WO2000012501A1 - Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität - Google Patents

Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität Download PDF

Info

Publication number
WO2000012501A1
WO2000012501A1 PCT/EP1999/006139 EP9906139W WO0012501A1 WO 2000012501 A1 WO2000012501 A1 WO 2000012501A1 EP 9906139 W EP9906139 W EP 9906139W WO 0012501 A1 WO0012501 A1 WO 0012501A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compounds
substituted
alkoxy
alkyl
radical
Prior art date
Application number
PCT/EP1999/006139
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Dieter Flockerzi
Beate Gutterer
Hermann Amschler
Wolf-Rüdiger Ulrich
Thomas Martin
Thomas Bär
Armin Hatzelmann
Hildegard Boss
Rolf Beume
Daniela Bundschuh
Hans-Peter Kley
Original Assignee
Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh filed Critical Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh
Priority to PT99968237T priority Critical patent/PT1109810E/pt
Priority to CA002342245A priority patent/CA2342245A1/en
Priority to SI9930644T priority patent/SI1109810T1/xx
Priority to US09/744,974 priority patent/US6436952B1/en
Priority to JP2000567529A priority patent/JP2002523505A/ja
Priority to DE59909760T priority patent/DE59909760D1/de
Priority to AT99968237T priority patent/ATE269331T1/de
Priority to AU59701/99A priority patent/AU5970199A/en
Priority to EP99968237A priority patent/EP1109810B1/de
Publication of WO2000012501A1 publication Critical patent/WO2000012501A1/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the invention relates to new benzonaphthyridine N-oxides which are used in the pharmaceutical industry for the manufacture of medicaments.
  • the invention thus relates to compounds of the formula I
  • R1 is 1-4C-alkyl
  • R2 is hydroxy, 1-4C-alkoxy, 3-7C-cycloalkoxy, 3-7C-cycloalkylmethoxy or completely or predominantly fluorine-substituted 1-4C-alkoxy
  • R3 is hydroxy, 1-4C-alkoxy, 3-7C-cycloalkoxy, 3-7C-cycloalkylmethoxy or wholly or predominantly fluorine-substituted 1-4C-alkoxy, or wherein
  • R2 and R3 together represent a 1-2C-alkylenedioxy group
  • R4 represents a phenyl radical substituted by R5, where
  • R5 represents a tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6, where
  • R6 is hydrogen, 1-10C-alkyl, 3-7C-cycloalkyl, 3-7C-cycloalkylmethyl or Ar-1-4C-alkyl, where
  • Ar represents a phenyl radical which is unsubstituted or substituted by R7 and / or R8, and
  • R7 and R8 independently of one another denote 1-4C-alkyl or 1-4C-alkoxy, as well as the salts of these compounds.
  • 1-4C-alkyl represents a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms. Examples include the butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, propyl, isopropyl and preferably the ethyl and methyl radical.
  • 1-4C-alkoxy represents radicals which, in addition to the oxygen atom, contain a straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 4 carbon atoms. Examples include the butoxy, iso-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, propoxy, isopropoxy and preferably the ethoxy and methoxy radicals.
  • 3-7C-Cycloalkoxy stands for cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy and cycloheptyloxy, of which cyclopropyloxy, cyclobutyloxy and cyclopentyloxy are preferred.
  • 3-7C-Cycloalkylmethoxy stands for Cyclopropylmethoxy, Cyclobutylmethoxy, Cyclopentylmethoxy, Cyclohexylmethoxy and Cycloheptylmethoxy, of which Cyclopropylmethoxy, Cyclobutylmethoxy and Cyclopentylmethoxy are preferential.
  • Examples of completely or predominantly fluorine-substituted 1-4C-alkoxy include 2,2,3,3,3-pentafluoropropoxy, perfluoroethoxy, 1,2,2-trifluoroethoxy, in particular 1, 1, 2, Called 2-tetrafluoroethoxy, the trifluoromethoxy, the 2,2,2-trifluoroethoxy and preferably the difluoromethoxy.
  • 1-2C-Alkylenedioxy stands for example for the methylenedioxy- (-0-CH 2 -0-) and the ethylenedioxy radical (-0-CH 2 -CH 2 -0-).
  • 1-10C-alkyl stands for straight-chain or branched alkyl radicals with 1 to 10 carbon atoms.
  • Examples include decyl, nonyl, octyl, heptyl, isoheptyl (5-methylhexyl), hexyl, isohexyl (4-methylpentyl), neohexyl (3,3-dimethylbutyl), Pentyl, isopentyl (3-methylbutyl), neopentyl (2,2-dimethylpropyl), butyl, iso-butyl, sec-butyl, tert-butyl, propyl, isopropyl , Ethyl and the methyl radical.
  • 3-7C-Cycloalkyl stands for the cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl radical.
  • the 5-7C-cycloalkyl radicals cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl are preferred.
  • 3-7C-Cycloalkylmethyl stands for a methyl radical which is substituted by one of the above 3-7C-Cycloalkylreste.
  • Examples include the cyclopentylmethyl and cyclohexylmethyl radicals.
  • Ar-1-4C-alkyl represents one of the above-mentioned 1-4C-alkyl radicals which is substituted by one of the aryl radicals defined above. Examples include the p-methoxybenzyl, phenethyl and benzyl radicals.
  • Suitable salts for compounds of the formula I — depending on substitution — are all acid addition salts or all salts with bases. Particular mention should be made of the pharmacologically acceptable salts of the inorganic and organic acids and bases commonly used in galenics. Suitable as such are on the one hand water-soluble and water-insoluble acid addition salts with acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, nitric acid, sulfuric acid, acetic acid, citric acid, D-gluconic acid, benzoic acid, 2- (4-hydroxybenzoyi) benzoic acid, butyric acid, sulfosalicylic acid, maleic acid , Lauric acid, malic acid, fumaric acid, succinic acid, oxalic acid, tartaric acid, embonic acid, stearic acid, toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid or 3-hydroxy-2-naphthoic acid, the acids in the salt production - depending on whether
  • salts with bases can also be used.
  • alkali lithium, sodium, potassium
  • calcium, aluminum, magnesium, titanium, ammonium, meglumine or guanidinium salts may be mentioned, the bases also being used here in salt production equimolar or a different ratio.
  • Pharmacologically incompatible salts which may initially be obtained as process products in the preparation of the compounds according to the invention on an industrial scale, are converted into pharmacologically acceptable salts by processes known to the person skilled in the art.
  • the compounds according to the invention and their salts if they are isolated, for example, in crystalline form, can contain different amounts of solvents.
  • the invention therefore also includes all solvates and in particular all hydrates of the compounds of the formula I, and also all solvates and in particular all hydrates of the salts of the compounds of the formula I.
  • R1 means 1-2C-alkyl
  • Fluorine-substituted 1-4C-alkoxy means R3 1-4C-alkoxy, 3-7C-cycloalkoxy, 3-7C-cycloalkylmethoxy or entirely or predominantly by
  • R4 represents a phenyl radical substituted by R5, where R5 represents a tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6, where R6 is hydrogen, 1-7C-alkyl, 3-7C-cycloalkyl, 3-7C-cycloalkylmethyl or Ar-1-4C-alkyl, where Ar is an unsubstituted or substituted by R7 and / or R8 phenyl radical, and R7 and R8 independently of one another 1- 4C-alkyl or 1-4C-alkoxy mean, as well as the salts of these compounds.
  • R1 means methyl
  • Fluorine substituted 1-2C-alkoxy means, R3 1-4C-alkoxy, 3-7C-cycloalkoxy, 3-7C-cycloalkylmethoxy or entirely or predominantly by
  • Fluorine-substituted 1-2C-alkoxy means R4 is a phenyl radical substituted by R5, where R5 is a tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6, where R6 is hydrogen, 1-7C-alkyl, 5-7C-cycloalkyl, 3- 7C-cycloalkylmethyl or Ar-1-2C-alkyl, where Ar is an unsubstituted or substituted by R7 phenyl radical, and R7 is 1 -2C-alkyl or 1 -2C-alkoxy, and the salts of these compounds.
  • Preferred compounds of formula I are those in which
  • R1 means methyl
  • R2 means 1-4C-alkoxy
  • R3 means 1-4C-alkoxy
  • R4 represents a phenyl radical substituted by R5, where
  • R5 represents a tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6, where
  • R6 is hydrogen, 1-7C-alkyl, cyclohexylmethyl or 4-methoxybenzyl, and the salts of these compounds.
  • R1 means methyl
  • R2 ethoxy means
  • R3 means methoxy or ethoxy
  • R4 represents a phenyl radical substituted by R5, where
  • R5 represents a tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6, where
  • R6 is 1-4C-alkyl, and the salts of these compounds.
  • the compounds of the formula I are chiral compounds with chiral centers in positions 2, 4a and 10b.
  • the numbering of the compounds of formula I is shown in formula la.
  • the invention relates to all eight possible enantiomers in any mixing ratio to one another.
  • Preferred are the compounds of formula I in which the hydrogen atoms in positions 4a and 10b are in the cis position relative to one another.
  • particular preference is given to those compounds of the formula I which have the same absolute configuration in positions 4a and 10b as the compound (-) - cis-4-amino-3- (3-ethoxy-4-methoxyphenyl) which can be used as the starting product.
  • the tetrazol-5-yl radical R5 of the compounds of the formula I can be attached to the phenyl radical R4 both in the ortho, meta and in the para position to the benzonaphthyridine ring.
  • Preferred compounds of the formula I are those in which the tetrazol-5-yl radical R5 is bonded to the phenyl radical R4 in the meta or para position to the benzonaphthyridine ring.
  • particular preference is given to the compounds of the formula I in which the tetrazol-5-yl radical R5 is bonded in the para position.
  • the invention therefore also relates to the 1 H and 2H-tetrazol-5-yl compounds of the formula I which are substituted by a radical R6 (R6 ⁇ H), both in pure form and in any mixing ratio.
  • R6 substituents R6
  • the invention further relates to a process for the preparation of the compounds of the formula I, in which R1, R2, R3 and R4 have the meanings indicated above, and their salts.
  • the process is characterized in that compounds of the formula II
  • R1, R2, R3 and R4 have the meanings given above, subject to N-oxidation and, if desired, subsequently converting the compounds of the formula I obtained into their salts, or if desired subsequently obtained salts of the compounds of the formula I into the free compounds transferred.
  • the N-oxidation takes place in a manner familiar to the person skilled in the art, e.g. with the help of hydrogen peroxide in methanol or with the help of m-chloroperoxibenzoic acid in dichloromethane at room temperature.
  • the person skilled in the art is familiar with the reaction conditions which are required for carrying out the process in detail on the basis of his specialist knowledge.
  • R4 is a phenyl radical which is substituted by a 1 H- or 2H-tetrazol-5-yl radical R5, for example from the corresponding compounds of the formula II in which R4 represents a phenyl radical substituted by a cyano group, can be prepared by reaction with an alkali metal azide and an ammonium halide (for example ammonium chloride). Corresponding reactions are e.g. in J. Med. Chem. 1993, 36, 3246.
  • the compounds of the formula II obtained in this way can be converted into further compounds of the formula II by an alkylation reaction, the hydrogen on the tetrazol-5-yl radical being replaced by one of the radicals mentioned for R6, with the exception of hydrogen.
  • the alkylation reactions are advantageously carried out analogously to the methods known to the person skilled in the art, e.g. by reaction of the 1 H or 2H tetrazole compounds of the formula II with compounds of the formula R6-X in the presence of a base, where R6 has the meanings given above - except hydrogen - and X is a suitable leaving group such as a chlorine, bromine or iodine atom or represents an alkyl sulfate residue.
  • the 1- and 2-substituted tetrazole regioisomer mixtures usually formed in the alkylation are separated by methods known to the person skilled in the art, such as crystallization or chromatography on suitable support materials.
  • An analogous alkylation of tetrazoles and separation of the regioisomers is described, for example, in J. Med. Chem. 1996, 39, 2354.
  • cyclocondensation is carried out in a manner known per se to the person skilled in the art according to Bischler-Napieralski (for example as described in J. Chem. Soc, 1956, 4280-4282) in the presence of a suitable condensing agent, such as, for example, polyphosphoric acid, phosphorus pentachloride, phosphorus trichloride, Phosphorus pentoxide, thionyl chloride or preferably phosphorus oxytrichloride, in a suitable inert solvent, e.g.
  • a chlorinated hydrocarbon such as chloroform
  • a cyclic hydrocarbon such as toluene or xylene
  • another inert solvent such as acetonitrile
  • an excess of condensing agent preferably at elevated temperature, in particular at the boiling point of the solvent or Condensing agent.
  • Enantiomerically pure compounds of the formula II can be separated in a known manner (for example by preparing and separating corresponding diastereoisomeric compounds) or can be prepared by stereoselective synthesis methods. Such separation processes and synthesis methods are described for example in EP 247 971 and in DE 42 17 401.
