WO2005097976A1

WO2005097976A1 - 抗原パルスして得られた樹状細胞

Info

Publication number: WO2005097976A1
Application number: PCT/JP2005/006679
Authority: WO
Inventors: Morikazu Onji; Sk. Md. Fazle Akbar
Original assignee: Ehime University; Biosystem Medical Technology(Shanghai) Co., Ltd.; HASEGAWA, Hyo
Priority date: 2004-04-06
Filing date: 2005-04-05
Publication date: 2005-10-20

Abstract

　疾患、主としてＢ型肝炎の予防、治療に有効な樹状細胞を提供する。　樹状細胞をＨＢｓ抗原でパルスする工程を含む方法によって得られたＨＢｓ抗原提示能を有する樹状細胞は、Ｂ型肝炎の予防、治療に有効である。ＨＢｓ抗原として、ＨＢワクチンに含まれるＨＢｓ抗原を用いることができる。樹状細胞をワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られたワクチンパルス樹状細胞は、患者だけでなく健常者にも用いることができる。パルスに用いるワクチンとしては、様々な種類のワクチンを用いることができる。

Description

明細書

抗原パルスして得られた樹状細胞

技術分野

[0001] 本発明は、疾患の予防又は治療に用いることができる榭状細胞に関する。

背景技術

[0002] (榭状細胞療法とその問題点）

癌治療等の分野において、細胞免疫療法の一種である榭状細胞療法が注目されている。

[0003] 榭状細胞は、生体内で最も強い抗原提示能を有する抗原提示細胞 (antigen pre senting cell: APC)であり、取り込んだ抗原ェピトープを T細胞に提示することによつて Τ細胞を活性ィ匕し、免疫応答を高めることができる。

[0004] 榭状細胞療法は、この榭状細胞を、癌細胞から抽出した物質又は癌特異的抗原を用いて、生体外でパルスし、抗原提示能を亢進させて生体内に戻す治療法である。

[0005] 癌細胞力抽出した物質は、一般に、多種類の物質の混合物である。従って、癌細胞から抽出した物質を用、てパルスした榭状細胞は、細胞抽出物質中の多種類の癌抗原によって榭状細胞がパルスされたと考えられるため、癌に対する強力な免疫反応が誘導されると予想される。しかし、このように多種類の物質の混合物によってパルスした場合は、榭状細胞が提示する抗原を特定することができない。従って、癌患者に対して使用することは許される力健常者に対して使用することは許されない。

[0006] また、癌特異的抗原を用いてパルスした榭状細胞にぉ、ては、榭状細胞が提示する抗原を特定することができるが、現在同定されて!ヽる癌特異的抗原の数自体がまだ多くないという問題点がある。

[0007] 榭状細胞に抗原を提示させる別の態様として、例えば、抗原に由来するペプチドをコードする遺伝子を榭状細胞に導入し、発現させる方法が知られている。しかし、このようにして調整した榭状細胞が、特定の抗原に対して強力な免疫応答を引き起こすことが可能であったとしても、現段階では、遺伝子操作を用いた榭状細胞を、疾患の予防等のために健常者に投与することは許されて、な、。 [0008] (肝炎について）

肝炎とは、肝臓に起こる炎症であり、主にウィルス、アルコール、薬物が原因となつて引き起こされる。最も多い肝炎は肝炎ウィルスが原因のものであり、今日まで、 7種類の肝炎ウィルスが見つかつている。また、日本のウィルス性肝炎においては、 B型、 C型がそのほとんどを占める。

[0009] 肝炎は、急性肝炎と慢性肝炎に大別でき、慢性肝炎とは、肝炎が 6ヶ月以上続くものを言う。 A型肝炎は、経口感染し、急性肝炎で留まり慢性化はしない。一方、 B型、 C型肝炎は、血液を介して感染し、母子間の垂直感染、家族や異性間の水平感染がある。また、 B型、 C型肝炎は、急性肝炎力も慢性肝炎に進行するケースが多ぐ慢性化すると、肝硬変や肝臓癌等の重い肝臓疾病への移行率が極めて高いと言われている。

[0010] (B型肝炎について）

B型肝炎の患者は全世界的に分布しており、世界に 3億 5千万人の B型肝炎ウィルス感染者がいると言われている。特に、中国における感染者は 1億 2千万人と推定され極めて多ぐ東南アジア全体で、全世界の感染者数の 70%以上を占めるとされる。また、世界で毎年約 100万人が、この疾患が原因で死亡していることが報告されている。日本においては、 100万人以上の B型肝炎ウィルス感染者がいると推定され、その 10%程度が慢性肝炎患者であると推定される。

[0011] (B型肝炎の治療法とその問題点）

B型肝炎には特効的な治療薬はない。従って、治療は、ウィルスの数を減らしてその活動を抑えることが目的となる。代表的な治療法として、インターフェロン療法とラミブジン療法が知られて、る。

[0012] インターフェロン療法は、今から 20年ほど前に始められた B型肝炎の最初の治療法で、インターフェロンが免疫系の働きを助けてウィルスの増殖を抑える役割を果たす。インターフェロン療法は、ウィルス数が少ないほど効果が期待できるため、一般的に、ウィルス数力 ¾型肝炎の 1000分の 1である C型肝炎の治療に優れた効果を発揮する一方、 B型肝炎の治療には、約 20%の患者にしか効果を望めない。また、肝硬変に移行すると、よりインターフェロンが効きに《なる。さらに、治療に用いられるインタ一フエロンは、開発し製品とするまでに大きなコストがかかり、 1クールの治療で患者に 200〜300万円の大きな経済的負担をもたらす等の問題点も多い。

[0013] ラミブジンは、本来、エイズの治療薬として開発された薬剤であるが、 B型肝炎の治療にも有効であることが知られている。ラミブジンは、ウィルス DNAの合成を直接抑える働きがあり、 B型肝炎の急速な悪ィ匕ゃ劇症化を食い止める効果がある。ラミブジンは、インターフェロンが効果を示さな力つた B型肝炎患者にも効果を示すことが報告されているが、ウィルスが増殖状態にない時には効果が示されない。さらに、長期投与によってラミブジン耐性ウィルスが現れる等の問題点がある。

[0014] また、これらの B型肝炎の治療法は、効果の評価方法がそれぞれ異なって!/、るため、一律に効果を比較することができない。また、これらの治療法を用いても、 B型肝炎ウィルスを体内から完全になくすことは不可能であると考えられる。従って、前述のような B型肝炎患者の増加を防ぐためには、 B型肝炎を予防することが重要であると考えられる。

[0015] (B型肝炎の予防法とその問題点）

B型肝炎の予防の観点からは、一般に、 HBワクチンが有効である。

[0016] B型慢性肝炎を予防するためには、健常人であっても、体内に抗 HBs抗体を持ち、維持することが重要である。今日の HBワクチンは、 B型肝炎ウィルスの表面抗原である HBs抗原に基づいて作られている。通常、この HBワクチンを 3回接種することにより、 HBワクチンの効くヒトには、体内に抗 HBs抗体ができる。抗体ができたヒトは、その後 B型肝炎に感染することがないが、数年後に抗体値が低下した場合でも、一度抗 HBs抗体が体内にできていれば感染を免れる可能性があると考えられる。また、追加接種をすることによって、抗体値を再び高めることもできる。

[0017] し力し、 HBワクチンにも、いくつかの問題点が存在する。

[0018] まず、健常者のうちの約 10%は HBワクチンが非奏功（non—responder)であり、 HBワクチンを投与しても抗 HBs抗体を産生することができな、。医療従事者にぉヽても HBワクチン non— responderは少なくなぐ日本には数十万人いると考えられる

[0019] また、免疫能の低下を伴う疾患に力かって、る人、例えば、 HIV患者、肝疾患患者、透析患者においても、 HBワクチンが十分に効果を発揮できない。肥満者や喫煙者にも免疫能の低下がみられる力これらの人々も HBワクチンに対する反応性が低い

[0020] さらに、肝移植対象者等の免疫抑制剤投与中の人にも、 HBワクチンが効力ないため、患者は抗 HBs抗体を産生することができない。しかし、 B型肝炎関連肝移植においては、抗 HBs抗体値を維持することが治療成績に大きな影響を及ぼすため、肝移植後、患者は繰り返し抗 HBsヒト免疫グロブリンを投与することが必要となる。投与は 2週間に 1回の頻度で必要であり、このことは年間 250万円という大きな経済的負担をもたらす。これからは、特に患者の多い東南アジアを中心に、 B型肝炎関連肝移植が激増すると考えられるため、この経済的な問題の解決が世界的に必要とされている発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0021] 本発明は、疾患の予防又は治療に有効な榭状細胞を提供することを目的とし、特に、 B型肝炎の予防又は治療に好適に利用できる榭状細胞を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0022] 1、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞

本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、榭状細胞を HBs抗原でパルスする工程を含む方法によって得られた HBs抗原提示能を有する榭状細胞である。

[0023] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、 HBs抗原ェピトープを T細胞に提示することによって T細胞を活性ィ匕し、 HBs抗原に対する免疫応答を高めることができる。従って、本発明によれば、 B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することができる。

[0024] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞にぉ、て、前記方法はさらに、血液から前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。

[0025] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞において、前記方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好ま、。

[0026] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞において、前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒト由来の榭状細胞を得ることができるため、本発明による HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、ヒトに投与することが可能である。従って、本発明によって、ヒトの B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することができる。

[0027] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞にぉ、て、前記 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原であることが好ましい。例えばヒトの場合、 HBワクチンとして実際に販売されるものは、健常者を含むヒトに安全性、有効性が認められ、認可を受けたものである。従って、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞によれば、例えばヒトに安全かつ有効に用いることができる HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することができる。また、 HBワクチンは健常者に対して使用できるものであることから、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、 B型肝炎患者等に対する B型肝炎の治療目的のみならず、健常者に対しても、 B型肝炎の予防目的で使用することができる。なお、ヒトに限らず他の生物についても、その生物に安全かつ有効な HB ワクチンを用いてパルスした榭状細胞を用いることによって、その生物の B型肝炎を予防又は治療することができる。

[0028] 2、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法

本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法は、榭状細胞を HBs抗原でノルスする工程を含むことを特徴とする。これによれば、 B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることができる。

[0029] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法はさらに、血液から前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。 [0030] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好まし、。

[0031] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法において、前記生物は、ヒトとすることが好ましい。これによれば、ヒトの B型肝炎の予防又は治療に有効な、 H Bs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることが可能である。

[0032] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法におヽて、前記 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原であることが好ましい。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することができる。

[0033] 3、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物

本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物は、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含むことを特徴とする。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、例えば、他の物質と混合した状態、他の物質に懸濁した状態、他の物質と組み合わせた状態等で使用することができる。具体的には、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、例えば、 PBS、生理食塩水、 RPMI 1640培地等に懸濁した態様や、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞に、例えば、 TNF- a、 IL 12、 HBワクチン、 GM— CSF、 OK432、その他免疫賦活剤等を添加した態様で用いることができる。従って、本発明によれば、本発明の HBs 抗原提示能を有する榭状細胞を、使用目的に適した態様で又は本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の効果を高める態様で使用することが可能になる。

