WO2003072574A1 - Piperidinouracile als arzneimittel zur behandlung bakterieller infektionen - Google Patents

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WO2003072574A1
WO2003072574A1 PCT/EP2003/001405 EP0301405W WO03072574A1 WO 2003072574 A1 WO2003072574 A1 WO 2003072574A1 EP 0301405 W EP0301405 W EP 0301405W WO 03072574 A1 WO03072574 A1 WO 03072574A1
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compounds
formula
halogen
alkyl
group
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PCT/EP2003/001405
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Niels Svenstrup
Alexander Kuhl
Dietmar Flubacher
Michael Brands
Kerstin Ehlert
Christoph Ladel
Michael Otteneder
Jörg Keldenich
Original Assignee
Bayer Healthcare Ag
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings

Definitions

  • the invention relates to piperidinouracils and processes for their preparation and their use for the manufacture of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular bacterial diseases.
  • Gram-positive eubacteria contain three different DNA polymerase ex-nucleases, which are referred to as Pol 1, Pol 2 and Pol 3.
  • Pol 3 is an enzyme that is necessary for the replicative synthesis of DNA.
  • WO 01/29010 describes 3-aminocarbonyl-substituted phenylaminouracils.
  • WO 96/06614 describes 3-alkylidene-substituted uracils, WO 00/71523 describes 3-alkanoyloxyalkyluracils and
  • WO 00/20556 describes uracils with a zinc-finger-active unit as antibacterial compounds.
  • An object of the present invention is to provide new, alternative soluble compounds with antibacterial activity for the treatment of bacterial diseases in humans and animals
  • the present invention relates to compounds of the formula (I) wherein
  • Rl heteroaryl means
  • heteroaryl can be substituted with 0, 1, 2 or 3 substituents which are selected independently of one another from the group consisting of alkyl, alkoxy, alkylthio, halogen, alkanoyl, hydroxy, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, nitro, amino, alkylamino, alkanoylamino , Cyano, carboxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl and optionally methyl-substituted heteroaryl,
  • R ⁇ denotes hydrogen or alkyl
  • R ⁇ is a substituent of the following formula
  • R3 ⁇ 1 and R3-2 are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkylthio, cycloalkyl and halogen, or R ⁇ _ l and R3-2 together with the carbon atoms to which they are attached form a cycloalkyl or heterocyclyl ring which is optionally substituted with up to 3 halogen.
  • the compounds according to the invention can also be in the form of salts, solvates or
  • the invention also relates to tautomers of the compounds.
  • preferred salts are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of compounds (I) include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ehanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid
  • Physiologically acceptable salts of the compounds (I) also include salts of conventional bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth metal salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines with 1 to 16 Carbon atoms, such as, for example and preferably, ethylamine, diethylamine, triemylamine, ethyldiiso- propylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclo-hexylamine, dimethylaminoethanol, procain, dibenzylamine, N-methylmorpholine, dihydroabiethylamine, arginine, lysine, ethylenediamine and methylpiperidine.
  • alkali metal salts for example sodium and potassium salts
  • alkaline earth metal salts for example calcium and magnesium salts
  • solvates are those forms of the compounds which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvate, in which coordination takes place with water.
  • Alkyl per se and "alk” and “alkyl” in alkoxy, alkylamino, alkylthio, alkanoyl and alkanoylamino represent a linear or branched alkyl radical with generally 1 to 6, preferably 1 to 4, particularly preferably 1 to 3, carbon atoms, for example and preferably for methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, tert-butyl, n-pentyl and n-hexyl.
  • Alkenyl stands for a straight-chain or branched alkenyl radical with 2 to 6 carbon atoms.
  • a straight-chain or branched alkenyl radical having 2 to 4, particularly preferably 2 to 3, carbon atoms is preferred.
  • vinyl, allyl, n-prop-1-en-1-yl and n-but-2-en-1-yl is preferred.
  • Alkynyl is a straight-chain or branched alkenyl radical with 2 to 6 carbon atoms. A straight-chain or branched alkenyl radical is preferred
  • Alkoxy is exemplary and preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, tert-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Alkylamino stands for an alkylamino radical with one or two (independently selected) alkyl substituents, for example and preferably for methylamino, ethyl ino, n-propylamino, isopropylamino, tert-butylamino, n-pentylamino, n-hexylamino, N, N-dimethylamino, N , N-diethylamino, N-ethyl-N-methylamino, N-methyl-Nn-propylamino, N-isopropyl-Nn-propylamino, Nt-butyl-N-methylamino, N-ethyl-Nn-pentylamino and Nn-hexy
  • Alkylthio is exemplary and preferably methylthio, ethylthio, n-propylthio, isopropylthio, tert-butylthio, n-pentylthio and n-hexylthio.
  • Alkanoyl is exemplary and preferably acetyl and ethylcarbonyl.
  • Alkanoyl-imino is exemplary and preferably acetylamino and ethylcarbonylamino.
  • Cycloalkyl stands for a cycloalkyl group with generally 3 to 8, preferably 5 to 7 carbon atoms, by way of example and preferably for cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • Aryl stands for a mono- to tricychic aromatic carbocyclic radical with generally 6 to 14 carbon atoms; exemplary and preferably for phenyl, ⁇ aphthyl and phenanthrenyl.
  • Heteroaryl stands for an aromatic, mono- or bicyclic radical with generally 5 to 10, preferably 5 to 6 ring atoms and up to 5, preferably up to
  • heteroatoms from the series S, O and ⁇ by way of example and preferably for thienyl, furyl, pyrrolyl, thiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, imidazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, indolyl, indazolyl, benzofuranyl, benzothiophenyl, quinolinyl isoquinolinyl.
  • Heterocyclyl stands for a mono- or polycychic, preferably mono- or bicyclic, non-aromatic heterocychic radical with usually 4 to 10, preferably 5 to 8, in particular 5 or 6 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series N, O, S, SO, SO.
  • the heterocyclyl residues can be saturated or partially unsaturated.
  • Halogen stands for fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • a symbol * on a bond means the point of attachment in the molecule.
  • residues may be substituted one or more times in the same or different manner.
  • a substitution with up to three identical or different substituents is preferred.
  • Substitution with a substituent is very particularly preferred.
  • the uracil ring is bonded to the piperidine ring via positions 3, 4 or 5,
  • Rl heteroaryl means
  • heteroaryl can be substituted with 0, 1, 2 or 3 substituents which are selected independently of one another from the group consisting of Alkyl, alkoxy, alkylthio, halogen, hydroxy, carboxy, heterocyclyl and aryl,
  • R2 represents hydrogen or alkyl
  • R3 is a substituent of the following formula
  • R ⁇ -l and R3-2 are selected independently of one another from the group consisting of -CC 6 -alkyl, C 2 -C 6 -alkenyl, C 2 -C 6 -alkynyl, -C-C 6 - alkylthio, C 3 - C 6 cycloalkyl and halogen, or
  • R3-1 and R ⁇ ⁇ 2 together with the carbon atoms to which they are attached form a C 3 -C 6 cycloalkyl or heterocyclyl ring which is optionally substituted with up to 3 halogen.
  • the uracil ring is bonded to the piperidine ring via positions 3, 4 or 5,
  • Rl heteroaryl means where heteroaryl can be substituted with 0, 1 or 2 substituents which are selected independently of one another from the group consisting of alkyl, halogen and carboxy,
  • R2 means hydrogen
  • R ⁇ is a substituent of the following formula
  • R3-1 and R3-2 are independently selected from the group consisting of methyl, ethyl, fluorine and chlorine, or
  • Preferred within the scope of the present invention also provides compounds of general formula (I) wherein 'of the uracil ring of the positions 3, 4 or 5 bound to the piperidine ring is shown.