  • R1, R2 and R3 have the meanings given above
  • R4-CO-Y in which R4 has the meanings indicated above
  • Y is a suitable transition group, preferably represents a chlorine atom, accessible.
  • benzoylation is carried out according to the Einhorn method, the Schotten-Baumann variant or as described in J. Chem. Soc. (C), 1971, 1805-1808.
  • R4-COOH in which R4 has the meanings given above, are either known or can be obtained in a manner known to the person skilled in the art from 2-, 3- or 4-cyanobenzoic acid alkyl esters, e.g. by reaction with alkali azides and an ammonium halide (e.g. ammonium chloride) to give 2-, 3- or 4- (1 H- or 2H-tetrazol-5-yl) benzoic acid alkyl esters which are unsubstituted in the tetrazole part.
  • an ammonium halide e.g. ammonium chloride
  • these intermediates - as described above for the 1 H or 2H tetrazole compounds of the formula II or in the abovementioned literature - can be converted by alkylation with compounds of the formula R6-X in the presence of a base into R4-carboxylic acid alkyl esters in which R4 represents a phenyl radical substituted by R5, R5 represents a 1 H- or 2H-tetrazol-5-yl radical substituted by a radical R6 and R6 is not hydrogen but has one of the other meanings given above for R6.
  • the R4-carboxylic acid alkyl esters are converted into the free carboxylic acids R4-COOH by alkaline or acidic hydrolysis conditions familiar to the person skilled in the art.
  • the substances according to the invention are isolated and purified in a manner known per se, e.g. such that the solvent is distilled off in vacuo and the residue obtained is recrystallized from a suitable solvent or subjected to one of the customary purification methods, such as, for example, column chromatography on a suitable carrier material.
  • Salts are obtained by dissolving the free compound in a suitable solvent (e.g. a ketone such as acetone, methyl ethyl ketone or methyl isobutyl ketone, an ether such as diethyl ether, tetrahydrofuran or dioxane, a chlorinated hydrocarbon such as methylene chloride or chloroform, or a low molecular weight aliphatic Alcohol such as ethanol or isopropanol) which contains the desired acid or base, or to which the desired acid or base is subsequently added will give.
  • a suitable solvent e.g. a ketone such as acetone, methyl ethyl ketone or methyl isobutyl ketone, an ether such as diethyl ether, tetrahydrofuran or dioxane, a chlorinated hydrocarbon such as methylene chloride or chloroform, or a low molecular weight aliphatic Alcohol such as
  • mp stands for melting point, h for hour (s), RT for room temperature, SF for molecular formula, MG for molecular weight, TLC for thin layer chromatography, calc. for calculated, found for found.
  • mp stands for melting point, h for hour (s), RT for room temperature, SF for molecular formula, MG for molecular weight, TLC for thin layer chromatography, calc. for calculated, found for found.
  • the compounds mentioned in the examples and their salts are a preferred subject of the invention.
  • the compounds according to the invention have valuable pharmacological properties which make them commercially usable.
  • selective inhibitors of types 3 and 4 of cyclic nucleotide phosphodiesterase PDE3, PDE4
  • they are suitable on the one hand as bronchial therapeutic agents (for the treatment of airway obstructions due to their dilating and celiac stimulating effect but also due to their respiratory rate and respiratory drive increasing effect) on the other hand for the treatment of diseases of an inflammatory nature, for example the respiratory tract (asthma prophylaxis), the skin, the intestine, the eyes and the joints, which are mediated by mediators such as interferons, members of the tumor necrosis factor family, interleukins, chemokines, colony-stimulating factors, growth factors, lipid mediators (e.g.
  • PAF platelet activating factor
  • bacterial factors e.g. LPS
  • immunoglobulins oxygen radicals and relatives (e.g. nitrogen monoxide NO), biogenic amines (e.g. histamine, serotonin), kinins (e.g. Bradykinin), neurogenic mediators (such as substance P, neurokinin), proteins such as e.g. Granular substances from leukocytes (e.g. cationic proteins from eosinophils) and adherence proteins (e.g. integrins).
  • the compounds of the invention have smooth muscle cell relaxing activity, e.g. in the area of the bronchial system, blood circulation, and the urinary tract. Furthermore, they have cilia frequency-increasing effects, e.g. in the bronchial system.
  • the compounds according to the invention are notable for low toxicity, good human acceptance, good enteral absorption and high bioavailability, a wide therapeutic range, the absence of significant side effects and good water solubility.
  • the compounds according to the invention can be used as therapeutic agents in human and veterinary medicine, for example they can be used for the treatment and prophylaxis of the following diseases: Acute and chronic (in particular inflammatory and allergen-induced) respiratory diseases of various origins (bronchitis, allergic Bronchitis, bronchial asthma, emphysema, COPD); Diseases with restricted ciliary activity or increased demands on ciliary clearance (bronchitis, cystic fibrosis), dermatoses (especially proliferative, inflammatory and allergic types) such as psoriasis (vulgaris), toxic and allergic contact dermatitis, atopic eczema, seborrheic eczema, Are simplex, sunburn, pruritus in the genito-anal region, alopecia areata, hypertrophic scars, discoid lupus erythematosus, follicular and extensive pyoderma
  • the compounds according to the invention can also be used to treat hypertension disorders of various origins, such as pulmonary hypertension and the associated side effects, for the treatment of erectile dysfunction or colic of the kidneys and ureters in connection with kidney stones.
  • cAMP-increasing effect they can also be used for diseases of the heart that can be treated by PDE inhibitors, such as heart failure, and as anti-thrombotic substances that inhibit platelet aggregation.
  • Another object of the invention is a method for the treatment of mammals, including humans, who are suffering from one of the abovementioned diseases.
  • the method is characterized in that the sick mammal is administered a therapeutically effective and pharmacologically acceptable amount of one or more of the compounds according to the invention.
  • the invention further relates to the compounds according to the invention for use in the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the diseases mentioned.
  • the invention also relates to the use of the compounds according to the invention for the production of medicaments which are used for the treatment and / or prophylaxis of the diseases mentioned.
  • the invention furthermore relates to medicaments for the treatment and / or prophylaxis of the diseases mentioned, which contain one or more of the compounds according to the invention.
  • Another object of the invention is a commercial product, consisting of a conventional secondary packaging, a primary packaging containing the drug (for example, an ampoule or a blister) and, if desired, a package insert, the drug showing antagonistic activity against cyclic-nucleotide phosphodiesterases of types 3 and 4 and leads to a weakening of the symptoms of diseases which are associated with cyclic nucleotide phosphodiesterases of types 3 and 4, and on the secondary packaging and / or on the package insert of the commercial product on the suitability of the medicinal product for the prophylaxis or treatment of diseases which are in the Connection with cyclic-nucleotide phosphodiesterases of types 3 and 4 are pointed out, and wherein the medicament contains one or more compounds of the formula I according to the invention.
  • the secondary packaging, the primary packaging containing the medicament and the package insert otherwise correspond to what the person skilled in the art would regard as the standard for medicaments of this type.
  • the substances according to the invention are also suitable for combination with other substances which stimulate cAMP, such as prostaglandins (PGE2, PGI2 or prostacinin) and their derivatives, direct adenylate cyclase stimulators such as forskolin and related substances, or adenylate cyclase indirectly stimulating substances such as catecholamines and adrenergic receptor agonists, in particular beta-mimetics.
  • PGE2 prostaglandins
  • PGI2 or prostacinin prostacinin
  • adenylate cyclase stimulators such as forskolin and related substances
  • adenylate cyclase indirectly stimulating substances such as catecholamines and adrenergic receptor agonists, in particular beta-mimetics.
  • they develop a synergistic, superadditive effect due to their cAMP degradation-inhibiting effect. This comes e.g. when used in combination with PGE2 to treat pulmonary hypertension.
  • the pharmaceuticals are produced by methods known per se and familiar to the person skilled in the art.
  • auxiliaries which are suitable for the desired pharmaceutical formulations on the basis of his specialist knowledge.
  • active substance carriers for example antioxidants, dispersants, emulsifiers, preservatives, solubilizers or permeation promoters can be used.
  • the compounds according to the invention are preferably also administered by inhalation.
  • these are administered either directly as a powder (preferably in micronized form) or by atomizing solutions or suspensions containing them.
  • the compounds according to the invention are used in particular in the form of those medicaments which are suitable for topical application.
  • suitable pharmaceutical formulations include, for example, powders, emulsions, suspensions, sprays, oils, ointments, fatty ointments, creams, pastes, gels or solutions.
  • the pharmaceuticals according to the invention are produced by methods known per se.
  • the active ingredients are dosed in the order of magnitude customary for PDE inhibitors.
  • topical forms of application such as ointments
  • the dose for inhalation is usually between 0.1 and 3 mg per day.
  • the usual dose for systemic therapy is between 0.01 and 10 mg per kilogram and day.
  • Activation of inflammatory cells is of particular importance when studying PDE4 inhibition at the cellular level.
  • An example is the FMLP (N-formyl-methionylleucylphenylalanine) -induced superoxide production of neutrophil granulocytes, which can be measured as luminol-enhanced chemiluminescence.
  • FMLP N-formyl-methionylleucylphenylalanine
  • Substances which inhibit chemiluminescence and the cytokine secretion and the secretion of inflammation-increasing mediators on inflammatory cells are those which inhibit PDE4 or PDE3 and PDE4.
  • the latter isoenzyme of the phosphodiesterase families is particularly represented in granulocytes. Its inhibition leads to an increase in the intracellular cyclic AMP concentration and thus to the inhibition of cellular activation.
  • the PDE4 inhibition by the substances according to the invention is thus a central indicator for the suppression of inflammatory processes.
  • PDE activity was determined according to Thompson et al. (1) with some modifications (2).
  • the test samples contained 40 mM Tris-HCl (pH 7.4), 5 mM MgCl 2 , 0.5 ⁇ M cAMP or cGMP, [ 3 H] cAMP or
  • [ 3 H] cGMP (approx. 50,000 cpm / sample), the PDE isoenzyme-specific additives described in more detail below, the indicated concentrations of inhibitor and an aliquot of the enzyme solution for a total sample volume of 200 ⁇ l.
  • Stock solutions of the compounds to be examined in DMSO were prepared in such concentrations that the DMSO content - to avoid influencing the PDE activity - did not exceed 1% by volume in the test samples. After 5 minutes of pre-incubation at 37 ° C, the reaction was started by adding the substrate (cAMP or cGMP). The samples were incubated for a further 15 min at 37 ° C. The reaction was stopped by adding 50 ⁇ l of 0.2 N HCl.
  • Bovine brain PDE1 (Ca2 + / calmodulin-dependent): The inhibition of this isoenzyme was investigated in the presence of Ca 2+ (1 mM) and calmodulin (100 nM) using cGMP as substrate (3).
  • PDE2 (cGMP-stimulated) from rat hearts was purified chromatographically [Schudt et al. (4)] and in the presence of cGMP (5 ⁇ M) using cAMP as substrate.
  • PDE3 cGMP-inhibited
  • PDE5 cGMP-specific
  • PDE4 cAMP-specific
  • PMNL human polymorphonuclear leukocytes
  • the PDE3 inhibitor motapizon (1 ⁇ M) was used to suppress the PDE3 activity emanating from contaminating platelets.
  • IC 50 values were determined from the concentration-inhibition curves by nonlinear regression using the GraphPad InPlot TM program (GraphPad Software Inc., Philadelphia, USA).
  • Table 1 shows the inhibitory concentrations determined according to point A1 [inhibitory concentrations as -log IC 50 (mol / l)] for compound 1 for various PDE isoenzymes.
  • the number of the connection corresponds to the number of the example in the section end products.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Verbindungen der Formel (I), worin R1, R2, R3 und R4 die in der Beschreibung angegebenen Bedeutungen haben, sind neue wirksame Bronchialtherapeutika.