[0034] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物は、さらに HBワクチン添加物を含むことが好まヽ。

[0035] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物において、前記組成物の形態としては、例えば、実験試薬又は実験キットがあげられる。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、研究、例えば免疫研究に適した態様で用!/、ることができる。

[0036] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物において、前記組成物は、医薬組成物とすることが好ましい。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、医療、例えば、 B型肝炎の予防又は治療に適した態様で用いることができる。

[0037] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物において、前記組成物は、免疫応答活性ィ匕製剤であることが好ましい。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、 HBs抗原に対する免疫応答を活性化するのに適した投与剤形で用いることができる。

[0038] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物において、前記組成物は、細胞ワクチンであることが好ましい。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、生体内に直接投与することが可能になり、 HBs抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することができる。

[0039] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物において、前記細胞ヮクチンは、 B型肝炎の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。これによれば、前記細胞ワクチンに含まれる本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞が、生体内で HBs抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することによって、 B型肝炎を予防又は治療することが可能になる。

[0040] 4、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療方法本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療方法は、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いることを特徴とする。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞が、 HBs抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することによって、 B型肝炎を予防又は治療することができる。例えばヒトの場合、これまでの HBワクチンが非奏功であった健常者又は免疫能の低下を伴う疾患に力かっている人、免疫抑制剤投与中の人等、これまでの HBワクチンが効果を発揮できな力つた人が、本発明の B型肝炎の予防又は治療方法によって、抗 HBs抗体を産生することができ、 B型肝炎を予防又は治療することが可能になる。

[0041] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療方法において、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、生物に投与する工程を含むことが好ましい。これによれば、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞 1S 生体内で、 HBs抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することによって、 B型肝炎を予防又は治療することができる。また、本発明の B型肝炎の予防又は治療方法は、 HB ワクチンを直接生体内に投与するこれまでの B型肝炎の予防又は治療方法と比較して、高い効果を発揮することが可能である。

[0042] 本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療方法において、前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒトの B型肝炎を予防又は治療することが可能である。

[0043] 5、ワクチンパルス榭状細胞

本発明のワクチンパルス榭状細胞は、榭状細胞をワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られたワクチンパルス榭状細胞である。

[0044] 本発明のワクチンパルス榭状細胞にぉ、て、「ワクチンパルス榭状細胞」とは、ワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られた抗原提示能を有する榭状細胞のことを言う。

[0045] 本発明のワクチンパルス榭状細胞は、ワクチンに含まれる抗原ェピトープを T細胞に提示することによって T細胞を活性ィ匕し、前記抗原に対する免疫応答を高めることができる。従って、本発明によれば、疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0046] また、例えばヒトの場合、ワクチンとして実際に販売されるものは、ヒトに安全性、有効性が認められ、認可を受けたものである。従って、本発明によれば、例えばヒトに安全かつ有効に用いることができるワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。なお、ヒトに限らず他の生物についても、その生物に安全かつ有効なワクチンを用いてパルスしたワクチンパルス榭状細胞を用いることによって、その生物の疾患を予防又は '治療することができる。

[0047] 本発明のワクチンパルス榭状細胞にお!、て、前記方法はさらに、血液から前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明のワクチンパルス榭状細胞を提供することが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。

[0048] 本発明のワクチンパルス榭状細胞において、前記方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好まヽ。

[0049] 本発明のワクチンパルス榭状細胞において、前記生物は、ヒトとすることが好ましい。これによれば、ヒト由来の榭状細胞を得ることができるため、本発明によるワクチンパルス榭状細胞を、ヒトに投与することが可能である。従って、本発明によって、ヒト疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0050] 本発明のワクチンパルス榭状細胞において、前記パルスに使用するワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。これによれば、これらのワクチンに含まれて、る、前記疾患に関わる抗原を提示するワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。従って、前記疾患を予防又は治療することができる。

[0051] 本発明のワクチンパルス榭状細胞において、前記パルスに使用するワクチンは、肝炎ワクチンであることが好ましい。肝炎ワクチンとしては、例えば、 A型肝炎ワクチン、 B型肝炎ワクチン等が知られている。例えばヒトの場合、肝炎ワクチンとして実際に販売されるものは、健常者を含むヒトに安全性、有効性が認められ、認可を受けたものである。従って、本発明によれば、例えばヒトに安全かつ有効に用いることができる肝炎ウィルス抗原提示能を有する肝炎ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。また、肝炎ワクチンは健常者に対して使用できるものであることから、本発明の肝炎ワクチンパルス榭状細胞は、例えば、肝炎患者等に対する肝炎の治療目的のみならず、健常者に対しても、肝炎の予防目的で使用することができる。なお、ヒトに限らず他の生物についても、その生物に安全かつ有効な肝炎ワクチンを用いてパルスした榭状細胞を用いることによって、その生物の肝炎を予防又は治療することができる。

[0052] 本発明のワクチンパルス榭状細胞にぉ、て、前記肝炎ワクチンは、 HBs抗原を含む HBワクチンであることが好ましい。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有するワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0053] 6、ワクチンパルス榭状細胞の製造方法

本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法は、榭状細胞をワクチンでパルスする工程を含むことを特徴とする。これによれば、疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を得ることができる。 [0054] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法はさらに、血液から前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明のワクチンパルス榭状細胞を得ることが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。

[0055] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好まヽ。

[0056] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法にお!、て、前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒト疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を得ることが可能である。

[0057] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法において、前記パルスに使用するヮクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。これによれば、前記疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0058] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法において、前記パルスに使用するヮクチンは、肝炎ワクチンであることが好ましい。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる肝炎の予防又は治療に有効な、肝炎ウィルス抗原提示能を有する肝炎ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0059] 本発明のワクチンパルス榭状細胞の製造方法にお!、て、前記肝炎ワクチンは、 HB s抗原を含む HBワクチンであることが好ましい。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる B型肝炎の予防又は治療に有効な、HBs抗原提示能を有するワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0060] 7、ワクチンパルス榭状細胞を含む組成物

本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物は、本発明のワクチンパルス榭状細胞を含むことを特徴とする。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、例えば、他の物質と混合した状態、他の物質に懸濁した状態、他の物質と組み合わせた状態等で使用することができる。具体的には、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、例えば、 PBS、生理食塩水、 RPMI 1640培地等に懸濁した態様や、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞に、例えば、 TNF- a、 IL—12、 HB ワクチン、 GM— CSF、 OK432、その他免疫賦活剤等を添加した態様で用いることができる。従って、本発明によれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、使用目的に適した態様で又は本発明のワクチンパルス榭状細胞の効果を高める態様で使用することが可能になる。

[0061] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物は、さらにワクチン添加物を含むことが好ましい。

[0062] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物にぉヽて、前記組成物は、実験試薬又は実験キットであることが好ましい。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、研究、例えば免疫研究に適した態様で用いることができる。

[0063] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物において、前記組成物は、医薬組成物であることが好ましい。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、医療、例えば、疾患の予防又は治療に適した態様で用いることができる。

[0064] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物にぉヽて、前記組成物は、免疫応答活性ィ匕製剤であることが好ましい。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、ワクチンに含まれていた抗原に対する免疫応答を活性化するのに適した投与剤形で用いることができる。

[0065] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物にぉヽて、前記組成物は、細胞ヮクチンであることが好ましい。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、生体内に直接投与することが可能になり、ワクチンに含まれていた抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することができる。

[0066] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物において、前記細胞ワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。これによれば、前記細胞ヮクチンに含まれる本発明のワクチンノルス榭状細胞力生体内で、ワクチンに含まれていた抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することによって、前記疾患を予防又は治療することが可能になる。

[0067] 8、ワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療方法

本発明のワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療方法は、本発明のワクチンパルス榭状細胞を用いることを特徴とする。これによれば、本発明のヮクチンパルス榭状細胞が、ワクチンに含まれて 1ヽた抗原に対する免疫応答を活性化することによって、前記疾患を予防又は治療することができる。例えばヒトの場合、前記疾患を予防又は治療するためにこれまで用いられてきたワクチンが非奏功であった健常者又は免疫能の低下を伴う疾患に力かっている人、免疫抑制剤投与中の人等、ヮクチンが十分な効果を発揮できな力つた人が、本発明の疾患の予防又は治療方法によって、抗体を産生することができるようになり、前記疾患を予防又は治療することが可能になる。

[0068] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療方法にぉ、て、本発明のワクチンパルス榭状細胞を、生物に投与する工程を含むことが好ましい。これによれば、本発明のワクチンパルス榭状細胞力生体内で、ワクチンに含まれていた抗原に対する免疫応答を活性ィ匕することによって、前記疾患を予防又は治療することができる。また、本発明の疾患の予防又は治療方法は、ワクチンを直接生体内に投与することによるこれまでの疾患の予防又は治療方法と比較して、高い効果を発揮することが可能である。

[0069] 本発明のワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療方法にぉ、て、前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒトの疾患を予防又は治療することが可能である。

[0070] 9、ヒト用ワクチンパルス榭状細胞

本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞は、ヒトの B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンパルス榭状細胞であり、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであることを特徴とする。

[0071] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞において、前記ワクチンパルス榭状細胞は、例えば、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しないことが好ましぐさらに CTLを誘導しないことがより好ましい。

[0072] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞は、以下のような利点を有する。癌治療等で行われて！/ヽる榭状細胞療法にお！ヽては、細胞傷害性 T細胞 (CTL)の誘導を目的としているため、 Thlの誘導を促進し、 Th2を誘導しないように榭状細胞を活性ィ匕させている。これに対し、本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞は、例えば、 Th2を誘導し、 Thlおよび CTLを誘導しないため、癌治療等で行われてきた榭状細胞療法とはメカニズムが全く異なる。つまり、本発明におけるワクチンパルス榭状細胞よれば、例えば、 CTLを誘導することなく抗体の産生が可能となり、 CTLによる肝細胞の攻撃に伴う肝障害 (例えば、劇症肝炎等)を引き起こすこともない。従って、本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者および B型肝炎ウィルスキャリアに極めて有用である。なお、本発明のヒト用ワクチンノルス榭状細胞が Thlや CTLを誘導しな

V、と、うメカニズムは不明である。

[0073] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞において、前記榭状細胞をワクチンでパルスする工程において、ノルス時間は、例えば、 8時間〜 24時間であることが好ましい。また、前記榭状細胞取得工程において、単離した単球を GM— CSFおよび IL 4 で共培養することが好まし、。

