經由式（I)化合物其中R為氫與對應式（I I I )化合物反應製備 R-Y (III) 其中R定義如前，但非為氫，以及Y為適當離去基，較佳為氯或溴。前述反應可根據業界眾所周知之醯化、磺醯化或烷化胺基基團之習知程序進行，該程序例如於第三級鹼如三乙基胺、N，N -二異丙基乙基胺或吼啶存在下，於適當溶劑如甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氫呋喃、乙腈或N，N -二甲基曱醯胺，於約-1 0 °C至回流溫度經歷約3 0分鐘至約9 6 小時時間進行。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知R等於-S 0 2 N R ’ R ’’之式（I )化合物之製備實際上可如前文說明，或另外經由含R 為-S 0 2 N H R ’之式（I )化合物與適合製備二-經取代之磺醯胺之任何反應性部分反應進行。同理，其中R為-C0NHR’基以及R’非為氫之式（I)化合物可經由含有R為氫之式（I)化合物與式（IV)化合物反應製備 R’NCO (IV) 其中R’定義如前，但非為氫。本反應可於第三級鹼如三乙基胺、N , N -二異丙基乙基胺或吼啶存在下，於適當溶劑如曱苯、二氯甲烷、氣仿、乙醚、四氫呋喃、乙腈或N，N -二甲基甲醯胺，於約-1 0 °C至 15 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 回流之溫度經歷約3 0分鐘至約7 2小時時間進行。此外，其中R為-CONHR’之式（I)化合物可選擇性地進一步與式（V )化合物反應 R，，- Y ( V) 其中R”定義如前但非為氫，Υ為適當離去基，較佳為氯或溴，因而獲得對應式（I )化合物，其中R為-CONR’R”，R’ 及R ”二者皆非為氫原子。反應為業界已知，可由對應一取代之前驅物（-C 0 N H R ’）製備經二-取代之脲基衍生物 (-CONR’R”）。另外，仍然係根據眾所周知之方法，一種式（I )化合物其中R為-CON R’R”基以及R’及R”具有前文報告之定義，但非為氫，也可經由R為之式（I )化合物與氯甲酸4 -硝基苯酯反應，隨後與式（V I )化合物反應而製備 R，R，，Ν Η (VI) 至於另一例，其中R等於氫之式（I)化合物也可於還原操作條件下與式（V I I )化合物反應 R，-CH0 (VII) 其中R ’定義如前，但非為氫，因而獲得對應式（I )化合物，其中R為R’CH2-基。本反應係於適當溶劑如N，N -二甲基甲醯胺、N，N -二曱基乙醯胺、氣仿、二氯甲烷、四氫呋喃或乙腈，選擇性地於乙酸、乙醇或甲醇作為助溶劑存在下，於約-1 0 °C至回流範圍之溫度經歷約3 0分鐘至約4日時間進行。習知反應介質之還原劑例如為硼氫化鈉、三乙醯氧基硼 16 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 氫化納等。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知前述任化合物可根據方法步驟（c)而轉成其它式（I )衍應係經由R基以外之官能基根據習知合成有機成。因此舉例言之，其中Ri為- COOMe之式（I)化習知方法，經由使用適當鹼如氫氧化鈉或氫氧而被水解成對應式（I )羧基化合物，其中R!為-，式（I)化合物其中Ri為-COOMe可藉轉移酯化 Ri為-C0 0R’其中R’非為氫或甲基之對應式（I ) 物。前述式（I)化合物其中Ri為-C00H基容易經應羧基而轉成其它衍生物（I )。特別式（I )化合物其中R丨為-C 0 N R ’ R ’’基以及I 經由式（I )化合物其中R i為羧基與適當縮合劑>? 隨後與式（V I Π )化合物 R，R，，Ν Η (VIII) 其中R ’及R ”定義如前，根據製備醯胺之已知方備。同理，其中1^為-(：01?’以及R非為氫之式（I) 由對應式（I)化合物其中Ri為溫瑞（Weinreb)胺 CONCH3〇CH3與式（IX)化合物反應而製備 R，Li (IX) 其中R ’非為氫。反應係根據習知用於製備酮類之方法進行， 312/發明說明書(補件)/92-〗0/92119120 一種式（I ) 生物，該反方法處理達合物可根據化鉀處理， C 0 0 Η。另夕卜而轉成其中羧基化合 ί由適當反 Ϊ非為氫可 i應，以及法反應而製 4匕合物可經基該方法例如 17 1284645 於適當溶劑如四氫呋喃、甲苯、乙醚或己烷存在下，於約 - 7 8 °C至約1 0 °C範圍之溫度，經歷約1 0分鐘至約7 2小時時間而進行，若有所需可應用標準官能基保護方法。另外，其中1^為-(：001?’基以及R及R’非為氫之式（I)化合物可經由其中1^為-(：0〇}1基之對應式（I)化合物與式（X) 化合物反應而製備 R，OH (X) 其中R ’非為氫，該反應係根據習知製備酯之方法進行。至於其它實施例，R !為-S 0 2 N R ’ R ”之式（I )化合物之製備實際上可經由1為-3〇2腿1?’之式（I)化合物與任何適當部分例如烷化部分根據二-經取代之磺醯胺之眾所周知之製法進行。由前文說明，熟諳技藝人士也顯然易知前述式（I )化合物也可經由前述1?及R!以外之官能基適當反應而轉成其它式（I )衍生物。舉例言之，R2等於- CH2〇H或-0H以及R非為氫之式（I) 化合物可與式（X I )化合物反應 R，-Y (XI ) 其中R’定義如前但非為氫，以及Y為適當離去基，較佳為氯或溴，因此獲得R2為-CH2〇R’或OR’之對應化合物。後述反應可於鹼如氫化鈉、N，N -二異丙基乙基胺或咄啶存在下，於適當溶劑如曱苯、二氣甲烷、氯仿、乙醚、四氫呋喃、乙腈或N，N -二曱基曱醯胺，於約-1 0 °C至回流範圍之溫度進行。 18 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 至於其它實施例，其中X為S 0以及R非為氫之式（I )化合物可方便經由始於其中X為S之對應式（I )化合物，該製法係經由該化合物與氧化劑根據習知方法反應。反應可於氧化劑如三氟化硼二乙基醚酸鹽存在下，於MCPBA過氧化氫存在下，於TFA等存在下於適當溶劑如二氯甲烷、水、甲醇或乙醇於約-1 0 °C至回流溫度範圍之溫度經歷一段約 3 0分鐘至約4 8小時之時間。氧化條件適用於始於X為S之對應衍生物（I )製備X為 S 0 2之式（I )化合物。此種情況下，反應可於氧化劑如M C P B A 、二甲基二氧丙烷、過氧基一硫酸鉀、一過氧基苯二曱酸鎂，於適當溶劑如二氣甲烷、氯仿、丙酮、乙腈、水、甲醇或乙醇，於約-1 0 °C至回流溫度經歷約3 0分鐘至約4 8 小時時間進行。又一實施例中，式（I )化合物其中X為N R ’以及R ’及R 皆非為氫，可方便地經由始於其中X為N Η之對應式（I )化合物，與式（X I )化合物反應而製備 R，-Y (XI) 其中R’定義如前，但非為氫，Y為適當離去基報告如前。後述反應可於鹼如氫化鈉、第三丁酸鉀、碳酸鉀、氫氧化鉀等存在下，於適當溶劑如曱苯、二氯曱烷、氣仿、乙醚、四氫呋喃、乙腈、N，N -二甲基曱醯胺或二甲亞砜，於約-1 0 °C至回流之溫度進行。最後，如步驟（c )所述式（I )化合物之鹽化反應，或另外式（I )化合物之轉成自由態式（I )化合物皆係根據眾所周知 19 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 之方法進行，意圖包含於本發明之範圍。如熟諳技藝人士已知，製備本發明之式（I )目的化合物時，起始化合物或其中間物二者之選擇性之官能基以及可能產生期望之副反應之官能基係根據習知技術適當保護。同理，後者轉成自由態經脫去保護之化合物可根據已知程序進行。就此方面而言，值得注意者為選擇性之副產物例如源自前述胺基之官能化之副產物也出現於咄唑氮原子。如此，根據業界眾所周知之方法需要額外步驟而分離所需式（I ) 化合物。舉例言之，經由其中R為氫之胺基衍生物（I )與醯化劑反應所得化合物，可能獲得下式化合物，其中醯化反應係出現於胺基以及咄唑氮原子。此等化合物容易經由吼唑氮原子同一位置的醯基選擇性水解，將咣唑氮原子脫醯化而轉成對應式（I )化合物。另外，式（I )化合物係根據該方法之步驟（a )獲得，該化合物首先根據已知方法保護咄唑氮原子，隨後遵照步驟（b) 及/或步驟（c )轉成所需式（I )衍生物，以及最終脫去保護。因此，本發明之另一目的可以一種製備式（I )化合物及其醫藥上可接受之鹽表示，該方法包含： d )步驟（a )所得式（I )化合物與式（X I I )氯碳酸烷酯衍生物 Ra-O-COCl (XII) 其中R 3為低碳烷基反應，因而獲得式（X I I I )化合物 20 3丨2/發明說明書(補件)/92-10/92119120

1284645 該化合物與吼唑氮原子經保護； e )將所得式（X I II )化合物轉成其中R非為氫原子之式 (X I I I )化合物；

f) 於鹼性條件下裂解式（XI II)化合物，去除-COOR3保護基，獲得所需式（I )化合物；及/或若有所需， g) 將式（I)轉成另一種式（I)化合物或轉成其醫藥上可接受之鹽。根據方法步驟（d )，與式（X I I )氯碳酸烷酯之反應可於適當溶劑如四氫呋喃、二氯甲烷、氣仿、乙腈、甲苯或其混合物，於適當質子清除劑如三乙基胺或二異丙基乙基胺存在下於約-5 °C至約3 5 °C之溫度進行約3 0分鐘至約7 2小時時間。較佳於式（X I I )化合物，R 3為低碳烷基如直鏈或分支 C 1 - C 6烧基。顯然參照式（X I II )化合物，保護基意圖鍵結至任一個咄啶氮原子，主要如後： 21 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645

根據方法步驟（f )，式（X III )化合物根據習知方法使用強驗條件處理而於吼σ坐氮原子脫去保護，該方法例如使用氫氧化納或氫氧化卸，於適當助溶劑如甲醇、乙醇、二甲基甲醯胺或1,4 -二氧己烷存在下，或由使用第三級胺如三乙基胺或二異丙基乙基胺，於作為溶劑之低碳醇典型為甲醇台乙醇存在下處理進行。脫保護反應可於約1 8 °C至回流溫度反應約3 0分鐘至約 72小時時間。顯然任何式（I )化合物額外轉成另一種式（I )化合物，如方法步驟（g)報告係以類似方式遵照前文於前一方法步驟 (c )報告之操作條件下進行。同理，式（X I I I )化合物其中R 為氫遵照步驟（e )轉成另一種式（X I I I )化合物，其中R非為氫係遵照前述方法步驟（b)報告之操作條件進行。另外，根據本發明之額外目的，發明之式（I )化合物其中R非為氫原子如- COR’或- COOR’基，及其醫藥上可接受之鹽可經由一種方法製備，該方法包含 h )前述步驟（a )所得式（I )化合物與過量適當下式氯碳酸酯或醯基氯反應 R，-0-C0-C1 (XI Va) R，-CO-Cl (XIVb) 其中R’定義如前，因而獲得式（XVa)或（XVb)化合物 22 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645

R, _ i )於鹼性條件下，裂解式（XVa)或（XVb)化合物，因而去除咄唑氮原子之保護基，如此獲得R為-C 0 R ’或-C 0 0 R ’基之所需式（I )化合物；及若有所需 j )將所得式（I )化合物轉成另一種式（I )化合物或轉成其醫藥上可接受之鹽。根據該方法之步驟（h)，式（I )化合物與式（XI Va)或 (X I V b )化合物間之反應可於適當溶劑如四氫呋喃、二氯甲烷、氣仿、乙腈、甲苯或其混合物，於適當性質子清除劑如三乙基胺或二異丙基乙基胺存在下於約-5 °C至約35 °C 範圍之溫度進行約3 0分鐘至約7 2小時時間。隨後，於步驟（i )，吼嗤氮原子該基團之選擇性水解係如前文步驟（f)報告，於鹼性條件下進行。步驟（j )包含任何變化步驟，係有關將式（I )化合物遵照前文於步驟（c )報告之條件轉成另一種式（I )化合物。根據又另一種方法，式（I )化合物係於步驟（a)獲得，替代於他唑氮原子接受保護，也可支載於適當樹脂上，隨後反應而獲得所需化合物。因此本發明之又一目的係有關一種製備式（I )化合物及其醫藥上可接受之鹽，該方法包含 k )步驟（a )所得式（I )化合物與式（X V )異氰酸酯聚苯乙烯樹 23 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 脂反應

因而獲得式（XVI)聚苯乙烯甲基脲

其中X、Ri及R2定義如前； 1 )將所得式（XVI )化合物轉成式（XVI I )化合物

其中R非為氫原子；以及 m )於鹼性條件下裂解式（X V I I )化合物，去除樹脂，而獲得所需式（I )化合物；以及若有所需 η)將式（I)化合物轉成另一種式（I)化合物，或轉成其醫藥 24 312/發明說明書(補件)/924 0/92119120 1284645 上可接受之鹽。根據步驟（k )，式（X V )異氰酸基曱基聚苯乙烯樹脂與式（I ) 化合物間之反應可於適當溶劑如N，N -二曱基曱醯胺、二氯甲烷、氣仿、乙腈、甲苯或其混合物，於約5 °C至約3 5 °C 溫度之範圍進行約3 0分鐘至約7 2小時時間。根據步驟（1)，經樹脂支載之式（X V I )化合物轉化成對應經樹脂支載之式（XV I I )衍生物，其中R非為氫，可如前文步驟（b)指示進行，該轉化係經由於溫和條件下例如於約5 °C至約6 0 °C範圍之溫度進行約2小時至約7日時間。隨後根據步驟（m )裂解樹脂係於鹼性條件下根據習知技術處理進行，該裂解例如係於水性氫氧化鈉、氫氧化舒存在下，於適當助溶劑如曱醇、乙醇、二曱基甲醢胺、1，4-二氧己烷或乙腈存在下進行。式（I )化合物遵照步驟（η)轉成另一種式（I )化合物係依據前文對步驟（c )報告之條件進行。根據本發明之方法目的全部化合物由式（I I )至（X I I )、 (XI Va)、（XI Vb)及（XV)皆為已知，若該等化合物非市面上可得，則可根據眾所周知之方法獲得。式（I I )關鍵化合物特別可經由根據參考文獻報告之習知方法還原式（XV I I I )化合物製備。

0 〇二 N+ CN

25 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 舉例言之反應可於適當還原劑如鐵粉、錫粉、氯化錫、氯化鈦存在下進行；或透過催化氫化而於阮尼鎳或林達催化劑存在下，於適當溶劑如甲苯、二曱基曱醯胺、乙腈、曱醇、乙醇、水、乙酸或鹽酸，於約-5 °C至約9 0 °C範圍之溫度進行約1 0分鐘至約4日時間。式（XVIII)化合物又可經由類似El Kassmi A·等人於 Synth. Comm.1994， 24(1)， 95-101 報告之方式後續處理而製備，其製備係始於式（X I X )化合物

