WO2005054468A1

WO2005054468A1 - 抗糖尿病剤の標的タンパク質及び対応する新規抗糖尿病剤「インスフル」

Info

Publication number: WO2005054468A1
Application number: PCT/JP2004/016996
Authority: WO
Inventors: Yorimasa Suwa; Tsuyoshi Yamada; Hironori Osaki; Minoru Furuya
Original assignee: Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd.
Priority date: 2003-12-01
Filing date: 2004-11-16
Publication date: 2005-06-16
Also published as: JPWO2005054468A1; EP1698696A1; US20070093536A1; EP1698696A4

Abstract

　チアゾリジン誘導体等の抗糖尿病剤の分子標的を明らかにする。　スクリーニング候補物質を以下の（ａ）又は（ｂ）に示すタンパク質に接触させる工程と、（ａ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ｂ）配列番号２に示されるアミノ酸配列において、１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、抗糖尿病剤と相互作用するタンパク質　上記候補物質と上記タンパク質との相互作用を検出する工程と、を備える抗糖尿病剤のスクリーニング方法。

Description

明細書

抗糖尿病剤の標的タンパク質及び対応する新規抗糖尿病剤「インスフル

J

技術分野

[0001] 本発明は、公知の抗糖尿病剤の標的タンパク質及び当該タンパク質を用いた新規抗糖尿病剤のスクリーニング方法に関する。

背景技術

[0002] 糖尿病患者は WHOの推計によれば、現在（2003年)世界中で 1億 5000万人であり、 2025年には 3億人に達するといわれている。現在の米国では人口の 6%が糖尿病を罹患しており、糖尿病が原因となる合併症対策コストを合わせた関連医療費は 97年には 980億ドルに達してヽる。世界における経口血糖降下剤の巿場は 8000億一 9000億円と推定され、 2010年には 2兆一 3兆円に達すると、う推定もある。

[0003] 日本では 98年の調査で患者数 690万人であり、インスリンの効き目が低下し、糖尿病の予備軍とされる耐糖能異常を示す人を合わせると 1370万人に達した。糖尿病の薬物療法にはインスリンのような注射型剤のほかに経口型薬剤がある力合計は 1800 億一 2100億円と推定される。

[0004] 糖尿病には、インスリン分泌が著しく低下したことによって発症するインスリン依存型糖尿病（1型）と、インスリン分泌はある程度保たれているものの、なお不足しているィンスリン非依存型糖尿病（2型）とがある。 2型糖尿病患者の増加は特に著しぐ 40歳以上の人の 10%が罹患していると言われている。わが国では糖尿病の 90%以上がこの 2型糖尿病患者である。 2型糖尿病は、インスリン分泌不全とインスリン抵抗性とによる病態を特徴とする。 2型糖尿病におけるインスリン作用不足は次の病因による。

[0005] '脾|8—細胞力のインスリン分泌不足

•肝からの糖の放出の亢進

'筋や脂肪組織など末梢組織でのインスリン抵抗性

2型糖尿病の発症に対して、インスリン抵抗性は大きく関与しているのみならず、高血圧、肥満、高脂血症などとの関連性も指摘されている。最近になって糖尿病予防 · 治療においてインスリン抵抗性は特に重視されている。インスリン抵抗性は、血中にインスリンが存在していても、標的組織である肝、筋肉、脂肪組織などにおいて十分な作用が発現できない状態を意味している。インスリン抵抗性は、インスリンの感受性が低下し、正常なインスリン作用が阻害されているので、通常以上の量のインスリンを必要とする。肥満のな、本態性高血圧患者にぉ、てインスリン感受性は 30— 40%の低下と報告されており、肥満のある場合はさらに感受性は低下する。従って、インスリン抵抗性は本態性高血圧全体では 50— 60%、肥満を伴う場合は 70— 80%、空腹時中性脂肪高値を伴う場合は 80%が認められるとされている。

[0006] インスリン抵抗性には、遺伝因子のほか、肥満、糖尿病（特に肥満を伴ったインスリン非依存型糖尿病）、過食、運動不足、ストレス、妊娠、感染症、加齢、ステロイドの長期使用などの環境因子が関わっている。インスリン抵抗性は、インスリン受容体のインスリン結合能は正常だが、インスリン受容体遺伝子の異常などにより、細胞表面のインスリン受容体が高度に減少したり、チロシンキナーゼ活性が低下したために起こる。また、インスリン受容体に対する自己抗体が生じ、インスリン抵抗性を生じることもめる。

[0007] インスリン抵抗性の発現は、脾臓の j8—細胞からのインスリン過分泌と!/ヽぅ形で見られる。すなわち生体はインスリン抵抗性に打ち勝つために、インスリンを多量に分泌するので血中インスリン値が高くなり、一般に高インスリン血症が見られることが多い。

[0008] インスリン抵抗性が加わっても、脾 β 細胞のインスリン分泌予備能が十分であれば、代償性のインスリン分泌亢進によって作用の不足は起こらない。しかし、脾 j8—細胞側に何らかの障害があって、インスリン分泌不足になると代償は困難となり、インスリンの作用不足が起こり高血糖をきたす。さらに高血糖が持続すると、高血糖が二次的に脾のインスリン分泌を抑制することになり、肝や筋でのインスリン作用も低下させ、インスリン抵抗性を増加させるなどの悪循環を起こす。

[0009] インスリン抵抗性が長く続くと、高インスリン血症そのものが、インスリン受容体の数を減少させたり、受容体の j8—サブユニットのチロシンキナーゼ活性を低下させる。高インスリン血症自体力インスリン抵抗性を悪ィ匕させ、さらにインスリンの効果が低下することになる。 [0010] 従来開発されてきた経口抗糖尿病剤には以下のようなものがある（薬効分類: 396)

[0011] 1 'インスリン分泌促進剤：

1-aスルホ-ル尿素剤；トルプタミド（へキストラスチノン他）、クロルプロパミド（ダイヤビニーズ他）、ァセトへキサミド (ジメリン）、トラザミド（トリナーゼ）、グリクロビラミド (デァメリン S)、ダリベンクラミド (オイダルコン、ダォニール他）、ダリクラジド (ダリミクロン他）

