WO2000008470A1 - Procede de classification de patients atteints de schizophrenie - Google Patents

Procede de classification de patients atteints de schizophrenie Download PDF

Info

Publication number
WO2000008470A1
WO2000008470A1 PCT/FR1999/001891 FR9901891W WO0008470A1 WO 2000008470 A1 WO2000008470 A1 WO 2000008470A1 FR 9901891 W FR9901891 W FR 9901891W WO 0008470 A1 WO0008470 A1 WO 0008470A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
patients
schizophrenia
kda
protein
epg
Prior art date
Application number
PCT/FR1999/001891
Other languages
English (en)
Inventor
Christian Neri
Original Assignee
Fondation Jean Dausset-Ceph
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fondation Jean Dausset-Ceph filed Critical Fondation Jean Dausset-Ceph
Publication of WO2000008470A1 publication Critical patent/WO2000008470A1/fr

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease

Definitions

  • the subject of the invention is a method of classifying patients suffering from schizophrenia and identifying a potential therapeutic target for this disease.
  • Schizophrenia is a multifactorial pathology of complex origin, probably both environmental and polygenic. Until now, the demonstration of this pathology in a patient is only possible after a clinical examination of the latter, that is to say by means of the symptoms he presents. However, the diagnosis of schizophrenia is delicate and always includes an element of uncertainty, it can indeed only be confirmed years later.
  • the inventors therefore set out to highlight one of the links involved in the molecular bases of this disease.
  • SAE can be detected using unmodified DSM-IIIR criteria (8-9) (3 e " 16 revised edition of the diagnostic and statistical manual for mental illness published by the American Psychiatry Association) and has the following main characteristics : (i) disease more serious than schizophrenia that appeared in adulthood (SAA or AOS in English for Adult Onset Schizophrenia), (ii) disruption of multiple areas of development before the onset of psychotic symptoms and, occasionally, progression brain abnormalities after the onset of psychosis (9-11), and (iii) clinical (9) and neurobiological continuity (11) with SAA. The study of SAE may therefore shed new light on susceptibility genetics to schizophrenia in general.
  • Lymphoblastoid cell lines from 32 unrelated patients with EAS recruited from across the United States (NIMH study in progress, see ref. 8) were tested by western blot analysis with the monoclonal antibody 1C2 initially generated against the "TATA-binding protein".
  • the 1C2 antibody specifically recognizes long polyglutamines (polyglutamines) (12). Above the detection threshold (33 to 35 glutamines), the intensity of the signal increases as a function of the number of glutamines (12). EPG signals are observed at approximately sixty kDa in eight of the eleven unrelated black American patients with EAS (Table).
  • the intensity of the 60 kDa band is strong in two patients (patients 14 and 18) of the eight positive patients with SAE, and attests to a strong EPG.
  • patients 14 and 18 In families nuclear (FNI and FNII or NFI and NFII in English) of patients 14 and 18, a low band at 60 kDa (attesting to a low EPG) is detected in certain parents and siblings not affected, which suggests that the lower band at 60 kDa is not associated with SAE ( Figures la and lb).
  • TBP is a 37.2 k protein that migrates to around 50 kDa. This suggests that the strong EPG signal at 60 kDa corresponds to a protein with an actual mass of around 47 kDa.
  • monoclonal antibody 1C2 it has previously been reported that normal HD protein is barely detectable after gross overexposure if the polyglutamine contains more than 27 units (12).
  • the strength of the strong EPG signal at 60 kDa is similar in these two patients, and the other patients with EAS for whom high DER scores correspond to Dir 1 sizes do not have a strong EPG signal of 60 kDa, which leaves assume that the polyglutamine tract detected in the candidate acid protein does not correspond to Dir 1 or other CAG expansions detected by DER in SAE.
  • the small number of SAE patients who test positive for the strong EPG signal in our study may reflect the fact that any candidate gene can provide a low level of sensitivity to a complex disease such as schizophrenia.
  • the present invention relates to a method of classifying patients suffering from schizophrenia comprising: - analysis of a protein extract prepared from at least one line of lymphoblastoid cells of said patients, by western blot with a monoclonal antibody, and
  • the classification method according to the invention may comprise an additional step consisting in determining the clinical profile of each selected patient (that is to say for which the analysis by means of the antibody revealed the existence of an acid protein of 52 to 57 kDa with an expansion of polyglutamines).
  • the aim of this additional step is to try to establish a correlation between the demonstration in certain patients of the existence of proteins with an expansion of polyglutamines and their clinical profile. It is a question here of trying on the one hand to better understand, at least in part, the causes and / or the development of schizophrenia and on the other hand to envisage with the most precise possible an effective treatment.
  • the clinical profile of a patient can in particular be determined by means of criteria chosen from the group comprising: the age of onset of the pathology, the severity of the pathology, the patient's response to certain drugs, etc. in itself, the polyglutamine expansion / schizophrenia association was established in the context of the present invention and therefore, the proteins having said expansions constitute a therapeutic target, even partial, in the context of a treatment for schizophrenia.
  • the present invention therefore also relates to the use of a compound or a molecule (chosen according to the technique used and the aim to be achieved) for the preparation of a medicament targeting proteins containing polyglutamine expansions and / or the biochemical pathways involved in the synthesis, function and degradation of these proteins, said drug being intended for the treatment of schizophrenia.
