WO2005054203A1 - Derives de quinoline substitues par des groupes amino aliphatiques et preparation et utilisation pharmaceutique de ces derives - Google Patents

Derives de quinoline substitues par des groupes amino aliphatiques et preparation et utilisation pharmaceutique de ces derives Download PDF

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WO2005054203A1
WO2005054203A1 PCT/CN2004/000175 CN2004000175W WO2005054203A1 WO 2005054203 A1 WO2005054203 A1 WO 2005054203A1 CN 2004000175 W CN2004000175 W CN 2004000175W WO 2005054203 A1 WO2005054203 A1 WO 2005054203A1
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formula
group
cycloalkyl
alkyl
compound
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PCT/CN2004/000175
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Lianquan Gu
Jinlin Zhou
Xiaofeng Zhu
Zhishu Huang
Yueming Li
Junmin Zhou
Zongchao Liu
Lin Ma
Chung Hin Chui
Cheuk On Tang
Albert Sun-Chi Chan
Original Assignee
Sun Yat-Sen University
The Hong Kong Polytechnic University
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Publication date
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention relates to a fatty amino-substituted quinoline derivative, a preparation method thereof, and use of the compound in preparing an antitumor drug.
  • Tumor is a major disease that threatens human health and life safety.
  • the research and development of anti-tumor drugs has been a focus of attention for chemists and pharmacologists.
  • the search for more effective, more selective antitumor drugs with less toxic and side effects is the main direction of research and development of antitumor drugs.
  • Telomeres are a special structure at the end of eukaryotes' chromosomes that contain DNA and related proteins.
  • Human telomere DNA is composed of G-rich nucleotides, which can form a G-quadruplex structure under appropriate conditions, thereby inhibiting telomerase activity.
  • Telomerase is a special ribozyme that supplements telomere sequences and is the molecular basis for cells to be immortalized. Telomerase is abundantly expressed in tumor cells and scarcely found in normal cells, so telomerase has become a highly selective target for anticancer drugs. Interaction with G-quadruplex is an effective way to inhibit telomerase activity. At the same time, this effect can also affect other important proteins on the telomere non-telomerase.
  • Small molecule compounds that interact with telomere DNA have some common structural characteristics: they have three or more planar aromatic ring structures; and one or more side chains that are positively charged under physiological conditions. The mechanism of their antitumor effect is mainly through interaction with telomere DNA, inhibiting the telomerase activity of tumor cells, thereby inhibiting tumor cell replication.
  • Indoloquinoline compounds are a kind of relatively rare alkaloids in nature. They have a structure of four planar aromatic rings. Quindoline and cryptolepine are typical representatives of these compounds. These two compounds were respectively in 1977. It was first isolated from the West African plant Cryptolepis sanguinolenta in 1929. These compounds have a wide range of physiological activities such as antibacterial, anti-inflammatory, antiviral, and antimalarial. In 1998, L Bonjean et al. Reported that scopolamine inhibited B16 melanoma by interfering with topoisomerase II (see Biochemistry 9, 37, 5136-5146).
  • EP0376166 discloses the preparation of a series of aromatic amino substituted indoloquinoline analogs and their antitumor activity.
  • EP033 2 190 discloses an indoloquinoline compound having the following structure:
  • This quinoline compound is obtained by changing the structure of the tetracyclic parent of quinoline, and has certain antitumor activity. Summary of the invention
  • the object of the present invention is to provide a novel fatty amino-substituted quinoline derivative, a preparation method thereof, and use thereof in preparing an antitumor drug.
  • the inventors of the present invention found in research that structural modification using the indoquinoline parent structure as a lead compound is a new and effective way to find a highly effective and low toxicity antitumor drug.
  • the principle of the present invention is: according to the structural characteristics of some small molecular compounds capable of interacting with telomere DNA, while retaining the parent skeleton of indoloquinoline compounds, an aliphatic amino side chain is introduced to make the obtained compound physiologically It can exist as a dication at pH, thereby retaining the structural feature of the positive interaction of the conjugated aromatic ring precursor with DNA; at the same time, a positively charged side chain is introduced, and it is adjusted to the phosphate backbone of DNA through appropriate adjustment.
  • the negatively charged interactions of these compounds allow this class of compounds to selectively and strongly interact with G-quadrupl ex structures.
  • the interaction with G-quadrup l ex is an effective way to inhibit telomerase activity, and this interaction It can also act on other important proteins of non-telomerase on telomeres.
  • the present invention provides a fatty amino-substituted quinoline derivative having a chemical structure represented by Formula I:
  • X is CH 2 , Lai, 0 or S, preferably, X is NH or 0;
  • n 1, 2, 3, or 4, preferably, n is 1 or 2.
  • the fatty amino-substituted quinine derivative represented by Formula I may be selected from the group consisting of the following compounds
  • X is CH 2 , D, 0 or S, preferably, X is NH or 0;
  • n 1, 2, 3 or 4, preferably n is 1 or 2.
  • the chloroquinoline derivative represented by formula II and phenol may be mixed under heating conditions, wherein the heating temperature is preferably 50-65 ° C, and the amount of phenol added is preferably The molar amount of the compound of formula II is 8-20 times; then, the fatty amine represented by formula III is added, and the temperature is increased and the reaction is stirred, wherein the added amount of the fatty amine is preferably 2 to 5 times the molar amount of the compound of formula II, and the reaction temperature is preferably The temperature is 80-140 ° C, and the reaction time is preferably 2-8 hours.
  • the pH of the system is adjusted to be greater than 9 with an aqueous solution of an inorganic alkali, wherein the aqueous solution of the inorganic alkali is preferably an aqueous NaOH solution or ammonia water; Immiscible organic solvents are used for extraction.
  • the organic solvents used are preferably chloroform, ethyl acetate, diethyl ether, etc.
  • solids can be collected and purified by concentration or filtration.
  • the purification method is preferably purified by chromatography on a silica gel column.
  • a fatty amino-substituted quinoline derivative represented by Formula I was prepared.
  • the chloroquinoline derivative represented by Formula II can be prepared according to a known method, or can be prepared from a compound represented by Formula IV by the following reaction method:
  • RR 2 are selected from the group comprising one of the groups of: H, F, Cl, Br , C , and alkyl with 1-6 C 3 - 6 cycloalkyl, or and ⁇ 1 2; preferably R, and / or R 2 is hydrogen;
  • X is CH 2 ,, 0 or S, preferably X is NH or 0.
  • the compound of formula II can be prepared by the following steps: A compound of formula IV (for example, tetrahydroindole [3, 2-b] quinolin-11-one or tetrahydrobenzofuran [3, 2-b ] Quinoline-11-one) mixed with POC1 3 , the ratio is preferably 1: 8 ⁇ 10w / v; then heating and stirring, the temperature is preferably 80-120 ° C, the time is preferably 2-10 hours; the excess POC1 is distilled off 3. Pour the product into 8-10 times the mass of water, and collect the solid by filtration to obtain the compound of formula II.