  • R 1 is a 5- to 6-membered heteroaryl radical, in particular a 5-membered heteroaryl radical.
  • R3 is selected from the group
  • R ⁇ is selected from the group
  • the present invention further relates to a process for the preparation of the compounds of the general formula (I), wherein compounds of the general formula
  • R 1 has the meaning given above, and
  • X 1 is halogen, preferably chlorine or bromine, or hydroxy, be implemented.
  • reaction is carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to 50 ° C. at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, tetrachloromethane, trichloroethane, tetrachloroethane, 1,2-dichloroethane or trichlorethylene, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 10 dioxane, tetrahydrofuran, glycol dimethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether
  • Hydrocarbons such as benzene, xylene, toluene, hexane, cyclohexane or petroleum fractions, or other solvents such as nitromethane, ethyl acetate, acetone, dimethylformamide, dimethylacetamide, 1,2-dimethoxyethane, 2-butanone, dimethyl sulfoxide, acetonitrile or pyridine, preference is given to dioxane or methylene chloride.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or amides such as lithium diisopropylamide, or other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, preferably diisopropylethylamine or triethylamine.
  • alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate
  • amides such as lithium diisopropylamide
  • other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, preferably diisopropylethylamine or triethylamine.
  • reaction is carried out in inert solvents, in the presence of conventional condensing agents, if appropriate in the presence of a base; preferably in a temperature range from room temperature to 50 ° C at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane, carbon tetrachloride, trichloroethane, tetrachloroethane, 1,2-dichloroethane or trichlorethylene, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, dioxane, tetrahydrofuran, glycol dimethyl ether or diethylene glycol, hydrochloride glycol 30 Xylene, toluene, hexane, cyclohexane or petroleum fractions, or other solvents such as nitromethane, ethyl acetate, acetone, dimethyl formamide, dimethylacetamide, 1,2-dimethoxyethane, dimethyl sulfoxide, acetonitrile or pyridine, tetrahydrofuran, dimethylformamide, 1,2-dichloroethane or
  • Common condensing agents are, for example, carbodiimides such as e.g. N, N'
  • Bases are, for example, alkali carbonates, such as, for example, sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases, such as trialkylamines, for example triethylamine, N-methylmorpholine, * N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • alkali carbonates such as, for example, sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate
  • organic bases such as trialkylamines, for example triethylamine, N-methylmorpholine, * N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine.
  • N- (3-dimethylarninoisopropyl) -N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC), 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) and triethylamine in dimethylformamide or benzotriazole-1-yloxytris (dimethylammo) phosphonium hexafluorophosphate (BOP) is particularly preferred.
  • diisopropylethylamine in tetrahydrofuran is particularly preferred.
  • the compounds of the formula (III) are known or can be prepared analogously to known processes.
  • a process for the preparation of the compounds of the general formula (II) is characterized in that compounds of the formula
  • R, 2 has the meaning given above
  • the reaction is optionally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from 100 ° C. to 150 ° C. at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as ethers
  • Dioxane Dioxane, glycol dimethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether, hydrocarbons such as benzene, xylene or toluene, or other solvents dimethylformamide, Dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, pyridine or 1-methylpyrrolidinone, preference is given to dioxane or 1-methylpyrrolidinone.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or amides such as lithium diisopropylamide, or other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, preferably diisopropylethylamine or triethylamine.
  • alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate
  • amides such as lithium diisopropylamide
  • other bases such as DBU, triethylamine or diisopropylethylamine, preferably diisopropylethylamine or triethylamine.
  • a process for the preparation of the compounds of the general formula (JN) is characterized in that compounds of the formula
  • R 2 has the meaning given above
  • a process for the preparation of the compounds of the general formula (VI) is characterized in that the compound of the formula
  • R 2 has the meaning given above
  • the compounds according to the invention show an unforeseeable, valuable pharmacological and pharmacokinetic spectrum of action. They are therefore suitable for use as medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases in humans and animals.
  • the compounds according to the invention are particularly effective against bacteria and bacteria-like microorganisms, in particular Gram-positive bacteria. They are therefore particularly well suited for the prophylaxis and chemotherapy of local and possibly systemic infections in human and veterinary medicine, which are caused by these pathogens.
  • local and / or systemic diseases that are caused by the following pathogens or by mixtures of the following pathogens can be treated and / or prevented:
  • Gram-positive cocci e.g. Staphylococci (Staph. Aureus, Staph. Epidermidis) and Streptococci (Strept. Agalactiae, Strept. Faecalis, Strept. Pneumoniae, Strept. Pyogenes) and strictly anaerobic bacteria such as e.g. Clostridium, also mycoplasma
  • pathogens examples include: InfeMonski diseases in humans such.
  • bacterial infections can also be treated in other species. Examples include:
  • Ruminants (cattle, sheep, goats): sepsis, bronchopneumonia, mycoplasmosis,
  • Horse bronchopneumonia, puerperal and post-puerperal infections
  • Dogs and cats bronchopneumonia, dermatitis, otitis, urinary tract infections, prostatitis;
  • Poultry (chicken, turkey, quail, pigeon, ornamental birds and others): mycoplasmosis, chronic respiratory diseases, psittacosis.
  • Bacterial diseases in the rearing and keeping of farmed and ornamental fish can also be treated, the antibacterial spectrum extending beyond the previously mentioned pathogens to other pathogens such as e.g. Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Nocardia expanded.
  • pathogens e.g. Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, Nocardia expanded.
  • the active substance can act systemically and / or locally.
  • it can be applied in a suitable way, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, transdermal, conjunctival, optical or as an implant.
  • Parenteral administration is preferred.
  • the active ingredient can be administered in suitable administration forms for these administration routes.
  • suitable administration forms for these administration routes.
  • Known application forms which release the active ingredient quickly and / or modified such as tablets (non-coated and coated tablets, for example enteric coatings), capsules, dragees, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions and solutions are suitable for oral administration.
  • Parenteral administration can be done by bypassing an absorption step (intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinally or intralumbally) or by switching on absorption (intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously, or intraperitoneally).
  • Application forms suitable for parenteral administration include: Injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates and sterile powders. Intravenous administration is preferred.
  • Inhaled drug forms e.g. powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops / solutions, sprays e.g., nasal drops / solutions, sprays; tablets or capsules to be administered lingually, sublingually or buccally, suppositories, ear and eye preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shaking mixes), lipophilic suspensions, ointments, creams, milk, pastes, powder or implants.
  • the active compounds can be converted into the administration forms mentioned in a manner known per se. This is done using inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • Carriers e.g. microcrystalline cellulose
  • solvents e.g. liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers e.g. sodium dodecyl sulfate
  • dispersants e.g. polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural biopolymers e.g. albumin
  • stabilizers e.g. antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes e.g. inorganic pigments
  • iron oxides e.g. inorganic pigments
  • parenteral in particular intravenous, e.g. as an iv bolus injection (i.e. as a single dose, e.g. by syringe), short-term infusion (i.e. infusion over a period of up to one hour) or long-term infusion (i.e. infusion over a period of more than one hour).
  • the volume applied can be between 0.5
  • the active ingredient in solid form (e.g. as a lyophilisate) and to dissolve it in the solution medium just before application.