1- bスルホ-ルアミド剤；グリブゾール（グルデアーゼ）

2.インスリン抵抗性改善剤：

2- aチアゾリジン剤；トログリタゾン（ノスカール）、ピオグリタゾン

2- bビグアナイド剤；ブホルミン（ジべトン S他）、トホルミン (グリコラン、メルヒケン）

3.食後過血糖改善剤：

3- a a -ダルコシダーゼ阻害剤；ァカルボース（ダルコバイ）、ボグリボース（ベイスン）これら経口糖尿病薬には種々の問題点がある。スルホニル尿素剤は糖尿病と診断されたばカゝりの患者に最も普通に使われる薬剤であるが、運動療法や食事療法が不十分な場合、すい臓の疲弊を必要以上に早める。 αダルコシダーゼ阻害剤は血糖値に対する影響が十分ではな、と、う指摘がある。

[0012] 一方、チアゾリジン誘導体はスルホニル尿素剤のようにインスリン分泌刺激作用を介さず、脾の )8—細胞の機能を保ちつつ、生体のインスリン感受性を増強させて、糖尿病状態で亢進してヽるインスリン標的臓器でのインスリン抵抗性を改善して、末梢での糖利用を促進し、肝での糖放出を抑制して血糖低下作用を示す。

[0013] チアゾリジン誘導体はインスリン受容体のインスリン結合部以降に作用してインスリン抵抗性を軽減し、肝における糖産生を抑制し、末梢組織における糖利用を高め血糖を低下させる。この作用は、インスリン抵抗性の主因である細胞内インスリン情報伝達機構を正常化することによると推測されるが、その分子標的は完全には明らかになつていない。

[0014] また、糖尿病は複数の遺伝子変異、環境の問題が集積した疾患であり、症状は似ていても、その根本原因に個人差がある。糖尿病の遺伝素因として明らかになつている遺伝子に PPAR y、 j8 3アドレナリン受容体、アディポネクチンがある。 3者の異常はそれぞれインスリン抵抗性を増悪させる。抗糖尿病剤の分子標的を明らかにすることは、患者の遺伝情報に基づくオーダーメイド医療を開発するうえにおいても重要である。

特干文献 1： WY FUJIMOTO he importance of insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus. Am. J. Med., Apr 2000; 108 Suppl. 6a: 9S-14S

非特許文献 2： M Diamant and RJ Heine "Thiazolidinediones in type 2 diabetes mellitus: current clinical evidence Drugs, Jan 2003; 63(13): 1373-1405 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0015] しカゝしながら、チアゾリジン誘導体を始めとする抗糖尿病剤は、インスリン抵抗性に対して高、有効性を示すが、その薬理作用機序にっ、ては明らかになって!/、な！/、のが現状である。チアゾリジン誘導体等の抗糖尿病薬の薬理作用機序、特にチアゾリジン誘導体の分子標的が明らかになれば、さらに薬理作用の明らかな新規薬剤の開発が可能となる。

[0016] そこで、本発明は、上述したような実情に鑑み、チアゾリジン誘導体等の抗糖尿病薬の分子標的を明らかにし、新規抗糖尿病薬のスクリーニング方法を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0017] 上述した目的を達成するために本発明者らが鋭意検討した結果、チアゾリジン誘導体の分子標的となるタンパク質を同定することができ、当該タンパク質を用いた新規なスクリーニング方法を開発することができ、本発明を完成するに至った。

[0018] すなわち、本発明は以下を包含する。

[0019] (1) 以下の（a)又は (b)に示され、抗糖尿病剤の標的タンパク質。

[0020] (a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

(b)配列番号 2に示されるアミノ酸配列において、 1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、抗糖尿病剤と相互作用するタンパク質 (2) 上記抗糖尿病剤はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする (1)記載の標的タンパク質。

[0021] (3) 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする (2)記載の標的タンパク質。

[0022] (4) γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする (1)記載の標的タンパク質。

[0023] (5) 以下の（a)又は (b)に示され、抗糖尿病剤の標的タンパク質をコードする遺伝子

[0024] (a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

(b)配列番号 2に示されるアミノ酸配列において、 1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、抗糖尿病剤と相互作用するタンパク質

(6) 上記抗糖尿病剤はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする (5)記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[0025] (7) 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする (6)記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[0026] (8) 上記標的タンパク質は γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする (5)記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[0027] (9) スクリーニング候補物質を以下の（a)又は (b)に示すタンパク質に接触させるェ程と、

(a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

上記候補物質と上記タンパク質との相互作用を検出する工程と、

を備える抗糖尿病剤のスクリーニング方法。

[0028] (10) 上記抗糖尿病剤はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする (9)記載の抗糖尿病剤のスクリーニング方法。 [0029] (11) 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする (10)記載の抗糖尿病剤のスクリーニング方法。

[0030] (12) 上記標的タンパク質は γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする (9)記載の抗糖尿病剤のスクリーニング方法。

[0031] (13) (9)乃至 (12)いずれか 1記載のスクリーニング方法によってスクリーニングされ、上記タンパク質と相互作用を示す物質を主成分とする抗糖尿病剤。

[0032] (14) 一般式 (I)

[化 1]

[0033] (上記式 (I)中、 Rは、水素、炭素数 1一 10のアルキル基、炭素数 3— 7のシクロアル

1

キル基、炭素数 7— 11のフエ-ルアルキル基、フエ-ル基、窒素、酸素及び硫黄からなる群力も選ばれる 1又は 2のへテロ原子を含む 5又は 6員環のへテロ環である。 L

1 及び Lは、同一又は異なり、それぞれ水素又は炭素数 1一 3のアルキル基である力、

2

若しくは、一緒になつて炭素数 2— 6のシクロアルキル基を形成する。 mは 1一 5のいずれかの整数を表す。）で表されるチアゾリジン誘導体。

[0034] (15) 上記式 (I)中、 L及び Lは、一緒になつて形成する炭素数 2— 6のシクロアルキ

1 2

ル基であることを特徴とする (14)記載のチアゾリジン誘導体。

[0035] (16) 上記式 (I)中、 Rは水素であり、 L及び Lは一緒になつて形成する炭素数 2— 6

1 1 2

のシクロアルキル基であることを特徴とする (14)記載のチアゾリジン誘導体。

[0036] (17) 上記式 (I)中、 Rは炭素数 1一 10のアルキル基であり、 L及び Lは一緒になつ

1 1 2

て形成する炭素数 2— 6のシクロアルキル基であることを特徴とする (14)記載のチアゾリジン誘導体。

[0037] (18) 5-{4-[2-(1-メチル -シクロへキシルォキシ) -エトキシ] -ベンジル }-チアゾリジン

-2,4-ジオンであることを特徴とする (14)記載のチアゾリジン誘導体。

[0038] (19) (14)乃至 (18)いずれか 1記載のチアゾリジン誘導体の薬理上許容される塩。 [0039] (20) (14)乃至 (18)いずれか 1記載のチアゾリジン誘導体及び/又はその薬理上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。