[0074] 10、ヒト用ワクチンパルス榭状細胞の製造方法

本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞の製造方法は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得るヒト由来の血液力榭状細胞を得る榭状細胞取得工程、および、前記榭状細胞をワクチンでパルスして、ヒトの B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンパルス榭状細胞を得るパルス工程を含む製造方法であって、前記パルス工程にぉ、てパルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであることを特徴とする。本発明の製造方法により得られたヒト用ワクチンパルス榭状細胞によれば、ヒトにおいて、例えば、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しないことが好ましぐさらに CTLを誘導しな、ことが好ま、。

[0075] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞の製造方法において、前記ワクチンパルス工程におけるパルス時間は、 8時間〜 24時間であることが好まし、。

[0076] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞の製造方法の前記榭状細胞取得工程にお

V、て、単離した単球を GM— CSFおよび IL 4と共培養することが好まし、。 [0077] 11、ヒト B型肝炎のための治療および予防のための医薬品

本発明のヒト B型肝炎のための治療および予防のための医薬品は、前記本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞を含むことを特徴とする。本発明の医薬品において、本発明のワクチンパルス榭状細胞力例えば、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しないことが好ましぐさらに CTLを誘導しないことが好ましい。このように、 CTLを誘導しないため、本発明の医薬品によれば、例えば、 CTLによる肝細胞の攻撃等により、劇症肝炎を引き起こすこともない。さらに、本発明の医薬品によれば、 B型肝炎患者はもちろんのこと、 B型肝炎を予防又は治療するためにこれまで用いられてきたワクチンが非奏功であった健常者等、ワクチンが十分な効果を発揮できな力つた人が、抗体を産生することができるようになり、 B型肝炎を予防又は治療することが可能になる。前記 B型肝炎としては、 B型慢性肝炎があげられる。本発明のヒト B型肝炎のための治療および予防のための医薬品の投与形態は特に制限されないが、例えば、皮下投与することが好ましい。

[0078] 12、ワクチンパルス榭状細胞を用いたヒトの B型肝炎の予防又は治療方法

本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞を用いたヒトの B型肝炎の予防又は治療方法は、自己の榭状細胞由来のワクチンパルス榭状細胞を B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリアに投与することを含む予防又は治療方法であって、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたヒト用ワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであることを特徴とする。

[0079] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞を用いたヒトの B型肝炎の予防又は治療方法において、本発明のヒト用ワクチンノルス榭状細胞力例えば、 Th2を誘導し、 Th 1を誘導しないことが好ましぐさらに CTLを誘導しないことが好ましい。本発明の予防又は治療方法によれば、 B型肝炎患者はもちろんのこと、 B型肝炎を予防又は治療するためにこれまで用いられてきたワクチンが非奏功であった健常者等、ワクチンが十分な効果を発揮できな力つた人が、抗体を産生することができるようになり、 B型肝炎を予防又は治療することが可能になる。さらに、本発明の予防又は治療方法は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア自身の榭状細胞を使用して!/、るため、安全性が極めて高いものとなる。前記 B型肝炎としては、 B型慢性肝炎があげられる。本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞を用いたヒトの B型肝炎の予防又は治療方法において、ヒト用ワクチンパルス榭状細胞の投与形態は特に制限されないが、例えば、皮下投与が好ましい。

[0080] 13、ヒト B型肝炎の治療又は予防のためのヒト用ワクチンパルス榭状細胞の使用本発明のヒト B型肝炎の治療又は予防のためのヒト用ワクチンパルス榭状細胞の使用は、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリアから末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたヒト用ワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであり、前記ワクチンパルス榭状細胞を、末梢血を採取した B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリアに投与することを含むことを特徴とする。

[0081] 本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞をヒト B型肝炎の治療又は予防に使用すれば、 B型肝炎患者はもちろんのこと、 B型肝炎を予防又は治療するためにこれまで用 V、られてきたワクチンが非奏功であった健常者等、ワクチンが十分な効果を発揮できな力つた人が、抗体を産生することができるようになり、 B型肝炎を予防又は治療することが可能になる。さらに、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア自身の榭状細胞を使用しているため、安全性が極めて高いものとなる。本発明のヒト用ワクチンパルス榭状細胞力例えば、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しないことが好ましぐさらに CTL を誘導しないことが好ましい。前記 B型肝炎としては、 B型慢性肝炎があげられる。図面の簡単な説明

[0082] [図 1]図 1は、実施例 1における HBワクチンパルス榭状細胞投与前の抗 HBs抗体値を示す。

[図 2]図 2は、前記実施例における HBワクチンパルスによる、榭状細胞の HLA— DR 及び CD86の変化を示すグラフである。 [図 3]図 3は、前記実施例における HBワクチンパルスによる、榭状細胞の T細胞幼若化補助能の変化を示すグラフである。

[図 4]図 4は、前記実施例における HBsメモリー T細胞を用いた、 HBワクチンパルス榭状細胞が HBsメモリー T細胞の増殖能に及ぼす効果を示すグラフである。

[図 5]図 5は、前記実施例における HBsメモリー T細胞を用いた、 HBワクチンパルス榭状細胞が抗 HBs抗体産生能に及ぼす効果を示すグラフである。

[図 6]図 6は、前記実施例における血液生化学的検査による、 HBワクチンパルス榭状細胞の安全性テストの検査項目を示す。

[図 7]図 7は、前記実施例における ALT検査の結果を示すグラフである。

[図 8]図 8は、前記実施例における CRP検査の結果を示すグラフである。

[図 9]図 9は、前記実施例における PT検査の結果を示すグラフである。

[図 10]図 10は、前記実施例における Creatinine検査の結果を示すグラフである。

[図 11]図 11は、前記実施例における血清生化学的検査を用いた自己免疫反応に関する安全性テストの結果を示すグラフである。

[図 12]図 12は、前記実施例における HBワクチンパルス榭状細胞投与による、抗 HB s抗体値の変化を示す。

[図 13]図 13は、前記実施例における HBワクチンパルス榭状細胞投与による、抗 HB s抗体値の変化を示すグラフである。

[図 14]図 14は、前記実施例における HBワクチンパルス榭状細胞投与による、 HBヮクチン non— responderの抗 HBs抗体値の推移を示すグラフである。

[図 15]図 15は、実施例 2における血清生化学的検査を用いた自己免疫反応に関する安全性テストの結果を示すグラフである。

[図 16]図 16は、実施例 3における HBワクチンパルス榭状細胞投与による、抗 HBs抗体値の変化を示すグラフである。

発明を実施するための最良の形態

[0083] 以下、本発明の最良の実施の形態を説明する。本発明は、以下の実施形態に限定されず、本発明の要旨を超えない範囲で種々の変更が可能である。

[0084] 1、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、榭状細胞を HBs抗原でノルスする工程を含む方法によって得られる。本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞によれば、 B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することができる。

[0085] 本実施の形態にぉ、て、「榭状細胞を抗原でパルスする」とは、榭状細胞を、抗原を取り込んで前記榭状細胞内で分解し、前記分解した抗原をペプチドとして提示しうる状態にすることを言う。

[0086] 本実施の形態にぉヽて、榭状細胞を抗原でパルスする具体的な方法としては、例えば、適切なサイト力イン等の存在下に、抗原と榭状細胞とを共存させて培養する方法が挙げられる。

[0087] 榭状細胞を得る方法は、最終的に、抗原を取り込みこの抗原を提示しうる榭状細胞が得られれば特に限定されず、種々の手法を用いることができる。

[0088] 例えば、血液力榭状細胞を得ることができる。具体的には、例えば、当業者に公知の方法を利用して、榭状細胞の前駆細胞を含む血液から榭状細胞を分化誘導する方法又は血液力榭状細胞を直接分離する方法を用いることができる。より具体的には、例えば、骨髄細胞、臍帯血又は末梢血の CD34陽性前駆細胞力主に GM CSFと TNF— αを用いて誘導する方法、臍帯血単核球又は末梢血単核球から主に GM— CSFと IL 4を用、て誘導する方法、末梢血単核球から主に GM— CSFと IFN— αを用いて誘導する方法、末梢血単核球より直接分離する方法等によって、榭状細胞を得ることができる。

[0089] また、これらの榭状細胞を得る方法は、必要に応じてさらに、生物から血液を採取する工程を含むこともできる。前記生物は、 Β型肝炎に感染する可能性の有無によつて特に限定されるものではないが、例えば、 Β型肝炎に感染しうる生物であることが好ましい。前記 Β型肝炎に感染しうる生物には、 Β型肝炎に自然に感染しうる生物や、 Β 型肝炎を人工的に感染させることができる生物を含むことが好ましい。具体的には、前記 Β型肝炎に自然に感染しうる生物としては、例えば、ヒト、チンパンジー等の霊長類や、ウッドチャック、ペキンダック等のァヒル等、前記 Β型肝炎を人工的に感染させることができる生物としては、例えば、リス、ラット、カモ、ガチョウ、サギ、ツル、マウス等を挙げることができる。特に、 B型肝炎による死亡者が世界で増加している点からも、本発明を、前記生物がヒトである場合に使用できる効果は大きい。

[0090] また、血液を利用せずに榭状細胞を得る方法としては、例えば、 ES細胞を分化誘導して榭状細胞を得る方法があげられる。具体的には、例えば、胚盤胞の内部に存在する内部細胞塊力樹立された ES細胞を、適切なフィーダ一細胞やサイト力インとともに培養することによって、榭状細胞に分ィ匕誘導することができる。

[0091] 本実施の形態にぉ、て、榭状細胞を培養する培地につ!、ては、榭状細胞の前駆細胞から榭状細胞への分化誘導、榭状細胞の生存、抗原による榭状細胞のパルス等を阻害しない限り特に限定されないが、例えば、 RPMI 1640培地等を用いることができる。また、好ましくは RPMI 1640培地である。

[0092] 本実施の形態において、榭状細胞の誘導には、サイト力インを使用することができる。榭状細胞の誘導に用いるサイト力インとしては、榭状細胞への分化誘導、榭状細胞の生存、抗原による榭状細胞のパルス等を阻害しない限り特に限定されないが、例えば、 GM— CSF、 TNF— α、 IL— 4、 IFN— α等を用いることができる。

[0093] 本実施の形態において、 HBs抗原の態様は、最終的に、榭状細胞によって提示されることが可能ならば特に限定されず、完全なタンパク質の抗原でも、ペプチド抗原でもよい。

[0094] また、本実施の形態に係る HBs抗原は、例えば、様々な物質や液体と組み合わせた態様で用いることができる。具体的には、例えば、 HBs抗原をリボソーム等のリン脂質二重膜を用いて榭状細胞内に導入することや、 HBs抗原を緩衝液、例えば PBS や、培地、例えば RPMI 1640培地に懸濁して榭状細胞に導入することができる。