式（XIX)化合物其中1^為-(：0(^1:，X為S，及R2為氫可根據 Dell’Erba C.等人於 Tetr. 1965， 21， 1061-1066 所述程序製備。以類似方式，允許相同程序獲得對應式（X I X )化合物，其中 Ri 為-R，、-COOR’、-S〇2R，、-SChNHIT或 S〇2NR，R，’、R’、 R ”、R 2及X定義如前，該反應係始於式（X X )化合物

式（XIX)化合物其中Ri為- SihNHR’ ，及R’、R2及X定義如前可方便得自對應式（X X )化合物，其中R !為-S 0 2 C 1，該方法係經由式（X X )化合物與式（V I )化合物反應 26 3丨2/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 (VI) R，R，，Ν Η 其中R’及R”定義如前，二者非同時為氫。後述反應可於第三級鹼如三乙基胺、Ν，N -二異丙基乙基胺或咄啶存在下，於適當溶劑如甲苯、二氣甲烧、氯仿、四氫咳喃、乙腈或 Ν，N -二甲基曱醯胺，於約_ 1 0 °C至回流範圍之溫度進行約 3 0分鐘至9 6小時時間。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知R ^為-S 0 2 N R ’ R ”之式（X X )化合物之製備實際上可如前述進行，或另外經由R 1 為-S 0 2 N H R ’之式（X X )化合物於製備二經取代之磺醯胺之適當部分（例如烷化部分）反應進行。式（X X )化合物，其中R 2及R!非為氫，方便地係得自式 (X X I )化合物

該反應係經由使用適當反應劑進行溴化反應。舉例言之，反應係於溴化劑如溴、N -溴丁二醯亞胺等存在下，於適當溶劑如曱苯、二氯曱烷、氣仿、乙醚、四氫呋喃、乙腈或 Ν，N -二甲基甲醯胺，於約-1 0 °C至回流範圍之溫度經歷約 3 0分鐘至約9 6小時時間進行。最後根據本發明之更佳具體例，式（I )化合物及其醫藥上可接受之鹽可經由一種方法製備，該方法包含： i)經由適當反應轉化式（XX II)化合物 27 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 (XXII) 1284645

其中R !、R 2及X定義如前，以及H a 1為鹵原子，成為對應氰基衍生物；若上式（X X I I )之R ^亦為C Η 0殘基，則選擇性分離所需異構物； i i )如此所得式（X X I I I )化合物

(XXIII) 其中Ri、R2、X及Hal定義如前，與式（XXIV)腙衍生物反應：RaRbC = N-NH2，其中Ra及Rb為直鏈或分支烷基、芳基、芳基-C! - C 6烷基，或與其鍵聯之碳原子共同形成選擇性稠和之雜環或C5-C7環烷基，該反應係於惰性氣氛下於鈀催化劑、配位子及鹼存在下進行； i i i )使用酸於適當溶劑處理式（X X V )化合物

HN CN

其中1^1、82、乂、1?8及1^定義如前，因而獲得式（1)化合物，其中R為氫原子以及Ri、R2及X定義如前；以及若所需， 28 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 將如此所得式（I )化合物轉成另一種式（I )化合物，其中R 非為氫原子，及/或若有所需將式（I)化合物轉成另一種式 (I)化合物或轉成其醫藥上可接受之鹽，如前文於步驟b) 及 c); d)、e)、f)及 g); h)、i)、j)或 k)、1)、m)、n) 說明。舉例言之，其中R!基團為C 0 0 H之水解化合物可根據習知酯之製備方法與如前文定義之式（X )化合物反應，因而獲得另一種式（I)化合物，其中Ri為COOR’。根據方法步驟i )，CHO基轉成CN殘基可根據參考文獻報告之習知方法進行。舉例言之，該反應可於羥基胺或其衍生物存在下，於鹼如吼啶三乙基胺、N，N -二異丙基乙基胺、乙酸鈉等存在下於適當溶劑如水、四氫呋喃（T H F )、乙腈（M e C Ν )、二曱基甲醯胺（D M F )、二0¾烷、甲醇或乙醇進行。反應係於約0 °C至約4 0 °C範圍之溫度進行約1 0分鐘至約6 小時時間。然後，如此所得肟無需分離，經由使用適當脫水劑如三氟乙酐處理，而轉成所需式（X X I I I )化合物。至於方法步驟i i )，與腙衍生物之反應係於惰性氣氛如氮氣或氬氣氣氛下於把催化劑如Pd(AcO)2、PdCl2、Pd2(dba)3存在下，於鹼Cs2C〇3、K2C〇3或K3P〇4以及二膦配位子或官能化二烷基膦基膦苯基配位子存在下進行，二膦配位子例如 2,2’-貳（二苯基膦基）-1，1’-聯萘（81^?)、1，1’-貳（二苯基膦基）鐵茂（DPPF)、10, 11-二氫-4, 5-氣（二苯基膦基）二苯并[b，f]氧雜庚烷（HomoXantphos)、貳（2-(二苯基膦基）苯基）萘（〇?£0匕〇3)、9,9-二曱基-4,6-貳（二苯基膦基）氮雜蔥（Xantphos)、（鄰一聯苯）P (t - Bu ) 2、（鄰-聯苯）PCy2 等； 29 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 或官能化二烷基膦基聯苯配位子例如2 -二環己基膦基 -2’-二甲基胺基聯苯等（參考J· Org. Chem·， 65(17)， pp · 5 3 3 8 - 5 3 4 1 ， 2 0 0 0 )。適當溶劑例如為甲苯、MeCN > DMF 或二氧己烷；反應係於約7 0 °C至約1 3 0 °C範圍之溫度進行約6小時至約7 2小時時間。至於式（X X I V )腙衍生物，當 Ra及Ri,與鍵聯之碳原子共同形成選擇性經稠合之雜環時，可為例如氧雜蔥或硫雜蔥等；當形成C5-C?環烷基時可為例如環己烷環等。其它可用於此一步驟之腙衍生物係述於參考文獻，參考例如 J. Am. Chem· Soc. ， 120(26)， ρρ· 6 6 2 1 - 6 6 2 2，1 9 9 8。步驟i i i )獲得式（I )化合物之反應係使用酸如對-曱苯磺酸、曱烷磺酸、硫酸、鹽酸、三氟乙酸、過氣酸等，於適當溶劑如水、醇如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇第三丁醇等或其混合物，選擇性混合四氫呋喃、二氧己烷、二甲氧基乙烷、D Μ A、Ν Μ P等溶劑進行。反應係於約2 0 °C至約1 2 0 °C範圍之溫度進行約1 0分鐘至約1 2小時時間。於此步驟i i i )，酸性處理也將R!基轉成不同基團，例如藉水解亦即由C 0 0 R ’轉成C 0 0 Η ;或藉轉移酯化亦即由 C 0 0 R ’轉成C 0 0 R ’，其中所得R ’基係與開始之R ’不同，依據使用之醇溶劑決定。根據本發明之方法目的之全部式（X X I I )及（X X I V )化合物為已知，若非市面上可得，則可根據眾所周知之方法獲得。式（X X I I )關鍵中間物，特別可始於式（X X V I )化合物 30 3丨2/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645

Hal Hal rtY _)

Ri 其中R!、R2、X及Hal定義如前，根據參考文獻報告之習知方法製備。舉例言之，反應可於鋰衍生物存在下，接著於二甲基曱醯胺處理，然後使用酸進行，該反應係類似 Chemical & Pharmaceutical Bu 1 1 etiη ( 1 9 9 7 )，45(5)， 799-806 或 J. Org. Chem.,67(12)， 4177-4185; 2002 報告之反應。至於另一實施例，反應可於溫和條件下使用烷基鎂化合物類似 J. Org. Chem. , 65(15)，4168-4185; 2000 報告之方法進行。式（X X V I )起始化合物為已知化合物，或易經由鹵化如前文定義之式（XXI )化合物，接著當R!為C(hH時酯化該化合物而製備。式（XX I I I )及（XXV )中間化合物為新穎化合物，因此構成本發明之又一目的。由前文說明，熟諳技藝人士顯然易知本發明式（I )化合物較佳經由以組合方式進行前述反應而製備。舉例言之，式（XV I )及（XV I I )化合物可支載於樹脂粒子如聚苯乙烯樹脂，甚至更佳支載於曱基異氰酸酯聚苯乙烯樹脂，如前文所述製備，可以前文報告之多種方式反應，因而獲得多種式（I )化合物，例如根據組合化學方法由數千種不同式（I )化合物組成。因此’本發明之又一目的為一種組合化學存庫，包含複 31 312/發明說明書(補件)/92_ 10/92119120 1284645 推定c d k /週期素抑制劑之抑制活性以及選用之化合物之強度係基於使用S P A技術（亞莫森法馬西亞生技公司 (Amersham Pharmacia Biotech))之檢定分析方法測定。該檢定分析包含藉激酶將經過放射性標記之破酸根部分轉移至生物素酶基質。結果所得3 3 P標記之生物素化產物結合至經過鏈絲菌抗生物素塗覆之SPA珠粒（生物素容量1 3 0微微莫耳/毫克）於閃爍計數器測量及發光。 (c d k 2 /週期素A活性抑制檢定分析）激酶反應：4 μ Μ室内生物素化組織腺Η 1 (西格馬（S i g m a ) #H-5505)酶基質、10μΜΑΤΡ(0·1 微 Ci Ρ33γ-ΑΤΡ) > l.lnM 週期素A/CDK2錯合物，抑制劑於終容積30微升緩衝液 (TRIS HC1 10 mM pH 7.5，MgCl2 = 10 mM，DTT 7. 5 mM + 0. 2 毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之各孔。於室溫培養 60分鐘後，藉加入1 00微升PBS緩衝液終止反應，PBS緩衝液含有32 11^£1)丁八、5〇〇0肘冷儿丁？、〇.1%崔頓（111^1:〇11) XI 00及10毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之SPA珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6孔光板 (0卩1'1?1^了£)含100微升5!4〇3(：1。經4小時後，於派克 (Packard)頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定··抑制劑係於0 . 0 0 1 5至1 0 // Μ之不同濃度試驗。實驗資料係使用4參數邏輯方程式藉電腦程式 GraphPad Prizm 分析： y =底 +(頂 +底）ai + l(T((l〇gIC50-x)* 斜率））此處X為抑制劑濃度之對應，y為回應；y始於底部，以s 33 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 字形升高至頂部。 K i計算：實驗方法：反應係於緩衝液（lOmMTris，pH7.5，10mM MgCl2，0.2 毫克 / 毫升 BSA，7. 5 mM DTT)含 3. 7 nM 酶，組織腺及ATP(冷ATP/經標記之ATP之恆定比值= 1 / 3 0 0 0 )進行反應係使用EDTA停止，基質捕捉於磷膜（多重螢幕 (Multiscreen)96孔孔板，得自米利玻（Millipore)公司）。經徹底洗滌後，多重螢幕孔板於頂計數器上讀取。對各A T P及組織腺濃度測量對照濃度（時間為0 )。實驗設計：反應速度係於4種A T P、酶基質（組織腺）及抑制劑濃度測定。設計8 0點濃度矩陣環繞個別A T P K m值及酶基質Km值，以及抑制劑IC50值（0. 3、1、3、9倍Km 或I C50值）。無抑制劑存在下以及於不同ATP濃度及酶基質濃度進行初步時程實驗，允許對K i測定實驗於反應之線性範圍選擇單一終點時間（1 0分鐘）。動態參數估值：動態參數係使用完整資料集合（8 0點）使用[方程式1 ](相對於ATP之競爭抑制劑，隨機機轉）藉同時非線性最小平方回歸估計動態參數：

Vm· Α·Β Κα 、Kci · Kb + oc · Kci · Β ci · Kb ·Α + Α·Β + 〇ί· · I ·、Kb + [方程式1 ] 此處A = [ A T P ]，B =[酶基質]，I =[抑制劑]，V m =最大速度， Ka、Kb、Ki分別為ATP、酶基質及抑制劑之解離常數。α 及/3分別為酶基質與ATP結合以及酶基質與抑制劑結合間 34 312/發明說明書(補件)/92· 10/92119120 1284645 之協力因素。此外，選用之化合物於與細胞周期有嚴格相 ser/thre激酶（cdk2/週期素E、cdkl/週期素 c d k 5 / p 2 5，c d k 4 /週期素D 1 )決定特徵，也決吳 PKA、EGFR、IGF1 - R、奥羅拉 -2 及 Cdc7 之特 I (c d k 2 /週期素E活性之抑制檢定分析）激酶反應：1 Ο μ M室内生物素化組織腺Η 1 (西 # H-5505)S每基質、30 μΜ ΑΤΡ(0.3 微 Ci Ρ33γ 克G S Τ -週期素Ε / C D Κ 2錯合物，抑制劑於終容3 衝液（TRIS HC1 10 mM pH 7.5， MgClz 10 mM ， + 0.2毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之溫培養6 0分鐘後，藉加入1 0 0微升P B S緩衝浓 PBS 緩衝液含有 32 mM EDTA、500 μΜ 冷 ATP、 (T r i t ο η ) X 1 0 0及1 0毫克/毫升經鏈絲菌抗生拍 S P A珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮孔光板含1 0 0微升5 M C s C1。經4小時後，於放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定：參見上文 (c d k 1 /週期素Β 1活性之抑制檢定分析）激酶反應：4 μ Μ室内生物素化組織觫Η 1 (西才 # Η-5505)酶基質、20 μΜ ΑΤΡ(0·2 微 Ci Ρ33γ-克週期素Β / C D Κ 1錯合物，抑制劑於終容積3 Ο (TRIS HC1 10 mM pH 7.5， MgCl2 10 mM， DTT 7 毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之各孔。 312/發明說明書(補件)/92-】0/92119120 關之一組 B1、 :對 MAPK 、卜。格馬（S i g m a ) -ATP) 、 4 奈黃3 0微升緩 DTT 7.5 mM 各孔。於室 L終止反應， 0 . 1 %崔頓 7素塗覆之液，移至96 派克頂計數 F 馬（Sigma) ATP) 、 3 奈微升緩衝液 .5 m Μ + 0.2 於室溫培養 35 1284645 20分鐘後，反應藉含1毫克SPA珠粒之1 00微升PBS + 32 mM EDTA + 0.1%崔頓（Triton)X-lOO + 500 μΜ ATP 終止。然後1 1 0微升容積移至光板上。經2 0分鐘培養捕捉酶基質後，添加100微升5M CsCl，允許珠粒成層至光板頂上，於頂計數儀計數放射性前放置4小時。 (c d k 5 / ρ 2 5活性之抑制檢定分析） cdk5/p25活性之檢定分析係根據如下方案進行〇激酶反應：1 0 μ Μ室内生物素化組織腺Η 1 (西格馬# η -5 5 0 5 )酶基質、30 // Μ ΑΤΡ(0· 3 微 Ci P33 r -ATP)、15 奈克

C D K 5 / ρ 2 5錯合物，抑制劑於終容積3 0微升緩衝液（T R I S HC1 10 mM pH 7.5， MgCl2 10 mM， DTT 7.5 mM + 0.2 毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之各孔。於室溫培養35 分鐘後，藉加入1 00微升PBS緩衝液終止反應，PBS緩衝液含有 32mMEDTA、500 冷 ΑΤΡ、0·1% 崔頓（Triton)XlOO 及1 0毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之SPA珠粒。培養 2 0分鐘後，取出1 1 〇微升懸浮液，移至9 6孔光板含1 0 0 微升5 M C s C 1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定：參見上文 (c d k 4 /週期素D 1活性之抑制檢定分析）激酶反應：0. 4 // Μ 小鼠 GST-Rb( 7 6 9_921)(#sc-4112