[0040] (21) 抗糖尿病剤であることを特徴とする (20)記載の医薬組成物。

[0041] (22) 一般式 (Π)

[化 2]

(^π)

[0042] (上記式 (II)中、 Rは、水素、炭素数 1

1 一 10のアルキル基、炭素数 3— 7のシクロアルキル基、炭素数 7— 11のフエ-ルアルキル基、フエ-ル基、窒素、酸素及び硫黄からなる群力も選ばれる 1又は 2のへテロ原子を含む 5又は 6員環のへテロ環である。 L

2

若しくは、一緒になつて炭素数 2 6のシクロアルキル基を形成する。 mは 1一 5のいずれかの整数を表す。 Xは MeSO、 p-toluenesulfonyUヨウ素、臭素、塩素及び水酸

2

基力なる群力選ばれる一種である。 )

で表される化合物と、一般式 (III)

[化 3]

[0043] で表される化合物とを縮合反応させる、チアゾリジン誘導体の製造方法。

発明の効果

[0044] 本発明によれば、新規抗糖尿病剤のスクリーニングに使用することができる標的タンパク質及び当該タンパク質をコードする遺伝子を提供することとができる。また、本発明によれば、当該標的タンパク質を用いることによって、抗糖尿病剤のスクリーニング方法を提供することができる。

[0045] 本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願 2003-402164号の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。

図面の簡単な説明

[0046] [図 1]ピオグリタゾンと FLJ14797由来タンパク質との相互作用解析の結果を示す特性図である。

[図 2]配列番号 2に示すアミノ酸配列と NP_055259.1のアミノ酸配列とのァライメントを示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0047] 以下、本発明を詳細に説明する。

[0048] チアゾリジン誘導体に対して相互作用を示すタンパク質

本発明に係るタンパク質は、抗糖尿病剤に対して相互作用を示すタンパク質である

。このタンパク質は、特に、抗糖尿病薬の一種であるチアゾリジン誘導体 (具体的にはピオグリタゾン）に対する相互作用を示す。ピオグリタゾンの構造式を以下に示す。

[化 4]

[0049] 本発明に係るタンパク質と相互作用を示す抗糖尿病剤としては、チアゾリジン誘導体を挙げることができる。チアゾリジン誘導体としては、上記構造式に類似の構造式を有し、ピオグリタゾンと同様な薬理作用を有する化合物を挙げることができる。但し、タンパク質が相互作用を示すチアゾリジン誘導体としては、ピオグリタゾンに限定されず、例えばロシグリタゾン、トロゲリタゾン、シグリタゾン等を例示することができる。

[0050] 本発明に係るタンパク質は、例えば、配列番号 2に表すアミノ酸配列を有するタンノク質である。ここで、本発明に係るタンパク質としては、配列番号 2に表すアミノ酸配列からなるタンパク質に限定されず、配列番号 2に表すアミノ酸配列において 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は置換されたアミノ酸配列力なり、且つ、チァゾリジン誘導体に対して相互作用を示すタンパク質も含んでいる。

[0051] アミノ酸の置換、欠失あるいは挿入の数及び部位は、その機能が保持される限り制限はないが、具体的には、配列番号 2に表すアミノ酸配列において、 1一 30個、好ましくは 1一 10個、さらに好ましくは 1一 5個のアミノ酸が置換、欠失あるいは挿入されたアミノ酸配列であってもよ、。

[0052] また、本発明に係るタンパク質としては、配列番号 2に表すアミノ酸配列において、 50%以上、好ましくは 70%以上、さらに好ましくは 90%以上の相同性を有するァミノ酸配列から構成され、且つ、チアゾリジン誘導体に対して相互作用を示すタンパク質であっても良い。ここで、上記相同性の数値は、配列解析ソフトウェアである DNASI S (日立ソフトウェアエンジニアリング）を用いて、例えば、マキシムマッチング法のコマンドを実行することにより求められる。その際のパラメータは、デフォルトの設定 (初期設定)とする。

[0053] なお、配列番号 2に表されるタンパク質は、 NEDO (新エネルギー '産業技術総合開発機構）タンパク質 cDNA構造解析プロジェクト（Http：〃 www.nedo.go. jp/bip/)にお!/ヽて FLJ14797として登録された cDNAにコードされ、 Swiss- Prot Q9USQ2、 GenBank AAH09870.1及び ReSeq NP_055259.1と高い相同性（93%)を示す。配列番号 2に示すアミノ酸配列と NP_055259.1のアミノ酸配列とのァライメントを図 2に示す。

AAH09870.1及び ReSeq NP_055259.1は、 γチュブリン'リング複合体タンパク質 GCP4遺伝子として知られている（Fava, F et al.， Human 76p: A new member of the gamma- tubulin- associated protein family, J. Cell Biol. 147(4), 857-868 (1999))。したがって、本発明に係るタンパク質もまた、 γチュブリン'リング複合体タンパク質 GCP4と機能的に非常に類似性の高いタンパク質であると考えられる。なお、本発明に係るタンパク質をコードする遺伝子については、 WO0204514に公開されているが、その機能については未知であり、本発明の以前においてはチアゾリジン誘導体に対する相互作用を示すタンパク質をコードする遺伝子であることは知られていない。

[0054] 一方、本発明に係る遺伝子、すなわち、本発明に係るタンパク質をコードする cDNA

(FLJ14797)の塩基配列としては、例えば、配列番号 1に示す塩基配列を挙げることができる力この塩基配列に限定されるものではない。例えば、配列番号 1に示す塩基配列において、配列番号 2に示すアミノ酸配列をコードするようにコドンを変更させた塩基配列であっても良い。また、配列番号 1に示すアミノ酸配列をコードする塩基配列と相補的な塩基配列に対してストリンジヱントな条件でハイブリダィするような塩基配列からなり、且つチアゾリジン誘導体に対して相互作用を示すタンパク質をコードする塩基配列も本発明に係る遺伝子に含まれる。

[0055] ここで、「ストリンジェントな条件下でハイブリタイズする」とは、例えば、 6 X SSC、 0.

