WO2005061551A1 - Derives carboxy-reduits de la chondroïtine sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant - Google Patents
Derives carboxy-reduits de la chondroïtine sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant Download PDFInfo
- Publication number
- WO2005061551A1 WO2005061551A1 PCT/FR2004/003228 FR2004003228W WO2005061551A1 WO 2005061551 A1 WO2005061551 A1 WO 2005061551A1 FR 2004003228 W FR2004003228 W FR 2004003228W WO 2005061551 A1 WO2005061551 A1 WO 2005061551A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- chondroitin sulfate
- carboxy
- reduced
- derivatives
- salification
- Prior art date
Links
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 title claims abstract description 82
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 title claims abstract description 67
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical class CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 title claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical class FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 122
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims description 59
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 34
- SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(phenylmethyl)-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]ammonium Chemical class C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- AKEJUJNQAAGONA-UHFFFAOYSA-N sulfur trioxide Inorganic materials O=S(=O)=O AKEJUJNQAAGONA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 23
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 23
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 23
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims description 18
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 16
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 claims description 16
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 claims description 13
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 12
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims description 11
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 10
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 8
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 8
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 8
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010003059 aggrecanase Proteins 0.000 claims description 7
- 229940006423 chondroitin sulfate sodium Drugs 0.000 claims description 7
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 6
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- -1 matrisylin (MMP-7) Proteins 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 4
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 claims description 3
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 claims description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010058112 Chondrolysis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010041591 Spinal osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 2
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000005801 spondylosis Diseases 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 4
- 238000002483 medication Methods 0.000 claims 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims 1
- 102000000424 Matrix Metalloproteinase 2 Human genes 0.000 claims 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 claims 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 claims 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 claims 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 claims 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 claims 1
- 125000004436 sodium atom Chemical group 0.000 claims 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 64
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 33
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 22
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 18
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 description 15
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 12
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 11
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 10
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 6
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 5
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 4
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 4
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229940124761 MMP inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 3
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 3
- NYYRRBOMNHUCLB-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-n,n-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CN(C)CCCCl NYYRRBOMNHUCLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CC)C(S(O)(=O)=O)SC2=C1 PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091022879 ADAMTS Proteins 0.000 description 1
- 102000029750 ADAMTS Human genes 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 0 CCC(*)C*(CC*)(*C1*)OC(C*)C1*=C Chemical compound CCC(*)C*(CC*)(*C1*)OC(C*)C1*=C 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016799 Leukocyte elastase Human genes 0.000 description 1
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N iodoethane Chemical compound CCI HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N l-iduronic acid Chemical group O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-CLQWQSTFSA-N 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 1
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
Definitions
- the present invention relates to new glycosaminoglycans as well as their pharmaceutically acceptable addition salts and, more precisely, to carboxy-reduced and ioselectively 0-sulfated derivatives of Chondroitin sulfate, isolated or in mixture, their application as medicament and pharmaceutical compositions. containing them.
- Glycoaminoglycans are essentially formed of alternating uronic acid-amino sugar units (or vice versa), of the type encountered in the oligo or polysaccharide chains of biologically active natural GAGs such as heparin, heparan sulfate, dermat n-sulfate, chondroitins, chondroitins sulfates or Hyaluronic acid.
- the uronic acid units more specifically respond to the D-glucoronic or L-iduronic acid structure and the amino sugar units to that of D-galactosamine.
- Natural GAGs exhibit therapeutic activities as inhibitors of Thrombin. They therefore exhibit antithrombotic and anticoagulant activity and are used in cardiovascular pathologies in which there is a risk of thrombosis.
- the Applicant has developed a new process implementing a carboxy-reduction stage and a sulphation stage making it possible to obtain new derivatives of Chondroitin sulphate having advantageous properties making it possible to treat or prevent disorders which display activity increased by at least one of the matrix metalloproteinases.
- the carboxylated and chemoselectively O-sulfated derivatives of Chondroitin sulfate of formula (I) have a very regular polymeric structure with degrees of purity of the order of 90%. This results in reproducible and unexpected biological properties.
- agrecan In the pathological state of osteoarthritis, the degradation of Agrecan, the main proteoglycan of articular cartilage, represents a very early and crucial event.
- the pathological loss of agrecan is caused by proteolytic cleavages in its interglobular domain.
- Amino acid sequence analyzes of proteoglycan metabolites isolated from the synovial fluid of patients suffering from joint damage, osteoarthrosis or inflammatory joint disorder have shown that there is a proteolytic cleavage between the amino acids Glu 373 and Ala 374 in the interglobular field of human agrecan (Lohmander, et al., Arthritis Rheum., 36: 1214-1222 (1993)).
- the proteolytic activity responsible for this cleavage is called "aggrecanase” and can be attributed to the superfamily of metalloproteinases (MP) or matrix metalloproteinases (MMP).
- MP metalloproteinases
- Zinc is an essential element in the catalytically active center of metalloproteinases.
- MMPs cleave collagen, laminin, proteoglycans, elastin or gelatin under physiological conditions. Therefore, they play an important role in bone and connective tissue.
- a large number of different MMP inhibitors are known (see, for example, EP 0 606 046; 094/28889).
- known inhibitors of MMPs frequently have a significant disadvantage. They lack specificity for any particular class of MMP. In contrast, most MMP inhibitors simultaneously inhibit a plurality of MMPs.
- the subject of the invention is very particularly the carboxy-reduced and sulphated derivatives of Chondroitin sulphate of formula (I):
- R X R 2 , R 3 and R 4 which are identical or different, represent H or S0 3 M, it being understood that at least one of the substituents Ri, R 2 / R 3 and R 4 represents a group S0 3 M, n is an integer between 0 and 200, M is an alkali metal, the said derivatives being in the form of an isolated compound or in the form of mixtures, as well as their diastereoisomers.
- the subject of the invention is the carboxy-reduced derivatives of Chondroitin sulfate according to formula (I) characterized in that the M is chosen from sodium, calcium, magnesium and potassium and in particular Sodium.
- n is an integer between 100 and 200.
- a more particular subject of the invention is the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate as described above, characterized in that Ri, R 2 , R 3 and R 4 represent S0 3 Na.
- a more particular subject of the invention is the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate as described above, characterized in that R x , R 2 and R 4 represent S0 3 Na and R 3 represents H
- a more particular subject of the invention is the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate as described above, characterized in that R x represents H or S0 3 Na, R 2 represents S0 3 Na and R 3 and R 4 represent H.
- a more particular subject of the invention is the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate as described above, characterized in that R x represents H or S0 3 Na, R 2 and R 3 represent S0 3 Na and R 4 represents H.
- These polysaccharides thus comprise an even number of saccharides.
- the polysaccharide mixtures according to the invention can be prepared on the one hand by carboxy-reduction of chondroitin sulfate or its derivatives, followed by chemioselective sulfation or vice versa by sulfation followed by carboxy-reduction.
- the subject of the invention is therefore the process for preparing the carboxy-reduced and sulfated derivatives of chondroitin sulfate as defined above, implementing the following steps: - Carboxy-reduction of chondroitin sulfate
- the chemoselectively O-sulfated carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate can be obtained by sulfation of a quaternary ammonium salt of chondroitin sulfate in organic medium using a sulfuric anhydride complex with a base organic such as pyridine or trimethylamine, followed by a carboxy-reduction by means of a carbodiimide derivative such as 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride in the presence of a reducing agent such as sodium borohydride or by means of an ester derivative, such as methyl ester, in the presence of a reducing agent such as sodium borohydride.
- a reducing agent such as sodium borohydride
- an ester derivative such as methyl ester
- the persulfated or 6 O-sulfated carboxy-reduced derivative of chondroitin sulfate can then be trans-salified with a quaternary ammonium salt and then optionally sulfated on the hydroxy function in position 6 ′ thus generated by the action of an anhydride complex sulfuric with an organic base such as pyridine or trimethylamine.
- the invention therefore also relates to a process for the preparation of the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate as defined above by successively implementing the following steps:
- R1 H
- the methods according to the present invention are characterized by the high chemoselectivity of the carboxy-reduction and sulfation reactions.
- the resulting products are remarkably homogeneous and lead to true polymers.
- the carboxy-reduced chondroitin sulfate derivatives have purities of the order of 90%. This homogeneity is determined by NMR and infrared structural analysis. This results in reproducible and unexpected biological properties.
- the persulfation reactions are preferably carried out in an organic medium by means of a sulfuric anhydride complex with an organic base such as pyridine or trimethylamine. They are generally followed by a salification reaction, for example by the action of sodium acetate.
- the carboxy-reduced derivative or not of chondroitin sulfate can be trans-salified with a quaternary ammonium salt and then chemioselectively O-sulfated on the hydroxyl positions 6 and 6 'only or persulfated by reaction with a complex of sulfuric anhydride with an organic base such as pyridine or trimethylamine
- a complex of sulfuric anhydride with an organic base such as pyridine or trimethylamine
- a benzethonium salt in the presence of 10 to 30 equivalents of complex pyridine - sulfuric anhydride by hydroxyl function to be sulfated.
- the reactions must be carried out preferably at temperatures between -15 and 70 ° C.
- the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate can be obtained by carboxy-reduction of chondroitin sulfate or its derivatives, according to the operating conditions described for example by R. L.
- chondroitin sulfate is reacted with an aqueous soluble carbodiimide derivative such as 1- (3-dimethyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride to form an activated adduct which is reduced by a reducing agent such as borohydride. sodium.
- a reducing agent such as borohydride. sodium.
- chondroitin sulfate derivatives means in particular the chondroitin sulfate sodium salt, the benzethonium salt of chondroitin sulfate, the sulfated derivatives of chondroitin sulfate, as well as the sulfated derivatives of benzethonium salts of chondroitin sulfate.
- the carboxy-reduced derivatives of chondroitin sulfate can also be obtained by carboxy-reduction of an ester of chondroitin sulfate or of its chemioselectively O-sulfated derivatives.
- methyl esters of chondroitin sulfate or of its chemoselectively O-sulfated derivatives and to reduce them by means of a reducing agent such as sodium borohydride.
- the reaction with the carbodiimide derivative is carried out preferably in the presence of 5 to 20 equivalents of reagent and at a pH of between 4 and 5. Even more preferably, the reaction with the carbodiimide derivative is carried out in the presence of 7 to 13 equivalents of reagent and at a pH between 4.3 and 4.9.
- the reduction proper is carried out by a reduction agent known to a person skilled in the art and in particular with an alkali metal borohydride.
