WO2002046447A3 - Procede d'identification de nucleotides a des positions determines dans des acides nucleiques cibles - Google Patents

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Abstract

La présente invention concerne un procédé permettant de déterminer l'identité d'un nucléotide d'intérêt dans une molécule d'acide nucléique cible par la combinaison de la cible avec deux amorces, où la première amorce opère une hybridation à un emplacement 3' du nucléotide d'intérêt et s'étend à partir de celui-ci dans la cible, afin d'incorporer le complément du nucléotide d'intérêt dans un premier produit d'extension. La deuxième amorce opère ensuite une hybridation à un emplacement 3' du complément du nucléotide d'intérêt et s'étend en fonction du premier produit d'extension, afin d'incorporer le nucléotide d'intérêt dans un deuxième produit d'extension. Ensuite, la première amorce opère une hybridation à un emplacement 3' du nucléotide d'intérêt dans le deuxième produit d'extension et s'étend à partir de celui-ci, afin de constituer, en combinaison avec le deuxième produit d'extension, un fragment d'acide nucléique. Les première et deuxième amorces sont destinées à incorporer une portion de la séquence de reconnaissance d'une endonucléase de restriction qui reconnaît une séquence de base interrompu partiellement variable, c'est à dire, une séquence de formule A-B-C dans laquelle A et C sont un nombre et une séquence de bases essentielles à la reconnaissance RE, et B est un nombre de bases essentielles à la reconnaissance RE. La première amorce incorpore la séquence A, la deuxième amorce incorpore la séquence C, et elles sont destinées, par rapport à la cible, de produire un fragment d'acide nucléique où les séquences A et C sont séparées par les bases B, où le nucléotide d'intérêt se trouve au sein de la région B. L'action de la reconnaissance sur le fragment d'acide nucléique fournit un petit fragment d'acide nucléique qui peut faire l'objet d'une caractérisation, permettant ainsi de révéler l'identité du nucléotide d'intérêt.
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