[0095] また、 HBs抗原の添カ卩時期は、結果として、 HBs抗原が榭状細胞によって提示されることが可能ならば特に限定されず、例えば、榭状細胞を分化誘導した後に添加することができる。また、分ィ匕誘導時に HBs抗原を添加して、一緒に培養することもできる。また、 HBs抗原のノルス時間も、結果として、 HBs抗原が榭状細胞によって提示されることが可能ならば特に限定されず、例えば、 8時間から 24時間であることが好ましい。また、 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原であることが好ましい。

[0096] ワクチンには、例えば、生ワクチン、不活ィ匕ワクチン、トキソイド等、、くつかの種類が存在する。生ワクチンは、例えば、病原性を弱めたウィルスや細菌を生きたまま接種するワクチンを言う。不活ィ匕ワクチンは、例えば、ウィルスの粒子や細菌の菌体等を精製し、加熱やホルマリン等の薬剤を用いて処理して、病原性を消失又は無毒化して作られるワクチンを言う。トキソイドは、例えば、菌の毒素のみを取り出して精製し、ホルマリンをカ卩えて免疫原性を失わせずに無毒化したものを言う。

[0097] 本実施の形態における HBワクチンは、 HBs抗原が含まれていればその種類が限定されるものではないが、現在日本において、ヒトに使用が許可され販売されている HBワクチンは、不活ィ匕ワクチンに分類される。本実施の形態において、不活化ワクチンである HBワクチンを用いる場合は、例えば、組換え沈降 B型肝炎ワクチンや、沈降 B型肝炎ワクチンを用いることができる。

[0098] 組換え沈降 B型肝炎ワクチンとしては、例えば、 B型肝炎ウィルス DNAの HBs抗原に相当する部分を、酵母菌や動物細胞等の DNAに挿入し発現させることで、ヮクチンの有効成分である HBs抗原を作り、免疫増進剤のアルミニウムゲルを加えて調整したワクチンを用いることができる。動物細胞として、例えば、 CHO細胞を用いて調整したワクチンを用いることができる。

[0099] 沈降 B型肝炎ワクチンとしては、例えば、動物細胞等により生産された HBs抗原を精製した後、アルミニウムゲルをカ卩えて調整したワクチンを用いることができる。動物細胞として、例えば、 huGK— 14細胞を用いて調整したワクチンを用いることができる。

[0100] 2、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法

本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法は、榭状細胞を HBs抗原でパルスする工程を含む。これによれば、 B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることができる。

[0101] 前記製造方法はさらに、血液力前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。

これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。

[0102] また、前記製造方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好ましい。

[0103] 前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒトの B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得ることが可能である。

[0104] また、前記 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原であることが好まし!/、。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる B 型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を提供することがでさる。

[0105] 3、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物

本実施の形態に係る組成物は、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含むことが好ましヽ。

[0106] また、本実施の形態に係る組成物はさらに、 HBワクチン添加物を含むことが好ましい。

[0107] 本実施の形態において、「本実施の形態に係る組成物はさらに、 HBワクチン添カロ物を含む」とは、 HBワクチン添加物力本実施の形態に係る組成物全体中のどこかに含まれている状態を言うとする。すなわち、 HBワクチン添加物が含まれる場所は、本実施の形態に係る組成物中の榭状細胞の外、中、細胞膜上等どこでもよぐ特に限定されない。本実施の形態に係る組成物がワクチン添加物を含むことにより、 HBs 抗原として、 HBワクチンに含まれる HBs抗原を用いて本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を得たことが、判定可能となる。

[0108] HBワクチン添加物としては、例えば、保存剤、抗生物質、安定剤、防腐剤、免疫増進薬、緩衝剤、等張化剤等を挙げることができる。具体例としては、チメロサール、硫酸アルミニウムカリウム、水酸化ナトリウム、塩ィ匕アルミニウム、酢酸、酢酸ナトリウム、塩ィ匕ナトリウム等を挙げることができる。なお、 HBワクチン添加物はこれらに限定されない。

[0109] HBワクチン添加物の検出方法としては、例えば、公知の分析方法を用いることができる。具体的には、例えば、各種クロマトグラフを用いた分離分析、定量分析や、赤外線分光分析、核磁気共鳴分析、質量分析、元素分析などによる構造分析等を挙げることができる。 [0110] 本実施の形態に係る組成物は、実験試薬又は実験キットであることが好ましい。これによって、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、様々な研究に適した態様で用いることができる。用いうる研究分野としては、例えば、免疫応答、免疫寛容、サイト力イン産生に関するシグナル伝達メカニズムについての研究や、榭状細胞を用いた免疫療法についての研究が挙げられる。また、例えば、 B型肝炎の予防又は治療に関わる研究、例えば、遺伝子、 RNA、ペプチド、タンパク質、化合物、医薬、サイト力イン等のスクリーニング等の目的にも用いることができる。

[0111] また、本実施の形態に係る組成物は、医薬組成物であることが好ま、。本実施の形態に係る医薬組成物は、例えば、生体内に直接投与する態様や、生体外で他の物質や細胞と混合する態様で用いることができる。

[0112] また、本実施の形態に係る組成物は、免疫応答活性ィ匕製剤であることが好ましい。

本実施の形態に係る免疫応答活性化製剤は、例えば、生体内に直接投与する態様や、生体外で他の物質や細胞と混合する態様で用いることができる。

[0113] 本実施の形態に係る組成物を生体外で用いる態様としては、例えば、本実施の形態に係る免疫応答活性化製剤と T細胞を混合して、 HBs抗原ェピトープを T細胞に提示することによって T細胞を活性化する使用方法が挙げられる。また、この T細胞は生体内に投与して用いることが可能である。

[0114] また、本実施の形態に係る組成物を生体内に直接投与する態様としては、例えば、細胞ワクチンとしての注射や点滴が挙げられる。細胞ワクチンとしては、好ましくは、 B 型肝炎の予防又は治療ワクチンである。また、本実施の形態に係る組成物を生体内に直接投与する場所としては、例えば、静脈内投与、動脈内投与、胸腔内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉中投与、組織内 (例えば肝臓内)投与、リンパ節投与等が挙げられる。投与の簡潔さの点から、皮下注射が好ましい。

[0115] 4、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療

本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、例えば、 B型肝炎の予防又は治療に用いることができる。

[0116] HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療は、例えば、従来の B型肝炎の予防又は治療方法と組み合わせて用いることができる。 [0117] また、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療は、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、生物に投与する工程を含むことが好ましい。前記生物としては、例えば、前述のような B型肝炎に感染しうる生物を挙げることができる。また、拒絶反応を抑えることができれば、榭状細胞が由来とする生物と、投与対象となる生物が、同種生物でも異種生物でもよい。同種生物の場合においては、本実施の形態に係る榭状細胞を、取り出した自己の体内に投与することも、組織適合性抗原が投与可能な程度に一致している非自己の体内に投与することも可能である。

[0118] 例えば、前記生物は、ヒトであることが好ましい。この場合、 HLAの型が可能な限り一致していることが望ましい。従って、榭状細胞の由来は、好ましくは、血縁にあたる提供者に由来する榭状細胞である。自家細胞を用いれば HLAの型の適合性を考慮する必要がないため、より好ましくは、投与対象の本人に由来する榭状細胞である。

[0119] 本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、前述のように、生体内に直接投与する態様で用いることや、生体外で T細胞と混合して T細胞を活性化し、この T細胞は生体内に投与する態様で用いることが可能である。しかし、 T細胞はェフエクタ一細胞であるため、一度機能を果たすと短時間で死に、消失してしまう。従つて、 B形肝炎を予防、治療するためには、 T細胞を高頻度で繰り返し投与する必要がある。それに対し、榭状細胞は、ナイーブ T細胞や HBsメモリー T細胞、 B細胞にも作用し、繰り返し刺激を与えるため、長時間でかつ強力な効果をもたらす。以上のことから、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、生体内に直接投与する態様で用いる方がより好まし、と考えられる。

[0120] 5、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞の使用例及びその効果

以下に、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞の使用例及びその効果について示す。本使用例では、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、ヒトに投与する工程を含むことが好ましい。本使用例は、 B型肝炎の予防又は治療に適用することができる。なお、本使用例は、以下の場合に限定されず、本使用例に係る榭状細胞の使用態様は、本発明の要旨を超えない範囲で種々の変更が可能である。

[0121] 5— 1、B型肝炎の予防への適用

健常者のうちの約 10%は、 HBワクチンに対して非奏功である人（non—responde r)であり、 HBワクチンを投与しても抗 HBs抗体を産生することができないことが知られている。 B型肝炎は血液を介して感染するため、医療従事者等は、特に抗 HBs抗体の必要性が高いと考えられるが、これらの人々においても HBワクチン non— respo nderが少なくない。

[0122] そこで、これらの HBワクチン non— responderに、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を投与することによって、これらの人々が抗 HBs抗体を産生することが可能になる。 B型肝炎の感染を予防するには、抗 HBs抗体値を少なくとも lOmlUZmLに維持することが必要であると言われている。後述の実験例 11の結果によれば、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を 1回投与したことによって、 HBワクチン non— responderの抗 HBs抗体値が平均 30mIUZmLまで上昇し、 10mIU/mL以上の値をおよそ 3〜6ヶ月間維持できることがわかった。従って、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞によって、現在の H Bワクチン non— responderが抗 HBs抗体を産生できるようになり、 B型肝炎に感染するのを予防することができる。

[0123] また、現在、 B型肝炎の予防に用いられている HBワクチンは、一定期間ごとに通常 3回の接種を行う必要がある。後述の実験例 11の結果によれば、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を 1回投与することによって、 HBワクチン non responderのみならず、 HBワクチンが奏功する健常者（responder)の抗 HBs抗体値も高めることが可能であることがわ力つた。従って、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、 HBワクチン non— responderのみならず、 HBワクチン responderに対しても、新たな B型肝炎の予防手段として用いることができ、接種回数と経済的負担を減らすことができる可能性がある。

[0124] また、 HIV患者、肝疾患患者、透析患者、肥満者、喫煙者等の免疫能が低下している人にも、従来の HBワクチンが十分に効果を発揮できないことが知られている。このような人々も、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いることによって、抗 HBs抗体を産生することが可能になると考えられる。

[0125] 5— 2、 B型肝炎の治療への適用

B型肝炎の治療には、これまで主に抗ウィルス剤が用いられてきた。しかし、抗ウイルス剤を長期間投与することにより、抗ウィルス剤が効力ゝない変異ウィルスが高頻度で出現することが知られている。その結果、 B型肝炎ウィルス量が再上昇し、肝炎の憎悪をまねく危険性があった。

[0126] そこで、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いれば、このような変異ウィルスの出現頻度を下げることができると予想され、これは B型肝炎治療にお、て大きな利点であると考えられる。

[0127] また、肝移植対象者等の免疫抑制剤投与中の人も、免疫抑制状態であるために通常の HBワクチンが効かず、抗 HBs抗体を産生できない。しかし、 B型肝炎関連肝移植にぉヽては、抗 HBs抗体値を維持することが治療成績に大きな好影響を及ぼすことが知られているため、患者は移植後、抗 HBsヒト免疫グロブリンを 2週間に 1回の頻度で投与することが必要である。このことは患者に、年間約 250万円の負担をもたらしており、この経済的問題の解決が世界的に必要とされている。