5%SDS及び 50%ホノレムアミドの溶液中で 42。Cにてカロ温した後、 0. 1 X SSC、 0. 5 %SDSの溶液中で 68°Cにて洗浄する条件でも依然として陽性のハイブリタイズのシグナルが観察されることを表す。

[0056] チアゾリジン誘導体と本発明に係るタンパク質との相互作用

以下、チアゾリジン誘導体と本発明に係るタンパク質の相互作用につ、て説明する

[0057] 糖尿病におけるインスリン作用の不足の原因は、脾臓からのインスリン分泌量の低下、及び肝臓や筋肉におけるインスリン感受性の低下 (インスリン抵抗性)の二つの機序に大別されるが、肝臓や筋肉におけるインスリン作用は以下のような細胞内機構に基づく。すなわち、インスリンが細胞表面のインスリン受容体に結合するとチロシンキナーゼが活性ィ匕され、インスリン受容体の自己リン酸ィ匕が起こる。さらに、インスリン受容体のリン酸化チロシンに細胞内基質である IRS-1が結合し、インスリン受容体によつて IRS-1のチロシンがリン酸化される。次に IRS-1のリン酸化チロシンに PI3キナーゼが結合し、活性化される。活性ィ匕された PI3キナーゼは、 PIを PI(3)Pに、 PI(4)Pを PI(3,4)P2及び PI(3,4,5)P3にリン酸化する。

[0058] PI3キナーゼによる細胞内シグナルは、たとえば GLUT4を含む小胞に伝えられ、

GLUT4が細胞表面にトランスロケートされてグルコースの細胞内への取り込みが促進されるものと考えられている。一方、 Kapellerら（JBC, Vol. 270, pp.25985- 25991, 1995)及び Inukaiら（Biochem. J. Vol. 346, pp.483- 489, 2003)はヒト A431細胞あるいは CHO細胞を用いた実験ではある力インスリン刺激により、 PI3キナーゼが γチュブリンと結合することを報告している。 yチュブリンは小さなチュブリンを含み中心体に多く局在している。中心体はほぼすベての動物細胞に存在する微小管形成中心であり、細胞周期の間期には核膜の外側に接して存在しているが、間期に倍加、二等分され、有糸分裂の開始時に両側に移動して紡錘体のふたつの極になる。 Kapeller らは、 PI3キナーゼカ Sインスリン刺激による微小管形成を介して、脂肪細胞等の分ィ匕増殖に影響する可能性を示唆して、る。

[0059] 上述したように、本発明に係るタンパク質は、 γチュブリン'リング複合体タンパク質 GCP4と機能的に非常に類似性の高いタンパク質であると考えられるため、チアゾリジン誘導体が結合することにより、 _Ύチュブリンと ΡΙ3キナーゼの結合を増強する可能性が考えられる。

[0060] 一方、チアゾリジン誘導体がペルォキシソーム増殖薬活性化受容体、 peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) yのリガンドとなる可能性がしめされて以来、これらのインスリン感受性改善薬が PPAR yを介するどのような機構で薬理作用を発現するのかに注目が集まっている。 PPARは核内ホルモン受容体スーパーファミリーのひとつであり、リガンドの結合により活性化されると retinoid-X-receptor- α (RXR a )と複合体を形成し、転写因子として標的遺伝子の上流にある特異的応答配列 (.peroxisome proliferator responsive element, PPRE)に結合して遺子の発現を導する。 PPARの名称の由来となったペルォキシソーム増殖薬 (PP)とは、細胞内顆粒ペルォキシソームを増殖させるという共通した作用を持つ一群の化学物質につけられた総称である。発見当初、 PPARは PPの多面的な効果 (ペルォキシソーム増殖、酵素誘導、発癌)を仲介する受容体と考えられたが、リガンド探索、標的遺伝子探索を含むその後の広範な研究から、脂質代謝を含む多くの生理機能の重要な調節因子であることが明らかになつてきた。

[0061] PPARにはサブタイプがあり、 PPAR a、 PPAR jS (PPAR δあるいは NUC1とも呼ばれる）及び PPAR γ (転写開始点と alternative splicingの違いにより PPAR γ 1及び PPAR Ύ 2がある）と呼ばれている。ある化学物質 (リガンド）が PPARを活性ィ匕させる能力はサブタイプによって異なり、し力も各サブタイプの発現は組織により大きく異なる。 PPARひは肝臓、心筋、腸及び腎近位尿細管での発現が高い。 PPAR |8は広い組織に発現しており、 α及び γよりもそのレベルが高い場合もある。 PPAR yは主に脂肪組織及び免疫系で発現している。こうした組織分布の違いは、 PPARサブタイプが異なる生理的役割を持つことを示唆してヽる。

[0062] PPARの標的遺伝子が明らかになるにつれ、 PPAR aが主に肝臓及び心筋などにおける脂質酸ィ匕に関わる種々の遺伝子の発現を制御することが分かって来た。一方、 PPAR yは脂肪組織に高発現しており、白色脂肪組織における脂肪細胞分化終末における転写因子としての機能を持っている。 PPAR y 2は脂肪細胞の脂肪酸結合タンパク aP2を trans activateする特異的転写因子 ARF-6の 1成分としてクローユングされた。また PPAR y 2/RXR αはホスホェノールピルビン酸カルボキシキナーゼ (PEPCK) の脂肪細胞特異的発現を誘導してグリセロール生成をもたらす。 ΑΡ2及び PEPCKの両遺伝子は脂肪細胞分化終末の指標であり、 PPAR yによりそれらが制御されることは、この受容体が脂肪細胞の表現型維持に重要な役割を果たすことを示して!/ヽる。しかしながら、チアゾリジン誘導体と PPAR yを直接結びつける明確な機構はまだ良く力、；つてヽなヽ。 3;た、し BP LCAMP response element Dinding protein (CREB)binding protein]のヘテロ欠損マウス力 PPAR yヘテロ欠損マウス以上に強い抗肥満'抗糖尿病の表現型を呈することから、 PPAR y非依存性の抗肥満 '抗糖尿病の新規な情報伝達経路が存在することが示唆されてヽる。

