WO2006025598A1 - 長時間虚血による脳梗塞の抑制剤 - Google Patents

長時間虚血による脳梗塞の抑制剤 Download PDF

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cerebral infarction
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histidine
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Naoto Adachi
Keyue Liu
Tatsuru Arai
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Ehime University
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    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention relates to a drug for suppressing cerebral infarction caused by prolonged cerebral ischemia.
  • Cerebral infarction means that blood flow in the brain is insufficient due to blood clots that are formed in blood vessels other than the brain being transported to the brain or cerebrovascular is blocked or thinned due to arteriosclerosis in the cerebral blood vessels. This refers to a disease in which a damaged tissue falls into necrosis. Once a cerebral infarction has occurred, the necrotic brain tissue is not restored, and even if life is saved, dementia symptoms often remain as well as movement paralysis, sensory disturbance, and language impairment. On the other hand, in recent years, lifestyle-related diseases such as hypertension, heart disease, hyperlipidemia, and diabetes have increased, and the risk of cerebral infarction has increased. Therefore, an effective means for treating cerebral infarction is eagerly desired.
  • thrombolytic agents are used to dissolve blood clots that cause cerebral infarction and to resume blood flow.
  • free radical damage caused by resumption of blood flow is also deeply involved in the pathology of cerebral infarction, and thrombolytic agents alone are not the fundamental solution to necrosis of brain tissue.
  • edaravone a free radical force venger for protecting brain tissue from free radicals that cause brain tissue damage
  • the drug has side effects such as liver dysfunction and renal dysfunction.
  • the data indicate that abnormal fluctuations in clinical laboratory values, such as abnormal liver function values, are as high as 21.4% of patients treated. There is also. There is a problem with the high incidence of side effects, even though it is a treatment for cerebral infarction, which is a fatal disease.
  • hypothermia As an alternative to drugs. However, it takes to implement In addition to high costs, there are infections and bleeding tendency due to decreased immunity, so general implementation is difficult.
  • a programmed death (apoptosis) of a neuron is caused by a short ischemia (transient ischemia) even if the necrosis (necrosis) of a brain cell is not reached.
  • transient ischemia transient ischemia
  • Toshiki Kawamoto et al. “Month 1 ⁇ 4: Effect of L-nistidine (singlet oxygen scavenger) during transient forebrain ischemia in rats”, Moon 3 ⁇ 4 Ne Kyoku, No. 4 9-7, No. 6 1 2-6
  • page 1 (1 9 9 7) when 5 minutes or 10 minutes of transient forebrain ischemia was loaded, the loss of pyramidal neurons in the hippocampal CA-1 region occurred after 1 week.
  • the method of suppressing neuronal cell death in transient ischemia is not always applicable to actual cerebral infarction.
  • the cause of cell death due to ischemia is complex, as the mechanism of inhibition of neuronal cell death differs depending on whether the drug is administered before or after ischemia. It depends.
  • brain tissue necrosis the direct cause of actual cerebral infarction (brain tissue necrosis) is cerebral ischemia that lasts several hours, and the mechanism of delayed neuronal death that occurs 7 days after several to ten minutes of ischemia Is different.
  • transient ischemia causes apoptosis only in neurons, but long-term ischemia necrosis occurs not only in neurons but also in the entire brain tissue including glial cells and vascular endothelial cells.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a cerebral infarction inhibitor that is effective for brain tissue necrosis after ischemia for a long time corresponding to actual cerebral infarction and has few side effects. .
  • the present inventors have made various studies on drugs capable of suppressing brain tissue necrosis after ischemia for several hours, and found that administration of histidine after reperfusion is extremely effective. As a result, the present invention has been completed.
  • the cerebral infarction inhibitor according to the present invention suppresses cerebral infarction due to prolonged ischemia, and is characterized by containing histidine.
  • the use according to the present invention is characterized in that histidine is used for producing a therapeutic agent for cerebral infarction due to prolonged ischemia.
  • the method for treating cerebral infarction treats cerebral infarction due to prolonged ischemia and is characterized by administering histidine.
  • Fig. 1 is a photograph showing the effect of inhibiting cerebral infarction when histidine is administered after prolonged ischemia.
  • the cerebral infarction inhibitor of the present invention contains histidine as an active ingredient. Since this histidine is one of the essential amino acids, it is considered that there are few side effects, and large doses are possible. In addition, histidine easily crosses the blood brain barrier and is converted to histamine by decarboxylase in the brain. This histamine is thought to act on brain tissue.
  • Cerebral infarction is generally caused by ischemia due to cerebral thrombosis or cerebral embolism, and is accompanied by a morphological disorder (necrosis) of a size that is visible to the naked eye.
  • Apoptosis due to ischemia for a very short time for example, several minutes to several tens of minutes
  • cerebral blood flow or small thrombus, etc. after several days, only nerve cells that are vulnerable to ischemia fall off. Even if symptoms occur due to this apoptosis, it is much less severe than cerebral infarction and does not endanger life.