得自聖塔克魯茲（Santa Cruz))酶基質，10 μ Μ ΑΤΡ(0·5 微CiP33r _ΑΤΡ)、100奈克由桿病毒表現之GST-cdk4/GST-週期素D 1，適當濃度抑制劑於終容積5 0微升緩衝液（TR I S 36 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 HCl 10 mM pH 7.5， MgCl2 10 mM， 7. 5 mM DTT + 0.2 毫克/毫升B S A )添加至9 6孔U字形底孔板之各孔。於3 7 °C培養4 0分鐘後，藉2 0微升E D T A終止反應。捕捉：由各孔移出6 0微升至多螢幕板上，讓酶基質結合至磷酸纖維素過濾膜。然後孔板使用1 5 0微升/孔不含 Ca_ VMg + +之PBS洗3次，藉多螢幕過濾系統過濾。偵測：讓過濾膜於3 7 °C乾燥，然後加入1 0 0微升/孔閃爍劑，於頂計數儀計算放射性而偵測經過33P標記之Rb片段。 I C 5 0之測定：參見上文 (M A P K活性之抑制檢定分析）激酶反應：1 0 μ Μ室内生物素化組織腺Η 1 (西格馬# Μ -1891)酶基質、15 μ Μ ΑΤΡ(0.15 微 Ci Ρ33 γ -ATP) > 30 奈克G S T - M A P K (優士塔特（U p s t a t e )生技公司# 1 4 1 7 3 )，抑制劑於終容積30微升緩衝液（TRIS HCl 1 0 mM pH 7. 5，MgClz 10 mM，DTT 7.5 mM + 0.2 毫克 / 毫升 BSA)添加至 96 孔 U 字形底之各孔。於室溫培養3 5分鐘後，藉加入1 0 0微升 P B S緩衝液終止反應，P B S緩衝液含有3 2 hi Μ E D T A、5 0 0 // Μ冷A T Ρ、0 . 1 %崔頓X 1 0 0及1 0毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之S Ρ A珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6孔光板含1 0 0微升5 M C s C 1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定：參見上文 (Ρ Κ Α活性之抑制檢定分析） 37 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 激酶反應：1 Ο μ Μ室内生物素化組織腺Η 1 (西格馬# Η -5 5 0 5 )酶基質、10 μ Μ ΑΤΡ(0.2 微 M P33r - ATP)、0.45U PKA(西格馬公司# 2 6 4 5 )，抑制劑於終容積30微升緩衝液 (TRIS HC1 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM，DTT 7.5 mM + 0. 2 毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之各孔。於室溫培養 90分鐘後，藉加入1 00微升PBS緩衝液終止反應，PBS緩衝液含有 32 mM EDTA、500 μΜ 冷 ATP、0.1°/。崔頓 X100 及 1 0毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之SPA珠粒。培養2 0 分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6孔光板含1 0 0微升 5 M C s C 1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定：參見上文 (E G F R活性之抑制檢定分析）激酶反應：1 Ο β Μ室内生物素化ΜΒΡ(西格馬# Μ-1 981 ) 酶基質、2 /zM ATPC0.04 微 Ci P33r - ΑΤΡ)、36 奈克由昆蟲細胞表現之GST-EGFR，抑制劑於終容積30微升緩衝液 (Hepes 50 mM pH 7. 5 » MgCl2 3 mM，MnCl2 3 mM，DTT 1 mM， NaVOa 3//M + 0.2毫克/毫升BSA)添加至96孔U字形底之各孔。於室溫培養2 0分鐘後，藉加入1 Ο 0微升PBS緩衝液終止反應，PBS緩衝液含有32 mMEDTA、500 /zM冷ATP、 0. 1 %崔頓（Triton )X1 00及10毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之S P A珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6孔光板含1 0 0微升5 M C s C 1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 38 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 I C 5 0之測定：參見上文 (I G F 1 - R活性之抑制檢定分析） I G F 1 - R活性之抑制檢定分析係根據如下方案進行。酶活化··實驗開始前，I G F 1 - R必須藉自動磷酸化活化。恰於檢定分析前，濃縮酶溶液（6 9 4 η Μ )於2 8 °C於1 0 0 // Μ ATP存在下培養半小時，然後於所示緩衝液調整至工作稀釋濃度。激酶反應：1 Ο μ Μ生物素化I R S 1胜肽（P R I Μ Μ )酶基質、 0-20 μ Μ 抑制劑、6 μΜ ATP、1 微 Ci 33 P-ATP 及 6 奈克 GST-IGF1-R(與冷60 μΜ冷ATP於室溫前培養30分鐘）於終容積 3 0 微升緩衝液（5 0 m Μ Η E P E S p Η 7 · 9，3 m Μ Μ n C 12， 1 ηιΜ DTT，3 μΜ NaV〇3)添加至96孔U字形底之各孔。於室溫培養3 5分鐘後，藉加入1 0 0微升P B S緩衝液終止反應，PBS 緩衝液含有 32 mM EDTA、5 0 0 μΜ 冷 ATP、0.1 %崔頓（T r i t ο n ) X 1 0 0及1 0毫克/毫升經鏈絲菌抗生物素塗覆之 S Ρ Α珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6 孔光板含1 0 0微升5 M C s C1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 (奥羅拉-2活性之抑制檢定分析）激酶反應：8 μ Μ生物素化胜肽（4次重覆L R R W S L G )，1 0 μΜ ΑΤΡ(0· 5微Ci Ρ33γ_ΑΤΡ)、7. 5奈克奧羅拉2、抑制劑於終容積30微升緩衝液（HEPES 50 mM pH 7. 0，MgC卜1 0 mM，1 mM DTT，0.2毫克/毫升BSA，3 μΜ正釩酸鹽）添加至9 6孔U字形底孔板之各孔。於室溫培育6 0分鐘後，中 39 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 止反應，藉加入1 Ο 0微升珠粒懸浮液捕捉生物素化胜肽。成層：1 0 0微升C s C 12 5 Μ添加至各孔，放置4小時，隨後於頂計數儀計算放射性。 I C 5 0之測定：參見上文 (C d c 7 / ά b ί 4活性之抑制檢定分析） C d c 7 / d b f 4活性之抑制檢定分析係根據如下方案進行。生物素MCM2酶基質於ATP存在下，以r 33-ATP追蹤，藉 C d c 7 / D b f 4錯合物轉移構酸化。然後填酸化後之生物素 -M C Μ 2酶基質藉經鏈絲菌抗生物素塗覆之S P A珠粒捕捉，藉万計數評估磷酸化程度。 C d c 7 / d b f 4活性之抑制檢定分析係於9 6孔孔板根據如下方案進行。孔板之各孔内之加入： - 1 0微升酶基質（生物素化M C Μ 2，6 // Μ終濃度） -1 0 微升酶（C d c 7 / D b f 4，1 7 · 9 η M 終濃度） -1 0微升試驗化合物（於η M至// M範圍1 2種遞增濃度來獲得劑量-反應曲線） -1 0微升冷ATP(2 # Μ終濃度）及放射性ATP(與冷ATP 為1 / 5 0 0 0莫耳比）之、混合物隨後用來開始反應，讓反於3 7 °C進行。酶基質、酶及ATP於50 niM HEPES pH 7,9稀釋，後者含有 15 mM MgCl2、2 mM DTT、3 //M NaVCh、2 mM 甘油基磷酸酯及Ο , 2毫克/毫升B S A。試驗化合物溶劑也含有1 Ο % DMSO ° 40 3丨2/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 培養6 0分鐘後，經由於各孔加入1 Ο 0微升P B S ρ Η 7 · 4 而中止反應，？83含有50 — £0丁八、111^冷八丁？、0.1%崔頓（Triton ) XI 00及10毫克/毫升經鏈絲菌抗生物塗覆之 SPA珠粒。培養2 0分鐘後，取出1 1 0微升懸浮液，移至9 6孔光板含1 0 0微升5 M C s C 1。經4小時後，於派克頂計數放射性讀取器讀取光板2分鐘。 I C 5 0之測定：參見上文。本發明化合物可用於治療，例如限制腫瘤細胞之不受調節增生。特別，本發明之二環咄唑類可用於治療多種癌症，該等癌症包括（但非限制性）數種器官、組織及腺體之癌瘤例如膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、包括小細胞肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、攝護腺癌及皮膚，包括鱗狀細胞癌；淋巴細胞系之造血系統腫瘤，包括白血病、急性淋巴球性白血病、急性母細胞性白血病、Β -細胞淋巴瘤、Τ -細胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、髮狀細胞淋巴瘤及柏杰氏淋巴瘤（B u r k e 11 ’ s 1 y m p h 〇 m a );骨髓細胞系之造血系統腫瘤包括急性及慢性骨髓原性白血病、骨髓成形不良症候群及前骨髓細胞性白血病；間葉來源之腫瘤包括纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤；中樞神經系統及周邊神經系統腫瘤，包括星狀細胞瘤、神經母細胞瘤、神經膠細胞瘤及許旺氏腫瘤（s c h w a η η 〇 m a s );其它腫瘤包括黑素瘤、精細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、色素沉著性乾皮病、角化黃瘤、甲 41 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 狀腺濾泡癌及卡波西氏肉瘤。因P K S於細胞增生調節上分演關鍵角色，故本發明之二環咄唑類也可用於治療多種增生病症例如良性攝護腺肥大、家族性腺瘤病、息肉、神經纖維瘤病、乾癬、動脈粥狀硬化相關之血管平滑肌增生、肺纖維硬化、關節炎、腎絲球體腎炎以及術後血管狹窄及血管再狹窄。本發明化合物可用於治療阿茲海默氏病，由 cdk5涉及tau蛋白質之填酸化現象可證實（J. Biochem.， 1 1 7，7 4 1 - 7 4 9，1 9 9 5 )。本發明化合物作為細胞凋亡調節劑，也可用於治療癌症、病毒性感染、預防Η I V感染個體出現愛滋病、自體免疫病及神經退化病症。本發明化合物可用於抑制腫瘤血管新生及腫瘤轉移。本發明化合物適合藉尋常途徑投予哺乳類如人類。投藥劑量係依據病人年齡、體重、情況及投藥途徑決定。口服投予本發明化合物例如Ν -苄基-3 - {[ 4 - ( 4 -乙基哌畊-1 -基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺之適當劑量為每劑約5毫克至約5 0 0毫克，每曰1至5 次0 本發明化合物可以多種劑型投藥，例如口服係呈錠劑、膠囊劑、糖衣錠或膜衣錠、液態溶液劑或懸浮液劑劑型；直腸投藥呈栓劑劑型；腸道外投藥如肌肉、靜脈或鞘内及/ 或脊内注射或輸注；或經皮投藥。此外，本發明化合物可呈單劑投藥，或另外呈組合治療方法投藥，該方法包含其它抗癌治療例如放射線治療或化學治療組合細胞抑制劑或細胞毒劑、抗生素劑、烧化劑、 42 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 抗代謝劑、激素劑、免疫劑、干擾素類型製劑、環氧合酶抑制劑（例如C Ο X - 2抑制劑，特別色雷克西（c e 1 e c ο X i b )、洛菲克西（rofecoxib)、佩瑞克西（parecoxib)及瓦德克西 (v a 1 d e c ο X i b ))、金屬基質蛋白酶抑制劑端粒酶抑制劑，酪胺激酶抑制劑、抗生長因子受體劑、抗Η E R劑、抗E G F R 劑、抗血管新生劑、法尼基轉移抑制劑、r a s _ r a f信號轉導路徑抑制劑、細胞週期抑制劑、其它cdks抑制劑、微管素結合劑、拓樸異構酶I抑制劑、拓樸異構酶I I抑制劑等。調配於固定劑時，此種組合產物採用本發明化合物於前述劑量範圍，及其它醫藥活性劑於核准劑量範圍。式（I )化合物於組合調配不當時，可與已知抗癌劑循序使用。因此本發明也提供一種治療患有因蛋白質激酶活性變更（失調）所引起及/或關聯的疾病之哺乳類包括人類之方法，包含對有需要之哺乳類投予治療有效量之式（I )二環吼唑化合物或其醫藥上可接受之鹽，同時進行同時、分開或循序抗癌治療。本發明之又一目的為使用式（I)或其醫藥上可接受之鹽用於接受同時、分開或循序抗癌治療病人，用於治療因蛋白質激酶活性變更引起的及/或關聯的疾病之藥物之用途。本發明也包括醫藥組成物，其包含式（I )化合物或其醫藥上可接受之鹽組合醫藥上可接受之賦形劑，該賦形劑可為載劑或稀釋劑。含有本發明化合物之醫藥組成物通常係遵照習知方法 43 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 製備，且係以醫藥上可接受之形式投藥。例如固體口月艮劑型連同活性化合物含有稀釋劑如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；潤滑劑如矽氧、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣及/或聚乙二醇類；黏結劑如澱粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯基吼咯啶酮；崩散劑如澱粉、藻蛋白酸、藻蛋白酸鹽或乙醇酸澱粉鈉；發泡混合物；染料；甜味劑；濕潤劑如卵磷脂、聚山梨酸鹽、月桂基硫酸鹽；以及通常為用於醫藥調配劑之無毒藥理上可接受之物質。醫藥製劑可以習知方式例如經由混合、造粒、打錠、包糖衣或包膜衣等處理製造。口服投藥用之液態分散液可為例如糖漿劑、乳液劑及懸浮液劑。糖漿劑例如含有蔗糠或蔗糖與甘油及/或甘露糠醇及/ 或山梨糠醇作為載劑。懸浮液劑及乳液劑例如含有天然樹膠、瓊脂、藻蛋白酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯醇作為載劑。肌肉注射用之懸浮液劑或溶液劑連同活性化合物，含有一種醫藥上可接受之載劑如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇類如丙二醇以及若有所需適量力度卡因（lidocaine) 鹽酸鹽。靜脈注射或輸注用之溶液劑含有例如無菌水作為載劑，或較佳靜脈注射用溶液劑係呈無菌水性等張食鹽水溶液劑型，或含有丙二醇作為載劑。 44 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 栓劑連同活性化合物，含有醫藥上可接受之載劑如可可脂、聚乙二醇、聚氧伸乙基聚山梨糖醇脂肪酸酯界面活性劑或卵磷脂。下列實施例於此處意圖舉例說明本發明而非限制性。 (合成例）下列HPLC方法用於分析如下合成例界定之化合物。用於此處「R t」一詞表示化合物使用之規定Η P L C方法之滯留時間。 (方法A ) HPLC/MS 係於瓦特氏（Waters)X 特拉（Terra) RP 18 (4.6 X 5 0毫米，3. 5微米）管柱，使用裝配有9 9 6瓦特氏P D A 偵測器之瓦特氏2 7 9 0 HPLC系統，以及裝配有電噴霧（ESI ) 離子來源之麥克羅梅斯（Micromass)型號ZQ單一四極質譜儀進行。動相A為乙酸銨5 m Μ緩衝液（p Η 5 . 5含乙酸/乙腈9 5 : 5 )及動相Β為水/乙腈（5 : 9 5 )。梯度為1 0至9 0 % Β 經歷8分鐘，維持於9 0 % Β經歷2分鐘。U V偵測係於2 2 0 奈米及254奈米。流速1毫升/分鐘。注入容積10微升。全掃描，質量範圍1 0 0至8 0 0 a m u。毛細電壓2 . 5千伏特；來源溫度1 2 0 °C ;錐1 0伏特。滯留時間（Η P L C r · t ·)係以於220奈米或254奈米之分鐘表示。質量係以m/z比表示。 (方法B ) HPLC/MS 係於海卜西（Hypersil)C18 BSD(2 X 50 毫米， 5微米）管柱，使用裝配有聚合物實驗室PL 1 0 0 0氣化光散射偵測器之惠普1312A HPLC系統以及裝配有電噴霧（ESI) 45 312/發明說明書(補件)/92-〗0/92119120 1284645 離子來源之麥克羅梅斯ZMD質譜儀進行。動相A為三氟乙酸水溶液（0 · 1 % v / v)，動相B為三氟乙酸乙腈溶液（0 · 1 % v / v)。梯度由0至9 5 % B為1 . 8分鐘，維持於9 5 % B經歷 0. 3分鐘。流速1毫升/分鐘。注入容積3微升。全掃描，質量於1 5 0至8 0 0 a m u之範圍。來源溫度1 4 0 °C ;錐為2 5 伏特。滯留時間（Η P L C r . t ·)以分鐘表示。質量以m / z比表示。 (實施例1 ) (5 -氰基_ 4 -硝基-噻吩-2 -羧酸曱酯（1 )之製備）於5 -溴-4 -硝基-噻吩-2 -羧酸曱酯（0 · 3 0莫耳，8 0 · 0克）於無水二甲基甲醯胺（1〇〇毫升）之溶液内，於氬下攪拌加入無水氰化銅（0 . 3 6莫耳，3 2 · 2克）。混合物加熱至8 0 °C 歷3小時，倒入F e C 1 3 · 6 Η 2 0 ( 0 . 4 5莫耳，1 2 1 · 6克）於水 (170毫升）之溶液及鹽酸10Ν(35毫升）内。於60°C加熱20 分鐘後，反應介質經冷卻，以二氯甲烷（6 X 2 0 0毫升）萃取。有機層以鹽酸6 N ( 2 X 2 0 0毫升）、水（2 X 2 5 0毫升）及飽和以碳酸氫鈉之水（1 5 0毫升）洗滌。有機層以N a 2 S 0 4脫水。濾液經蒸發至乾獲得紅色固體，固體藉急速層析術於矽膠純化，使用己烷/乙酸乙酯（3 5 : 1 5 )作為洗提劑，獲得標題化合物，呈白色固體（3 6 · 3克，5 7 % )。熔點 8 3 - 8 5 °C 。 (M+H)+=213 1H-NMR (DMS0-d6) d ppm 8.3 (s); 3.9(s)。以類似方式經由使用 5 -溴-4 -硝基-噻吩-2 -羧酸乙酯（2 46 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 製備： 5 -氰基-4-硝基-噻吩-2-羧酸乙酯，熔點94-96 °C。 (M+H)+=227 ， 1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 8.3 (s); 4·4 U); 1.3(t)。 (實施例2 ) (4 -胺基-5 -氰基-噻吩-2 -羧酸甲酯（3 )之製備）於5 -氰基-4-硝基塞吩-2-紱酸甲醋（0.17莫耳，36克）及鐵粉（0 · 5 1莫耳，2 8 · 5克）於冰醋酸6 8毫升（1 · 2莫耳）之懸浮液回流3小時。粗產物經真空濃縮，以稀氨中和。水層以乙酸乙酯（3 X 2 5 0毫升）萃取，以N a 2 S 0 4脫水。濾液經蒸發至乾獲得黃色固體，固體以矽膠使用己烷/乙酸乙酯 (3 8 : 1 2 )作為洗提劑藉急速層析術純化，獲得標題化合物呈黃色固體（21 · 4克，69%)。熔點 1 8 7 - 1 8 9 °C。 (M + H)、183 1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 7.1 (s); 6·7 (s); 3.7(s)〇以類似方式經由使用實施例1所述之適當乙酯製備： 4-胺基-5-氰基-噻吩-2-羧酸乙酯（4)。熔點 1 3 8 - 1 4 0 °C。 (M+H)+=l97 ° 1H-NMR (DMSO-de) d ppm 7. 2 (s) ; 6. 6 (s) ; 4. 3 (q) ; 1 . 3 (t)。 (實施例3 ) (3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧酸甲酯（5 )之製備） 47 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 於5 -氰基-4-硝基-噻吩-2-羧酸甲酯（0.10莫耳，21.0 克）於1 2 0毫升鹽酸3 7 %之冰冷懸浮液内逐滴加入亞硝酸鈉 (0 · 1 2莫耳，8 · 3克）於1 2毫升水之溶液。經1 · 5小時後，冷懸浮液於5 °C逐滴添加至預先生成之氣化錫（0 . 8 0莫耳，1 5 1 . 7克）於1 2 0毫升鹽酸3 7 %之溶液。3小時後，冷卻懸浮液經過濾，濕固體以3 5 0毫升沸水處理3 0分鐘。熱混濁溶液經布過濾器過濾澄清。液體以冰冷卻及使用1 8 0 毫升氫氧化化鈉1 7 %逐滴處理。所得固體經過濾出及於5 0 °C真空脫水，獲得7. 3克標題化合物，呈黃色固體（3 7 %產率）。熔點 2 1 8 - 2 2 0 °C。 (M + H)+=l 98 1H-NMR (DMSO-de) d ppm 11. 7 (s) ; 7.6 (s) ; 5.2 (s) ; 3. 8 (s) ° 以類似方式經由使用實施例2所述適當乙醋製備： 3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸乙酯（6 )，熔點 2 3 1 - 2 3 3 °C。 (M + H)+ = 21 2 ° 1 H-NMR (DMSO-de) d ppm 11.8 (s) ; 7.5 (s) ; 5. 2 (s) ; 4. 3 U) ; 1· 3(t)。 (實施例4 ) (3-胺基-1H-噻吩并[3, 2 - c]咄唑-1,5 -二羧酸1-乙酯5 -甲酯（7 )之製備） 3 -胺基-1H -噻吩并[3, 2-c]吡唑-5-羧酸曱酯（35.5毫莫 48 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 耳，7.0克）及Ν，Ν’ -二異丙基乙基胺（0.21莫耳，36.5毫升）於7 1毫升四氫咬喃之冰冷懸浮液内逐滴加入3 · 5毫升氣曱酸乙酯（3 6 · 6毫莫耳）。1 . 5小時後，冷懸浮液經真空濃縮及以二氯甲烷稀釋。有機相以緩衝液pH 4、氫氧化鈉 1 N、鹽水洗滌及以N a 2 S 0 4脫水。濾液經蒸發至乾及以二氣曱烷濕磨獲得6克3 -胺基- 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑_ 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯（7 )。黃色固體，層析方法 ARt 3·7 (M + H) + = 270MH-NMR (DMSO-ch) d ppm 7.95 (寬 s 1 H) ; 4.5 1 (q 2H) ; 3.93 (s 3H) ; 1.47 (d 3H) ° 以類似方式經由使用實施例3所述乙酯製備： 3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-1，5 -二羧酸二乙酯（8 )， (Μ + Η)、284 1H-NMR (DMSO-de) d ppm 7.7 (s); 6. 3 (s) ; 4.4 (q) ; 4.2 (q ) ; 1 · 3 ( m )。 (實施例5 ) (3 - [ ( 4 -氟苯曱醯基）胺基]-1 H -噻吩并[3，2 - c ]吼唑- 1，5 -二羧酸二乙酯（9 )之製備） 4-氟苯甲醯氣（0.106莫耳，12.7毫升）於50毫升無水二氯曱烷之溶液逐滴添加至3 -胺基-噻吩并[3，2 _ c ]吼唑 -1，5 -二羧酸1-乙酯5 -曱酯（0.071莫耳，19.1克）於100 毫升無水二氣曱烷及1 1 4 · 0毫升咄啶（1 · 4 1 2莫耳）之冰冷懸浮液。所得溶液於5 °C攪拌5小時。粗產物經真空濃縮，以二氣甲烷稀釋。有機層以鹽酸1 N、氫氧化鈉1 N、鹽水洗 49 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 ί條及以N a 2 S Ο 4脫水。濾、液經蒸發至乾獲得黃色固體，藉急速層析術以矽膠使用己烷/乙酸乙酯（4 : 1 )作洗提劑純化獲得標題化合物，呈灰黃色固體（1 9 . 6克，6 8 %)。層析方法 A Rt 6.59 (Μ + ΗΓ = 392 以類似方式經由使3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯（7 )與適當醯基氣反應，製備下列化合物： (1 0 ) 3 - [ ( 3，5 -二氟苯甲醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑- 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -曱酯； (11) 3 - [(4 -第三丁基苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并[3, 2-c] 吼唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯； (12) 3-[(3-苯氧基苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并[3, 2-c] 口比唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯； (13) 3-[(4-三氟甲氧基苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并 [3，2 - c ]吼唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯； (1 4 ) 3 -[(噻吩_ 2 -基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑 -1，5-二羧酸1-乙酯5-甲酯； (1 5 ) 3 - [ 2 -呋喃曱醯基胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑 _1，5-二魏酸1-乙6旨5-甲醋； (1 6 ) 3 - [( 1，3 -苯并二氧戊環-5 -基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并 [3，2 - c ]咄唑- 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯； (1 7 ) 3 - { [ 5 -（嗎啉-4 -基曱基）- 2 -呋喃曱醯基]胺基} _ 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑- 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -曱酯； (18) 3-[(4-異丙氧基苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并[3,2-c] 50 312/發明說明書(補件)/92-10/92119 ] 20 1284645 吼σ坐- 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -曱酯； (1 9 ) 3 - [ ( 3 -氰基苯曱醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑 -1，5-二羧酸1-乙酯5-曱酯； (2 0 ) 3 - ( 3 -戊醯胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-1，5 -二羧酸1 -乙醋5 -甲酯； (2 1 ) 3 - ( 3 _環丙基羰基胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]毗唑 -1,5 -二羧酸1-乙酯5-曱酯； (2 2 ) 3 - ( 3 -環丁基羰基胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑 -1，5 -二羧酸1-乙酯5-甲酯。 (實施例6 ) (3 _ ( { [ ( 4 -氟节基）胺基]羰基}胺基）-1 Η _噻吩并[3，2 - c ] 口比唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯（2 3 )之製備） 4 -氟苄基異氰酸酯（0.130毫升，1.02毫莫耳）添加至3-胺基- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -曱酯 (8 5毫克，0 · 3 2毫莫耳）於無水二氣甲烷（5毫升）之溶液。於室溫攪拌9 6小時後，於減壓下去除溶劑，殘餘物於矽膠 (洗提劑二氣甲烷5 0 ;甲醇0 . 5 ; 6 °/◦水性氨0 · 1 )層析純化，獲得8 0毫克標題化合物，呈白色固體。層析方法 A，Rt 6.11，[Μ + ΗΓ 621。以類似方式經由使3 -胺基-1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ] 17比嗤-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯與適當異氰酸酯反應，製備下列化合物：（2 4 ) 3 - {[(苄基胺基）羰基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] 咄唑-1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -曱酯； (2 5 ) 3 - {[(丙基胺基）羰基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑 51 312/發明說明書(補件)/92-】0/92119】20 1284645 -1，5 -二羧酸1-乙酯5-曱酯； (2 6 ) 3 - {[(第三丁基胺基）羰基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] 口比σ坐-1，5 -二魏酸1 -乙酯5 -曱酯； (27) 3-[({[3-（二曱基胺基）丙基]胺基}羰基）胺基]-1Η - 噻吩并[3，2 - c ]咄唑- 1，5 -二羧酸1 -乙酯5 -甲酯。 (實施例7 ) (1-(4 -嗎啉-4-基苯甲醯基）-3-[(4-嗎啉-4-基苯甲醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸甲酯（2 8 )之製備）草醯氣（1 9 2 . 2毫升，0 · 2 2毫莫耳）添加至4 -嗎啉-4 -基苯甲酸（7.56克，36.5毫莫耳）於〇〇肘（210毫升）及 D M F ( 0 . 3 4毫升）之懸浮液。混合物回流6 . 5小時後，揮發物於減壓下小心去除（使用甲苯攝取殘餘物3次）。所得4 -嗎啉-4 -基苯曱醯氣鹽酸鹽分成數份（約0 . 5小時）添加至 3 -胺基- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸曱酯（2克，1 0 · 1 毫莫耳）於無水D C Μ ( 2 4 0毫升）之懸浮液及於攪拌下於5 °C 加入咄啶（1 2 . 2毫升，0 · 1 5 2毫莫耳）。所得懸浮液於室溫攪拌7 2小時。然後2 0 0毫升水性碳酸氫鈉添加至反應混合物，攪拌2 小時後，藉過濾分離固體殘餘物。有機層經分離，以鹽水洗滌，以硫酸鈉脫水及蒸發獲得褐色固體。組合二固體部分，使用乙喊及二氯曱烧之混合物（1 : 5 v / v )濕磨，過遽，於4 0 °C真空脫水獲得4. 4 5克淺黃色粉末。 LS-MS 層析方法 A，Rt 7.14，[ M + H ]+ 576° 以類似方式經由使3 -胺基-1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ]吼嗤- 5 - 52 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 羧酸曱酯與適當醯基氣反應，製備下列化合物： (29) 1-[4-(4 -甲基哌畊-1-基）苯曱醯基]-3 - {[4-(4_曱基哌畊-1 -基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸曱醋；方法 A，R t 3 . 6 9 ; (30) 1-[4-（4-乙基哌畊_1-基）苯甲醯基]-3-{[4-(4-乙基旅畊-1 -基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -嗔吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸曱醋； (31) 卜[3 -（4-曱基哌畊-1-基）苯甲醯基]-3-{[3-（4 -甲基哌畊-1 -基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸曱醋； (32) 1_{4-[(1-曱基哌啶-4-基）氧基]苯甲醯基}-3-（{4 一 [(1 一甲基旅咬一 4 一基）氧基]苯甲醯基}胺基）一 1 Η - °塞吩并 [3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸甲酯。 (實施例8 ) (3 - ( 4 -氟苯甲醯基胺基）- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑_ 5 -緣酸 (3 3 )之製備） 3 - [( 4 -氟苯甲醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑-1 , 5 -二羧酸1-乙酯5-甲酯（46.9毫莫耳，19克）於40毫升氫氧化鈉/水（1 : 1 )及1 0 0毫升乙醇之懸浮液於7 0 °C加熱3小時。然後粗產物經濃縮，所得懸浮液之p Η使用鹽酸3 7 °/◦及緩衝液ρ Η 4調整至ρ Η = 4。水層以乙酸乙酯（3 X 2 5 0毫升）萃取。收集有機層以鹽水洗滌，及以Na2S〇4脫水。濾液經蒸發至乾獲得1 3. 5克白色固體，其未經進一步純化即用於 53 3】2/發明說明書(補件)/92-】0/92】19120 1284645 次一步驟（產率9 4 % )。 (Μ + ΗΓ = 306 方法 A，Rt 2.00; 以類似方式，經由使用得自實施例5及6之3 -(醯基胺基）-1Η-σ塞吩并[3，2-c]吼唑-1,5 -二叛酸1-乙酯5 -曱酯而製備下列化合物： (34) 3- [(3，5- 二氟苯甲龜基）胺基]-1H-17塞吩并[3，唑- 5 -羧酸； (35) 3-[(4 -第三丁基苯甲醯基）胺基]-1H-噻吩并[3,2 - c] 吡唑-5 -羧酸； (3 6 ) 3 - [( 3 -苯氧基苯甲醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼 °坐-5 -鳆酸； (37) 3-[(4-三氟中氧基苯甲醯基）胺基]-1Η-嘍吩并 [3，2 - c ]吼嗤-5 -叛酸； (3 8 ) 3 -[(噻吩-2 -羰基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 - 羧酸； (39) 3-[2-口夫喃甲醯基胺基]-1Η_嚷吩并[3,2-〇]吼唑-5 - 羧酸； (4 0 ) 3 - [( 1，3 -苯并二氧戊環-5 -基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并 [3，2 - c ]吼σ坐- 5 -竣酸； (41) 3-{[5-(嗎啉-4-基曱基）-2-呋喃曱醯基]胺基}-1Η-嗔吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸； (4 2 ) 3 - [ ( 4 _異丙氧基苯曱醯基）胺基]- 1 Η -嘍吩并[3，2 - c ] 吼唑-5 -魏酸； (4 3 ) 3 - [( 3 -氰基苯曱醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑 54 312/發明說明書(補件)/92- ] 0/92 ] 19120 1284645 -5 -羧酸； (4 4 ) 3 -(戊醯基胺基）-1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑-5 -羧酸； (4 5 ) 3 -(環丙基羰基胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸； (4 6 ) 3 -(環丁基羰基胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 _ c ]呲唑-5 -羧酸； (4 7 ) 3 - ( { [ ( 4 -氟罕基）胺基]羰基}胺基）-1 Η -噻吩并 [3，2 - c ]吼σ坐- 5 -羧酸； (4 8 ) 3 - {[(亨基胺基）羰基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] nt唑 - 5 -羧酸； (49) 3-{[(丙基胺基）羰基]胺基}-1Η-噻吩并[3, 2-c]咄唑 - 5 -羧酸； (50) 3-{[(第三丁基胺基）幾基]胺基}-1Η-σ塞吩并[3，2-c] 吼唾-5 -叛酸； (5 1) 3-[({[3-(二甲基胺基）丙基]胺基}羰基）胺基]-1Η- σ塞吩并[3，2 - c ]吼σ坐-5 -緩酸。 (實施例9 ) (3 - [( 4 -嗎啉-4 -基苯甲醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]吼唑-5 -羧酸曱酯（5 2 )之製備） 1 -（4-嗎琳-4_基苯曱酿基）-3 - [(4-嗎琳- 4-基苯甲酿基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧酸甲酯（4 · 3克，7 · 5 毫莫耳）於甲醇（200毫升）及三乙基胺（20毫升）之混合物回流8小時。冷卻後，藉過濾分離沉澱，使用熱曱醇濕磨。於4 0 °C真空過濾及脫水後獲得2 . 4克標題化合物。 55 312/發明說明書(補件)/92-10/92119丨20 1284645 LC-MS，層析方法 A， Rt 4.52， [M+H]+387° 下列化合物係以類似方式製備： (5 3 ) 3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌畊-：1 -基）苯甲醯基]胺基丨- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸甲酯；方法 A，R t 6 · 3 7 ; [ Μ + Η Γ 4 0 0 ; (5 4 ) 3 - {[ 4 - ( 4 -乙基哌畊-1 -基）苯甲醯基]胺基卜1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼σ坐-5 -羰酸甲酯； (5 5 ) 3 - {[ 3 - ( 4 -曱基哌畊-：! -基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] °比唑-5 -羧酸甲酯；方法A，R t 3 · 2 0 ; (56) 3-({4 - [(1-甲基哌啶-4-基）氧基]苯甲醯基}胺基）- 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ]吼嗤-5 -叛酸甲酯；[M + Η ] + 4 1 5。 (實施例1 0 ) (3 - [ ( 4 -嗎啉_ 4 -基苯曱醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑- 5 -羧酸（5 7 )之製備） 3 - [( 4 -嗎啉-4 -基苯甲醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ] 咣唑-5 -羧酸甲酯（2 · 3克，6毫莫耳）及水性氫氧化鈉（1 2 · 5 毫升2 Ν溶液）於甲醇（5 0毫升）之混合物於5 0 °C加熱8小時。冷卻後，於減壓下蒸發去除甲醇，加水（5毫升），藉加入水性鹽酸將pH調整至7。藉過濾分離沉澱，以水及乙醚洗滌，於5 0 °C經真空脫水，獲得2. 2克標題化合物。 LC - MS，層析方法 A，Rt 2.06，[Μ + ΗΓ373。下列化合物係以類似方式製備： (5 8 ) 3 - { [ 4 -（ 4 -甲基哌畊_ ：1 -基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 _ 羧酸；*&A，Rt4.14;[M + H]+ 3 8 6; (5 9 ) 3 - {[ 4 - ( 4 -乙基哌畊- 1 -基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -噻吩 56 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸； (6 0 ) 3 - {[ 3 - ( 4 -甲基哌畊-1 -基）苯甲醯基]胺基卜1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸； (6 1 ) 3 _ ( { 4 - [ ( 1 -曱基哌啶_ 4 -基）氧基]苯甲醯基}胺基） -111-嚷吩并[3，2-(：]17比°坐-5-敌酸；[^{ + [1]401。 (實施例1 1 ) (3 - [( 4 -氟苯甲醯基）胺基]-Ν -異丙基- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] 口比唑-5 -羧醯胺（6 2 )之製備） 3 -（ 4 -氟-苯甲醯基胺基）- 1 Η _噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸曱酯（50.0亳克，0.164毫莫耳）及Ν, Ν’-二異丙基乙基胺 (1.476毫莫耳，0.253毫升）於0.3毫升無水二氯甲烷之冰冷懸浮液内逐滴加入0 . 0 7 8毫升氯甲酸乙酯（0 . 4 9 2毫莫耳）。2 0分鐘後，將0 · 0 8 3毫升異丙基胺（0 . 9 8 4毫莫耳）添加至所得溶液，讓反應混合物溫熱至室溫。3小時後，加入0.2毫升曱醇及0.1毫升Ν，Ν’ -二異丙基乙基胺，反應混合物於4 0 °C加熱4小時。粗產物經真空濃縮及以乙酸乙S旨稀釋。有機層以緩衝液ρ Η 4、氫氧化納1 N、鹽水洗條及以N a 2 S 0 4脫水。濾液經蒸發至乾獲得黃色固體，固體藉急速層析術以矽膠使用二氣甲烷/曱醇（4 8 : 2 )作為洗提劑純化獲得標題化合物，呈白色固體（2 0 . 5毫克，3 6 % )。 (M + H)、3 4 7 ^ 1H-NMR (DMSO-de) d p p m 1 2. 8 (s ) ; 11.3 (s); 8.3 (d); 8.1 (m) ; 7.6 (s) ; 4.0 (m); 4.2 (q); 1. 1 (m)° 以類似方式，經由使用適當3 -(醯基胺基）-1 H -噻吩并 57 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 [3，2 - c ]咄唑_ 5 -羧酸之適當胺製備下列化合物： (63) 4 -氟-N-{5-[(4-甲基哌畊-1-基）羰基]-1H-噻吩并 [3，2 - c ]吡唑-3 -爷醯胺；方法 A，R t 3 · 1 0 ; [ Μ + Η Γ 3 8 8 ; (64) Ν -窄基- 3- [(4-氟苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并[3,2-c] 口比 σ坐 _5_敌酿胺；方法 A，Rt 1·27; [M + H] 395; (65) Ν -苄基-3-[(3,5 -二氟苯甲醯基）胺基]-1Η-噻吩并 [3,2-c]吼唑-5-羧醯胺；方法 A，Rt 1·33; [Μ + ΗΓ413; (66) 3_[(4 -第三丁基苯甲醯基）胺基]-Ν -乙基-1Η-噻吩并 [3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；[Μ + Η Γ 3 7 1 ; (67) 3 - [(3-氰基苯曱醯基）胺基]- Ν-(2 -甲氧基乙基）-1Η-噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 1 · 0 2 ; [Μ + ΗΓ 3 7 0 ; (68) N -苄基- 3- [(3 -苯氧基苯曱醯基）胺基]-1H-噻吩并 [3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，R t 6 · 5 1 ; [ M + Η ]+ 4 6 9 ; (69) N-[(1R)-1-苯基乙基]-3 - {[4 -（三氟甲氧基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 6.27； [Μ + ΗΓ 4 7 5 ; (70) N-（2,6_二乙基苯基）-3 - {[4-(三氟甲氧基）苯曱醯基] 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 7.13； [Μ + ΗΓ 5 0 3 ; (71) N - [(1R)-1-苯基乙基]- 3-丨[4-（三氟曱氧基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 6· 88 ; [Μ + ΗΓ 4 8 7 ; (72) 1(3,5-二曱氧苯基）_3-{[4-（三氟甲氧基）苯甲醯基] 58 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 6.82； [ Μ + Η Γ 5 0 7 ; (73) N_(3_異丙氧基丙基）-3 - {[4-（三氟甲氧基）苯曱醯基] 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 5.85; [Μ + ΗΓ471 ； (74) N -（2-嗎琳-4-基-1_苯基乙基）-3-{[4-（三氟曱氧基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 6.00； [Μ + ΗΓ 5 6 0 ; (7 5 ) 3 - ( 2 -呋喃甲醯基胺基）-N -（ 2 -苯基乙基）-1 Η -噻吩并 [3，2-(3]吼0坐-5-魏酿胺；方法8，1?1;1.19;[^1 + }1]+381; (7 6 ) Ν - 丁基-（2 -呋喃甲醯基胺基）- 1 Η -嘍吩并[3，2 - c ]吼唑 - 5 - 羧醯胺；方法 Β，R t 1 · 0 9 ; [ Μ + Η ]+ 3 3 3 ; (7 7 ) Ν - [ 5 -(吡咯啶-卜基羰基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑 - 3 -基]-2 -呋喃醯胺；方法 B，R t 1 · 1 7 ; [ Μ + Η Γ 3 3 1 ; (7 8 ) Ν - ( 4 -曱基辛基）-3 -[(噻吩-2 -基羰基）胺基]- 1 Η _噻吩并[3，2 - c ]吡唑 - 5 -羧醯胺；方法 Β，R t 1 · 3 1 ; [ Μ + Η Γ 3 9 7 ; (79) Ν -丁基- 3- [(4-σ塞吩-2-基幾基）胺基]-1Η-σ塞吩并 [3，2 - c ] σ比口坐-5 -緩酉t 月安；方法 B，Rt 1.19； [ M + Η ]+ 3 4 9 ; (8 0 ) Ν , Ν -二乙基-3 - [ ( 4 -噻吩-2 -基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ] σ比口坐-5 -叛酉& 月安；方法 Β，Rt 1.14； [M + H]' 3 4 9 ； (8 1 ) 3 _[ ( 1，3 -苯并二氧戊環-5 -基羰基）胺基]-Ν - [ ( 1 R ) - 1 -苯基乙基]-111-17塞吩并[3，2-(：]17比°坐-5-叛醯胺；方法八，

