WO2001081339A1

WO2001081339A1 - Composes pour le traitement ou la prevention du paludisme et procedes pour le traitement du paludisme

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Publication number: WO2001081339A1
Application number: PCT/JP2001/003619
Authority: WO
Inventors: Tomio Takeuchi; Yusuke Wataya; Munekazu Iinuma; Hye-Sook Kim; Hiroomi Watabe; Hiroshi Naganawa; Yoshikazu Takahashi
Original assignee: Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai; Meiji Seika Kaisha, Ltd.
Priority date: 2000-04-26
Filing date: 2001-04-26
Publication date: 2001-11-01
Also published as: CA2411966A1; EP1295881B1; AU5259801A; EP1295881A1; CA2411966C; DE60136067D1; ATE410423T1; US20030176492A1; EP1295881A4; US6939892B2; JP4806510B2

Description

明細書マラリァ病の治療または予防用組成物、およびマラリァ病の治療方法技術分野

本発明は既知の抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩を、有効成分として含有するマラリア病の治療または予防用組成物に関する。さらに、本発明は、抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩を、マラリア原虫に感染されたヒト宿主に投与することから成る、マラリア病の治療方法、ならびにマラリア病の予防方法に関する。また、本発明は、抗マラリア薬の製造に抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩を用いる使用に関する。

1996年に発表された WHOの World Health Reportによると、結核およびジフテリアと同様に、マラリアは既に克服されたと考えられていた感染症であるが、しかし、マラリアは流行の兆しが再び見えることから再興感染症（Reemerging Infections)に指定されている。 1995年には世界で 210万人がマラリアで死亡しており、またマラリア原虫の感染者は 2億 7千万人に達すると言われている。マラリア病の発生地域は、熱帯地方のみならず、地球温暖化によって、これまで希にしか確認されていなかった温帯地域にも拡大しつつある。近い将来、日本の本州でマラリアの流行も懸念されている。

ヒ卜に感染するマラリア原虫（malarial parasites) には、胞子虫類に属する熱帯熱マラリァ原虫 Pl smodium fal ciparum；三日熱マラリァ原虫 Plasmodium vivax；四日熱マラリァ原虫 Plasmodium malailae.；および卵形マラリァ原虫 Plasmodium ovaleがある _n さらに、サルに感染するマラリア原虫と、ネズミに感染するマラリア原虫もある。

これらのマラリァ原虫は各種の抗マラリァ薬に対し耐性を獲得し、撲滅が困難なものになっている。このような状況下において、マラリア病の撲滅に向けてヮクチンの開発、媒介する蚊の生態生理の解明、マラリア原虫の生理機構の解明、マラリア原虫に対する人の免疫応答の解析、マラリアの病理病態解析、新規な抗マラリア薬の開発など、あらゆる方面から研究がなされている。特に、マラリアを根絶するのに有効である新規抗マラリア薬の開発が渴望されている。

マラリアの治療に現在使用されている薬剤としては、キニーネ、クロ口キン、ビリメ夕ミン、メフロキン、アルテミシニン等が知られているが、それら既知の抗マラリア薬は、その効果の信頼性、人に対する毒性、副作用の点から見ると、また耐性マラリァ原虫の発生などから見ると、必ずしも満足できるマラリァ治療薬ではない。

また、ポリエーテル系抗生物質であるモネンシン、ニゲリシン〔Life Sci. vol. 59(20) 309〜315 頁（1996)〕およびサリノマイシン Zentralbl. Bakteriol. , Mikrobiol. Hyg. , Ser A 256(3), 305〜313 頁（1984)〕は、微生物の生産する抗マラリア活性を示す抗生物質として知られている。しかしながら、モネンシン、ニゲリシンおよびサリノマイシンは、いずれも経口投与で急性毒性が高く、さらにそれらの抗マラリア効果も安定せず且つ低いため、現在に至るまで実用されていない。