  • the application forms must be sterile and pyrogen-free. They can be based on aqueous or mixtures of aqueous and organic solvents.
  • aqueous solutions include, for example, aqueous solutions, mixtures of aqueous and organic solvents (in particular ethanol, polyethylene glycol (PEG) 300 or 400), aqueous solutions containing cyclodextrins or aqueous solutions containing emulsifiers (surface-active solubilizers, e.g. lecithin or Pluronic F 68, Solutol HS 15, Cremophor).
  • Aqueous solutions are preferred.
  • Isotonic and euhydric formulations are largely suitable for parenteral administration, for example those with a pH between 3 and 11, particularly 6 and 8, in particular around 7.4.
  • the injection solutions are packaged in suitable containers made of glass or plastic, e.g. in vials. These can have a volume of 1 to 1000, in particular 5 to 50 ml. The solution can be taken directly from these and applied. In the case of a lyophilizate, it is dissolved in the vial by injecting a suitable solvent and then removed.
  • the infusion solutions are packaged in suitable glass or plastic containers, e.g. in bottles or collapsing plastic bags. These can have a volume of 1 to 1000, in particular 50 to 500 ml.
  • the structural gene polC is amplified with the help of PCR from genomic DNA from S. aureus.
  • the primers SAPol31 5'-GCGCCATATGGACAGAGCAACAAAAATTTAA-3 'and SAPolrev 5'-GCGCGGATCCTTACATATCAAATATCGAAA-3' the restriction sites Ndel and BamHI are introduced before and after the amplified gene.
  • the 4300 bp PCR product After the 4300 bp PCR product has been digested with Ndel and BamHI, it is ligated into the vector pET15b (Novagen, USA), likewise digested with Ndel and BamHI, and transformed into E. coli XL-1 Blue.
  • Ni-NTA agarose from Quiagen, Germany
  • the gel matrix is washed with 50 mM NaH 2 PO pH 8.0, 2 mM ⁇ -mercaptoethanol, 20 mM imidazole, 10% glycerol and the purified protein is then washed with the same! Buffer containing 100 mM imidazole eluted.
  • the purified protein is mixed with 50% glycerol and stored at -20 ° C.
  • PolC Determination of the IC Q against polymerase III
  • the activity of PolC is measured in an enzymatically coupled reaction, the pyrophosphate formed during the polymerization being converted into ATP with the aid of the ATP-Sulfurylsae, which is detected with the help of the Firefly-Luciferase.
  • the reaction mixture contains 50 mM Tris / Cl pH 7.5 in a final volume of 50 ⁇ l; 5 mM DTT, 10 mM MgCl 2 , 30 mM NaCl, 0.1 mg / ml BSA, 10% glycerol, each 20 ⁇ M dATP, dTTP, dCTP, 2U / ml activated calf thymus DNA (Fa.
  • the reaction is started by adding purified PolC in a final concentration of ⁇ 2 nM and incubated at 30 ° C. for 30 min.
  • the amount of pyrophosphate formed is then converted to ATP by adding ATP sulfurylase (Sigma, USA) at a final concentration of 5 nM and incubating at 30 ° C for 15 min.
  • ATP sulfurylase Sigma, USA
  • the luminescence is measured in a luminometer for 60 s.
  • the concentration of an inhibitor is given as IC 50 , which leads to a 50% inhibition of the enzyme activity of PolC.
  • the MIC values against various bacterial strains were carried out using the microdilution method in BHI broth.
  • the bacterial strains were grown overnight in BHI broth (staphylococci) or BHI broth + 10% bovine serum (streptococci, enterococci).
  • the test substances were tested in a concentration range from 0.5 to 256 ⁇ g / ml.
  • the microtiter plates were inoculated with the test germs. The germ concentration was approximately lxl 0 6 germs / ml of suspension.
  • the plates were incubated at 37 ° C under 8% CO2 (for streptococci, enterococci) for 20 h. The lowest concentration at which the visible growth of the bacteria was completely inhibited was recorded as the MIC value.
  • S. aureus 133 cells are grown overnight in BH broth.
  • the overnight culture is diluted 1: 100 in fresh bra broth and turned up for 3 hours.
  • the bacteria in the logarithmic growth phase are centrifuged off and washed twice with buffered, physiological saline (303).
  • a cell suspension with an absorbance of 50 units in 303 is then set on the photometer (model LP 2W, Dr. Lange, Germany). After a dilution step (1:15), this suspension is mixed 1: 1 with a 10%> mucin suspension.
  • 0.25 ml / 20 g mouse ip is applied from this infection solution. This corresponds to a cell count of approximately 1 x 10E 6 germs / mouse.
  • the ip Therapy takes place 30 minutes after infection.
  • Female CFW1 mice are used for the infection attempt. The survival of the animals is recorded over 6 days.
  • the substances according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • Example 1 100 mg of the compound from Example 1, 50 mg lactose (monohydrate), 50 mg corn starch (native), 10 mg polyvinylpyrolidone (PVP 25) (from BASF, Ludwigshafen, Germany) and 2 mg magnesium stearate.
  • the mixture of active ingredient, lactose and starch is granulated with a 5% solution (m / m) of the PVP in water.
  • the granules are dried with the magnesium stearate for 5 min. mixed.
  • This mixture is compressed with a conventional tablet press (tablet format see above).
  • a pressure force of 15 kN is used as a guideline for the pressing.
  • Rhodigel is suspended in ethanol, the active ingredient is added to the suspension. The water is added with stirring. The swelling of the Rhodigel is stirred for about 6 hours.
  • Composition 1 mg of the compound from Example 1, 15 g of polyethylene glycol 400 and 250 g of water for injections.
  • Example 1 The compound of Example 1 is dissolved together with polyethylene glycol 400 in the water with stirring.
  • the solution is sterile filtered (pore diameter

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Abstract

Die Erfindung betrifft Piperidinouracile und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von bakteriellen Erkrankungen.

Description

PIPERIDINOURACILE ALS ARZNEIMITTEL ZUR BEHANDLUNG BAKTERIELLER INFEKTIONEN
Die Erfindung betrifft Piperidinouracile und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von bakteriellen Erkrankungen.
Gram-positive Eubakterien enthalten drei unterschiedliche DNA-Polymerase-Exo- Nucleasen, die als Pol 1, Pol 2 und Pol 3 bezeichnet werden. Pol 3 ist ein Enzym, welches für die replikative Synthese der DNA notwendig ist.
Die Eignung von Uracilderivaten für die Behandlung bakterieller Infektionen ist schon sein einiger Zeit bekannt. So beschreibt WO 01/29010 3-Aminocarbonyl-sub- stituierte Phenylaminouracile. WO 96/06614 beschreibt 3-Alkyliden-substituierte Uracile, WO 00/71523 beschreibt 3-Alkanoyloxyalkyluracile und WO 00/20556 beschreibt Uracile mit Zink-Finger-aktiver Einheit als antibakterielle Verbindungen.