Description

BENZONAPHTHYRIDIN-N-OXIDE MIT PDE3 UND PDE4 INHIBIERENDER AKTIVITÄT
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft neue Benzonaphthyridin-N-Oxide, die in der pharmazeutischen Industrie zur Herstellung von Medikamenten verwendet werden.
Bekannter technischer Hintergrund
in der DE-OS 21 23 328 und im USP 3,899,494 werden substituierte Benzonaphthyridine beschrieben, die sich durch ausgeprägte Blutplättchenaggregationshemmung auszeichnen. In den internationalen Anmeldungen W091/17991 und WO98/21208 werden 6-Phenylbenzonaphthyridine zur Behandlung entzündlicher Atemwegserkrankungen offenbart.
Beschreibung der Erfindung
Es wurde nun gefunden, daß die nachfolgend näher beschriebenen Verbindungen der Formel I, die sich von den Verbindungen der W091/17991 bzw. WO98/21208 insbesondere durch die Substitution am 6-Phenylring und das Vorhandensein eines N-Oxids in 2-Position unterscheiden, überraschende und besonders vorteilhafte Eigenschaften besitzen.
Gegenstand der Erfindung sind somit Verbindungen der Formel I,
Figure imgf000003_0001
worin
R1 1-4C-Alkyl bedeutet, R2 Hydroxy, 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R3 Hydroxy, 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, oder worin
R2 und R3 gemeinsam eine 1-2C-Alkylendioxygruppe bedeuten,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 Wasserstoff, 1 -10C-Alkyl, 3-7C-Cycloalkyl, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1 -4C-alkyl bedeutet, wobei
Ar einen unsubstituierten oder durch R7 und/oder R8 substituierten Phenylrest darstellt, und
R7 und R8 unabhängig voneinander 1-4C-Alkyl oder 1-4C-Alkoxy bedeuten, sowie die Salze dieser Verbindungen.
1-4C-Alkyl steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielsweise seien genannt der Butyl-, iso-Butyl-, sec.-Butyl-, tert.-Butyl-, Propyl-, Isopropyl- und bevorzugt der Ethyl- und Methylrest.
1-4C-Alkoxy steht für Reste, die neben dem Sauerstoffatom einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen enthalten. Beispielsweise seien genannt der Butoxy-, iso-But- oxy-, sec.-Butoxy-, tert.-Butoxy-, Propoxy-, Isopropoxy- und bevorzugt der Ethoxy- und Methoxyrest.
3-7C-Cycloalkoxy steht für Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy, Cyclohexyloxy und Cyclo- heptyloxy, wovon Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy und Cyclopentyloxy bevorzugt sind.
3-7C-Cycloalkylmethoxy steht für Cyclopropylmethoxy, Cyclobutylmethoxy, Cyclopentylmethoxy, Cy- clohexylmethoxy und Cycloheptylmethoxy, wovon Cyclopropylmethoxy, Cyclobutylmethoxy und Cyclopentylmethoxy bevorzugt sind.
Als ganz oder überwiegend durch Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy seien beispielsweise der 2,2,3,3,3-Pentafluorpropoxy-, der Perfluorethoxy-, der 1 ,2,2-Trifluorethoxy-, insbesondere der 1 ,1 ,2,2-Tetrafluorethoxy-, der Trifluormethoxy-, der 2,2,2-Trifluorethoxy- und bevorzugt der Difluorme- thoxyrest genannt.
1-2C-Alkylendioxy steht beispielsweise für den Methylendioxy- (-0-CH2-0-) und den Ethylendioxyrest (-0-CH2-CH2-0-). 1-10C-Alkyl steht für geradkettige oder verzweigte Alkylreste mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen. Beispielsweise seien genannt der Decyl-, Nonyl-, Octyl-, Heptyl-, Isoheptyl- (5-Methylhexyl-), Hexyl-, Iso- hexyl- (4-Methylpentyl-), Neohexyl- (3,3-Dimethylbutyl-), Pentyl-, Isopentyl- (3-Methylbutyl-), Neopent- yl- (2,2-Dimethylpropyl-), Butyl-, iso-Butyl-, sec.-Butyl-, tert.-Butyl-, Propyl-, Isopropyl-, Ethyl- und der Methylrest.
3-7C-Cycloalkyl steht für den Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl- und Cycloheptylrest. Bevorzugt seien die 5-7C-Cycloalkylreste Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl genannt.
3-7C-Cycloalkylmethyl steht für einen Methylrest, der durch einen der vorstehend genannten 3-7C-Cy- cloalkylreste substituiert ist. Beispielsweise seien genannt der Cyclopentylmethyl- und der Cyclohe- xylmethylrest.
Ar-1-4C-alkyl steht für einen der vorstehend genannten 1-4C-Alkylreste, der durch einen der vorstehend definierten Arylreste substituiert ist. Beispielsweise seien genannt der p-Methoxybenzyl-, der Phenethyl- und der Benzylrest.
Als Salze kommen für Verbindungen der Formel I -je nach Substitution - alle Säureadditionssalze oder alle Salze mit Basen in Betracht. Besonders erwähnt seien die pharmakologisch verträglichen Salze der in der Galenik üblicherweise verwendeten anorganischen und organischen Säuren und Basen. Als solche eignen sich einerseits wasserlösliche und wasserunlösliche Säureadditionssalze mit Säuren wie beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, Essigsäure, Zitronensäure, D-Gluconsäure, Benzoesäure, 2-(4-Hydroxybenzoyi)-benzoe- säure, Buttersäure, Sulfosalicylsäure, Maleinsäure, Laurinsäure, Äpfelsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Oxalsäure, Weinsäure, Embonsäure, Stearinsäure, Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure oder 3-Hydroxy-2-naphthoesäure, wobei die Säuren bei der Salzherstellung - je nachdem, ob es sich um eine ein- oder mehrbasige Säure handelt und je nachdem, welches Salz gewünscht wird - im äquimo- laren oder einem davon abweichenden Mengenverhältnis eingesetzt werden.
Andererseits kommen - zum Beispiel im Fall einer 1 H- oder 2H-Tetrazol-5-yl-Substitution - auch Salze mit Basen in Betracht. Als Beispiele für Salze mit Basen seien Alkali- (Lithium-, Natrium-, Kalium-) oder Calcium-, Aluminium-, Magnesium-, Titan-, Ammonium-, Meglumin- oder Guanidiniumsalze erwähnt, wobei auch hier bei der Salzherstellung die Basen im äquimolaren oder einem davon abweichenden Mengenverhältnis eingesetzt werden. Pharmakologisch unverträgliche Salze, die beispielsweise bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen im industriellen Maßstab als Verfahrensprodukte zunächst anfallen können, werden durch dem Fachmann bekannte Verfahren in pharmakologisch verträgliche Salze übergeführt.
Dem Fachmann ist bekannt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen als auch ihre Salze, wenn sie zum Beispiel in kristalliner Form isoliert werden, verschiedene Mengen an Lösungsmitteln enthalten können. Die Erfindung umfaßt daher auch alle Solvate und insbesondere alle Hydrate der Verbindungen der Formel I, sowie alle Solvate und insbesondere alle Hydrate der Salze der Verbindungen der Formel I.
Hervorzuhebende Verbindungen der Formel I sind solche, worin
R1 1-2C-Alkyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, R3 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, oder worin R2 und R3 gemeinsam eine 1-2C-Alkylendioxygruppe bedeuten, R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, 3-7C-Cycloalkyl, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1-4C-alkyl bedeutet, wobei Ar einen unsubstituierten oder durch R7 und/oder R8 substituierten Phenylrest darstellt, und R7 und R8 unabhängig voneinander 1-4C-Alkyl oder 1-4C-Alkoxy bedeuten, sowie die Salze dieser Verbindungen.
Besonders hervorzuhebende Verbindungen der Formel I sind solche, in denen
R1 Methyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-2C-Alkoxy bedeutet, R3 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-2C-Alkoxy bedeutet, R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, 5-7C-Cycloalkyl, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1-2C-alkyl bedeutet, wobei Ar einen unsubstituierten oder durch R7 substituierten Phenylrest darstellt, und R7 1 -2C-Alkyl oder 1 -2C-Alkoxy bedeutet, sowie die Salze dieser Verbindungen.
Bevorzugte Verbindungen der Formel I sind solche, in denen
R1 Methyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R3 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, Cyclohexylmethyl oder 4-Methoxybenzyl bedeutet, sowie die Salze dieser Verbindungen.
Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel I sind solche, in denen
R1 Methyl bedeutet,
R2 Ethoxy bedeutet,
R3 Methoxy oder Ethoxy bedeutet,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 1-4C-Alkyl bedeutet, sowie die Salze dieser Verbindungen.
Bei den Verbindungen der Formel I handelt es sich um chirale Verbindungen mit Chiralitätszentren in den Positionen 2, 4a und 10b. Die Bezifferung (Numerierung) der Verbindungen der Formel I ist in Formel la dargestellt.
Figure imgf000007_0001
Gegenstand der Erfindung sind alle acht denkbaren Enantiomeren in jedem beliebigen Mischungsverhältnis zueinander. Bevorzugt sind die Verbindungen der Formel I, in denen die Wasserstoffatome in den Positionen 4a und 10b cis-ständig zueinander sind. Besonders bevorzugt sind in diesem Zusammenhang solche Verbindungen der Formel I, die in den Positionen 4a und 10b dieselbe absolute Konfiguration haben wie die als Ausgangsprodukt einsetzbare Verbindung (-)-cis-4-Amino-3-(3-ethoxy-4-methoxyphenyl)-1-methylpiperidin Dihydrochlorid mit dem
, 20 optischen Drehwert [α] D = -65,5° (c=1 , Methanol).
Der Tetrazol-5-ylrest R5 der Verbindungen der Formel I kann am Phenylrest R4 sowohl in ortho-, me- ta-, als auch in para-Position zum Benzonaphthyridinring angebunden sein.
Bevorzugt sind diejenigen Verbindungen der Formel I, bei denen der Tetrazol-5-ylrest R5 in meta- oder para-Position zum Benzonaphthyridinring am Phenylrest R4 angebunden ist. Insbesondere bevorzugt sind in diesem Zusammenhang die Verbindungen der Formel I, bei denen der Tetrazol-5-ylrest R5 in para-Position angebunden ist.
Verbindungen der Formel I, bei denen R1 , R2, R3, R4 und R5 die oben angegebenen Bedeutungen haben und R6 für Wasserstoff steht, treten in mehreren tautomeren Formen auf, die miteinander im Gleichgewicht stehen (z.B. 1 H- und 2H-Form des Tetrazol-5-ylrestes). Die Erfindung umfaßt alle tautomeren Formen in jedem Mischungsverhältnis.