  • FIG. 1 Detection of EPG in CAS. Electrophoresis is carried out on 50 ⁇ g (polyacrylamide gels with gradients from 4 to 20%) or 60 ⁇ g (long polyacrylamide gels at 10%) of protein from LCL extracts (see Table). (a) A strong EPG signal at approximately 60 kDa is detected by the monoclonal antibody 1C2 in patients (with SAE, black Americans) 14 (nuclear family NFI, plate above left) and "18 (nuclear family NFII, board at the top right; there is no LCL for the father of patient 18, the latter being deceased.
  • NFI neurotrophic factor
  • LCL LCL from 32 unrelated EAS patients (recruited from across the United States) for whom a detailed clinical description was previously published (8-10-11); (2) LCL from 38 unrelated American black witnesses, including 10 healthy individuals (NTMH; between 9 and 50 years old; no history of psychiatric illness) from the Washington area and 28 individuals not affected (NIGMS Cell Repository, Coriell Institute for Medical Research, NY, USA: between 2 and 58 years old; regional origin in the United States not identified) presenting pathological mutations for diseases other than psychiatric diseases, in particular ataxia telangiectase, cystic fibrosis, mental retardation of fragile sites, cryptophthalmia, hemoglobin loci mutations, and disorders metabolism of nucleotides and nucleic acids and carbohydrates, and (3) LCL from three families of healthy white Americans (CEPH Utah genealogies 1334, 1344 and 1420; 53 individuals in total).
  • Total cell extracts without detergent are prepared from cells in the division phase.
  • Cell extracts are obtained as indicated above (12) by homogenization in 50 mM Tris-HCl pH 8.0 of 10% glycerol (v / v), 1 mM EDTA, 5 mM KCI, PMSF 1 mM, 2 ⁇ g / ml of peptin-Leu and 4 ⁇ g / ml of protein A.
  • the protein concentration of the LCL extracts is determined using the reagent with bicinchoninic acid (BCA) (Pierce) in accordance with the manufacturer's recommendations. The aliquots are stored at -80 ° C. until use.
  • BCA bicinchoninic acid
  • 1D and 2D gel electrophoresis and electroblotting 1D gel electrophoresis is carried out as follows.
  • Total cell extracts of LCL 50 ⁇ g of protein per line
  • SDS-PAGE 4-20% acrylamide / bisacrylamide gradient gels (39/1) (Biorad).
  • total cell extracts of LCL 60 ⁇ g of protein / line
  • SDS-PAGE 4-20% acrylamide / bisacrylamide gradient gels (39/1) (Biorad).
  • SDS-PAGE 4-20% acrylamide / bisacrylamide gradient gels (39/1) (Biorad).
  • For high resolution 1D gel electrophoresis total cell extracts of LCL (60 ⁇ g of protein / line) are analyzed by SDS-PAGE using long gels containing 7 or 10% acrylamide / bisacrylamide (39/1 ) (CBS Scientific Co.).
  • P 2D gel electrophoresis is carried out as follows: LCL protein samples (500 ⁇ g) are analyzed by electrophoresis on sodium dodecylsulfate and polyacrylamide gels by SDS-isoelectric focusing (DEF) using 12% polyacrylamide gels 20 x 20 cm (Pharmacia- Biotech) in accordance with the manufacturer's recommendations. The relative mass (Mr) of the proteins is established using molecular weight standards supplied by Sigma. SDS-PAGE gels are stained with silver as indicated above (23).
  • Lyophilized 1C2 monoclonal antibody from mouse ascites fluid is resuspended in sterile distilled water, aliquots are prepared and stored at -20 ° C until use.
  • the immunosounding and detection are carried out as indicated above (12) with slight modifications.
  • the membranes are blocked with skimmed milk powder at 5% and Tween 0.02% overnight at 4 ° C, allowed to incubate in skimmed milk powder at 0.5% with the monoclonal antibody 1C2 ( 1/2000) for two hours at room temperature and treated with anti-mouse serum conjugated to horseradish peroxidase (Amersham), at 1/4000 in 0.5% milk without fat for one hour at temperature ambient.
  • the membranes are treated using ECL + TM detection in accordance with the manufacturer's recommendations (Amersham).
  • the blots are exposed to MP hyperfilms (Amersham) for 30 s to 1 h to examine background signals due to the presence of normal proteins containing polyglutamine segments.
  • the detection profiles are interpreted by comparative analysis of band intensities for the specifically reactive proteins, the protein binding the TATA sequence (TBP) for which the main allele corresponds to 38 glutamines, and the ASC2 proteins (22/43 glutamines ) and ASC3 (23/72 glutamines) from heterozygous patients at these loci. These experiments are repeated at least three times. Selection criteria and testing of candidate genes containing CAG repeat triplets
  • Genbank database version no. 103
  • Genbank database version no. 103
  • BLASTP software is used with a request sequence (Gln) 25 as indicated previously (15). All the selected sequences are chosen to ensure that all the polyglutamines having at least 8 to 10 consecutive units are extracted and then the human and unique sequences are sorted.
  • the theoretical molecular mass and the isoelectric focusing point (pi) of each of the selected proteins are determined using a program available at the following URL address: http://www-biol.univ-mrs.fr.
  • one of the proteins, DAN26 has a theoretical mass in the range of 50 to 60 kDa (52.5 kDa) and a theoretical pl in the range between 4 and 6 (pi 4.8) and has been retained for a PCR test in the FNI family of SAE.