一方、脂肪細胞組織特異的に高発現する遺伝子の産物として発見されたアディポネクチンの欠乏も、肥満、 2型糖尿病のインスリン抵抗性の重要な原因のひとつであると考えられている。これはインスリン感受性が良好な PPAR yヘテロ欠損マウスでァディポネクチンの発現が亢進していること、及びアディポネクチン遺伝子は日本人の 2型糖尿病の主要な疾患感受性遺伝子であることに基づくものである。アディポネクチンは白色脂肪細胞由来の主要なインスリン感受性ホルモンであり、アディポネクチンを補充することにより、脂肪萎縮性糖尿病のインスリン抵抗性が改善される。 2型糖尿病患者ではアディポネクチン不足によりインスリン抵抗性が惹起され、アディポネクチンの補充によりインスリン抵抗性が改善されるものと考えられる。また、アディポネクチンホモ欠損マウスは耐糖能低下を示すことから、アディポネクチンは生体内で抗糖尿病因子として作用していると予想される。さらに、インスリン抵抗性を呈する脂肪萎縮性糖尿病マウスや KKAyマウスへのアディポネクチンの投与実験、あるいは肥満 · インスリン抵抗性のモデルマウスである ob/obマウスとアディポネクチン過剰発現トランスジエニックマウスとの掛け合わせ実験にぉ、て、アディポネクチンを投与すると脂肪酸燃焼やエネルギー浪費に関わる因子の発現が増加する。これは、これらの遺伝子を標的とする PPAR aの発現量、及び PPAR aの内因性リガンド活性自体がアディポネクチン投与により増加することによる可能性が報告されている（山内ら、分子糖尿病学の進歩一基礎から臨床まで 2003、 pp.97-106,金原出版)。

[0064] 一方、 Surapureddiら（PNAS, Vol. 99, pp.11836- 11841, 2002)は、ラットの肝組織抽出液を用い、 PRIC複合体と呼ばれるコアクチベータが PPAR αと結合してその作用を増強すること、さらに GSTタグをつけた PPAR αをバイトとしたプルダウンアツセィにより、 PRIC複合体のなかでも TOGとよばれるチュブリン結合タンパク質が PPAR αと結合することを見出している。また、 Spittleら（JBC, Vol. 275, pp.20748-20753, 2000)は、 TOGタンパク質は yチュブリンリング複合体と非常に類似した微小管構造に結合することを報告している。

[0065] これらの情報と本発明者らの結果を総合すると、ピオグリタゾンは γチュブリン'リング複合体との結合を介して Ίチュブリン'リング複合体- TOG-PPAR aの 3者間の相互作用を増強することにより、アディポネクチンの作用をミミックして 2型糖尿病患者のインスリン抵抗性を改善する可能性が考えられる。またあるいは、 PPAR yに対しても TOGタンパク質に類似のタンパク質が存在すると想定した場合、ピオダリタゾンが γ チュブリン'リング複合体- TOG-PPAR yの 3者間の相互作用を亢進して、 PPAR γを活性ィ匕する可能性も考えられる。

[0066] 以上のように、本発明者らは、チアゾリジン誘導体の分子標的のひとつが γチュブリン'リング複合体であり、チアゾリジン誘導体が γチュブリンリング複合体との結合を介して、 ΡΙ3キナーゼのシグナル及び/又は PPAR αの作用を増強することにより、インスリン感受性を向上させ、インスリン抵抗性に対する治療効果を示す可能性があることを見出した。

[0067] 本発明に係るタンパク質を用いたスクリーニング方法

以上説明したように、チアゾリジン誘導体と本発明に係るタンパク質との相互作用から、本発明に係るタンパク質を使用して、新規抗糖尿病薬のスクリーニング方法を確立することができる。

[0068] スクリーニング方法は、上述した本発明に係るタンパク質に対してスクリーング候補物質を接触させる工程の後、当該候補物質と当該タンパク質との相互作用の有無を検出する工程とを備える。

[0069] スクリーニング候補物質としては特に限定されな!、が、各種の低分子化合物、タンノク質を挙げることができる。

[0070] スクリーニング候補物質と本発明に係るタンパク質とを接触させる方法としては、特に限定されず、候補物質と対象物質との二分子間の相互作用を解析する方法と知れられる如何なる方法も使用することができる。例えば、表面プラズモン共鳴 (Surface Plasmon Resonanse:SPR)の原理を応用したリアルタイムでの相互作用解析を行う装置、例えば、 Biacore 3000 (ビアコア社製)等を使用する方法や、非修飾かつ非固定で 2種の分子間相互作用を分析する手法として、クロマトグラフィーを用いた手法 (米国特許公報 4,762,617)を挙げることができる。さらに、 Y.Dunayevskiy et al.， Rapid Comm. Mass Spectrometry, vol.11, 1178-1184 (1997)に記載された方法や、 F.J.Moy et al.， Anal. Chem., vol.73, 571-581 (2001)に記載された方法、国際公開公報 WO 00/47999に記載された方法、特許公表公報第 2002-508515号に記載された方法、特許公表公報第 2003-502665号に記載された方法を適宜使用することができる。

[0071] また、水晶発振子等のその他の表面プラズモン共鳴法、 Coupled waveguideプラズモン共鳴法、二面偏波式干渉法、カロリメトリー法、遠心沈降法、キヤピラリー電気泳動法、エナジートランスファ一法、蛍光偏向法、蛍光相関分析法、プロテインチップ、化合物チップ等の方法も適宜使用することができる。

[0072] 本スクリーニング方法によって、本発明に係るタンパク質と間で相互作用を有すると判断された候補物質は、チアゾリジン誘導体と同様な薬理作用機序を有する新規な抗糖尿病薬としてスクリーニングされたこととなる。

[0073] スクリーニングされた新規化合物

上記スクリーニング方法によって、抗糖尿病薬の候補物質として下記一般式 (I)で表されるチアゾリジン誘導体を同定した。なお、下記一般式 (I)で表される化合物は新規物質である。

[化 5] 叶 ο

[0074] (上記式 (I)中、 Rは、水素、炭素数 1

1 一 10のアルキル基、炭素数 3— 7のシクロアルキル基、炭素数 7— 11のフヱ-ルアルキル基、フヱ -ル基、窒素、酸素及び硫黄からなる群力も選ばれる 1又は 2のへテロ原子を含む 5又は 6員環のへテロ環である。 L

2

若しくは、一緒になつて炭素数 2— 6のシクロアルキル基を形成する。 mは 1一 5のいずれかの整数を表す。 )

具体的に上記一般式 (I)で表される化合物としては、例えば、下記式 A-1で表される 5-{4-[2-(1-メチル -シクロへキシルォキシ)-ェチロキシ] -ベンジル }-チアゾリジン- 2,4- ジオンを挙げることができる

[化 6]

[0075] また、上記式 (I)で表される化合物としては、上記 A-1に限定されず、下記式 A-2及び A-3を例示することができる。

[化 7]

[化 8]

A-3

[0076] 上記式 (I)で表される化合物は、下記式 (II)

[化 9]

[0077] (上記式 (II)中、 R、 L及び Lは上記式 (I)と同じ定義である。 Xは MeSO、

1 1 2 2

p-toluenesulfonyUヨウ素、臭素、塩素及び水酸基力なる群力選ばれる一種である。）で表される化合物と、下記式 (III)

[化 10]

[0078] で表される化合物とを縮合反応させることで製造することができる。

[0079] 例えば上記の A-1で表される化合物の製造方法を説明する。先ず、以下のようにして (1-メチル -シクロへキシル) -tert-酢酸ブチルエステル (2)を合成する。

[化 11]

1 2

[0080] 具体的には、窒素雰囲気下、氷冷した水素化ホウ素ナトリウム（油性; 60wt% 300mg )を含む THF/DMF (5/1)混液 40mLの懸濁溶液へ、化合物 (D(713mg、 6.2mmol)を攪拌しながらゆっくりと加え、その後 10分間攪拌する。続いて氷浴を取り除き、室温で 30分間攪拌する。攪拌収量後再び氷冷する。次に、ブロモ酢酸 t-ブチルエステル（ 2.25mL、 15.5mmol)を加える。添加終了後、氷浴を取り除き、室温にて 2時間攪拌する。その後、再び氷冷し、反応液へ水（lmL)をゆっくりとカ卩える。反応液へ水、酢酸ェチルを注ぎ、良く攪拌した後、有機相を集める。さらに酢酸ェチルカも抽出する。有機相を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下ろ過濃縮後シリカゲルカラムクロマトグラフにより精製し、化合物（2) ('H-NMRCCDCl ) δ :1.28- 1.38(13H, m), 1.40

一 3

(9H, s), 4.02 (2H, s))を合成することができる。

[0081] 次に、以下のようにして、化合物②力も 2-(1-メチル -シクロへキシル) -エタノール（

)を合成する。

[化 12]

[0082] 具体的には、窒素雰囲気下、氷冷した水素化アルミニウムリチウム（304mg、 8mmol) を含む THF懸濁溶液 4mLに、化合物（2) (254mg、 2mmol)の THF溶液 2mLを攪拌しながらゆっくりと加える。添加終了後、反応容器を 60°Cに加温し、 2時間攪拌する。攪拌終了後、再び氷冷し、反応液へ飽和硫酸ナトリウム水溶液を水素の発生がなくなるまでゆっくりと加える。セライト上で残渣をろ過し、残渣を酢酸ェチルで洗浄する。ろ液と洗浄液を合わせ、減圧下濃縮する。粗精製品をシリカゲルカラムクロマトグラフにより精製することで化合物（2) ('H-NMRCCDCl ) δ :1.28-1.38(13H, m), 3.50-3.75

3

(4H, m))を合成することができる。

[0083] 次に、以下のようにして、化合物 (2)力も 5-{4-[2-(1-メチル -シクロへキシルォキシ) - エトキシ] -ベンジル } -チアゾリジン- 2,4-ジオン (A-1)を合成する。

[化 13]

[0084] 具体的には、窒素雰囲気下、化合物（158mg、 l.Ommol)のトルエン (2mL)溶液にトリブチルホスフィン (234mg、 l.lmmol)をカ卩え、 20分間攪拌する。続いて、この溶液を、 5- (4-ヒドロキシ-ベンジル) -チアゾリジン- 2,4-ジオン（246mg、 l.lmmol)と 1,1，-ァゾビス（Ν,Ν，-ジメチルホルムアミド） (200mg, l.lmmol)とを含むトルエン（2mL)溶液に室温にて加え、終夜攪拌する。攪拌終了後、さらに酢酸ェチルを加え、残渣をセライト上でろ別する。残渣を更に酢酸ェチルで洗浄し、ろ液と洗浄液を合わせる。減圧下濃縮し、粗精製品をシリカゲルカラムクロマトグラフにより精製することで、化合物（ A-1) ('H-NMRCCDCl ) δ :1.28- 1.38(13H, m), 3.46 (2H, d), 3.79 (2H, t),4.11(2H,t),

3

4.13 (1H, t), 6.72 (2H, d), 7.00 (2H, d))を合成することができる。

[0085] なお、出発原料として化合物 (1)の代わりにシクロへキサノールを使用する以外は、上述した合成方法と同様に各反応を行うことによって、上述した化合物 A-2

Η— NMR(CDCl ) δ :1.28-1.42(10H, m), 2.85 (1H, m), 3.46 (2H, d),3.79 (2H,

3

t),4.11(2H,t), 4.13 (1H, t), 6.70 (2H, d), 7.00 (2H, d))を合成することができる。また、出発原料としてシクロペンタノールを使用する以外は、上述した合成方法と同様に各反応を行うことによって、上述した化合物 A-3 ^H-NMR CDCl )

3 δ :1.51-1.60(8Η, m), 2.85 (1H, m), 3.46 (2H, d),3.79 (2H, t),4.11(2H,t), 4.10(1H, t), 6.72 (2H, d), 7.00 (2H, d))を合成することができる。

[0086] 一方、上記一般式 (I)で表される新規ィ匕合物は、薬理上許容される塩としてもよ!、。「薬理上許容される塩」としては、例えば塩酸、硫酸、硝酸又はリン酸等の無機酸の塩；パラトルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シユウ酸又はクェン酸等の有機酸の塩；アンモ-ゥム、トリメチルアンモ -ゥム又はトリェチルアンモ -ゥム等の有機塩基の塩；ナトリウム又はカリウム等のアルカリ金属の塩；ヨウ化メチル、ヨウ化工チル等のハロゲン化アルキルとの四級塩;及びカルシウム又はマグネシウム等のアルカリ土類金属の塩等を挙げることができる。新規ィ匕合物 (I)としては、その水和物を含む意味であり、化合物 (I)に対して任意の数の水分子を配位していてもよい。また、新規化合物 (I)としてはそのプロドラッグを含み意味である。プロドラッグとは、生体内で代謝的に分解される基を有する新規化合物 (I)の誘導体であり、生体内での代謝過程により、新規化合物 (I)に変換されることで薬理作用を発現する化合物である。適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法及び製造する方法は、例えば Design of Prodrugs, Elsevi er, Amsterdam 1985に記載されている。