さらに、抗生物質 S F 2 4 8 7物質は抗菌活性と抗ィンフルェンザウィルス活性をもち、日本特許第 1725905号 (特公平 4-13353号公報)に記載されている既知のポリエ一テル系抗生物質である。抗生物質 S F 2 4 8 7物質およびそのナトリゥム塩、カリウム塩、 Ag塩は、「The Journal of Antibioticsj vol. XLI II、 No. 3、 259~266頁（1990年 3月）にも、それの化学構造式および製造法と共に記載されている。日の^ ヽ

抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、その構造中に、酸性基としてテトロン酸部分を持つものであり、この点で酸性基としてカルボン酸を持つ上記のモネンシン、二ゲリシンおよびサリノマイシンとは化学構造が顕著に相違する。抗ウィルス活性および抗菌活性を有する抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、ポリエーテル系抗生物質の型の従来知られた抗マラリア薬とは異なる薬理機序を有すると本発明者は推察した。従って、本発明者らは、試験管内で培養されてヒト赤血球に感染した熱帯熱マラリァ原虫 Eksmodil falciparumに杭牛物暂 S F 2 4 8 7物質ナトリゥム塩を作用させる試験を行って、これにより、このマラリア原虫の増殖を阻害する活性を抗生物質 S F 2 4 8 7物質が有することを今回見出すことに成功した。さらに、ネズミマラりァ原由 Plasmodium berghelに感染したネズミに抗牛物暂 S F 2 4 8 7物質ナトリウム塩を腹腔内投与すると、ネズミ体内でネズミ赤血球に感染したネズミマラリア原虫の増殖を抗生物質 S F 2 4 8 7物質ナトリゥム塩が阻害する活性を有することも今回本発明者らは見出した。こうして、本発明者らは、抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩が新しい抗マラリア薬として有用であると期待できることを知見した。これらの知見に基づいて、本発明は完成された。従って、第 1の本発明によると、次式（I )

で表わされる抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また有効成分のための薬学的許容できる固体または液体状の担体を含有することを特徴とする、マラリア疾患の治療または予防用組成物が提供される。

第 1の本発明による組成物に有効成分として含有される既知の抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、融点 250〜252°C (分解）をもつ無色結晶の形の酸性物質である。抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、ァクチノマジユラ sp. SF2487株の培養により製造できる。この抗生物質 S F 2 4 8 7物質の製造法およびァクチノマジユラ sp. SF2487株の菌学的性質は特公平 4-13353号明細書および前記の「The Journal of Antibioticsj Vol . XLI I I、 No.3, 259〜266頁（1990年 3月）に詳しく記載される。抗生物質 S F 2 4 8 7物質を生産する菌であるァクチノマジユラ (Ac t i nomadura) sp. SF2487株は、日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番地 1中央第 6に在る独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにブダぺスト条約の規約下に 2001年 3月 2日に移管寄託され、 FERM BP-7474の受託番号で同研究所に寄託されている。なお、 1986年 1 1月 29日の原寄託日に寄託されたァクチノマジユラ sp. SF2487株は、 FERM P- 9063の原寄託番号を有したものである。抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、酸性物質であり、その塩には、製薬学的に許容できる各種金属との塩、例えばアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩およびアンモニゥム塩、ならびに有機塩基、例えばトリアルキルァミンとの塩（第 4級アンモニゥム塩）がある。ちなみに、抗生物質 S F 2 4 8 7物質は、米国特許第 4876273号明細書（1989年 10月 24日発行）に示される抗生物質 A80577と同じ物質である。

第 1の本発明によるマラリァ疾患の治療または予防用組成物では、有効成分としての抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩は、担体と混合されて調剤の形に製剤できる。抗生物質 S F 2 4 8 7物質ナトリウム塩は、クロ口ホルム、酢酸ェチル、ジメチルスルホキシドに可溶性であり、エタノールに僅溶性であり、水にほとんど不溶性である。本組成物に配合できる担体は、製剤学的に許容される液体状の担体、例えばグリセリン、オリ一ブ油、水、生理食塩水、エタノール、含水エタノールなど、あるいは固体担体、例えば乳糖、タルク、ぺクチン、スターチ、結晶セルロースなどであることができる。配合される担体の種類および組成は、有効成分の投与経路や投与方法によって適宜選択する。

第 1の本発明による組成物は、有効成分が固体担体と混合された場合に錠剤または散剤またはカプセル剤の形で製剤できる。錠剤に製剤する時には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースのような結合剤、ステアリン酸 Mgのような滑沢剤を配合できる。また、適当な液体担体に溶解または懸濁された場合には注射剤の形で製剤できる。抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩は、経口的にも、あるいは例えば静脈内、皮下内、直腸内あるいは腹腔内注射により非経口的にも投与できる。経口または非経口投与用の製剤に含まれる抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩の割合は、組成物の重量について例えば 0. 01〜90 %、好ましくは 0. 1〜70 %の範囲にあることができ、製剤中の残余の成分は担体および補助剤である。

S F 2 4 8 7物質の投与量は、種々の状況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに総投与量が一定量を超えないように定められ、通常では成人 1人 1日当たり 0.；！〜 l, 000mg/kg、好ましくは 0.5〜500mg/kgの程度である。具体的な投与量は、投与方法、患者または被処理宿主の状況、例えば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、併用する薬剤、患者またはそのマラリア病の程度に応じて変化することは言うまでもない。また一定の条件のもとにおける S F 2 4 8 7物質の投与の適量と投与回数は、上記指針をもとに専門医による予備的な適量決定試験によつて決定することができる。

さらに、第 2の本発明においては、マラリア原虫に感染されてマラリアの病気症状を有するヒト宿主に、次式（I )

で表される抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を、宿主内の赤血球にいるマラリァ原虫の増殖を阻止するのに十分な量で経口的または非経口的に投与することから成る、マラリア疾患の治療方法が提供される。第 2の本発明によるマラリア疾患治療方法において、抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはそのナトリゥム塩または力リゥム塩を、ヒト宿主に 0.1〜1000mg/kgの投与量、好ましくは 0.5〜500mg/kgの投与量で経口的にあるいは静脈内、皮下内または直腸内に投与することが好ましい。

さらに、第 3の本発明において、マラリア原虫に感染されたがマラリアの病気症状を未だ示していないヒト宿主に、次式（I )

で表される抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を、宿主内でのマラリァ原虫の増殖を阻止するのに十分な量で経口的または非経口的に投与することから成る、マラリア疾患の予防方法が提供される。

また第 3の本発明によるマラリア疾患の予防方法においては、抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはそのナトリウム塩または力リゥム塩を、ヒト宿主に 0.；！〜 1000mg/kgの投与量、好ましくは 0.5〜500mg/kgの投与量で経口的に、あるいは静脈内、皮下内または直腸内に投与することが好ましい。

さらにまた、第 4の本発明においては、抗マラリァ薬の製造のために、次式（ I )

で表わされる抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を用いる使用が提供される。抗マラリア薬の製造に式（I ) の抗生物質 S F 2 4 8 7 物質のナトリゥム塩を用いる使用が好ましい。発明を荬施するめの晶自の形熊

次の第 1の本発明による組成物の製剤の例を次の実施例 1〜 2で示す c

卖施例 1 讓下記の原料成分を適当な割合で混合して、その混合物を常法の打錠法で成形した。 1錠あたり 280mgの重さの錠剤を得た。錠剤の 1錠あたりの組成は、下記のとおりのものとした。

S F 2 4 8 7物質 Na塩（有効成分） lOOmg ヒドロキシプロピルメチルセルロース（結合剤） 6mg 乳糖（賦形剤） 120mg クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤） 50mg