- a reduction agent known to a person skilled in the art and in particular with an alkali metal borohydride.
- an alkali metal borohydride As an example, it is possible to use sodium borohydride.
- the actual reduction of the activated adduct of the chondroitin sulfate derivative is carried out with 10 to 300 equivalents of alkali metal borohydride at a temperature between 10 and 70 ° C. More preferably, the reduction of the abovementioned adduct is carried out in the presence of alkali metal borohydride at a temperature between 10 and 30 ° C.
- the subject of the invention is the process implementing the following steps: either a) Carboxy-reduction of chondroitin sulfate sodium salt by means of 1- (3-dimethyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride presence of sodium borohydride, - either b) esterification by action of methyl iodide on the chondroitin sulfate derivative previously trans-salified with Benzethonium chloride then reduction of the corresponding methyl ester derivative with sodium borohydride then, - Trans-salification of the carboxy-reduced derivative with Benzethonium chloride Sulfation of the benzethonium salt of chondroitin sulfate in organic medium by means of a sulfuric anhydride complex with an organic base such as pyridine or trimethylamine, followed by salification with sodium acetate.
- the invention particularly relates to the process implementing the following steps: - Trans-salification of chondroitin sulfate sodium salt with Benzethonium chloride, - Sulfation of Benzethonium salt of Chondroitin sulfate in organic medium using of a sulfuric anhydride complex with an organic base such as pyridine or trimethylamine, followed by salification with sodium acetate then, - either a) Carboxy-reduction of chondroitin sulfate using 1 hydrochloride - (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide in the presence of sodium borohydride, - either b) esterification by action of ethyl iodide on Chondroitin Sulfate previously trans-salified with Benzethonium chloride then reduction of the corresponding methyl ester derivative by sodium borohydride, - then, if necessary trans-salification of the persulfated
- the sodium hydrogen carbonate solution is a solution of 0.1 to 1 mol / l. Even more preferably, the separation is carried out at a concentration of 1 mole / 1. Detection is carried out by refractometry.
- the subject of the invention is also the carboxylated and chemioselectively O-sulphated derivatives of chondroitin sulphate, isolated or in a mixture as defined above, capable of being obtained according to the process or processes as defined above.
- the polysaccharides of formula (I), isolated or in mixtures, can be used as medicaments.
- polysaccharides exhibit in particular a strong inhibitory activity of certain matrix metalloproteases. These inhibitors are particularly indicated for the treatment of pathological conditions where a strong increase in the activity of matrix metalloproteinases is observed.
- the medical conditions to which the present invention refers implies an increase in the activity of at least one of the matrix metalloproteinases following: the neutrophil elastase, Matrisilyne (MMP-7), aggrecanase, hADAMTSl and gelatinase A (MMP-2).
- MMP-7 Matrisilyne
- MMP-2 Matrisilyne
- aggrecanase hADAMTSl
- gelatinase A MMP-2
- the compounds can therefore be used for the prevention and treatment of diseases such as joint degenerative disorders (such as osteoarthrosis), spondylosis, chondrolysis associated with trauma joints or prolonged immobilization attached (often following an injury meniscus or patellar or ruptured ligaments), disorders related to injuries (healing), periodontic disorders, chronic disorders of the locomotor system (such as chronic or acute inflammatory or immunological or metabolic arthritis), arthropathies, or disorders related to bone metabolism.
- a subject of the invention is also the pharmaceutical compositions containing the compounds of formula (I) isolated or in mixture as well as one or more excipients, vehicle or pharmaceutically acceptable additives.
- Another aspect of the invention is a process for the preparation of pharmaceutical compositions containing the compounds of formula (I) characterized in that an amount corresponding to a desired dosage of a compound of formula (I) is mixed with one or more excipients, pharmaceutically acceptable additive vehicle.
- the compounds of formula (I) can be administered by different routes. They can include but are not limited to subcutaneous, intraarticular, intraperitoneal or intravenous injections. Administration can also be rectal, oral, inhalation, or even transdermally.
- the doses can range from 5 ⁇ g to approximately 200 g of compound of formula (I) and preferably from 10 ⁇ g to 40 mg.
- the daily dosage indicated for the treatment of an adult patient of approximately 70 kg is from 10 ⁇ g to 500 mg of active ingredients generally from 20 mg to approximately 100 mg. However depending on the circumstances higher or lower daily doses may be appropriate.
- These doses can be administered once daily as a single dosage unit.
- the doses may be administered in a plurality of smaller doses given repeatedly at defined intervals over time.
- chondroitin sulfate sodium salt is dissolved in 150 ml of water.
- the pH of the solution is adjusted to a value of 4.7 ⁇ 0.1 by addition of a 0.1 N hydrochloric acid solution.
- 3.45 g of 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl hydrochloride) ) carbodiimide are added and the mixture obtained is stirred while maintaining the pH at a value of 4.7 ⁇ 0.1 by addition of a 0.1N hydrochloric acid solution.
- 1.8 g of sodium borohydride are added in small portions.
- the reaction medium is stirred for approximately 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C. After cooling to a temperature in the region of 10 ° C, the reaction medium is neutralized by adding concentrated hydrochloric acid (10 N) to a pH in the region of 7.600 ml of a 10% solution of sodium acetate in the methanol are added. The solid obtained is filtered, then dissolved in 50 ml of water. 150 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol are added to the solution obtained. The solid obtained is filtered, then dissolved in 50 ml of water. The solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and put into dialysis by changing the water baths regularly for 26 hours. The contents of the membranes are lyophilized to provide 0.682 g of carboxy-reduced chondroitin sulfate, sodium salt in the form of a white lyophilisate. The yield obtained is 73%.
- the cake is dissolved in 30 ml of water and then precipitated by adding 90 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol.
- the suspension obtained is filtered.
- the cake is washed with methanol (2 times 5 ml) and then dissolved in 50 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a membrane of cellulose ester PM 3500 and put into dialysis by changing the water baths regularly for 30 hours.
- the contents of the membrane are lyophilized to provide 0.148 g of carboxy-reduced and persulfated chondroitin sulfate, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 74%.
- the carboxy-reduced chondroitin sulfate, sodium salt is prepared according to Example 1-a. - b) Preparation of carboxy-reduced chondroitin sulfate, benzethonium salt.
- the carboxy-reduced chondroitin sulfate, benzethonium salt is prepared according to Example 1-b.
- 0.13 g of carboxy-reduced chondroitin sulfate, benzethonium salt are dissolved in 10 ml of anhydrous dimethylformamide.
- the cake is washed with methanol (2 times 5 ml) and then dissolved in 10 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and dialyzed by changing the water baths regularly for 5 days.
- the contents of the membrane are lyophilized to provide 0.074 g of carboxy-reduced chondroitin sulfate and 6.6 'O-sulfated sodium salt as a white lyophilisate.
- the yield obtained is 83%.
- a solution of 113 g of benzethonium chloride in 560 ml of water is added to the solution of 50 g of chondroitin sulfate, sodium salt in 715 ml of water.
- the suspension obtained is stirred for 1 hour at a temperature in the region of 20 ° C. and then left to sediment overnight.
- the supernatant is removed by decantation and then replaced with the same volume of water.
- the suspension is again stirred for one hour and then left to sediment.
- the operation described above is repeated 3 times.
- the suspension is then filtered.
- the cake is washed with water and then dried at 40 ° C under reduced pressure (6 kPa) to provide 123.4 g of chondroitin sulfate, benzethonium salt in the form of a white solid.
- the yield obtained is 94%.
- the solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and put into dialysis by changing the water baths regularly for 28 hours.
- the contents of the membranes are lyophilized to provide 0.28 g of carboxy-reduced persulfated chondroitin sulfate, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 59%.
- R1 H or S ⁇ 3 Na (
- the chondroitin sulfate, benzethonium salt is prepared according to Example 3-a.
- the cake is dissolved in 500 ml of water and then precipitated by adding 1500 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol.
- the suspension obtained is filtered.
- the cake is washed with methanol (20 ml) and then dissolved in 200 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and put into dialysis by changing the water baths regularly for 24 hours.
- the contents of the membrane are lyophilized to provide 2.89 g of 6 O-sulfated chondroitin sulfate 6, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 69%.
- the reaction medium is stirred for about 20 hours at a temperature close to 20 ° C. After cooling to a temperature in the region of 10 ° C, the reaction medium is neutralized by adding concentrated hydrochloric acid (10 N) to a pH in the region of 7.
- the reaction medium is loaded into a membrane made of cellulose ester PM 3500 and placed on dialysis by changing the water baths regularly for 50 hours. 1530 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol are added to the contents of the membranes.
- the solid obtained is filtered, washed with methanol and then dissolved in 100 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a membrane made of cellulose ester PM 3500 and put into dialysis by changing the water baths regularly for 24 hours.
- the contents of the membranes are lyophilized to provide 0.758 g of carboxy-reduced chondroitin sulfate 6 O, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 4
- a solution of 0.9 g of benzethonium chloride in 15 ml of water is added to the solution of 0.4 g of carboxy-reduced persulfated chondroitin sulfate, sodium salt (prepared according to Example 3) in 15 ml of 'water.
- the suspension obtained is stirred for 1 hour at a temperature in the region of 20 ° C, left to sediment overnight, then filtered.
- the cake is washed with water (6 times 50 ml), dried in a vacuum desiccator, then at 80 ° C under reduced pressure (6 kPa) to provide 0.95 g of carbonduced persulfated chondroitin sulfate, benzethonium salt as a white solid.
- the yield obtained is 80%.
- the cake is dissolved in 50 ml of water.
- the suspension obtained is filtered.
- the filtrate is precipitated by adding 120 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol.
- the suspension obtained is filtered.
- the cake is dissolved in 10 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and put into dialysis by changing the water baths regularly for 26 hours.
- the contents of the membrane are lyophilized to provide 0.17 g of carboxy-reduced and persulfated chondroitin sulfate, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 48%.
- a solution of 1.9 g of benzethonium chloride in 30 ml of water is added to the solution of 0.8 g of carboxy-reduced 6 O-sulphate chondroitin sulfate, sodium salt (prepared according to Example 4) in 30 ml of water.
- the suspension obtained is stirred for 1 hour at a temperature in the region of 20 ° C, left to sediment overnight and then filtered.
- the cake is washed with water (5 times 25 ml), dried in a vacuum desiccator, then at 60 ° C under reduced pressure (6 kPa) to provide 1.64 g of carboxy-reduced 6 O-sulfated chondroitin sulfate, benzethonium salt in the form of a white solid.