[0087] 例えば、新規ィ匕合物 (I)がカルボキシを有する場合は、当該カルボキシと適当なアルコールを反応させることによって製造されるエステル誘導体、又は当該カルボキシと適当なアミンを反応させることによって製造されるアミド誘導体のようなプロドラッグが例示される。例えば、新規ィ匕合物 (I)がヒドロキシを有する場合は、例えば当該ヒドロキシと適当なァシルハライド又は適当な酸無水物とを反応させることに製造されるァシルォキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。例えば、新規ィ匕合物 (I)がァミノを有する場合は、そのァミノと適当な酸ハロゲン化物又は適当な混合酸無水物とを反応させることにより製造されるアミド誘導体のようなプロドラッグが例示される。

[0088] 新規ィ匕合物 (I)が不斉炭素原子を有する場合には、ラセミ体、両対掌体及び全ての立体異性体 (ジァステレオマー)を含む。また、新規ィ匕合物 (I)が二重結合を有する場合には、二重結合の置換基配置につき、幾何異性体が存在するときはそのいずれをも含む。

[0089] 以上のような新規化合物 (I)は、新規な抗糖尿病薬として作用を有する医薬組成物となる。当該医薬組成物を抗糖尿病薬として投与する場合、経口的、非経口的のいずれの方法でも投与することができる。経口投与は常法に従って錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤、液剤、シロップ剤、ノッカル剤又は舌下剤等の通常用いられる剤型に調製して投与すればよい。非経口投与は、例えば筋肉内投与、静脈内投与等の注射剤、坐剤、経皮吸収剤、吸入剤等、通常用いられるいずれの剤型でも好適に投与することができる。

[0090] また、当該医薬組成物の有効量に対して、剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤等の各種医薬用添加剤とを必要に応じて混合し医薬製剤とすることができる。注射剤の場合には適当な担体と共に滅菌処理を行なって製剤とすればよい。具体的には、賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシゥムもしくは結晶セルロース等、結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンもしくはポリビュルピロリドン等、崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末もしくはラウリル硫酸ナトリウム等、滑沢剤としてはタルク、ステアリン酸マグネシウムもしくはマクロゴール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マクロゴールもしくはメチルセルロース等を用いることができる。また、液剤もしくは乳濁性、懸濁性の注射剤として調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜添加しても良ぐ経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等を加えても良い。

[0091] 新規ィ匕合物 (I)の抗糖尿病薬としての投与量は、患者の年齢、体重、疾病の種類や程度、投与経路等を考慮した上で設定することが望ましいが、成人に経口投与する場合、通常 1一 lOOmgZkgZ日であり、好ましくは 5— 30mgZkgZ日の範囲内である。非経口投与の場合には投与経路により大きく異なる力通常 0. l-10mg/k gZ日であり、好ましく 1一 5mgZkgZ日の範囲内である。これを 1日 1回一数回に分けて投与すれば良い。

実施例

[0092] 以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。

[0093] [参考例 1] ヒト完全長 cDNAクローンからのタンパク質発現方法

1.発現プラスミドの作成

ヒト完全長 cDNAクローンの目的遺伝子に対して、 Invitrogenの Gatewayシステムを用いキットのプロトコールに従い、 PCRクロー-ングベクター GatewaypDONR201と BP 反応を行うことによりエントリーベクターを得た。 Gatewayシステムのデスティネーションベクターとしては、東洋紡績 (株）の小麦胚芽抽出液を用いた無細胞タンパク質合成システム（PROTEIOS)に適応する PEU3-NII (東洋紡績）を基にして、 Gatewayシステムが利用できるよう Gateway組換え配列を有する Gatewayカセットを導入し、さらに発現タンパク質の N末端領域にヒスチジンタグと FLAGタグ配列を有するペプチドが発現するように PCR法を用いて改変したダブルタグデスティネーションベクターを作成した

[0094] 作成したダブルタグデスティネーションベクターとエントリーベクターを用い、

Invitrogenの Gatewayシステムを用いプロトコールに従、BP反応を実施し、大腸菌コンピテントセル DH5 aに形質転換し、発現ベクターが導入されたクローンを選択した。得られたクローンから QIAfilter Midi kit (キアゲン）を用いて、キットのプロトコールに従ってプラスミドを調製した。得られたプラスミドは、 PROTEIOS (東洋紡績)のプロトコールに従い、フエノール'クロ口ホルム処理を行い RNA分解酵素の不活化処理を施し、精製発現プラスミドを得た。

[0095] 2.精製タンパク質の取得

東洋紡績 (株)の小麦胚芽抽出液を用いた無細胞タンパク質合成システム（ PROTEIOS)により組換えタンパク質を合成した。上記 1. に記載した方法で取得した発現プラスミドから PROTEIOSのプロトコールに従!、mRNAを作成した。取得した mRNAを 20 g使用し、 96穴マイクロタイタープレートの 2穴分で PROTEIOSのプロトコールに従いタンパク質を合成させた。合成したタンパク質は、高速遠心分離処理により沈殿を除去し、取得した可溶性の画分を抗 FLAGタグ抗体を固定ィ匕した

ANTI-FLAG M2 Affinity Gel (SIGMA社)を用い、プロトコールに従い精製を行い、精製タンパク質を得た。

[0096] [参考例 2] ビアコアを用いたヒトタンパク質-医薬品相互作用における結合解離定数の決定方法

ビアコア社市販の S51用 CM5センサーチップを 1M EDC, 1.33M NHS及び 16mg/ml AB- NTA(pH9.2)を用いてセンサーチップ表面の NTAィ匕を施し、 S51用 NTAセンサーチップとした。これに小麦胚芽系で発現させ、 FLAG tagで精製した蛋白質を固定ィ匕した。固定化は、 0.5M NiCl

2、 0.4M EDC、 0.1M EDC、リガンド溶液（蛋白質）、 1M

Ethanolamine, pH8.5を順次、 Biacore S51の流路系にインジェクションして行った。固定化の際の Running Bufferは PBS (pH7.4)を用いた。リガンドが固定化されたセンサ一チップを用いて以下の Assayを行った。 Running Bufferとして HBS(10mM HEPES、 150mM NaCl、 pH7.6)、 0.005% P 0、 lOOuM mineral ion cocktail(Ca(OAc)、 Zn(OAc)