Durch Anbindung der Substituenten R6 (R6≠H) an die Tetrazol-5-yl-gruppe wird die Umwandlung der beiden tautomeren 1H- und 2H-Formen des Tetrazol-5-ylrestes ineinander blockiert. Gegenstand der Erfindung sind daher auch die durch einen Rest R6 (R6≠H) substituierten 1 H- und 2H-Tetrazol-5-yl- verbindungen der Formel I, sowohl in reiner Form, als auch in jedem Mischungsverhältnis. Bevorzugt sind jedoch die Verbindungen der Formel I, bei denen der Tetrazol-5-ylrest in 2-Position durch einen der Reste R6 (R6≠H) substituiert ist.
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel I, worin R1 , R2, R3 und R4 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und ihrer Salze. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der Formel II,
Figure imgf000008_0001
in denen R1 , R2, R3 und R4 die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, einer N-Oxidation unterwirft und gewünschtenfalls anschließend die erhaltenen Verbindungen der Formel I in ihre Salze überführt, oder daß man gewünschtenfalls anschließend erhaltene Salze der Verbindungen der Formel I in die freien Verbindungen überführt.
Die N-Oxidation erfolgt auf eine dem Fachmann vertraute Weise, z.B. mit Hilfe von Wasserstoffperoxid in Methanol oder mit Hilfe von m-Chlorperoxibenzoesäure in Dichlormethan bei Raumtemperatur. Welche Reaktionsbedingungen für die Durchführung des Verfahrens im einzelnen erforderlich sind, ist dem Fachmann aufgrund seines Fachwissens geläufig.
Verbindungen der Formel II, worin R1 , R2 und R3 die oben angegebenen Bedeutungen haben, R4 einen durch einen 1 H- oder 2H-Tetrazol-5-ylrest R5 substituierten Phenylrest darstellt, können beispielsweise aus den entsprechenden Verbindungen der Formel II, in denen R4 einen durch eine Cya- nogruppe substituierten Phenylrest darstellt, durch Umsetzung mit einem Alkalimetallazid und einem Ammoniumhalogenid (z.B. Ammoniumchlorid) hergestellt werden. Entsprechende Reaktionen sind z.B. in J. Med. Chem. 1993, 36, 3246 beschrieben.
Die auf diese Weise erhaltenen Verbindungen der Formel II können gewünschtenfalls durch eine Alky- lierungsreaktion in weitere Verbindungen der Formel II übergeführt werden, wobei der Wasserstoff am Tetrazol-5-ylrest durch einen der für R6 oben genannten Reste - ausgenommen Wasserstoff - ersetzt wird.
Die Alkylierungsreaktionen erfolgen zweckmäßigerweise analog zu den dem Fachmann bekannten Methoden, z.B. durch Reaktion der 1 H- oder 2H-Tetrazolverbindungen der Formel II mit Verbindungen der Formel R6-X in Gegenwart einer Base, wobei R6 die oben genannten Bedeutungen - ausgenommen Wasserstoff - hat und X eine geeignete Abgangsgruppe wie beispielsweise ein Chlor-, Bromoder Jodatom oder einen Alkylsulfatrest darstellt. Die bei der Alkylierung gewöhnlich entstehenden 1- und 2-substituierten Tetrazolregioisomerengemische werden durch dem Fachmann bekannte Methoden wie Kristallisation oder Chromatographie an geeigneten Trägermaterialien getrennt. Eine analoge Alkylierung von Tetrazolen und Trennung der Regioisomeren ist beispielsweise in J. Med. Chem. 1996, 39, 2354 beschrieben.
Verbindungen der Formel II, worin R1 , R2 und R3 die oben angegebenen Bedeutungen haben und R4 einen durch einen Tetrazol-5-ylrest R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei der Tetrazol-5-ylrest R5 seinerseits durch R6 (R6 ≠ Wasserstoff) substituiert ist, können alternativ auch durch eine Cyclo- kondensationsreaktion der entsprechenden Verbindungen der Formel III
Figure imgf000010_0001
erhalten werden.
Die Cyclokondensation erfolgt auf eine dem Fachmann an sich bekannte Weise gemäß Bischler- Napieralski (z.B. so, wie in J. Chem. Soc, 1956, 4280-4282 beschrieben) in Gegenwart eines geeigneten Kondensationsmittels, wie beispielsweise Polyphosphorsäure, Phosphorpentachlorid, Phos- phortrichlorid, Phosphorpentoxid , Thionylchlorid oder bevorzugt Phosphoroxytrichlorid, in einem geeigneten inerten Lösungsmittel, z.B. in einem chlorierten Kohlenwasserstoff wie Chloroform, oder in einem cyclischen Kohlenwasserstoff wie Toluol oder Xylol, oder einem sonstigen inerten Lösungsmittel wie Acetonitril, oder ohne weiteres Lösungsmittel unter Verwendung eines Überschusses an Kondensationsmittel, vorzugsweise bei erhöhter Temperatur, insbesondere bei der Siedetemperatur des verwendeten Lösungs- bzw. Kondensationsmittels.
Enantiomerenreine Verbindungen der Formel II können in bekannter Weise (beispielsweise durch Herstellung und Trennung entsprechender diastereoisomerer Verbindungen) separiert oder durch stereoselektive Synthesemethoden hergestellt werden. Solche Trennverfahren und Synthesemethoden sind beispielsweise in der EP 247 971 und in der DE 42 17 401 beschrieben.
Verbindungen der Formel III, worin R1 , R2, R3 und R4 die oben angegebenen Bedeutungen haben sind aus den entsprechenden Verbindungen der Formel IV,
Figure imgf000010_0002
worin R1, R2 und R3 die oben angegebenen Bedeutungen haben, durch Umsetzung mit Verbindungen der Formel R4-CO-Y, worin R4 die oben angegebenen Bedeutungen hat und Y eine geeignete Ab- gangsgruppe, vorzugsweise ein Chloratom darstellt, zugänglich. Beispielsweise wird die Benzoylie- rung wie in den nachfolgenden Beispielen nach dem Einhorn-Verfahren, der Schotten-Baumann-Variante oder wie in J. Chem. Soc. (C), 1971 , 1805-1808 beschrieben, durchgeführt.
Verbindungen der Formel R4-CO-Y sind entweder bekannt oder können durch Umsetzung auf eine dem Fachmann geläufige Weise aus den entsprechenden Carbonsäuren R4-COOH, worin R4 die oben angegebenen Bedeutungen hat, hergestellt werden.
Die Verbindungen R4-COOH, worin R4 die oben angegebenen Bedeutungen hat, sind entweder bekannt oder können auf eine dem Fachmann bekannte Weise aus 2-, 3- oder 4-Cyanbenzoesäurealkyl- estern erhalten werden, z.B. durch Umsetzung mit Alkaliaziden und einem Ammoniumhalogenid (z.B. Ammoniumchlorid) zu im Tetrazolteil unsubstituierten 2-, 3- oder 4-(1 H- oder 2H-Tetrazol-5-yl)benzoe- säurealkylestern. Eine solche Umsetzung ist beispielsweise in J. Med. Chem. 1993, 36^ 3246 beschrieben. Gewünschtenfalls lassen sich diese Zwischenverbindungen - wie oben für die 1 H- oder 2H- Tetrazolverbindungen der Formel II oder in der vorstehend genannten Literatur beschrieben - durch Alkylierung mit Verbindungen der Formel R6-X in Gegenwart einer Base in R4-Carbonsäurealkylester überführen, in denen R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, R5 einen durch einen Rest R6 substituierten 1 H- oder 2H-Tetrazol-5-ylrest darstellt und R6 nicht Wasserstoff ist, sondern eine der anderen für R6 oben genannten Bedeutungen hat. Durch dem Fachmann geläufige alkalische oder saure Hydrolysebedingungen werden die R4-Carbonsäurealkylester in die freien Carbonsäuren R4-COOH übergeführt.
Die Herstellung von cis/trans-Racemat-Gemischen und von reinen cis-Racematen von Verbindungen der Formel IV ist beispielsweise im USP 3,899,494, in DE-OS 21 23 328 und in DE-OS 16 95 782 beschrieben. Reine cis-Enantiomere der Verbindungen der Formel IV können beispielsweise nach den Verfahren erhalten werden, wie sie in EP 0 247 971 und in DE 42 17 401 offenbart sind.
Die Isolierung und Reinigung der erfindungsgemäßen Substanzen erfolgt in an sich bekannter Weise z.B. derart, daß man das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert und den erhaltenen Rückstand aus einem geeigneten Lösungsmittel umkristallisiert oder einer der üblichen Reinigungsmethoden, wie beispielsweise der Säulenchromatographie an geeignetem Trägermaterial, unterwirft.
Salze erhält man durch Auflösen der freien Verbindung in einem geeigneten Lösungsmittel (z. B. einem Keton, wie Aceton, Methylethylketon oder Methylisobutylketon, einem Ether, wie Diethylether, Tetrahydrofuran oder Dioxan, einem chlorierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid oder Chloroform, oder einem niedermolekularen aliphatischen Alkohol wie Ethanol oder Isopropanol), das die gewünschte Säure bzw. Base enthält, oder dem die gewünschte Säure bzw. Base anschließend zuge- geben wird. Die Salze werden durch Filtrieren, Umfallen, Ausfällen mit einem Nichtlösungsmittel für das Anlagerungssalz oder durch Verdampfen des Lösungsmittels gewonnen. Erhaltene Salze können durch Alkalisierung bzw. durch Ansäuern in die freien Verbindungen umgewandelt werden, welche wiederum in Salze übergeführt werden können. Auf diese Weise lassen sich pharmakologisch nicht verträgliche Salze in pharmakologisch verträgliche Salze umwandeln.
Die nachfolgenden Beispiele dienen der näheren Erläuterung der Erfindung, ohne sie einzuschränken. Ebenso können weitere Verbindungen der Formel I, deren Herstellung nicht explizit beschrieben ist, in analoger oder in einer dem Fachmann an sich vertrauten Weise unter Anwendung üblicher Verfahrenstechniken hergestellt werden.
In den Beispielen steht Schmp. für Schmelzpunkt, h für Stunde(n), RT für Raumtemperatur, SF für Summenformel, MG für Molgewicht, DC für Dünnschichtchromatographie, Ber. für Berechnet, Gef. für Gefunden. Die in den Beispielen genannten Verbindungen und ihre Salze sind bevorzugter Gegenstand der Erfindung.
Beispiele
Endprodukte
1. cis-9-Ethoxy-8-methoxy-2-methyl-6-[4-(2H-2-ethyltetrazol-5-yl)phenyl]-1 ,2,3,4,4a,10b-hexa- hydrobenzo[c][1 ,6]naphthyridin-N-2-oxid
Eine Lösung von 2,23 g (-)-cis-9-Ethoxy-8-methoxy-2-methyl-6-[4-(2H-2-ethyltetrazol-5-yl)phenyl]- 1 ,2, 3,4,4a, 10b-hexahydrobenzo[c][1 ,6]naphthyridin (Ausgangsverbindung A) in 12 ml Methanol wird mit 6 ml 30 % Wasserstoffperoxid ca. 2 Tage bei RT gerührt. Nach vollständiger Oxidation (DC-Kontrolle) versetzt man das Reaktionsgemisch mit 7 g festem Natriumsulfit und rührt noch ca. 1 h bei RT nach. Nach dem Absaugen des Reaktionsgemisches extrahiert man das Filtrat mit Dichlormethan, wäscht die organische Phase mit Wasser und trocknet sie über Natriumsulfat. Nach dem Absaugen und Einengen der Produktlösung kristallisiert man den erhaltenen festen Rückstand in einem Ethylacetat- /Diethylether-Gemisch (2:1 ) um. Man erhält 1 ,9 g der Titelverbindung als farblose feine Kristalle vom Schmp. 168 - 170 ° C.
SF: C25 H30 N6 03 x 1 ,19 H20; MG: 484,07
Elementaranalyse: Ber.: C 62,14 H 6.74 N 17,39
Gef.: C 62,18 H 7.04 N 17,44
Ausgangsverbindungen:
A. (-)-cis-9-Ethoxy-8-methoxy-2-methyl-6-[4-(2H-2-ethyltetrazol-5-yl)phenyl]-1 ,2,3,4,4a,10b- hexahydrobenzo[c][1 ,6]naphthyridin
6J g (-)-cis-3-(3-Ethoxy-4-methoxyphenyl)-4-[4-(2H-2-ethyltetrazol-5-yl)-benzamido]-1-methylpiperidin werden in 20 ml Phosphoroxytrichlorid und 80 ml Acetonitril 16 h unter Rückfluß zum Sieden erhitzt. Nach Abdestillieren des überschüssigen Phosphoroxytrichlorids verteilt man den Rückstand zwischen Dichlormethan und gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung. Die organische Phase wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Den festen Rückstand reinigt man durch Kieselgelchromatographie, separiert die Hauptproduktfraktion und engt diese ein. Der Rückstand wird aus Petrolether/Diethylether (2:1 ) umkristallisiert. Man erhält 4,6 g der Titelverbindung (hellgelbe Kristalle) vom Schmp. 151-152°C.
SF: C2SH30N6O2, MG: 503,44 Optischer Drehwert: [α] 2° = -106,4° (c=1 , Methanol)
B. (-)-cis-3-(3-Ethoxy-4-methoxyphenyl)-4-[4-(2H-2-ethyltetrazol-5-yl)-benzamido]-1-methyl- piperidin
Zur im Eis-/Wasserbad gekühlten Lösung von 1 ,82 g (-)-cis-4-Amino-3-(3-ethoxy-4-methoxyphenyl)-1- methylpiperidin (freie Base, hergestellt durch Behandlung des Dihydrochlorids mit Natronlauge und Extraktion der freien Base mit Dichlormethan) in 60 ml Dichlormethan und 1 ml Triethylamin wird eine Lösung von 4-(2H-2-Ethyltetrazol-5-yl)benzoylchlorid (hergestellt durch Erhitzen unter Rückfluß von 1 ,5 g 4-(2H-2-Ethyltetrazol-5-yl)-benzoesäure mit 2 ml Thionylchlorid in 60 ml absolutem Toluol für ca. 2 h und vollständigem Einengen) innerhalb von 10 Min zugetropft. Das Reaktionsgemisch wird unter Rühren auf RT erwärmt und noch ca. 2 h nachgerührt. Nach Extraktion mit einem Gemisch aus gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und Dichlormethan engt man die organische Phase vollständig ein und kristallisiert den Rückstand in Methanol/Diethylether (1 +1 ) um. Man erhält 3,15 g farblose Kristalle der Titelverbindung vom Schmp. 165-167, 5°C.
SF: C25H32N603, MG: 464,57
Optischer Drehwert: [α] 2 D 0 = -89,7° (c=1 , Methanol)
Elementaranalyse: Ber.: C 64,64 H 6,94 N 18,09
Gef.: C 64,74 H 7,08 N 18,21
C. (-)-cis-4-Amino-3-(3-ethoxy-4-methoxyphenyl)-1 -methylpiperidin Dihydrochlorid
Die Titelverbindung wird analog dem in DE 42 17 401 für (-)-cis-4-Amino-3-(3,4-dimethoxyphenyI)-1- methylpiperidin Dihydrochlorid beschriebenen Verfahren erhalten, wenn in den dort beschriebenen Beispielen die entsprechenden 3-Ethoxy-4-methoxyverbindungen eingesetzt werden.
SF: C15H24N202 x 2HCI x 0,96 H20, MG: 354,52; Schmp. 252-254°C Optischer Drehwert: [ ] 2 D° = -65.5° (c=1 , Methanol) Gewerbliche Anwendbarkeit
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakologische Eigenschaften, die sie gewerblich verwertbar machen. Als selektive Inhibitoren des Typs 3 und 4 der Zyklisch-Nukleotid- Phosphodiesterase (PDE3, PDE4) eignen sie sich einerseits als Bronchialtherapeutika (zur Behandlung von Atemwegsobstruktionen aufgrund ihrer dilatierenden und zilienstimulierenden aber auch aufgrund ihrer atemfrequenz- bzw. atemantriebssteigernden Wirkung) andererseits jedoch vor allem zur Behandlung von Erkrankungen entzündlicher Natur, z.B. der Atemwege (Asthma-Prophylaxe), der Haut, des Darms, der Augen und der Gelenke, die vermittelt werden durch Mediatoren wie Interferone, Mitglieder der Tumor Nekrose-Faktorenfamilie, Interleukine, Chemokine, Kolonie-stimulierende Faktoren, Wachstumsfaktoren, Lipidmediatoren (z.B. u.a. PAF, plättchenaktivierender Faktor), bakterielle Faktoren (z.B. LPS), Immunglobuline, Sauerstoffradikaie und Verwandte (z.B. Stickstoffmonoxid NO), biogene Amine (z.B. Histamin, Serotonin), Kinine (z.B. Bradykinin), neurogene Mediatoren (wie Substanz P, Neurokinin), Proteine wie z.B. Granulainhaltsstoffe von Leukozyten (u.a. kationische Proteine von Eosinophilen) und Adhärenzproteine (z.B. Integrine). Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen glattmuskelzell-relaxierende Wirkung, z.B. im Bereich des Bronchialsystems, des Blutkreislaufs, und der ableitenden Harnwege. Desweiteren besitzen sie Zilienfrequenz-steigernde Wirkung, z.B. im Bronchialsystem.
Hierbei zeichnen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen durch eine geringe Toxizität, eine gute Humanakzeptanz, eine gute enterale Resorption und eine hohe Bioverfügbarkeit, eine große therapeutische Breite, das Fehlen wesentlicher Nebenwirkungen und eine gute Wasserlöslichkeit aus.
Aufgrund ihrer PDE-hemmenden Eigenschaften können die erfindungsgemäßen Verbindungen in der Human- und Veterinärmedizin als Therapeutika eingesetzt werden, wobei sie beispielsweise zur Behandlung und Prophylaxe folgender Krankheiten verwendet werden können: Akute und chronische (insbesondere entzündliche und allergeninduzierte) Atemwegserkrankungen verschiedener Genese (Bronchitis, allergische Bronchitis, Asthma bronchiale, Emphysema, COPD); Erkrankungen mit einer Einschränkung der Zilientätigkeit oder verstärkten Anforderungen an die ziliäre Clearance (Bronchitis, Mucoviscidose), Dermatosen (vor allem proliferativer, entzündlicher und allergischer Art) wie beispielsweise Psoriasis (vulgaris), toxisches und allergisches Kontaktekzem, atopisches Ekzem, sebor- rhoisches Ekzem, Liehen Simplex, Sonnenbrand, Pruritus im Genitoanalbereich, Alopecia areata, hypertrophe Narben, diskoider Lupus erythematodes, follikuläre und flächenhafte Pyodermien, endogene und exogene Akne, Akne rosacea sowie andere proliferative, entzündliche und allergische Hauterkrankungen; Erkrankungen, die auf einer überhöhten Freisetzung von TNF und Leukotrienen beruhen, so z.B. Erkrankungen aus dem Formenkreis der Arthritis (Rheumatoide Arthritis, Rheumatoide Spon- dylitis, Osteoarthritis und andere arthritische Zustände), systemischer Lupus erythematosus, Erkrankungen des Immunsystems (AIDS), einschließlich AIDS-bedingter Enzephalopathien, Autoimmun-Er- krankungen wie Diabetes mellitus (Typ I, Autoimmundiabetes), Multiple Sklerose und der Formenkreis Virus-, Bakterien- oder Parasiten-induzierter Demyelinisierungs-Krankheiten, zerebrale Malaria oder Lymes Erkrankung, Erscheinungsformen des Schocks [septischer Schock, Endotoxinschock, gram-negative Sepsis, Toxisches Schock-Syndrom und das ARDS (adult respiratory distress syn- drom)] sowie generalisierte Entzündungen im Magen-Darm Bereich (Morbus Crohn und Colitis ulce- rosa); Erkrankungen, die auf allergischen und/oder chronischen, immunologischen Fehlreaktionen im Bereich der oberen Atemwege (Rachenraum, Nase) und der angrenzenden Regionen (Nasennebenhöhlen, Augen) beruhen, wie beispielsweise allergische Rhinitis/Sinusitis, chronische Rhinitis/Sinusitis, allergische Conjunctivitis sowie Nasenpolypen; ferner Erkrankungen des Zentralnerversystems wie Gedächtnisstörungen und Alzheimer's Erkrankung, Candidiasis, Leishmaniosen und Lepra.
Aufgrund ihrer gefäßrelaxierenden Wirksamkeit können die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Behandlung von Bluthochdruckerkrankungen verschiedener Genese wie z.B. pulmonarer Hochdruck und den damit zusammenhängenden Begleiterscheinungen, zur Behandlung erektiler Dysfunkti- on oder Koliken der Nieren und der Harnleiter im Zusammenhang mit Nierensteinen, verwendet werden.
Aufgrund ihrer cAMP-steigernden Wirkung können sie aber auch für Erkrankungen des Herzens, die durch PDE-Hemmstoffe behandelt werden können, wie beispielsweise Herzinsuffizienz, sowie als anti- thrombotische, die Plättchen-Aggregation hemmende Substanzen verwendet werden.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung von Säugetieren einschließlich Menschen, die an einer der oben genannten Krankheiten erkrankt sind. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man dem erkrankten Säugetier eine therapeutisch wirksame und pharmakologisch verträgliche Menge einer oder mehrerer der erfindungsgemäßen Verbindungen verabreicht.
Weiterer Gegenstand der Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere den genannten Krankheiten.
Ebenso betrifft die Erfindung die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung von Arzneimitteln, die zur Behandlung und/oder Prophylaxe der genannten Krankheiten eingesetzt werden. Weiterhin sind Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe der genannten Krankheiten, die eine oder mehrere der erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten, Gegenstand der Erfindung.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Handelsprodukt, bestehend aus einem üblichen Sekundärpackmittel, einem das Arzneimittel enthaltenden Primärpackmittel (beispielsweise eine Ampulle oder ein Blister) und gewünschtenfalls einem Beipackzettel, wobei das Arzneimittel antagonistische Wirkung gegen zyklisch-nukleotid Phosphodiesterasen des Typs 3 und 4 zeigt und zur Abschwächung der Symptome von Krankheiten führt, die in Zusammenhang mit zyklisch-nukleotid Phosphodiesterasen des Typs 3 und 4 stehen, und wobei auf dem Sekundärpackmittel und/oder auf dem Beipackzettel des Handelsprodukts auf die Eignung des Arzneimittels zur Prophylaxe oder Behandlung von Krankheiten, die im Zusammenhang mit zyklisch-nukleotid Phosphodiesterasen des Typs 3 und 4 stehen, hingewiesen wird, und wobei das Arzneimittel ein oder mehrere erfindungsgemäße Verbindungen der Formel I enthält. Das Sekundärpackmittel, das das Arzneimittel enthaltende Primärpackmittel und der Beipackzettel entsprechen ansonsten dem, was der Fachmann als Standard für Arzneimittel dieser Art ansehen würde.