- the yield obtained is 96%.
- the cake is washed with methanol, dissolved in 20 ml of water, then precipitated by adding 60 ml of a 10% solution of sodium acetate in methanol.
- the suspension obtained is filtered.
- the cake is dissolved in 10 ml of water.
- the solution obtained is loaded into a PM 3500 cellulose ester membrane and put into dialysis by changing the water baths regularly for 26 hours.
- the contents of the membrane are lyophilized to provide 0.22 g of carboxy-reduced and 6,6 'O-sulfated chondroitin sulfate, sodium salt in the form of a white lyophilisate.
- the yield obtained is 79%.
- a fixed volume of synovial fluid or aggrecanase activity generating a known increase, between 1.0 and 1.4 absorbance units (405 nm) under the conditions of the analysis is mixed with 3 ⁇ l of solution of compound from the respective dilution step.
- Eagle medium modified by Dulbecco (DMEM) is added to each well to provide a final volume of 300 ⁇ l. Then, the plate is incubated for 1 hour at 37 ° C in a carbon dioxide atmosphere.
- the microplate is coated with 100 ⁇ l per well of a commercial IgG goat anti-mouse antibody for 1 hour at room temperature (5 ⁇ g / ml in a phosphate buffered saline solution pH 7 , 4 [PBS buffer]). After washing with PBS buffer containing 0.1% Tween-20 (washing buffer), the wells are blocked by a one hour incubation step using 100 ⁇ l per well of 5% albumin serum bovine in PBS buffer containing 0.05% Tween-20.
- each well is incubated with 100 ⁇ l of a solution diluted to 1: 1000 of BC-3 antibody in a PBS buffer containing 0.05% Tween 20 and 0.5% bovine serum albumin at room temperature for one hour.
- This antibody recognizes the cleavage fragments typical of aggrecanase (Hughes CE. Et al., Biochem. J. 305 (3), 799-804, 1995).
- the complete set of mixtures from the previous digestion is transferred well by well to this plate and incubated at room temperature for one hour.
- the plate is again washed as above.
- 100 ⁇ l of the second antibody anti-human IgG antibody, labeled with peroxidase, 1: 1000 in PBS containing 0.5% ASB and 0.05% T een-20
- the second antibody anti-human IgG antibody, labeled with peroxidase, 1: 1000 in PBS containing 0.5% ASB and 0.05% T een-20
- color development is initiated by adding 100 ⁇ l of ABTS substrate solution (2 mg / ml, 2,2 '-azinobis (3 ethylbenzthiazoline sulfonic acid in 40 mM) sodium citrate plus 60 mM disodium hydrogen phosphate, adjusted to pH 4.4 by adding acetic acid; 0.25 ⁇ l of 35% hydrogen peroxide added per ml immediately before measurement).
- ABTS substrate solution 2 mg / ml, 2,2 '-azinobis (3 ethylbenzthiazoline sulfonic acid in 40 mM) sodium citrate plus 60 mM disodium hydrogen phosphate, adjusted to pH 4.4 by adding acetic acid; 0.25 ⁇ l of 35% hydrogen peroxide added per ml immediately before measurement.
- ABTS substrate solution 2 mg / ml, 2,2 '-azinobis (3 ethylbenzthiazoline sulfonic acid in 40 mM) sodium citrate plus 60 mM dis
- the estimated IC50 of the product of Example 1 is of the order of 0.004 ⁇ g / ml
- Serial dilutions of the test compound are prepared in a 0.046 M Tris pH 8.4 buffer containing 0.15 M NaCl, 0.007 M EDTA, 0.1% Tween 80 and 0.12 I ⁇ / ml of antithrombin human III.
- the 50 ⁇ l samples of the respective dilutions are incubated with 50 ⁇ l of bovine factor Xa (13.6 U / ml) at 37 ° C for 80 seconds.
- 50 ⁇ l of 1.1 mM chromogenic substrate S-2765 are added.
- the absorbance at 405 nm is measured in a photometer.
- the activity of the unlocked factor Xa is indicated by the emission of p-nitroaniline from the substrate.
- Example 1 1.2 U / mg Effect of the carboxy-reduced persulfated derivative (Example 1) of human metalloproteases MMP -2 (gelatinase-A) and MMP7
- kits such as those supplied for example by the company Amersham Biosciences, kits RPN2617 and RPN 2620 were used respectively for the determination of the inhibitory activity of the enzymes MMP-2 and MMP-7.
- the enzyme concentrations are 800 ng / ml respectively for MMP-2.
- the tests were carried out in accordance with the manufacturer's recommendations by carrying out a series of dilutions of the compound to be studied in a PBS pH 7.5 buffer.
- MMP-2 enzymes were inhibited in a concentration-dependent manner
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
La présente invention concerne les dérivés carboxy-réduits et chemiosélectivement O-sulfatés de la chondroïtine sulfate de formule (I) : dans laquelle R1, R2, R3 et R4 représentent H ou SO3M, n est un entier compris entre 0 et 200, M est un métal alcalin, isolés ou en mélanges, leurs diastéréoisomères, leur procédé de préparation, leurs applications à titre de médicament et les compositions pharmaceutiques les contenant.
Description
DERIVES CARBOXY-REDUITS DE LA CHONDROÏTINE SULFATE, LEUR PREPARATION, LEUR APPLICATION COMME MEDICAMENT ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES LES RENFERMANT
La présente invention concerne de nouveaux Glycosaminoglycanes ainsi que leurs sels d'addition pharmaceutiquement acceptable et plus précisemment des dérivés carboxy-réduits et che iosélectivement 0-sulfatés de la Chondroïtine sulfate, isolés ou en mélange, leur application à titre de médicament et les compositions pharmaceutiques les contenant .
Les Glycoaminoglycanes (GAGs) sont essentiellement formés de motifs alternés acide uronique-sucre aminé (ou l'inverse), du type de ceux rencontrés dans les chaînes oligo ou polysaccharidiques de GAGs naturels biologiquement actifs comme l'héparine, l'heparane- sulfate, le dermat n-sulfate, les chondroitines, les chondroitines sulfates ou l'acide Hyaluronique .
Les motifs acides uronique répondent plus spécialement à la structure acide D-glucoronique ou L-iduronique et les motifs sucres aminés à celle de la D-galactosamine.
Les GAGs naturels présentent des activités thérapeutiques en tant qu'inhibiteurs de la Thrombine. Ils présentent donc une activité antithrombotique et anticoagulante et sont utilisés dans les pathologies cardiovasculaires dans lesquelles il y a un risque de thrombose.
Des dérivés sulfatés de la Chondroïtine sulfate sont décrits pour leurs propriétés anticoagulantes dans la demande de brevet FR258 728.
Par ailleurs, des dérivés O-persulfatés de la Chondroïtine sulfate ont été décrits et étudiés pour
leurs propriétés dans l'arthrite rhumatoïde dans la demande internationale W09213541-A1.
La demanderesse a mis au point un nouveau procédé mettant en œuvre une étape de carboxy-réduction et une étape de sulfatation permettant d'obtenir de nouveaux dérivés de la Chondroïtine sulfate présentant des propriétés avantageuses permettant de traiter ou de prévenir des désordres qui affichent une activité accrue d'au moins une des métalloprotéinases de matrice. Les dérivés carboxy- éduits et chemioselectivement O- sulfatés de la Chondroïtine sulfate de formule (I) possèdent une structure polymêrique très régulière avec des degrés de pureté de l'ordre de 90 %. Il en résulte des propriétés biologiques reproductibles et inattendues.
Dans l'état pathologique de l'ostéoarthrose, la dégradation de l'aggrecan, le protêoglycane principal du cartilage articulaire, représente un événement très précoce et crucial. La perte pathologique de l'aggrecan est provoquée par des clivages protéolytiques dans son domaine interglobulaire. Les analyses de séquences d'acides aminés des mêtabolites de protéoglycanes isolés à partir du liquide synovial des patients souffrant de dommages articulaires, d'ostéoarthrose ou de désordre inflammatoire des articulations, ont montré qu'il existe un clivage protéolytique entre les acides aminés Glu373 et Ala374 dans le domaine interglobulaire de l'aggrecan humain (Lohmander, et al . , Arthritis Rheum. , 36 : 1214- 1222 (1993)). L'activité protéolytique responsable de ce clivage est dénommée "aggrécanase" et peut être attribuée à la superfamille des métalloprotéinases (MP) ou métalloprotéinases de matrice (MMP) .
Le zinc est un élément essentiel dans le centre catalytiquement actif des métalloprotéinases. Les MMP
clivent le collagène, la laminine, les protëoglycanes, l'élastine ou la gélatine dans des conditions physiologiques. Donc, elles jouent un rôle important dans le tissu osseux et conjonctif. Un grand nombre de différents inhibiteurs des MMP sont connus (voir, par exemple, EP 0 606 046 ; 094/28889) . Toutefois, les inhibiteurs connus des MMP ont fréquemment un désavantage significatif. Ils manquent de spécificité pour toute classe particulière de MMP. Au contraire, la plupart des inhibiteurs de MMP inhibent simultanément une pluralité de MMP.
Par conséquent, il existe un besoin d'inhibiteurs de MMP ayant des spécificités plus étroitement définies afin de mieux traiter ou de prévenir des désordres spécifiques. L'invention a tout particulièrement pour objet les dérivés carboxy-réduits et sulfaté de la Chondroïtine sulfate de formule (I) :
dans laquelle RX R2, R3 et R4 identiques ou différents, représentent H ou S03M, étant entendu que l'un au moins des substituants Ri, R2/ R3 et R4 représente un groupement S03M, n est un entier compris entre 0 et 200, M est un métal alcalin, les dits dérivés étant sous la forme d'un composé isolé ou sous forme de mélanges, ainsi que leurs diastéréoisomères .
En particulier, l'invention a pour objet les dérivés carboxy-rëduits de la Chondroïtine sulfate selon la formule (I) caractérisé en ce que le M est choisi parmi sodium, calcium, magnésium et potassium et en particulier Sodium.
De préférence, dans la formule (I) , n est un entier compris entre 100 et 200.
L'invention a plus particulièrement pour objet les dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels que décrits plus haut caractérisés en ce que Ri, R2, R3 et R4 représentent S03Na.
L'invention a plus particulièrement pour objet les dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels que décrits plus haut caractérisés en ce que Rx, R2 et R4 représentent S03Na et R3 représente H
L'invention a plus particulièrement pour objet les dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels que décrits plus haut caractérisés en ce que Rx représente H ou S03Na, R2 représente S03Na et R3 et R4 représentent H. L'invention a plus particulièrement pour objet les dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels que décrits plus haut caractérisés en ce que Rx représente H ou S03Na, R2 et R3 représentent S03Na et R4 représente H.