Rt 5.32； [M+H]+435 ； (82) 3-丨[5-（嗎啉-4-基甲基）-2-呋喃甲醯基]胺基}-N- 59 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 [(1 R ) - ：l -苯基乙基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 4.01； [M+H]+480 ； (83) 3-[(4 -異丙氧基苯甲醯基）胺基]- N-[(1R) - 1-苯基乙基-1H-噻吩并[3,2-c]吼唑-5-羧醯胺；方法A，Rt 6.34; [Μ + ΗΓ44 9 ; (8 4 ) N - 丁基-3 -(戊醯基胺基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑- 5 -羧醯胺；方法 B，Rt 1.19; [Μ + ΗΓ323; (8 5 ) N - 丁基-3 -[(環丙基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ] 吼唑- 5 -羧醯胺；方法 Β，R t 1 . 0 5 ; [ Μ + Η Γ 3 0 7 ; (8 6 ) Ν - 丁基-3 -[(環丙基羰基）胺基]_ 1 Η -噻吩并[3，2 - c ] 口比 σ坐一 5 -竣 3¾ 胺；方法 B，R t 0 · 9 2 ; [ M + Η ]+ 3 2 3 ; (8 7 ) Ν -丙烯基-3 -丨[(罕基胺基）羰基]胺基} - 1 Η -噻吩并 [3，2-(3]口比〇圭一5-叛西&月安；方法 B，R t 1.09! [M + H] 356; (88) N-(2-苯基乙基）-3-{[(丙基胺基）獄基]胺基}-1Η_Ρ塞吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法 Β，R t 1 · 1 7 ; [ Μ + Η ] + 3 7 2 ; (89) 3-{[4-(4-乙基哌哜_1-基）苯甲醯基]胺基}-Ν -異丙基-1Η-噻吩并[3,2-c]咄唑-5-羧醯胺；[Μ + ΗΓ441; (90) N -乙基-3- {[4 -（4 -乙基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -嗔吩并[3，2 - c ]吼σ坐- 5 -緩酿胺；方法A，R t 2 · 5 8 ; [Μ + ΗΓ4 2 7 ; (9 1 ) N -辛基-3 - {[ 4 - ( 4 -曱基哌畊-；l -基）苯甲醯基]胺基} -1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 3 · 7 0 ; [Μ + ΗΓ 4 7 5 ; (9 2 ) N -異丙基-3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌畊- 1 -基）苯曱醯基]胺 60 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 2 · 9 Ο ; [Μ + ΗΓ4 2 7 ; (9 3 ) Ν -乙基-3 - {[ 4 -（ 4 -甲基哌畊- 1 -基）苯甲醯基]胺基卜 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 2 . 4 1 ; [Μ + ΗΓ413 ; (94) N -（3-氟窄基）-3-{[4-(4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基] 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 4 · 0 7 ; [Μ + ΗΓ 4 9 3 ; (95) N-(4-氟¥基）-3-{[4-（4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基] 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 _ c ]吼唑- 5 -羧醯胺；方法A，R t 4 . Ο 4 ; [Μ + ΗΓ 4 9 3 ; (9 6 ) Ν - ( 3 -氣爷基）-3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌畊- 1 _基）苯甲醯基] 胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]呲唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 4 . 2 6 ; [Μ + ΗΓ510 ; (97) N-（4-氣苄基）-3 - {[4-(4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基] 胺基} - 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ] 0比°坐-5 -叛酿胺；方法A ’ R t 4 · 2 7 ; [Μ + Η Γ 5 1 Ο ; (98) 3-{[4-(4-甲基哌畊-：!-基）苯甲醯基]胺基}-Ν -苯基 - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 4 · 2 3 ; [Μ + ΗΓ461 ; (99) 3-{[4 -（4-曱基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-N -（1-苯基乙基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 4.22； [Μ + ΗΓ 4 8 9 ; (100) 3-{[4-(4 -曱基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-Ν-(1 - 61 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 苯基丙基）-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 _羧醯胺； 4.43 ； [M + Η ]+ 5 0 3 ; (101) Ν_(2-氟罕基）-3-{[4-(4-曱基哌畊-1-基胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法 [Μ+Η]*493 ； (102) Ν-(2,4-二氟窄基）-3 - {[4-(4- 甲基哌畊-醯基]胺基丨-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺： Rt 4.36； [M + H] + 51 1 ； (103) N-(4-曱基氧亨基）-3-{[4 -（4-甲基哌畊-醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺； Rt 4· 06 ; [Μ + ΗΓ 5 0 5 ; (104) 3 - {[4-(4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺！ (三氟甲基）Ϋ基]-1H-噻吩并[3,2-c]咄唑-5-羧 A，Rt 4.88； [Μ + ΗΓ 5 4 3 ; (1 0 5 ) 3 - {[ 4 -（ 4 -曱基哌畊- 1 -基）苯甲醯基]胺I (三氟甲氧基）辛基]- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -法 A，Rt 4.98； [Μ + Η ] + 5 5 9 ; (106) Ν -（2 -氣罕基）-3 - {[4-（4-甲基哌畊-卜基胺基} - 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法1 [Μ + ΗΓ510 ; (107) Ν-(2,6-二乙基苯基）-3-{[4 -（4-甲基哌 4 甲醯基]胺基丨_ 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯月5 R t 4.72； [M + Η ]+ 517 ； (1 0 8 ) Ν - ( 2，6 -二曱基苯基）- 3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌 4 312/發明說明書(補件)/92-10/92119】20 方法A，R t )苯曱醯基] A，Rt 4. 02 ; 1-基）苯曱 ;方法A， 1-基）苯曱方法A， y } - N - [ 4 - 醯胺；方法 w } - N - [ 4 -羧醯胺；方 )苯甲醯基] l，R t 4 · 5 1 ; :-1 -基）苯 f ;方法A， …卜基）苯 62 1284645 甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A， Rt 4. 12 ; [Μ + ΗΓ 4 8 9 ; (1 Ο 9 ) N -（ 2氯-6 -甲基苯基）- 3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌畊-1 -基）苯曱醯基]胺基丨-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A， Rt 4. 30 ; [Μ + ΗΓ51 0 ; (110) 3-{[4-(4 -曱基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-N-[(1S)-1-苯基乙基]-1H-噻吩并[3,2-c]吼唑-5-羧醯胺；方法 A，Rt 4.25； [Μ + ΗΓ489; (111) 3-{[4-(4-曱基哌畊-1-基）苯曱醯基]胺基}-N- [(1 R ) - 1 -苯基乙基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 4.25； [Μ + ΗΓ489; (112) N -二苯甲基-3-{[4 -（4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基] 胺基} - 1 Η - 11塞吩并[3 , 2 - c ] °比°坐-5 -叛醯胺；方法A，R t 5 · 0 7 ; [M+H]+551 ； (113) N-芊基-N -甲基-3-{[4 -（4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 _羧醯胺；方法A，R t 3.99； [Μ + ΗΓ 4 8 9 ; (1 1 4 ) N - ( 2 -呋喃基甲基）- 3 - {[ 4 - ( 4 -甲基哌畊-1 -基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -喀吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，

Rt 3.60； [M+H]+465 ； (1 1 5 ) 3 - {[ 4 -（ 4 -甲基哌畊-：1 -基）苯甲醯基]胺基}_ N _ (噻吩-2 -基曱基）- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A， Rt 3. 61 ; [Μ + ΗΓ481 ; (116) N-2,3 - 二氫 -1H-夺-1-基 -3 - {[4 -（4 -甲基哌畊-1-基） 63 312/發明說明書(補件)/92-10/921】9120 1284645 苯曱醯基]胺基丨-1 Η -噻吩并[3，2 _ c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 4. 47 ; [Μ + ΗΓ501 ; (Π 7 ) 3 - {[ 4 - ( 4 -曱基哌畊- ：l -基）苯甲醯基]胺基} - N - 1，2，3，4 -四氫萘-1 -基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法 A， Rt 4.39； [M+H]+515; (118) 3-{[4 -（4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-N-[ (1 S ) - 1 -苯基丙基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 4.35； [Μ + ΗΓ503; (119) 3-{[4-（4-甲基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-N-[(1R) -苯基丙基]-1Η-σ塞吩并[3，2_c]°比唾-5-叛酿胺；方法 A ， Rt 4.35； [M+H]+503 ； (120) 3-{[4 -（4 -甲基哌畊-1-基）苯甲醯基]胺基}-N -（2 -嗎啉-4 -基-1 -苯基乙基）-1 Η -嘍吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，R t 3 · 6 4 ; [ Μ + Η ] + 5 7 4 ; (121) 3-{[4-（4~甲基°辰°井-1-基）苯甲醢基]胺基}-Ν-[ (1R)-1-苯基乙基]-1Η -噻吩并[3,2_c]咄唑-5-羧醯胺；方法 A，Rt 4.27； [Μ + ΗΓ489; (122) N-(2-氣-6 -甲基窄基）_3-{[4 -（4-甲基哌畊-1-基）苯曱醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺貳（三氟乙酸鹽）；方法 A，Rt 4.52; [Μ + ΗΓ523; (1 2 3 ) 3 - { [ 4 - ( 4 -甲基哌畊_ 1 -基）苯甲醯基]胺基丨-N - [ ( ：1 -曱基-1 Η -咄咯-2 -基）甲基]- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，R t 3 · 4 1 ; [ Μ + Η Γ 4 7 8 ; (1 2 4 ) Ν -（ 3 -呋喃基甲基）- 3 - {[ 4 -（ 4 -甲基哌畊- 1 -基）苯曱 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 64 1284645 醯基]胺基丨-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，

Rt 3. 23 ； [M+H]+465 ； (1 2 5 ) N -苄基- 3 - [ ( 4 -嗎啉- 4 -基苯甲醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3, 2-c]吼唑-5 - 羧醯胺；方法 A，R t 4 . 8 0 ； [ M + H ] + 4 6 2 ； (126) 3-[(4-嗎啉-4-基苯曱醯基）胺基]-N - [(1R) - 1-苯基乙基]- 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ]吼σ坐-5 -叛δ篮胺；方法A，R t 5.06； [Μ + ΗΓ 4 7 6 ; (127) 3-[(4 -嗎啉-4-基苯甲醯基）胺基]-N-[(1S)-1-苯基乙基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 5· 04 ; [Μ + ΗΓ4 7 6 ; (128) Ν_二苯曱基_3 - [(4-嗎琳_4-基苯甲酿基）胺基]-1Η_ 噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 6 · 0 3 ; [M+H]+538 ； (129) N-[(lS)-2-甲氧基-1-苯基乙基]-3 - [(4 -嗎啉-4-基苯甲醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 4.79； [Μ + ΗΓ 5 0 6 ; (130) N-[1-(4 -氯苯基）乙基]- 3-[(4-嗎啉_4-基苯甲醯基）胺基]-1 Η -嗔吩并[3，2 - c ]吼σ坐-5 -魏醢胺；方法A，R t 5 · 6 1 ; [Μ + ΗΓ51 1 ; (131) 3-[(4 -嗎啉-4-基苯曱醯基）胺基]-N-[(1R) - 1-苯基丙基]-1H -噻吩并[3,2-c]吡唑-5-羧醯胺；方法A，Rt5.38; [Μ + ΗΓ 4 8 9 ; (132) N-(3 -氣牟基）-3-[(4 -嗎琳_4-基苯曱酿基）胺基] - 1 Η - p塞吩并[3 , 2 - c ]吼σ圭-5 -魏醯胺；方法A，R t 5 · 0 4 ; 65 312/發明說明書(補件)/92-】0/92119120 1284645 [M+H]+480 ;

甲醯基）胺基]- [Μ + ΗΓ4 8 0 ; 醯胺；方法A，R t 5. 01 ;

[M+H]+496 ; )- 3 - [(4 -嗎啉-4-基苯甲醯基）胺基] 方法 A，R t 5 . 4 3 135) 3一[(4 —嗎啉—4-基苯甲醯基）胺基]-N- [(IS) - 2-嗎啉 -5 -叛酿胺；方 4-基-1-苯基乙基]—1Η一噻吩并[3, 2_c]吡唑法 A，Rt 4.42; [Μ + ΗΓ561; (136) 3一[(4 —嗎啉—4-基苯甲醢基）胺基]- N-[(1S) - 1-苯基 2比各定1 —基乙基]- 1Η-σ塞吩并[3,2 - 坐-5-緩醯胺；方法 A，Rt 3· 68 ; [m + h]+ 5 4 5 ; (1 3 7 ) 3 - {[ 4 -（ 4 -甲基哌畊—；[一基）苯甲醯基；]胺基卜Ν 一 [ (1 S ) — 2 -吼略11定-卜基乙基]1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，Rt 2.46; [Μ + ΗΓ558; (138) N-異丙基-3 一 [(3 一苯氧基苯甲醯基）胺基]_1H_噻吩并[3，2 - c ]吼嗤-5 -羧醯胺；方法 a，R t 5 · 8 4 ; [ M + Η ] + 4 2 1 ; (139) 基一 3 - [( 3 -苯氧基苯甲醯基）胺基]一丨H 一噻吩并 [3，2-c]吼唑-5-羧醯胺；方法 a, Rt 5·47; [Μ + Η]+407; (140) Ν-{5- [(4-甲基哌畊 _；[一基）羰基]—1Η·噻吩并[3, 2_c] 吡唑-3-基卜3-苯氧基节醯胺；方法a，Rt 4. 45 ;[μ + ΗΓ 4 6 2 ; (141) 4 -氟-Ν -（5 -丨[4 -（2-羥基乙基）哌畊-1-基]羰基} - 1 Η -嚷吩并[3，2 - c ]吡唑-3 -基）辛醯胺；方法a，R t 312/發明說明書(補件)/92·〗0/92119120 1284645 3· 00 ; [Μ + ΗΓ418 ; (142) 3-(4-甲基哌畊-卜基）- Ν-{5-[(4-甲基哌畊-1-基）羰基]_ 1 Η - σ塞吩并[3，2 - c ] 0比σ坐-3 -基} ¥酿胺；方法A ’ R t 2· 04 ; [Μ + ΗΓ 4 6 8 ; (1 4 3 ) Ν -（ 2 -嗎啉-4 -基-Ϋ基）-3 -丨[4 -(三氟甲氧基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]吡唑-5 -羧醯胺；方法A， Rt 6.11； [M+H]+546 ； (144) 4 -氟- N- {6 -甲基-5 - [(4-甲基哌畊-1-基）羰基]-1H-嚯吩并[3，2 - c ]吼唑-3 -基}芊醯胺；方法A，R t 3 · 5 0 ; [Μ + ΗΓ 4 0 2 ; (145) 3 - [(4 -氟苯甲醯基）胺基]- N_(4 -氟苄基）-6 -甲基 - 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 5 · 6 0 ; [Μ + ΗΓ 4 2 7 ; (1 4 6 ) N -（ 4 -氟亨基）- 6 -甲基-3 - [(噻吩并-2 -基羰基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 5 · 4 0 ; [Μ + ΗΓ415 ; (147)噻吩并N-{6 -曱基- 5- [(4-甲基哌畊-1-基）羰基]-1 Η -嚷吩并[3，2 - c ]吼唑-3 -基} σ塞吩-2 -羧醯胺；方法A，R t 2.69； [Μ + ΗΓ 3 0 9 ; (1 4 8 ) N - { 6 -曱基-5 - [ ( 4 -甲基哌畊- 1 -基）羰基]-1 Η -噻吩并[3，2-〇]吼〇坐-3-基}-3-苯氧基罕酿胺；方法八，1?14.76; [Μ + ΗΓ 4 6 0 ; (149) 1(4-氟¥基）-6_甲基_3-[(3-苯氧基苯曱醯基）胺基]-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧醯胺；方法A，R t 6 · 4 0 ; 67 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 [Μ + ΗΓ501。 (實施例1 2 ) (3 -胺基一6-甲基-1H -嘴吩并[3, 2 - c] 口比嗤一 5-叛酸甲酯（150) 之製備）步驟1 ( 4 , 5 -二溴-3 -曱基噻吩-2 -羧酸曱酯）溴（2 0毫升，3 8 9毫莫耳）逐滴添加至3 -甲基噻吩-2 -羧酸甲酯（14.0克，89. 6毫莫耳）於350毫升乙酸之溶液。於室溫攪拌1 6小時後，反應混合物逐滴添加至1 0 % ( w / v )亞硫酸氫鈉水溶液。藉過濾分離沉澱，以水性亞硫酸氫鈉及水洗滌，最終於7 0 °C真空脫水，獲得2 7. 8克標題化合物，未經進一步純化即用於隨後步驟。 4-NMR (DMS0_d6): ppm 2.55 (s， 3H)， 3.84 (s, 3H)。步驟2 (4-溴-5 -曱醯基-3-甲基噻吩-2-羧酸曱酯）異丙基氣化鎂（2M THF溶液，41毫升）於-40 °C於氮下逐滴添加至4, 5-二溴-3-曱基噻吩-2-羧酸曱酯（23.5克， 74.8毫莫耳）於四氫呋喃（250毫升）之溶液。於-4 0 °C攪拌3小時後，加入二甲基甲醯胺（1 7. 5毫升， 2 2 4毫莫耳），讓混合物達到室溫。然後反應混合物倒入乙酸乙酯及水性鹽酸内。有機層經分離，以硫酸鈉脫水及蒸發。所得粗產物使用正己烷濕磨獲得1 7. 6克標題化合物，未經進一步純化即用於次一步驟。 ^-NMR (DMSO-de) : ppm 2.54 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 10.01 (s, 1H) 〇 68 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 步驟3 ( 4 -溴- 5 -氰基- 3 -甲基噻吩- 2 -羧酸曱酯）羥基胺鹽酸鹽（5克，7 2毫莫耳）添加至4 -溴-5 -曱醯基 -3-曱基噻吩-2-羧酸甲酯（16·5克，63毫莫耳）於乙腈（175 毫升）及吼啶（3 0毫升）之溶液。所得溶液於室溫攪拌2小時，然後加入三氟乙酐（2 1 · 3毫升，1 5 3毫莫耳）。3小時後，反應混合物倒入乙酸乙酯及水性鹽酸内。有機層經分離，以鹽酸及水洗滌，以硫酸鈉脫水及蒸發。所得粗產物使用9 0毫升水/乙醇混合物（1 : 1 )濕磨，及真空脫水獲得 1 5克標題化合物，未經進一步純化即用於次一步驟。丨 H-NMR (DMSO - d〇: ppm 2.53 (s，3Η)，3.90 (s, 3Η)。步驟4 (5 -氰基-[4-(二苯基亞甲基）肼基]-3-甲基噻吩-2 -羧酸曱酯） 4 -溴-5 -氰基-3-甲基噻吩-2-羧酸曱酯（13克，50毫莫耳）及二苯甲酮腙（11.8克，60毫莫耳）於甲苯（390毫升）之溶液於氮下添加至碳酸鉋（2 6克，8 0毫莫耳），乙酸鈀 (365毫克，1.6毫莫耳）及1，1’ -貳（二苯基膦基）鐵茂於曱苯（1 2 0毫升）之懸浮液。所得混合物於1 1 0 °C攪拌1 6小時。於5 0 °C冷卻後，混合物經過濾，蒸發去除甲苯。所得粗產物使用乙酸乙酯濕磨及真空脫水，獲得1 3 . 2克標題化合物，未經進一步純化即用於次一步驟。 Ή-NMR (DMSO-de) : ppm 2.17 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 7.37-7.70 (m, 10H), 8.16 (s, 1H) ° 步驟5 (3 -胺基-6-曱基-1H-噻吩并[3, 2-c]吡唑-5-羧酸甲酯（1 5 0 )) 69 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 水性鹽酸（1 8 0毫升，3 7 %溶液），5 -氰基-4 - [ 2 -(二苯基亞曱基）肼基]-3 -甲基噻吩-2-羧酸甲酯（13克，34.6毫莫耳），甲醇（1 4 0毫升）及四氫呋喃（1 0 0毫升）之混合物於8 0 °C攪拌1 0小時。隨後於減壓下去除溶劑，所得懸浮液經過濾，殘餘物以二曱氧基乙烷洗滌。固體溶解於甲醇（1 0 0毫升），以9 6 %硫酸（2 · 5毫升）處理。所得溶液於7 5 °C攪拌1 6小時。冷卻後，溶液於減壓下蒸發成小量溶劑，使用乙醚/正己烷（1 : 1 )混合物萃取。水層以5 %水性氨稀釋及以二氯甲烷萃取。有機層以硫酸鈉脫水，蒸發，殘餘物藉層析術純化（洗提劑二氯曱烷，甲醇，5 %水性氨1 0 0 : 7 5 : 5 )獲得4 . 4克標題化合物。層析方法 A，2 . 7 7，[ M + Η ]+ 2 1 2。 ^-NMR (DMSO-de): ppm 2.52 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 5.35 (bs, 2H), 12. 0 (bs, 1H)。 (實施例1 3 ) (1 -醯基-3 -[(醯基）胺基]-6 -甲基- 1 Η -噻吩并[3，2 - c ]毗唑 - 5 -羧酸曱酯之製備）遵照實施例7所述程序，前一實施例製備之3 -胺基-6 -曱基-1H-噻吩并[3,2-c]°比唑-5-羧酸曱酯與適當醯基氯反應而製備下列1 -醯基-3 -[(醢基）胺基]-6 -甲基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑- 5 -羧酸酯： (151) 1-(4 -氟苯甲醯基）-3-[(4-氟苯甲醢基）胺基]- 6-甲基-1 Η - p塞吩并[3，2 - c ]吼σ坐-5 -叛酸甲酉旨； 70 312/發明說明書(補件)/92- ] 0/92119120 1284645 (1 5 2 ) 6 -曱基-1 -（噻吩-2 -基羰基）_ 3 - [(噻吩-2 -基羰基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]吡唑-5 -羧酸曱酯； (153) 6 -甲基-1_(3-苯氧基苯甲醯基）-3 - [(3 -苯氧基苯甲醯基）胺基]- 1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]咄唑-5 -羧酸曱酯。 (實施例1 4 ) (3-[(醢基）胺基]-6 -甲基-1Η -噻吩并[3,2 - c]吡唑-5-羧酸之製備）遵照實施例8所述程序，實施例1 3所得1 -醯基-3 -[(酿基）胺基]-6 -甲基-1Η -噻吩并[3,2-c]咄唑-5-羧酸酯轉成對應之3 -[(醯基）胺基]-6 -甲基-1 Η -噻吩并[3 , 2 - c ]吡唑 - 5 -羧酸； (154) 3-[(4-氟苯曱醯基）胺基]-6-甲基-1Η-噻吩并 [3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸； (155) 6-曱基-3-[(噻吩-2-基羰基）胺基]-1Η-噻吩并 [3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸； (156) 6-甲基- [3-(3-苯氧基苯甲醯基）胺基]- 1Η-噻吩并[3,2-c]咄唑-5-羧酸；方法 A，Rt 3.90; [Μ + ΗΓ394。 (實施例1 5 ) (3 -胺基-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 _羧酸丙酯（1 5 7 )之製備）步驟1 ( 4，5 -二溴-2 -呋喃甲酸曱酯）於6 9 · 9 1克（0 · 2 5 9莫耳）4 , 5 -二溴_ 2 -呋喃甲酸於7 0 0毫升曱醇之溶液内於室溫小心加入42.4毫升（0.777莫耳）9 8 °/。硫酸。混合物回流7小時。所得溶液於減壓下濃縮成為漿液，且以0. 5升Μ Τ Β Ε稀釋。此冰冷溶液内，於激烈 71 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 攪拌下緩慢加入Ο . 5升3 Ο %檸檬酸三鈉及Ο . 2 5升2 N N a Ο Η。水層（ρΗ = 6)經分離，再度以3 0 0毫升ΜΤΒΕ萃取。若干不溶性固體（殘餘起始物料）藉過濾而由有機萃取物中移出。澄清萃取物以Na2S〇4脫水，然後濃縮至乾，獲得淺褐色固體，固體使用3 0毫升熱Μ T B E及6 0毫升正庚烷結晶純化。混合物冷卻至0 / + 4 °C，老化1小時，然後過濾獲得5 7. 1 3克乳酪色產物。由母液，藉層析術（洗提劑：乙酸乙酯/環己烷 5 : 9 5 )可回收額外量1 2 . 6 5克產物。如此，分離之產物總量為6 9 . 7 8克。產率=9 4 . 8 %。丨H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.84 (s, 3H)， 7.65 (s， 1H)。

熔點=5 6 - 5 7 °C 步驟2 ( 4 -溴-5 -甲醯基- 2 -呋喃甲酸曱酯）於6 9 · 6 5克（0 · 2 4 6莫耳）4，5 -二溴-2 -呋喃曱酸甲酯於 7 0 0毫升無水T H F之溶液於氬下冷卻至-4 5 °C 。此溶液内，於-4 3 / - 4 8 °C緩慢加入1 4 1 . 5毫升（0 · 2 8 2莫耳）異丙基氯化鎂2 Μ (亞利希公司（A 1 d r i c h ) ) 4 5分鐘，混合物又攪拌1小時。所得懸浮液於-4 5 °C經歷3 0分鐘時間，使用5 6 . 8毫升 (0 . 7 3 7莫耳）無水D M F (亞利希，水小於0 . 0 0 5 % )處理，於同溫攪拌1 5分鐘。反應混合物緩慢溫熱至+ 2 0 °C ，攪拌1 小時，然後緩慢倒入1 . 2升鹽酸1 Μ及1 . 0升Μ T B E之混合物内。水層經分離及以1 . 0升及0 . 5升Μ Τ Β Ε萃取兩次。組合有機萃取物經濃縮至乾，獲得5 7 . 8 1克粗產物，粗產物由1 2 0毫升熱曱苯及2 3 0毫升熱庚烷結晶。所得漿液冷卻 72 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 至+ 4 °C ，老化2小時及過濾，獲得4 6 . 5 5克嗶嘰色固體。產率=8 1 . 3 %。 Ή-NMR (DMSO-de): ppm 3.90 (s, 3H), 7.78 (s, 1H), 9.76 (s, 1H)。

熔點= 8 3 - 8 4 °C 步驟3 ( 4 -溴- 5 -氰基- 2 -呋喃甲酸曱酯）於4 6 · 5 5克（0 · 2 0莫耳）4 -溴-5 -甲醯基- 2 -呋喃甲酸曱酯於465毫升乙腈之溶液内加入15. 28克（0.22莫耳）羥基胺鹽酸鹽。此懸浮液内於2 0 - 2 5 °C經歷3 5分鐘時間逐滴加入 9 6 · 6毫升（1 . 2莫耳）咄啶。攪拌9 0分鐘後，於室溫以4 5 分鐘時間逐滴加入淨三氟乙酐（6 7 . 7 2毫升，0 . 4 8莫耳）。攪拌2. 5小時後，反應質塊倒入鹽酸1 Μ ( 0 . 7 5升）及乙酸乙酯（0 · 7 5升）之混合物内；水層再度以0 . 4 5升乙酸乙酯萃取。有機萃取物以0 . 4 5升2 Μ鹽酸洗滌，水層以0 . 3升乙酸乙酯回萃取。組合有機萃取物於減壓下濃縮至乾。粗產物溶解於1 0 0毫升乙醇9 5 ° ，且於4 0 °C - 4 5 °C於有效攪拌下使用1 5 0毫升水逐滴處理。所得懸浮液冷卻至0 / + 4 °C 1 小時，然後過濾，脫水後獲得4 4. 2克產物呈淺乳酪色固體。產率=9 6 . 2 %。 4-NMR (DMS〇-d6): ppm 3.90 (s， 3H)， 7.88 (s， 1H)。

熔點= 75_78°C 步驟4 ( 5 -氰基-4 - [ 2 -（二苯基亞甲基）肼基]-2 -呋喃甲酸曱酯）乙酸鈀（2.098 克；9.347 毫莫耳），DPPF(10.36 克，18.69 73 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 毫莫耳）及碳酸鉋（85.27克，0.262毫莫耳）於氬下饋入無水反應瓶内。預先生成之4 - 臭-5 -氰基-2 -咬喃曱酸甲西旨 (43.00克，0.187莫耳）及二苯甲酮腙（44. 02克，0.224 莫耳）於1 . 2升甲苯之無水溶液經套管而移入反應瓶内。所得懸浮液於氬下於1 0 0 - 1 0 4 °C激烈攪拌4 5小時。反應混合物冷卻至約7 0 °C ，加入6 5克狄卡來（D i c a 1 i t e )及過渡；板以熱曱苯（4 0 0毫升）洗2次。濾液經真空濃縮成小量容積，於+ 4 °C維持1 8小時。固體藉過濾收集，以6 0毫升甲苯洗滌獲得5 3 . 5 2克黃色產物。產率=8 2 . 8 °/〇。 Ή-NMR (DMSO-de) : ppm 3.84 (s, 3H), 7.09 (s, 1H), 7.34-7.68 (m, 10H), 9.60 (s, 1H) ° 熔點=2 0 6 - 2 0 8 °C分解步驟5 ( 3 -胺基-1 H -呋喃并[3，2 - c ]吼唑-5 _羧酸丙酯 (157)) 於56.01克（0.1624莫耳）5-氰基_4 - [2-(二苯基亞甲基）肼基]-2 -呋喃甲酸曱酯於1 . 1 2升正丙醇之溶液内緩慢加入1 1 5毫升（2 · 1莫耳）9 8 °/。硫酸。所得混合物回流2小時，獲得澄清褐色溶液。反應質塊於減壓下濃縮成小量容積，冷卻至0 / + 4 °C ，及以1 . 1升2 5 %檸檬酸三鈉二水合物溶液於有效攪拌下以9 0分鐘時間緩慢稀釋。混合物（p Η = 4 )以 600毫升環己烧萃取3次。拋棄有機萃取物，水層冷卻至 0 / + 4 °C ，小心加入1升1 0 %水性碳酸氫鈉，及最終加入8 2 毫升N -曱基嗎啉調整至p Η 6 - 7。所得懸浮液於0 / + 2 °C老 74 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 化小時，然後過濾，以水徹底洗滌，於脫水後獲得2 1 . 3 5 克產物，呈淺褐色固體。產率=6 2 . 8 %。層析方法A R T = 3 . 6分鐘[Μ + Η ] + = 2 1 0 Ή-NMR ( DMSO-de) : ppm 0.97 (t, 3H), 1.67-1.76 (m, 2H), 4.24 ( t, 2H), 5.13 (s, 2H), 7.31 (s, 1H), 11.34 (bs, 1H) ° 熔點=1 4 7 - 1 4 9 °C分解 (實施例1 6 ) (1 -醯基-3 -(醯基胺基）-1 Η -呋喃并[3 , 2 - c ]吼唑-5 -羧酸丙酯之製備）類似實施例7所述程序，經由使用適當醯基氯處理 3 -胺基-1 Η -呋喃并[3 , 2 - c ]咄唑- 5 -羧酸丙酯，製備下列1 -醯基- 3 -(醯基胺基）-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸丙酯： (158) 1-(4 -嗎啉-4 -基苯甲醯基）_3-[(4-嗎啉_4 -基苯甲醯基）胺基]-1 Η -呋喃并[3 , 2 - c ]咄唑-5 -羧酸丙酯； (159) 卜[4-(4-甲基哌畊-1-基）苯曱醯基]-3-{[4 -（4-甲基哌畊-1 -基）苯甲醯基]胺基丨-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸丙酯； (160) 1-(4 -氟苯曱醯基）-3-[(4_氟苯甲醯基）胺基]-1Η-口夫喃并[3，2 - c ] p比σ坐-5 _敌酸丙S旨。 (實施例1 7 ) (3 -(醯基胺基）-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸之製備）前一實施例製備之1 -醯基-3 -(醯基胺基）_ 1 Η -呋喃并 75 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 [3，2 - c ]吡唑-5 -羧酸丙酯遵照實施例8所述程序水解，獲得對應3 -(醯基胺基）-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧酸： (1 6 1 ) 3 - [( 4 -嗎啉_ 4 -基苯甲醯基）胺基]- 1 Η -呋喃并 [3 , 2 - c ]吡唑-5 -羧酸；[Μ + Η ]+ 3 5 7 ; (1 6 2 ) 3 - { [ 4 -（ 4 -甲基哌畊-：1 -基）苯甲醯基]胺基} - 1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸；[Μ + Η ]+ 3 7 0 ; (1 6 3 ) 3 - [( 4 -氟苯曱醯基）胺基]- 1 Η -呋喃并[3，2 - c ]吼唑 -5- 羧酸；方法 A，Rt 2.18； [M + H] + 370° (實施例1 8 ) (3 -(醯基胺基）_ 1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺之製備）遵照實施例1 1所述程序，實施例1 7之3 -(醯基胺基）-1 Η -呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧酸與適當胺反應獲得下列4匕合物： (164) 3-[(4 -嗎啉-4-基苯甲醯基）胺基]- N-[l_苯基丙基]-1 Η _ ϋ夫喃并[3，2 - c ]吼°坐-5 -竣酿胺；方法A，R t 5 · 4 0 ; [Μ + ΗΓ 4 7 4 ; (165) 3-{[4-（4-甲基σ底σ井-1-基）苯甲醯基]胺基卜N - [1-苯基丙基]-1 Η - p夫喃并[3，2 - c ] 17比嗤-5 -叛S&胺；方法A ’ Rt 3.48； [Μ + ΗΓ4 8 7 ; (166) 3-[(4-氟苯甲醯基）胺基]- N-[l-苯基丙基]-1H-呋喃并[3，2 - c ]咄唑-5 -羧醯胺；方法 A，R t 5 · 4 8 ; [ Μ + Η ] + 4 0 7 ; (1 6 7 ) 4 -氟-Ν - { 5 - [ ( 4 -曱基哌畊-：! -基）羰基]- 1 Η -呋喃并 [3，2 - c ]吼唑-3 -基}辛醯胺；方法 A，R t 2 · 1 9 ; [ Μ + Η ]+ 3 7 2 ; (168) 3-[(4-氟苯甲酷基）胺基]-Ν-[2-嗎琳_4-基-1_苯基 76 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 乙基]- 1 Η -呋喃并[3，2 - c ]吼唑- 5 -羧醯胺；方法A，R t 4 · 4 3 ; [Μ + ΗΓ 3 7 2 ° (實施例1 9 ) (3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吡唑-5 -羧酸甲酯（5 )之製備）步驟1 ( 4 , 5 -二溴-2 -噻吩羧酸甲酯之製備）於2 3 · 7 5克（8 3 · 0 6毫莫耳）4，5 -二溴-2 -噻吩羧酸於2 3 5 毫升曱醇之懸浮液内，於室溫緩慢加入1 5 . 5毫升（2 8 4莫耳）9 8 %硫酸。混合物回流2 3小時。所得溶液於減壓下濃縮成稠厚漿液，且以2 4 0毫升二氯甲烷稀釋。此以冰冷卻之溶液内，於激烈攪拌下緩慢加入1 9 0毫升1 7 %氫氧化鈉。水層經分離，再度以1 2 0毫升二氯甲烷萃取。組合有機萃取物以硫酸鈉脫水，然後濃縮至乾獲得2 4. 0 2克產物，呈灰白色固體。產率=9 6 . 4 °/〇。 l-NMR (DMSO-ch): ppm 3.81 (s, 3Η)，7.79 (s，1Η)。

熔點=7 9 - 8 0 °C 步驟2 ( 4 -溴- 5 -曱醯基噻吩-2 -羧酸曱酯之製備）於2 3 . 4 5克（7 8 · 1 7毫莫耳）4，5 -二溴-2 -噻吩羧酸甲酯於 1 9 0毫升無水T H F之溶液於氬下冷卻至-3 5 / - 4 0 °C。於此溶液内於-3 5 / - 4 0 °C以1小時時間逐滴加入4 3毫升（8 6毫莫耳）異丙基氣化鎂2 Μ (亞利希公司），混合物又攪拌1小時。所得淺褐色溶液於-3 5 / - 4 0 °C經歷3 0分鐘時間，以1 7 . 1 4 克（1 8 · 0毫升；2 3 4 · 5莫耳）無水D M F逐滴處理，於此溫度攪拌1 5分鐘。然後反應混合物緩慢溫熱至+ 2 0 °C ，於此溫 77 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 度又攪拌1小時。反應質塊緩慢倒入2 3 0毫升鹽酸1 Μ與 2 3 0毫升Μ Τ Β Ε之混合物内，伴以激烈攪拌；水層經分離，再度以2 0 0毫升Μ Τ Β Ε萃取。組合有機萃取物以硫酸鈉脫水及濃縮至乾，獲得2 0 . 1 4克粗產物。粗產物使用8 0毫升正己烷以攪拌處理3小時。純產物（1 6 . 5克）藉抽取分離，呈灰白色固體。產率=8 4 . 5 %。 ^-NMR (DMSO-de) ： ppm 3.86 (s, 3H), 7.98 (s, 1 H), 9.90 (s, 1H)。

熔點=9 2 - 9 3 °C 步驟3 ( 4 -溴-5 -氰基噻吩-2 -羧酸甲酯之製備）於1 6 · 4 8克（6 6 · 1 7毫莫耳）4 -溴-5 -曱醯基噻吩-2 -羧酸甲酯於165毫升乙腈之溶液内加入5.06克（72. 78毫莫耳）羥基胺鹽酸鹽。此懸浮液内，於2 0 - 2 5 °C以2 0分鐘時間逐滴加入3 2 · 0 5毫升（3 9 7毫莫耳）咄啶。攪拌9 0分鐘後，淨三氟乙酐（22. 5毫升，158.8毫莫耳）於室溫以30分鐘時間逐滴添加。攪拌2. 5小時後，反應物倒入鹽酸0 · 5 Μ ( 2 0 0 毫升）於乙酸乙酯（1 5 0毫升）之混合物内；水層再度以1 5 0 毫升乙酸乙酯萃取。合併有機萃取物於減壓下濃縮，再度以1 2 0毫升鹽酸1 Μ洗滌。有機層經真空濃縮獲得固體粗產物。粗產物攝取於7 5毫升乙醇，於有效攪拌下使用7 5毫升水處理。所得懸浮液冷卻至0 / + 4 °C ，然後過濾出獲得 1 5 . 4克產物呈淺乳酪色固體。產率=9 4 . 8 %。 78 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645

I - NMR (DMSO-ch): ppm 3.88 (s，3H)，8.02 (s，1H)。熔點=1 0 2 - 1 0 3 °C 步驟4 (5 -氰基-4- [2-(二苯基亞甲基）肼基]ϋ塞吩-2-叛酸曱酯之製備）燒瓶内饋進乙酸鈀（375毫克；1.67毫莫耳），DPPF(1.85 克；3. 34毫莫耳）及碳酸.铯（27. 2克；83. 5毫莫耳），燒瓶經抽真空，及以氬氣回填3次，然後於攪拌下經套管加入 7 0毫升曱苯。1 5分鐘後預先生成之4 _溴-5 _氰基噻吩-2 -羧酸甲酯（1 3 · 7 0克，5 5 . 6 7毫莫耳）與二苯甲酮腙（1 3 · 1 1 克，66.8毫莫耳）於470毫升甲苯之無水溶液經套管移入燒瓶内，所得懸浮液於氬下於1 0 0 °C攪拌1 6小時。反應混合物冷卻至6 0 °C，過濾，板以熱甲苯洗2次。濾液經真空濃縮獲得黃褐色固體。粗產物於室溫使用7 0毫升乙酸乙酯攪拌1小時，然後固體經過濾出，獲得1 6 . 7 8克標題化合物。產率=8 3 . 4 %。 !H-NMR (DMSO-de) : ppm 3.82 (s, 3H), 7. 3 0 - 7. 6 5 ( m, 1 1H), 10.02 (s, 1H)。熔點=1 7 8 _ 1 8 0 °C 。步驟5 ( 3 -胺基-1 Η -噻吩并[3，2 - c ]吼唑-5 -羧酸甲酯（5 )之製備）於18.41克（50·94毫莫耳）5 -氰基-4 - [2 -（二苯基亞甲基）肼基]-噻吩-2-羧酸甲酯於312毫升THF及110毫升甲醇之溶液内，緩慢加入1 1 0毫升3 7 %鹽酸。所得混合物回流1 4 79 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 小時，獲得澄清黃色溶夜。產物相 U 1部分呈自由態酸存在，約占總產物之 3 0% 〇反應物經真空濃縮去除有機溶劑 :所得懸浮液於 + 4°C 維持1 8小時，後過濾獲得1 0.10 克結晶產物含曱酯與 1 由態酸之混合物〇此固體溶解於 1 50 毫升甲醇，以 3. 5 毫濃硫酸處理及回流24小時。 ,合物濃縮成小量容積獲得懸浮液 .，懸浮液以 1 30 毫升稀釋，於敖烈隱拌下以三，乙基} 按（1 4毫升〕丨小心處理至達到 pH = Ί-Ϊ 混合物於+ 4 °C 維持1 8小丨時，缺後' 經: 過濾·，板以水洗滌獲得 7 . 6 3克細 i*產物，呈黃色固體< ) 產率=76. 0%，層析方法A ，RT = :2· 8分鐘。物理化學資料同實施例 3 之方法製備之化合物〇 (生物試驗例 1 ) 根據前文藥理學乙節所述方法篩檢，下列化合物顯示具有奥羅拉 -2 抑，制作用之 IC5 〇值低於 100 nM ： 52 ； 57 ； 66 ;79 ；82 ；9 '1 ； 9 2; 93; 94 ； 95 ； 96 ； 9 7 ； 99 ； 100；；1 0 1 102； 1 04 106 1 07 108； 109 110 ；1 11 112；；1 1 3 11 4 ； 1 15 ; 116 117 118； 119 1 20 ；1 2 1 122；；123 124； 1 25 ; 126 1 27 128； 129 1 30 ；1 3 1 132 ；；133 134； 1 35 136 137 146 ; 161 1 62 ；1 63 164；；165 〇 (生物試驗例： 2) 根據前文藥理學乙即所述方法篩檢，下列化合物顯示具有c d k 2 /週期素A抑制作用之I C 5 ◦值低於5 Ο Ο η Μ : 80 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120 1284645 57; 63; 65; 79; 84; 85; 86; 87; 93; 114； 119； 121； 124 ； 145 ； 146 ； 161 ； 164； 165； 167 ° (生物試驗例3 ) 根據前文藥理學乙節所述方法篩檢，下列化合物顯示具有c d c 7抑制作用之I C 5 〇值低於1 Ο Ο Ο η Μ : 52; 57; 92; 93; 95; 101； 102； 114； 115； 121； 123 ； 124； 137； 161； 162； 165° (生物試驗例4 ) 根據前文藥理學乙節所述方法篩檢，下列化合物顯示具有P A Κ 4抑制作用之I C 5。值低於5 0 0 η Μ _· 52; 91; 93; 95; 96; 99; 100； 101； 102； 111； 114； 115； 119； 121 ； 125； 129 ； 131； 132； 133； 137 ； 163； 164° 81 312/發明說明書(補件)/92-10/92119120

Claims

2006 2 9 SEP 申請專利範圍：猶)正本1替换本 1 · 一種式（I )二環吡唑化合物

Ri 其中 X係選自硫或氧； R!係選自-COOR’或-CONHR’ ； R 係選自-COR’或-CONHR’ ；其中R ’係選自氫或選擇性地進一步經取代之直鏈或分支 Cl_C6 烧基、C2-C6 婦基、C2-C6 快基、C6-Cl。芳基、C3-C9 雜環基或芳基-Ci_C6烧基’其中該雜原子為- NH、-0或-S; R2係選自氫或甲基；及其醫藥上可接受之鹽。 2. 如申請專利範圍第1項之式（I )化合物，其中R i為 -CONHR、 3. 如申請專利範圍第1項之式（I )化合物，其或其醫藥上可接受之鹽係用作為藥物。 4. 一種申請專利範圍第1項之式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製造藥物，該藥物係用於治療患有因蛋白質激酶活性改變（失調）所引起及/或關聯之疾病病人。 5. —種治療患有由蛋白質激酶活性變更（失調）所引起及/或相關疾病之哺乳類之醫藥組成物，包含有效量之式（I ) 82 326V總檔\92\92119120\92119120(替換)-1 1284645 雙環吡唑化合物： R

Ri 其中 X係選自硫或氧； L係選自-COOR’或-CONHR’ ； R 係選自-COR’或-CONHR’ ；其中R’係選自氫或選擇性地進一步經取代之直鏈或分支 Ci-Ce 烧基、C2-C6 烯基、C2-C6 炔基、C6_Ci。芳基、C3-C9 雜環基或芳基-CrCe烷基，其中該雜原子為- NH、-0或-S; R2係選自氫或甲基；及其醫藥上可接受之鹽。 6. 如申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其中該由蛋白質激酶活性變更所引起及/或關聯之疾病係選自癌症、細胞增生病症、阿茲海默氏病、病毒感染、自體免疫病及神經退化病症。 7. 如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其中該癌症係選自癌瘤、鱗狀細胞癌、骨髓細胞系及淋巴細胞系之造血系統腫瘤、間葉來源之腫瘤、中樞神經系統及周邊經系統腫瘤、黑素瘤、精細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、色素沉著性乾皮病、角化黃瘤、甲狀腺濾泡癌及卡波西氏肉瘤組成的組群。 8. 如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其中該細胞增 83 326V總檔\92\92119120\92119120(替換)-1 1284645 生病症係選自良性攝護腺肥大、家族性腺瘤病、息肉、神經纖維瘤病、乾癬、動脈粥狀硬化相關之血管平滑肌增生、肺纖維硬化、關節炎、腎絲球體腎炎以及術後血管狹窄及血管再狹窄組成的組群。 9.如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其提供腫瘤血管生成及腫瘤轉移抑制作用，以及治療器官移植排斥及宿主對移植片病。 1 0 .如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其提供放射性治療誘生之禿髮或化學治療誘生之禿髮之治療或預防。 1 1 .如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其係組合至少一細胞抑制劑或細胞毒劑以為有需要之哺乳類進一步接受放射性治療或化學療程所用。 1 2 .如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其中該有需要之哺乳類係為人類。 1 3. —種抑制蛋白質激酶活性之醫藥組成物，包含有效量之申請專利範圍第1項定義之式（I )化合物，其係與該蛋白質激酶接觸。 1 4 · 一種醫藥組成物，包含治療有效量之申請專利範圍第1項定義之式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，以及至少一種醫藥上可接受之賦形劑、載劑及/或稀釋劑。 1 5 ·如申請專利範圍第1 4項之醫藥組成物，進一步包含一或多種化學治療劑。 1 6 . —種產品或套件組，包含申請專利範圍第1項定義之式（I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，以及一或多種化學 84 326V總檔\92\92119120\92119120(替換)-1 1284645 治療劑呈組合製劑供同時、分開或循序用於抗癌治療。 1 7. —種組合化學存庫，包含複數種式（I )化合物 R

I NH 其中 X係選自硫或氧； L 係選自-COOR’或-CONHR’ ； R 係選自-COR’或-CONHR’ ；其中R ’係選自氫或選擇性地進一步經取代之直鏈或分支 Cl - C6 烧基、C2- C6 婦基、C2-C6 快基、C6"~Cl。芳基、C3-C9 雜環基或芳基- Ci-C6烧基’其中該雜原子為-NH、-0或-S; R2係選自氫或曱基；及其醫藥上可接受之鹽。 1 8. —種製備式（I )二環吡唑化合物或其醫藥上可接受之鹽之方法：

其中X、R及R!及R2定義如申請專利範圍第1項，該方法包含： i )經由適當反應轉化式（XXI I )化合物 85 326\|§檔\92\92119120\92119120(替換)-1 (XXII) 1284645

其中Ri、R2及X定義如前，以及Hal為鹵原子，成為對應氰基衍生物；若上式（XXI I )之R!亦為CHO殘基，則選擇性分離所需異構物； i i )如此所得式（X X I I I )化合物

其中R!、R2、X及Hal定義如前，與式（XXIV)腙衍生物反應：RaRbC = N-NH2，其中Ra及Rb為直鏈或分支Ci-Ce烷基、芳基、芳基-U-C 6烷基，或與其鍵聯之碳原子共同形成選擇性稠和之雜環或C 5 - C 7環烷基，該反應係於惰性氣氛下於把催化劑、配位子及驗存在下進行； i i i )使用酸於適當溶劑處理式（X X V )化合物

N HN CN

其中R!、R2、X、Ra及Rb定義如前，因而獲得式（I )化合物，其中R為氫原子以及Ri、R2及X定義如前，以及若所需，將如此所得式（I )化合物轉成另一種式（I )化合物，其中R 非為氫原子；及/或若有所需將式（I)化合物轉成另一種式 86 326V總檔\92\92119120\92119120(替換)-1 1284645 (i)化合物或轉成其醫藥上可接受之鹽。 1 9.如申請專利範圍第1 8項之方法，其中，將所得式（I ) 化合物，其中R為氫原子，轉成另一式（I)化合物，其中R 非為氫原子，及/或將式（I )化合物轉成另一式（I )化合物，其藉下述步驟進行： k)申請專利範圍第1 8項之步驟i i i )所得之式（I )化合物與式（X V )異氰酸酯聚苯乙烯樹脂反應

因而獲得式（XVI)聚苯乙烯甲基脲

Ri I 其中X、Ri及R2定義如申請專利範圍第18項； 1 )將所得式（XVI )化合物轉成式（XVI I )化合物

87 326V總檔 \92\92119120\92119120(替換 >1 1284645 MAK » 0 £UUf 串請糊範圍替換頁外年$月（日修(更)正本其中R非為氫原子；以及 m )於鹼性條件下裂解式（XV I I )化合物，去除樹脂，而獲得所需式（I )化合物；以及若有所需 η)將式（I)化合物轉成另一種式（I)化合物，或轉成其醫藥上可接受之鹽。 20. —種式（XXIII)或（XXV)化合物：

其中1^、1?2、又、1^1、1^及1?1)定義如申請專利範圍第18 項0

88 326\總檔\92\92119120\92119120(替換)-2 1284645 :厂_———j 20Q6 之 9 1年月日修(更)正替換頁替换頁拾壹、圖式· 326纖檔\92\92119120\92119120(替換)-1