2 2 2

•2H 0、 Cu(OAc) ·Η 0、 Co(OAc) ·4Η 0、 Mn(OAc) ·4Η 0、 Mg(OAc) ·4Η 0、 FeCl

2 2 2 2 2 2 2 2 2

•6H O)に DMSOを final 5%になるように加えて調製したものを用いた。測定化合物は

3 2

62.5uM— 0.244uMまで 1/2希釈ずつ 9point調製した。溶媒の組成が Running Bufferと同様になるように調製し、 0濃度測定として化合物の含まれて、な、溶媒だけのものを調製した。また、化合物溶液、 Running Buffer中に含まれる DMSOの効果の補正（ solvent correction)として、 3.8- 5.1%の DMSO (8point)を含む Running Bufferと同様の溶液を調製し、これらの測定結果をもとにして補正を行った。 Biacore S51の

Compound Characterization Assayプログラムを実施し、固定化されたリガンド（蛋白質）とアナライト (化合物； 62.5uM— 0.244uM)の相互作用を測定し、専用ソフトウェアにて解析を行った。

[0097] [実施例 1] ピオグリタゾンと FLJ14797由来タンパク質の相互作用解析

参考例 1の方法に従って FLJ14797よりタンパク質の発現精製を行い、参考例 2の方法に従ってピオグリタゾンと FLJ14797から発現精製したタンパク質の相互作用を解析した。結果を図 1に示した。ピオグリタゾンの用量に依存して結合量が増大し、かつ高用量では結合の飽和がみられることから、特異的な相互作用であることが確認された。 BiacoreS51専用ソフトウェアを用いて結合解離定数を算出したところ、 KD= 9.038 X 10—6 Mであった。

[0098] 図 1に示した結果から、ピオグリタゾンと FLJ14797由来タンパク質とが相互作用することが明ら力となった。したがって、 FLJ14797由来タンパク質は、抗糖尿病薬として知られて、るピオグリタゾン (チアゾリジン誘導体)の標的タンパク質であることが判明した。このことより、 FLJ14797由来タンパク質とスクリーニング候補物質とを作用させることで、新規抗糖尿病剤のスクリーニングを行うことができる。すなわち、 FLJ14797由来タンパク質と候補物質との相互作用を、例えば参考例 2の方法で検出するような系を構築することによって、新規抗糖尿病薬のスクリーニングを行うことができる。

[0099] [実施例 2] 新規ィ匕合物 (I)と FLJ14797由来タンパク質の相互作用解析

実施例 1で使用したピオグリタゾンに代えて上述した化合物 A-1、 A-2及び A-3を使用した以外は、実施例 1と同様にして FLJ14797由来タンパク質と各化合物との相互作用を解析した。実施例 1と同様に算出された KD値を表 1に示す。

[表 1] 化合物 KD (M)

A— 1 8. 431 10' ^fi M

A— 2 1. 382 10"⁵ M

A— 3 2. 156 X 10— ⁵ M

[0100] 表 1から判るように、いずれの化合物おいても FLJ14797由来タンパク質に対する特異的な相互作用がみられた。この結果より、上述した一般式 (I)で表される化合物が FLJ14797由来タンパク質すなわち γチュブリン'リング複合体タンパク質に対して相互作用を示すことが明らかとなった。

[0101] 本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims

請求の範囲

[1] 以下の（a)又は (b)に示され、抗糖尿病薬の標的タンパク質。

(a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

(b)配列番号 2に示されるアミノ酸配列において、 1又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、抗糖尿病薬と相互作用するタンパク質

[2] 上記抗糖尿病薬はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする請求項 1記載の標的タンパク質。

[3] 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする請求項 2記載の標的タンパク質。

[4] γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする請求項 1記載の標的タンパク質。

[5] 以下の（a)又は (b)に示され、抗糖尿病薬の標的タンパク質をコードする遺伝子。

(a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

[6] 上記抗糖尿病薬はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする請求項 5記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[7] 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする請求項 6記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[8] 上記標的タンパク質は γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする請求項 5記載の標的タンパク質をコードする遺伝子。

[9] スクリーニング候補物質を以下の（a)又は (b)に示すタンパク質に接触させる工程と

(a)配列番号 2に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質

を備える抗糖尿病薬のスクリーニング方法。

[10] 上記抗糖尿病薬はチアゾリジン誘導体であることを特徴とする請求項 9記載の抗糖尿病薬のスクリ一ユング方法。

[11] 上記チアゾリジン誘導体はピオグリタゾンであることを特徴とする請求項 10記載の抗糖尿病薬のスクリ一ユング方法。

[12] 上記標的タンパク質は γチュブリン'リング複合体タンパク質であることを特徴とする請求項 9記載の抗糖尿病薬のスクリーニング方法。

[13] 請求項 9乃至 12いずれか一項記載のスクリーニング方法によってスクリーニングされ、上記タンパク質と相互作用を示す物質を主成分とする抗糖尿病薬。

[14] 一般式 (I)

[化 1]

(上記式 (I)中、 Rは、水素、炭素数 1一 10のアルキル基、炭素数 3— 7のシクロアル

1

2

[15] 上記式 (I)中、 L及び Lは、一緒になつて形成する炭素数 2— 6のシクロアルキル基

1 2

であることを特徴とする請求項 14記載のチアゾリジン誘導体。

[16] 上記式 (I)中、 Rは水素であり、 L及び Lは一緒になつて形成する炭素数 2— 6のシ

1 1 2

クロアルキル基であることを特徴とする請求項 14記載のチアゾリジン誘導体。

[17] 上記式 (I)中、 Rは炭素数 1一 10のアルキル基であり、 L及び Lは一緒になつて形

1 1 2

成する炭素数 2— 6のシクロアルキル基であることを特徴とする請求項 14記載のチアゾリジン誘導体。

[18] 5-{4-[2-(1-メチル -シクロへキシルォキシ) -エトキシ] -ベンジル } -チアゾリジン- 2,4- ジオンであることを特徴とする請求項 14記載のチアゾリジン誘導体。

[19] 請求項 14乃至 18いずれか 1項記載のチアゾリジン誘導体の薬理上許容される塩。

[20] 請求項 14乃至 18 、ずれ力 1項記載のチアゾリジン誘導体及び/又はその薬理上許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。

[21] 抗糖尿病薬であることを特徴とする請求項 20記載の医薬組成物。

[22] 一般式 (II)

[化 2]

(上記式 (II)中、 Rは、水素、炭素数 1 — 7のシクロアル

1 一 10のアルキル基、炭素数 3

2

基力なる群力選ばれる一種である。 )

で表される化合物と、一般式 (III)

[化 3]

で表される化合物とを縮合反応させる、チアゾリジン誘導体の製造方法。