  • CAG / CTG seven repetitions of CAG / CTG are also tested (GCT1C9, GCT4B10, GCT5E11, GCT16E06, GCT10D04, GCTIOCIO and GCT10H06) isolated from genomic DNA and made up of more than 15 consecutive units (18).
  • the selection and use of primers suitable for the detection of CAG expansion in DNA from the FNI family of SAE are carried out as indicated previously (15).

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

L'invention concerne un procédé de classification de patients atteints de schizophrénie comprenant: l'analyse d'un extrait protéique préparé à partir d'au moins une lignée de cellules lymphoblastoïdes desdits patients, par western blot avec un anticorps monoclonal, et la sélection desdits patients pour lesquels l'analyse a révélé l'existence d'une protéine acide de 52 à 57 kDa qui présente une expansion de polyglutamines.

Description

PROCEDE DE CLASSIFICATION DE PATIENTS ATTEINTS DE SCHIZOPHRENIE
L'invention a pour objet un procédé de classification de patients atteints de schizophrénie et l'identification d'une cible thérapeutique potentielle pour cette maladie.
La schizophrénie est une pathologie multifactorielle d'origine complexe probablement à la fois environnementale et polygénique. Jusqu'à présent, la mise en évidence de cette pathologie chez un patient n'est possible qu'à l'issue d'un examen clinique de ce dernier, c'est-à- dire au moyen des symptômes qu'il présente. Cependant, le diagnostic de la schizophrénie est délicat et comprend toujours une part d'incertitude, il peut en effet n'être confirmé que des années plus tard.
Les inventeurs se sont donc attachés à mettre en évidence l'un des maillons impliqués dans les bases moléculaires de cette maladie.
L'expansion de polyglutamines dans les protéines (EPG ou PGE en anglais pour Polyglutamine expansion) codée par une expansion de triplets répétés CAG est à la base de huit maladies neurodégéneratives héréditaires parmi lesquelles l'atrophie musculaire spino-bulbaire, l'ataxie spino-cérébelleuse 1 (ASC 1), l'ASC 2, l'ASC 3, l'ASC 6, l'ASC 7, l'atrophie dentorubrique-pallidoluysienne, et la chorée de Huntington (CH ou Hd en anglais pour Huntington' s disease) (1,2). Des expansions CAG ont également été décrites dans le cas de la schizophrénie (3-5), ce qui laisse supposer que l'EPG joue un rôle. La mise en évidence d'expansion CAG en schizophrénie est difficile à répliquer (6), ce qui suggère que le locus et l'hétérogénéité allélique en schizophrénie peuvent entraîner une hérédité complexe pour laquelle les associations génétiques sont difficiles à détecter (7). A cet égard, l'utilisation de familles nucléaires comprenant un patient atteint par une forme précoce et/ou grave de schizophrénie est considérée comme une méthode de plus en plus séduisante pour l'identification de gènes de susceptibilité (7). Les inventeurs ont recherché une EPG dans la schizophrénie apparue dans l'enfance (SAE ou COS en anglais pour Childhood Onset Schizophrenia), forme rare et grave de la maladie (8-11). La SAE peut être décelée à l'aide des critères DSM-IIIR non modifiés (8-9) (3e"16 édition révisée du manuel diagnostique et statistique des maladies mentales édité par l' American Psychiatrie Association) et présente les caractéristiques principales suivantes : (i) maladie plus grave que la schizophrénie apparue à l'âge adulte (SAA ou AOS en anglais pour Adult Onset Schizophrenia), (ii) perturbation de multiples domaines du développement avant l'apparition de symptômes psychotiques et, occasionnellement, la progression d'anomalies cérébrales après l'apparition de la psychose (9-11), et (iii) continuité clinique (9) et neurobiologique (11) avec la SAA. L'étude de la SAE peut donc apporter de nouveaux éclairages sur la susceptibilité génétique à la schizophrénie en générale.
Des lignées de cellules lymphoblastoïdes (LCL) de 32 patients sans lien de parenté atteints de SAE recrutés sur l'ensemble des Etats- Unis (étude NIMH en cours, voir réf. 8) ont été testées par analyse western blot avec l'anticorps monoclonal 1C2 initialement généré contre la « TATA-binding protein ». L'anticorps 1C2 reconnaît de manière spécifique les polyglutamines longues (polyglutamines) (12). Au-dessus du seuil de détection (33 à 35 glutamines), l'intensité du signal augmente en fonction du nombre de glutamines (12). On observe des signaux EPG à soixante kDa environ chez huit des onze patients noirs américains sans lien de parenté atteints de SAE (Tableau). L'intensité de la bande à 60 kDa est forte chez deux patients (patients 14 et 18) des huit patients positifs atteints de SAE, et atteste d'une forte EPG. Dans les familles nucléaires (FNI et FNII ou NFI et NFII en anglais) des patients 14 et 18, on détecte une faible bande à 60 kDa (attestant d'une faible EPG) chez certains parents et frères et sœurs non atteints, ce qui laisse supposer que la bande plus faible à 60 kDa n'est pas associée à SAE (Figures la et lb). En utilisant des gels SDS-PAGE (10 %) longs à haute résolution, la bande faible migre clairement à une position légèrement supérieure à celle de la bande forte dans FNI (Figure la, planche du bas), ce qui indique que le signal faible ne correspond pas à la même protéine avec un domaine polyglutaminique plus court, et que les signaux EPG faibles et fort sont le fait de deux protéines différentes. Les profils de détection sont reproduits pour FNI et FNII en utilisant trois lots différents d'extraits de LCL.