—ステアリン酸マグネシウム (滑沢剤） 4mg _ 合計 280mg 赛施例 2 腿

下記の原料成分を適当な割合で混合して、その混合物を打錠法で成形した。 1 錠あたり 300mgの重さの錠剤を得た。錠剤の 1錠あたりの組成は、下記のとおりのものとした。

S F 2 4 8 7物質 Na塩（有効成分） lOOmg ヒドロキシプロピルセルロースタイプ L (結合剤） 5mg トウモロコシデンプン（賦形剤） 60mg 結晶セルロース（賦形剤） 80mg カルボキシメチルスターチナトリウム（崩壊剤） 50mg ーステアリン酸マグネシゥム (滑沢剤） 5mg _ 合計 300mg 次に、本発明で有効成分として用いる抗生物質 S F 2 4 8 7物質が抗マラリァ活性を示すことを試験例 1〜 2で例証する。

MMM 3 マラリァ原虫阻害活性の in vitro試験

本試験では、抗生物質 S F 2 4 8 7物質（ナトリゥム塩）および供試の比較化合物（キニーネ、クロ口キン、ピリメタミン、メフロキン等）の各々のマラリア原虫阻害活性の測定試験、および哺乳動物の培養細胞における供試の各化合物の細胞毒性の測定試験を、平行して実施した。さらに、供試の各化合物のマラリア原虫阻害活性と細胞毒性との比から、それら供試の各化合物が抗マラリァ薬として有用性をもっかを判定した。 1 . 熱帯熱マラリア原虫の培養物の調製

本試験には、熱帯熱マラリァ原虫 Plasmodium falciparumの FCR-3株 (ATCC 30932)と Honduras- 1株 (ATCC30950)との 2種類を被検マラリア原虫として用いて培養した。マラリア原虫の培養用の培地は、濾過滅菌した PRMI 1640培地を、 pH を 7.4に調整後、赤血球を含む人血清を 10% (重量）の濃度となるように添カロして調製されたものである。培地のへマトクリット値（赤血球浮遊液中に占める赤血球のの割合）が、 5%になるように調整してから、その培地を 24穴培養プレートの各ゥエルに入れた。各ゥエル中の培地に、熱帯熱マラリア原虫を接種した。各ゥエル毎に、培地内でマラリア原虫による初期の赤血球の感染率は培養開始時で 0.1%に調整した。その後に赤血球と共にマラリア原虫の培養を行った。この培養は、酸素 5.0%、炭酸ガス 5.0%、窒素 90%よりなる雰囲気下で、 36.5°C の温度で行った。

各ゥエル内の培地は毎日交換し、マラリア原虫による赤血球の感染率が 4%になった時期に、別の培養プレートへマラリア原虫の植継ぎを行った。このようにして、熱帯熱マラリア原虫の培養物を調製した。

なお、前記したマラリア原虫による赤血球の感染率は、各ゥエルから取出したサンプルに含まれた赤血球の薄層塗末標本を作成し、ギムザ染色或いは

Diff-Qick染色を行った後に、顕微鏡（油浸、 l，000 x ) 下で、マラリア原虫で感染された赤血球の個数を計測して、そして下記の計算式で算出された。

マラリア原虫に感染した

マラリア原虫による ― 亦血球の数 _{x 1 m}

赤血球の感染率 (％)一総赤血球数 ¹⁰⁰ 前記で調製されたマラリァ原虫培養物から、マラリァ原虫感染赤血球を遠心で集め、集めた赤血球を血清を含む PRMI 1640培地で洗浄した後、さらにマラリア原虫非感染赤血球を加えた。これにより、マラリァ原虫による初期感染率を 0.3% に調整された赤血球を含むマラリア原虫培養液を用意した。この時の培養液のへマトクリツト値は 3%である。

他方、実験に用いる供試化合物は滅菌水、ジメチルホルムアミド（DMF)、あるいはジメチルスルホキシド（DMS0)に溶解した溶液としてあらかじめ調製した。 2 . マラリァ原虫の増殖を阻害する供試化合物の活性の測定試験