In J Med. Chem., 1999, 42, 2035, Antimicro. Agents and Chemotherapy, 1999, 43, 1982 und Antimicro. Agents and Chemotherapy, 2000, 44, 2217 sind Phenylaminouracile als antibakterielle Verbindungen beschrieben.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, neue, alternative lösliche Verbindungen mit antibakterieller Wirkung zur Behandlung von bakteriellen Erkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen der Formel (I),
Figure imgf000004_0001
worin
Rl Heteroaryl bedeutet,
wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, Halogen, Alkanoyl, Hydroxy, Trifluormethyl, Tri- fiuormethoxy, Nitro, Amino, Alkylamino, Alkanoylamino, Cyano, Carboxy, Cycloalkyl, Heterocyclyl, Aryl und gegebenenfalls Methyl-substituiertes Heteroaryl,
R^ Wasserstoff oder Alkyl bedeutet,
R^ ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000004_0002
ist, worin
R3~1 und R3-2 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Alkylthio, Cycloalkyl und Halogen, oder R^_l und R3-2 zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen Cycloalkyl- oder Heterocyclyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 3 Halogen substituiert ist.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Form ilirer Salze, Solvate oder
Solvate der Salze vorliegen.
Die erfmdungsgemäßen Verbindung'en können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung betrifft deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Die Erfindung betrifft in Abhängigkeit von der Struktur der Verbindungen auch Tautomere der Verbindungen.
Als Salze sind im Rahmen der Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt.
Physiologisch unbedenkliche Salze der Verbindungen (I) umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäüre, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ehansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumar- säure, Maleinsäure und Benzoesäure
Physiologisch unbedenkliche Salze der Verbindungen (I) umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammonium- salze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triemylamin, Ethyldiiso- propylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclo-hexylamin, Dimetliylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methylmorpholin, Dihydroabiethyl- amin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und Methylpiperidin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy, Alkylamino, Alkylthio, Alkanoyl und Alkanoylamino stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit in der Regel 1 bis 6, vorzugsweise 1 bis 4, besonders bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, tert-Butyl, n- Pentyl und n-Hexyl.
Alkenyl steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkenylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkenylrest mit 2 bis 4, besonders bevorzugt mit 2 bis 3 Kohlenstoffatomen. Beispielsweise und vorzugsweise seien genannt: Vinyl, Allyl, n-Prop-1-en-l-yl und n-But-2-en-l-yl.
Alkinyl steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkenylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder- verzweigter Alkenylrest mit
2 bis 4, besonders bevorzugt mit 2 bis 3 Kohlenstoffatomen. Beispielsweise und vorzugsweise seien genannt: n-Prop-1-in-l-yl und n-But-2-in-l-yl.
Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, Isopropoxy, tert-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy. Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethyla ino, n-Propylamino, Isopropylamino, tert-Butylamino, n-Pentylamino, n-Hexylamino, N,N-Dimethylamino, N,N-Diethylamino, N-Ethyl-N-methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-Isopropyl-N-n-propylamino, N-t-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino und N-n-Hexyl-N-methylamino.
Alkylthio steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylthio, Ethylthio, n-Propylthio, Isopropylthio, tert-Butylthio, n-Pentylthio und n-Hexylthio.
Alkanoyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Acetyl und Ethylcarbonyl.
Alkanoyl-imino steht beispielhaft und vorzugsweise für Acetylamino und Ethyl- carbonylamino.
Cycloalkyl steht für eine Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 8, bevorzugt 5 bis 7 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl.
Aryl steht für einen mono- bis tricychschen aromatischen carbocychschen Rest mit in der Regel 6 bis 14 Kohlenstoffatomen; beispielhaft und vorzugsweise für Phenyl, Νaphthyl und Phenanthrenyl.
Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 bis 6 Ringatomen und bis zu 5, vorzugsweise bis zu
4, insbesondere bis zu 3 Heteroatomen aus der Reihe S, O und Ν, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl, Isochinolinyl. Heterocyclyl steht für einen mono- oder polycychschen, vorzugsweise mono- oder bicyclischen, nicht-aromatischen heterocychschen Rest mit in der Regel 4 bis 10, vorzugsweise 5 bis 8, insbesondere 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O, S, SO, SO . Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- bis 6-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, wie beispielhaft und vorzugsweise Tetrahydrofu- ran-2-yl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidiπ-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidinyl, Morpholinyl, Per- hydroazepinyl.
Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod.
Ein Symbol * an einer Bindung bedeutet die Verknüpfungsstelle im Molekül.
Wenn Reste in den erfindungsgemäßen Verbindungen substituiert sind, können die
Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach gleich oder verschieden substituiert sein. Eine Substitution mit bis zu drei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I),
worin
der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist,
Rl Heteroaryl bedeutet,
wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, Halogen, Hydroxy, Carboxy, Heterocyclyl und Aryl,
R2 Wasserstoff oder Alkyl bedeutet,
R3 ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000009_0001
ist, worin
R^-l und R3-2 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Cι-C6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, Cι-C6- Alkylthio, C3-C6-Cycloalkyl und Halogen, oder
R3-1 und R^~2 zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen C3-C6-Cycloalkyl- oder Heterocyclyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 3 Halogen substituiert ist.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der allgemei- nen Formel (I),
worin
der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist,
Rl Heteroaryl bedeutet, wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Halogen und Carboxy,
R2 Wasserstoff bedeutet,
R^ ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000010_0001
ist, worin
R3-1 und R3-2 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Methyl, Ethyl, Fluor und Chlor, oder
R3-1 und R^- zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen C5-Cycloalkyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Chlor oder Fluor substituiert ist.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin' der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der all- gemeinen Formel (I), worin R1 ein 5- bis 6-gliedriger Heteroaryl-Rest ist, insbesondere ein 5-gliedriger Heteroaryl-Rest.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R1 Isoxazolyl oder Furyl ist. Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R2 Wasserstoff ist.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin
R3 ausgewählt wird aus der Gruppe
Figure imgf000011_0001
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind darunter besonders Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin
R^ ausgewählt wird aus der Gruppe
Figure imgf000011_0002
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind auch Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R3 ausgewählt wird aus der Gruppe
Figure imgf000012_0001
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (I), wobei Verbindungen der allgemeinen Formel
Figure imgf000012_0002
worin
R und R die oben angegebene Bedeutung haben,
mit Verbindungen der allgemeinen Formel,
Figure imgf000012_0003
worin
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, und
X1 Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, oder Hydroxy bedeutet, umgesetzt werden.
Im Falle, dass X1 für Halogen steht, erfolgt die Umsetzung in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer 5 Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0 °C bis 50 °C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlörmethan, Trichlorethan, Tetrachlorethan, 1,2- Dichlorethan oder Trichlorethylen, Ether wie Diethylether, Methyl-tert.-butylether, 10 Dioxan, Tetrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethylether,
Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Ethylacetat, Aceton, Dimethyl- formamid, Dimethylacetamid, 1,2-Dimethoxyethan, 2-Butanon, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt sind Dioxan oder Methylenchlorid.
15
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Amide wie Lithiumdiisopropylamid, oder andere Basen wie DBU, Triethylamin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt Diisopropylethylamin oder Triethylamin.
20
Im Falle, dass X1 für Hydroxy steht, erfolgt die Umsetzung in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart von üblichen Kondensationsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base; bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 50°C bei Normaldruck.
25.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan, Tetrachlormethan, Trichlorethan, Tetrachlorethan, 1,2-Di- chlorethan oder Trichlorethylen, Ether wie Diethylether, Methyl-tert.-butylether, Dioxan, Tetrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethylether, 30 Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Ethylacetat, Aceton, Dimethyl- formamid, Dimethylacetamid, 1,2-Dimethoxyethan, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt sind Tetrahydrofuran, Dimethylformamid, 1,2-Dichlorethan oder Methylenchlorid.