Ces polysaccharides comportent ainsi un nombre pair de saccharides.
De manière générale, les mélanges de polysaccharides selon l'invention peuvent être préparés d'une part par carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate ou de ses dérivés, suivie d'une sulfatation chemiosélective ou inversement par sulfatation suivie d'une carboxy- réduction.
L'invention a donc pour objet le procédé de préparation des dérivés carboxy-réduits et sulfatés de la chondroïtine sulfate tels que définis plus haut mettant en oeuvre les étapes suivantes : - Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate
- Soit a) au moyen d'un dérivé de carbodidiimide ( pour former un adduit activé) et en présence d'un agent réducteur, - Soit b)par estérification, la chondroïtine sulfate ayant le cas échéant été préalablement trans- salifiée par un sel d'ammonium quaternaire, suivie d'une réduction du dérivé intermédiaire d'ester correspondant par action d'un agent réducteur, - Le cas échéant trans-salification du dérivé carboxy- réduit par un sel d'ammonium quaternaire, - Sulfatation en milieu organique suivie d'une salification,
Le schéma reactionnel suivant illustre la présente invention :
De manière alternative, les dérivés carboxy-réduits chemioselectivement O-sulfatés de la chondroïtine sulfate peuvent être obtenus par sulfatation d'un sel d'ammonium quaternaire de la chondroïtine sulfate en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la trimethylamine, suivie d'une carboxy-réduction au moyen d'un dérivé de carbodiimide tel que le chlorhydrate de 1- (3-dimêthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide en présence d'un agent réducteur tel que le borohydrure de sodium ou au moyen d'un dérivé ester, tel que l'ester de mêthyle, en présence d'un agent réducteur tel que le borohydrure de sodium.
Le dérivé persulfaté ou 6 O-sulfaté carboxy-réduit de la chondroïtine sulfate peut ensuite être trans-salifië par un sel d'ammonium quaternaire puis éventuellement sulfaté sur la fonction hydroxy en position 6' ainsi générée par action d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la trimethylamine . L'invention a donc également pour objet un procédé de préparation des dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels que définis plus haut en mettant en oeuvre successivement les étapes suivantes :
- Trans-salification de la chondroïtine sulfate par un sel d'ammonium quaternaire, - Sulfatation en milieu organique suivie d'une salification, - Carboxyréduction de la chondroïtine sulfate persulfatée - Soit a) au moyen d'un dérivé de carbodiimide ( pour former un adduit activé) en présence d'un agent réducteur, - Soit b) par estérification, la chondroïtine sulfate persulfatée ayant le cas échéant été préalablement trans-salifiée par un sel d'ammonium quaternaire, puis réduction du dérivé intermédiaire d'ester correspondant par action d'un agent réducteur, - Le cas échéant trans-salification du dérivé persulfaté carboxyréduit par un sel d'ammonium quaternaire puis resuifatation suivie d'une salification. Le schéma reactionnel suivant illustre la présente invention :
Chondroitine Sulfate Sel de Sodium
Les procédés selon la présente invention sont caractérisés par la forte chemiosëlectivité des réactions de carboxy-réduction et de sulfatation. Les produits qui en résultent sont remarquablement homogènes et conduisent
à des polymères vrais. Les dérivés de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite possèdent des puretés de l'ordre de 90%. Cette homogénéité est déterminée par analyse structurale RMN et Infrarouge. II en résulte des propriétés biologiques reproductibles et inattendues.
Les réactions de persulfatation s'effectuent de préférence en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine. Elles sont suivies en général par une réaction de salification par exemple par action d'acétate de sodium.
De manière générale, le dérivé carboxy-réduit ou non de la chondroïtine sulfate peut être trans-salifié par un sel d'ammonium quaternaire puis chemioselectivement O- sulfaté sur les positions hydroxyle 6 et 6' uniquement ou persulfaté par réaction avec un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine Pour une chemiosélectivite optimale des réactions de persulfatation du chondroïtine Sulfate Carboxy-réduite ou non, il est préférable de mettre en oeuvre un sel de benzéthonium en présence de 10 à 30 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique par fonction hydroxyle à sulfater. Pour la même raison, les réactions doivent être réalisées prëfërentiellement à des températures comprises entre -15 et 70°C.
Lors de la persulfatation du sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite ( composé de formule (I) avec Rx=H / R2=S03Na ou Rx=S03Na / R2=H et R3=R4=H) , on opère de préférence à des températures comprises entre 50 et 70°C. Ceci est illustré à l'exemple 1.
Pour une chemiosélectivite optimale de la 6, 6' O- sulfatation de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de benzéthonium ( composé de formule (I) avec RX=H / R2=S03Na ou Rx=S03Na / R2=H et R3=R4=H) , on opère en présence de 5 à 15 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures comprises entre -15 et 5°C. Ceci est illustré à l'exemple 2.
La persulfatation de la Chondroïtine Sulfate sel de Benzéthonium, s'effectue quant à elle a des températures comprises entre 50 et 70°C. Ceci est illustré à l'exemple 3.
De même, pour une chemiosélectivite optimale de la 6-0 sulfatation de la Chondroïtine Sulfate, sel de benzéthonium, il est préférable de travailler en présence de 5 à 15 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures comprises entre -15 et 5°C. Encore plus préférentiellement, il faut travailler en présence d'environ 10 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique à une température voisine de 0°C . Ceci est illustré à l'exemple 4.
Lors de la (re) sulfatation du dérivé persulfaté carboxy- reduit, sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate ( composé de formule (I) avec Rι=R2=R4=S03Na et R3=H) , on opère de préférence en présence de 10 à 30 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures voisines de 20°C. Ceci est illustré à 1' exemple 5.
Pour une chemiosélectivite optimale de la 6'-0 sulfatation de la chondroïtine sulfate 6-0 sulfatée carboxy-réduite , sel de benzéthonium ( composé de formule (I) avec Rx=H/S03Na R2=S03Na et R3=R4=H) , il est préférable de travailler en présence de 5 à 15
équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures comprises entre -15 et 5°C. Encore plus prëfêrentiellement, il faut travailler en présence d'environ 10 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique a une température voisine de -10°C . Ceci est illustré à l'exemple 6.
Les dérivés carboxy-réduits de chondroïtine sulfate peuvent être obtenus par carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate ou de ses dérivés, selon les conditions opératoires décrites par exemple par R. L.
Taylor et H. E. Conrad, Biochemistry, 11 (8) , 1383-1388, (1972) . La chondroïtine sulfate est mise en réaction avec un dérivé de carbodiimide soluble en phase aqueuse tel que le chlorhydrate de 1- (3-dimêthyl aminopropyl) -3- ethylcarbodiimide pour former un adduit activé qui est réduit par un agent réducteur tel que le borohydrure de sodium.
Par dérivés de la chondroïtine sulfate, on entend en particulier la chondroïtine sulfate sel de sodium, le sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate, les dérivés sulfatés de la chondroïtine sulfate, ainsi que les dérivés sulfatés sels de benzéthonium de la chondroïtine sulfate.
Selon une méthode alternative, les dérivés carboxy- réduits de la chondroïtine sulfate peuvent également être obtenus par carboxy-réduction d'un ester de chondroïtine sulfate ou de ses dérivés chemioselectivement O-sulfatés.
A titre d'exemple, on peut utiliser des esters méthyliques de chondroïtine sulfate ou de ses dérivés chemioselectivement O-sulfatés et les réduire au moyen d'un agent réducteur tel que le borohydrure de sodium.
La réaction avec le dérivé carbodiimide est réalisée préfèrentiellement en présence de 5 à 20 équivalents de réactif et à un pH compris entre 4 et 5. Encore plus préférentiellement, la réaction avec le dérivé carbodiimide est réalisée en présence de 7 à 13 équivalents de réactif et à un pH compris entre 4,3 et 4,9.
La réduction proprement dite est réalisée par un agent de réduction connu de l'homme du métier et en particulier avec un borohydrure de métal alcalin. A titre d'exemple, il est possible d'utiliser le borohydrure de sodium.
La réduction proprement dite de l' adduit activé du dérivé de la chondroïtine sulfate est réalisée avec 10 à 300 équivalents de borohydrure de métal alcalin à une température comprise entre 10 et 70 °C. Plus préférentiellement, la réduction de l' adduit sus mentionné est réalisée en présence de borohydrure de métal alcalin à une température comprise entre 10 et 30°C.
Tout particulièrement, l'invention a pour objet le procédé mettant en oeuvre les étapes suivantes : - soit a) Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate sel de sodium au moyen du chlorhydrate de l-(3- diméthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide en présence du borohydrure de sodium, - soit b) estërification par action du iodure de mêthyle sur le dérivé de la chondroïtine sulfate préalablement trans-salifiê par le chlorure de Benzéthonium puis réduction du dérivé ester mëthylique correspondant par le borohydrure de sodium puis,
- Trans-salification du dérivé carboxy-réduit par le chlorure de Benzéthonium Sulfatation du sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine, suivie d'une salification par l'acétate de sodium..
Alternativement l'invention a tout particulièrement pour objet le procédé mettant en œuvre les étapes suivantes : - Trans-salification de la chondroïtine sulfate sel de sodium par le chlorure de Benzéthonium, - Sulfatation du sel de Benzéthonium de la Chondroïtine sulfate en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine, suivie d'une salification par l'acétate de sodium puis, - soit a) Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate au moyen du chlorhydrate de 1- (3-dimëthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide en présence du borohydrure de sodium, - soit b) estêrification par action du iodure de éthyle sur la Chondroïtine Sulfate préalablement trans-salifiée par le chlorure de Benzéthonium puis réduction du dérivé ester méthylique correspondant par le borohydrure de sodium, - puis, le cas échéant trans-salification du dérivé persulfaté carboxy-réduit par le chlorure de benzéthonium puis resulfatation par le complexe d'anhydride sulfurique - base organique suivie d'une salification par l'acétate de sodium.
Au cas où l'on désire obtenir des dérivés isolés à partir du mélange de dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels qu'obtenus selon le procédé décrit plus haut, le procédé suivant doit ensuite être appliqué au mélange : - Fractionnement du mélange par chromâtographie sur des colonnes remplies de gel de type polyacrylamide agarose ou un gel de polyacrylamide. Le mélange est élue par une solution d'hydrogenocarbonate de sodium.