(i ) 24穴培養プレートの各ゥエルに、前記したマラリア原虫培養用の培地を入れておき、次に処理区では、該培地を収容した各ゥエルに、前記のように調製された供試化合物の溶液を 5〜10 1ずつ加えた。培養プレー卜の各ゥエル内に入れた培地に添加ざれた供試化合物の濃度は、種々の値に調整された。試験は、 duplicateあるいは triplicateで行った。他方、対照区（無処理）のゥエルでは、供試化合物を加えずに、滅菌水、 D F、あるいは DMS0を 10 lずつゥエルに加えた。

次に、前記のとおりあらかじめ用意しておいた前記の熱帯熱マラリァ原虫培養液（赤血球の初期感染率 0.3%であるもの）を各ゥエルに 990〜995 1ずつピべットで加えた。静かにピペッティングを行って、各ゥエル内で、培地中に一様にマラリァ原虫感染赤血球および非感染赤血球を懸濁させた。

(ii ) 上記のようにして熱帯熱マラリア原虫培養液を添加されて且つ供試化合物を添加された、または添加されてない培地を収容する各ゥエル（処理区のゥェル、および無処理区のゥエル）をもつ 24穴培養プレートを、酸素 5.0%、炭酸ガス 5.0%、窒素 90%よりなる雰囲気下でインキュぺ一夕一に入れて、 36.5°Cで 72 時間マラリア原虫を培養した。その後、処理区および対照区（無処理）のそれぞれのゥエルから、その中の培養物のサンプルを取出して薄層塗末標本を作成した。これら作成された標本中の赤血球を染色した後、顕微鏡下でマラリア原虫感染赤血球を観察して計数した。 S F 2 4 8 7物質（Na塩）または比較の供試化合物を加えた処理区における赤血球のマラリァ原虫感染率、ならびに対照区 (無処理、コントロール）における赤血球のマラリァ原虫感染率を前出の計算式により算出する。

上記のようにして算出されたマラリア原虫による赤血球の感染率から、下記の計算式によって定義されるマラリア原虫増殖率を算出する。 , 、 (b - a)

マラリア原虫増殖率 (％) = X 100

(c- a)

マラリア原虫増殖率（％) を算定するのに用いる上記の計算式において、 aはマラリァ原虫培養試験の開始時点での、すなわちマラリァ原虫培養液を各ゥエル中の培地に添カ卩した時点での培地内のマラリア原虫による赤血球感染率（％) (すなわち接種したマラリア原虫培養液の初期感染率 0.3%と同じ）を意味し、また bは添加された供試化合物を含む培地を有する処理区のゥエルで 72 時間マラリァ原虫の培養を供試ィ匕合物の存在下に行った後におけるマラリア原虫による赤血球感染率（％) を意味し、また cは溶媒のみを添加されたが供試化合物を添加されなかった培地を有する対照区（無処理）のゥエルで 72時間マラリァ原虫の培養と増殖を供試ィ匕合物の非存在下で行った後におけるマラリァ原虫による赤血球感染率（％) を意味する。従って、（c-a)の値は、供試化合物の非存在下で培養されたマラリア原虫の増殖の程度を示し、また (b-a)の値は供試化合物の存在下で培養されたマラリァ原虫の増殖の程度を示す。

上記の試験において本発明により用いた抗生物質 S F 2 4 8 7物質（Na塩）と、比較の供試化合物（従来の抗マラリア薬）の一例としてのクロ口キンとについてマラリア原虫増殖率（％) の測定結果を、次の表 1に示す。

培地に添加された供試マラリア原虫増殖率（％)

化合物の濃度（モル） SF2487物質（Na塩) (本発明）クロ口キン (比較化合物)

1 X 10"¹⁰ 100

3 10"'° 100

7 Χ 10·¹⁰ 85

1 X ⁹ 60 100

3 X 10 40 100

7 X 10'⁹ 25 72

1 X 10 ⁸ 10 56

3 X 10"⁸ 5 45

7 10^-8 0 35

1 10"⁷ 0 5

1 X 1 CT⁶ 0 表 1の結果から、供試化合物の非存在下でマラリア原虫の培養を行った場合の対照区（無処理）について得られたマラリア原虫の増殖率を 100%とみなした上での、対照区に比べてマラリァ原虫の増殖を 50%阻害して処理区においてマラリァ原虫増殖率を 50 %にまで低下できる S F 2 4 8 7物質 Na塩の濃度 ( 50 %阻害濃度、 EC₅₀)は、 2 Χ.10·⁹モルであることが認められる。

3 .マウス乳癌由来 FM3A細胞の F28-7株細胞に対する供試化合物の細胞毒性の測定

マウス乳癌由来の FM3A細胞の野生株であるマウス乳癌 F28-7株の細胞を供試細胞として用いた。 F28- 7株細胞の培養用の培地は、 ES培地に非働化した胎児牛血清を 2%となるように添カロして調製されたものである。この培地中で C0₂ 5%を含む空気の下で 37°Cで供試の F28-7株細胞を培養した。この条件下でのマウス乳癌由来の F28- 7株細胞の倍加時間は約 12時間であつた。

前培養を行った後に、対数増殖期に入った供試の F28-7株細胞を、 5 x l0⁴ cells/mlの濃度になるように細胞培養液を培地で希釈した。これによつて、培養された F28-7株細胞の浮遊液を用意した。

供試化合物の溶液としては、マラリァ原虫の増殖阻害活性の測定試験にあたり調製した供試化合物溶液と同じものを用いる。

24穴培養プレートの各ゥエルに、前記した F28- 7株細胞の培養用の培地を入れて置いた。次に、処理区では、その 24穴培養プレートの各ゥエル内の培地に供試化合物溶液を 5〜10 1ずつ加えて、各ゥエル内の培地に添加された供試化合物の最終濃度が 1 X 10一⁴〜 1 X 10_ ⁶Mとなるように調整した。

試験は duplicateあるいは triplicateで行った。他方、対照区（無処理、コントロール）のゥエルには、滅菌水、 DMF、あるいは DMS0のみを 10 1加えたが供試化合物を加えなかった。次に、上記で用意しておいた F28-7株細胞浮遊液を 990 〜995 1ずつ各ゥエルにピぺッ卜で加え、静かにビベッティングを行って、各ゥエル内で培地に一様に細胞を懸濁させた。その後、前記の培養条件下で F28- 7株細胞を 48時間培養した。その後、処理区および対照区（無処理）のそれぞれのゥエルについて F28- 7 株細胞の細胞数を cell counter(CC-108, Toa Medical Electronics)で計数した。 F28-7株細胞の増殖に対する供試化合物の阻害活性は、添加された供試化合物の存在下で培養をされたゥエル内の細胞培養液における F28-7株細胞の数と、供試化合物の非存在下で培養をされた対照区との F28- 7株細胞の数から、次の計算式で定義される F28-7株細胞の増殖率（％) から判定された。このように判定された細胞増殖率（％) より供試化合物の細胞毒性を評価する。

F28- 7細胞の増殖率（％) = (^ニ X 100 但し、上記の計算式において、 Aは培養開始時点での処理区および対照区の各ゥエルにおける F28-7株細胞の個数を示し、 Bは供試化合物を添加されずに培養を行った対照区（無処理）のゥエルにおける 48時間培養後の F28- 7株細胞の個数を示し、また Cは添加された供試ィ匕合物の存在下に培養を行った処理区のゥエルにおける 48時間培養後の F28-7株細胞の個数を示す。従って、（B- A)の値は、供試化合物の非存在下で培養された F28-7株細胞の増殖の程度を表し、また（C-A) の値は供試化合物の存在下で培養された F28- 7株細胞の増殖の程度を表す。このように測定された細胞増殖率（％)を、供試の S F 2 4 8 7物質とクロ口キン（比較）の場合について、次の表 2に示す。

2.

表 2の結果から、供試化合物の非存在下で F28- 7株細胞の培養を行った場合の対照区（無処理）について得られた F28-7株細胞の増殖率を 100%とみなした上での、対照区に比べて F28-7株細胞の増殖を 50%阻害して処理区において F28-7 株細胞の増殖率を 50%にまで低下できる S F 2 4 8 7物質 Na塩の濃度 ( 50%阻害濃度、 EC₅₀ )は、 1. 6 X 10—⁶モルであることが認められる。

4 . 供試化合物の抗マラリァ医薬として実用上の利用可能性の判定

一般的には、一つの化合物がマラリア原虫の増殖に高い阻害活性を示す場合にも、その化合物がヒト細胞（例えば、ヒト細胞の一例である前記の乳癌細胞）に対して高い細胞毒性を有するならば、その化合物を抗マラリア医薬として実際にヒトに投与することが制限されるか、もしくはその化合物の投与量が低く制限される必要があって、従ってその化合物の抗マラリァ医薬として実用上の利用可能性が低いことになる。

本試験例で用いた供試化合物の抗マラリァ医薬として実用上の利用可能性がマラリア原虫阻害活性をヒト細胞に対する細胞毒性の間のバランスについて下記の計算式で算定された供試化合物の選択毒性値を参照して判定された。

まず、マラリア原虫の培養用培地に供試化合物を添加していないでマラリア原虫を培養した場合の対照区（無処理、コントロール）におけるマラリア原虫感染率を測定した。その測定値を 100%とみなした基準にて、マラリア原虫の培養用培地への供試化合物の添加をして供試化合物の存在下にマラリァ原虫を培養した時に、対照区におけるマラリア原虫の増殖率を 50%阻害できる供試化合物濃度 (モル濃度で表示する）を算定し、 50%阻害できた濃度を、マラリア原虫に対する供試化合物の EC_5Q値であるとする。次に、 F28-7株細胞の培地に供試化合物を添加していないで該細胞を培養した場合の対照区（コントロール）における F28-7 株細胞の増殖率を 100%とみなした基準にて、培地への供試化合物の添加を供試化合物の存在下に F28-7株細胞を培養した時に、対照区における F28-7株細胞の増殖を 50%阻害できる供試化合物濃度 (モル濃度で表示する）を算定し、その 50% 阻害できた濃度を F28- 7株細胞に対する供試化合物の EC_5fl値であるとする。このように判定された 2つの EC_M値を用いて、下記の計算式より定義される供試化合物の選択毒性値を判定する。 F28- 7株細胞に対する供試化合物の EC₅₀値

選択毒性値：

熱帯熱マラリァ原虫に対する供試化合物の EC₅₀値

以下の表 3に、既存の抗マラリア剤および抗生物質 S F 2 4 8 7物質について測定された EC_5fl値および判定された選択毒性値の結果を示す。

表 3

試.験例 2 抗マラリァ原虫活性の in vivo試験

1 . 使用マウスおよびマラリア原虫

被検マウスとしては、 ICR系の体重 26〜31g、 5週令の雄を 1群 5匹で用いた。感染実験にはネズミマラリア原虫 (Plasmodium berghei ) NK65株を用いた。本マラリア原虫は、マウスに感染すると、急激に増殖し、感染マウスをことごとく死亡させる猛毒株として知られている。

2 . 試験方法

ネズミマラリア原虫（Plasmodium berghei ) NK65株に感染した ICRマウスの心臓から採血し、採血された血液試料での赤血球に対するネズミマラリア原虫の感染率を試験例 1に示した計算式に準じて測定および算定した。次いで採血した血液試料の赤血球浮遊液の 1 ml あたり 1 X 10⁶匹のマラリア原虫となるように血清で希釈して調整し、そのマラリア原虫に感染された赤血球浮遊液を非感染マウスの尾静脈に 0.2ml注射してマラリァ原虫を接種した。

このようにマラリア原虫で感染された赤血球を含む血球浮遊液の静脈注射により行われたマラリア原虫接種の時を 0日として、接種からそれぞれ 2時間後と 1 日後に、 DMSO( lOO^ l )に溶解させた供試ィ匕合物を種々の投与量で腹腔内に投与した。 4日目に、マウス尾部静脈より血液を採取し、血液の塗抹標本を作成し、顕微鏡下で赤血球を観察した。無処理区と処理区とにおけるネズミの血液のそれぞれのマラリア原虫による赤血球感染率を測定した。これらの試験結果から、 5 mg/kgの投与量で静注投与された抗生物質 S F 2 4 8 7物質 (Na塩)は、 80%のマラリア原虫増殖阻止率を与えることが認められた。ここで言うマラリア原虫増殖阻止率（％) とは次の計算式により算定されたものである。マラリア原虫増殖阻止率（％) = (l -—) X 100

\ A ノ

但し、 Aは無処理区におけるマラリア原虫による赤血球感染率（％) を示し、また Bは処理区におけるマラリア原虫による赤血球感染率（％) を示す。

議 3 急性毒性

ICR系マウス（5週令、 1群 3匹）に、 S F 2 4 8 7物質 (Na塩）を、 10¾DMS0を含む生理食塩水にとかした溶液として、種々な投与量で S F 2 4 8 7物質を腹腔内投与した。投与後 14日目には、 25mg/kgの S F 2 4 8 7物質 (Na塩)の投与群では 3匹中 1匹が死亡し、また 12.5mg/kgの S F 2 4 8 7物質 (Na塩)投与群では、 3匹の全例が生存した。腹腔内投与試験では S F 2 4 8 7物質 (Na塩)の LD_M値は、 25mg/kgまたはそれ以上であると判定された。産業上の利用可能性

本発明によれば、抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその塩はマラリア原虫の増殖を阻害する活性を有することが認められ、そしてマラリァ疾患の治療または予防薬として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 次式（ I )

で表される抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また有効成分のための薬学的許容できる固体または液体状の担体を含有することを特徴とする、マラリァ疾患の予防または治療用組成物。

2 . マラリア原虫に感染されてマラリアの病気症状を有するヒト宿主に、次式 ( I )

で表される抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を、宿主内の赤血球にいるマラリア原虫の増殖を阻止するのに十分な量で経口的または非経口的に投与することから成る、マラリア疾患の治療方法。

3 . 抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはそのナトリゥム塩または力リゥム塩を、ヒト宿主に 0. l〜1000mg/kgの投与量、好ましくは 0.5〜500mg/kgの投与量で、経口的にあるいは静脈内、皮下内または直腸内に投与する、請求の範囲 1に記載の方法。

4 . マラリア原虫に感染されたがマラリアの病気症状を未だ示していないヒト宿主に、次式（ I )

で表される抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を、宿主内でのマラリァ原虫の増殖を阻止するのに十分な量で経口的または非絰ロ的に投与することから成る、マラリア疾患の予防方法。

5 . 抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはそのナトリゥム塩または力リゥム塩を、ヒト宿主に 0. l〜1000mg/kgの投与量、好ましくは 0.5〜500mg/kgの投与量で経口的に、あるいは静脈内、皮下内または直腸内に投与する、請求の範囲 4に記載の方法。

6 . 抗マラリァ薬の製造のために、次式（ I )

で表わされる抗生物質 S F 2 4 8 7物質またはその製薬学的に許容できる塩を用いる使用。

7 . 抗マラリア薬の製造のために式（I ) の抗生物質 S F 2 4 8 7物質のナトリウム塩を用いる、請求の範囲 6に記載の使用。