Les segments polyglutaminiques longs dans les protéines humaines induisent un déplacement de migration vers des poids moléculaires élevés (12). Par exemple, la TBP est une protéine de 37,2 k qui migre à 50 kDa environ. Ceci laisse supposer que le signal EPG fort à 60 kDa correspond à une protéine d'une masse réelle de 47 kDa environ. Lorsqu'elle est sondée avec l'anticorps monoclonal 1C2, il a précédemment été rapporté que la protéine HD normale est à peine décelable après une surexposition brute si la polyglutamine contient plus de 27 unités (12). En utilisant des gels SDS-PAGE (7 %, 10 %) avec une migration prolongée et une longue exposition, la protéine de 60 kDa qui réagit à l'anticorps monoclonal 1C2 chez le patient 14 atteint de SAE n'est pas décelée sous forme de doublet (données non présentées), ce qui laisse supposer que la forme allélique normale de la protéine en question contient moins de 28 glutamines (12). Dans des expériences de contrôle, aucune bande à 60 kDa n'est observée chez trois familles blanches en bonne santé (généalogies Utah CEPH 1334, 1344 et 1420 ; 53 individus au total ; données non présentées) pour lesquelles une expansion de CAG avait précédemment été rapportée (13). 38 témoins noirs américains sans antécédents de maladies psychiatriques ont également été testés (voir METHODES, ci-après). A l'exception de onze d'entre eux (présentant une faible bande à 60 kDa), ces individus sont négatifs aux signaux EPG à 60 kDa, comme l'illustre la Figure le. Afin de caractériser davantage la protéine qui porte le signal
EPG fort, une électrophorèse sur gel bidimensionnel (2D) (gradient p/ 10 à 3) a été effectuée. En utilisant deux lots différents d'extrait de LCL du patient 14 atteint de SAE, la comparaison de l'EEF/SDS-PAGE coloré au nitrate d'argent (Figure 2a) avec des immunotransferts 1C2 (Figure 2b) laisse supposer que l'EPG est portée par une protéine acide (point d'isoélectrofocalisation pl] de 4 environ). Les expériences d' électrophorèse sur gel en deux dimensions entraînent également une estimation plus précise (52 à 57 kDa) de la masse relative ( r) de cette protéine. Aucun signal EPG n'est détecté chez le patient 10 atteint de SAE et négatif par l'EPG (données non présentées). On ne détecte pas non plus de signal EPG chez le patient 16 atteint de SAE, ce qui laisse supposer que la bande faible de 60 kDa correspond à une protéine (pi en dehors de la plage testée) différente de la protéine acide détectées chez les patients 14 et 18 atteints de SAE (données non présentées). Cette observation corrobore les observations précédemment effectuées dans la FNI par électrophorèse sur gel 1D à grande résolution (voir le paragraphe précédent).
Afin d'identifier le gène de la polyglutamine étendue chez les patients 14 et 18 atteints de SAE, 27 protéines portant 8-34 glutamines consécutives ont été choisies par ciblage informatique, et une protéine acide, DAN26 (14) (52,5 kDa, p/ 4,8) a été retenue pour un test PCR dans la famille SAE FNI(voir METHODES). Vingt-sept triplets répétés CAG trouvés dans des ADN complémentaires (15-17) et des triplets répétés CAG/CTG isolés à partir d'ADN génomique (18) constitués de plus de 10 à 15 unités consécutives ont également été testés pour expansion dans la FNI (voir METHODES). Tous les candidats testés présentent des allèles (répétition CAG) non étendus et on n'observe aucune différence de taille de ces allèles entre le patient 14 et ses parents ou frères et sœurs (données non présentées). En conséquence, tous les candidats testés ont été exclus. Ceci laisse supposer que la protéine cible détectée chez les patients 14 et 18 n'est pas représentée dans les séquences d'ADN de Genbank qui contiennent de longues répétitions de CAG (> 10 à 15 unités). L'essai d'autres candidats choisis selon des critères moins rigoureux et/ou l'analyse aminoacide détaillée de la protéine cible pourrait permettre le clonage de ce gène.
La détection d'expansions CAG (3-5) et l'identification de loci de susceptibilité (19) laissent supposer que la schizophrénie a une base génétique. Ce qui pourrait être hérité, dans la schizophrénie, est une prédisposition à développer la maladie (7-19), et l'on considère que l'utilisation de familles nucléaires comprenant un patient atteint d'une forme précoce et/ou grave de la maladie constitue une variante intéressante à l'approche des gènes candidats pour définir la susceptibilité génétique (7). Une apparition plus précoce et/ou une plus grande gravité de la maladie peuvent en effet refléter une plus grande transmission héréditaire, et les membres non atteints de familles nucléaires fournissent des témoins bien appariés. En utilisant l' électrophorèse sur gel 1D et 2D et des expériences d'immunotranfert pour révélation à l'aide de l'anticorps monoclonal 1C2, un signal EPG fort a été détecté correspondant à une protéine acide vraisemblablement nouvelle de 52 à 57 kDa, et a été observé de manière spécifique chez les patients nord américains 14 et 18 atteints de SAE. Etant donné que l'intensité du signal EPG chez les patients 14 et 18 atteints de SAE est nettement plus forte que celle observée pour la bande de la TBP et pour la bande faible à 60kDa, et étant donné l'absence de bruits de fond, il est peu probable que le signal EPG fort résulte de réactions croisées de l'anticorps monoclonal 1C2 avec des polyglutamines contenant moins de 33 à 35 glutamines. La faible bande à 60 kDa observée chez certains membres non atteints des familles des patients 14 et 18 et chez les autres témoins testés correspond vraisemblablement à une protéine différente, comme l'indiquent les expériences d' électrophorèse sur gel 1D et 2D à grande résolution. Etant donné qu'aucun signal EPG fort n'a été détecté chez les témoins appariés suivant l'âge sans antécédents de troubles psychiatriques (en particulier une des sœurs du patient 14 ; voir Figure 1, piste 4), il est peu probable qu'il y ait des différences dues à l'âge dans l'expression de la protéine acide de 52 à 57 kDa observée avec un pic pendant la puberté. Ainsi, ces données indiquent que la protéine acide de 52 à 57 kDa est un candidat potentiellement intéressant pour la SAE et nécessitent trois lignes de recherches supplémentaires afin de déterminer si cette protéine peut oui ou non être impliquée dans la schizophrénie. Premièrement, le nombre de LCL actuellement disponibles pour des patients atteints de SAE est limité, et les études de réplication chez d'autres patients atteints de SAE sont justifiées (8). En second lieu, la notion de continuité clinique de la SAE à la SNA (9-10) exige de rechercher l'EPG détectée dans cette étude dans la schizophrénie en général. L'EPG ne semble pas se produire chez les patients schizophrènes présentant des expansions CAG/CTG de cinquante unités ou plus (20). Récemment, il a été rapporté que les allèles les plus longs (> 19 à 20 unités) de répétition de CAG (codant un domaine de polyglutamine polymorphe constitué de 12 à 28 unités) dans le gène hSKCa3 (canal potassique) sont sur-représentés chez des patients schizophrènes (21), ce qui laisse supposer que les polyglutamines modérément agrandies jouent un rôle dans la schizophrénie. Finalement, il est intéressant de noter qu'en utilisant l'anticorps monoclonal 1C2, on observe des signaux EPG dans la plage comprise entre 50 et 60 kDa chez deux patients blancs sans lien de parenté atteints de SAA (données non montrées), ce qui suggère en outre que les protéines portant des polyglutamines polymorphes pourraient être des candidats à la schizophrénie en général. Tandis que l'utilisation de la technique 'de détection d'expansion CAG (13) (DER, RED en anglais) a permis la détection de plus grandes répétitions de CAG/CTG chez les patients schizophrènes (3-5), des répétitions de CAG/CTG longues et instables ont également été identifiées chez des individus normaux, notamment la répétition intronique CTG18.1 dans le gène SEF2-1 et la répétition transcrite ERDAl/Dir 1 (22). Il s'est avéré que de la majorité des expansions de CAG détectées par DER dans SAE (22) est due aux expansions CAG au niveau de ces deux loci. En particulier, le patient 14 atteint de SAE a un score DER de 90 unités et une taille Dir 1 de 95 unités, et le patient 18 atteint de SAE a un score DER de 60 unités et une taille Dir 1 de 57, la répétition CTG18.1 étant normale (< 37 unités) chez ces deux patients (données non montrées). L'intensité du signal EPG fort à 60 kDa est similaire chez ces deux patients, et les autres patients atteints de SAE pour lesquels des scores DER élevés correspondent à des tailles Dir 1 ne présentent pas de signal EPG fort de 60 kDa, ce qui laisse supposer que le tractus polyglutaminique détecté dans la protéine acide candidate ne correspond pas à Dir 1 ou à d'autres expansions CAG détectées par DER en SAE. En conclusion, le faible nombre de patients atteints de SAE qui s'avèrent positifs au signal EPG fort dans notre étude peut refléter le fait que tout gène candidat peut apporter une faible part de sensibilité à une maladie complexe telle que la schizophréenie. A cet égard, on peut s'attendre à ce que les études supplémentaires mentionnées ci-dessus, sur des effectifs plus importants et/ou plus diversifiés, apportent un éclairage plus approfondi sur le rôle éventuel de la protéine détectée dans cette étude dans la schizophrénie.
Ainsi, la présente invention concerne un procédé de classification de patients atteints de schizophrénie comprenant : - l'analyse d'un extrait protéique préparé à partir d'au moins une lignée de cellules lymphoblastoïdes desdits patients, par western blot avec un anticorps monoclonal, et
- la sélection desdits patients pour lesquels l'analyse a révélé l'existence d'une protéine acide de 52 à 57 kDa présentant une expansion de polyglutamines. Cette expansion de polyglutamines est à associer à un signal fort correspondant à la reconnaissance des polyglutamines par un anticorps monoclonal spécifique, comme indiqué précédemment. Ce procédé peut notamment être mis en œuvre au moyen d'un anticorps monoclonal choisi dans le groupe comprenant : 1C2 (12) commercialisé par Eurogentec, France ; 1F8 (24) qui est un anticorps monoclonal généré contre TBP et présentant des propriétés similaires à celles de l'anticorps monoclonal 1C2, ou tout autre anticorps de préférence monoclonal spécifique des expansions de polyglutamines.
En effet, tous ces anticorps monoclonaux présentent la particularité commune d'être spécifiques des EPG.
Plus particulièrement, le procédé de classification conforme à l'invention peut comprendre une étape supplémentaire consistant à déterminer le profil clinique de chaque patient sélectionné (c'est-à-dire pour lequel l'analyse au moyen de l'anticorps a révélé l'existence d'une protéine acide de 52 à 57 kDa présentant une expansion de polyglutamines).
En effet, le but de cette étape supplémentaire est d'essayer d'établir une corrélation entre la mise en évidence chez certains patients de l'existence de protéines présentant une expansion de polyglutamines et leur profil clinique. Il s'agit là d'essayer d'une part de mieux Comprendre, au moins en partie, les causes et/ou le développement de la schizophrénie et d'autre part d'envisager avec le plus de précision possible un traitement efficace. Le profil clinique d'un patient peut notamment être déterminé au moyen de critères choisis dans le groupe comprenant : l'âge d'apparition de la pathologie, la sévérité de la pathologie, la réponse du patient à certains médicaments... Quoiqu'il en soit, l'association expansion des polyglutamines/schizophrénie a été établie dans le cadre de la présente invention et de ce fait, les protéines présentant lesdites expansions constituent une cible thérapeutique, même partielle, dans le cadre d'un traitement de la schizophrénie. En fait, cette notion de cible s'étend également à toutes les voies biochimiques impliquées dans la synthèse, la fonction et la dégradation de ces protéines. Ainsi, que l'on cherche à réprimer l'expression de gènes codants pour les protéines présentant une expansion de polyglutamines ou que l'on cherche au contraire à surexprimer ce gène, l'homme du métier est à même de mettre en oeuvre les différents techniques permettant d'obtenir l'un ou l'autre de ces résultats en agissant directement ou indirectement sur les protéines en question y compris au niveau des séquences nucléotidiques (ADN ou ARN) correspondant auxdites protéines.
La présente invention a donc également pour objet l'utilisation d'un composé ou d'une molécule (choisi(e) en fonction de la technique utilisée et du but à atteindre) pour la préparation d'un médicament ayant pour cible les protéines contenant des expansions de polyglutamines et/ou les voies biochimiques impliquées dans la synthèse, la fonction et la dégradation de ces protéines, ledit médicament étant destiné au traitement de la schizophrénie.
Figure 1. Détection de l'EPG dans les cas de la SAE. On effectue une électrophorèse sur 50 μg (gels de polyacrylamide avec gradients de 4 à 20 %) ou 60 μg (gels de polyacrylamide longs à 10 %) de protéine provenant d'extraits de LCL (voir le Tableau). (a) Un signal EPG fort à 60 kDa environ est détecté par l'anticorps monoclonal 1C2 chez les patients (atteints de SAE, noirs américains) 14 (famille nucléaire NFI, planche en haut à gauche) et "18 (famille nucléaire NFII, planche en haut à droite ; on ne dispose pas de LCL du père du patient 18, celui-ci étant décédé). Les parents ou les frères et sœurs de ces deux patients SAE (aucun antécédent de maladies psychiatriques excepté le père du patient 14, atteint de SAA) sont négatifs pour la bande à environ 60 kDa (NFI, bande 2) ou présentent un signal EPG faible à environ 60 kDa (NFI, bandes 1 à 4 à 6). L'analyse sur gel SDS-PAGE (10 %) haute résolution (NFI, planche du bas, vue agrandie du gel) indique que la bande faible à 60 kDa réagissant avec l'anticorps monoclonal 1C2 (bandes 1 et 4 à 6) migre à une position plus élevée que la bande forte à 60 kDa (bande 3). Les frères et sœurs du patient 14 sont âgés de 13,9 (bande 4), 23,3 (bande 5) et 23,9 ans (bande 6) au moment du prélèvement sanguin. Les patients NFI, SCA2 (bande 7) et SCA3 (bande 8) sont montrés comme étant des témoins EPG positifs ; le nombre de répétitions de Gin des allèles de la TBP dans le NFI a été déterminé par analyse PCR ainsi que décrit précédemment (15) et il est compris entre 33 et 37 unités. Les bandes NFII 1 et 2 montrent respectivement le patient SAE 14 (pour comparaison avec le signal EPG fort à 60 kDa) et sa mère (négative pour la bande à 60 kDa).
(b) Aucun signal EPG à 60 kDa (pateints 10 et 32) ou un signal EPG faible à 60 kDa (pateints 16, 5, 30, 29 et 13) est détecté par l'anticorps monoclonal 1C2 chez les 30 autres patients SAE testés (voir le Tableau). Dernière bande à gauche : patient SAE 14 (pour comparaison avec le signal EPG fort à 60 kDa).
(c) Aucun signal EPG à 60 kDa (bandes 2, 3, 4, 5 et 7) ou un signal EPG faible à 60 kDa (bandese 6 et 8) est détecté par l'anticorps monoclonal 1C2 chez des sujets noirs américains sains. Bande, 1 : patient 14 SAE (pour comparaison avec le signal EPG fort à 60 kDa). Figure 2. Caractérisation de la protéine portant l'EPG chez le patient 14 SAE.
(a) EEF/SDS-PAGE coloré à l'argent (moitié droite du gel représentée) de protéines provenant d'extrait de LCL (500 μg de protéine) de patient SAE. La TBP n'est pas détectée car cette protéine a un p/ théorique supérieur ou égal à 10.
(b) Immunoblot correspondant au gel 2D et révélation avec l'anticorps monoclonal 1C2. Flèche noire (planches 1 et B) = protéine immunoréactive vis-à-vis de l'anticorps monoclonal 1C2 (Mr = 52-57 kDa, p/= 4 environ)
TABLEAU
EPG chez des patients américains atteints de SAE
Figure imgf000014_0001
Légende du tableau
Trente-deux patients atteints de SAE ont été testés par analyse western blot avec l'anticorps monoclonal 1C2 pour rechercher une EPG (voir la figure 1). Huit des 11 patients noirs américains atteints de SAE se sont révélés positifs pour l'EPG.
* F = sexe féminin, M = sexe masculin
* Mτ ou masse relative approximative, - = négatif, + = faible intensité non associée à la maladie (également observé chez des sujets noirs américains non atteints par la SAE),
++ = forte intensité (observée uniquement chez les patients atteints de SAE).
METHODES
Origines et préparation des extraits de LCL
Nous avons analysé les échantillons suivants : (1) LCL provenant de 32 patients atteints de SAE sans lien de parenté (recrutés dans tous les Etats-Unis) pour lesquels une description clinique détaillée a précédemment été publiée (8-10-11) ; (2) LCL provenant de 38 témoins noirs américains sans lien de parenté, parmi lesquels 10 individus en bonne santé, (NTMH ; entre 9 et 50 ans ; pas d'antécédents de maladies psychiatriques) provenant de la région de Washington et 28 individus non atteints (NIGMS Cell Repository, Coriell Institute for Médical Research, NY, USA : entre 2 et 58 ans ; origine régionale aux Etats-Unis non identifiée) présentant des mutations pathologiques pour des maladies autres que des maladies psychiatriques, notamment l'ataxie télangiectase, la fibrose kystique, l'arriération mentale des sites fragiles, la cryptophtalmie, des mutations des loci d'hémoglobine, et des troubles du métabolisme des nucléotides et des acides nucléiques et des hydrates de carbone, et (3) LCL provenant de trois familles d'américains blancs en bonne santé (généalogies CEPH Utah 1334, 1344 et 1420 ; 53 individus au total). On prépare des extraits cellulaires totaux sans détergent à partir de cellules en phase de division. On obtient des extraits cellulaires comme indiqué précédemment (12) par homogénéisation dans du Tris- HCI 50 mM pH 8,0 du glycérol à 10 % (v/v), de l'EDTA 1 mM, du KCI 5 mM, du PMSF 1 mM, 2 μg/ml de peptine-Leu et 4 μg/ml de protinine A. On détermine la concentration en protéine des extraits de LCL en utilisant le réactif à l'acide bicinchoninique (BCA) (Pierce) conformément aux recommandations du fabricant. On stocke les aliquotes à - 80°C jusqu'à l'utilisation.
Electrophorèse sur gel 1D et 2D et électroblotting On effectue l' électrophorèse sur gel 1D comme suit. On analyse des extraits cellulaires totaux de LCL (50 μg de protéine par ligne) par SDS-PAGE en utilisant des gels à gradient d'acrylamide/bisacrylamide à 4-20 % (39/1) (Biorad). Pour l' électrophorèse sur gel 1D à grande résolution, on analyse des extraits cellulaires totaux de LCL (60 μg de protéine/ligne) par SDS-PAGE en utilisant des gels longs à 7 ou 10 % d'acrylamide/bisacrylamide (39/1) (CBS Scientific Co.). On effectue P électrophorèse sur gel 2D comme suit : on analyse des échantillons de protéine de LCL (500 μg) par électrophorèse sur gels de dodécylsulfate de sodium et polyacrylamide par SDS-d'isoélectrofocalisation (DEF) en utilisant des gels de polyacrylamide à 12 % de 20 x 20 cm (Pharmacia- Biotech) conformément aux recommandations du fabricant. On établit la masse relative (Mr) des protéines en utilisant des étalons de masse moléculaire fournis par Sigma. On colore à l'argent les gels SDS-PAGE comme indiqué précédemment (23). On effectue un électroblotting des membranes Hybond N+ conformément aux procédures standards sur un système Biorad (électrophorèse sur gel ID) et sur les systèmes Multiphor II et Novablot de Pharmacia-Biotech (électrophorèse sur gel 2D) conformément aux recommandations des fabricants.