  • the necrosis and apoptosis mechanisms are clearly different. Therefore, the cerebral infarction inhibitor of the present invention targets cerebral infarction due to prolonged ischemia.
  • the “long time” in long-term ischemia is not particularly limited, but means at least a time to the extent that ischemia directly causes necrosis of brain tissue.
  • the specific time depends on the cause and extent of ischemia, individual differences, etc., but takes into account the time from the occurrence of ischemia until actual treatment is performed, for example, 1 hour or more, and further 1.5. More than 2 hours, especially more than 2 hours.
  • the dosage form and administration form of the inhibitor of the present invention are not particularly limited, but it is preferably administered intravenously as an injection in consideration of the urgency against cerebral ischemia.
  • physiological saline adjusted with pH, pure water, distilled water, sterilized water, or the like can be used as the solvent.
  • the administration method of histidine in the present invention is larger than the dose of general drugs. As shown in the examples described below, when histidine of 2 0, 5 0 0, 10 0 O mg / kg was administered twice to a rat weighing approximately 300 g, dose-dependent cerebral infarction Suppression The control effect was obtained. Considering these results, the dose for humans can be 50 to 50 O mg Z kg per dose. However, this dose should be changed appropriately according to future studies and patient conditions, and continuous administration by infusion should be considered.
  • the cerebral infarction inhibitor according to the present invention is preferably administered during or after ischemia / reperfusion.
  • ischemic reperfusion or after ischemic reperfusion “ischemic reperfusion” and “after ischemic reperfusion” are not clearly distinguished, and for example, ischemic reperfusion such as administration of a thrombolytic agent.
  • ischemic reperfusion such as administration of a thrombolytic agent.
  • At least pre-ischemic administration is not included in “during or after ischemia-reperfusion”.
  • Administration prior to ischemia is practically used as a prophylactic agent. In the case of a cerebral infarction that occurs suddenly and cannot be identified, pre-ischemic administration is not possible.
  • administration of histidine prior to ischemia alone does not show an effect in the case of ischemia over a long period of time.
  • the cerebral infarction inhibitor of the present invention is administered after reperfusion. This is because it is important to minimize brain tissue necrosis due to reperfusion injury by administration of the cerebral infarction inhibitor of the present invention. More preferably, it is administered immediately after reperfusion.
  • the term “immediately” here does not strictly mean immediately after reperfusion, but refers to within 30 minutes after some treatment for ischemia reperfusion such as administration of a thrombolytic agent.
  • the cerebral infarction inhibitor of the present invention is preferably administered multiple times or continuously.
  • cerebral infarction in many cases of cerebrovascular occlusion, even when blood flow is resumed, restenosis of blood vessels, which are deeply involved in inflammatory cell infiltration by neutrophils, etc., often occurs. Therefore, in the treatment of cerebral infarction, in order to prevent this vascular restenosis and inflammatory reaction, it is necessary to maintain the histamine concentration in the brain tissue for a long time. Specifically, during ischemic reperfusion or immediately after ischemic reperfusion and once every 4-8 hours thereafter, more preferably 2 during ischemic reperfusion or immediately after ischemic reperfusion and every 4-8 hours thereafter. It is preferable to administer more than once (total of 3 or more times). In the case of continuous administration, it is preferable to administer a single dose by infusion or the like over 1 to several hours.
  • mice 51 Wistar male rats (body weight: about 300 g), control group (12 animals), 1000 mg / kg histidine administration group (8 animals) before ischemia, post-ischemic 20 Omg / kg histidine administration group (8 animals), 50 Omg / kg histidine administration group after ischemia (10 animals), and 1000 mg / kg histidine administration group (13 animals) after ischemia.
  • the rats were anesthetized with a mixture of 2% halothane, 49% oxygen and 49% laughing gas (N 2 o) and allowed to breathe spontaneously. Next, a midline incision was made in the rat's neck on the back, exposing the right common artery.
  • the right middle cerebral artery is inserted by inserting silicone-coated 4 ⁇ 0 nylon thread into the right internal artery from the internal carotid and external branches of the common carotid artery. The starting part of was closed. The tip of the nylon thread was placed 18 mm from the branch. After the incision was stitched, the patient recovered from anesthesia. During surgery, an electronic thermometer was inserted into the rectum, and a lamp maintained the rectal temperature at 37.0 ⁇ 0.1 ° C. After recovery from anesthesia, all rats showed paralysis in the contralateral limb.
  • Rats were anesthetized again 5 minutes before resuming blood flow. After opening the skin suture, 5 mm of Nylon thread was removed to resume blood flow in the brain 2 hours after middle cerebral artery occlusion. The incision site was sutured again, and physiological saline or histidine (200, 500 or 100 OmgZkg) was intraperitoneally administered. Histidine was once dissolved in a physiological saline adjusted to pH 4.0 with hydrochloric acid, and then returned to pH 6.0 with sodium hydroxide and used. After recovery from anesthesia, food and water were given ad libitum.