Übliche Kondensationsmittel sind beispielsweise Carbodiimide wie z.B. N,N'-
Diethyl-, N,N,'-Dipropyl-, N,N'-Diisopropyl-, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-(3- Dimethylaminoisopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC), N-Cyclohexyl- carbodiimid-N'-propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbin- dungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1 ,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5- phenyl-l,2-oxazolium-3 -sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylamino Verbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3- oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phospho- niumhexafluorophosphat, oder O-(Benzotriazol- 1 -yl)-N,N,N',N'-tetra-methyluro- nium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-tetramethyl- uroniumtetrafluoro-borat (TPTU) oder O-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetra- methyl-uroniumliexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1 -yloxytris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluoro-phosphat (BOP), oder Mischungen aus diesen.
Basen sind beispielsweise Alkälicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, *N-Methylpiperidin, 4- Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin.
Besonders bevorzugt ist die Kombination von N-(3-Dimethylarninoisopropyl)-N'- ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC), 1-Hydroxybenztriazol (HOBt) und Triethylamin in Dimethylformamid oder Benzotriazol- l-yloxytris(dimethylammo)-phospho- niumhexafluorophosphat (BOP) und Diisopropylethylamin in Tetrahydrofuran. Die Verbindungen der Formel (III) sind bekannt oder können analog bekannten Verfahren hergestellt werden.
Ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (II) ist dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel
Figure imgf000015_0001
worin
R , 2 die oben angegebene Bedeutung hat,
mit Verbindungen der allgemeinen Formel
H2Ν-R3 (V)
worin
R die oben angegebene Bedeutung hat,
gegebenenfalls in Gegenwart einer Base umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt gegebenenfalls in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 100°C bis 150°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Ether wie
Dioxan, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethylether, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder andere Lösungsmittel Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, Pyridin oder 1-Methylpyrrolidinon, bevorzugt sind Dioxan oder 1-Methylpyrrolidinon.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Amide wie Lithiumdiisopropylamid, oder andere Basen wie DBU, Triethylamin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt Diisopropylethylamin oder Triethylamin.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können analog bekannten Ver- fahren hergestellt werden.
Ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (JN) ist dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel
Figure imgf000016_0001
worin
R2 die oben angegebene Bedeutung hat,
mit Trifluoressigsäure, gegebenenfalls in Gegenwart von Methylenchlorid, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 60°C bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck umgesetzt werden. Ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (VI) ist dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung der Formel
Figure imgf000017_0001
mit Verbindungen der allgemeinen Formel
Figure imgf000017_0002
worin
R2 die oben angegebene Bedeutung hat,
nach Mitsunobu Bedingungen in Gegenwart eines Phosphins und eines Azodicarbon- säuredialkylesters, bevorzugt in Gegenwart von Triphenylphosphin und Azodicar- bonsäurediethylester in Tetrahydrofuran bei 0°C bis Raumtemperatur unter Normaldruck um.
Die Verbindungen der Formel (VII) und (VIII) sind bekannt oder können analog bekannten Verfahren hergestellt werden. Die Herstellungswege sollen durch folgende Abbildungen beispielhaft erläutert werden:
Herstellung von Alkylpiperidinyl-6-chloruracilen:
Figure imgf000018_0001
Herstellung von entschützten Alkylpiperidinyl-6-chloruracilen:
Figure imgf000018_0002
Herstellung von 6-Aminoaryl-alkylpiperidinyluracilen :
Figure imgf000018_0003
Herstellung von 6-Aminoaryl-alkyl-N'-acylpiperidinyluracilen
Figure imgf000019_0001
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum. Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Besonders wirksam sind die erfindungsgemäßen Verbindungen gegen Bakterien und bakterienähnliche Mikroorganismen, insbesondere Gram-positive Bakterien. Sie sind daher besonders gut zur Prophylaxe und Chemotherapie von lokalen und gegebenenfalls systemischen Infektionen in der Human- und Tiermedizin geeignet, die durch diese Erreger hervorgerufen werden.
Beispielsweise können lokale und/oder systemische Erkrankungen behandelt und/oder verhindert werden, die durch die folgenden Erreger oder durch Mischungen der folgenden Erreger verursacht werden:
Gram-positive Kokken, z.B. Staphylokokken (Staph. aureus, Staph. epidermidis) und Streptokokken (Strept. agalactiae, Strept. faecalis, Strept. pneumoniae, Strept. pyo- genes) sowie strikt anaerobe Bakterien wie z.B. Clostridium, ferner Mykoplasmen
(M. pneumoniae, M. hominis, M. urealyticum).
Die obige Aufzählung von Erregern ist lediglich beispielhaft und keineswegs beschränkend aufzufassen. Als Krankheiten, die durch die genannten Erreger oder Mischinfektionen verursacht und durch die erfindungsgemäßen Verbindungen verhindert, gebessert oder geheilt werden können, seien beispielsweise genannt: InfeMonskiankheiten beim Menschen wie z. B. septische Infektionen, Knochen- und Gelenkinfektionen, Hautinfektionen, postoperative Wundinfektionen, Abszesse, Phlegmone, Wundinfektionen, infizierte Verbrennungen, Brandwunden, Infektionen im Mundbereich, Infektionen nach Zahnoperationen, septische Arthritis, Mastitis, Tonsillitis, Genital-Infektionen und Augeninfektionen.
Außer beim Menschen können bakterielle Infektionen auch bei anderen Spezies behandelt werden. Beispielhaft seien genannt:
Schwein: Sepsis, Metritis-Mastitis-Agalaktiae-Syndrom, Mastitis;
Wiederkäuer (Rind, Schaf, Ziege): Sepsis, Bronchopneumonie, Mykoplasmose,
Genitalinfektionen;
Pferd: Bronchopneumonien, puerperale und postpuerperale Infektionen;
Hund und Katze: Bronchopneumonie, Dermatitis, Ötitis, Harnwegsinfekte, Prostati- tis;
Geflügel (Huhn, Pute, Wachtel, Taube, Ziervögel und andere): Mycoplasmose, chronische Luftwegserkrankungen, Psittakose.
Ebenso können bakterielle Erkrankungen bei der Aufzucht und Haltung von Nutz- und Zierfischen behandelt werden, wobei sich das antibakterielle Spektrum über die vorher genannten Erreger hinaus auf weitere Erreger wie z.B. Brucella, Campylo- bacter, Listeria, Erysipelothris, Nocardia erweitert.
Der Wirkstoff kann systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck kann er auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublin- gual, lingual, buccal, rectal, transdermal, conjunctival, optisch oder als Implantat. Bevorzugt ist parenterale Applikation.
Für diese Applikationswege kann der Wirkstoff in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden. Für die orale Applikation eignen sich bekannte, den Wirkstoff schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, wie z.B. Tabletten (nichtüberzogene sowie überzogene Tabletten, z.B. magensaftresistente Überzüge), Kapseln, Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen und Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan, oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikations- formen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten und sterilen Pulvern. Bevorzugt ist intravenöse Applikation.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen / -lösungen, Sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- und Augen-präparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, Milch, Pasten, Streupuder oder Implantate.
Die Wirkstoffe können in an sich bekannter Weise in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies geschieht unter Verwendung inerter nichttoxischer, pharmazeutisch geeigneter Hilfsstoffe. Hierzu zählen u.a. Trägerstoffe (z.B. mikrokristalline Cellulose), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren (z.B. Natriumdodecylsulfat), Dispergiermittel (z.B. Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Biopolymere (z.B. Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidan- tien wie Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie Eisenoxide) oder Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation
Mengen von etwa 0,001 bis 10 mg/kg, vorzugsweise etwa 0,01 bis 1 mg/kg Körper- gewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 0,01 bis 500 mg/kg, vorzugsweise etwa 1 bis 10 mg/kg Körpergewicht.