De préférence, la solution d'hydrogenocarbonate de sodium est une solution de 0,1 à 1 mole/1. Encore plus préférentiellement, la séparation est réalisée à une concentration de 1 mole/1. La détection est réalisée par réfractometrie .
L'invention a également pour objet les dérivés carboxy- réduits et chemioselectivement O-sulfatés de la chondroïtine sulfate, isolés ou en mélange tels que définis plus haut susceptibles d'être obtenus selon le ou les procédés tels que définis précédemment.
Les polysaccharides de formule (I) , isolés ou en mélanges sont utilisables à titre de médicaments.
Ces polysaccharides présentent en particulier une forte activité inhibitrice de certaines mëtalloproteases de matrice. Ces inhibiteurs sont particulièrement indiqués pour le traitement d'états pathologiques où une forte augmentation de l'activité des métalloprotéinases de matrice est constatée.
Les états pathologiques auxquels la présente invention fait référence implique une augmentation de l'activité d'au moins une des métalloprotéinases de matrice
suivante : la neutrophile élastase, la Matrisilyne (MMP- 7), l' aggrecanase, l'hADAMTSl et la gélatinase A (MMP-2) .
Les composés peuvent donc être utilisés, pour la prévention et le traitement de maladies telles que les désordres joint dëgênératifs (tels que l'ostéoarthrose) , les spondyloses, les chondrolyse associéees avec les joint Trauma ou les immobilisations prolongées jointes (souvent suite à une blessure du ménisque ou patellar ou les ruptures de ligaments) , les désordres liés à des blessures (healing) , les désordres periodontique, les désordres chronique du système locomoteur ( tels que arthritides chronique ou aiguës inflammatoires, immunologique ou du métabolisme) , les arthropathies, ou les désordres liés au métabolisme osseux. L'invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques renfermant les composés de formule (I) isolés ou en mélange ainsi qu'un ou plusieurs excipients, véhicule ou additifs pharmaceutiquement acceptable.
Un autre aspect de l'invention est un procédé de préparation des compositions pharmaceutiques renfermant les composés de formule (I) caractérisés en ce qu'on mélange une quantité correspondant à un dosage désiré d'un composé de formule (I) avec un ou plusieurs excipients, véhicule additifs pharmaceutiquement acceptable .
Les composés de formule (I) peuvent être administrés par différente voie. Elles peuvent inclure sans être limité aux injections par voie subcutanée, intraarticulaire, intrapéritonée ou intraveineuse. L'administration peut également être rectale, orale, par inhalation, ou encore par voie transdermique.
Dans le cas de solutions pour injection (par exemple sous forme d'ampoule) , les doses peuvent s'échelonner de 5 μg à environ 200 g de composé de formule (I) et de préférence de 10 μg à 40 mg. Le dosage quotidien indiqué pour le traitement d'un patient adulte d'environ 70 kg est de 10 μg à 500 mg d' ingrédients actifs généralement de 20 mg à environ 100 mg. Cependant selon les circonstances des doses quotidiennes plus hautes ou plus basses peuvent être appropriées .
Ces doses peuvent être administrées une fois par jour sous la forme d'une seule unité de dosage.
Alternativement, les doses peuvent être administrées dans une pluralité de doses plus petites données de manière répétées à des intervalles définis au cours du temps.
Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.
Chondroïtine Sulfate
La chondroïtine sulfate utilisée pour la préparation des composés illustrant cette invention présente une masse moléculaire de 85,2 kDalton. Elle est produite à partir de cartilage de poisson, et est constituée par un mélange de chondroïtine A et chondroïtine C dans des proportions 50 / 50. Sa structure chimique peut être décrite par la formule (I) avec les groupements Rx = S03M et R2 = R3 = R4 =H ou Rx = H, R2 = S03M, R3 = R4 = H.
EXEMPLE 1 : Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite et persulfatée, sel de sodium (Composés de formule (I) avec les groupements Rx = 2 ≈ K-3 = R4 = S03Na)
- a) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite, sel de sodium
A une température voisine de 20°C, 1 g de chondroïtine sulfate, sel de sodium sont mis en solution dans 150 ml d'eau. Le pH de la solution est ajusté à une valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. 3,45 g de chhorhydrate de l-éthyl-3- (3-diméthylaminopropyl) carbodiimide sont ajoutés et le mélange obtenu est agité en maintenant le pH à une valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. Lorsque le pH est stabilisé à une valeur voisine de 4,7, 1,8 g de borohydrure de sodium sont ajoutés par petites portions. Le milieu reactionnel
est agité environ 20 heures à une température voisine de 20°C. Après refroidissement à une température voisine de 10°C, le milieu reactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique concentré (10 N) à un pH voisin de 7. 600 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. Le solide obtenu est filtré, puis dissout dans 50 ml d'eau. 150 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés à la solution obtenue. Le solide obtenu est filtré, puis dissout dans 50 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 26 heures. Le contenu des membranes est lyophilisé pour fournir 0,682g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 73 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 333 K (δ en ppm - Mélange des chondroitines A et C) : 2,0 (3H, s), 3,30 (1H, m), entre 3,4 et 3,65 (4H, m), entre 3,7 et 4,05 (3H + 1/2H, m), 4,18 (2H, s), entre 4,4 et 4,6 (2H, m), 4,81 (1/2H, s) .
- b) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite, sel de benzéthonium
Une solution de 1,6 g de chlorure de benzéthonium dans 12 ml d'eau est ajoutée à la solution de 0,685 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de sodium dans 10 ml d'eau. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé à l'eau puis séché à 40°C sous pression réduite (6 kPa) pour fournir 1,25 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de benzéthonium sous forme d'un solide crème. Le rendement obtenu est de 96 %.
- c) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite et persulfatée, sel de sodium
A une température voisine de 60°C et sous atmosphère inerte, 0,2 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de benzéthonium sont mis en solution dans 6 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 2,08 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 15 ml de diméthylformamide anhydre est ajoutée à la solution précédente. Après 1 heure 30 d'agitation à une température voisine de 60°C, le milieu reactionnel est refroidi à une température voisine de 10°C. 6 ml d'eau, puis 90 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est dissout dans 30 ml d'eau puis précipité par addition de 90 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol (2 fois 5 ml) puis dissout dans 50 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 30 heures . Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 0,148 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite et persulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 74 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 298 K (δ en ppm -
Mélange des chondroitines A et C) : 2,05 (3H, s), 3,85 (1H, m), entre 3,92 et 4,05 (3H, m), entre 4,12 et 4,3 (5H, m), 4,58 (1H, s), 4,65 (1H, s) , 4,75 (1H, m), 4,95 (1H, s) , 5,0 (1H, s) .
EXEMPLE 2 : Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite et 6, 6' O- sulfatée, sel de sodium ( Composés de formule (I) avec les groupements Ri = H / SO3Na R2 = R3 = SO3Na et Rt = H )
La chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de sodium est préparée selon l'exemple 1-a. - b) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite, sel de benzéthonium.
La chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de benzéthonium est préparée selon l'exemple 1-b. - c) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite et 6, 6' O-sulfatée, sel de sodium A une température voisine de 20°C et sous atmosphère inerte, 0,13 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite,
sel de benzéthonium sont mis en solution dans 10 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 0,2 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 5 ml de diméthylformamide anhydre est ajoutée à la solution précédente, à une température voisine de -10°C. Après 2 heures 30 d'agitation à une température voisine de -10°C, 2 ml d'eau, puis 60 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. La suspension obtenue est agitée 30 minutes, laissée à sédimenter une nuit puis filtrée. Le gâteau est lavé par 5 ml de méthanol, dissout dans 20 ml d'eau puis précipité par addition de 60 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol (2 fois 5 ml) puis dissout dans 10 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 5 jours. Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 0,074 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite et 6,6' O-sulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 83 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 333 K (δ en ppm - Mélange de 4 chondroitines, sulfatées ou non en C4 (Gai 2N6S) , épimérisée ou non en C5 (Glu6S) ) : 2,0 (3H, s), 3,30 (1H, m), entre 3,5 et 4,25 (11H, m), entre 4,4 et 4,7 (2H, m), entre 4,75 et 4,92 (1/2H) .
EXEMPLE 3 : Préparation de la chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de sodium ( Composés de Formule (I) avec les groupements Rx = R2 = R4 = S03Na et R3 = H )
R1 = H, R2 = Sθ3Hy ou R1 = Sθ3Hy, R2 = H
- a) Préparation de la chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium
Une solution de 113 g de chlorure de benzéthonium dans 560 ml d'eau est ajoutée à la solution de 50 g de chondroïtine sulfate, sel de sodium dans 715 ml d'eau. La suspension obtenue est agitée pendant 1 heure à une température voisine de 20°C puis laissée à sédimenter pendant une nuit . Le surnageant est éliminé par décantation puis remplacé par le même volume d'eau. La suspension est de nouveau agitée pendant une heure puis laissée à sédimenter. L'opération décrite précédemment est répétée 3 fois. La suspension est ensuite filtrée. Le gâteau est lavé à l'eau puis séché à 40°C sous pression réduite (6 kPa) pour fournir 123,4 g de chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium sous forme d'un solide blanc. Le rendement obtenu est de 94 %.