[0128] そこで、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を患者に投与することにより、患者は、抗 HBs抗体を産生できるようになると考えられる。さらに、後述の実験例 11の結果より、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、例えば 3〜6ヶ月に 1回の頻度で投与することで、 lOmlUZmL以上の抗 HBs抗体値を維持できると予想される。このことから、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いれば、抗 HBsヒト免疫グロブリンを用いるよりも投与頻度を大幅に減らすことが可能であり、その結果、患者の経済的負担を大幅に軽減できると考えられる。

[0129] また、従来力存在する HBワクチンは、 B型肝炎の予防ワクチンであり、 B型肝炎の治療ワクチンは、あくまでも試験的にしか使用されていな力つた。

[0130] それに対して、前述のように、本実施の形態に従って HBワクチンを用いて製造した HBs抗原提示能を有する榭状細胞は、従来から存在する HBワクチンを、 B型肝炎の予防のみならず、治療にも用いることを可能にした。このことは、現在実際に使用されており、安全性、有効性が認められている HBワクチンの使用用途を広げるものであり、さらに、従来力存在する HBワクチンの効果を高める新たな使用態様を見出したものと言える。

[0131] 以上から、本実施の形態に係る HBs抗原提示能を有する榭状細胞には、広い使用用途と大きな利点が認められる。

[0132] 6、ワクチンパルス榭状細胞

本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞は、榭状細胞をワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られる。これによれば、疾患の予防又は治療に有効な、ヮクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0133] 前記方法はさらに、血液力榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。

[0134] また、前記方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好ましい。前記生物は、ヒトであることが好ましい。

[0135] また、前記方法は、 B型慢性肝炎又はキャリアの患者力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得ることが好ましい。ヒトの場合、末梢血は、安全かつ容易に繰り返し採取することができるからである。

[0136] また、ワクチンの添加時期は、結果として、ワクチンに含まれる抗原が榭状細胞によつて提示されることが可能ならば特に限定されず、例えば、榭状細胞を分化誘導した後に添加することができる。また、分ィ匕誘導時にワクチンを添加して、一緒に培養することもできる。また、ワクチンによるパルス時間も、結果として、ワクチンに含まれる抗原が榭状細胞によって提示されることが可能ならば特に限定されず、例えば、 8時間力も 24時間であることが好まし、。

[0137] ワクチンとしては、結果として、前記ワクチンに含まれる抗原が榭状細胞によって提示されることが可能であれば特に限定されず、例えば、生ワクチン、不活ィ匕ワクチン、トキソイド、抗毒素等を用いることができる。また、ワクチンの形態も、結果として、前記ワクチンに含まれる抗原が榭状細胞によって提示されることが可能であれば特に限定されず、例えば、液状ワクチン、沈降型ワクチン、凍結乾燥ワクチン等を用いることができる。

[0138] 本実施の形態に用いうるワクチンの例として、百日せきワクチン、ジフテリアトキソィド、破傷風トキソイド、ポリオワクチン、麻疹ワクチン、風疹ワクチン、日本脳炎ワクチン

、インフルエンザワクチン、 BCGワクチン等の結核ワクチン、おたふくかぜワクチン、水痘ワクチン、 A型肝炎ワクチン、 B型肝炎ワクチン、肺炎球菌ワクチン、黄熱ヮクチン、狂犬病ワクチン、コレラワクチン、ワイル病秋やみ混合ワクチン、はぶ抗毒素、まむし抗毒素、ペストワクチン、 MMRワクチン、月昜チフスワクチン、インフノレェンザ b菌結合型ワクチン、髄膜炎菌ワクチン、赤痢ワクチン、マラリアワクチン等が挙げられる。なお、本実施の形態に用いうるワクチンは、ここに例示したものに限定されない。

[0139] 前記ノルスに使用するワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。例えば、前記パルスに使用するワクチンは、肝炎ワクチンであることが好ましい。前記肝炎ワクチンは、例えば、 HBs抗原を含む HBワクチンであることが好ましい。

[0140] 7、ワクチンパルス榭状細胞の製造方法

本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞の製造方法は、榭状細胞をワクチンでノルスする工程を含む。これによれば、疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を得ることができる。

[0141] 前記製造方法はさらに、血液力前記榭状細胞を得る工程を含むことが好ましい。

これによれば、血液由来の榭状細胞から、本発明のワクチンパルス榭状細胞を得ることが可能である。また、血液を用いれば、従来公知の方法等を用いて、比較的簡便な操作によって榭状細胞を得ることが可能である。

[0142] また、前記製造方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含むことが好ましい。

[0143] 前記生物は、ヒトであることが好ましい。これによれば、ヒト疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を得ることが可能である。

[0144] また、前記パルスに使用するワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンであることが好ましい。これによれば、前記疾患の予防又は治療に有効な、ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0145] 前記ノルスに使用するワクチンは、肝炎ワクチンであることが好ましい。これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる肝炎の予防又は治療に有効な、肝炎ウィルス抗原提示能を有する肝炎ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0146] 前記肝炎ワクチンは、例えば、 HBs抗原を含む HBワクチンであることが好ましい。

これによれば、生物、例えば健常者を含むヒトに、安全かつ有効に用いることができる B型肝炎の予防又は治療に有効な、 HBs抗原提示能を有する肝炎ワクチンパルス榭状細胞を提供することができる。

[0147] 8、ワクチンパルス榭状細胞を含む組成物

本実施の形態に係る組成物は、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を含むことが好ましい。

[0148] また、本実施の形態に係る組成物はさらに、ワクチン添加物を含むことが好ましい。

[0149] 本実施の形態において、「本実施の形態に係る組成物はさらに、ワクチン添加物を含む」とは、ワクチン添加物力本実施の形態に係る組成物全体中のどこかに含まれている状態を言うとする。すなわち、ワクチン添加物が含まれる場所は、本実施の形態に係る組成物中の榭状細胞の外、中、細胞膜上等どこでもよぐ特に限定されない。本実施の形態に係る組成物がワクチン添加物を含むことにより、抗原として、ヮクチンに含まれる抗原を用いて、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を得たこと力判定可能となる。

[0150] ワクチン添加物としては、例えば、保存剤、抗生物質、安定剤、防腐剤、免疫増進薬、緩衝剤、等張化剤、着色剤等を挙げることができる。具体例としては、保存剤としてチメロサール、ホルマリン等、抗生物質としてエリスロマイシン、ラタトビオン酸エリスロマイシン、硫酸カナマイシン等、及び、他の添加物が挙げられる。他の添加物としては、例えば、精製白糖、 L—グルタミン酸ナトリウム、ゼラチン、乳糖、グルタミン酸力リウム、 D—ソルビトール、ヒト血清アルブミン、ポリソルベート 80、グリシン、ブドウ糖、水酸化ナトリウム、硫酸アルミニウムカリウム、塩ィ匕アルミニウム、酢酸、酢酸ナトリウム、塩ィ匕ナトリウム、塩ィ匕カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、フエノールレッド、 L一塩酸アルギニン、リン酸ニナトリウム、リン酸一カリウム、 L—アルギニン酸、塩酸リジン等を挙げることができる。これらの他の添加物は、安定剤、防腐剤、免疫増進薬、緩衝剤、等張化剤、着色剤として添加されることができる。なお、ワクチン添加物はこれらに限定されない。 [0151] 本実施の形態に係る組成物は、実験試薬又は実験キットであることが好ましい。これによって、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を、様々な研究に適した態様で用いることができる。用いうる研究分野としては、例えば、その疾患に関するシグナル伝達メカニズムにつ、ての研究や、榭状細胞を用いた免疫療法にっ、ての研究が挙げられる。また、例えば、その疾患の予防又は治療に関わる研究、例えば、遺伝子、 RNA、ペプチド、タンパク質、化合物、医薬、サイト力イン等のスクリーニング等の目的にも用いることができる。

[0152] また、本実施の形態に係る組成物は、医薬組成物であることが好ましい。本実施の形態に係る医薬組成物は、例えば、生体内に直接投与する態様や、生体外で他の物質や細胞と混合する態様で用いることができる。

[0153] また、本実施の形態に係る組成物は、免疫応答活性ィ匕製剤であることが好ま、。

[0154] 本実施の形態に係る組成物を生体外で用いる態様としては、例えば、本実施の形態に係る免疫応答活性化製剤と T細胞を混合して、ワクチンに含まれてヽた抗原ェピトープを T細胞に提示することによって T細胞を活性化する使用方法が挙げられる。また、この T細胞は生体内に投与して用いることが可能である。

[0155] また、本実施の形態に係る組成物を生体内に直接投与する態様としては、例えば、細胞ワクチンとしての注射や点滴が挙げられる。細胞ワクチンとしては、好ましくは、疾患の予防又は治療ワクチンである。また、本実施の形態に係る組成物を生体内に直接投与する場所としては、例えば、静脈内投与、動脈内投与、胸腔内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉中投与、組織内 (例えば肝臓等)投与、リンパ節投与等が挙げられる。投与の簡潔さの点から、皮下注射が好ましい。

[0156] 9、ワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療

本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞は、疾患の予防又は治療に用いることができる。前記疾患としては、 B型肝炎および B型慢性肝炎があげられる。

[0157] 本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞は、例えば、従来のその疾患の予防又は治療方法と組み合わせて用いることができる。 [0158] また、本実施の形態に係る疾患の予防又は治療は、ワクチンパルス榭状細胞を、生物に投与する工程を含むことが好ましい。前記生物としては、例えば、前記疾患に感染しうる生物を挙げることができる。また、拒絶反応を抑えることができれば、榭状細胞が由来とする生物と、投与対象となる生物が、同種生物でも異種生物でもよい。同種生物の場合においては、本実施の形態に係る榭状細胞を、取り出した自己の体内に投与することも、組織適合性抗原が投与可能な程度に一致している非自己の体内に投与することも可能である。

[0159] 例えば、前記生物は、ヒトであることが好ましい。この場合、 HLAの型が可能な限り一致していることが望ましい。従って、榭状細胞の由来は、好ましくは、血縁にあたる提供者に由来する榭状細胞である。自家細胞を用いれば HLAの型の適合性を考慮する必要がないため、より好ましくは、投与対象の本人に由来する榭状細胞である。

[0160] 本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞は、前述のように、生体内に直接投与する態様で用いることや、生体外で T細胞と混合して T細胞を活性ィ匕し、この T細胞を生体内に投与する態様で用いることが可能である。しかし、 T細胞はエフェクター細胞であるため、一度機能を果たすと短時間で死に、消失してしまう。従って、疾患を予防、治療するためには、 T細胞を高頻度で繰り返し投与する必要がある。それに対し、榭状細胞は、ナイーブ T細胞やメモリー T細胞、 B細胞にも作用し、繰り返し刺激を与えるため、長時間でかつ強力な効果をもたらす。以上のことから、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を、生体内に直接投与する態様で用いる方がより好ましいと考えられる。

[0161] 10、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞の使用例及びその効果

以下に、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞の使用例及びその効果を示す。本使用例では、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を、ヒトに投与する工程を含むことが好ましい。本使用例は、疾患の予防又は治療に適用することができる。なお、本使用例は、以下の場合に限定されず、本使用例に係る榭状細胞の使用態様は、本発明の要旨を超えない範囲で種々の変更が可能である。

[0162] これまで、癌治療等で行われてきた榭状細胞療法にお!、ては、榭状細胞を、癌細胞力抽出した物質を用いてパルスしている。背景技術の項で前述したように、細胞力抽出した物質は、一般に、多種類の物質の混合物である。従って、細胞抽出物質を用、てパルスした榭状細胞は、細胞抽出物質中の多種類の抗原によってパルスされたと考えられる。そのように処理した榭状細胞は、特定できない抗原や、疾患に関連のな!ヽ抗原を提示して!/ヽる榭状細胞を含む抗原提示能を有する多種類の榭状細胞の集団であると考えられる。このようにして作製された榭状細胞は、癌治療等の分野において、すでに疾患に力かった患者の治療に使用することは許されている力健常者に投与することは許されない。従って、細胞抽出物質を用いてパルスした榭状細胞を、疾患の予防のために、健常者に対して用いることは不可能である。

[0163] これに対して、本実施の形態におけるワクチンパルス榭状細胞は、ワクチンを用いて榭状細胞をパルスすることによって作製することができる。ワクチンとして実際に販売されるものは、健常者を含むヒトに安全性、有効性が認められ、認可を受けたものである。従って、本実施の形態による、ワクチンでパルスした榭状細胞は、疾患の治療のために患者に使用できるだけでなぐ疾患の予防のために健常者にも使用することができる。

[0164] また、例えば結核について、日本では戦後順調に患者数が減少してきたものの、 1 980年頃より減少率が鈍化し、 1997年から 3年連続で患者数が増加した。また、結核の治療には、抗結核剤の長期投与が不可欠だが、それによつて薬剤耐性菌が生じる可能性が非常に高ぐそれを防ぐために 2種類以上の多剤併用が鉄則であった。

[0165] そこで、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を、結核の治療に用いることができる。ここで本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞として、 BCGワクチン等の結核ワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られたワクチンノルス榭状細胞を用いることができる。これによれば、前述のような薬剤耐性菌の出現頻度を下げることができると予想され、これは結核の治療において大きな利点であると考えられる。また、他の疾患についても、治療にワクチンパルス榭状細胞を用いることによつて同様の効果が期待できる可能性があり、その疾患の治療に大きな利点となることが予想される。

[0166] また、榭状細胞に抗原提示させる別の手法として、抗原をコードする遺伝子を、ブラスミドベクター等に組み込んでトランスフエクシヨンすることによって又はウィルスベクタ一等に組み込んで感染させることによって、榭状細胞内で目的抗原を発現させる方法が知られている。しかし今日では、このように遺伝子操作を施した榭状細胞を、疾患に力かった患者の治療に使用することが許される場合はあっても、健常者に対する疾患の予防のために用いることは許されてヽな、。

[0167] これに対して、本実施の形態におけるワクチンパルス榭状細胞は、前述のように、患者に対する疾患の治療ワクチンとして使用できるだけでなぐ健常者に対する疾患の予防ワクチンとして使用が可能である。

[0168] また、ワクチンが有効でない患者の原因の一つに、榭状細胞の機能低下が考えられる。すなわち、これまでのような生体へのワクチンの投与のみでは、十分に榭状細胞の活性ィ匕ができな!/、状態が考えられる。

[0169] そこで、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を、例えば、生体内に直接投与する態様や、生体外で T細胞と混合して T細胞を活性化しこの T細胞を生体内に投与する態様で用いることによって、これまでワクチンが効かず抗体を産生できなかつた健常者に対しても、目的抗原に対する抗体を産生させることが可能となる。

[0170] 以上から、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞には、広い使用用途と大きな利点が認められる。また、本実施の形態に係るワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療は、従来の榭状細胞療法とは全く区別されると考えられる。

[0171] なお、この発明を実施するための最良の形態の項において、 6、〜10、における、パルスの定義、パルスの具体的な方法、榭状細胞を得る方法、榭状細胞培養のための培地やサイト力イン、ワクチン添加物の検出方法等は、特に記載しない限り、同項の 1、〜5、に記したものと同様の解釈、方法、物質を用いることができるものとする。実施例 1

[0172] 以下、本発明を実験例に基づき具体的に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。

[0173] (実験例 1) 榭状細胞の調製

(1)へパリン (ノボ ·へパリン注 1000：アベンテイス社製)で内腔をぬらした注射器 ( テルモシリンジ SS— 50ESZ :テルモ社製）を用いて、被験者（すでに HBワクチンの投与を繰り返し受けた経験がある健常人ボランティア 5人を対象とした。 ) 1人あたり 4 0〜60mLの採血を行った。得られた血液と、血液と同量の phosphate— buffered saline (PBS)を、専用クリーンベンチ内で十分に混合した。次に、 Ficoll— Conray 液 (比重 1. 077)を用いた比重遠心法により、単核細胞を分離した。遠心は、室温、 1800rpm〜3000rpmで 30分間行、、遠心後の中間層を単核細胞として取り出した。

[0174] (2)同時に、以下の手順に従って、それぞれの被験者から自己血清を得た。まず、へパリンを使用してヽな、別の注射器 (テノレモシリンジ SS - 10ESZ：テルモネ土製）を用いて、被験者 1人あたり約 10mLの採血を行った。次に、得られた血液を滅菌済みバキュティナ採血管（ベタトン'ディッキンソン社製）を用いて 3000rpmで遠心し、血清を分離した。

[0175] (3) (1)で得られた単核細胞に PBSをカ卩え、十分に混合した。次に、このサンプルを 4°C、 1800rpm〜2700rpmで 10分間遠心し、（1)と同様の手順で、単核細胞を再度回収した。この操作を最低 2回繰り返すことによって、単核細胞を十分に洗浄した。

[0176] (4) (3)によって得られた単核細胞をカウントし、 2 X 10⁶〜2 X 10⁷ZmLの細胞密度で、 35mm dishに 2mLずつ加えた。培地は、（2)で得られた被験者それぞれの自己血清を 1〜5%の濃度でカ卩えた RPMI 1640培地 (二プロ社製)を用いた。培養は、専用培養室にて、 37°C、 5%CO濃度、 75%の airの条件で行った。

2

[0177] (5) (4)の単核細胞を 90分間培養後、以下の手順に従って、付着細胞を分離した。まず、 dishを培養室から取り出し、クリーンベンチ内で 5分間静置した。その後、 dis hを斜めに傾け、培養液を付着細胞全体にゆっくりとかけて洗浄を行い、リンパ球を取り除いた。

[0178] (6) (5)で得られた付着細胞（単球）を、 1枚の dishにっき、 GM-CSF (ぺプロテツク EC社製）を 800UZmL、 IL— 4 (ぺプロテック EC社製）を 500UZmL、自己血清を 1〜5%加えた RPMI 1640培地 2mLで 4日間培養した。

[0179] (7)培養 4日目に、培養上清の lmLを捨て、新たに（6)に記載した組成の培地を 1 mLカ卩え、さらに 4日間培養した。

[0180] (8)培養 8日目に、 dish力も榭状細胞を回収し、榭状細胞数を測定した。 [0181] (実験例 2) HBワクチンによる榭状細胞のパルス

(1)実験例 1で得られた榭状細胞を 2つに分けた。一方の榭状細胞に、 HBワクチン (r— HBワクチン「ミツビシ」：三菱ゥエルファーマ社製）（組成： HBs抗原 20 g、チメ口サール 0. 01wZv%、硫酸アルミニウムカリウム 5. 2g (それぞれ lmLあたり））を最終濃度 2. 5〜5 /ζ ₈/π^になるように添加して 8〜24時間培養し、 HBs抗原を含む HBワクチンでパルスした榭状細胞を作製した。（以下、この細胞を「HBワクチンパルス榭状細胞」と記す。）培養は、専用培養室にて、 37°C、 5%CO濃度、 75%の airの

2

条件で行った。もう一方の榭状細胞は、 HBワクチンを添加せず、ネガティブコント口ールとして培養した。

[0182] (2)培養後、 dishから HBワクチンパルス榭状細胞を回収した。回収した細胞と、 P BSを混合して、 4°C、 1500rpmで 5分間遠心後、上清を捨てた。この操作を 5回繰り返すことによって、榭状細胞を十分に洗浄した。得られた榭状細胞を、 PBS500 L に加えた。また、ネガティブコントロールの榭状細胞についても同様の操作を行った。

[0183] (実験例 3) HBワクチンパルス榭状細胞の投与

(1) HBワクチンパルス榭状細胞投与前の抗 HBs抗体を測定した。まず、被験者（すでに HBワクチンの投与を繰り返し受けた経験がある健常人ボランティア） 5人から採血を行い、実験例 1 (2)と同様の方法を用いて、それぞれの被験者力血清を得た。その血清を用いて、 CLIA法によって抗 HBs抗体値を測定した。結果を図 1に示す。図 1に示すように、被験者 5人のうち、 2人が抗 HBs抗体を産生することができ (抗 HBs抗体陽性， responder)、 3人が抗 HBs抗体を産生できない（抗 HBs抗体陰性， non― responder)こと;^わ力つ 7こ。

[0184] (2)被験者への HBワクチンパルス榭状細胞の投与を行った。まず、実験例 2で得られた HBワクチンパルス榭状細胞 500 μ Lのうち 50 μ Lを用いて、それぞれの被験者に各自の榭状細胞に対するブリックテストを行った。その結果、すべての被験者においてブリックテストが陰性であった。次に、それぞれの被験者に、各自の ΗΒヮクチンパルス榭状細胞を 450 L皮下投与した。なお、実験例 1から実験例 3に示した Η Βワクチンパルス榭状細胞の作製、投与の過程において、作業者は滅菌ガウン、滅菌マスク、滅菌キャップを着用して作業し、操作は可能な限りクリーンベンチ内で行つた。使用試薬は、滅菌済みの試薬を購入して使用し (PBS :インビトロジェン社製、 R PMI 1640 : -プロ社製、等）、使用に際して、肉眼及び顕微鏡で、試薬に混濁がないことを確認した。また、培養上清中のエンドトキシン測定等を実施することによって、培養過程での微生物による汚染がないことを確認した。

[0185] (実験例 4) HBワクチンパルス榭状細胞の表面抗原解析

フローサイトメトリーを用いて、細胞表面抗原の解析を行った。

[0186] (1)実験例 2で得られた、 HBワクチンパルス榭状細胞、及び、ノレスして、なヽ榭状細胞を、 5°C、 1500rpmで 5分間遠心して回収した。回収した細胞を FCM PBS (pH 7. 22 :ギブコネ土製）で洗浄し、再び 5°C、 1500rpmで 5分間遠心して回収した

[0187] (2) (1)で得られたそれぞれの榭状細胞を 4本のスピッツ管に分け、（a) FITC標識マウス IgG (Cat. No. 349041 :ベタトン'ディッキンソン社製）を 10 L、（b) PE標識マウス IgG (Cat. No. 349043 :ベタトン'ディッキンソン社製）を 2 /z L、（c) FITC標識マウス抗ヒト HLA— DRモノクローナル抗体（PM— 32414X:ベタトン'ディツキンソン社製）を 10 1^、（d) PE標識抗ヒト CD86 (B70/B7— 2) (Mat. No. 555658 : ファーミンジヱン社製)を 10 L添加したサンプルを作製した。これらを氷中に 30分間置き、 lysing solution (ベタトン'ディッキンソン社製）を 2mLカ卩えて混合し、 5°C、 2000rpmで 5分間遠心した。

[0188] (3)回収した榭状細胞を、 FCM PBS (pH 7. 22)を用いて十分に洗浄を繰り返した後、 FACScalibur (ベタトン'ディッキンソン社製）を用いて、表面抗原の解析を行った。

[0189] (4)解析の結果を図 2に示す。図 2の横軸は解析した表面抗原、縦軸は表面抗原の相対濃度を示す。この結果より、 HBワクチンパルス榭状細胞は、パルスしていない榭状細胞と比較して、 HLA— DRの発現が 1. 2倍、 CD86の発現が 1. 6倍に上昇していることがわ力つた。これらの結果から、 HBワクチンパルス榭状細胞が成熟していることがわかった。

[0190] (実験例 5) HBワクチンパルス榭状細胞の機能解析 1

(1)ワクチンを打たない他人の末梢血から、実験例 1 (1)と同様にして単核細胞を採取した。

[0191] (2) autoMACS (Miltenyi Biotec社製）、 Pan T cell isolation kit (Milten yi Biotec社製)を用いて、単核細胞から T細胞を単離する操作を行った。まず、 1 X 10⁷あたりの単核細胞に MACS— Bufferをカ卩えて 80 μ Lとし、さらに 20 μ Lのハプテン標識抗体カクテル（CDl lb、 CD16、 CD19、 CD36、 CD56)を加えて、 6〜12 °Cにて 10分間混和した。次に、 MACS— Bufferをカ卩えて洗浄し、上清を除く操作を 2回行った。続いて、 1 X 10⁷あたりの単核細胞に MACS— Bufferをカ卩えて 80 μ とし、さらに 20 Lの MACS抗ハプテン抗体標識マイクロビーズをカ卩えて、 6〜12°Cにて 15分間混和した。次に、 MACS— Bufferをカ卩えて洗浄し、上清を除いた。続いて、 1 X 10⁷あたりの単核細胞に MACS— Bufferを 500 μ Lカロえ、 autoMACSの Dep leteプログラムにてデプリーシヨンを行!、、 T細胞を採取した。

[0192] (3) (a)パルスして、な、榭状細胞 1 X 10⁴細胞、（b) HBワクチンパルス榭状細胞 1

X 10⁴細胞に、（2)で得られた T細胞をそれぞれ 2 X 10⁵細胞カ卩えて、 108時間培養した。培地は、 10%の FCS (フィルトロン社製）をカ卩えた RPMI 1640培地を使用した。

[0193] (4)それぞれに³ Hで標識したサイミジンを添加してさらに 12時間培養した後、 dish 力細胞を回収した。

[0194] (5) γ線カウンター（LS6500 :ベックマン社製）を用いて、取り込み能の評価を行つた結果を図 3に示す。図 3の縦軸はサイミジンの取り込み能を示し、横軸は左から（3) に示した (a)、（b)の場合を示す。この結果から、 HLAの一致していない T細胞に対して、 HBワクチンパルス榭状細胞は、パルスしていない榭状細胞と比較して、 T細胞の幼若化補助能が 1. 5〜2倍に亢進していることがわ力つた。

[0195] (実験例 6) HBワクチンパルス榭状細胞の機能解析 2

(1)被験者 (すでに HBワクチンの投与を繰り返し受けた経験がある健常人ボランティァで、かつ、 HBワクチン responder)から 1人あたり 60mLの採血を行い、実験例 1 (1)、実験例 5 (2)の方法を用いて、 T細胞を採取した。（以下、この T細胞を「HBsメモリー T細胞」と記す。 )

(2)同じ被験者から、実験例 1の方法を用いて榭状細胞を採取し、二つに分けた。一方の榭状細胞は、実験例 2の方法を用いて、 HBワクチンパルス榭状細胞とし、もう一方の榭状細胞は、 HBワクチンでパルスせずネガティブコントロールとした。

[0196] (3) (a) HBsメモリー T細胞 1 X 10⁵細胞と HBワクチン 10 μ g、（b) HBsメモリー T細胞 1 X 10⁵細胞とパルスしていない榭状細胞 1 X 10⁴細胞、（c) HBsメモリー Τ細胞 1 X 10⁵細胞と HBワクチンパルス榭状細胞 1 X 10⁴細胞を、それぞれ混合培養した。

[0197] (4) 7日後、測定の 12時間前に³ Hで標識したサイミジンを投与し、実験例 5 (5)と同様に γ線カウンターを用いてサイミジン取り込み能を測定した。

[0198] (5)結果を図 4示す。図 4の縦軸は相対的 cpm比を表し、横軸に左から、 (3)に記した (a)、（b)、（c)の場合を示す。この結果から、（b)のパルスしていない榭状細胞と混合培養した場合と比較して、（c)の HBワクチンノルス榭状細胞と混合培養した cpm 力 7倍となり、 HBsメモリー T細胞が増殖していた。

[0199] (実験例 7) HBワクチンパルス榭状細胞の機能解析 3

(1)被験者 (すでに HBワクチンの投与を繰り返し受けた経験がある健常人ボランティァで、かつ、 HBワクチン responder)から 1人あたり 60mLの採血を行い、実験例 1 (1)の方法を用いて単核細胞を採取した。

[0200] (2)単核細胞 6 X 10⁷細胞を、（a)何も混合せず、 (b) HBワクチン 10 μ g、 (c)パルスして、な、榭状細胞 1 X 10⁵細胞、（d) HBワクチンパルス榭状細胞 1 X 10⁵細胞と、それぞれ混合培養した。培養条件は、実験例 1 (4)と同様の条件で行った。

[0201] (3) 5日後、培養上清を回収し、 CLIA法によって抗 HBs抗体値を測定した。

[0202] (4)結果を図 5に示す。図 5の縦軸は抗 HBs抗体値を示し、横軸に左から、 (2)に記した（a)、（b)、（c)、（d)の場合を示す。この結果から、 HBワクチンやパルスしていない榭状細胞を混合した場合は、抗 HBs抗体を産生させることができな力たが、 H Bワクチンパルス榭状細胞を混合した場合は、抗 HBs抗体を 15〜56mIUZmL産生させることができることがわかった。

[0203] (実験例 8) HBワクチンパルス榭状細胞投与に伴う過敏性反応テスト (0〜24時間 )

(1)実験例 3にて、 HBワクチンパルス榭状細胞をそれぞれの被験者に皮下投与した後、 0〜24時間において、ワクチン投与に伴う炎症等の過敏性反応の有無を確認した。

[0204] (2)その結果、 HBワクチンパルス榭状細胞を投与した被験者 5人全例にぉ、て、発熱、発赤、ショック等の急性期過敏性反応は見られな力つた。従って、 HBワクチンパルス榭状細胞は安全であることが確認された。

[0205] (実験例 9) 血液生化学的検査による安全性テスト（0、 1、 3、 14日目）

(1)実験例 3にて被験者に投与した HBワクチンパルス榭状細胞の安全性をさらに確認するために、それぞれの被験者に対し、 CBC、肝機能、腎機能等についての 5 0項目以上の検査を行った。代表的な検査項目を図 6に示す。

[0206] (2) ALT, CRP、 PT、 Creatinine検査の結果を図 7〜10に示す。それぞれの図の横軸は投与からの日数を示し、縦軸は検査項目とその値を表す。これらの結果より、 HBワクチンパルス榭状細胞を投与した被験者 5人全例において、血液生化学的検査で異常は見られな力つた。従って、 HBワクチンパルス榭状細胞は安全であることがわかった。

[0207] (実験例 10) 血清生化学的検査を用いた自己免疫反応に関する安全性テスト (0 、 14曰目）

(1)実験例 3にて被験者に投与した HBワクチンパルス榭状細胞による自己免疫反応の有無を検討するために、 IgG量、 IgM量の測定や、サイロイドテスト、マイクロゾームテスト、抗核抗体などの自己抗体検査を行った。

[0208] (2)結果を図 11に示す。これらの結果より、 HBワクチンパルス榭状細胞は、 HBヮクチンパルス榭状細胞を投与した被験者 5人全例で、自己免疫反応は見られなかつた。従って、 HBワクチンパルス榭状細胞は安全であることがわ力つた。

[0209] (実験例 11) in vivoにおける、 HBワクチンパルス榭状細胞の抗 HBs抗体誘導能の評価 (0日目、 2、 3、 4、 12週間目）

(1)実験例 3にて HBワクチンパルス榭状細胞の投与を受けた被験者それぞれから

、実験例 1 (2)の方法を用いて血清を採取し、 CLIA法によって抗 HBs抗体値を測定した。

[0210] (2)結果を図 12、 13、 14に示す。図 12、 14の横軸は投与からの週を示し、縦軸は抗 HBs抗体値を示す。また、図 13は、図 12のグラフの値を数値ィ匕したものである。図 14は、 HBワクチン non— responderである被験者の、抗 HBs抗体値の推移を示すグラフである。図 12、 13の結果より、 1回の HBワクチンノルス榭状細胞投与によつて、 HBワクチン non— responderであった被験者 3人について 2人力抗 HBs抗体を産生できるようになったことがわかった。また、 HBワクチン responderである被験者 2人についても、抗 HBs抗体値が上昇した。これらの被験者 4例は、抗 HBs抗体値が lOmlUZmL以上であることから、 1回の HBワクチンパルス榭状細胞投与によって、 B型肝炎予防又は治療に十分な量の抗体を産生できていると考えられる。また、図 1 4の結果より、この HBワクチン responderであった被験者が、 lOmlUZmL以上の抗 HBs抗体値を少なくとも 3ヶ月間は維持できることがわ力つた。

実施例 2

[0211] 被験者 (B型肝炎患者 2人および B型肝炎肝移植後の患者 1人)から血液を採取し、前記実施例 1の実験例 1と同様にして、その血液を用いて榭状細胞を調製した。次に、得られた榭状細胞を用いて、前記実施例 1の実験例 2と同様にして、 HBワクチンパルス榭状細胞を作製した。

[0212] 前記実施例 1の実験例 1と同様にして、得られた HBワクチンパルス榭状細胞 500

IX Lのうち 50 Lを用いて、それぞれの被験者に各自の榭状細胞に対するブリックテストを行った。その結果、すべての被験者においてブリックテストが陰性であった。次に、それぞれの被験者に、各自の HBワクチンパルス榭状細胞を 450 μ L皮下投与した。投与後、前記被験者には自覚症状に変化は見られな力た。

[0213] 被験者に投与した ΗΒワクチンパルス榭状細胞の安全性をさらに確認するために、それぞれの被験者に対し、 0、 3、 14および 28日目に、 CBC、肝機能、腎機能等についての 50項目以上の検査を行った。前記全ての被験者において、血液性化学的検査では投与前後で変化はなぐ異常はみられな力つた。前記被験者のうち、 B型肝炎患者 1名の ALT、 CRP、 PT、 WBC検査の結果を図 15に示す。前記図の横軸は投与からの日数を示し、縦軸は検査項目とその値を表す。従って、 HBワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者に対しても安全であることがわ力つた。

実施例 3

[0214] 実施例 2におヽて各自の HBワクチンパルス榭状細胞の皮下投与を行った被験者（ B型肝炎患者）に対して、前記投与力 2週間後、および 6週間後に、それぞれ、 HB ワクチンパルス榭状細胞を 450 /z L皮下投与した。その被験者から血清を採取し、その血清を用いて、 CLIA法によって抗 HBs抗体値を測定した（0、 2、 6、 10、 14、 18 および 22週間目）。その結果を図 16に示す。同図に示すように、 1回目（0週間目）の投与終了後から HBs抗体が産生し、 3回目（6週間目）の投与終了後も、 HBs抗体量が上昇した。なお、この測定期間中における肝機能検査の上昇およびトランスァミラーゼの上昇は見られなかった。

以上の結果、ワクチンパルス榭状細胞の投与後、トランスアミラーゼの上昇が見られないことから、本発明のワクチンパルス榭状細胞によれば、 CTLを誘導することなぐ HBs抗体が産生できることがわ力つた。通常、 CTLが誘導されると、トランスアミラーゼが上昇する力もである。この CTLを誘導しないことのメカニズムは不明だ力パルスに使用した HBワクチンの組成力この CTLを誘導しないメカニズムと深く関係しているものと考えられる。また、本発明のワクチンノルス榭状細胞は、 B型肝炎患者であつても、 HBs抗体産生を誘導できることから、体液性免疫を中心に誘導していることが示された。

Claims

請求の範囲

[I] 榭状細胞を HBs抗原でパルスする工程を含む方法によって得られた、 HBs抗原提示能を有する榭状細胞。

[2] 前記方法はさらに、血液力前記榭状細胞を得る工程を含む請求項 1に記載の H

Bs抗原提示能を有する榭状細胞。

[3] 前記方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含む請求項 2に記載の H

Bs抗原提示能を有する榭状細胞。

[4] 前記生物は、ヒトである請求項 3に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞。

[5] 前記 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原である請求項 1に記載の HBs 抗原提示能を有する榭状細胞。

[6] 榭状細胞を HBs抗原でパルスする工程を含む HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法。

[7] さらに血液力も前記榭状細胞を得る工程を含む請求項 6に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法。

[8] さらに生物力も前記血液を採取する工程を含む請求項 7に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法。

[9] 前記生物は、ヒトである請求項 8に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法。

[10] 前記 HBs抗原は、 HBワクチンに含まれる HBs抗原である請求項 6に記載の HBs 抗原提示能を有する榭状細胞の製造方法。

[I I] 請求項 1に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を含む組成物。

[12] さらに HBワクチン添加物が含まれる請求項 11に記載の組成物。

[13] 前記組成物は、実験試薬又は実験キットである請求項 11に記載の組成物。

[14] 前記組成物は、医薬組成物である請求項 11に記載の組成物。

[15] 前記組成物は、免疫応答活性化製剤である請求項 11に記載の組成物。

[16] 前記組成物は、細胞ワクチンである請求項 11に記載の組成物。

[17] 前記細胞ワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療ワクチンである請求項 16に記載の組成物。

[18] 請求項 1に記載の HBs抗原提示能を有する榭状細胞を用いた B型肝炎の予防又は治療方法。

[19] 前記 HBs抗原提示能を有する榭状細胞を、生物に投与する工程を含む請求項 18 に記載の B型肝炎の予防又は治療方法。

[20] 前記生物は、ヒトである請求項 19に記載の B型肝炎の予防又は治療方法。

[21] 榭状細胞をワクチンでパルスする工程を含む方法によって得られた、ワクチンパルス榭状細胞。

[22] 前記方法はさらに、血液力も前記榭状細胞を得る工程を含む請求項 21に記載のヮクチンパルス榭状細胞。

[23] 前記方法はさらに、生物から前記血液を採取する工程を含む請求項 22に記載のヮクチンパルス榭状細胞。

[24] 前記生物は、ヒトである請求項 23に記載のワクチンパルス榭状細胞。

[25] 前記パルスに使用するワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンである請求項 21 に記載のワクチンパルス榭状細胞。

[26] 前記パルスに使用するワクチンは、肝炎ワクチンである請求項 21に記載のワクチンパルス榭状細胞。

[27] 前記肝炎ワクチンは、 HBs抗原を含む HBワクチンである請求項 26に記載のヮクチンパルス榭状細胞。

[28] 榭状細胞をワクチンでパルスする工程を含むワクチンパルス榭状細胞の製造方法

[29] さらに血液力前記榭状細胞を得る工程を含む請求項 28に記載のワクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[30] さらに生物力前記血液を採取する工程を含む請求項 29に記載のワクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[31] 前記生物は、ヒトである請求項 30に記載のワクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[32] 前記パルスに使用するワクチンは、疾患の予防又は治療ワクチンである請求項 28 に記載のワクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[33] 前記パルスに使用するワクチンは、肝炎ワクチンである請求項 28に記載のワクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[34] 前記肝炎ワクチン力 HBs抗原を含む HBワクチンである請求項 33に記載のヮクチンパルス榭状細胞の製造方法。

[35] 請求項 21に記載のワクチンパルス榭状細胞を含む組成物。

[36] さらにワクチン添加物が含まれる請求項 35に記載の組成物。

[37] 前記組成物は、実験試薬又は実験キットである請求項 35に記載の組成物。

[38] 前記組成物は、医薬組成物である請求項 35に記載の組成物。

[39] 前記組成物は、免疫応答活性化製剤である請求項 35に記載の組成物。

[40] 前記組成物は、細胞ワクチンである請求項 35に記載の組成物。

[41] 前記細胞ワクチンが、疾患の予防又は治療ワクチンである請求項 40に記載の組成物。

[42] 請求項 21に記載のワクチンパルス榭状細胞を用いた疾患の予防又は治療方法。

[43] 前記ワクチンパルス榭状細胞を、生物に投与する工程を含む請求項 42に記載の疾患の予防又は治療方法。

[44] 前記生物は、ヒトである請求項 43に記載の疾患の予防又は治療方法。

[45] ヒト用ワクチンパルス榭状細胞であって、前記ワクチンパルス榭状細胞は、ヒトの B 型肝炎の予防又は治療のためのワクチンパルス榭状細胞であり、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであるヒト用ワクチンパルス榭状細胞。

[46] 前記ワクチンパルス工程にぉ、て、パルス時間力 8時間〜 24時間である請求項 4 5に記載のヒト用ワクチンパルス榭状細胞。

[47] 前記榭状細胞取得工程において、単離した単球を GM— CSFおよび IL 4と共培養する請求項 45に記載のヒト用ワクチンパルス榭状細胞。

[48] ヒトにおいて、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しない請求項 45に記載のヒト用ワクチンパルス榭状細胞。

[49] ヒトにお、て、 CTLを誘導しな、請求項 48に記載のヒト用ワクチンパルス榭状細胞

[50] ヒト B型肝炎のための治療および予防のための医薬品であって、請求項 49に記載のヒト用ワクチンパルス榭状細胞を含む医薬品。

[51] 前記 B型肝炎が、 B型慢性肝炎である請求項 50に記載の医薬品。

[52] ヒト用ワクチンパルス榭状細胞の製造方法であって、 B型肝炎患者又は B型肝炎ゥィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得るヒト由来の血液力榭状細胞を得る榭状細胞取得工程、および、前記榭状細胞をワクチンでパルスして、ヒトの B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンパルス榭状細胞を得るパルス工程を含み、前記パルス工程にぉ、てパルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンである製造方法。

[53] 前記ワクチンパルス工程にぉ、て、パルス時間力 8時間〜 24時間である請求項 4 5に記載の製造方法。

[54] 前記榭状細胞取得工程において、前記単離した単球を GM— CSFおよび IL 4と共培養する請求項 45に記載の製造方法。

[55] 前記ヒト用ワクチンパルス榭状細胞力ヒトにおいて、 Th2を誘導し、 Thlを誘導しな、請求項 45に記載の製造方法。

[56] 前記ヒト用ワクチンパルス榭状細胞力ヒトにお、て、 CTLを誘導しな、請求項 48 に記載の製造方法。

[57] ヒト用ワクチンパルス榭状細胞を用いたヒトの B型肝炎の予防又は治療方法であつて、自己の榭状細胞由来のワクチンパルス榭状細胞を B型肝炎患者又は B型肝炎ゥィルスキャリアに投与することを含み、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリア力末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたヒト用ワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するワクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンである予防又は治療方法。

[58] 前記ヒト用ワクチンパルス榭状細胞力 Th2を誘導し、 Thlを誘導しな、請求項 58 に記載の予防又は治療方法。

[59] 前記ヒト用ワクチンパルス榭状細胞力 CTLを誘導しない請求項 59に記載の予防又は治療方法。

[60] 前記 B型肝炎が、 B型慢性肝炎である請求項 59記載の予防又は治療方法。

[61] ヒト B型肝炎の治療又は予防のためのヒト用ワクチンパルス榭状細胞の使用であつて、前記ワクチンパルス榭状細胞は、 B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリアから末梢血を採取し、その末梢血から単離した単球を用いて榭状細胞を得る榭状細胞取得工程および前記榭状細胞をワクチンでパルスするパルス工程を含む製造方法によって得られたヒト用ワクチンパルス榭状細胞であり、前記パルスに使用するヮクチンは、 B型肝炎の予防又は治療のためのワクチンであり、前記ワクチンパルス榭状細胞を、前記末梢血を採取した B型肝炎患者又は B型肝炎ウィルスキャリアに投与することを含む使用。