5 Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
10 Besonders bevorzugt ist die parenterale, insbesondere die intravenöse Applikation, z.B. als iv Bolus Injektion (d.h. als Einzelgabe, z.B. per. Spritze), Kurzzeitinfusion (d.h. Infusion über einen Zeitraum von bis zu einer Stunde) oder Langzeitinfusion (d.h. Infusion über einen Zeitraum von mehr als einer Stunde). Das applizierte Volumen kann dabei in Abhängigkeit von den speziellen Bedingungen zwischen 0,5
15 bis 30, insbesondere 1 bis 20 ml bei der iv Bolus Injektion, zwischen 25 bis 500, insbesondere 50 bis 250 ml bei der Kurzzeitinfusion und zwischen 50 bis 1000, insbesondere 100 bis 500 ml bei der Langzeitinfusion betragen. Hierzu kann es vorteilhaft sein, den Wirkstoff in fester Form bereitzustellen (z.B. als Lyophilisat) und erst unmittelbar vor der Applikation im Lösungsmedium zu lösen.
2.0
Hierbei (müssen die Applikationsformen steril und pyrogenfrei sein. Sie können auf wässrigen oder Mischungen aus wässrigen und organischen Lösungsmitteln basieren.
Dazu zählen z.B. wässrige Lösungen, Mischungen aus wässrigen und organischen 25 Lösungsmitteln (insbesondere Ethanol, Polyethylenglykol (PEG) 300 oder 400), wässrige Lösungen enthaltend Cyclodextrine oder wässrige Lösungen enthaltend Emulgatoren (grenzflächenaktive Lösungsvermittler, z.B. Lecithin oder Pluronic F 68, Solutol HS 15, Cremophor). Bevorzugt sind hierbei wässrige Lösungen. Für die parenterale Applikation eignen sich weitgehend isotone und euhydrische Formulierungen, z.B. solche mit einem pH- Wert zwischen 3 und 11, besonders 6 und 8, insbesondere um 7,4.
Die Verpackung der Iηjektionslösungen erfolgt in geeigneten Behältnissen aus Glas oder Kunststoff, z.B. in Durchstichflaschen (Vials). Diese können ein Volumen von 1 bis 1000, insbesondere 5 bis 50 ml aufweisen. Aus diesen kann die Lösung direkt entnommen und appliziert werden. 'Im Falle eines Lyophilisats wird sie in dem Vial aufgelöst durch Zuspritzen eines geeigneten Lösungsmittels und dann entnommen.
Die Verpackung der Infusionslösungen erfolgt in geeigneten Behältnissen aus Glas oder Kunststoff, z.B. in Flaschen oder kollabierenden Kunststoffbeuteln. Diese können ein Volumen von 1 bis 1000, insbesondere 50 bis 500 ml aufweisen.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
Beispiele
Abkürzungen:
aq. wassng
Bn Benzyl
BOP Benzotriazol- 1 -yloxytris(dimethylamino)-phosphomumhexa- fluorophosphat'
DMSO Dimethylsulfoxid
DMF Dimethylformamid d. Th. der Theorie eq. Äquivalent
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) h Stunde
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie
MS Massenspektroskopie
NMR Kernresonanzspektroskopie
Pd/C Palladium/Kohle
RP-HPLC Reverse Phase HPLC
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
HPLC- und LC-MS-Methoden:
Methode 1: Instrument Micromass Quattro LCZ
Säule: Symmetry C18, 50 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Temperatur: 40°C; Fluss = 0.5 mlmin"1; Eluent A = CH3CN + 0.1% Ameisensäure, Eluent B = Wasser + 0.1% Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 10% A → 4 min 90%o A -» 6 min 90% A Methode 2: Instrument Micromass Platform LCZ
Säule: Symmetry C18, 50 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Temperatur: 40°C; Fluss = 0.5 mimin"1; Eluent A = CH3CN + 0.1% Ameisensäure, Eluent B = Wasser + 0.1% Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 10%) A - 4 min 90% A - 6 min 90% A
Methode 3: Instrument: Finnigan MAT 900S, TSP: P4000,AS3000,UV3000HR Säule: Symmetry C 18, 150 mm x 2.1 mm, 5.0 μm; Eluent C: Wasser, Eluent B: Wasser + 0.3g 35%>ige HCl, Eluent 'A: Acetonitril; Gradient: 0.0min 2%A - 2.5min 95%A - 5min 95%A; Ofen: 70 °C; Fluss: 1.2ml/min; UV-Detektion: 210 nm
Aus gangs Verbindungen :
Beispiel I l-[(Benzyloxy)methyl]-6-chlor-2,4(lH,3H)-pyrimidindion
5
Figure imgf000026_0001
45 g (307.09 mmol) Chloruracil werden mit 600 ml Dimethylformamid zusammengegeben und auf 0°C gekühlt. Man gibt vorsichtig 3.22 g (405.46 mmol) Lithium-
10 hydrid hinzu (stark exotherm) und rührt 10 Minuten nach. Dann werden 62.25 g
(317.17 mmol) Benzylchlormethylether innerhalb von 10 Minuten zugetropft. Man rührt 90 Minuten bei 0°C nach. Die Reaktionslösung wird mit 1000 ml 2%iger Natriumhydroxidlösung versetzt und mit 1000 ml Toluol extrahiert. Die Toluolphase wird noch einmal mit 100 ml 2 %>iger Natriumhydroxidlösung gewaschen. Die
15 vereinigten wässrigen Phasen werden mit IN Schwefelsäure auf pH3 gestellt. Der ausgefallene Feststoff wird abfiltriert und im Hochvakuum getrocknet. Man erhält 57.1 g (70 % d. Th.) Produkt.
1H-NMR (200 MHz, CDC13): δ = 4.69 (s, 2H), 5.54 (s, 2H), 5.87 (s, 1H), 7.35 (m, 5H), 8.45 (s, 1H). '20 Beispiel II
4-(Hydroxymethyl)- 1 -piperidincarbonsäure-tert.-butylester
Figure imgf000027_0001
12.1 g (105.06 mmol) 4-(Hydroxymethyl)piperidin werden zusammen mit 0.31 g (2.5 mmol) 4-Dimethylaminopyridin und 32.22 ml (231.13 mmol) Triethylamin in 305 ml Dichlormethan gelöst. Man kühlt auf 0°C ab und gibt 24.07 g (110.31 mmol) Pyrokohlensäure-di-tert.-butylester portionsweise hinzu. Man rührt 50 Stunden bei Raumtemperatur nach. Die Reaktionslösung wird mit 25 ml Wasser versetzt. Man trennt die Phasen ab und die organische Phase wird noch einmal mit 100 ml IM Salzsäure und einmal mit 50 ml Natriumchloridlösung gewaschen. Man trocknet über Natriumsulfat und engt im Vakuum ein. Man erhält 20 g (92 % d. Th.) Produkt. LC-MS (Methode 3): Rt = 2.13 min
MS (ESIpos): m/z = 216 (M+H)+
Beispiel III
4- { [3 -[(Benzyloxy)methyl] -4-chlor-2,6-dioxo-3 ,6-dihydro- 1 (2H)-pyrimidinyl] - methyl} - 1 -piperidincarbonsäure-tert.-butylester
Figure imgf000028_0001
5 g (23.22 mmol) der Verbindung aus Beispiel I, 6.19 g (23.22 mmol) der Verbindung aus Beispiel II und 6.7 g (25.55 mmol) Triphenylphosphin werden in 153 ml Tetrahydrofuran zusammen gegeben. Man kühlt auf 0°C ab und tropft innerhalb von 10 Minuten 4.02 ml (25.55 mmol) Azodicarbonsäurediethylester hinzu. Es wird
72 Stunden bei Raumtemperatur nachgerührt. Man engt die Reaktionslösung im Vakuum ein und reinigt über Kieselgel 60. Man erhält 7.43 g (69 % d. Th.) Produkt. LC-MS (Methode 2) : Rt = 4.7 min MS (ESIpos) : m z = 464 (M+H)+
Beispiel IV
6-Chlor-3-(4-piperidinylmethyl)-2,4(lH,3H)-pyrimidindion
Figure imgf000028_0002
9.85 g (21.23 mmol) der Verbindung aus Beispiel III werden mit 161 ml Trifluoressigsäure versetzt und auf Rückfluss erhitzt. Nach 2 Stunden wird die Reaktionslösung abgekühlt und im Vakuum eingeengt. Man nimmt noch einmal in Methanol auf und engt erneut im Vakuum ein. Der Rückstand wird aus 30 ml Ethylacetat umkristallisiert.