- b) Préparation de la chondroïtine sulfate persulfatée, sel de sodium
A une température voisine de 60°C et sous atmosphère inerte, 5 g de chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium sont mis en solution dans 100 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 26,5 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 250 ml de diméthylformamide anhydre est ajoutée à la solution précédente. Après 1 heure 30 d'agitation à une température voisine de 60°C, le milieu reactionnel est refroidi à une température voisine de 10°C. 100 ml d'eau, puis 1350 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol (50 ml) , dissout dans 400 ml d'eau puis précipité par addition de 1200 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol (20 ml) puis dissout dans 200 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 4 jours. Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 2 g de chondroïtine sulfate persulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 66 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 298 K (δ en ppm - Mélange des chondroitines A et C) : 2,05 (3H, s), 4,0 (3H, m), 4,1 (1H, s), 4,23 (2H, m), 4,4 (2H, m), 4,7 (1H, m), 4,82 (1H, d, J=3Hz) , 4,87 (1H, s) , 4,95 (1H, s) . - c) Préparation de la chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de sodium A une température voisine de 20°C, 0,5 g de chondroïtine sulfate persulfatée, sel de sodium sont mis en solution dans 45 ml d'eau. Le pH de la solution est ajusté à une
valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. 1,1 g de chhorhydrate de l-ëthyl-3- (3-dimëthylaminopropyl) carbodiimide sont ajoutés et le mélange obtenu est agité en maintenant le pH à une valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. Lorsque le pH est stabilisé à une valeur voisine de 4,7, 4,44 g de borohydrure de sodium sont ajoutés par petites portions. Le milieu reactionnel est agité pendant environ 20 heures à une température voisine de 20°C. Après refroidissement à une température voisine de 10°C, le milieu reactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique concentré (10 N) à un pH voisin de 7. Le milieu reactionnel est chargé dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mis en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 65 heures. 600 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés au contenu des membranes. Le solide obtenu est filtré, puis dissout dans 200 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 28 heures. Le contenu des membranes est lyophilisé pour fournir 0,28 g de chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 59 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 323 K (δ en ppm - Mélange des chondroitines A et C) : 2,0 (3H, s), 3,65 (3H, m), 3,89 (3H, m), 3,96 (1H, m), 4,05 (1H, s), 4,2 (2H, S), 4,7 (2H, m), 4,89 (1H, s) , 4,93 (1H, s). EXEMPLE 4 : Préparation de la chondroïtine sulfate 6 O- sulfatêe carboxy-réduite, sel de sodium ( Composés de
Formule (I) avec les groupements Rx = H / S03Na R2 = S03Na et R3 = R4 =H )
- a) Préparation de la chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium
La chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium est préparée selon l'exemple 3-a.
- b) Préparation de la chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée, sel de sodium A une température voisine de 0°C et sous atmosphère inerte, 10 g de chondroïtine sulfate, sel de benzéthonium sont mis en solution dans 200 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 10,6 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 100 ml de diméthylformamide anhydre est ajoutée à la solution précédente. Après 2 heure 30 d'agitation à une température voisine de 0°C, 150 ml d'eau, puis 1600 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol
sont ajoutés. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est dissout dans 500 ml d'eau puis précipité par addition de 1500 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol . La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol (20 ml) puis dissout dans 200 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 24 heures. Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 2,89 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 69 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 323 K (δ en ppm - Mélange des chondroitines A et C) : 2,0 (3H, s), 3,35 (1H, m), 3,55 (1H, m), entre 3,62 et 4,38 (3H + 1/2H, m), entre 3,4 et 4,1 (2H, m), 4,2 (2H, m), 4,45 (1H, m), 4,55 (1H, m) , 4,78 (1/2H, s) .
- c) Préparation de la chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxyréduite, sel de sodium
A une température voisine de 20°C, 2 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée, sel de sodium sont mis en solution dans 250 ml d'eau. Le pH de la solution est ajusté à une valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. 6,5 g de chhorhydrate de l-êthyl-3- (3-dimêthylaminopropyl) carbodiimide sont ajoutés et le mélange obtenu est agité en maintenant le pH à une valeur de 4,7 ± 0,1 par addition d'une solution d'acide chlorhydrique 0,1 N. Lorsque le pH est stabilisé à une valeur voisine de 4,7, 25,8 g de borohydrure de sodium sont ajoutés par petites portions. Le milieu reactionnel est agité pendant environ 20 heures à une température
voisine de 20°C. Après refroidissement à une température voisine de 10°C, le milieu reactionnel est neutralisé par addition d'acide chlorhydrique concentré (10 N) à un pH voisin de 7. Le milieu reactionnel est chargé dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mis en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 50 heures. 1530 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés au contenu des membranes. Le solide obtenu est filtré, lavé par du méthanol puis dissout dans 100 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 24 heures . Le contenu des membranes est lyophilisé pour fournir 0,758 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxy-réduite, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 41 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 298 K (δ en ppm -
Mélange des chondroitines A et C (l/3 4-OS03H, 2/3 6- 0S03H) ) : 2,0 (3H, s), 3,30 (1H, m), entre 3,4 et 3,90 (7H+ 1/3H, m), entre 3,92 et 4,05 (2H, m), 4,19 (4/3H, s), entre 4,4 et 4,6 (2H, m), 4,88 (1/3H, s).
EXEMPLE 5 : Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite et persulfatée, sel de sodium ( Composés de Formule (I) avec les groupements Rx= R2 = R3 = R4 ≈ S03Na)
- a) Préparation de la chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium
Une solution de 0,9 g de chlorure de benzéthonium dans 15 ml d'eau est ajoutée à la solution de 0,4 g de chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de sodium (préparé selon l'exemple 3) dans 15 ml d'eau. La suspension obtenue est agitée pendant 1 heure à une température voisine de 20°C, laissée à sédimenter pendant une nuit, puis filtrée. Le gâteau est lavé à l'eau (6 fois 50 ml) , séché en dessicateur sous vide, puis à 80°C sous pression réduite (6 kPa) pour fournir 0,95 g de chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium sous forme d'un solide blanc. Le rendement obtenu est de 80 %.
- b) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite et persulfatée, sel de sodium
A une température voisine de 20°C et sous atmosphère inerte, 0,95 g de chondroïtine sulfate persulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium sont mis en solution dans 10 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 1,27 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 5 ml de diméthylformamide anhydre est ajoutée à la solution
précédente. Après 2 heure 30 d'agitation à une température voisine de 20°C, le milieu reactionnel est refroidi à une température voisine de 10°C. 7 ml d'eau, puis 60 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est dissout dans 50 ml d'eau. La suspension obtenue est filtrée. Le filtrat est précipité par addition de 120 ml d'une solution à 10 % d'acétate de sodium dans le méthanol. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est dissout dans 10 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 26 heures. Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 0,17 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite et persulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 48 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 298 K (δ en ppm -
Mélange des chondroitines A et C) : 2,05 (3H, s), 3,85 (1H, m), entre 3,92 et 4,05 (3H, m), entre 4,12 et 4,3 (5H, m), 4,58 (1H, s), 4,65 (1H, s), 4,75 (1H, m), 4,95 (1H, s) , 5,0 (1H, S ) .
EXEMPLE 6 : Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite et 6, 6' 0-sulfatée, sel de sodium ( Composés de Formule (I) avec les groupements Rx = H / S03Na R2 = R3 = S03Na et R4 =H )
R1 = H ou S03Hy R1 = H ou S03Na
- a) Préparation de la chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium
Une solution de 1,9 g de chlorure de benzéthonium dans 30 ml d'eau est ajoutée à la solution de 0,8 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxy-réduite, sel de sodium (préparé selon l'exemple 4) dans 30 ml d'eau. La suspension obtenue est agitée pendant 1 heure à une température voisine de 20°C, laissée à sédimenter pendant une nuit puis filtrée. Le gâteau est lavé à l'eau (5 fois 25 ml) , séché en dessicateur sous vide, puis à 60°C sous pression réduite (6 kPa) pour fournir 1,64 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium sous forme d'un solide blanc. Le rendement obtenu est de 96 %.
- b) Préparation de la chondroïtine sulfate carboxy- réduite et 6, 6' O-sulfatée, sel de sodium
A une température voisine de 20°C et sous atmosphère inerte, 0,5 g de chondroïtine sulfate 6 O-sulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium sont mis en solution dans 8 ml de diméthylformamide anhydre. Après dissolution totale, une solution de 0,65 g de complexe pyridine anhydride sulfurique dans 4 ml de diméthylformamide
anhydre est ajoutée à la solution précédente, à une température voisine de -10°C. Le milieu reactionnel est agité à une température voisine de -10°C pendant 2 heure 30. 5 ml d'eau, puis 80 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol sont ajoutés. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est lavé par du méthanol, dissout dans 20 ml d'eau, puis précipité par addition de 60 ml d'une solution à 10% d'acétate de sodium dans le méthanol. La suspension obtenue est filtrée. Le gâteau est dissout dans 10 ml d'eau. La solution obtenue est chargée dans une membrane en ester de cellulose PM 3500 et mise en dialyse en changeant les bains d'eau régulièrement pendant 26 heures. Le contenu de la membrane est lyophilisé pour fournir 0,22 g de chondroïtine sulfate carboxy-réduite et 6, 6' 0-sulfatée, sel de sodium sous forme d'un lyophilisât blanc. Le rendement obtenu est de 79 %.
Spectre proton dans D20, 400 MHz, T = 333 K (δ en ppm - Mélange de 4 chondroitines, sulfatées ou non en C4 (Gai 2N6S) , épimërisëe ou non en C5 (Glu6S) ) : 2,0 (3H, s), 3,30 (1H, m), entre 3,5 et 4,25 (11H, m), entre 4,4 et 4,7 (2H, m), entre 4,75 et 4,92 (l/2H) .
Test pharmacologique
Effet des dérivés carboxy-réduits sur l'Aggrecanase des fluides synoviaux ou sur des préparations de protéine recombinante ADAMTS.
L'analyse est effectuée sur des plaques 96-puits. Avant l'analyse, des dilutions sérielles des composés de l'essai sont préparées dans une solution aqueuse
Digestion:
Dans chaque puits, un volume fixe de fluide synovial ou d'activité aggrecanase générant une augmentation connue, entre 1,0 et 1,4 unités d'absorbance (405 nm) dans les conditions de l'analyse est mélangé avec 3 μl de solution de composé de l'étape de dilution respective. Le milieu d'Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) est ajouté à chaque puits pour fournir un volume final de 300 μl. Ensuite, la plaque est incubée 1 heure à 37°C dans une atmosphère de dioxyde de carbone.
Après un ajout de 5 μl d'une solution de 1 μg/μl de substrat recombinant Agglmut dans le DMEM à chaque puits (substrat tel que décrit par Bartnik E. et al., EP 785274, 1997), le mélange réactif est incubé pendant 4 heures à 37°C sous atmosphère de dioxyde de carbone.
Préparation de la plaque d'analyse :
Lors d'une première étape, la microplaque est enduite au moyen de 100 μl par puits d'un anticorps anti-souris de chèvre IgG du commerce pendant 1 heure à température ambiante (5 μg/ml dans une solution saline de phosphate tamponnée pH 7,4 [Tampon PBS] ) . Après lavage avec le tampon PBS contenant 0,1% de Tween-20 (tampon de lavage), les puits sont bloqués par une étape d'une heure d'incubation au moyen de 100 μl par puits de 5% de sérum d'albumine bovin dans un tampon PBS contenant 0,05 % de Tween-20. A la suite d'un autre rinçage au moyen du tampon de lavage, chaque puits est incubé avec 100 μl d'une solution diluée à 1:1000 d'anticorps BC-3 dans un tampon PBS contenant 0,05% de Tween 20 et 0,5% d'albumine de sérum bovin à température ambiante pendant une heure. Cet anticorps reconnaît les fragments de clivage typiques de l' aggrecanase (Hughes CE. et al., Biochem. J. 305 (3) , 799-804, 1995) .