  • saline or histidine was administered by the abdominal fistula and repeated the same amount as the first administration 6 hours after reperfusion.
  • histidine 1 10 minutes before middle cerebral artery occlusion
  • anesthesia was performed by intraperitoneal injection of pentobarbital sodium. Thereafter, the brain was perfused with saline containing heparin and decapitated. The brain was quickly removed and rinsed with saline. Crossover and papillary body tail side Between the edges, the brain was sliced in a coronal shape with a thickness of 2 mm, and these brain slices were washed with 37% C 2% triphenyltetrazolium chloride phosphate buffer (0. lmo lZL, pH7. 4). ) Incubated with solution.
  • the values in the table indicate the size of the cerebral infarction (mean soil standard deviation), and “*” is significant at 0.05 compared to the control group. This is the case when p was significant at 0.01.
  • frozen sections of the control group that perfused the brain 12 and 24 hours later, and each histidine-administered group (4 groups in total) were used as the neutrophil marker Mieguchi.
  • Immunostaining was performed with an antibody against bar oxidase. By observing these with an optical microscope, the total number of neutrophils on the ischemic and non-ischemic sides was determined. The results are shown in Table 2.
  • frozen slices of a predetermined site obtained from the same rat were immunostained with an antibody against ED1, which is a cell surface marker of macrophages. ED 1 is thought to be present in cells other than macrophages. In fact, ED 1 positive cells were also found on the non-ischemic side in this experiment.
  • neutrophil infiltration was observed on the ischemic side at 12 and 24 hours after 2 hours of ischemia.
  • neutrophil infiltration after 12 hours was significantly suppressed in the histidine administration group.
  • Histidine administration ischemic side 366 soil 149 450 ⁇ 190 363 ⁇ 186
  • the cerebral infarction inhibitor of the present invention has few side effects and can effectively suppress cerebral tissue necrosis caused by long-term ischemia due to cerebral thrombosis, cerebral embolism or the like. Therefore, the cerebral infarction inhibitor of the present invention is extremely useful as a cerebral infarction that has been able to reduce cerebral infarction, which has not been particularly effective until now.

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Abstract

本発明は、実際の脳梗塞に沿う長時間にわたる虚血後の脳組織ネクローシスに対して有効であり、且つ副作用の少ない脳梗塞抑制剤を提供することを課題とする。本発明に係る長時間虚血による脳梗塞の抑制剤は、ヒスチジンを含むことを特徴とする。

Description

明細書 発明の名称
長時間虚血による脳梗塞の抑制剤 技術分野
本発明は、 長時間にわたる脳虚血により引き起こされる脳梗塞を抑制するため の薬剤に関するものである。 背景技術
脳梗塞とは、 脳以外の血管でできた血栓が脳に運搬されたり、 脳血管における 動脈硬化等を原因として脳血管が閉塞したり細くなることによって、 脳の血流が 不足して血流障害組織が壊死に陥る疾病をいう。 いったん脳梗塞が生じると、 壊 死した脳組織は元通りにはならないため、 たとえ生命を取り留めた場合でも、 運 動麻痺や感覚障害、言語障害のみならず痴呆症状が残る場合が多い。その一方で、 近年、 高血圧、 心臓病、 高脂血症、 糖尿病などの生活習慣病といわれる疾病が増 加しており、 脳梗塞の危険性が増している。 したがって、 効果的な脳梗塞の処置 手段が切望される。
ところが、 これまでのところ、 真に有効な治療手段は未だ見出されていない。 例えば、 脳梗塞の原因となった血栓を溶解して血流を再開させるために、 血栓溶 解剤が使用されている。 しかし、 血流再開により生じるフリーラジカルによる障 害も脳梗塞の病態に深く関与しており、 血栓溶解剤のみでは、 脳組織の壊死に対 する根本的な解決方法とはならない。
また、 脳組織障害の原因となるフリ一ラジカルから脳組織を保護するためのフ リーラジカルス力ベンジャーであるエダラボンが市販されている。 しかし、 当該 薬剤には肝機能障害ゃ腎機能障害等の副作用が見られ、 特に、 肝機能検査値異常 など臨床検査値の異常変動は、 投与患者の実に 2 1 . 4 %にも及ぶというデータ もある。 いかに致死的な疾患である脳梗塞に対する治療手段といえども、 この様 に高い副作用発生率には問題がある。
薬剤以外の治療手段としては、 低体温療法がある。 しかし、 その実施に要する 費用が高額である上に、 免疫力の低下による感染症や出血傾向などがあり、 一般 的な実施は困難である。
ところで、脳細胞の壊死（ネクローシス） には至らなくとも、短時間の虚血（一 過性虚血） によって、 神経細胞のプログラム死 （アポトーシス） が引き起こされ ることが知られている。例えば、川本俊樹ら， 「ラット一過性前脳虚血時における L— n i s t i d i n e (singlet oxygen scavenger)の月 ¼： 効果」，月 ¾ネ申経， 第 4 9卷 7号， 第 6 1 2〜 6 1 8頁 （1 9 9 7年） によれば、 5分または 1 0分 の一過性前脳虚血を負荷したところ、 1週間後には海馬 C A— 1領域の錐体神経 細胞の脱落が認められている （遅発性神経細胞死）。 この一過性虚血によるアポト 一シスの主な原因は、 興奮性アミノ酸であるグルタミン酸の細胞外濃度の上昇と されている。 つまり、 グルタミン酸濃度の上昇により細胞内カルシウムイオン濃 度が増加して、 細胞死を誘発する遺伝子が発現したり生化学反応が進行する。 当 該文献には、 斯かるプログラム死が L一ヒスチジンの一過性虚血前投与により抑 制されることが記載されており、 その理由の一つとして、 グルタミン酸濃度の低 減が挙げられている。
また、 Naoto Adachi ら， 「Alleviation of ischemic neuronal damage by postischemic loading with istidine in the rat striatumj， Brain Research, 第 9 98卷， 第 1 3 6〜 1 3 8頁 （2004年） では、 ヒスチ ジン投与を、ラットに 1 5分間の一過性虚血を負荷した直後、 6時間、 24時間、 48時間後の 4回行なうことによって、 虚血から 7日後にアポトーシスによる神 経細胞死を抑制できたことが開示されている。 しかし、 斯かる虚血後投与では、 一過性虚血によるグルタミン酸濃度の上昇がヒスチジン投与時にすでに起こって いるはずであるから、 虚血前投与によるアポトーシス抑制メカニズムとは異なる メカニズムによって神経細胞死が抑制されていると考えられる。
これら公知の知見に関わらず、 一過性虚血における神経細胞死の抑制方法が、 実際の脳梗塞へそのまま適用できるとは限らない。 それは、 上述した様に、 薬剤 投与が虚血前であるか後であるかによつても神経細胞死の抑制メカ二ズムが異な る様に、 虚血による細胞死の発生要因が複雑であることによる。 その上、 実際の 脳梗塞 （脳組織のネクローシス） の直接原因は数時間に及ぶ脳虚血であり、 数分 から十数分の虚血により 7日後に生じる遅発性神経細胞死とはメカニズムが異な る。例えば、一過性虚血によりアポトーシスが生じるのは神経細胞のみであるが、 長時間にわたる虚血によるネクローシスは、 神経細胞のみならずグリア細胞や血 管内皮細胞も含む脳組織全体で起こる。
脳梗塞に対する実際の治療を考慮すると、 血栓や塞栓の発生から治療にかかる までが数分程度ということはあり得ず、 数時間経過しているのが普通である。 そ して、 一刻も早く血栓を除去することにより血流を再開させることが第一である 力 ー且死滅した神経細胞は回復しないことから、 再灌流障害による脳組織の壊 死 （ネクローシス） を最小限に抑えることが極めて重要になる。 この際、 後日進 行するアポトーシス対策は二の次にすべきであり、 また、 アポトーシスの抑制に 有効であった処置が、 ネクローシスの抑制にも有効であるとは限らない。 発明の開示
上述した様に、 短時間虚血から数日を経て生じる神経細胞のアポトーシスにつ いては、 学術的な興味もあって研究実績が発表されている。 しかし、 斯かる知見 力 長時間にわたる虚血によって直接引き起こされる脳組織のネクローシスに対 して適用できるとは限らない。 その一方で、 長時間にわたる虚血後に生じる脳組 織のネクローシスに対しては、 副作用の点も含めて真に有効な抑制方法がないこ とから、 その処置方法が切望されている。
そこで、 本発明が解決すべき課題は、 実際の脳梗塞に相当する長時間にわたる 虚血後の脳組織ネクローシスに対して有効であり、 且つ副作用の少ない脳梗塞抑 制剤を提供することにある。
本発明者らは、 上記課題を解決すべく、 数時間にわたる虚血後の脳組織ネクロ 一シスを抑制できる薬剤につき種々検討を進めたところ、 ヒスチジンの再灌流後 投与が極めて有効であることを見出して、 本発明を完成した。
即ち、 本発明に係る脳梗塞の抑制剤は、 長時間虚血による脳梗塞を抑制するも のであり、 ヒスチジンを含むことを特徴とする。
また、 本発明に係る使用は、 長時間虚血による脳梗塞の治療剤を製造するため にヒスチジンを用いることを特徴とする。
本発明に係る脳梗塞の治療方法は、 長時間虚血による脳梗塞を治療するもので あり、 ヒスチジンを投与することを特徴とする。 図面の簡単な説明
図 1 長時間に及ぶ虚血後にヒスチジンを投与した場合における脳梗塞の抑制効 果を示す写真である。 発明を実施するための最良の形態
本発明の脳梗塞抑制剤は、 ヒスチジンを有効成分とする。 このヒスチジンは、 必須アミノ酸の一つであることから副作用が少ないと考えられ、 大量投与も可能 である。 更にヒスチジンは、 血液脳関門を容易に通過し、 脳内で脱炭酸酵素によ つてヒスタミンに変換される。 このヒスタミンが、 脳組織に作用すると考えられ る。
脳梗塞は、 一般的に、 脳血栓や脳塞栓等による虚血によって生じ、 肉眼でわか る程度の大きさの形態的障害 （ネクローシス） を伴う。 一時的な脳血流の低下や 小さな血栓等によるごく短時間 （例えば、 数分から十数分間） の虚血によるアポ トーシスでは、 数日後、 虚血に弱い部位の神経細胞のみの脱落が生じる。 このァ ポトーシスにより症状が生じたとしても、 脳梗塞の場合よりもはるかに軽度で、 生命を脅かすに至らない。 しかも、 これらネクローシスとアポトーシスの発生メ 力ニズムは、 明らかに異なる。 そこで本発明の脳梗塞抑制剤は、 長時間虚血によ る脳梗塞をターゲットにしている。
ここで、 長時間虚血における 「長時間」 は、 特に制限されないが、 少なくとも 虚血により脳組織のネクローシスが直接引き起こされる程度の時間をいう。 具体 的な時間としては、 虚血の原因や程度、 或いは個人差等にもよるが、 虚血の発生 から実際に処置が行なわれるまでを考慮して、 例えば 1時間以上、 更には 1 . 5 時間以上、 特に 2時間以上を挙げることができる。
本発明の抑制剤の剤形や投与形態は特に問わないが、 脳虚血に対する緊急性を 考慮すれば、 注射剤として静脈内投与することが好ましい。 その場合、 溶媒とし ては、 p Hを調整した生理食塩水、 純水、 蒸留水、 滅菌水等を使用できる。 本発明におけるヒスチジンの投与方法は、 一般的な薬剤の投与量よりも多い。 後述する実施例で示す通り、 体重約 3 0 0 gのラットに対して 2 0 0、 5 0 0、 1 0 0 O m g / k gのヒスチジンを 2回投与した場合、 用量依存的な脳梗塞の抑 制効果が得られた。 斯かる結果から考えると、 ヒ トに対する投与量は、 1回当た り 5 0〜5 0 O m g Z k gとし得る。 但し、 この投与量は、 今後における試験や 患者の状態等によって適宜変更し、 また、 点滴による持続投与も考慮すべきであ る。
本発明に係る脳梗塞抑制剤の投与時は特に制限されないが、 好適には虚血再灌 流中または虚血再灌流後に投与する。 ここで 「虚血再灌流中または虚血再灌流後」 において、 「虚血再灌流中」 と 「虚血再灌流後」 は明確に区別されず、 例えば血栓 溶解剤の投与など虚血再灌流のための何らかの処置の前後、 当該処置と同時、 或 いは当該処置から所定時間後などを表す。 少なくとも、 虚血前の投与は 「虚血再 灌流中または虚血再灌流後」 には含まれない。 虚血前における投与は実質的に予 防剤としての使用となり、突発的に発生しその時期を特定できない脳梗塞の場合、 虚血前投与は不可能である。 また、 後述する実施例の結果によれば、 ヒスチジン の虚血前投与のみでは、 長時間に及ぶ虚血の場合には効果を示さない。
好適には、 本発明の脳梗塞抑制剤は再灌流後に投与する。 再灌流障害による脳 組織のネクローシスを本発明の脳梗塞抑制剤の投与により最小限に抑えることが 重要だからである。 より好ましくは、 再灌流の直後に投与する。 ここでの 「直後」 は、 厳密に再灌流の直後をいうものではなく、 例えば血栓溶解剤の投与など虚血 再灌流のために何らかの処置をしてから 3 0分以内をいう。
また、 本発明の脳梗塞抑制剤は、 複数回にわたって或いは持続的に投与するこ とが好ましい。 脳血管の長時間にわたる閉塞では、 血流が再開しても、 好中球等 による炎症細胞浸潤が深く関与する血管の再狭窄が起こることが多い。 従って、 脳梗塞の処置においては、 この血管再狭窄や炎症反応を防ぐために、 脳組織のヒ スタミン濃度を長時間にわたって高く維持する必要があるからである。 具体的に は、 虚血再灌流中または虚血再灌流直後とその後 4〜 8時間に 1回、 より好適に は虚血再灌流中または虚血再灌流直後とその後 4〜8時間ごとに 2回以上 （計 3 回以上） 投与することが好ましい。 また、 持続的に投与する場合には、 点滴等に より 1回分の投与量を 1〜数時間かけて投与することが好ましい。
以下、 実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、 本発明はもとより下 記実施例により制限を受けるものではなく、 前 ·後記の趣旨に適合し得る範囲で 適当に変更を加えて実施することも可能であり、 それらはいずれも本発明の技術 的範囲に含まれる 実施例
実施例 1
51匹のウィスター系雄性ラット （体重：約 300 g) を、 コントロール群（1 2匹）、 虚血前における 1000mg/k gヒスチジン投与群 （8匹）、 虚血後 2 0 Omg/k gヒスチジン投与群（8匹）、虚血後 50 Omg/k gヒスチジン投 与群 （10匹）、 虚血後 1000mg/k gヒスチジン投与群 （1 3匹） の 5群に 分けた。 これらラットを、 2%ハロタン、 49%酸素および 49%笑気ガス （N2 o) の混合ガスにより麻酔し、 自発呼吸させた。 次いで、 仰向けにしたラットの 頸部を正中切開し、 右総類動脈を露出させた。 へパリン （100単位） を腹腔内 投与した後、 総頸動脈の内頸と外類の分枝部からシリコンコーティングした 4 · 0ナイロン糸を右内類動脈に挿入することによって、 右中大脳動脈の基始部を閉 塞した。 ナイロン糸の先端は、 分岐部から 18 mmの位置に置いた。 切開部を縫 合した後、 麻酔から回復させた。 術中、 電子式温度計を直腸に揷入し、 ランプに より直腸温を 37. 0±0. 1°Cに維持した。 麻酔から回復した後には、 全ての ラットで対側肢に麻痺が認められた。
血流を再開する 5分前に、 ラットを再度麻酔した。 皮膚縫合を開いた後、 ナイ ロン糸を 5 mm抜去することによって、 中大脳動脈閉塞から 2時間後に脳におけ る血流を再開させた。再び切開部位を縫合し、生理食塩水若しくはヒスチジン（2 00、 500または 100 OmgZk g) を腹腔内投与した。 ヒスチジンは、 p H4. 0に塩酸で調整した生理食塩水にいったん溶解した後、 水酸化ナトリウム により pHを 6. 0に戻して使用した。 麻酔から回復させた後、 食餌と水を自由 に与えた。 コントロール群とヒスチジンの虚血後投与群には、 生理食塩水または ヒスチジンの腹腔內投与を、 再灌流から 6時間後に初回投与と同量繰り返した。 なお、 虚血前ヒスチジン投与群には、 中大脳動脈閉塞の 10分前にヒスチジン 1
00 Omg/k gを投与し、 血流再開後には何も投与しなかった。
血流再開から 24時間経過した後、 ペントバルビタールナトリゥムを腹腔内投 与することにより麻酔した。その後、へパリンを加えた生理食塩水で脳を灌流し、 断頭した。 速やかに脳を取り出し、 生理食塩水ですすいだ。 視交叉と乳頭体尾側 端との間で脳を 2mmの厚さで冠状にスライスし、 これらの脳スライスを 37°C の 2%塩化トリフエニルテトラゾリゥムのリン酸緩衝液 （0. lmo lZL、 p H7. 4) 溶液でインキュベートした。 その結果、 生存細胞に存在する脱水素酵 素の作用により塩化トリフエニルテトラゾリゥムは還元され、 組織が暗赤色に染 色された。 一方、 梗塞部位における死滅組織は染色されなかった。 これらの脳ス ライスを、 リン酸緩衝ホルマリン中で一晩保存した。結果を図 1に示す。その後、 ヒスチジン投与に関与しなかった第三者的な実験者が、 コンピュータを用いて梗 塞部位の大きさを測定した。 また、 得られた脳梗塞部位の大きさを分散分析とシ エツフェテス ト （S c h e f f e t e s t) で検定した。 結果を表 1に示す。
[表 1]
Figure imgf000009_0001
表中の値 （単位： mm 3) は脳梗塞の大きさ （平均土標準偏差） を示し、 「*」 は、コントロール群に対して pく 0.05で有意であった場合、 「**」は pく 0. 01で有意であった場合である。
以上の結果によれば、 生理食塩水のみを投与したコントロール群では、 2時間 にわたる虚血によって、線条体と大脳皮質の両方で梗塞が生じていた（図 1参照）。 虚血前における 100 OmgZk gヒスチジン投与群では、 梗塞の大きさはコン トロール群と比べ有意な差がなかった。 一方、 虚血後にヒスチジンを投与したグ ループでは、 投与量に応じて梗塞の大きさが低減した。 即ち、 2時間虚血後再灌 流の直後と 6時間後にヒスチジンを 200、 500または 100 OmgZk g投 与した群では、 コントロール群に比べて、 梗塞部位がそれぞれ 71 %、 39%、 7%に抑制され、 50 OmgZk g投与群と l O O OmgZk g投与群において、 コントロール群との比較で有意差が認められた。 以上の結果から、 本発明によれ ば、 長時間虚血を原因とする脳組織のネクロ一シスをヒスチジンの虚血後投与に より低減できることが実証された。 実施例 2
虚血による臓器障害の原因のひとつとして血流再開通後の再灌流障害があり、 炎症反応は再灌流障害を引きおこす重要な因子である。 そこで、 血流再開後にお ける炎症の指標として、 好中球とマクロファージの数を測定した。
3 2匹のウィスター系雄性ラット（体重：約 3 0 0 g )を 8匹ずつ 4群に分け、 上記実施例 1と同様に中大脳動脈を 2時間閉塞した。 血流再開直後と 6時間後の 2回、 コントロールである 2群には生理食塩水を、 残りの 2群には 1 0 0 O m g / k gヒスチジンを上記実施例 1と同様に腹腔内投与した。 次いで、 血流再開か ら 1 2時間後または 2 4時間後に生理食塩水で脳を灌流した後、脳を取り出した。 この脳のブレダマ （大泉門） から 1 . 7 mm吻側、 0 . 7 mm吻側および 0 . 3 mm尾側近辺の冠状断において、 厚さ 6 μ mの凍結切片を作成した。
得られた凍結切片のうち、 1 2時間後および 2 4時間後に脳を灌流したコント ロール群、 並びに各ヒスチジン投与群 （計 4群） の凍結切片を、 好中球のマーカ —であるミエ口バーオキシダ一ゼに对する抗体で免疫染色した。 これらを光学顕 微鏡で観察することによって、 虚血側と非虚血側における好中球の総数をそれぞ れ求めた。 結果を表 2に示す。 また、 同じラットから得られた所定部位の凍結切 片をマクロファージの細胞表面マーカ一である E D 1に対する抗体で免疫染色し た。 なお、 E D 1はマクロファージ以外の細胞にも存在すると考えられており、 実際、本実験でも非虚血側にも E D 1陽性細胞が認められた。し力 し表 2の通り、 非虚血側には好中球は認められず、 炎症は起こっていない。 そこで、 E D 1陽性 細胞に関しては、 虚血側と非虚血側における細胞数の差も求め、 これをマクロフ ァージ数として各群で比較検討した。 なお、表 2と 3中、 「*」 は、 F i s h e r， s P L S D (protected least significant differenceリ アス卜によりコン トロール群に対して p < 0 . 0 5で有意であった場合、 「* *」 は pく 0 . 0 1で 有意であった場合である。 [表 2]
再灌流開始から 12時間後の好中球数
Figure imgf000011_0001
表 2の通り、 2時間の虚血から 1 2時間後と 24時間後において虚血側で好中 球の浸潤が認められた。 一方、 ヒスチジン投与群では 1 2時間後の好中球浸潤が 有意に抑制された。
ほ 3]
再灌流開始から 12時間後の ED1陽性細胞数
ブレグマから ブレグマから ブレグマから
+， . 7mm + 0. 7mm —0. 3mm
非虚血側 194±54 263±85 245±39
コントロール 虚血側 362 ±140 522±241 297±96
差 168±119 259 ±169 74±74
非虚血側 238 ±95 328±113 309 ±72
ヒスチジン投与 虚血側 366土 149 450±190 363±186
差 135±101 123±100* 92±107 再灌流開始から 24時間後の ED1陽性細胞数
ブレグマから ブレグマから ブレグマから
+1. /mm + 0. 7mm — 0. 3mm
非虚血側 116±26 141±50 195±61
コント口一ル 虚血側 371±101 419±126 509 ±206
差 255 ±102 279±137 315±170
非虚血側 104±28 124±34 150±46
ヒスチジン投与 虚血側 230±57 264±101 340±107
差 125±72' 141±104* 190±93* 表 3の通り、 2時間の虚血から 1 2時間後、 ヒスチジン投与群ではブレダマか ら + 0 . 7 mmの断面で E D 1陽性細胞数が有意に減少しており、 2 4時間後に は全ての断面で有意に減少した。
以上の結果より、 長時間に及ぶ虚血後にヒスチジンを投与することによって、 脳における好中球やマクロファージの浸潤を抑制することができ、 結果として虚 血後の炎症反応を抑制できることが明らかにされた。 産業上の利用可能性
本発明の脳梗塞抑制剤は、 副作用が少ない上に、 脳血栓や脳塞栓等による長時 間にわたる虚血を原因とする脳組織ネクローシスを効果的に抑制することができ る。 従って、 本発明の脳梗塞抑制剤は、 これまで特に有効な処置手段のなかった 脳梗塞を低減できるものとして、 極めて有用である。

Claims

請求の範囲
1. ヒスチジンを含むことを特徴とする長時間虚血による脳梗塞の抑制剤。
2. 1時間以上の長時間虚血による脳梗塞を抑制するためのものである請求項 1に記載の脳梗塞抑制剤。
3. 虚血再灌流中または虚血再灌流後に投与するものである請求項 1または 2 に記載の脳梗塞抑制剤。
4. 虚血再灌流の直後に投与するものである請求項 1または 2に記載の脳梗塞 抑制剤。
5. 複数回投与するものである請求項 1〜 4のいずれかに記載の脳梗塞抑制剤。
6. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4〜 8時間後に投与するも のである請求項 5に記載の脳梗塞抑制剤。
7. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4〜 8時間ごとに 2回以上 投与するものである請求項 5に記載の脳梗塞抑制剤。
8. 持続的に投与するものである請求項 1〜4のいずれかに記載の脳梗塞抑制 剤。
9. 1回当たりの投与量が 50〜50 Omg/k gである請求項 1〜8のいず れかに記載の脳梗塞抑制剤。
10. 長時間虚血による脳梗塞の治療剤を製造するためのヒスチジンの使用。
1 1. 1時間以上の長時間虚血による脳梗塞の治療剤を製造するためのもので ある請求項 10に記載の使用。
1 2. 虚血再灌流中または虚血再灌流後に投与する治療剤を製造するためのも のである請求項 10または 1 1に記載の使用。
13. 虚血再灌流の直後に投与する治療剤を製造するためのものである請求項 10または 1 1に記載の使用。
14. 複数回投与する治療剤を製造するためのものである請求項 10〜1 3の いずれかに記載の使用。
1 5. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4~8時間後に投与する 治療剤を製造するためのものである請求項 14に記載の使用。
1 6. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4〜 8時間ごとに 2回以 上投与するものである請求項 14に記載の使用。
1 7. 持続的に投与する治療剤を製造するためのものである請求項 10〜1 3 のいずれかに記載の使用。
18. 1回当たりの投与量が 50〜500mg/k gである治療剤を製造する ためのものである請求項 10〜1 7のいずれかに記載の使用。
1 9. ヒスチジンを投与することを特徴とする長時間虚血による脳梗塞の治療 方法。
20. 1時間以上の長時間虚血による脳梗塞を治療するものである請求項 1 9 に記載の方法。
21. 虚血再灌流中または虚血再灌流後にヒスチジンを投与する請求項 1 9また は 20に記載の治療方法。
22. 虚血再灌流の直後にヒスチジンを投与する請求項 1 9または 20に記載 の治療方法。
23. ヒスチジンを複数回投与する請求項 1 9〜 22のいずれかに記載の治療
24. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4〜 8時間後にヒスチジ ンを投与する請求項 23に記載の治療方法。
25. 虚血再灌流中または虚血再灌流直後と、 その後 4〜8時間ごとに 2回以 上投与するものである請求項 23に記載の脳梗塞抑制剤。
26. ヒスチジンを持続的に投与する請求項 1 9〜 22のいずれかに記載の治 療方法。
27. ヒスチジンを 1回当たり 50〜500mgZk g投与する請求項 1 9〜 26のいずれかに記載の治療方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5298028B2 (ja) * 2007-12-26 2013-09-25 株式会社大塚製薬工場 脳虚血障害治療剤
JPWO2016056631A1 (ja) * 2014-10-08 2017-07-27 味の素株式会社 評価方法、評価装置、評価プログラム、評価システム、及び端末装置

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01180823A (ja) * 1988-01-13 1989-07-18 Sawai Seiyaku Kk 脳障害処置剤

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2579596B1 (fr) * 1985-03-26 1987-11-20 Inst Nat Sante Rech Med (imidazolyl-4) piperidines, leur preparation et leur application en therapeutique
US5280038A (en) * 1992-03-13 1994-01-18 Virginia Commonwealth University Histidine as a protective agent in cardiac surgery and myocardial ischemic syndrome
US6380254B2 (en) * 1994-01-24 2002-04-30 Leigh Biotechnology, Inc. Method and composition for treating and preventing pathogenic effects caused by intracellular calcium overload

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01180823A (ja) * 1988-01-13 1989-07-18 Sawai Seiyaku Kk 脳障害処置剤

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADACHI N. ET AL, BRAIN RESEARCH, vol. 1039, no. 1-2, March 2005 (2005-03-01), pages 220 - 223, XP004798648 *
ADACHI N. ET AL: "Alleviation of ischemic neuronal damage by postischemic loading with histidine in the rat striatum", BRAIN RESEARCH, vol. 998, no. 1, February 2004 (2004-02-01), pages 136 - 138, XP002998921 *
DATABASE CAPLUS [online] ADACHI N. ET AL: "Prevention of brain infarction by postischemic administration of histidine in rats", XP003006482, Database accession no. 2005:255930 *
KAWAMOTO T. ET AL: "Rat Ikkasei Zenno Kyoketsuji ni Okeru L-histidine (singlet oxygen scavenger) no No Hogo Koka", NOSHINKEI, vol. 49, no. 7, 1997, pages 612 - 618, XP002998920 *
See also references of EP1795193A4 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5298028B2 (ja) * 2007-12-26 2013-09-25 株式会社大塚製薬工場 脳虚血障害治療剤
JPWO2016056631A1 (ja) * 2014-10-08 2017-07-27 味の素株式会社 評価方法、評価装置、評価プログラム、評価システム、及び端末装置

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