Man erhält 5.43 g (99% d. Th.) Produkt. LC-MS (Methode 1): Rt = 0.32 min MS (ESIpos): m z = 244 (M+H)+ -
Beispiel V
6-(2,3 -Dihydro- 1 H-inden-5-ylamino)-3 -(4-piperidinylmethyl)-2,4( 1 H,3H)-pyrimi- dindion
Figure imgf000029_0001
0.77 g (3.18 mmol) der Verbindung aus Beispiel IV werden mit 0.93 g (7 mmol) 5- Aminoindan versetzt und auf 150°C erhitzt. Nach 2 Stunden kühlt man die Reaktionslösung ab. Man versetzt mit 10 ml Dichlormethan und 5 ml Methanol und gibt dieses Gemisch unter Rühren auf 50 ml Dieethylether. Der Niederschlag wird abfil- triert und im Hochvakuum getrocknet.
Man erhält 0.667 g (61 % d. Th.) Produkt. LC-MS (Methode 1): Rt = 2.37 min MS (ESIpos): m/z = 341 (M+H)+ Beispiel VI
6-[(3-Ethyl-4-methylphenyl)amino]-3-(4-piperidinylmethyl)-2,4(lH,3H)-ρyrimidin- dion
Figure imgf000030_0001
Die Darstellung erfolgt wie für Beispiel V aus 1 g (4.104 mmol) der Verbindung aus Beispiel IV, 0.845 g (4.924 mmol) 3-Ethyl-4-methylanilin Hydrochlorid und 1.57 ml (9.02 mmol) N,N-Diisopropylethylamin. Man erhält 0.498 g (35 % d. Th.) Produkt LC-MS (Methode 1): Rt = 2.47 min MS (ESIpos): m/z = 343 (M+H)+
Herstellungsbeispiele
Beispiel 1
6-(2,3-Dihydro-lH-inden-5-ylamino)-3-({l-[(5-methyl-4-isoxazolyl)carbonyl]- 4-piperidinyl}methyl)-2,4(lH,3H)-pyrimidindion
Figure imgf000030_0002
133.9 mg (0.39 mmol) der Verbindung aus Beispiel V werden zusammen mit 50 mg (0.39 mmol) 5-Methylisoxazol-4-carbonsäure und 225.19 mg (0.43 mmol) 1-Ben- zotriazolyloxy-tripyrrolidinphosphoniumhexafluorophosphat in 1.5 ml Tetrahydrofuran suspendiert. 55.93 mg (0.43 mmol) N,N-Diisopropylethylamin werden hinzu- gegeben und man rührt 24 Stunden bei Raumtemperatur nach. Die Reaktionslösung wird mit 0.5 ml Wasser versetzt. Nach 15 Minuten filtriert man über eine Extrelut/ Kieselgelkartusche. Es wird mit 3 ml Methanol/Dichlormethan im Verhältnis 2:1 nachgewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in Ethylacetat aufgenommen und zweimal mit Natriumhydrogencarbonatlösurig gewaschen. Man trocknet über Natriumsulfat und engt im Vakuum ein. Es wird über eine präparative HPLC gereinigt. Man erhält 65 mg (37% d. Th.) Produkt. LC-MS (Methode 2): Rt = 3.57 min MS (ESIpos): m/z = 450 (M+H).
Die in der folgenden Tabelle aufgeführten Beispiele können analog den oben beschriebenen Vorschriften aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen hergestellt werden.
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0001
B. Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
in tro-Wirkung
Die in v tro-Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in folgenden Assays gezeigt werden:
Klonierung, Expression und Reinigung von Pol III aus S. aureus Zur Klonierung von polC mit einem N-terminalem His-Tag wird das Strukturgen polC mit Hilfe der PCR aus genomischer DNA von S. aureus amplifiziert. Mit Hilfe der Primer SAPol31 5'-GCGCCATATGGACAGAGCAACAAAAATTTAA-3' und SAPolrev 5'-GCGCGGATCCTTACATATCAAATATCGAAA-3' werden die Restriktionsschnittstellen Ndel und BamHI vor bzw. hinter dem amplifizierten Gen ein- geführt. Nachdem das 4300 bp große PCR-Produkt mit Ndel und BamHI verdaut worden ist, wird es in den ebenfalls mit Ndel und BamHI verdauten Vektor pET15b (Novagen, USA) ligiert und in E. coli XL-1 Blue transformiert.
Nach Transformation in E. coli BL21(DE3) werden die Zellen zur Expression von PolC bei 30°C in LB-Medium mit 100 μg/ml Ampicillin bis zu einer OD595nm von
0,5 kultiviert, auf 18°C abgekühlt und nach Zusatz von 1 mM IPTG 20 Stunden weiter inkubiert. Die Zellen werden durch Zentrifugation geerntet, einmal in PBS mit
1 mM PMSF gewaschen und in 50 mM NaH2PO4 pH 8,0, 10 mM Imidazol, 2 mM ß-
Mercaptoethanol, 1 mM PMSF, 20 % Glycerin aufgenommen. Die Zellen werden mit Hilfe einer French Press bei 12.000 psi aufgeschlossen, die Zelltrümmer abzentri- fugiert (27.000xg, 120 min, 4°C) und der Überstand mit einer entsprechenden
Menge Ni-NTA-Agarose (Fa. Quiagen, Deutschland) 1 Stunde bei 4°C gerührt. Nach dem Einfüllen in eine Säule wird die Gelmatrix mit 50 mM NaH2PO pH 8,0, 2 mM ß-Mercaptoethanol, 20 mM Imidazol, 10 % Glycerin gewaschen und das gereinigte Protein wird anschließend mit demselben! Puffer, welcher 100 mM Imidazol enthält, eluiert. Das gereinigte Protein wird mit 50 % Glycerin versetzt und bei -20°C gelagert.