Mode opératoire de l 'essai :
Après un autre rinçage de la plaque d'analyse avec le tampon de lavage, le jeu complet des mélanges provenant de la digestion précédente est transféré puits par puits vers cette plaque et incubé à température ambiante pendant une heure. La plaque est à nouveau lavée tel que ci-dessus. Ensuite, 100 μl du second anticorps (anticorps anti-humain IgG, marqué à la peroxydase, 1:1000 dans du PBS contenant 0,5% de ASB et 0,05% de T een-20) sont ajoutés à chaque puits, avec une incubation ultérieure à température ambiante pendant à nouveau une heure. A la suite d'un rinçage final avec le tampon de lavage, le développement de la couleur est initié par ajout de 100 μl de solution de substrat ABTS (2mg/ml, 2,2' -azinobis (3 ethylbenzthiazoline sulfonic acid dans 40 mM de citrate de sodium plus 60 mM d'hydrogenophosphate disodique, ajusté à un pH 4,4 par ajout d'acide acétique ; 0,25 μl de peroxyde d'hydrogène à 35 % ajouté par ml immédiatement avant la mesure) . La mesure est effectuée au moyen du mode de tamis à l'aide d'une détection à 405 nm par rapport à un filtre de référence (620 nm) avec des lectures automatiques à des intervalles de 5 secondes. Le développement est arrêté dès que le signal maximum (405 nm) dans la gamme d'absorbance de 1,0 à 1,4 est atteint.
Tableau 1
% d'inhibition de la conversion du substrat par activité de 1 ' aggrecanase dans le surnageant.
L'IC50 estimée du produit de l'exemple 1 est de l'ordre de 0.004 μg/ml
Inhibition du facteur Xa
Pour la calibration, un échantillon standard d'héparine de bas poids moléculaire (Enoxaparin) a été utilisé comme référence
Les dilutions sérielles du composé de l'essai sont préparées dans un tampon de 0,046 M Tris pH 8,4 contenant 0,15 M NaCl, 0,007 M EDTA, 0,1% de Tween 80 et 0,12 Iϋ/ml d'antithrombine humaine III. Les échantillons de 50 μl des dilutions respectives sont incubés avec 50 μl de facteur bovin Xa (13,6 U/ml) à 37°C pendant 80 secondes. Ensuite, 50 μl de substrat chromogénique 1,1 mM S-2765 sont ajoutés. L'absorbance à 405 nm est mesurée dans un photomètre. L'activité du facteur débloqué Xa est indiquée par l'émission de p-nitroaniline à partir du substrat .
Comparés au composé d'héparine de référence (100 U/mg) , les glycosamonoglycanes présentent un facteur Xa d'activité inhibitrice bien inférieur : Exemple 1 : 1.2 U/mg Effet du dérivé persulfaté carboxy-réduit (exemple 1) des métalloproteases humaines MMP-2 (gelatinase-A) et MMP7
Des Kit ELISA commerciaux (comme ceux fournis par exemple par la société Amersham Biosciences, kits RPN2617 and RPN 2620) ont été respectivement utilisés pour la détermination de l'activité inhibitrice des enzymes MMP-2 et MMP-7. Les concentrations des enzymes sont respectivement de 800 ng/ml pour MMP-2. Les tests ont été réalisés en accord avec les recommandations du fabricant en réalisant une série de dilutions du composé à étudier dans un tampon PBS pH 7.5. Les enzymes MMP-2 ont été inhibées de façon concentration -dépendante
ICso estimée : 0.4 μg/ml
Claims
1. Dérivés carboxy-réduits et chemioselectivement O- sulfatés de la Chondroïtine sulfate, isolés ou en mélange, ainsi que leurs sels.
2. Dérivés carboxy-réduits de la Chondroïtine Sulfate selon la revendication 1 de formule (I) :
dans laquelle Rx, R2, R3 et R4, identiques ou différents représentent H ou S03M, étant entendu que l'un au moins des substituants Rx, R2, R et R4 représente un groupement S03M, n est un entier compris entre 0 et 200, M est un métal alcalin, les dits dérivés étant sous la forme d'un composé isolé ou sous forme de mélanges, ainsi que leurs diastéréoisomères
3. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que M est choisi parmi sodium, calcium, magnésium et potassium.
4. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon la revendication 2 ou 3 caractérisé en ce que M est un atome de sodium et n est un entier compris entre 100 et 200.
5. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que Rx, R2, R3 et R4 représentent S03Na.
6. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que Rx, R2 et R4 représentent S03Na et R3 représente H
7. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que Rx représente H ou S03Na, R2 représente S03Na et R3 et R4 représentent H
8. Dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisés en ce que Rx représente H ou S03Na, R2 et R3 représentent S03Na et R4 représente H.
9. Procédé de préparation des dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel on met en œuvre successivement les étapes suivantes :
- Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate - Soit a) au moyen d'un dérivé de carbodiimide ( pour former un adduit activé) en présence d'un agent réducteur, - Soit b) par estêrification, la chondroïtine sulfate ayant le cas échéant été préalablement trans- salifiée par un sel d'ammonium quaternaire, suivie d'une réduction du dérivé ester correspondant par action d'un agent réducteur,
- Le cas échéant trans-salification du dérivé carboxy- réduit par un sel d'ammonium quaternaire Sulfatation en milieu organique suivie d'une salification,
10. Procédé de préparation des dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate selon l'une quelconque des
revendications 1 à 8, dans lequel on met en œuvre successivement les étapes suivantes : - Trans-salification de la chondroïtine sulfate par un sel d'ammonium quaternaire, - Sulfatation en milieu organique suivie d'une salification - Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate sulfatée - Soit a) au moyen d'un dérivé de carbodiimide ( pour former un adduit activé) en présence d'un agent réducteur, - Soit b) par estërification de la chondroïtine sulfate laquelle ayant le cas échéant été préalablement trans-salifiée par un sel d'ammonium quaternaire, suivie d'une réduction du dérivé ester correspondant paraction d'un agent réducteur, - Le cas échéant trans-salification du dérivé persulfaté carboxy- éduit par un sel d'ammonium quaternaire puis resuifatation suivie d'une salification
11. Procédé selon la revendication 9 ou 10 caractérisé en ce que la sulfatation s'effectue en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine à une température comprise entre -15 et 70°C.
12. Procédé selon la revendication 9 caractérisé en ce que la sulfatation s'effectue à partir d'un sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite, ( composé de formule (I) avec RX==H / R2=S03Na ou Rx= S03Na / R2=H et R3=R4=H) en présence de 10 à 30 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique par fonction
hydroxyle à sulfater, et à une température comprise entre 50 et 70 °C afin d'obtenir un composé de formule (I) tel que défini à la revendication 5 (R1=R2=R3=R4=S03Na) .
13. Procédé selon la revendication 9 caractérisé en ce que la sulfatation s'effectue à partir de la chondroïtine sulfatée carboxy-réduite, sel de benzéthonium telle que définie à la revendication 6 ( composé de formule (I) avec Rι=R2=R4=S03Na et R3=H) en présence de 10 à 30 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à environ 20°C afin d'obtenir un composé de formule (I) tel que défini à la revendication 5
.
1 . Procédé de préparation selon la revendication 9 caractérisé en ce que la sulfatation s'effectue à partir de la Chondroïtine sulfate carboxy-réduite, sel de benzéthonium ( composé de formule (I) avec RX=H / R2=S03Na ou Rx= S03Na / R2=H et R3=R4=H) ) , en présence de 5 à 15 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures comprises entre -15 et 5°C afin d'obtenir un composé de formule (I) tel que défini à la revendication 8 avec RX=H / S03Na R2=R3=S03Na et R4=H.
15. Procédé de préparation selon la revendication 10 caractérisé en ce que la resuifatation s'effectue à partir de la chondroïtine sulfate carboxy-réduite 6-0- sulfatëe, sel de benzéthonium ( composé de formule (I) avec Rx=H/S03Na R2=S03Na et R3=R4=H) telle que définie à la revendication 7, en présence de 5 à 15 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique, à des températures comprises entre -15 et 5°C et en particulier en présence d'environ 10 équivalents de complexe pyridine - anhydride sulfurique à environ -10°C afin d'obtenir des composés de formule (I) avec Rx=H/S03Na R2=R3=S03Na et R4=H tels que définis à la revendication 8.
16. Procédé selon la revendication 9 ou 10 caractérisé en ce que la carboxyréduction s'effectue au moyen de chlorhydrate de 1- (3-diméthyl aminopropyl) -3- éthylcarbodiimide en présence du borohydrure de métal alcalin tel que le borohydrure de sodium.
17. Procédé selon la revendication 16 caractérisé en ce qu'on utilise 5 à 20 équivalents de chlorhydrate de l-(3- diméthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide et à un pH compris entre 4 et 5 et en particulier entre 4,3 et 4,9.
18. Procédé selon la revendication 9 ou 10 caractérisé en ce que la réduction de l' adduit activé du dérivé de la chondroïtine sulfate est réalisée avec 10 à 300 équivalents de borohydrure de métal alcalin à une température comprise entre 10 et 70 °C et en particulier entre 10 et 30°C.
19. Procédé selon la revendication 9 ou 10 caractérisé en ce que la carboxy-réduction s'effectue par réduction d'un ester méthylique en présence de borohydrure de métal alcalin tel que le borohydrure de sodium.
20. Procédé selon la revendication 9 mettant en oeuvre les étapes suivantes : - soit a) Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate sel de sodium au moyen du chlorhydrate de 1- (3- diméthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide en présence du borohydrure de sodium, - soit b) estérification par action du iodure de mêthyle sur le dérivé de la chondroïtine sulfate préalablement trans-salifié par le chlorure de Benzéthonium puis réduction du dérivé ester méthylique correspondant par le borohydrure de sodium puis,
- Trans-salification du dérivé carboxyreduit par le chlorure de Benzéthonium - Sulfatation du sel de benzéthonium de la chondroïtine sulfate en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine, suivie d'une salification par l'acétate de sodium.