  • a compound of formula IV for example, tetrahydroindole [3, 2-b] quinolin-11-one or tetrahydrobenzofuran [3, 2-b ] Quinoline-11-one
  • POC1 3 the ratio is preferably 1: 8 ⁇ 10w / v
  • heating and stirring the temperature is preferably 80-120 ° C
  • the time is preferably
  • ketones of formula IV can be prepared either by known methods or by the following methods:
  • R, R 2 are selected from the group comprising one of the groups of: H, F, Cl, Br , C 1-6 alkyl, and C 3 - 6 cycloalkyl, or and R, ⁇ R 2 , preferably, and / or 12 is hydrogen;
  • X is CH 2 , NH, 0 or S, preferably X is NH or 0.
  • the above reaction is preferably carried out in the presence of a polytetracarboxylic acid.
  • tetrahydroindole [3, 2-b] quinolin-11-one or tetrahydrobenzofuran [3, 2-b] quinolin-11-one can be prepared by the following steps: Substituted benzaminoacetaminobenzoic acid, substituted benzyl mercaptoacetaminophenic acid or substituted phenoxyacetaminophenic acid and polyphosphoric acid are mixed uniformly, and the ratio is preferably 1: 5-10 w / v; Reaction in a microwave oven at 150-350 watts for 1-10 minutes. After cooling, dilute with 5-10 times the volume of water.
  • a is chloroacetyl chloride
  • b is potassium iodide
  • c is aniline or a derivative of aniline
  • the above method 1 may adopt the following steps:
  • d sodium monochloroacetate
  • e is anthranilic acid.
  • R,> R 2 are each one selected from the group consisting of: H, F, C l, Br, d- 6 alkyl and (; 3-6 ring Alkyl, JL RH ⁇ R ⁇ R ⁇
  • the above method 2 may adopt the following steps:
  • the (substituted) sodium phenoxide, sodium thiophene sodium, and sodium monochloroacetate used in the above method 2 can be prepared according to known methods or can be prepared by the following methods: (1) Add monochloroacetic acid to water to a concentration of 10-100M 2. Under cooling and stirring, a 25 % (W / V) aqueous solution of equimolar NaOH was slowly added dropwise to obtain sodium monochloroacetate; (2) adding (substituted) phenol or thiophenol to 1.2 times moles (Substituted) phenol #) or sodium thiophenolate were prepared from a 50% (w / v) aqueous solution of NaOH and an equal volume of ethanol.
  • fatty amino-substituted quinoline compounds represented by the formula I provided by the present invention have strong inhibitory effects on a variety of tumor cell lines, but have low toxicity to normal cells, and can be used for preparing antitumor drugs.
  • the present invention also provides the use of fatty amino-substituted quinoline compounds in the preparation of antitumor drugs, and antitumor pharmaceutical compositions, the antitumor pharmaceutical compositions comprising one or more formula
  • the represented compound or its salt form may further include other pharmaceutically acceptable adjuvants.
  • Example 1 Synthesis of 2- (2-anilinoacetamido) -benzoic acid 0.5 mol of anthranilic acid was dissolved in 170 ml of DMF and 170 ml of dioxane, cooled to 0 ° C, and 0.5 was slowly added dropwise. 5 mol chloroacetyl chloride, the temperature is not higher than 5 ° C, after the dropwise addition, (stirring at TC for 20 minutes, and then at room temperature overnight; It was poured into 1500 ml of water, and the precipitate was filtered, washed with 3 75 ml of water, and dried to obtain 2- (2-chloroacetamino) benzoic acid as an off-white solid.
  • Example 2 Synthesis of 5, 5a, 10, 10a-tetrahydroindole [3, 2-b] quinolin-11-one Take 0.1 mol of compound 1 prepared in Example 1 and 400 g of polyphosphoric acid, 140 ° C Heat and stir for 2 hours, cool, pour into 500raL cold water, heat and boil, cool slightly, adjust the pH to about 6 with solid NaOH, produce a large amount of dark green solid, filter and wash with a large amount of water, and dry to a light green solid 5, 5a, 10, 10a-tetrahydroindole [3, 2-b] quinolin-11-one (compound 2).
  • Example 4 Synthesis of chloro-10hydro-indole [3, 2-b] quinoline 0.1 mol of compound 2 and 100 g of dried POC1 3 were stirred under reflux at 120 ° C for 3 hours, cooled, and carefully poured into 200 g In ice water, carefully adjust to neutrality with saturated NaOH solution (temperature is not higher than 30 C), extract with a large amount of chloroform, dry with anhydrous Na 2 S 0 4 , and recover the solvent to obtain a large amount of light yellow solid 11 -chloro-10 hydrogen-ind Indole [3,2-b] quinoline (Compound 4).
  • Example 5 Synthesis of 11-chlorobenzo [4, 5] furan [3, 2 b] quinoline. Take 0.1 mol of compound 3 and 100 g of dry POC1 3 and stir at 120 ° C for 3 hours under reflux. Cool and pour carefully. Into 200 g of water, carefully adjust to neutrality (temperature is not higher than 30) with saturated NaOH solution, extract with a large amount of chloroform, dry with anhydrous Na 2 S 0 4 , and recover the solvent to obtain a large amount of light yellow solid 11-chloro-benzo [4, 5] furan [3,2-b] quinoline (compound 5).
  • MCF-7 estrogen receptor positive breast cancer cell line
  • DA-MB231 estrogen receptor negative breast cancer cell line
  • SaoS2 osteosarcoma cell line
  • CNE-2 nasopharyngeal carcinoma cell line
  • the SRB protein staining method was used to test the cytotoxicity of the compound of the present invention: The cells were reacted in 4'C (50 ⁇ L / we 11, final concentration) 50% trichloroacetic acid (manufactured by Sigma Chemical) for one hour to thereby The method of precipitating proteins fixes cells. The supernatant was removed and Pingya was washed 5 times with tap water.
  • the selectivity of the compounds of the present invention to normal cells and tumor cells was tested: the ratio was 3.
  • telomerase extraction K562 cells were collected, washed with water-cooled PBS for 3 times, and centrifuged. Add 200 ⁇ l of telomerase pre-chilled lysate to suspend the cells, centrifuge in an ice bath for 30min, and centrifuge at 15000g at 4 ° C for 20min. Transfer the supernatant to another clean test tube to prepare a telomerase extract.
  • telomerase Repeated Sequence Amplification (TRAP) reaction Add the above extraction solution 3 ⁇ 1, ⁇ drug, 25 ⁇ ⁇ reaction mixture, 21 ⁇ 1 sterile DEPC water to the PCR amplification tube, set 25 ° C, 10min extension primer; 94 ° C Inactivate telomerase for 5 min; PCR amplification: 50 ⁇ reaction system, including dNTP, Taq enzyme, biotin-labeled primer I and primer ⁇ , set at 94 ° C for 30s, 50 ° C for 30 s, 72 ° C for 90 s, 30 times; finally, equilibrate for 10 min at 72 ° C; (3) ELISA method to detect amplification products : Take 5 ⁇ 1 PCR amplification product, add 20 ⁇ 1 denaturing reagent, incubate at room temperature (20 ° C.) for 10 min, add 11 ⁇ ⁇ 1 hybridization mixture (containing digoxin labeled probe), mix thoroughly, and transfer 100 ⁇ of the mixture was plated on

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Description

脂肪氨基取代喹啉衍生物、 其制备方法和其制药用途 技术领域
本发明涉及脂肪氨基取代的喹啉衍生物、 其制备方法以及该化合物在制备抗肿瘤药物 中的用途。 技术背景
肿瘤是威胁人类健康和生命安全的主要疾病。抗肿瘤药物的研究与开发一直是化学家 和药物学家关注的热点。寻找更高效、更高选择性而毒副作用小的抗肿瘤药物是抗肿瘤药 物研究开发的主要方向。
以 DNA为靶点设计合成抗肿瘤药物，特别是针对具有重要生理意义的 DNA高级结构端 粒设计合成的小分子化合物， 是发展新型抗肿瘤药物的重要方法。
端粒是真核生物染色体末端的一段包含 DNA 和相关蛋白的特殊结构。 人类端粒 DNA 是由富含 G的核苷酸组成的， 可以在适当条件下形成 G- quadruplex结构， 从而抑制端粒 酶的活性。 端粒酶是一个特殊的核蛋白酶， 它的作用是补充端粒序列， 是细胞得以永生化 的分子基础。 端粒酶在肿瘤细胞中.有大量的表达， 而在正常细胞中几乎没有， 因此端粒酶 成为抗癌药物的高选择性靶点。 与 G- quadruplex相互作用是抑制端粒酶活性的一种有效 办法。 同时这种作用还可以对端粒上的非端粒酶的其它重要蛋白产生作用。
与端粒 DNA相互作用的小分子化合物具有一些共同的结构特征:有三个或者更多的平 面芳环结构； 一条或者几条在生理条件下带正电荷的侧链。它们的抗肿瘤作用的机制主要 是通过与端粒 DNA相互作用， 抑制肿瘤细胞的端粒酶活性， 从而抑制肿瘤细胞的复制。
吲哚喹啉类化合物是一类自然界比较稀少的生物碱， 具有四个平面芳环的结构， quindoline 和白叶藤碱 ( cryptolepine )是该类化合物的典型代表， 这两种化合物分别 于 1977年和 1929年从西非植物 Cryptolepis sanguinolenta中首次分离出来。这类化合 物具有抗菌、 抗炎、 抗病毒、 抗疟等广泛的生理活性。 1998年 L Bonjean等报道了白叶 藤碱通过干扰拓朴异构酶 II抑制 B16黑素瘤 （见 Biochemistry 9 , 37, 5136-5146 )。 此 后众多的研究小组相继报道了一系列修饰的吲哚喹啉类化合物的生理活性,但这些修饰都 集中在四环母体上（J Nat. Prod. 1999, 62, 976-983; J. Med. Chem. 2001, 44, 949-960;
确 认 本 J. Med. Chem. 2001 , 44, 3187-3194) 0 BP0376166 , EP0332190 等公开了一系列芳香氨基 取代的吲哚喹啉类似物的制备及其抗肿瘤活性。如 EP0332190中公开了一种具有以下结构 的吲哚喹啉系的化合物：
Figure imgf000004_0001
这种喹啉系的化合物是通过改变喹啉的四环母体的结构得到的， 具有一定的抗肿瘤的活 性。 发明内容
本发明的目的是提供了一种新的脂肪氨基取代的喹啉衍生物、其制备方法和其在制备 抗肿瘤药物中的用途。
本发明的发明人在研究中发现，以吲哚喹啉母体结构作为先导化合物，进行结构修饰， 是寻找高效低毒抗肿瘤药物的一条新的有效途径。
本发明的原理是：根据一些能与端粒 DNA相互作用的小分子化合物的结构特征，在保 留吲哚喹啉类化合物母体骨架的情况下， 引入一条脂肪氨基侧链，使所得的化合物在生理 pH下可以以双阳离子存在， 从而保留共轭芳环母体带正电荷这一与 DNA相互作用的结构 特征； 同时引入一条带正电荷的侧链，通过适当的调整使它与 DNA的磷酸骨架上的负电荷 相互作用， 从而使得该类化合物可以与 G- quadrupl ex结构发生选择性的强相互作用。 而 与 G- quadrup l ex的相互作用， 正是抑制端粒酶活性的一种有效办法， 同时这种相互作用 还可以对端粒上的非端粒酶的其它重要蛋白产生作用。
一方面，本发明提供了一种脂肪氨基取代的喹啉衍生物，该化合物具有式 I所示的化 学结构： .
Figure imgf000005_0001
(式 I)
式 I中，
R,> R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 Cw的烷基和 C3—6的 环烷基， 且1^=12或！^≠12； 优选地， 和/或 R2为氢；
— N 0
R3是选自于如下一组基团中的一种： 0H、 丽 3、 皿 R4、 NR5R6和 U ， 其中， R4、 R5和 为（1-6的烷基或 C3—6的环烷基， JLR5=R6^R5≠R6； 优选地， R3是选自于
— N O
如下一組基团中的一种： 0H、 N(CH3)2、 N (C2H5) 2和 \ ~ ；
X是 CH2、 丽、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0;
n=l、 2、 3或 4, 优选地， n为 1或 2。 在本发明中， 式 I 所表示的脂肪氨基取代的喹淋衍生物可以选自于如下的一组化合
Figure imgf000005_0002
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0002
(式 II ) (式 III) (式 I)
在式 I、 式 II和式 III中，
R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 6的烷基和 C3-6的 环烷基， 且 R!=R2或 ≠12； 优选地， R!和 /或 R2为氢；
— 0
R3是选自于如下一组基团中的一种： 0H、 NH3、 NHR4、 516和 ~ , 其中， R4、 R5和 16为 d— 6的烷基或 C3— 6的环烷基， 且 R5=R6 R5≠R6； 优选地， R3是选自于
— Ο
如下一组基团中的一种： 0H、 N(CH3)2、 N (C2H5) ^P ；
X是 CH2、 皿、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0;
n=l、 2、 3或 4, 优选地， n为 1或 2。 具体地说，上述方法中，可以先将式 II所代表的氯代喹啉衍生物与苯酚在加热的条件 下进行混合， 其中， 加热温度优选为 50 - 65°C, 苯酚的加入量优选为式 II化合物 8~20 倍的摩尔量； 然后再加入式 III所代表的脂肪胺， 升温并搅拌反应， 其中， 脂肪胺的加入量 优选为式 II化合物 2~ 5倍的摩尔量， 反应温度优选为 80-140°C, 反应时间优选为 2-8小 时； 所得的反应产物冷却后， 用无机碱水溶液调节至体系 pH大于 9， 其中， 无机碱水溶 液优选为 NaOH水溶液或氨水； 再用与水不互溶的有机溶剂进行萃取， 采用的有机溶剂优 选为氯仿、 乙酸乙酯、 乙醚等； 最后， 可以采用浓缩或过滤的方法收集固体并純化， 纯化 的方法优选采用硅胶柱进行层析提纯， 从而制得式 I所示的脂肪氨基取代的喹啉衍生物。 本发明方法中，式 II所示的氯代喹啉衍生物既可以按已知方法制备，也可由式 IV所示 的化合物通过如下的反应方法制备：
Figure imgf000007_0001
在式 II和式 IV中，
R R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 C1-6的垸基和 C3-6的环烷 基， 且 或 ≠1 2； 优选地， R,和 /或 R2为氢；
X是 CH2、 、 0或 S , 优选地， X是 NH或 0。
具体地说， 式 II化合物可以采用如下步骤制得： 将式 IV化合物 （例如， 四氢吲哚 [3, 2- b]喹啉- 11-酮或四氢苯并呋喃 [3， 2- b]喹啉- 11-酮）与 P0C13混合， 比例优选为 1 : 8 ~ 10w/v; 然后加热搅拌， 温度优选为 80-120 °C , 时间优选为 2-10小时； 蒸出过量的 P0C13, 并将产物倒入 8 ~ 10倍质量的水水中， 过滤收集固体， 得到式 II化合物。
式 IV所示的酮既可以按已知方法制备， 也可以按如下的方法制备：
Figure imgf000007_0002
(式 V ) (式 IV )
在式 IV和式 V中，
R, R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 C1-6的烷基和 C3— 6的环烷 基， 且 或 R,≠R2, 优选地， 和/或1 2为氢；
X是 CH2、 NH、 0或 S , 优选地， X是 NH或 0。
上述反应优选在多聚碑酸的存在下进行。
具体地说， 如四氢吲哚 [3, 2-b]喹啉- 11-酮或四氢苯并呋喃 [3, 2-b]喹啉- 11-酮可 以采用以下的步骤制得： 将取代苯氨基乙酰氨基苯甲酸、取代苯巯基乙酰氨基苯曱酸或 取代苯氧基乙酰氨基苯曱酸与多聚磷酸混合均匀， 比例优选为 1： 5-10 w/v; 然后加热， 优选置于微波炉中、在 150-350瓦下反应 1-10分钟， 冷却后加 5 ~ 10倍体积的水稀释， 并搅拌 30分钟以上； 最后， 过滤收集固体，真空干燥，制得四氢吲哚 [3，2-b]喹啉- 11- 酮或四氢苯并呋喃 [3， 2- b]喹啉- 11 -酮。
当式 V中的 X是 N时， 则其可以采用如下的方法 1制得:
Figure imgf000008_0001
(式 VII ) (式 VI ) (式 VIII )
其中， a为氯乙酰氯， b为碘化钾， c是苯胺或苯胺的衍生物；
Ri , R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 C l、 Br、 （^6的烷基和 C3-6的 环烷基， 且 R,=R2或 1^≠1 2。
具体地说， 以上的方法 1可以采用以下的步骤：
( 1 )将取代邻氨基苯曱酸溶于 DMF (二曱基曱酰胺）或二氧六环或二者按 1： 10 - 10： 1 ( V/V )组成的混合溶剂（通常浓度为 0. 01- 1M) 中； 在低温搅拌下缓慢滴加等摩尔的氯 乙酰氯， 温度优选控制在- 10°C至 10°C之间， 加完后维持该温度搅拌 20-60分钟， 再室温 搅拌 12-50小时； 倒入 5 10倍体积的水中 , 过滤收集固体， 用水洗涤， 自然干燥得式 VI 所示的固体产物；
( 2 )将上面得到的式 VI所示的产物溶解于丙酮 （浓度通常为 0. 01- 1M ) , 加入等摩 尔的碘化钾，室温搅拌 1-6小时，过滤，用丙酮洗涤固体物， 合并滤液和洗涤液，减压蒸干， 所得固体溶于 DMF (通常浓度为 0. 5-5M) , 再加入 DMF体积 4倍的乙腈和 1. 1-2摩尔量的 芳香胺， 搅拌回流 12-30小时； 减压蒸掉大部分溶剂后， 加入 6 ~ 10倍体积， 收集所得固 体， 即得到式 V111产物。
当式 V中的 X是 0或 S时， 则其可以采用如下的方法 2制得：
Figure imgf000008_0002
(式 IX ) (式 X )
其中， d是一氯乙酸钠； e邻氨基苯曱酸。
R, > R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 C l、 Br、 d-6的烷基和（；3-6的环 烷基， JL RH^ ^ R^ R^
具体地说， 以上的方法 2可以采用以下的步驟：
( 1 )将苯酚钠或 酚 1与等摩尔的一氯乙酸钠混合， 在 波炉中以 180-360瓦加热 反应 1-10分钟， 冷却到室温， 加入水稀释（浓度通常采用为 1-5M ), 并酸化至 pH值为 5 左右， 析出大量沉淀， 优选采用浓盐酸进行酸化； 最后， 过滤收集固体， 水洗、 干燥、 乙 醇重结晶， 得到固体中间产物式 X；