In vorteilhafter Weise eignen sich die erfindungsgemäßen Substanzen auch zur Kombination mit anderen Substanzen, die eine Stimulation von cAMP bewirken, wie Prostaglandine (PGE2, PGI2 bzw. Pro- stazykiin) und ihre Abkömmlinge, direkte Adenylatzyklase-Stimulatoren wie Forskolin und verwandte Substanzen, bzw. mittelbar die Adenylatzyklase stimulierende Substanzen wie Katecholamine und adrenerge Rezeptoragonisten, insbesondere Beta-Mimetika. Sie entfalten dabei in Kombination auf Grund ihrer den cAMP-Abbau hemmenden Wirkung eine synergistische, überadditive Wirksamkeit. Diese kommt z.B. bei ihrer Anwendung in Kombination mit PGE2 zur Behandlung der pulmonalen Hypertonie zum Tragen.
Die Arzneimittel werden nach an sich bekannten, dem Fachmann geläufigen Verfahren hergestellt. Als Arzneimittel werden die erfindungsgemäßen Verbindungen (= Wirkstoffe) entweder als solche, oder vorzugsweise in Kombination mit geeigneten pharmazeutischen Hiifsstoffen z.B. in Form von Tabletten, Dragees, Kapseln, Suppositorien, Pflastern, Emulsionen, Suspensionen, Gelen oder Lösungen eingesetzt, wobei der Wirkstoffgehalt vorteilhafterweise zwischen 0,1 und 95 % beträgt.
Welche Hilfsstoffe für die gewünschten Arzneiformulierungen geeignet sind, ist dem Fachmann aufgrund seines Fachwissens geläufig. Neben Lösemitteln, Gelbildnern, Salbengrundlagen und anderen Wirkstoffträgern können beispielsweise Antioxidantien, Dispergiermittel, Emulgatoren, Konservierungsmittel, Lösungsvermittler oder Permeationspromotoren verwendet werden. Für die Behandlung von Erkrankungen des Respirationstraktes werden die erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt auch inhalativ appliziert. Hierzu werden diese entweder direkt als Pulver (vorzugsweise in mikronisierter Form) oder durch Vernebeln von Lösungen oder Suspensionen, die sie enthalten, verabreicht. Bezüglich der Zubereitungen und Darreichungsformen wird beispielsweise auf die Ausführungen im Europäischen Patent 163 965 verwiesen.
Für die Behandlung von Dermatosen erfolgt die Anwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere in Form solcher Arzneimittel, die für eine topische Applikation geeignet sind. Für die Herstellung der Arzneimittel werden die erfindungsgemäßen Verbindungen (= Wirkstoffe) vorzugsweise mit geeigneten pharmazeutischen Hilfsstoffen vermischt und zu geeigneten Arzneiformulierungen weiterverarbeitet. Als geeignete Arzneiformulierungen seien beispielsweise Puder, Emulsionen, Suspensionen, Sprays, Öle, Salben, Fettsalben, Cremes, Pasten, Gele oder Lösungen genannt.
Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden nach an sich bekannten Verfahren hergestellt. Die Dosierung der Wirkstoffe erfolgt in der für PDE-Hemmstoffe üblichen Größenordnung. So enthalten topische Applikationsformen (wie z.B. Salben) für die Behandlung von Dermatosen die Wirkstoffe in einer Konzentration von beispielsweise 0,1-99 %. Die Dosis für die inhalative Applikation beträgt üblicherweise zwischen 0,1 und 3 mg pro Tag. Die übliche Dosis bei systemischer Therapie (p.o. oder i.v.) liegt zwischen 0,01 und 10 mg pro Kilogramm und Tag.
Biologische Untersuchungen
Bei der Untersuchung der PDE4-Hemmung auf zellulärer Ebene kommt der Aktivierung von Entzündungszellen besondere Bedeutung zu. Als Beispiel sei die FMLP (N-formyl-methionylleucylphenylala- nin)-induzierte Superoxid-Produktion von neutrophilen Granulozyten genannt, die als Luminol-ver- stärkte Chemilumineszenz gemessen werden kann. [Mc Phail LC, Strum SL, Leone PA und Sozzani S, The neutrophil respiratory burst mechanism. In "immunology Series" 1992, 57, 47-76; ed. Coffey RG (Marcel Decker, Inc., New York-Basel-Hong Kong)].
Substanzen, welche die Chemilumineszenz sowie die Zytokinsekretion und die Sekretion entzün- dungssteigernder Mediatoren an Entzündungszellen, insbesonders neutrophilen und eosinophilen Granulozyten, T-Lymphozyten, Monozyten und Makrophagen hemmen, sind solche, welche die PDE4 oder PDE3 und PDE4 hemmen. Das letztgenannte Isoenzym der Phosphodiesterase-Familien ist besonders in Granulozyten vertreten. Dessen Hemmung führt zur Erhöhung der intrazellulären zyklischen AMP-Konzentration und damit zur Hemmung der zellulären Aktivierung. Die PDE4-Hemmung durch die erfindungsgemäßen Substanzen ist damit ein zentraler Indikator für die Unterdrückung von entzündlichen Prozessen. (Giembycz MA, Could isoenzyme-selective phosphodiesterase inhibitors render bronchodilatory therapy redundant in the treatment of bronchial asthma?; Biochem Pharmacol 1992, 43, 2041-2051 ; Torphy TJ et al., Phosphodiesterase inhibitors: new opportunities for treatment of asthma. Thorax 1991 , 46, 512-523; Schudt C et al., Zardaverine: a cyclic AMP PDE3/4 inhibitor. In "New Drugs for Asthma Therapy", 379-402, Birkhäuser Verlag Basel 1991 ; Schudt C et al., Influence of selective phosphodiesterase inhibitors on human neutrophil functions and levels of cAMP and Ca; Naunyn-Schmiedebergs Arch Pharmacol 1991 , 344, 682-690; Tenor H and Schudt C, Analysis of PDE isoenzyme profiles in cells and tissues by pharmacological methods. In „Phosphodiesterase Inhibitors", 21-40, „The Handbook of Immunopharmacology", Academic Press 1996. Hatzelmann A et al., Enzymatic and functional aspects of dual-selective PDE3/4-inhibitors. In „Phosphodiesterase Inhibitors", 147-160, „The Handbook of Immunopharmacology", Academic Press, 1996.
A. Methodik
1. Hemmung der PDE Isoenzyme
Die PDE-Aktivität wurde gemäß Thompson et al. (1 ) mit einigen Modifikationen (2) bestimmt. Die Prüfproben enthielten 40 mM Tris-HCI (pH 7,4), 5 mM MgCI2, 0,5 μM cAMP oder cGMP, [3H]cAMP oder
[3H]cGMP (ca. 50.000 cpm/Probe), die unten näher beschriebenen PDE Isoenzym-spezifischen Zusätze, die angegebenen Konzentrationen an Hemmstoff und ein Aliquot der Enzymlösung bei einem Gesamtprobenvolumen von 200 μl. Stammlösungen der zu untersuchenden Verbindungen in DMSO wurden in solchen Konzentrationen hergestellt, daß der DMSO-Gehalt - zur Vermeidung einer Beeinflussung der PDE-Aktivität - in den Prüfproben 1 Vol-% nicht überschritt. Nach 5-minütiger Vorinkubation bei 37°C wurde die Reaktion durch Zugabe des Substrates (cAMP oder cGMP) in Gang gesetzt. Die Proben wurden für weitere 15 Min. bei 37°C inkubiert. Durch Zugabe von 50 μl 0,2 N HCI wurde die Reaktion abgebrochen. Nach 10-minütiger Kühlung auf Eis und Zugabe von 25 μg 5'-Nukleotidase (Schlangengift von Crotalus atrox) wurde erneut für 10 Min. bei 37°C inkubiert und die Proben dann auf QAE Sephadex A-25-Säulen aufgetragen. Die Säulen wurden mit 2 ml 30 mM Am- moniumformiat (pH 6,0) eluiert. Die Radioaktivität des Eluats wurde gemessen und um die entsprechenden Leerwerte korrigiert. Der Anteil an hydrolysiertem Nucleotid überschritt in keinem Fall 20 % der ursprünglichen Substratkonzentration.
PDE1 (Ca2+/Calmodulin-abhängig) aus Rinderhirn: Die Hemmung dieses Isoenzyms wurde in Gegenwart von Ca2+ (1 mM) und Calmodulin (100 nM) unter Verwendung von cGMP als Substrat untersucht (3).
PDE2 (cGMP-stimuliert) aus Rattenherzen wurde chromatografisch gereinigt [Schudt et al. (4)] und in Gegenwart von cGMP (5 μM) unter Verwendung von cAMP als Substrat untersucht.
PDE3 (cGMP-inhibiert) und PDE5 (cGMP-spezifisch) wurden in Homogenaten von menschlichen Blutplättchen [Schudt et al. (4)] unter Verwendung von cAMP bzw. cGMP als Substrat untersucht.
PDE4 (cAMP-spezifisch) wurde im Zytosol von humanen polymorphonuclearen Leukozyten (PMNL) [isoliert aus Leukozytenkonzentraten, siehe Schudt et al. (5)] unter Verwendung von cAMP als Substrat untersucht. Der PDE3-Hemmstoff Motapizon (1 μM) wurde verwendet um die von verunreinigenden Blutplättchen ausgehende PDE3 Aktivität zu unterdrücken. 2. Statistik
Die IC50-Werte wurden aus den Konzentrations-Hemmkurven durch nichtlineare Regression unter Verwendung des Programms GraphPad InPlot™ (GraphPad Software Inc., Philadelphia, USA) ermittelt.
3. Literatur
(1 ) Thompson W.J., Terasaki W. L., Epstein P. M. and Strada S. J., Assay of cyclic nucleotide phosphodiesterase and resolution of multiple molecular forms of the enzyme; Adv. Cycl. Nucl. Res. 1979, 10, 69-92
(2) Bauer A.C. und Schwabe U., An improved assay of cyclic 3',5'-nucleotide phosphodiesterase with QAE Sephadex A-25; Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1980, 311 , 193-198
(3) Gietzen K., Sadorf I. und Bader H., A model for the regulation of the calmodulin-dependent en- zymes erythrocyte Ca2+-transport ATPase and brain phosphodiesterase by activators and inhibitors; Biochem. J. 1982, 207, 541-548
(4) Schudt C, Winder S., Müller B. und Ukena D., Zardaverine as a selective inhibitor of phosphodiesterase isoenzymes; Biochem. Pharmacol. 1991, 42, 153-162
(5) Schudt C, Winder S., Forderkunz S., Hatzelmann A. und Ullrich V., Influence of selective phosphodiesterase inhibitors on human neutrophil functions and levels of cAMP and Ca; Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1991 , 344, 682-690
B. Ergebnisse
In der nachfolgenden Tabelle 1 sind die gemäß Punkt A1 ermittelten Hemmkonzentrationen [Hemmkonzentrationen als -log IC50 (mol/l)] für die Verbindung 1 für verschiedene PDE Isoenzyme angegeben. Die Nummer der Verbindung entspricht der Nummer des Beispiels im Abschnitt Endprodukte.
Tabelle 1
Figure imgf000022_0001

Claims

Patentansprüche
Verbindungen der Formel I,
Figure imgf000023_0001
worin
R1 1-4C-Alkyl bedeutet,
R2 Hydroxy, 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R3 Hydroxy, 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, oder worin
R2 und R3 gemeinsam eine 1-2C-Alkylendioxygruppe bedeuten,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 Wasserstoff, 1-10C-Alkyl, 3-7C-Cycloalkyl, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1-4C-alkyl bedeutet, wobei
Ar einen unsubstituierten oder durch R7 und/oder R8 substituierten Phenylrest darstellt, und
R7 und R8 unabhängig voneinander 1-4C-Alkyl oder 1-4C-Alkoxy bedeuten, sowie die Salze dieser Verbindungen.
2. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , in denen
R1 1-2C-Alkyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, R3 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-4C-Alkoxy bedeutet, oder worin R2 und R3 gemeinsam eine 1-2C-Alkylendioxygruppe bedeuten, R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, 3-7C-CycloalkyI, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1-4C-alkyl bedeutet, wobei Ar einen unsubstituierten oder durch R7 und/oder R8 substituierten Phenylrest darstellt, und R7 und R8 unabhängig voneinander 1-4C-Alkyl oder 1-4C-Alkoxy bedeuten, sowie die Salze dieser Verbindungen.
3. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , in denen R1 Methyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-2C-Alkoxy bedeutet, R3 1-4C-Alkoxy, 3-7C-Cycloalkoxy, 3-7C-Cycloalkylmethoxy oder ganz oder überwiegend durch
Fluor substituiertes 1-2C-Alkoxy bedeutet, R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei R5 einen durch einen Rest R6 substituierten TetrazoI-5-ylrest darstellt, wobei R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, 5-7C-Cycloalkyl, 3-7C-Cycloalkylmethyl oder Ar-1-2C-alkyl bedeutet, wobei Ar einen unsubstituierten oder durch R7 substituierten Phenylrest darstellt, und R7 1 -2C-Alkyl oder 1 -2C-Alkoxy bedeutet, sowie die Saize dieser Verbindungen.
4. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , in denen R1 Methyl bedeutet,
R2 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R3 1-4C-Alkoxy bedeutet,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten Tetrazol-5-ylrest darstellt, wobei
R6 Wasserstoff, 1-7C-Alkyl, Cyclohexylmethyl oder 4-Methoxybenzyl bedeutet, sowie die Salze dieser Verbindungen.
5. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , in denen R1 Methyl bedeutet,
R2 Ethoxy bedeutet,
R3 Methoxy oder Ethoxy bedeutet,
R4 einen durch R5 substituierten Phenylrest darstellt, wobei
R5 einen durch einen Rest R6 substituierten TetrazoI-5-ylrest darstellt, wobei R6 1-4C-Alkyl bedeutet, sowie die Salze dieser Verbindungen.
6. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , in denen die Wasserstoffatome in den Positionen 4a und 10b cis-ständig zueinander sind, sowie die Salze dieser Verbindungen.
7. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1 , die in den Positionen 4a und 10b dieselbe absolute Konfiguration haben, wie die als Ausgangsprodukt einsetzbare Verbindung (-)-cis-4-Amino-3-(3- ethoxy-4-methoxyphenyl)-1 -methylpiperidin Dihydrochlorid mit dem optischen Drehwert [α] ^ = -65,5°
(c=1 , Methanol).
8. Arzneimittel enthaltend eine oder mehrere Verbindungen nach Anspruch 1 zusammen mit den üblichen pharmazeutischen Hilfs- und/oder Trägerstoffen.
9. Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 1 zur Herstellung von Arzneimitteln für die Behandlung von Atemwegserkrankungen und/oder Dermatosen.
10. Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 1 zur Herstellung von Arzneimitteln für die Behandlung von Bluthochdruckerkrankungen verschiedener Genese und den damit zusammenhängenden Begleiterkrankungen.
PCT/EP1999/006139 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität WO2000012501A1 (de)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PT99968237T PT1109810E (pt) 1999-08-21 1999-08-21 N-oxidos de benzonaftiridina com actividade inibidora de pde3 e pde4
CA002342245A CA2342245A1 (en) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridine-n-oxides comprising a pde3 and pde4 inhibiting activity
SI9930644T SI1109810T1 (en) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridine-n-oxides comprising a pde3 and pde4 inhibiting activity
US09/744,974 US6436952B1 (en) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridine-N-oxides comprising a PDE3 and PDE4 inhibiting activity
JP2000567529A JP2002523505A (ja) 1998-08-31 1999-08-21 Ｐｄｅ３−及びｐｄｅ−４抑制作用を有するベンゾナフチリデン−ｎ−オキシド
DE59909760T DE59909760D1 (de) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität
AT99968237T ATE269331T1 (de) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität
AU59701/99A AU5970199A (en) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridine-n-oxides comprising a pde3 and pde4 inhibiting activity
EP99968237A EP1109810B1 (de) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP98116416.3 1998-08-31
EP98116416 1998-08-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2000012501A1 true WO2000012501A1 (de) 2000-03-09

Family

ID=8232548

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP1999/006139 WO2000012501A1 (de) 1998-08-31 1999-08-21 Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität

Country Status (11)

Country Link
US (1) US6436952B1 (de)
EP (1) EP1109810B1 (de)
JP (1) JP2002523505A (de)
AT (1) ATE269331T1 (de)
AU (1) AU5970199A (de)
CA (1) CA2342245A1 (de)
DE (1) DE59909760D1 (de)
DK (1) DK1109810T3 (de)
ES (1) ES2224745T3 (de)
SI (1) SI1109810T1 (de)
WO (1) WO2000012501A1 (de)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066476A1 (en) * 2001-02-21 2002-08-29 Altana Pharma Ag 6-phenylbenzonaphthyridines
US6630483B2 (en) 2000-01-11 2003-10-07 Altana Pharma Ag Phenanthridine-N-oxides
WO2006027345A2 (en) * 2004-09-08 2006-03-16 Altana Pharma Ag Novel 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
US7470704B2 (en) 2002-09-04 2008-12-30 Nycomed Gmbh Benzonaphthyridines
US7671068B2 (en) 2004-03-17 2010-03-02 Nycomed Gmbh N-(alkoxyalkyl) carbamoyl-substituted 6-phenyl-benzonaphthyridine derivatives and their use as PDE ¾ inhibitors
US7718668B2 (en) 2005-03-02 2010-05-18 Nycomed Gmbh Salts of 6-heterocycle substituted hexahydrophenanthridine derivatives
US7838521B2 (en) 2004-09-08 2010-11-23 Nycomed Gmbh 3-oxa-10-aza-phenanthrenes
US8003798B2 (en) 2004-03-03 2011-08-23 Nycomed Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US9468598B2 (en) 2002-02-20 2016-10-18 Astrazeneca Ab Oral dosage form containing a PDE 4 inhibitor as an active ingredient and polyvinylpyrrolidon as excipient

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1147087E (pt) 1999-01-15 2005-09-30 Altana Pharma Ag Feantridina-n-oxidos com actividade de inibicao de pde-iv
US6534519B1 (en) 1999-01-15 2003-03-18 Altana Pharma Ag Phenanthridine-N-oxides with PDE-IV inhibiting activity
CA2360386A1 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Beate Gutterer Polysubstituted 6-phenylphenanthridines with pde-iv inhibiting activity
WO2003101964A1 (fr) * 2002-05-31 2003-12-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Derive piperidine, procede de production, et utilisation
EP1581533A2 (de) * 2002-08-17 2005-10-05 ALTANA Pharma AG Benzonaphthyridine mit pde 3/4 hemmender wirkung
JPWO2006030975A1 (ja) * 2004-09-17 2008-05-15 武田薬品工業株式会社 ピペリジン誘導体およびその用途
WO2006066747A1 (en) * 2004-12-20 2006-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag 4-aminopiperidine derivatives
CA2601250C (en) 2005-03-16 2014-10-28 Nycomed Gmbh Taste masked dosage form containing roflumilast
WO2013109738A1 (en) 2012-01-17 2013-07-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Novel phosphodiesterase inhibitors and uses thereof
EP3022205B1 (de) 2013-07-17 2020-02-05 The Trustees of Columbia University in the City of New York Neuartige phosphodiesterasehemmer und verwendungen davon

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998021208A1 (en) * 1996-11-11 1998-05-22 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Benzonaphthyridines as bronchial therapeutics

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3899494A (en) 1970-05-13 1975-08-12 Sandoz Ltd Substituted 6-phenyl benzo-naphthyridines
SI0968211T1 (en) * 1997-03-07 2004-02-29 Altana Pharma Ag Tetrazole derivatives
JP2002513793A (ja) 1998-05-05 2002-05-14 ビイク グルデン ロンベルク ヒエーミツシエ フアブリーク ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクテル ハフツング 新規ｎ−オキシド

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998021208A1 (en) * 1996-11-11 1998-05-22 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Benzonaphthyridines as bronchial therapeutics

Cited By (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6630483B2 (en) 2000-01-11 2003-10-07 Altana Pharma Ag Phenanthridine-N-oxides
WO2002066476A1 (en) * 2001-02-21 2002-08-29 Altana Pharma Ag 6-phenylbenzonaphthyridines
US6936622B2 (en) 2001-02-21 2005-08-30 Altana Pharma Ag 6-phenylbenzonaphthyridines
US9468598B2 (en) 2002-02-20 2016-10-18 Astrazeneca Ab Oral dosage form containing a PDE 4 inhibitor as an active ingredient and polyvinylpyrrolidon as excipient
US8198295B2 (en) 2002-09-04 2012-06-12 Nycomed Gmbh Benzonaphthyridines
US7470704B2 (en) 2002-09-04 2008-12-30 Nycomed Gmbh Benzonaphthyridines
US9962377B2 (en) 2004-03-03 2018-05-08 Takeda Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US9387205B2 (en) 2004-03-03 2016-07-12 Takeda Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US9149479B2 (en) 2004-03-03 2015-10-06 Takeda Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US8003798B2 (en) 2004-03-03 2011-08-23 Nycomed Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US8883818B2 (en) 2004-03-03 2014-11-11 Takeda Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US8324391B2 (en) 2004-03-03 2012-12-04 Nycomed Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US8318944B2 (en) 2004-03-03 2012-11-27 Nycomed Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US8455653B2 (en) 2004-03-03 2013-06-04 Takeda Gmbh Hydroxy-6-heteroarylphenanthridines and their use as PDE4 inhibitors
US7671068B2 (en) 2004-03-17 2010-03-02 Nycomed Gmbh N-(alkoxyalkyl) carbamoyl-substituted 6-phenyl-benzonaphthyridine derivatives and their use as PDE ¾ inhibitors
US7589205B2 (en) 2004-09-08 2009-09-15 Nycomed Gmbh 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
US8324404B2 (en) 2004-09-08 2012-12-04 Nycomed Gmbh 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
AU2005281703B2 (en) * 2004-09-08 2011-11-17 Takeda Gmbh Novel 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
US7838521B2 (en) 2004-09-08 2010-11-23 Nycomed Gmbh 3-oxa-10-aza-phenanthrenes
WO2006027345A3 (en) * 2004-09-08 2006-08-31 Altana Pharma Ag Novel 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
WO2006027345A2 (en) * 2004-09-08 2006-03-16 Altana Pharma Ag Novel 3-thia-10-aza-phenanthrene derivatives
US8354535B2 (en) 2005-03-02 2013-01-15 Nycomed Gmbh Salts of 6-heterocycle substituted hexahydrophenanthridine derivatives
US8754218B2 (en) 2005-03-02 2014-06-17 Takeda Gmbh Salts of 6-heterocycle substituted hexahydrophenanthridine derivatives
US8829189B2 (en) 2005-03-02 2014-09-09 Takeda Gmbh Salts of 6-heterocycle substituted hexahydrophenanthridine derivatives
US7718668B2 (en) 2005-03-02 2010-05-18 Nycomed Gmbh Salts of 6-heterocycle substituted hexahydrophenanthridine derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP1109810B1 (de) 2004-06-16
JP2002523505A (ja) 2002-07-30
US6436952B1 (en) 2002-08-20
EP1109810A1 (de) 2001-06-27
SI1109810T1 (en) 2004-12-31
ATE269331T1 (de) 2004-07-15
DE59909760D1 (de) 2004-07-22
DK1109810T3 (da) 2004-10-18
AU5970199A (en) 2000-03-21
CA2342245A1 (en) 2000-03-09
ES2224745T3 (es) 2005-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1075477B1 (de) Neue Benzonaphtyridin-N-oxide
DE69719778T2 (de) Benzonaphthyridine als bronchialtherapeutika
EP1109810B1 (de) Benzonaphthyridin-n-oxide mit pde3 und pde4 inhibierender aktivität
DE69918422T2 (de) Phthalazinone als PDE3/4 Inhibitoren
EP0889886B1 (de) Neue in 6-position substituierte phenanthridine
DE69822162T2 (de) Neue tetrazolderivate
DE69817548T2 (de) Tetrazole derivate
EP0920426B1 (de) Neue thiazol-derivate mit phosphodiesterase inhibierender wirkung
DE69811492T2 (de) Benzonaphthyridine
EP1086096B1 (de) Benzamide mit tetrahydrofuranyloxy-substituenten als inhibitoren der phosphodiesterase 4
DE60019894T2 (de) Phenantrhridin-n-oxides mit pde-iv hemmender wirkung
DE69808099T2 (de) Substituierte 6-alkylphenanthridine
DE60025327T2 (de) 6-arylphenanthridine mit pde-iv hemmender wirkung
DE60202669T2 (de) 6-phenylbenzonaphthyidine
DE69916066T2 (de) Neue benzoxazole mit pde-hemmender wirkung
DE60108758T2 (de) 6-heteroarylphenanthridine
EP0937075B1 (de) Neue Imidazo- und Oxazolopyridine als Phosphodiesterase Inhibitoren.
DE60313331T2 (de) Neue benzonaphthyridine
EP1075476B1 (de) Benzimidazole und oxazole

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AL AU BA BG BR CA CN CZ EE GE HR HU ID IL IN JP KR LT LV MK MX NO NZ PL RO SG SI SK TR UA US VN YU ZA ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1999968237

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 09744974

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2342245

Country of ref document: CA

Ref country code: CA

Ref document number: 2342245

Kind code of ref document: A

Format of ref document f/p: F

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1999968237

Country of ref document: EP

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1999968237

Country of ref document: EP