Bestimmung der IC Q gegen Polymerase III Die Aktivität von PolC wird in einer enzymatisch gekoppelten Reaktion gemessen, wobei das während der Polymerisation gebildete Pyrophosphat mit Hilfe der ATP- Sulfurylsae in ATP umgewandelt wird, welches mit Hilfe der Firefly-Luciferase de- tektiert wird. Der Reaktionsansatz enthält in einem Endvolumen von 50 μl 50 mM Tris/Cl pH 7,5; 5 mM DTT, 10 mM MgCl2, 30 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 10 % Glycerol, je 20 μM dATP, dTTP, dCTP, 2U/ml aktivierte Kalbsthymus-DNA (Fa.
Worthington, USA), 20 μM APS und 0,06 mM Luciferin. Die Reaktion wird durch Zusatz von gereinigter PolC in einer Endkonzentration von ~2 nM, gestartet und 30 min bei 30°C inkubiert. Die Menge an gebildetem Pyrophosphat wird anschließend durch Zugabe von ATP-Sulfurylase (Sigma, USA) in einer Endkonzentration von 5 nM und Inkubation bei 30°C für 15 min in ATP umgewandelt. Nach Zugabe von 0,2 nM Firefly-Luciferase wird die Lumineszenz in einem Luminometer für 60 s gemessen. Als IC50 wird die Konzentration eines Inhibitors angegeben, die zu einer 50%>igen Inhibition der Enzymaktivität von PolC fuhrt.
Tabelle A
Figure imgf000045_0001
Bestimmung der minimalen Hemmkonzentrationen (MHK) gegenüber einer Reihe von Keimen
Die MHK- Werte gegen verschiedene Bakterienstämme (S. aureus, S. pneumoniae, E. faecalis) wurden unter Verwendung der Mikrodilutionsmethode in BHI-Bouillon durchgeführt. Die Bakterienstämme wurden über Nacht in BHI-Bouillon (Staphylo- kokken) bzw. BHI-Bouillon + 10% Rinderserum (Streptokokken, Enterokokken) angezüchtet. Die Testsubstanzen wurden in einem Konzentrationsbereich von 0,5 bis 256 μg/ml geprüft. Nach serieller Verdünnung der Testsubstanzen wurden die Microtiterplatten mit den Testkeimen beimpft. Die Keimkonzentration lag bei ca. lxl 06 Keimen/ml Suspension. Die Platten wurden bei 37°C unter 8 % CO2 (für Streptokokken, Enterokokken) für 20 h inkubiert. Als MHK- Wert wurde die niedrigste Konzentration protokolliert, bei der das sichtbare Wachstum der Bakterien vollständig inhibiert wurde.
in yrw-Wirkung
Die Eignung der erfmdungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung bakterieller Infektionen kann in folgenden Tiermodellen gezeigt werden:
Systemische Infektion mit S.aureus 133
S. aureus 133 Zellen werden über Nacht in BH-Bouillon angezüchtet. Die Übernachtkultur wird 1:100 in frische BH-Bouillon verdünnt und für 3 Stunden hochgedreht. Die in der logarithmischen Wachstumsphase befindlichen Bakterien werden abzentri- fugiert und 2 x mit gepufferter, physiologischer Kochsalzlösung (303) gewaschen. Danach wird am Photometer (Modell LP 2W, Fa. Dr. Lange, Deutschland) eine Zellsuspension mit einer Extinktion von 50 Einheiten in 303 eingestellt. Nach einem Verdünnungsschritt (1 :15) wird diese Suspension 1:1 mit einer 10 %>igen Mucin- Suspension gemischt. Von dieser Infektionslösung werden 0,25 ml/20 g Maus ip appliziert. Dies entspricht einer Zellzahl von etwa 1 x 10E6 Keimen/Maus. Die ip- Therapie erfolgt 30 Minuten nach der Infektion. Für den Infektionsversuch werden weibliche CFW1 -Mäuse verwendet. Das Überleben der Tiere wird über 6 Tage protokolliert.
C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden: -
Tablette:
Zusammensetzung :
100 mg der Verbindung von Beispiel 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke (nativ), 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Ludwigshafen, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus Wirkstoff, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Als Richtwert für die Verpressung wird eine Pesskraft von 15 kN verwendet.
Oral applizierbare Suspension:
Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung von Beispiel 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum der Fa. FMC, Pennsylvania, USA) und 99 g Wasser. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension. Her Stellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, der Wirkstoff wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt.
Intravenös applizierbare Lösung:
Zusammensetzung: 1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250g Wasser für Injektionszwecke.
Herstellung:
Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser
0,22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Patentansprüche
Verbindungen der Formel
Figure imgf000049_0001
worin
Rl Heteroaryl bedeutet,
wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, Halogen, Alkanoyl, Hydroxy, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Nitro, Amino, Alkylamino, Alka- noylamino, Cyano, Carboxy, Cycloalkyl, Heterocyclyl, Aryl und gegebenenfalls Methyl-substituiertes Heteroaryl,
R^ Wasserstoff oder Alkyl bedeutet und
R^ ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000049_0002
ist, worin R^-l und R^-2 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Alkylthio, Cycloalkyl und Halogen, oder
R3-1 und R3-2 zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen Cycloalkyl- oder Heterocyclyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 3 Halogen substituiert ist.
2. Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1, worin
der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist,
Rl Heteroaryl bedeutet,
wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1, 2 oder 3 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, Halogen, Hydroxy, Carboxy, Heterocyclyl und Aryl,
R^ Wasserstoff oder Alkyl bedeutet und
R^ ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000050_0001
ist, worin R3_1 und R3- unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus CrC6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl, C2-C6-Alkinyl, Cι-C6- Alkylthio, C3-C6-Cycloalkyl und Halogen, oder
R3_1 und R3-2 zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen C3-C6-Cycloalkyl- oder Heterocyclyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 3 Halogen substituiert ist.
3. Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, worin
der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist,
RA Heteroaryl bedeutet,
wobei Heteroaryl substituiert sein kann mit 0, 1 oder 2 Substituenten, die unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Alkyl, Halogen und Carboxy,
R^ Wasserstoff bedeutet und
R^ ein Substituent der folgenden Formel
Figure imgf000051_0001
ist, worin
R3_l und R3-2 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Methyl, Ethyl, Fluor und Chlor, oder R3-1 und R3-2 zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen Cs-Cycloalkyl-Ring bilden, der gegebenenfalls mit bis zu 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Chlor oder Fluor sub- stituiert ist.
4. Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, worin
der Uracilring über die Positionen 3, 4 oder 5 an den Piperidinring gebunden ist.
5. Verbindungen der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin
R1 ein 5- bis 6-gliedriger Heteroaryl-Rest ist.
6. Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1, 2, 4 oder 5, worin
R2 Wasserstoff ist
7. Verbindungen der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 6, worin
R^ ausgewählt wird aus der Gruppe
Figure imgf000052_0001
Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I) durch Umsetzung von Verbindungen der Formel
Figure imgf000053_0001
worin
R 9 und R ^ di •e in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben,
mit Verbindungen der allgemeinen Formel
Figure imgf000053_0002
worin
R1 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, und
X1 Halogen, bevorzugt Chlor oder Brom, oder Hydroxy bedeutet.
9. Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Behandlung und/oder
Prophylaxe von Krankheiten.
10. Arzneimittel enthaltend mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Kombination mit mindestens einem pharmazeutisch verträg- liehen, pharmazeutisch unbedenklichen Träger oder Exzipienten.
11. Verwendung von Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe bakterieller Infektionen.
12. Arzneimittel nach Anspruch 10 zur Behandlung und/oder Prophylaxe bakterieller Infektionen.
13. Verfahren zur Bekämpfung bakterieller Infektionen in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer antibakteriell wirksamen Menge mindestens einer
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7.
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