( 2 )将上述式 X所示的固体中间产物溶于干燥的三氯甲烷中（浓度通常为 0. 01-1M ), 加入 1. 2倍摩尔量的 S0C12,回流 0. 5-5小时，减压蒸掉溶剂和过量的 S0C12,加入面 F制成 1-5M的溶液，并緩慢滴入到冷却至 -10 °C至 10°C的 0. 1-1M的邻氨基苯曱酸的丽 F溶液中， 加完后室温搅拌 5-30小时， 倒入到 5- 10倍的水中， 过滤、 洗涤、 自然干燥， 即可得到产 物。
上述方法 2 中所用的 （取代）苯酚钠、 硫酚納和一氯乙酸钠可按已知方法制备， 也 可通过如下方法制得： （1 )将一氯乙酸加入水中至浓度为 10-100M, 冷却及搅拌下， 慢慢 滴加等摩尔 NaOH的 25% (W/V)的水溶液， 制得一氯乙酸钠； （ 2 )将（取代）苯酚或硫酚加 入到 1. 2倍摩尔量的 NaOH的 50% ( w/v )水溶液和等体积的乙醇中， 制得（取代 )苯酚 #) 或硫酚钠。
实验证明，本发明所提供的如式 I所示的脂肪氨基取代的喹啉类化合物对多种肿瘤细 胞株具有很强的抑制作用， 而对正常细胞毒性小， 可用于制备抗肿瘤药物。
因而，本发明还提供了脂肪氨基取代的喹啉类化合物在制备用于抗肿瘤药物中的用途 以及抗肿瘤药用组合物，该抗肿瘤药用组合物包括一种或一种以上的式 I所代表的化合物 或其盐的形式， 还可以包括其它的药学上可接受的助剂。
下面结合实施例， 对本发明做进一步地说明。 具体实施方式
实施例 1 2- (2 -苯胺基乙酰氨基) -苯甲酸的合成 将 0. 5mol邻氨基苯曱酸溶于 170mlDMF与 170ml二氧六环中， 冷却至 0°C , 缓慢滴加 0. 5mol氯乙酰氯， 温度不高于 5 °C , 滴加完后， （TC下搅拌 20分钟， 然后室温搅拌过夜； 倒入 1500ml水中， 沉淀过滤， 3 75ml水洗涤， 干燥， 得灰白色固体 2-（2-氯乙酰氨基） 苯甲酸。 取 0. lmol 2- (2-氯乙酰氨基）苯曱酸溶于适量的丙酮中， 加入 0. lraol碘化钾， 室温搅拌 2小时， 过滤， 并用适量的丙酮洗涤沉淀， 低于 40°C旋转蒸发至干， 将所得固 体加入少量的 DMF,溶解， 然后加入适量的乙腈， 搅拌下緩慢回流过夜， 回收乙腈， 剩余物 加入大量水， 有大量灰色固体析出， 过滤， 水洗， 干燥得 2-（2-苯胺基乙酰氨基） -苯曱 酸（化合物 1 )。
产率： 82%, MS (FAB) m/z 271 )； Ή丽 R (500 MHz, DMS0- ) δ: 8.66-8.67 (1H) , 7.94-7.97 (1H)， 7.44-7.54 (2H) , 7.05-7.11 (3H), 6.58-6.61 (3H), 6.32(1H), 3.82 (2H);
Figure imgf000010_0001
化合物 1
实施例 2 5, 5a, 10， 10a-四氢吲哚 [3, 2-b]喹啉 -11-酮的合成 取 0. lmol实施例 1制备的化合物 1和 400g多聚磷酸， 140°C下加热搅拌 2小时， 冷 却， 倒入 500raL冷水中， 加热煮沸， 稍冷， 用固体 NaOH调节 pH到 6左右， 产生大量墨绿 色固体， 过滤并用大量水洗涤， 干燥得浅绿色固体 5, 5a, 10, 10a-四氢吲哚 [3, 2- b]喹啉 -11-酮 （化合物 2)。
产率： 80%, m/z 2 5 { M+1 )； Ή NMR (500 MHz, DMSO-fl',) δ: 8.34-8.36 (1Η), 8.18-8.19 (1H), 7.72-7.73 (1H), 7.51-7.53 (1H), 7.45-7.49 (1H) , 7.26-7.30 (1H),
7.18-7.21 (1H);
Figure imgf000010_0002
实施例 3 5a, 10a-二氢- 5氢-苯并 [4， 5]呋喃 [3， 2- b]喹啉酮的合成 取 0. lmol 2- (2-苯氧基乙酰氨基） -苯曱酸和 100g多聚磚酸， 在家用微波炉中 280 瓦反应 3分钟， 冷却， 倒入 200mL冷水中， 大量灰白色色固体， 过滤并用大量水洗涤， 干 燥得灰白色固体 5a, 10a -二氢 -5氛-苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2-b]喹啉酮 (化合物 3 )。
产率： 88%, m/z 236 (M+1 ) ； Ή NMR (500 MHz, DMSO-^) δ: 8.29—8.31 (1H) , 8.16-8.17 (1H), 7.72-7.73 (1H), 7.60-7.62 (1H), 7.52-7.53 (1H) , 7.44 - 7.46 ( 1H) 7.32-7.34 (1H), 7.10-7.12 (1H);
Figure imgf000011_0001
化合物 3
实施例 4 氯- 10氢-吲哚 [3, 2- b]喹啉的合成 取 0.1 mol化合物 2和 100 g干燥的 P0C13, 120 °C下搅拌回流 3小时， 冷却， 小心 倒入 200 g冰水中， 用饱和 NaOH溶液小心调节到中性（温度不高于 30 C ), 用大量氯仿 萃取， 无水 Na2S04干燥， 回收溶剂， 得到大量浅黄色固体 11 -氯- 10氢-吲哚 [3,2- b]喹啉 (化合物 4 )。
产率： 62%, MS (ESI) m/z 253 (M+l ) 'Η應 R (500 MHz, DMSO- ） δ: 8.44-8.46 (1H), 8.33-8.35 (1H), 8.23-8.25 (1Ή), 7.73-7.76 (1H), 7.69-7.02 (1H) , 7.65-7.68 (1H), 7.58-7.64 (1H), 7.32- 7.35 (1H)。
Figure imgf000011_0002
化合物 4
实施例 5 11-氯苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉的合成 取 0.1 mol化合物 3和 100 g干燥的 P0C13, 120 °C下搅拌回流 3小时， 冷却， 小心 倒入 200 g水水中， 用饱和 NaOH溶液小心调节到中性（温度不高于 30 ), 用大量氯仿 萃取， 无水 Na2S04干燥， 回收溶剂， 得到大量浅黄色固体 11-氯 -苯并 [4, 5]呋喃 [3,2- b] 喹啉 (化合物 5 )。
产率： 62%, MS (BSD /z 254 (M+l) ¾ NMR(500 MHz, DMSO-^) δ: 8.34-8.36 (1H), 8.26-8.28 (1H), 8.12-8.14 (1H), 7.73-7.76 (1H), 7.69-7.02 (1H), 7.65-7.68 (1H), 7.60-7.62 (1H), 7.31- 7.33 (1H);
Figure imgf000012_0001
化合物 5
实施例 6 11-N, N-二甲基丙二胺基- 10氢 -吲哚 [3, 2- b]喹啉的合成
2 mmol 化合物 4和 10g苯酚在 50°C加热搅拌 30分钟， 然后加入 6ramol Ν,Ν-二甲基 丙二胺， 迅速升温到 120°C, 并搅拌 2小时， 冷却， 用 2N的 NaOH水溶液调节至 pH大于 11, 氯仿萃取， 无水硫酸 ]干燥， 回收溶剂， 所得固体经柱层析得到 11- N，N-曱基丙二胺 基 10氢-吲哚 [3, 2-b]喹啉 (化合物 6 )。
产 率 ： 72% , m/z 319 ( M+1 ) ； !H 匪 R(500 MHz, DMS0 - ) δ: 8.47-8.49 (IH), 8.28-8.31 (IH), 7.99-8.02 (m, 2H) , 7.86-7.93 (IH), 7.74-7.76 (IH)， 7.68-7.71 (IH), 7.61-7.64 (IH), 7.34-7.38 (IH), 4.24-4.26 (2H), 3.08-3.10 (2H), 2.27-2.30 (2H);
Figure imgf000012_0002
化合物 6
实施例 7 11-N, N-二甲基乙二胺基 10氢 -吲哚 [3, 2-b]喹啉的合成
2 腿 ol 化合物 4, lGg苯酚在 50°C加热搅拌 30分钟， 然后加入 6mmol Ν,Ν-二甲基 乙二胺， 迅速升温到 120°C, 并搅拌 2小时， 冷却， 用 2N的 NaOH水溶液调节至 pH大于 11, 氯仿萃取， 无水石 酸钠干燥， 回收溶剂， 所得固体经柱层析得到 11- Ν,Ν-曱基乙二胺 基 10氢-吲哚 [3, 2-b]喹啉 (化合物 7 )。
产率： 65%, m/z 305 (M+1 )； Ή NMR (500 MHz, DMSO-^) δ: 8.82-8.83 (IH), 8.59-8.62 (IH), 8.22-8.23 (IH), 7.92-7.95 (IH) , 7.87-7.89 (IH), 7.69-7.74 (IH) , 7.62-7.66 (1H); 7.35-7.40 (IH), 3.50-3.58 (2H); 2.35-2.46 (2H)
Figure imgf000013_0001
化合物 7
实施例 8 11- (2' -吗啉基乙胺 ) 10氢 -吲哚 [3, 2-b]喹啉的合成
2 mmol 化合物 4和 10g苯酚在 50°C加热搅拌 30分钟， 然后加入 6ramol 2-吗啉基乙 胺， 迅速升温到 120°C, 并搅拌 2小时， 冷却， 用 2N的 NaOH水溶液调节至 PH大于 11, 氯仿萃取， 无水硫酸钠干燥， 回收溶剂， 所得固体经柱层析得到 11- (2' -吗啉基乙胺）10 氢 -吲哚 [3, 2-b]喹啉 (化合物 8 )。
产率： 75%, MS (FAB) m/z 347 (M+l )； 'Η羅 R (500匪 z, DMS0- ) δ: 8.33-8.36 (2H), 8.01-8.03 (1H), 7.80-7.83 (1H), 7.66-7.72 (2H) , 7.57-7.60 (1©, 7.34-7.37 (1H) , 4.17-4.19 (2H), 3.67-3.69 (4H), 2.89-2.91 (2H), 2.62-2.64 (4H)
Figure imgf000013_0002
化合物 8
实施例 9 11- (3' -羟基丙胺） 10氢-吲哚 [3, 2- b]喹啉的合成 按实施例 Ί同样的方法制得化合物 9。
产率： 87%, MS (ESI)BA
Figure imgf000013_0003
8.55- 8.60 (1H)， 8.14-8.17 (1H) , 7.88-7.94 (1H) , 7.74-7.76 (1H) , 7.68-7.71 (1H) , 7.59-7.64 (1H ) , 7.34-7.37 (1H) , 4.17-4.21 (2H) , 3.66-3.68 (2Η) , 2.01—2.06 (2Η)。
Figure imgf000013_0004
化合物 9
实施例 10 11- ( 2' -羟基乙胺） 10氢-吲哚 [3， 2-b]喹啉的合成 按实施例 7 同样的方法制得 11- (2' -羟基乙胺） 10氢-吲哚 [3, 2- b]喹啉（化合物 产率： 85% MS (ESI) m/z 278 (M+l); Ή NMR(500 MHz, DMSO-if,) δ: 8.48-8.496 (1H) 8.31-8.32 (1H), 7.99-8.01 (1H), 7.88-7.91 (1H), 7, 65—7.73 (2H) , 7.61-7.65 (1H) 7.34-7.39 (1H), 4.25-4.26 (2H), 4.04— 4.06 (2H)。
Figure imgf000014_0001
化合物 10
实施例 11 1卜（2 ' -吗啉基乙胺苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉的合成
2 mmol 11-氯 -苯并 [4, 5]呋喃 [3， 2-b]喹啉和 10g苯酚在 50°C加热搅拌 30分钟， 然 后加入 4mmol 2-吗啉基乙胺， 迅速升温到 120°C, 并搅拌 4小时， 冷却， 用 2N的 NaOH 水溶液调节至 pH大于 11, 氯仿萃取， 无水硫酸 1干燥， 回收溶剂， 所得固体经柱层析得 到 11- (2 ' -吗啉基乙胺）苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹淋 (化合物 11 )。
产率： 82%, MS (ESI) m/z 348 (M+l ) , JH NMR (500 MHz, DMS0- ) δ: 8.32-8.33 (1H), 8.20-8.21 (1H), 7.99-8.00 (1H), 7.72-7.73 (1H), 7.64-7.67 (1H), 7.45-7.49 (2H) , 4.04-4.08 (2H), 3.59 (4H), 2.52-2.58 (2H), 2.45— 2.52 (4H)。
Figure imgf000014_0002
化合物 11
实施例 12 11- (Ν,Ν-二曱氨基乙二胺）苯并 [4, 5]呋喃〖3， 2 b]喹啉的合成 按实施例 10同样的方法制得 11- (Ν,Ν-二曱氨基乙二胺）苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉 (化合物 12)。
产率： 80%, MS (ESI) m/z 306 (M+l) , Ή NMR (500 MHz, DMS0- ) δ: 8.30-8.31 (1H) : 8.19-8.21 (1H), 7.98-8.00 (1H), 7.63-7.71 (3H), 7.44- 7.47 (2H), 7.12-7.14(1H,NH): 4.00-4.04 (2H), 2.64-2.67 (2H), 2.28(6H)。
Figure imgf000015_0001
化合物 12
实施例 13 11- 1^-二乙氨基乙二胺）苯并[4,5]呋喃[3，2 b]喹啉的合成 按实施例 10同样的方法制得 11- (Ν,Ν-二乙氨基乙二胺）苯并 [4,5]呋喃 [3,2 b]喹啉 (化合物 13)。
产率： 76%, MS (ESI) m/z 334 (M+1 ) , Ή NMR (500 MHz, DMSO-^) & 8.28-8.30 (1H);.19-8.21 (IH), 7.98— 8.00 (IH), 7.63-7.68 (3H), 7.44- 7.47 (2H), 4.00-4.02 (2H) ,.81-2.83 (2H), 2.36-2.63 (4H), 1.01 (6H)。
Figure imgf000015_0002
化合物 13
实施例 14 11- (Ν,Ν-二乙氨基丙二胺)苯并 [4， 5]呋喃〖3, 2 b]喹啉的合成 按实施例 10同样的方法制得 11- (N, N-二乙氨基丙二胺）苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉 (化合物 14)。
. 产率： 76%, MS (ESI) m/z 348 (M+1 ) , Ή NMR(500 MHz, DMSO-cQ δ: 8.30-.31 (IH) , 8.19-8.20 (IH)， 7.98-8.00 (IH) , 7.63-7.71 (3H) , 7.44—7.49 (2H) ,
.97-4.03 (2H) , 2.42-2.52 (2H)， 2.32-2.39 (4H) , 1.24—1.34 (2H) , 0.82-0.88 (6H)。
Figure imgf000015_0003
化合物 14
实施例 15 11-(2' -羟基乙胺)苯并 [4， 5]呋喃 [3， 2 b]喹啉的合成
按实施例 10同样的方法制得 11- (Ν,Ν-二乙氨基丙二胺）苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉 (化合物 15)。 产率： 77%, MS (ESI) m/z 279 (M+1) , Ή NMR(500 MHz, DMSO- ) δ: 8.37-8.39 (IH).19-8.20 (IH), 7.98-8.00 (IH), 7.63-7.72 (3H), 7.44-7.47 (2H), 4.00-4.04 (2H) ,.74-3.78 (2H)0
Figure imgf000016_0001
化合物 15
实施例 16 11- (3' -羟基丙胺)苯并 [4， 5]呋喃 [3, 2 b]喹啉的合成
按实施例 10同样的方法制得 11- (Ν,Ν-二乙氨基丙二胺）苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b] 啉 (化合物 16)。
产率： 77% MS (ESI) m/z 293 ( M+1 ) , NMR (500 MHz, DMSO-^) δ: 8.36-8.37 (IH).20-8.23 (IH), 7.98-8.00 (IH), 7.71-7.73 (IH), 7.64-7.68 (2H), 7.44-7.48 (2H) ,.01-4.05 (2H), 3.62-3.65 (2H), 1.91-1.96 (2H)。
Figure imgf000016_0002
化合物 16
实施例 17 11- (2' -哌啶基乙胺)苯并 [4, 5]呋喃〖3， 2 b]喹啉的合成
按实施例 10 同样的方法制得化合物 11- (2' -派啶基乙胺)苯并 [4, 5]呋喃 [3, 2 b] 喹啉（化合物 17)。
产率： 85%, MS (ESI) m/z 346 (M+1 ) , ¾丽 R (500 MHz, DMS0- ) δ: 8.29-8.31 (IH), 8.20— 8.21 (IH), 8.00-8.01 (IH), 7.63-7.70 (3H), 7.44-7.48 (2H), 7.08-7.11 (IH), 4.00-4.04 (2H) , 3.27-3.30 (2H) , 2.66-2.69 (2H) , 1.47—1.52 (4H) , 1.37-1.40 ( 2H )。
Figure imgf000016_0003
化合物 17 实施例 18 取代吲哚（氧茚）并喹啉衍生物 （式 I )化合物
对肿瘤细胞生长的抑制作用
1、 用 MTT法测试本发明化合物对癌细胞林的抑制作用：
选择部分具代表性的化合物， 以四种肿瘤细胞株 Bel- 7402 (人肝癌细胞林）、 GLC-82 (人肺腺癌细胞株）、 CNE- 2 (人鼻炎癌细胞株）、 MDA- MB231 (人乳腺癌细胞株） ， 采用 MTT 法进行体外细胞毒测定。 对数生长期细胞加入不同浓度的取代吲哚并喹啉衍生物， 作用 72小时后， 测定其吸光度。 分别计算抑制细胞生长达 50%时的化合物浓度， 以 IC5。/uM值 表示，结果如表 1所示。结果表明式 I化合物在提外对着两种肿瘤细胞株均具有非常强的 抑制作用。 .
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0002
2、 用 SRB蛋白染色方法和 MTS法测试本发明化合物的细胞毒性
MCF-7 (雌激素受体阳性乳腺癌细胞株）、 DA-MB231 (雌激素受体阴性乳腺癌细胞株）、 SaoS2 (骨肉瘤细胞株）、 CNE- 2 (鼻咽癌细胞林）属于实体瘤， 采用 SRB蛋白染色方法测试 本发明化合物的细胞毒性： 把细胞通过在 4 'C ( 50 μ L/we 11 , 最终浓度） 50%的三氯乙酸 (Sigma Chemical 公司制造）中反应一小时从而沉淀蛋白的方法固定细胞。 除去上清液， 并将平亚用自来水洗涤 5 次。 把这些细胞用 0. 4% 在 1%的醋酸中溶解的 SRB (S igma Chemical 公司制造） 染色除去游离的染料。 平 在空气中干燥， 结合型的蛋白染料在 150IL的 10微米 Trizma緩冲溶液（Sigma Chemical 公司制造）中有吸收。吸光度是在 540 纳米的分光光度平亚读计上读出的。 以上步骤采用三份平行操作。 562 (慢性骨髓 lekaemia )、 KGl-a ( 急性骨髓 lekaemia) 属于白血病细胞，采用 MTS 法测试化合物的细胞毒性： 笫一天，把细胞接种在 96- well 板上。 第二天， 把不同浓度 的待测化合物加入， 把细胞在 7°C、 含 5%二氧化碳的条件下孵化 1、 2、 4、 6、 24和 48h 小时。 孵化 1、 2、 4、 6、 24小时后， 把细胞用磷酸緩冲盐洗涤， 并在第 4天加入完全新 鲜的介质。然后，加入 20 μ 1的 MTS(MTS溶解在 Dulbecco's 磷酸緩冲盐中），把平 在 37 °C下孵化 4小时，吸光度在 490纳米的微型平亚上读出。该实验平行操作三份，重复三遍。 以 MTS5。来确定化合物的浓度时， 应将 MTS5。减少 50%, 再与空白样品的 MTS5。作比较。
用上述方法测得本发明化合物对人癌细胞的细胞毒作用，结果以 IC5。（ g/ml)表示， 见表 2。 表 2
Figure imgf000018_0001
另外， 还测试了本发明化合物对正常细胞和肿瘤细胞的选择性： 其比例为 3。
3、 本发明化合物对端粒酶活性的抑制作用
用德国灵曼公司（Boehrioger Mannheim)的端粒酶 PCR-ELISA检测试剂盒进行测试， 其测试步驟为： （ 1 )端粒酶抽提： 收集 K562细胞， 以水冷 PBS洗涤 3次， 离心去上清， 加入 200 μ 1端粒酶预冷裂解液悬浮细胞， 冰浴 30min, 4°C15000g离心 20min, 移取上清 于另一干净试管即制备出端粒酶提取液； （2)端粒酶重复序列扩增法（TRAP)反应： 将上 述提取液 3μ1、 Ιμΐ药物、 25 μΐ反应混合液、 21 μ 1无菌 DEPC水加入 PCR扩增管， 置 25 °C, lOmin延伸引物； 94°C灭活端粒酶 5min; PCR扩增： 50 μΐ反应体系， 包括 dNTP、 Taq酶、 生物素标记的引物 I和引物 Π , 置 94°C 30s、 50°C 30 s、 72 °C 90 s , 30次； 最后 72°C平衡 lOmin; ( 3 ) ELISA法检测扩增产物： 取 5 μ 1 PCR扩增产物， 加入 20 μ 1 变性试剂， 室温（ 20。C )孵育 lOmin, 加入 11Λ μ 1杂交混合液（含地高辛标记的探针 ), 充分混匀后， 转 100 μΐ混合液于抗生素蛋白包被的 孔板上， 37°C摇床杂交 2h。 弃杂交 液， 250 μΐ洗涤緩冲液洗 3次， 加入偶联过氧化物酶的抗地高辛抗体（anti- DIG- POD) 100 μ 1, 室温下孵育 30min。 震荡、 洗涤后加入 100 μ 1P0D的底物 PMB显色 lOmin, 最后 加终止液 100 μ 1, 以 690nm作为参比波长， 30min内酶标仪测定样品在 450nm波长的吸光 度（A)值， 根据 A=A45。- A69。进行计算。 结果见表 3。 表 3
本发明化合物 IC50 ( μ g/ml )
化合物 10 0.65
化合物 8 0.19
化合物 15 38.43
化合物 6 0.14
化合物 11 2.47
化合物 7 1.52
化合物 13 0.34

Claims

权利要求
1、 一种具有式 I所示结构的脂肪氨基取代的喹琳†生物,
Figure imgf000020_0001
式 I中，
Ri, R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 C1-6的烷基和 C3-6的环烷 基， JLR!=R2 ¾ R,≠R2； 优选地， 和/或 R2为氢；
— N 0
R3是选自于如下一组基团中的一种： 0H、 NH3、 NHR4、 和 , 其中， R4、
R5和 16为 d— 6的烷基或 C3-6的环烷基， 且 =16或 R5≠R6; 优选地， 13是选自于如下一
— N 0
组基团中的一种： 0H、 N(CH3)2、 ？ ((：2 ) 2和 _/ ；
X是 CH2、 NH、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0; n=l、 1、 3或 4, 优选地， n为 1或 2。
2、 如权利要求 1所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物， 其特征在于， 所述的 和/或 R2为氢。
3、 如权利要求 1或 2所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物， 其特征在于， 所述的 ^是
— N 〇
选自于如下一組基团中的一种： 0H、 N(CH3)2、 N (C2H5) 2和 ~ 。
4、 如权利要求 1所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物， 其特征在于， 所述的 X是 NH 或 0。
5、 如权利要求 1所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物， 其特征在于， 所述的结构式中 n=l或 2。
6、 如权利要求 1所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物， 其特征在于, 所述的脂肪氨基 取代的 Φ啉衍生物是选自于如下一组化合物中的一种:
Figure imgf000021_0001
(式 II ) (式 III) (式 I)
在式 I、 式 II和式 III中，
Ri, R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 （1-6的烷基和 CM的环烷 基， 且 严！^或 R!≠R2; 优选地， ^和/或 为氢；
— N 0
R3是选自于如下一组基团中的一种： 0H、 NH3、 NHR4、 NR5R6和 \~」 ， 其中， R4、 R5和 R6为 C1-6的垸基或 C3-6的环烷基， JLR5=R6 R5≠R6； 优选地， R3是选自于如下一 r~\
— N 0
组基团中的一种： 0H、 N(CH3)2> N (C2H5) 2和 ； X是 CH2、 NH、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0; n=l、 2、 3或 4 , 优选地， n为 1或 2。
8、 如权利要求 7所述的制备脂肪氨基取代的喹啉衍生物的方法， 其特征在于， 先使 所述的氯代喹啉衍生物与苯酚混合， 然后再加入所述的脂肪胺， 升温并搅拌反应； 所得的 反应产物冷却后， 用无机碱水溶液调节至 pH值大于 9后， 再用与水不互溶的有机溶剂进 行萃取； 用浓缩或过滤的方法收集固体并纯化， 制得所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物。
9、如权利要求 7所述的方法， 其特征在于， 所述的氯代喹啉衍生物是由式 IV所示的 化合物与 P0C13反应制备的：
Figure imgf000022_0001
(式 IV ) (式 Π )
在式 II和式 IV中，
R!、 R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 d-6的烷基和 C3-6的环烷 基， 且 或 R,≠R2, 优选地， 和/或112为氢；
X是 CH2、 顯、 0或 S , 优选地， X是 NH或 0。
10、 如权利要求 9所述的方法， 其特征在于，式 IV所示的化合物是由式 V所示的化合 物制备的：
Figure imgf000022_0002
(式 V ) (式 IV ) 在式 IV和式 V中，
R,, R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 Cw的烷基和 C3-6的环烷 基， 且 或 R,≠R2, 优选地， 1^和/或 R2为氢;
X是 C 、 冊、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0。 11、 如权利要求 10所述的方法， 其特征在于， 式 IV所示的化合物是由式 V所示的化 合物在多聚磷酸的存在下制备的。
12 如权利要求 10所述的方法， 其特征在于， 式 V中的 X为 NH, 且式 V所示的化合 物是采用如下的方法制得的：
Figure imgf000023_0001
(式 VII ) (式 VI ) (式 VIII )
其中，
a为氯乙酰氯， b为碘化钾， c是苯胺或苯胺的衍生物；
Ri> 分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 d— 6的烷基和 C3-6的环烷 基， R R R R
13、 如权利要求 10所述的方法， 其特征在于， 式 V中的 X为 0或 S , 且式 V所示的 化合物是采用如下的方法制得的：
Figure imgf000023_0002
(式 IX ) (式 X )
其中，
d是一氯乙酸钠， e是邻氨基苯甲酸；
Ri R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 C1-6的烷基和 C3-6的环烷 基， R R
14、如权利要求 1-6之一所述的脂肪氨基取代的喹啉衍生物在制备抗肿瘤药物中的用 途。
15、一种抗肿瘤的药物组合物，该药物组合物一种或一种以上的式 I所表示的化合物 或其盐以及药学上可接受的助剂：
Figure imgf000024_0001
式 I中，
R„ R2分别是选自于如下一组基团中的一种： H、 F、 Cl、 Br、 Cw的烷基和 C3— 6的环烷 基， 且 «或 R,≠R2; 优选地， 和/或 R2为氢;
— N 0
R3是选自于如下一組基团中的一种： 0H、 NH3、 皿 R4、 NR5R6和 U , 其中， R4、 R5和 R6为（^-6的烷基或 C3_6的环烷基， 且 15=16或 R5≠R6； 优选地， R3是选自于如下一
— Ν 0
组基团中的一种： 0H、 N(CH3)2、 N (C2H5) 2和 ； X是 CH2、 皿、 0或 S, 优选地， X是 NH或 0; n=l、 2、 3或 4, 优选地， n为 1或 2。
16、 如权利要求 15所述的药物组合物， 其特征在于， 所述的药物组合物包括以下一 组化合物中的一种或几种或其盐：
Figure imgf000024_0002
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