21. Procédé selon la revendication 10 mettant en œuvre les étapes suivantes :
- Trans-salification de la chondroïtine sulfate sel de sodium par le chlorure de Benzéthonium, - Sulfatation du sel de Benzéthonium de la Chondroïtine sulfate en milieu organique au moyen d'un complexe d'anhydride sulfurique avec une base organique telle que la pyridine ou la triméthylamine, suivie d'une salification par l'acétate de sodium puis, - soit a) Carboxy-réduction de la chondroïtine sulfate au moyen du chlorhydrate de 1- (3-diméthyl aminopropyl) -3-ethylcarbodiimide en présence du borohydrure de sodium, - soit b) estérification par action du iodure de méthyle sur la chondroïtine Sulfate préalablement trans-salifiée par le chlorure de Benzéthonium puis réduction du dérivé ester méthylique correspondant par le borohydrure de sodium, - puis, le cas échéant trans-salification du dérivé persulfaté carboxy-réduit par le chlorure de benzéthonium puis resulfatation par le complexe d'anhydride sulfurique - base organique suivie d'une salification par l'acétate de sodium.
22. Procédé d'obtention des dérivés isolés de la chondroïtine sulfate carboxy-réduits et chemioselectivement O-sulfatés selon la revendication 1 à 8 à partir du mélange de dérivés carboxy-réduits de la chondroïtine sulfate tels qu'obtenus selon le procédé tel que défini à l'une quelconque des revendications 10 à 22, caractérisé en ce qu'on fractionne le mélange par chromatographie sur des colonnes remplies de gel de type polyacrylamide agarose ou un gel de polyacrylamide, le mélange étant élue par une solution d'hydrogenocarbonate de sodium, notamment de 0,1 à 1 mole/1.
23. A titre de médicaments les composés tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 8
24. A titre de médicaments selon la revendication 23, les composés tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour traiter ou prévenir les désordres qui affichent une activité accrue d'au moins une des métalloprotéinases de matrice, telle que la collagênase élastase, la matrisyline (MMP-7) , 1 ' aggrecanase hADAMTSl et la gélatinase A (MMP-2) .
25. A titre de médicaments selon la revendication 23 ou 24, les composés tels que définis à l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour traiter ou prévenir des désordres tels que la dégénérescence articulaire, la spondylose, la chondrolyse, associée à un traumatisme de l'articulation ou une immobilisation prolongée de l'articulation, les désordres des tissus conjonctifs, les troubles de la cicatrisation de plaie, les désordres parodontaux, les désordres chroniques du système locomoteur, les arthropathies, les myalgies, ou les désordres du métabolisme osseux.
26. les compositions pharmaceutiques renfermant un médicament tel que défini à l'une quelconque des revendications 24 à 25 et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables .
27. Dérivés carboxy-réduits et chemioselectivement O- sulfatés de la chondroïtine sulfate, isolés ou en mélange tels que définis selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 susceptibles d'être obtenus selon le procédé tel que défini à l'une quelconque des revendications 9 à 22.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0314988 | 2003-12-19 | ||
| FR0314988A FR2864089B1 (fr) | 2003-12-19 | 2003-12-19 | Derives carboxy-reduits de la chondroitine sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2005061551A1 true WO2005061551A1 (fr) | 2005-07-07 |
Family
ID=34630339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/FR2004/003228 WO2005061551A1 (fr) | 2003-12-19 | 2004-12-15 | Derives carboxy-reduits de la chondroïtine sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2864089B1 (fr) |
| WO (1) | WO2005061551A1 (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114057908A (zh) * | 2020-08-08 | 2022-02-18 | 烟台东诚药业集团股份有限公司 | 一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988000211A1 (fr) * | 1986-07-07 | 1988-01-14 | Pharmacia Ab | Procede de preparation de polysaccharides sulfates par traitement du polysaccharide avec un agent reducteur avant sulfatation |
| WO1992001003A1 (fr) * | 1990-07-10 | 1992-01-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Derives de glycosaminoglycan et leur emploi en tant qu'inhibiteurs d'invasion de tumeurs ou de profusion metastatique-ii |
| WO1992013541A1 (fr) * | 1991-01-30 | 1992-08-20 | Hoechst Aktiengesellschaft | Utilisation de polysaccharides substitues pour le traitement de maladies degeneratives des articulations |
| WO1994028889A1 (fr) * | 1993-06-08 | 1994-12-22 | Neogenix, Inc. | Composes synthetiques et naturels purifies pour le traitement de l'osteo-arthrite |
| JP2000080102A (ja) * | 1998-09-04 | 2000-03-21 | Shin Nippon Yakugyou Kk | Ｏ−過硫酸化グリコサミノグリカン及びそれを有効成分として含有する抗血液凝固剤 |
-
2003
- 2003-12-19 FR FR0314988A patent/FR2864089B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-12-15 WO PCT/FR2004/003228 patent/WO2005061551A1/fr active Application Filing
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988000211A1 (fr) * | 1986-07-07 | 1988-01-14 | Pharmacia Ab | Procede de preparation de polysaccharides sulfates par traitement du polysaccharide avec un agent reducteur avant sulfatation |
| WO1992001003A1 (fr) * | 1990-07-10 | 1992-01-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Derives de glycosaminoglycan et leur emploi en tant qu'inhibiteurs d'invasion de tumeurs ou de profusion metastatique-ii |
| WO1992013541A1 (fr) * | 1991-01-30 | 1992-08-20 | Hoechst Aktiengesellschaft | Utilisation de polysaccharides substitues pour le traitement de maladies degeneratives des articulations |
| WO1994028889A1 (fr) * | 1993-06-08 | 1994-12-22 | Neogenix, Inc. | Composes synthetiques et naturels purifies pour le traitement de l'osteo-arthrite |
| JP2000080102A (ja) * | 1998-09-04 | 2000-03-21 | Shin Nippon Yakugyou Kk | Ｏ−過硫酸化グリコサミノグリカン及びそれを有効成分として含有する抗血液凝固剤 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BAZIN H G ET AL: "INHIBITION OF APOLIPOPROTEIN E-RELATED NEUROTOXICITY BY GLYCOSAMINOGLYCANS AND THEIR OLIGOSACCHARIDES", BIOCHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY. EASTON, PA, US, vol. 41, no. 25, 2002, pages 8203 - 8211, XP001196989, ISSN: 0006-2960 * |
| DATABASE WPI Section Ch Week 200029, Derwent World Patents Index; Class B04, AN 2000-331701, XP002286685 * |
| PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 2000, no. 06 22 September 2000 (2000-09-22) * |
| TAYLOR R L ET AL: "STOICHIOMETRIC DEPOLYMERIZATION OF POLYURONIDES AND GLYCOSAMINOGLYCURONANS TO MONOSACCHARIDES FOLLOWING REDUCTION OF THEIR CARBODIIMIDE-ACTIVATED CARBOXYL GROUPS", BIOCHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, EASTON, PA, US, vol. 11, no. 8, 1972, pages 1383 - 1388, XP008032393, ISSN: 0006-2960 * |
| WOLFROM M L ET AL: "CHONDROITIN SULFATE MODIFICATIONS. I. CARBOXYL-REDUCED CHONDROITIN AND CHONDROSINE", JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, WASHINGTON, DC, US, vol. 82, 5 April 1960 (1960-04-05), pages 1673 - 1677, XP001193362, ISSN: 0002-7863 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114057908A (zh) * | 2020-08-08 | 2022-02-18 | 烟台东诚药业集团股份有限公司 | 一种低分子硫酸软骨素钠的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2864089B1 (fr) | 2006-02-03 |
| FR2864089A1 (fr) | 2005-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0116801B1 (fr) | Héparine dépolymérisée et supersulfatée, procédé pour sa préparation et compositions pharmaceutiques en contenant | |
| CA1327968C (fr) | Heparines de bas poids moleculaire, a structure reguliere leur preparation et leurs applications biologiques | |
| EP0214879B1 (fr) | Procédé de sulfatation de glycosaminoglycanes, nouveaux glycosaminoglycanes obtenus et leurs applications biologiques | |
| EP0428182B1 (fr) | Dérivés du dextrane dotés, notamment, de propriétés anticoagulantes et de propriétés anticomplémentaires, leur préparation et leurs applications biologiques | |
| EP0208623A2 (fr) | Utilisation de poly- et oligosaccharides pour l'obtention de médicaments actifs dans les pathologies du tissu conjonctif | |
| JP4870068B2 (ja) | レインを含むヒアルロン酸のエステル、その製造方法、およびそれを含んでなる組成物 | |
| CA2678168A1 (fr) | Heparines de bas poids moleculaire comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine, leur procede de preparation et leur utilisation | |
| CA2577258C (fr) | Hexadecasaccharides biotinyles, leur preparation et leur utilisation comme anticoagulants et antithrombotique de l'heparine | |
| EP2120970A1 (fr) | Heparines comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine, leur procede de preparation et leur utilisation | |
| JP2001163789A (ja) | マトリックスメタロプロテアーゼ阻害用医薬組成物 | |
| WO2005061550A1 (fr) | Derives carboxy-reduits de l'acide hyaluronique, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant | |
| WO2005061551A1 (fr) | Derives carboxy-reduits de la chondroïtine sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant | |
| WO2005061549A1 (fr) | Derives carboxy-reduits du dermatan sulfate, leur preparation, leur application comme medicament et les compositions pharmaceutiques les renfermant | |
| US10813944B2 (en) | Cyclodextrins as procoagulants | |
| JP2001097867A (ja) | 皮脂産生抑制剤 | |
| US20050203056A1 (en) | Carboxyl-reduced derivatives of hyaluronic acid, preparation thereof, use thereof as a medicinal product and the pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0344068B1 (fr) | N-Polyosyl-polypeptides | |
| JPH02223525A (ja) | 血管新生阻害剤 | |
| EP0138632B1 (fr) | Complexes contenant des oligosaccharides, leur préparation et leurs applications biologiques et biochimiques | |
| US20050187187A1 (en) | Carboxyl-reduced derivatives of chondroitin sulfate, preparation thereof, use thereof as a medicinal product and the pharmaceutical compositions containing them | |
| FR2622450A1 (fr) | Association heparine/dermatane sulfate | |
| US20050164983A1 (en) | Carboxyl-reduced derivatives of dermatan sulfate, preparation thereof, use thereof as a medicinal product and the pharmaceutical compositions containing them | |
| FR2651436A1 (fr) | Compositions pharmaceutiques contenant un derive substitue soluble de dextrane. | |
| FR2637804A1 (fr) | Compositions pharmaceutiques contenant un derive d'heparine partiellement n-desulfate a activite antithrombotique |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AK | Designated states |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW |
|
| AL | Designated countries for regional patents |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG |
|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application | ||
| NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
| WWW | Wipo information: withdrawn in national office |
Country of ref document: DE |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |