WO2006049258A1 - 発酵茶から抽出された高分子ポリフェノール、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤、並びに飲食物 - Google Patents

発酵茶から抽出された高分子ポリフェノール、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤、並びに飲食物 Download PDF

Info

Publication number
WO2006049258A1
WO2006049258A1 PCT/JP2005/020315 JP2005020315W WO2006049258A1 WO 2006049258 A1 WO2006049258 A1 WO 2006049258A1 JP 2005020315 W JP2005020315 W JP 2005020315W WO 2006049258 A1 WO2006049258 A1 WO 2006049258A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
fraction
extracted
butanol
tea
therapeutic agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2005/020315
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Osamu Numata
Takashi Fujiwara
Kazuaki Hosoda
Tetsuo Ozawa
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Tsukuba NUC
Original Assignee
University of Tsukuba NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Tsukuba NUC filed Critical University of Tsukuba NUC
Priority to US11/667,082 priority Critical patent/US20090047368A1/en
Priority to JP2006542450A priority patent/JP5439644B2/ja
Priority to GB0708115A priority patent/GB2435166B/en
Publication of WO2006049258A1 publication Critical patent/WO2006049258A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • High molecular weight polyphenols extracted from fermented tea mitochondrial disease treatment, prevention and treatment of diabetes, and food and drink
  • the present invention relates to a high-molecular polyphenol having a mitochondrial activity that is extracted from fermented tea, a therapeutic agent for mitochondrial disease and a therapeutic agent for diabetes, and food and drink containing the high-molecular polyphenol.
  • Polyphenol is a general term for compounds having a plurality of phenolic hydroxyl groups in the same molecule, and is widely present in plants.
  • polyphenols have attracted attention because it has been revealed that they have various effects such as anti-acidic and antibacterial effects, and now we have discovered various types of polyphenols. Research on the pharmacological effects of these drugs is advancing.
  • flavonoids include catechins, anthocyanins, flavones, flavonols, isoflavones, and flavans.
  • Catechins are flavans with multiple phenolic hydroxyl groups in the C -C -C skeleton.
  • catechins include catechin, force techin gallate, epicatechin, epicatechin gallate, epiga catechin, epigallocatechin gallate, gallocatechin, gallocatechin gallate, and the like.
  • the chemical structural formula of catechin is shown in “Chemical Formula 1”.
  • Catechins (catechins and force techin derivatives) have A, B, and C rings in the basic skeleton as shown in the chemical structural formula of “Chemical Formula 1”.
  • gallocatechin is obtained by replacing the hydrogen (H) at the 5′-position of the B ring in the chemical structural formula of “I ⁇ 1” with a hydroxyl group (OH group).
  • anthocyanins are anthocyanins composed of C—C—C skeleton (flavylium).
  • Compound is a glycoside having a non-sugar component and various carbohydrate components bound thereto, such as shea-zine glycoside and delphi-zine glycoside. It is a water-soluble plant pigment mainly found in flowers, fruits and leaves, and is known as an antioxidant.
  • Polyphenols are highly polymerized catechins, anthocyanins, and the like.
  • Non-Patent Document 1 describes the chemical structure of high-molecular polyphenol extracted from black tea.
  • the chemical structure of high-molecular polyphenol published in Non-Patent Document 1 is shown in “Chemical 2”.
  • R is H (hydrogen) or galloyl
  • R and R are H (hydrogen) or OH (hydroxyl group).
  • Patent Document 1 relates to a method for extracting polyphenols, and there is a description of the anti-acidic action of polyphenols in the column of "Prior art”.
  • Patent Document 2 relates to a skin aging preventive action of catechins and procyanidins. The anti-skin aging effect in this document is based on the inhibition of the activity of MMPs (matrix meta-oral protease).
  • Patent Document 3 relates to a melanin production inhibitor for black tea polyphenols. The literature describes that the inhibitor is excellent in whitening effect.
  • Patent Document 1 JP-A-7-199645
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 2003-252745
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 2001-158726
  • Non-patent literature 1 Tetsuo Ozawa, Mari Kataoka, Keiko Morikawa, and Osamu Negishi, Elucidation of the Partial Structure of Polymeric Thearubigins from Black Tea by Shimical Degration ", Biosci. Biotech. Biochem., 60 (12), 2023- 2027, 1996
  • polyphenols are diverse, and there are many polyphenols that have not yet been separated * extracted.
  • catechins, anthocyanins and other substances are highly polymerized.
  • Many of the polymer polyphenols that have been bound are unseparated and unextracted, and their pharmacological action has been elucidated.
  • the main object of the present invention is to separate and extract a novel polymer polyphenol and to provide a novel pharmacological action of the polymer polyphenol.
  • the polymer polyphenol extracted from fermented tea has a mitochondrial activity, a blood glucose increase inhibitory effect, a body weight increase inhibitory effect and the like. Therefore, in the present invention, a high-molecular-weight polyphenol from which fermented tea power is also extracted, a procyanine structure in which catechins and / or gallic acid esters thereof are polymerized in a partial structure, and catechins and / or their Of gallic acid esters
  • a high-molecular-weight polyphenol having a number average molecular weight of 9000 to 18,000 including a structure in which B rings are bonded to each other is provided.
  • the polymer polyphenol according to the present invention for example, extracts a water-eluting component in fermented tea leaves with ethyl acetate, extracts a non-eluting component of ethyl acetate that was not extracted with the ethyl acetate extraction with butanol, and extracts the butanol with
  • the butanol-eluting component extracted in step 1 can be obtained by purifying it with column chromatography using a hydrous acetone solvent.
  • water-eluting components in fermented tea leaves are extracted with ethyl acetate, and non-eluting components of ethyl acetate that have not been extracted with the ethyl acetate extraction are extracted with butanol.
  • the non-eluting component of butanol can be acidified and then extracted again with butanol, and the butanol-eluting component extracted by the second butanol extraction can be obtained by purifying it with column chromatography using aqueous acetone solvent. it can.
  • the polymer polyphenol of the present invention has a catechin structure (a structure having A, B, and C rings as basic skeletons shown in Chemical Formula 1) in a partial structure, and a gallic acid residue in the catechin structure.
  • a catechin structure a structure having A, B, and C rings as basic skeletons shown in Chemical Formula 1
  • Structure in which the group is ester-bonded, procyanine structure structure in which C ring in catechin structure and A ring in other catechin structure are bonded
  • ring A in catechin structure and ring B in other catechin structure It is thought to include a structure in which the B ring in the catechin structure and the B ring in another catechin structure are combined, a quinone structure, etc. (including the case where there are overlapping parts in the partial structure).
  • the polymer polyphenol according to the present invention has a mitochondrial activity, and therefore, by using the composition containing this polymer polyphenol as a pharmaceutical product, Can improve mitochondrial diseases.
  • mitochondria are the main organelles that play a major role in ATP synthesis and are responsible for the production of energy, which is the basis of cell activity.
  • the activity can stabilize the cell membrane. Therefore, by using the polymer polyphenol according to the present invention, it is possible to obtain an anti-aging action, a skin beautifying action, an energy metabolism promoting action, an anti-obesity action, a motor anemia preventing action, and the like.
  • the composition containing the high molecular weight polyphenol according to the present invention can be applied as a drug to a preventive agent for motor anemia and the like, and can also be applied as a cosmetic.
  • the food and drink may contain the polymer polyphenol according to the present invention.
  • the composition containing the polymeric polyphenol according to the present invention is used for male (or male) infertility. It can also be applied to improve the fertilization rate in treatment and artificial insemination of human 'cow.
  • the use of the polymer polyphenol according to the present invention can enhance the expectorant action, ciliary movement of the oviduct, and the like. it can. Therefore, the present invention can be applied to a composition expectorant containing the polymer polyphenol according to the present invention, an infertility treatment agent used for women (or females), and the like.
  • the composition containing the polymeric polyphenol according to the present invention can be applied as a drug or a cosmetic.
  • the food and drink can contain the polymer polyphenol according to the present invention.
  • the polymer polyphenol according to the present invention also has a blood glucose elevation inhibitory action, a body weight elevation inhibitory action and the like, it can also be applied as a diabetes preventive, therapeutic agent or anti-diabetic health food.
  • “Fermented tea” refers to tea in general including a stage of fermentation during the manufacturing process, such as oolong tea and black tea.
  • Water refers to water (HO) as a substance name. That is, in the present invention, boiling water, hot water, Water vapor and the like are also included in “water”. Therefore, the “water-eluting component” in the present invention includes a component that elutes when fermented tea leaves are extracted with boiling water, hot water, steam, or the like.
  • Mitochondrial disease is a general term for various congenital diseases in which mitochondrial function is reduced due to genetic variation in mitochondrial DNA. , Myoclonic epilepsy with dark red fiber myopathy (MERRF), mitochondrial myopathy, encephalopathy, lactoacidosis, seizures (MELAS), Lieber ocular-europathy.
  • Intracellular mitochondria can be activated by the polymer polyphenol according to the present invention.
  • FIG. 1 is a graph showing an elution curve of a neutral fraction extracted from oolong tea butanol.
  • FIG. 2 is a graph showing an elution curve of an acidic fraction extracted from oolong tea.
  • FIG. 3 is a graph showing an elution curve of a neutral fraction extracted from black tea butanol.
  • FIG. 4 is a graph showing an elution curve of an acidic fraction extracted from black tea butanol.
  • FIG. 5 is a graph showing changes in body weight when the extracted effective fraction is administered to a diabetic model mouse.
  • FIG. 6 is a graph showing changes in blood glucose level when the extracted effective fraction is administered to a diabetic model mouse.
  • FIG. 7 is a graph showing changes in blood glucose level when high-molecular polyphenol and low-molecular polyphenol are administered to mice, respectively.
  • Example 1 the fermented tea extract component was fractionated. For each of oolong tea and black tea, a butanol-extracted neutral fraction and a butanol-extracted acidic fraction were extracted, and then further subdivided using column chromatography.
  • butanol-eluting components were extracted from the aqueous phase left during extraction of the ethyl acetate-eluting component to obtain "Ouron tea butanol-extracted neutral fraction".
  • the aqueous phase remaining after fractionation of the ethyl acetate phase was concentrated under reduced pressure using the procedure for extracting the ethyl acetate-eluted component, and the remaining ethyl acetate was removed.
  • 200 ml of water-saturated n-butanol was added to 500 ml of the aqueous phase solution, and the mixture was stirred and allowed to stand as described above, and then the butanol phase was separated.
  • n-butanol-eluting component was extracted again to obtain "Oolong tea butanol extracted acidic fraction".
  • hydrochloric acid was added to the aqueous phase remaining after the butanol phase was separated to adjust the pH to about 3.
  • the aqueous phase solution was added to 500 ml, 200 ml of water-saturated n-butanol was added, stirred and allowed to stand, and then the butanol phase was separated.
  • Toyopearl HW-40F was packed in a column having a diameter of 2.4 cm and a length of 35 cm. Also
  • Fig. 1 shows the elution curve (elution pattern) of the neutral fraction extracted from oolong tea butanol
  • Fig. 2 shows the elution curve of the acidic fraction extracted from oolong tea
  • Fig. 3 shows the neutral fraction extracted from black tea butanol.
  • the elution curves are shown in Fig. 4, respectively.
  • the horizontal axis indicates the test tube number (in order of recovery) from which the eluate was recovered.
  • the vertical axis shows the absorbance at 350 nm.
  • Fraction described in Figs. 1 to 4 represents a fraction obtained by performing fractional fractionation based on the elution curve.
  • the neutral fraction extracted from oolong tea butanol in Fig. 1 and the acidic fraction extracted from oolong tea in Fig. 2 are 1 to 15 fractions, and the fraction from 1 to 16 in the neutral fraction extracted from black tea butanol in Fig. 3.
  • the acidic fraction extracted from black tea butanol in FIG. 4 it was subdivided into 1 to L 1 fractions, respectively.
  • Example 2 the mitochondrial activation action of each fermented tea extract sample fractionated in Example 1 was examined.
  • Mitochondrial activity was detected by measuring whether or not the mitochondrial membrane potential was increased when a fermented tea extract sample was given to the protozoan Tetrahymena, using Rhodamine-123.
  • Rhodamine-123 is a reagent that binds to the inner mitochondrial membrane and emits strong fluorescence due to a potential difference generated by pumping hydrogen ions into the intermembrane region.
  • SIGMA a product made by SIGMA was used. The experimental procedure is as follows.
  • a fermented tea extract sample was given to the protozoan Tetrahymena.
  • Each fermented tea extract sample fractionated in Example 1 was dissolved in 5% DMSO solution to prepare lmgZml fermented tea extract sample solution.
  • a 5% DMSO solution was used as a control.
  • Tetrahymena 2.7 ml (l to 2 X 10 4 cellsZml) to each fermented tea extract sample solution 0.3 ml.
  • the final concentration of the fermented tea extract sample solution was 0.1 mgZml
  • Rhodamine-123 staining was performed.
  • NKC solution and Rhodamine-123 (final concentration 10 ⁇ g / ml) were added to make 3 ml, and stained by shaking for 45 minutes. Then, Tetrahymena was centrifuged and the supernatant was discarded, and then the procedure for collecting NKC was repeated 7 times to wash off Rhodamine-123. Subsequently, mitochondrial membrane potential measurement was performed. First! 3 ⁇ 40 (1 & 111 ⁇ -123 stained each tetrahymena was shaken for 4 hours, and then the number of cells in each sample was aligned.
  • Rhodamine-123 stained tetrahymena was added to each 100 ⁇ l Zwell in a 96-well plate. Two 96-well plates were prepared, one that was allowed to stand for 1 hour at room temperature and the other that was allowed to stand for 1 hour on ice.
  • the 96-well plate was set in a microplate reader (excitation: 485 nm, absorption: 535 nm), and the fluorescence was measured.
  • the degree of increase in mitochondrial membrane potential was calculated.
  • mitochondrial activity remains low, regardless of whether the sample has mitochondrial activity or not, because Tetrahymena's motility is reduced. Therefore, the difference in fluorescence intensity between those left at room temperature for 1 hour and those left on ice for 1 hour was calculated, and the value was used as a value indicating the degree of increase in mitochondrial membrane potential.
  • it was converted to a relative value when the difference in control fluorescence was taken as 1. The value indicates the degree of increase in mitochondrial membrane potential.
  • Tables 1 to 4 show the results (relative values indicating the degree of increase in mitochondrial membrane potential).
  • Table 1 shows the neutral fraction of oolong tea butanol
  • Table 2 shows the acidic fraction of oolong tea butanol
  • Table 3 shows the neutral fraction of black tea butanol
  • Table 4 shows the acidic fraction of black tea butanol.
  • the degree of increase in mitochondrial membrane potential is shown.
  • Yield is the amount recovered when 0.30 to 0.35 g of the fermented tea extract sample was applied to the column, and how much polymer is in each fraction. This is a reference value indicating whether or not polyphenol is contained.
  • the fraction eluted in the latter half of the column chromatography can be presumed to be a high molecular polymer in which catechins and the like are complicatedly polymerized. Therefore, it can be considered that the mitochondrial membrane potential was increased by a high molecular weight polymer in which catechins and the like were complicatedly polymerized.
  • Example 3 fraction 15 of oolong tea butanol extracted acidic fraction fractionated in Example 1 (hereinafter referred to as “oolong tea active fraction” in this Example and Example 4 below), and Similarly, fraction 15 of black butanol extracted neutral fraction fractionated in Example 1 (hereinafter referred to as “tea active fraction” in this example and Example 4 below) was subjected to tannase degradation. It was.
  • oolong tea active fraction fraction 15 of oolong tea butanol extracted acidic fraction fractionated in Example 1
  • tea active fraction fraction 15 of black butanol extracted neutral fraction fractionated in Example 1 (hereinafter referred to as “tannase” in this example and Example 4 below) was subjected to tannase degradation. It was.
  • tannase is an enzyme that cleaves gallic acid residues such as catechins and tannins.
  • the "oolong tea active fraction” was selected from fractions 15 of the oolong tea butanol extracted acidic fraction of the fractions having mitochondrial activity in Example 2 and used in this experiment. It does not mean that the fraction having mitochondrial activity is limited to that only (the same applies hereinafter). The same applies to “tea active fraction”.
  • Tannase degradation was carried out by the following procedure. First, dissolve 1.000 mg of oolong tea active fraction and 0.86 mg of black tea active fraction with 0.2 ml of water, add 0.3 ml of tannase aqueous solution, and perform the enzyme reaction at 30 ° C for 3 hours. Made progress. As the tannase aqueous solution, tannase (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was prepared to 17.3 U with water and used. [0060] Next, paper chromatography was performed on the enzyme reaction solution (including the decomposition product of the enzyme reaction). The following two solvents were used respectively.
  • the present inventors separately performed the same experiment on the oolong tea butanol extracted neutral fraction and the black tea butanol extracted acidic fraction. As a result, similar results were obtained.
  • the mitochondrial activating component contained in the neutral fraction extracted from oolong tea butanol and the acidic fraction extracted from black tea butanol also contains epicatechin or epigallocatechin or their gallate esters in a higher-order chemical structure as described above. It includes the same ⁇ ⁇ structure.
  • Example 4 the oolong tea active fraction of the oolong tea butanol extracted acidic fraction fractionated in Example 1 and the black tea activity of the black butanol extracted neutral fraction also fractionated in Example 1 The fraction was subjected to hydrochloric acid-butanol decomposition. The procedure is as follows.
  • a mixed reagent of 1.1 ml of hydrochloric acid and 8.9 ml of n-butanol was prepared.
  • 0.5 mg each of the oolong tea active fraction and the black tea active fraction are put in each small reaction container, and the mixture is mixed.
  • Combined reagent 1. Prepare Oml, attach screw cap, and heat in autoclave at 105 ° C for 50 minutes.
  • reaction product was subjected to paper chromatography.
  • the following two solvents were used as developing solvents.
  • the present inventors separately conducted the same experiment on the oolong tea butanol-extracted neutral fraction and the black tea butanol-extracted acidic fraction. As a result, similar results were obtained. This result indicates that the mitochondrial activating component contained in the neutral fraction extracted from oolong tea butanol and the acidic fraction extracted from black tea butanol also contains a procyanidin structure in the higher-order chemical structure as described above. .
  • Example 3 Summarizing the results of Example 3 and Example 4, the component exhibiting mitochondrial activity in Example 2 is a high-molecular polyphenol having a higher order chemical structure, and its partial structure It is presumed that epicatechin and epicallocatechin and their gallic acid esters contain polymerized procyan-azine structures.
  • Example 5 the average molecular weight of the effective fraction extracted from fermented tea was measured.
  • the sample includes fraction 15 of the oolong tea butanol extracted neutral fraction fractionated in Example 1, and fraction 1 of the oolong tea butanol extracted acidic fraction fractionated in Example 1 as well. 4.Fraction 15 of the neutral fraction extracted from black tea butanol, which was also fractionated in Example 1, and fraction 11 of the acidic fraction extracted from black tea butanol, which was also fractionated in Example 1, were used. .
  • the average molecular weight was measured by size exclusion chromatography (SEC) method.
  • An LC-10A system (manufactured by Shimadzu Corporation) was used as a high-speed chromatograph.
  • TSK-GEL a-3000 column size 7.8 mml. D. X 30 cm, manufactured by Tosoh Corporation
  • the column temperature was 40 ° C.
  • Dimethylformamide containing 10 mM lithium chloride (LiCl) was used as the developing solvent.
  • the flow rate was set at 0.6 mlZmin.
  • the UV detector included in the LC-10A system was used as the detector. The detection wavelength was set at 275 nm.
  • a molecular weight standard compound was poured into a column, and a calibration curve was created by plotting the elution time on the horizontal axis and the UV detection value on the vertical axis.
  • TSK standard polystyrene manufactured by Tosohichi Corporation
  • each sample was poured into the column, and the elution time was plotted on the horizontal axis and the UV detection value on the vertical axis, and the average molecular weight was calculated based on the calibration curve.
  • the average molecular weight both the number average molecular weight and the weight average molecular weight were calculated.
  • Example 6 the structural analysis of the effective fraction extracted from fermented tea was performed using a pyrolysis gas chromatograph mass spectrum (Py-GC-MS) analyzer.
  • Py-GC-MS pyrolysis gas chromatograph mass spectrum
  • the decomposition products were introduced into a gas chromatograph (GC) and fractionated, and the compounds separated with Sarakuko and mass spectrometer (MS) were separated.
  • GC gas chromatograph
  • MS Sarakuko and mass spectrometer
  • Example 5 In the sample, as in Example 5, the fraction 15 extracted from the oolong tea butanol extracted fraction in Example 1 was extracted, and the fraction extracted from the oolong tea butanol extracted in Example 1 was the acidic fraction. Fraction 14, fraction 15 of the black butanol-extracted neutral fraction extracted in the same manner as in Example 1, and fraction 15 of the tea butanol-extracted acidic fraction also fractionated in Example 1. 4 types were used.
  • the temperature in the furnace and the gas chromatograph introduction part was set to 250 ° C.
  • wrap the sample in a Ferromagnetic coupe foil (thickness 50 ⁇ m) add 5 L of 10% tetramethyl hydroxide ammonia methanol solution to the sample, place it in the furnace, heat at 315 ° C for 4 seconds.
  • the decomposition product was sent to a gas chromatograph.
  • a 10% tetramethyl hydroxide ammonium methanol solution was used in order to obtain volatile heat stability at the stage of mass spectrometry by methylating the compound in the sample.
  • TS S-2000 manufactured by Nippon Analysis Co., Ltd.
  • HP-IMS column size: 0.25 mm X 30 m, coated layer thickness: 0.25 ⁇ m, manufactured by Agilent Technologies
  • the pyrolysis product and the carrier gas were allowed to flow into the column, the substances present in the pyrolysis product were separated, and data on the retention time was acquired.
  • mass spectrometry was performed on each separated substance, and knowledge on chemical structure was obtained.
  • the temperature in the column was first maintained at 50 ° C for 1 minute, then linearly increased to 300 ° C at 5 ° C / min, and then maintained at 300 ° C for 14 minutes.
  • Helium was used as the carrier gas. Its flow rate is 1. Om Set to lZmin.
  • mass spectrometry was performed under the conditions of an ion source temperature of 250 ° C and an ionization voltage of 70 eV.
  • the compound was determined to be catechins or gallate esters thereof. It was suggested that there is a polymerization site between C2, C5, C6, sites in catechin chemical structures, between C4 and C8 between catechins, between C6 and C6, or between C6 'and C6'.
  • Example 3 Summarizing the results of Example 3 to Example 6, the components that exhibited mitochondrial activity in Example 2 were procyanates in which catechins and Z or gallate esters thereof were polymerized in the partial structure.
  • -Number average molecular weight 9,000-18,000 weight average molecular weight 14, 000-25, 000
  • B rings of catechins and Z or gallate esters thereof are bonded to each other Presumed to be a high molecular weight polyphenol.
  • Example 7 an effective fraction extracted from fermented tea was administered to a diabetic model mouse, and it was examined whether or not the component had an effect of suppressing an increase in blood glucose level.
  • Example 2 the effective fraction in Example 2 was dissolved in PBS to obtain administration solutions of 2.7 mgZml and 0.9 mgZml.
  • a type II diabetes model mouse (BSK. Cg-+ Lepr ⁇ db> / + Lepr ⁇ db> Zjcl, male 6 weeks old, purchased from CLEA Japan)
  • 0.1 ml ml day (0.27 mg / day) Or 0.09 mg / day) daily.
  • 0.1 ml of PBS each Administered intraperitoneally daily.
  • FIG. 5 is a graph showing changes in body weight when an effective fraction extracted from fermented tea is administered
  • FIG. 6 is a graph showing changes in blood glucose level when an effective fraction extracted from fermented tea is administered.
  • the horizontal axis in FIG. 5 and FIG. 6 represents the number of weeks of administration start force.
  • the vertical axis in FIG. 5 represents the body weight (g) of the mouse
  • the vertical axis in FIG. 6 represents the blood glucose level (mg / dl).
  • the number of individuals administered in each graph is 5 or 6.
  • Example 8 the high-molecular-weight polyphenol and the low-molecular-weight polyphenol according to the present invention were each administered to mice, and the effect of suppressing the increase in blood glucose level was compared.
  • Example 7 The experimental procedure is almost the same as in Example 7.
  • B6 mice C57BL, purchased from Nippon Tarera Co., Ltd.
  • the PBS solution of the effective fraction in Example 2 was intraperitoneally administered daily at 0.25 mg / day
  • the PBS solution of epicatechin was 0.27 mg / day. Per day.
  • blood was collected from the tail vein on the first day of administration and 15 days after the start of administration, and the blood glucose level was measured.
  • FIG. 7 is a graph showing changes in blood glucose level when high-molecular polyphenol and low-molecular polyphenol are administered to mice, respectively.
  • Horizontal axis in the figure Represents the number of days of administration starting power, and the vertical axis represents the change rate (%) of blood glucose level when the blood glucose level on the first day of administration is 100.
  • the blood glucose level in the high-molecular polyphenol-administered group decreased by about 16%, whereas the blood glucose level hardly changed in the low-molecular-weight polyphenol-administered group.
  • composition containing the polymeric polyphenol according to the present invention can be applied as a pharmaceutical or a cosmetic.
  • the food and drink can contain the polymer polyol according to the present invention.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

　【課題】高分子ポリフェノールの新規な薬理作用を提供すること。 　【解決手段】発酵茶（ウーロン茶、紅茶など）から抽出された高分子ポリフェノールであって、部分構造中に、カテキン類及び／又はその没食子酸エステル類が重合したプロシアニジン構造、並びにカテキン類及び／又はその没食子酸エステル類のＢ環同士が結合した構造を含む数平均分子量９，０００～１８，０００の高分子ポリフェノールを提供する。この高分子ポリフェノールは、ミトコンドリア活性化作用、血糖上昇抑制作用、体重上昇抑制作用などを有する。従って、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤として用いることができる。また、健康飲食物などに含有させて用いてもよい。なお、選択図は、この高分子ポリフェノールを、糖尿病モデルマウスに毎日各量投与した場合における血糖値の変化を示す。 　

Description

明 細 書
発酵茶から抽出された高分子ポリフエノール、ミトコンドリア病治療剤、糖 尿病予防 ·治療剤、並びに飲食物
技術分野
[0001] 本発明は、発酵茶から抽出された、ミトコンドリア活性ィ匕作用を有する高分子ポリフ ェノール、その高分子ポリフエノールを含有するミトコンドリア病治療剤及び糖尿病治 療剤、並びに飲食物に関する。
背景技術
[0002] ポリフエノールは、同一分子内にフエノール性水酸基を複数持つ化合物の総称で あり、植物中に広く存在する。近年、ポリフ ノール類には抗酸ィ匕作用、抗菌作用な ど多彩な作用があることが明らかになったことから注目され、現在、様々な種類のポリ フエノールの発見.抽出や、そのポリフ ノールの薬理作用などに関する研究が進ん でいる。
[0003] ポリフエノールは、フラボノイド系、クマリン系、クルクミン系、リグナン系、フエ二ルカ ルボン酸系などに大きく分類される。そのうち、フラボノイド系としては、カテキン類、ァ ントシァ-ジン類、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、フラバン類などがある
[0004] カテキン類は、 C -C -C骨格にフエノール性水酸基を複数持つフラバン 3—
6 3 6
オール骨格の物質群であり、特に、茶の葉に多量に含まれる。カテキン類としては、 例えば、カテキン、力テキンガレート、ェピカテキン、ェピカテキンガレート、ェピガ口 カテキン、ェピガロカテキンガレート、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、などがある 。代表例として、カテキンの化学構造式を「化 1」に示す。カテキン類 (カテキン及び力 テキン誘導体）は、「化 1」の化学構造式に示す、 A環、 B環、 C環を基本骨格に持つ 。例えば、ガロカテキンは、「ィ匕 1」の化学構造式中の B環の 5'位の水素 (H)を水酸 基 (OH基）に置換したものである。
Figure imgf000004_0001
[0005] 一方、アントシァニン類は、 C— C— C骨格からなるアントシァ-ジン（フラビリウム
6 3 6
化合物)を非糖質成分とし、これに種々の糖質成分が結合した配糖体で、シァ-ジン 配糖体、デルフィ-ジン配糖体などがある。主として、花 ·果実 '葉などに多在する水 溶性植物色素であり、抗酸化物質として知られる。
[0006] また、ポリフエノールには、カテキン類、アントシァニン類などが高度に重合したもの
(高分子ポリフエノール)も存在する。高分子ポリフエノールは、ワイン、発酵茶などに 多く含まれ、発酵や熟成の過程で、カテキン類、アントシァニン類などが重合すること により生成されると考えられている。非特許文献 1には、紅茶から抽出された高分子 ポリフエノールの化学構造につ 、て記載されて 、る。非特許文献 1中に掲載されて ヽ る高分子ポリフエノールの化学構造を、「化 2」に示す。なお、「化 2」に示す化学構造 式中、 Rは H (水素）又はガロイル、 R及び Rは H (水素）又は OH (水酸基)である。
1 2 3
Figure imgf000005_0001
[0007] その他、特許文献 1は、ポリフエノール類の抽出方法に関するものであり、「従来の 技術」の欄に、ポリフエノールの抗酸ィ匕作用についての記載がある。特許文献 2は、 カテキン類、プロシア-ジン類の皮膚老化防止作用に関するものである。この文献に おける皮膚老化防止作用は、 MMPs (マトリックスメタ口プロテアーゼ)の活性阻害に 基づくものである。特許文献 3は、紅茶ポリフエノールのメラニン生成抑制剤に関する ものである。文献中に、その抑制剤が美白効果に優れることが記載されている。 特許文献 1 :特開平 7— 199645号公報
特許文献 2：特開 2003 - 252745号公報
特許文献 3：特開 2001— 158726号公報
非特干文献 1 : Tetsuo Ozawa, Mari Kataoka, Keiko Morikawa, and Osamu Negishi, Elucidation of the Partial Structure of Polymeric Thearubigins from Black Tea byし h emical Degration", Biosci. Biotech. Biochem., 60(12), 2023-2027, 1996
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0008] 前記の通り、ポリフエノールは多種多様であり、未だ分離 *抽出されていないポリフエ ノールも多い。特に、カテキン類、アントシァニン類や、その他の物質が高度に重合' 結合した高分子ポリフエノールは、その多くが未分離'未抽出であり、その薬理作用も 解明されて ヽな 、ものが多!、。
[0009] そこで、本発明は、新規な高分子ポリフエノールを分離'抽出すること、及び、その 高分子ポリフエノールの新規な薬理作用を提供することを主な目的とする。
課題を解決するための手段
[0010] 本願発明者らの鋭意研究の結果、発酵茶力 抽出された高分子ポリフ ノールが、 ミトコンドリア活性ィ匕作用、血糖上昇抑制作用、体重上昇抑制作用などを有すること を新規に見出した。そこで、本発明では、発酵茶力も抽出された高分子ポリフエノー ルであって、部分構造中に、カテキン類及び/又はその没食子酸エステル類が重合 したプロシア-ジン構造、並びにカテキン類及び/又はその没食子酸エステル類の
B環同士が結合した構造を含む数平均分子量 9, 000〜18, 000の高分子ポリフエノ ールを提供する。
[0011] 本発明に係る高分子ポリフ ノールは、例えば、発酵茶葉中の水溶出成分を酢酸 ェチル抽出し、前記酢酸ェチル抽出で抽出されなかった酢酸ェチル非溶出成分を ブタノール抽出し、前記ブタノール抽出で抽出されたブタノール溶出成分を、含水ァ セトン溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーで高純度化することにより得ることができ る。
[0012] また、例えば、発酵茶葉中の水溶出成分を酢酸ェチル抽出し、前記酢酸ェチル抽 出で抽出されな力つた酢酸ェチル非溶出成分をブタノール抽出し、前記ブタノール 抽出で抽出されな力つたブタノール非溶出成分を、酸性ィ匕した後、再度ブタノール 抽出し、二度目のブタノール抽出で抽出されたブタノール溶出成分を、含水アセトン 溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーで高純度化することにより得ることができる。
[0013] 本発明に係る高分子ポリフエノールは、部分構造中に、カテキン構造（「化 1」に示し た A環、 B環、 C環を基本骨格として持つ構造)、カテキン構造に没食子酸残基がェ ステル結合した構造、プロシア-ジン構造 (カテキン構造中の C環と他のカテキン構 造中の A環が結合した構造）、カテキン構造中の A環と他のカテキン構造中の B環が 結合した構造、カテキン構造中の B環と他のカテキン構造中の B環が結合した構造、 キノン構造、などを含むと考えられる (部分構造に重複部分がある場合を含む)。 [0014] 上記の通り、本発明に係る高分子ポリフエノールにはミトコンドリア活性ィ匕作用があ ることが明らかになつたため、この高分子ポリフエノールを含有する組成物を、医薬品 として用いることにより、ミトコンドリア病を改善できる。
[0015] カロえて、ミトコンドリアは、 ATP合成を主な役割とする主要な細胞内小器官で、細胞 活動の基礎となるエネルギー産生を担っているため、ミトコンドリアを活性ィ匕すること により、細胞の活性ィ匕ゃ細胞膜の安定ィ匕などを図ることができる。従って、本発明に 係る高分子ポリフエノールを用いることにより、抗老化作用、美肌作用、エネルギー代 謝促進作用、抗肥満作用、運動性貧血予防作用などを得ることができる。なお、本発 明に係る高分子ポリフエノールを含有する組成物は、薬剤として、運動性貧血予防剤 などに適用できるほか、化粧品としても適用できる。また、健康食品などとして、飲食 物に本発明に係る高分子ポリフエノールを含有させてもょ 、。
[0016] また、精子運動能は、鞭毛中のミトコンドリアの ATP合成能に大きく依存するため、 本発明に係る高分子ポリフエノールを含有する組成物は、男性 (又はォス）に用いる 不妊症の治療や、ヒト '牛などの人工授精における受精率の向上にも、適用できる。
[0017] さらに、繊毛の運動能も、ミトコンドリアの ATP合成能に大きく依存するため、本発 明に係る高分子ポリフエノールを用いることにより、去痰作用や輸卵管の繊毛運動な どを亢進することができる。従って、本発明に係る高分子ポリフエノールを含有する組 成物去痰剤、女性 (又はメス）に用いる不妊症治療剤などに適用できる。
[0018] 以上のように、本発明に係る高分子ポリフエノールを含有する組成物は、薬剤、化 粧品として、適用できる。また、健康食品などとして、飲食物に本発明に係る高分子 ポリフエノールを含有させることができる。
[0019] カロえて、上述の通り、本発明に係る高分子ポリフエノールには血糖上昇抑制作用、 体重上昇抑制作用などもあるため、糖尿病予防，治療剤又は抗糖尿病健康食品とし ても適用できる。
[0020] 以下、本発明に関わる用語の定義づけを行う。
[0021] 「発酵茶」とは、ウーロン茶、紅茶など、製造工程中に発酵させる段階を含む茶全般 をいう。
[0022] 「水」とは、物質名としての水 (H O)をいう。即ち、本発明において、沸騰水、熱水、 水蒸気なども「水」に包含される。従って、本発明における「水溶出成分」は、発酵茶 葉を沸騰水、熱水、水蒸気などで抽出した場合に溶出する成分を包含する。
[0023] 「ミトコンドリア病」とは、ミトコンドリア DNAの遺伝的変異に由来してミトコンドリアの 機能が低下する種々の先天性疾患の総称であり、濃赤染線維ミオパシー、進行性外 眼筋麻痺、 Leigh症候群、濃赤染線維ミオパシーを伴ったミオクローヌスてんかん (M ERRF)、ミトコンドリアミオパシー、脳症、ラクトアシドーシス、発作 (MELAS)、 Lieber 眼性-ユーロパシーが含まれる。
発明の効果
[0024] 本発明に係る高分子ポリフエノールにより、細胞内ミトコンドリアを活性ィ匕できる。
図面の簡単な説明
[0025] [図 1]ウーロン茶ブタノール抽出中性画分の溶出曲線を示すグラフ。
[図 2]ウーロン茶抽出酸性画分の溶出曲線を示すグラフ。
[図 3]紅茶ブタノール抽出中性画分の溶出曲線を示すグラフ。
[図 4]紅茶ブタノール抽出酸性画分の溶出曲線を示すグラフ。
[図 5]発酵茶力 抽出した有効画分を糖尿病モデルマウスに投与した場合における 体重の変化を示すグラフ。
[図 6]発酵茶力 抽出した有効画分を糖尿病モデルマウスに投与した場合における 血糖値の変化を示すグラフ。
[図 7]高分子ポリフエノールと低分子ポリフエノールとを、それぞれマウスに投与した場 合における血糖値の変化を示すグラフ。
実施例 1
[0026] 実施例 1では、発酵茶抽出成分の分画を行った。ウーロン茶と紅茶のそれぞれに ついて、ブタノール抽出中性画分、ブタノール抽出酸性画分を抽出した後、カラムク 口マトグラフィーを用いて、さらに細力べ分画した。
[0027] ウーロン茶の成分抽出は、次の手順で行った。
[0028] まず、ウーロン茶葉から、水溶出成分を抽出した。沸騰水 1000mlにウーロン茶葉 3 Ogを加え、約 1分間沸騰後、 10分間静置した。次に、ウーロン茶葉をろ過'除去し、 ろ液を得た。以上の操作を 4回行い、ウーロン茶葉 120gから熱水抽出された水溶出 成分を含む水溶液を得た。
[0029] 次に、水溶出成分を含有した水溶液力も酢酸ェチル溶出成分を抽出した。この手 順は、ウーロン茶水溶出成分の中から、比較的低分子のポリフ ノールを酢酸ェチル で溶出 ·除去するために行った。水溶出成分を含有した水溶液 500mlにっき、 200 mlの水飽和酢酸ェチルを加え、撹拌し、静置した後、酢酸ェチル相を分取した。こ の操作を 10回繰り返し、分取した酢酸ェチル相を集め、酢酸ェチル溶出成分を含有 した抽出液を得た。
[0030] 次に、酢酸ェチル溶出成分抽出の際に残された水相からブタノール溶出成分を抽 出し、「ウーロン茶ブタノール抽出中性画分」を得た。まず、前記酢酸ェチル溶出成 分抽出の手順にぉ ヽて酢酸ェチル相の分取後残された水相を減圧濃縮し、残存す る酢酸ェチルを取り除いた。次に、その水相の溶液 500mlにっき、 200mlの水飽和 n—ブタノールを加え、前記と同様に、撹拌し、静置した後、ブタノール相を分取した 。この操作を 10回繰り返し、分取したブタノール相を集め、ブタノール溶出成分を含 有した抽出液を得た。次に、抽出液を減圧濃縮することによりブタノールを除去し、ブ タノール溶出成分を含有した水溶液を得た。この水溶液を凍結乾燥し、「ウーロン茶 ブタノール抽出中性画分」のサンプルとした（収量 4. 5gZウーロン茶葉 120g当たり）
[0031] 次に、ブタノール溶出成分抽出の際に残された水相を酸性にした後、再度 n—ブタ ノール溶出成分を抽出し、「ウーロン茶ブタノール抽出酸性画分」を得た。まず、前記 ブタノール溶出成分抽出の手順においてブタノール相の分取後残された水相に塩 酸を加え、 pH約 3に調整した。次に、前記と同様に、その水相の溶液 500mlにっき、 200mlの水飽和 n—ブタノールを加え、撹拌し、静置した後、ブタノール相を分取し た。この操作を 5回繰り返し、分取したブタノール相を集め、ブタノール溶出成分を含 有した抽出液を得た。次に、抽出液を減圧濃縮することによりブタノールを除去し、ブ タノール溶出成分を含有した水溶液を得た。この水溶液を凍結乾燥し、「ウーロン茶 ブタノール抽出酸性画分」のサンプルとした (収量 3. 2g/ウーロン茶葉 120g当たり）
[0032] 紅茶の成分抽出についても、ウーロン茶の場合と同様の手順で調製を行い、「紅茶 ブタノール抽出中性画分」、「紅茶ブタノール抽出酸性画分」をそれぞれ得た。
[0033] なお、紅茶の場合、各画分調製の前段階である水溶出成分の抽出は、沸騰水 500 mlに紅茶葉 25gを加え、 10分間、緩やかに沸騰後、直ちにブフナーロートで紅茶葉 をろ過 ·除去することにより行った。
[0034] 今回の実験では、紅茶ブタノール抽出中性画分の収量は 1. 5g、紅茶ブタノール 抽出酸性画分の収量は 1. 9gだった。
[0035] 続、て、前記各有機溶媒抽出画分にっ 、て、カラムクロマトグラフィーを行って、さ らに細力べ分画した。固定相にはトヨパール HW—40F (東ソ一株式会社製、「トヨパ ール」は登録商標）を、移動相には含水アセトン溶液を用いた。
[0036] まず、直径 2. 4cm X長さ 35cmのカラムに、トヨパール HW— 40Fを充填した。また
、移動相に用いる溶媒として、 20%アセトン溶液 600mlと 50%アセトン溶液 600mlと を準備した。
[0037] 次に、前記有機溶媒抽出画分 0. 3gを 20%アセトン 3mlに溶解し、その溶液をカラ ムに流し込んだ。次に、前記有機溶媒抽出画分のうち、 20%アセトン溶液下で固定 相（トヨパール）に吸着した成分を、前記二つの濃度のアセトン溶液を用いて 20〜50 %の直線的濃度勾配をかけることにより、順次溶出させた。そして、フラクションコレク ターを用いて、溶出液を 5gずつ試験管に分取した。溶出液は、流速 0. 3gZ分であ つた o
[0038] 次に、各試験管内の溶出液について、それぞれ 350nmにおける吸光度を測定し、 溶出曲線を作成した。そして、溶出曲線に基づいて有機溶媒抽出画分をさらに細か く分画し、同じ画分に属する試験管内の溶出液を集めた後、減圧濃縮してアセトンを 除去し、凍結乾燥した。
[0039] 以上の手順により細力べ分画された発酵茶抽出成分を、サンプルとして後述する実 験に用いた。
[0040] なお、図 1はウーロン茶ブタノール抽出中性画分の溶出曲線 (溶出パターン)を、図 2は、ウーロン茶抽出酸性画分の溶出曲線を、図 3は、紅茶ブタノール抽出中性画分 の溶出曲線を、図 4は、紅茶ブタノール抽出酸性画分の溶出曲線を、それぞれ示し ている。図 1から図 4において、横軸は溶出液を回収した試験管番号（回収した順)を 、縦軸は 350nmにおける吸光度を、それぞれ示している。
[0041] また、図 1〜図 4中に記載された「画分」は、溶出曲線に基づいて細力べ分画した際 の画分を示している。図に示す通り、図 1のウーロン茶ブタノール抽出中性画分及び 図 2のウーロン茶抽出酸性画分では 1〜15の画分に、図 3の紅茶ブタノール抽出中 性画分では 1〜16の画分に、図 4の紅茶ブタノール抽出酸性画分では 1〜： L 1の画 分に、それぞれ、細分画した。
実施例 2
[0042] 実施例 2では、実施例 1で分画した各発酵茶抽出サンプルのミトコンドリア活性化作 用について調べた。
[0043] ミトコンドリア活性ィ匕作用は、原生動物のテトラヒメナに発酵茶抽出サンプルを与え た場合にミトコンドリア膜電位が上昇するかどうかを、 Rhodamine— 123を用いて測 定することにより、検出した。ここで、 「Rhodamine— 123」とは、ミトコンドリア内膜に 結合し、水素イオンがミトコンドリアのマトリックス部分力も膜間部分に汲み出されるこ とで生じる電位差によって、強い蛍光を発する試薬である。本実験では、 SIGMA社 製のものを用いた。実験手順は以下の通りである。
[0044] まず、原生動物のテトラヒメナに発酵茶抽出サンプルを与えた。実施例 1で分画した 各発酵茶抽出サンプルをそれぞれ 5%DMSO溶液に溶解し、 lmgZmlの発酵茶抽 出サンプル溶液を調製した。コントロールには 5%DMSO溶液を用いた。次に、全発 酵茶抽出サンプル溶液 (コントロールを含む、以下同じ）について、それぞれ、テトラヒ メナ 2. 7ml ( l〜2 X 104cellsZml)に、発酵茶抽出サンプル溶液 0. 3mlをカ卩ぇ (発 酵茶抽出サンプル溶液の最終濃度は 0. lmgZml)、室温で 10〜12時間振盪した 。そして、テトラヒメナと発酵茶抽出サンプルとの反応を止めるために、手回し遠心機 を用いて遠心し、上清を捨てた後、 NKC溶液（34. 7mMNaCl、 1. 07mMKCl、 1 . 08mMCaCl )を加え、発酵茶抽出サンプルを洗い流した。
2
[0045] 次に、 Rhodamine— 123染色を行った。それぞれの発酵茶抽出サンプルで処理 したテトラヒメナに、 NKC溶液と Rhodamine— 123 (最終濃度 10 μ g/ml)を加えて 3mlにし、 45分間振盪して染色を行った。そして、テトラヒメナを遠心し、上清を捨て た後、 NKCをカ卩える手順を 7回繰り返し、 Rhodamine— 123を洗い流した。 [0046] 続、て、ミトコンドリア膜電位測定を行った。まず、！¾0(1&111^^—123染色したそれ ぞれのテトラヒメナを 4時間振盪後、各サンプルの細胞数をそろえた。次に、 96穴プ レートに、 Rhodamine— 123染色したテトラヒメナを、それぞれ 100 μ lZwellずつ入 れ、 1時間静置した。前記 96穴プレートは、室温で 1時間静置するものと、氷上で 1時 間静置するものと、二つ作成した。
[0047] そして、 1時間静置後、 96穴プレートをマイクロプレートリーダー（励起： 485nm、吸 収： 535nm)にセットし、蛍光光度を測定した。
[0048] 次に、ミトコンドリア膜電位の上昇の度合いを算出した。氷上で 1時間静置した場合 、テトラヒメナの運動能が低下しているため、サンプルにミトコンドリア活性ィ匕能がある かどうかにかかわらず、ミトコンドリア活性は低いままである。そこで、室温で 1時間静 置したものと氷上で 1時間静置したものとの蛍光光度の差を算出し、その数値を、ミト コンドリア膜電位上昇の度合いを示す値とした。なお、本実験では、室温で 1時間静 置したものと氷上で 1時間静置したものとの蛍光光度の差を求めた後、コントロール の蛍光光度の差を 1としたときの相対値に換算し、ミトコンドリア膜電位上昇の度合い を示す値とした。
[0049] 結果 (ミトコンドリア膜電位上昇の度合いを示す相対値)を表 1から表 4に示す。それ ぞれ、表 1はウーロン茶ブタノール中性画分について、表 2はウーロン茶ブタノール 酸性画分について、表 3は紅茶ブタノール抽出中性画分について、表 4は紅茶ブタノ ール抽出酸性画分にっ 、てのミトコンドリア膜電位上昇の度合 、を示して 、る。なお 、表 1から表 4中、「収量」は、発酵茶抽出サンプル 0. 30〜0. 35gをカラムにかけた ときに回収できた量であり、各画分のそれぞれに、どの程度の高分子ポリフエノール が含有して 、るかを示す参考値である。
[0050] [表 1] 画分 収量 （mg ) 膜電位 (相対値）
1 6. 1 4. 0
2 14. 4 一
3 78. 2 0. 5
4 45. 0 一
5 40. 9 0. 4
6 1 8. 2 3. 3
7 24. 1 4. 2
8 ― 4. 3
9 13. 9 7. 4
10 1 3. 1 10. 0
1 1 1 6. 3 10. 7
1 2 8. 6 1 7. 7
1 3 1 2. 6 1 9. 6
14 16. 2 25. 9
1 5 1 2. 5 32. 8
画分 収量 （mg) 膜電位 （相対値）
1 24. 0
2 60. 5 1 · 0
3 1 1. 0 0. 4
4 1 0. 1 0. 8
5 51. 5 0. 8
6 14. 6 4. 8
7 41. 8 7. 3
8 1 8. 2 1 2. 0
9 1 6. 0 9. 2
1 0 14. 5 19. 7
1 1 28. 8 1 9. 1
1 2 40. 9 29. 6
1 3 29. 2 34. 3
14 24. 4 38. 6
1 5 30. 5 38. 2 [0052] [表 3]
Figure imgf000014_0001
[0053] [表 4]
Figure imgf000014_0002
表 1から表 4に示すとおり、ウーロン茶ブタノール中性画分、ウーロン茶ブタノール酸 性画分、紅茶ブタノール抽出中性画分、紅茶ブタノール抽出酸性画分のいずれの 場合も、カラムクロマトグラフィーで後半 (アセトン濃度 35〜50%)に溶出した画分に おいて、ミトコンドリア膜電位上昇の度合いが高力つた。即ち、ウーロン茶ブタノール 中性画分 (表 1)では画分 12以降、ウーロン茶ブタノール酸性画分 (表 2)では画分 1 0以降、紅茶ブタノール抽出中性画分 (表 3)では画分 10以降、紅茶ブタノール抽出 酸性画分 (表 4)では画分 7以降にお 、て、ミトコンドリア膜電位上昇の度合 、が高か つた o
[0055] カラムクロマトグラフィーで後半に溶出した画分は、カテキン類などが複雑に重合し た高分子ポリマーであると推測できる。従って、カテキン類などが複雑に重合した高 分子ポリマーによって、ミトコンドリア膜電位が上昇したと考えることができる。
[0056] ミトコンドリア膜電位は、 ATP産生時に呼吸鎖酵素複合体が活発に働き、水素ィォ ンを膜間部分に汲み出す際に上昇する。従って、これらの結果は、発酵茶に含まれ る高分子ポリフエノールカ、ミトコンドリアの酸素呼吸を活性ィ匕する作用を有することを 示唆する。
実施例 3
[0057] 実施例 3では、実施例 1において分画したウーロン茶ブタノール抽出酸性画分の画 分 15 (以下、本実施例及び下記実施例 4において、「ウーロン茶活性画分」とする）、 及び、同じく実施例 1において分画した紅茶ブタノール抽出中性画分の画分 15 (以 下、本実施例及び下記実施例 4において、「紅茶活性画分」とする）について、タンナ ーゼ分解を行った。ここで、 「タンナーゼ」は、カテキン類、タンニン類など力も没食子 酸残基を切り離す酵素である。
[0058] なお、「ウーロン茶活性画分」は、実施例 2においてミトコンドリア活性ィ匕作用のあつ た画分のうち、ウーロン茶ブタノール抽出酸性画分の画分 15を選んで本実験に用い たことを示すものに過ぎず、ミトコンドリア活性ィ匕作用を持つ画分が、それのみに限局 されることを意味するわけではない（以下同じ)。「紅茶活性画分」についても同様で ある。
[0059] タンナーゼ分解は以下の手順で行った。まず、ウーロン茶活性画分 1. lOmg及び 紅茶活性画分 0. 86mgのそれぞれを、水 0. 2mlで溶解し、タンナーゼ水溶液 0. 3 mlを加え、 30°C、 3時間条件下で、酵素反応を進行させた。タンナーゼ水溶液は、タ ンナーゼ (和光純薬工業株式会社製)を水で 17. 3Uに調製し用いた。 [0060] 次に、酵素反応液 (酵素反応による分解生成物を含む）につ 、て、ペーパークロマ トグラフィーを行った。展開溶媒には、次の二つをそれぞれ用いた。
(1) 2%酢酸水溶液。
(2) n—ブタノール、酢酸、水を、 4 : 1 : 5 (容積比）に混合した溶媒の上層。
[0061] 没食子酸 (コントロール）と酵素反応液をペーパークロマトグラフで同時に展開させ 、 0. 5%鉄明礬と 0. 5%赤血塩を噴霧して、展開した反応生成物を検出し、 Rfを求 めた。ここで、「Rf (rate of flow)」は、ペーパークロマトグラフィーにより原点から展 開物質が移動した距離を表す。
[0062] その結果、ウーロン茶活性画分、紅茶活性画分ともに、 (1)の溶媒で展開した場合 には RfO. 37、（2)の溶媒で展開した場合には RfO. 59に、スポットが検出された。こ のスポットは、没食子酸のスポットと Rfがー致する。
[0063] 従って、この結果は、ウーロン茶ブタノール抽出酸性画分及び紅茶ブタノール抽出 中性画分に含有するミトコンドリア活性ィ匕成分が、高次的な化学構造の中に、ェピカ テキン又はェピガロカテキン若しくはそれらの没食子酸エステルと同じィ匕学構造を含 むことを示す。
[0064] なお、本発明者らは、別途、ウーロン茶ブタノール抽出中性画分及び紅茶ブタノー ル抽出酸性画分についても、同様の実験を行った。その結果、同様の結果が得られ た。この結果は、ウーロン茶ブタノール抽出中性画分及び紅茶ブタノール抽出酸性 画分に含有するミトコンドリア活性化成分も、前記と同様、高次的な化学構造の中に 、ェピカテキン又はェピガロカテキン若しくはそれらの没食子酸エステルと同じィ匕学 構造を含むことを示す。
実施例 4
[0065] 実施例 4では、実施例 1において分画したウーロン茶ブタノール抽出酸性画分のゥ 一ロン茶活性画分、及び、同じく実施例 1において分画した紅茶ブタノール抽出中性 画分の紅茶活性画分について、塩酸ーブタノール分解を行った。手順は以下のとお りである。
[0066] まず、塩酸 1. 1mlと n—ブタノール 8. 9mlの混合試薬を準備した。次に、ウーロン 茶活性画分及び紅茶活性画分を各 0. 5mg、それぞれの小反応容器に取り、前記混 合試薬 1. Omlをカ卩え、スクリューキャップを付けて、 105°Cのオートクレーブ中で 50 分加熱した。
[0067] 次に、反応生成物について、ペーパークロマトグラフィーを行った。展開溶媒には、 次の二つをそれぞれ用 Vヽた。
(1)酢酸、塩酸、水を、 30 : 3 : 10 (容積比)で混合した溶媒。
(2) n—ブタノール、酢酸、水を、 4 : 1 : 5 (容積比）に混合した溶媒の上層。
[0068] その結果、ウーロン茶活性画分では、（1)の溶媒で展開した場合には RfO. 57と Rf 0. 36、（2)の溶媒で展開した場合には RfO. 46と RfO. 27に、アントシァニン特有の ピンク色のスポットが検出された。また、紅茶活性画分でも、（1)の溶媒で展開した場 合には RfO. 56と RfO. 36、（2)の溶媒で展開した場合には RfO. 46と RfO. 27に、 アントシァニン類特有のピンク色のスポットが検出された。これらのスポットは、 Rf値の 高いほうがシァ-ジン、 Rf値の低いほうがデルフィ-ジンであると考える。
[0069] 従って、この結果は、ウーロン茶ブタノール抽出酸性画分及び紅茶ブタノール抽出 中性画分に含有するミトコンドリア活性ィ匕成分が、高次的な化学構造の中に、プロシ ァ-ジン構造を含むことを示す。
[0070] なお、本発明者らは、別途、ウーロン茶ブタノール抽出中性画分及び紅茶ブタノー ル抽出酸性画分についても、同様の実験を行った。その結果、同様の結果が得られ た。この結果は、ウーロン茶ブタノール抽出中性画分及び紅茶ブタノール抽出酸性 画分に含有するミトコンドリア活性化成分も、前記と同様、高次的な化学構造の中に 、プロシア二ジン構造を含むことを示す。
[0071] 実施例 3及び実施例 4の結果を総合すると、実施例 2においてミトコンドリア活性ィ匕 作用を示した成分は、高次的な化学構造を持つ高分子ポリフエノールであって、その 部分構造中に、ェピカテキンゃェピガロカテキン及びそれらの没食子酸エステルが 重合したプロシア-ジン構造を含むと推測する。
実施例 5
[0072] 実施例 5では、発酵茶から抽出した有効画分の平均分子量を測定した。
[0073] サンプルには、実施例 1において分画したウーロン茶ブタノール抽出中性画分の画 分 15、同じく実施例 1において分画したウーロン茶ブタノール抽出酸性画分の画分 1 4、同じく実施例 1において分画した紅茶ブタノール抽出中性画分の画分 15、同じく 実施例 1にお ヽて分画した紅茶ブタノール抽出酸性画分の画分 11、の 4種類を用い た。
[0074] 平均分子量の測定は、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC ; size exclusion chr omatography)法により行った。
[0075] 高速クロマトグラフ装置として、 LC— 10Aシステム (株式会社島津製作所製)を用 いた。カラムには、 TSK— GEL a— 3000 (カラム寸法 7. 8mml. D. X 30cm,東ソ 一株式会社製)を用いた。カラム温度は 40°Cにした。展開溶媒には、塩化リチウム (L iCl) 10mMを含有したジメチルホルムアミドを用いた。流速は、 0. 6mlZminに設定 した。検出器には、 LC—10Aシステムに含まれる UV検出器を用いた。検出波長は 275nmに設定した。
[0076] まず、カラムに分子量標準化合物を流し込み、溶出時間を横軸に、 UV検出値を縦 軸〖こしてプロットし、較正曲線を作成した。分子量標準化合物には、 TSK標準ポリス チレン (東ソ一株式会社製)を用いた。
[0077] 次に、カラムに各サンプルを流し込み、溶出時間を横軸に、 UV検出値を縦軸にし てプロットし、較正曲線に基づいて平均分子量を算出した。平均分子量として、数平 均分子量と重量平均分子量の両者を算出した。
[0078] 結果を表 5に示す。
[表 5]
Figure imgf000018_0001
[0079] 表 5の結果より、発酵茶から抽出した有効画分の数平均分子量は 9, 000〜18, 00 0、重量平均分子量は、 14, 000〜25, 000であること力 S分力、つた。
実施例 6
[0080] 実施例 6では、熱分解 ガスクロマトグラフ マススペクトル（Py— GC— MS)分析 装置を用いて、発酵茶から抽出した有効画分の構造解析を行った。 [0081] サンプルを熱分解装置 (Py)で熱分解した後、その分解生成物をガスクロマトグラフ 装置 (GC)に導入して分別し、さら〖こ、マススペクトル装置 (MS)で分別した化合物を 解析することにより、サンプルィ匕合物の熱的性質やィ匕学構造に関する知見を得ること ができる。
[0082] サンプルには、実施例 5と同様、実施例 1において分画したウーロン茶ブタノール抽 出中性画分の画分 15、同じく実施例 1にお 、て分画したウーロン茶ブタノール抽出 酸性画分の画分 14、同じく実施例 1にお!/ヽて分画した紅茶ブタノール抽出中性画分 の画分 15、同じく実施例 1において分画した紅茶ブタノール抽出酸性画分の画分 1 1、の 4種類を用いた。
[0083] 熱分解 (Py)には、キューリ一ポイント熱分解装置「JHP— 5 (日本分析工業株式会 社)」を用いた。
[0084] まず、炉内及びガスクロマトグラフ導入部の温度を、 250°Cにした。次に、フエロマグ ネテイツクーパイ口ホイル（厚さ 50 μ m)にサンプルを包み、 10%テトラメチルヒドロキ サイドアンモ-ゥムメタノール溶液 5 Lをサンプルに加え、炉内に入れ、 315°C、 4 秒間処理して熱分解を行った後、分解生成物をガスクロマトグラフへ送った。なお、 1 0%テトラメチルヒドロキサイドアンモ-ゥムメタノール溶液は、サンプル中の化合物を メチルイ匕することにより、質量分析の段階で揮発性'熱安定性が得られるようにするた め、用いた。
[0085] ガスクロマトグラフ マススペクトル（GC— MS)には、ガスクロマトグラフ質量分析計 「JMS— 600M (日本電子株式会社製)」を用いた。また、データ処理装置として、 TS S— 2000 (日本分析興行株式会社製)を用いた。ガスクロマトグラフ用のカラムには、 キヤビラリ一力ラム「HP— IMS (カラム寸法 0. 25mm X 30m,コーティングした液層 の厚さ 0. 25 ^ m,アジレント =テクノロジィズ製）」を用いた。
[0086] 熱分解生成物とキャリアガスとをカラム内に流し入れ、熱分解生成物中に存在する 物質を分離し、また、保持時間に関するデータを取得した。また、分離した各物質に ついて質量分析を行い、化学構造などに関する知見を得た。カラム内の温度は、は じめ 50°Cを 1分間保持し、次に、 5°C/minで 300°Cまで直線的に昇温させ、次に、 300°Cを 14分間保持した。キャリアガスには、ヘリウムを用いた。その流速は、 1. Om lZminに設定した。その他、質量分析は、イオン源温度 250°C、イオン化電圧 70eV の条件で行った。
[0087] そして、ガスクロマトグラフ 質量分析により得られたデータと合成標準物質の既知 データとを比較し、サンプル中に含まれる物質の化学構造などを検討した。
[0088] その結果、各サンプルの熱分解物から、下記 10種類の化合物が検出された。それ らの化合物の化学式を「化 3」から「化 5」に示す。なお、それらの化合物の保持時間（ tR; retention time)及び分子量は次の通りである。化合物 1 (tR23. Omin;分子 量 168)、化合物 2 (tR22. lmin;分子量 166)、化合物 3 (tR30. 3min;分子量 19 6)、化合物 4 (tR30. 5min;分子量 226)、化合物 5 (tR31. lmin;分子量 254)、 ィ匕合物 6 (tR32. 4min;分子量 254)、化合物 7 (tR32. 9min;分子量 254)、化合 物 8 (tR35. 2min;分子量 284)、化合物 9 (tR36. 9min;分子量 312)、化合物 10 ( tR46. 5min;分子量 450)。
[化 3]
Figure imgf000020_0001
[化 4]
Figure imgf000021_0001
2 R i =R2=R3=R4=H
3 Ri=R3-R4=H, R2=OCH3
4 Ri„ ， R2=R3=OCH3
5 Ri=COOCH3, R2=OCH3, R3==R4=H
6 Ri=R4-H, R2=OCH3, R3-COOCH3
7 Ri=R3-H, R2-OCH3, R4=COOCH3
8 Ri^H, R2=R3=CX:H3, R4=COOCH3
9 Ri=R4=COOCH3, R2=OCH3, R3=H
[化 5]
Figure imgf000021_0002
[0089] これらの結果は、各サンプルに含有する化合物の化学構造中に、上述の 10種類の 分解生成物を与える化学構造が含まれることを示す。
[0090] また、質量分析の結果より、その化合物が、カテキン類又はその没食子酸エステル 類の化学構造中の C2，、 C5，、 C6，部位、カテキン類同士の C4 C8間、 C6— C6， 間、又は、 C6'—C6'間に、重合部位を有することが示唆された。
[0091] 実施例 3から実施例 6の結果を総合すると、実施例 2においてミトコンドリア活性ィ匕 作用を示した成分は、部分構造中に、カテキン類及び Z又はその没食子酸エステル 類が重合したプロシア-ジン構造、並びにカテキン類及び Z又はその没食子酸エス テル類の B環同士が結合した構造を含む数平均分子量 9, 000-18, 000 (重量平 均分子量 14, 000〜25, 000)の高分子ポリフエノールであると推測する。
[0092] 上記知見に基づき、本発明に係る高分子ポリフエノールの化学構造式の一例を「ィ匕 6」に示す。なお、本発明に係る高分子ポリフエノールの化学構造は、これに狭く限定 されない。
[化 6]
Figure imgf000022_0001
実施例 7
[0093] 実施例 7では、発酵茶から抽出した有効画分を糖尿病モデルマウスに投与し、その 成分に血糖値上昇抑制効果があるかどうかを調べた。
[0094] まず、実施例 2における有効画分を PBSに溶解し、 2. 7mgZmlと 0. 9mgZmlの 投与液を得た。次に、 II型糖尿病モデルマウス (BSK. Cg - + Lepr < db > / + Lep rく db >Zjcl、雄 6週齢、日本クレア社より購入）に、 0. lmlZ日（0. 27mg/日又 は 0. 09mg/日）、毎日腹腔投与した。また、コントロールとして、 PBSを 0. 1mlずつ 毎日腹腔投与した。そして、毎日、尾静脈より採血し、血糖値を測定した。
[0095] 結果を図 5及び図 6に示す。図 5は、発酵茶から抽出した有効画分を投与した場合 における体重の変化を示すグラフ、図 6は、発酵茶から抽出した有効画分を投与した 場合における血糖値の変化を示すグラフである。図 5及び図 6の横軸は、投与開始 力もの週数を表す。図 5の縦軸はマウスの体重 (g)を、図 6の縦軸は血糖値 (mg/dl )を、それぞれ表す。なお、各グラフにおける投与個体数は 5匹又は 6匹である。
[0096] 0. 27mgZ日投与群では、図 5に示す通り、 PBS投与群（コントロール）と比較して 、 10週経過時において、約 5g体重が低力つた。また、図 6に示す通り、 4週経過した 頃力も血糖値の上昇抑制が観察され、また、 PBS投与群と比較して、 10週経過時に おいて、血糖値が約 33%下がった。
[0097] 一方、 0. 09mgZ日投与群では、図 5に示す通り、 PBS投与群（コントロール）と比 較して、 10週経過時に僅かな体重増加抑制が観察された。また、図 6に示す通り、 6 週経過した頃力 血糖値の上昇抑制が観察され、また、 PBS投与群と比較して、 10 週経過時において、血糖値が約 20%下がった。
[0098] これらの結果は、発酵茶から抽出した有効画分を比較的高濃度に投与した場合、 早期の体重増加抑制と血糖値上昇抑制を抑制でき、かつ、比較的低濃度に投与し た場合でも、長期的な投与により、体重増加抑制と血糖値上昇抑制を抑制できること を示す。
実施例 8
[0099] 実施例 8では、本発明に係る高分子ポリフエノールと低分子ポリフエノールとを、そ れぞれマウスに投与し、血糖値上昇抑制効果を比較した。
[0100] 実験手順は実施例 7とほぼ同様である。本実験では、 B6マウス (C57BL、 日本タレ ァ社より購入)を用いた。高分子ポリフエノール投与群では、実施例 2における有効画 分の PBS溶解液を、 0. 27mg/日、毎日腹腔投与し、低分子ポリフエノール投与群 では、ェピカテキンの PBS溶解液を、 0. 27mg/日、毎日腹腔投与した。そして、投 与初日と投与開始カゝら 15日後に尾静脈より採血し、血糖値を測定した。
[0101] 結果を図 7に示す。図 7は、高分子ポリフエノールと低分子ポリフエノールとを、それ ぞれマウスに投与した場合における血糖値の変化を示すグラフである。図中の横軸 は投与開始力もの日数を、縦軸は投与初日の血糖値を 100とした場合における血糖 値の変化の割合 (％)を、それぞれ表す。
[0102] 図 7に示す通り、高分子ポリフエノール投与群では、血糖値が約 16%低下したのに 対し、低分子ポリフエノール投与群では、血糖値はほとんど変化しなかった。
[0103] この結果は、本発明に係る高分子ポリフエノールには、低分子ポリフエノールよりも 強力な血糖値上昇抑制作用があることを示唆する。
産業上の利用可能性
[0104] 本発明に係る高分子ポリフエノールを含有する組成物は、医薬品、化粧品として、 適用できる。また、また、健康食品などとして、飲食物に本発明に係る高分子ポリフエ ノールを含有させることができる。

Claims

請求の範囲
[1] 発酵茶力 抽出された高分子ポリフエノールであって、
部分構造中に、カテキン類及び/又はその没食子酸エステル類が重合したプロシ ァ-ジン構造、並びにカテキン類及び/又はその没食子酸エステル類の B環同士が 結合した構造を含む数平均分子量 9, 000〜18, 000の高分子ポリフエノール。
[2] 前記発酵茶はウーロン茶又は紅茶であることを特徴とする請求の範囲第 1項記載 の高分子ポリフエノール。
[3] 請求の範囲第 1項記載の高分子ポリフエノールを少なくとも含有するミトコンドリア病 治療剤。
[4] 請求の範囲第 1項記載の高分子ポリフエノールを少なくとも含有する糖尿病予防- 治療剤。
[5] 請求の範囲第 1項記載の高分子ポリフ ノールを少なくとも含有する飲食物。
PCT/JP2005/020315 2004-11-04 2005-11-04 発酵茶から抽出された高分子ポリフェノール、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤、並びに飲食物 Ceased WO2006049258A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/667,082 US20090047368A1 (en) 2004-11-04 2005-11-04 Polymeric polyphenol extracted from fermented tea, therapeutic agent for mitochondrial disease, preventive/therapeutic agent for diabetes mellitus, and food or beverage
JP2006542450A JP5439644B2 (ja) 2004-11-04 2005-11-04 ウーロン茶又は紅茶から抽出された血糖値上昇抑制剤及びミトコンドリア膜電位上昇剤
GB0708115A GB2435166B (en) 2004-11-04 2005-11-04 High molecular weight polphenols extracted from fermented tea and a method of manufacturing a medicament for the prevention and treatment of diabetes

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004320980 2004-11-04
JP2004-320980 2004-11-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006049258A1 true WO2006049258A1 (ja) 2006-05-11

Family

ID=36319258

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2005/020315 Ceased WO2006049258A1 (ja) 2004-11-04 2005-11-04 発酵茶から抽出された高分子ポリフェノール、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤、並びに飲食物

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20090047368A1 (ja)
JP (1) JP5439644B2 (ja)
CN (1) CN101072815A (ja)
GB (1) GB2435166B (ja)
WO (1) WO2006049258A1 (ja)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2068941A4 (en) * 2006-07-21 2009-09-30 Mars Inc IMPROVING CONCENTRATIONS OR ACTIVITY OF ARGINASE
JP2012183010A (ja) * 2011-03-04 2012-09-27 Asahi Soft Drinks Co Ltd 紅茶飲料およびその製造方法
WO2013022846A3 (en) * 2011-08-05 2013-10-24 Cardero Therapeutics, Inc. Flavonoid compounds
JP2014529596A (ja) * 2011-08-16 2014-11-13 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 食事を変換する方法
US10898465B2 (en) 2016-06-21 2021-01-26 Epirium Bio Inc. Utility of (+) epicatechin and their analogs

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5112859B2 (ja) * 2004-06-04 2013-01-09 ホリズン サイエンス ピーティーワイ リミテッド 天然甘味料
US8021697B2 (en) * 2005-06-03 2011-09-20 Horizon Science Pty. Ltd. Substances having body mass redistribution properties
US9364016B2 (en) * 2006-09-19 2016-06-14 The Product Makers (Australia) Pty Ltd Extracts derived from sugar cane and a process for their manufacture
FR2917749B1 (fr) * 2007-06-19 2012-10-12 Laffort Utilisation de tanins en oenologie
EP2432485B1 (en) 2009-05-19 2013-07-31 Unilever PLC Prebiotic composition
CN103561585B (zh) 2011-02-08 2016-05-25 产品制造者(澳大利亚)有限公司 糖提取物
US10052316B2 (en) * 2011-06-06 2018-08-21 Cardero Therapeutics, Inc. Methods and compositions for treatment of mitochondrial toxicity
AU2013308395C1 (en) 2012-08-28 2018-03-15 Poly Gain Pte Ltd Extraction method
US20140179774A1 (en) * 2012-12-26 2014-06-26 Industrial Technology Research Institute Methods for inhibition of shc-1/p66 to combat aging-related diseases
AU2014306366B9 (en) 2013-08-16 2020-03-26 Poly Gain Pte Ltd Sugar cane derived extracts and methods of treatment
CN104232569A (zh) * 2014-06-23 2014-12-24 扬州大学 一种适用于幼龄兔卵母细胞体外受精方法及培养液配方
CN105646450A (zh) * 2014-12-02 2016-06-08 重庆宁牧生态农业有限公司 一种用作抗肥胖剂的化合物
CN106854643B (zh) * 2015-12-08 2021-01-26 台湾粒线体应用技术股份有限公司 植物萃取物用于提升粒线体活性的用途
JP2021533147A (ja) * 2018-08-06 2021-12-02 ユニリーバー・アイピー・ホールディングス・ベスローテン・ヴェンノーツハップ 局所組成物

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06335363A (ja) * 1993-05-27 1994-12-06 Kraft General Foods Inc 食品着色料による着色の防止剤としての高分子量ガロタンニン
JPH0920672A (ja) * 1995-07-04 1997-01-21 Agency Of Ind Science & Technol 抗アレルギー物質、その製造方法、抗アレルギー剤及び機能性食品
JPH09291039A (ja) * 1995-12-26 1997-11-11 Suntory Ltd プロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤
JP2002187848A (ja) * 1995-03-14 2002-07-05 Indena Spa 茶のポリフェノール画分、その使用、及びそれを含有する処方物
JP2003231684A (ja) * 2002-02-06 2003-08-19 Ichimaru Pharcos Co Ltd コレステロール代謝改善剤
JP2004315409A (ja) * 2003-04-15 2004-11-11 Amino Up Chemical Co Ltd 雲南苦丁茶成分を含有する組成物
JP2005075790A (ja) * 2003-09-02 2005-03-24 Fumio Hashimoto Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ誘導剤
WO2005077384A1 (ja) * 2004-02-17 2005-08-25 Suntory Limited 高分子ポリフェノール画分を含有するリパーゼ活性阻害剤、茶エキス、およびその製造方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5639500A (en) * 1993-05-27 1997-06-17 Kraft Foods, Inc. High molecular weight gallotannins as a stain-inhibiting agent for food dyes
DE69633502T2 (de) * 1995-12-26 2006-02-23 Suntory Ltd. Procyanidin als den aktiven bestandteil enthaltende mittel gegen fettleibigkeit

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06335363A (ja) * 1993-05-27 1994-12-06 Kraft General Foods Inc 食品着色料による着色の防止剤としての高分子量ガロタンニン
JP2002187848A (ja) * 1995-03-14 2002-07-05 Indena Spa 茶のポリフェノール画分、その使用、及びそれを含有する処方物
JPH0920672A (ja) * 1995-07-04 1997-01-21 Agency Of Ind Science & Technol 抗アレルギー物質、その製造方法、抗アレルギー剤及び機能性食品
JPH09291039A (ja) * 1995-12-26 1997-11-11 Suntory Ltd プロシアニジンを有効成分とする抗肥満剤
JP2003231684A (ja) * 2002-02-06 2003-08-19 Ichimaru Pharcos Co Ltd コレステロール代謝改善剤
JP2004315409A (ja) * 2003-04-15 2004-11-11 Amino Up Chemical Co Ltd 雲南苦丁茶成分を含有する組成物
JP2005075790A (ja) * 2003-09-02 2005-03-24 Fumio Hashimoto Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ誘導剤
WO2005077384A1 (ja) * 2004-02-17 2005-08-25 Suntory Limited 高分子ポリフェノール画分を含有するリパーゼ活性阻害剤、茶エキス、およびその製造方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2068941A4 (en) * 2006-07-21 2009-09-30 Mars Inc IMPROVING CONCENTRATIONS OR ACTIVITY OF ARGINASE
JP2010500973A (ja) * 2006-07-21 2010-01-14 マース インコーポレーテッド アルギナーゼ濃度／活性の改善
CN101516407B (zh) * 2006-07-21 2012-03-21 玛尔斯有限公司 改善精氨酸酶水平/活性
EP2438915A1 (en) * 2006-07-21 2012-04-11 Mars Incorporated Improvement of arginase levels/activity
AU2007275561B2 (en) * 2006-07-21 2013-12-19 Mars, Incorporated Improvement of arginase levels/activity
JP2012183010A (ja) * 2011-03-04 2012-09-27 Asahi Soft Drinks Co Ltd 紅茶飲料およびその製造方法
WO2013022846A3 (en) * 2011-08-05 2013-10-24 Cardero Therapeutics, Inc. Flavonoid compounds
JP2014529596A (ja) * 2011-08-16 2014-11-13 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 食事を変換する方法
US10898465B2 (en) 2016-06-21 2021-01-26 Epirium Bio Inc. Utility of (+) epicatechin and their analogs

Also Published As

Publication number Publication date
GB0708115D0 (en) 2007-06-06
JP5439644B2 (ja) 2014-03-12
GB2435166A (en) 2007-08-15
US20090047368A1 (en) 2009-02-19
CN101072815A (zh) 2007-11-14
GB2435166B (en) 2009-07-08
JPWO2006049258A1 (ja) 2008-08-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2006049258A1 (ja) 発酵茶から抽出された高分子ポリフェノール、ミトコンドリア病治療剤、糖尿病予防・治療剤、並びに飲食物
Muller et al. Acute assessment of an aspalathin-enriched green rooibos (Aspalathus linearis) extract with hypoglycemic potential
Zhuang et al. Protective effects of rambutan (Nephelium lappaceum) peel phenolics on H2O2-induced oxidative damages in HepG2 cells and d-galactose-induced aging mice
Yilmaz et al. Extraction and identification of proanthocyanidins from grape seed (Vitis Vinifera) using supercritical carbon dioxide
JP4941991B2 (ja) プロアントシアニジンオリゴマーの製造方法
Zhang et al. The effect of ultra-high pretreatment on free, esterified and insoluble-bound phenolics from mango leaves and their antioxidant and cytoprotective activities
Rho et al. Identification of fermented tea (Camellia sinensis) polyphenols and their inhibitory activities against amyloid-beta aggregation
BRPI0709053A2 (pt) extratos e métodos que compreendem espécies de chá verde
Li et al. Comparison of phytochemical profiles and antiproliferative activities of different proanthocyanidins fractions from Choerospondias axillaris fruit peels
CN106008172A (zh) 桑枝中具酪氨酸酶抑制作用有效部位制备方法及其应用
Tanaka et al. Structure of polymeric polyphenols of cinnamon bark deduced from condensation products of cinnamaldehyde with catechin and procyanidins
Esatbeyoglu et al. Structure elucidation of procyanidin oligomers by low-temperature 1H NMR spectroscopy
Lv et al. Dihydrochalcone-derived polyphenols from tea crab apple (Malus hupehensis) and their inhibitory effects on α-glucosidase in vitro
Asmaey et al. Phenolics and other structural compounds from leaves of Olea europaea L.: Extraction Techniques and Pharmacological Activities
He et al. Isolation and identification of polyphenolic compounds in longan pericarp
Zengin et al. HPLC–MS/MS-based metabolic profiling and pharmacological properties of extracts and infusion obtained from Amelanchier parviflora var. dentata
Wang et al. Gut microbiota as a novel tool to dissect the complex structures of black tea polymers
Yang et al. Characterization of unusual proanthocyanidins in leaves of bayberry (Myrica rubra Sieb. et Zucc.)
Yesil-Celiktas et al. Determination of extractability of pine bark using supercritical CO2 extraction and different solvents: optimization and prediction
JP4822291B2 (ja) 肝線維化抑制剤
CN102362876A (zh) 一种水杉皮提取物及其制备方法和用途
Jeong et al. A new approach to procyanidins synthesis with potent anti-adipogenic effects
Avello et al. Identification of water-soluble compounds contained in aqueous extracts and fractions obtained from leaves of ugni molinae to determine their effect on the viability of human gastric cancer cells
JP5441046B2 (ja) 脂肪肝の予防および／または治療剤
Sharma et al. Fractionation of grape seed proanthocyanidins for bioactivity assessment

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KN KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

DPEN Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006542450

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200580035415.1

Country of ref document: CN

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 0708115

Country of ref document: GB

Kind code of ref document: A

Free format text: PCT FILING DATE = 20051104

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 0708115.1

Country of ref document: GB

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11667082

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REG Reference to national code

Ref country code: GB

Ref legal event code: 789A

Ref document number: 0708115

Country of ref document: GB

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 05805410

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1