Immunodétection de l'EPG
On remet en suspension de l'anticorps monoclonal 1C2 lyophilisé provenant de fluide ascite de souris dans de l'eau distillée stérile, on prépare des aliquotes que l'on stocke à - 20°C jusqu'à l'utilisation. On effectue Pimmunosondage et la détection comme indiqué précédemment (12) avec de légères modifications. On bloque les membranes avec du lait en poudre écrémé à 5 % et du Tween 0,02 % jusqu'au lendemain à 4°C, on laisse incuber dans du lait en poudre écrémé à 0,5 % avec l'anticorps monoclonal 1C2 (1/2000) pendant deux heures à la température ambiante et on traite avec du sérum anti-souris conjugué à de la peroxydase de raifort (Amersham), à 1/4000 dans 0,5 % de lait sans matières grasses pendant une heure à température ambiante. Après avoir été lavées, les membranes sont traitées en ayant recours à la détection ECL+™ conformément aux recommandations du fabricant (Amersham). On expose les blots à des hyperfilms MP (Amersham) pendant 30 s à 1 h afin d'examiner les signaux de fond dus à la présence de protéines normales contenant des segments de polyglutamine. On interprète les profils de détection par analyse comparative d'intensités de bande pour les protéines réagissant de manière spécifique, la protéine liant la séquence TATA (TBP) pour laquelle le principal allèle correspond à 38 glutamines, et les protéines ASC2 (22/43 glutamines) et ASC3 (23/72 glutamines) provenant de patients hétérozygotes au niveau de ces loci. On répète ces expériences au moins trois fois. Critères de sélection et test de gènes candidats contenant des triplets répétés CAG
On recherche dans la base de données Genbank (version n° 103) la présence de séquences codantes entières connues ou supposées coder pour des protéines avec polyglutamines. On utilise le logiciel BLASTP avec une séquence de requête (Gln)25 comme indiqué précédemment (15). On choisit toutes les séquences sélectionnées pour s'assurer que toutes les polyglutamines ayant au moins 8 à 10 unités consécutives sont extraites puis on trie les séquences humaines et uniques. Ceci ce traduit par la sélection de 27 candidats portant 8 à 28 glutamines consécutives (à l'exception de la TBP qui présente 34 glutamines consécutives) : huit protéines de maladies neurodégéneratives à EPG, 15 protéines normales (qui incluent des facteurs de transcription tels que AJB1/Rac2, ASH1 ATBF1-A, hSNF2a, N-Oct-3, SATB1, TBP, et l'homologue polyhoméolytique humain 1 HPH1, la protéine homéobox humaine HLX1, la polymérase gamma polyglutamine et la protéine du méningiome MN1), et quatre nouvelles protéines (DAN26, DAN15, AAD10 et AAD14) préalablement identifiées par immunocriblage avec l'anticorps monoclonal 1C2 d'une bibliothèque d'ADN complémentaire construite à partir d'une LCL de patient SCA7 (14). On détermine la masse moléculaire théorique et le point d'isoélectrofocalisation (pi) de chacune des protéines sélectionnées en utilisant un programme disponible à l'adresse URL suivante : http://www-biol.univ-mrs.fr. En particulier, une des protéines, DAN26, présente une masse théorique dans la plage de 50 à 60 kDa (52,5 kDa) et un pl théorique dans la plage comprise entre 4 et 6 (pi 4,8) et a été retenue pour un test PCR dans la famille FNI de SAE. On teste également des répétitions CAG polymorphes et/ou longues (n=20) constituées de plus de dix unités consécutives et précédemment trouvées dans des bibliothèques d'ADN complémentaire humain (15-17), notamment 2.116, 2.119, i.181, i.182 (15), 12501r, bO1500t, et g02502r (16), et CTGla, CTG3a, CTG4a, CTG7a, CTG20a, CAGF9, F28, Hl, H16, H26, H32, H38, H39, H44, H45, L69, L85, L114, L234 et L237, dont certains sont supposés coder pour un segment polyglutaminique (17). Finalement, on teste également sept répétitions de CAG/CTG (GCT1C9, GCT4B10, GCT5E11, GCT16E06, GCT10D04, GCTIOCIO et GCT10H06) isolées à partir d'ADN génomique et constituées de plus de 15 unités consécutives (18). La sélection et l'utilisation d'amorces adaptées à la détection d'expansion de CAG dans PADN de la famille FNI de SAE sont réalisées comme indiqué précédemment (15).
REFERENCES
1. Koshy B.T. and Zoghbi H. Y. The CAG/polyglutamine tract- disease : gène products and molecular pathogenesis. Brain Pathol. 1997 ; 7 : 927-942.
2. David G., Abbas N., Stevanin G., Durr A., Yvert G, Weber C, Imbert G, Saudou F., Antoniou E., Drabkin H., Gemmill R., Giunti P., Benomar A., Wood N., Ruberg M., Agid Y., Mandel J.L., and Brice A. Cloning of the SCA7 gène reveals a higly unstable CAG repeat expansion. Nature Genêt. 1997 ; 17 : 65-70.
3. O'Donovan M.C., Guy C, Craddock N., Murphy K.C., Cardno A. G., Jones L.A., Owen M.J., and McGuffin P. Expanded CAG repeats in schizophrenia and bipolar disorders. Nature Genêt. 1995 ; 10 : 380- 381. 4. Morris A.G., Gaitond E., McKenna P.J., Mollon J.D., and Hunt D.M. CAG repeat expansions ans schizophrenia : association with disease in females and with early age-at-onset. Hum. Mol. Genêt 1995 ; 4 : 1957-1961.
5. O'Donovan M.C., Guy C, Craddock N., Bowen T., McKeon P., Macedo A., Maier W., Wildenauer D., Aschauer H.N., Sorbi S., Feldman
E., Mynett-Johnson L. Claffey E., Nacmias B., Valente J., Dourado A., Grassi E., Lenzinger E., Heiden A.M., Moorhead S., Harrison D., Williams J., McGuffin P., and Owen M.J. Confirmation of association between expanded CAG/CTG repeats and both schizophrenia and bipolar disorder. Psychol. Med. 1996 ; 26 : 1145-1153.
6. Petronis A., Basset A.S., Honer W.G., Vincent J.B., Tatuch Y., Sasaki T., Ying D.J., Klempan T. A., and Kennedy J.L. Search for unstable DNA in schizophrenia families with évidence for genetic anticipation. Am J. Hum. Genêt. 1996 ; 59 : 905-911. 7. Craddock N. an Owen M. Modem molecular genetic approaches to psychiatrie disease. British Médical Bulletin 1996 ; 52 : 434-452.
8. Gordon C.T., Frazier J.A., McKenna K., Giedd J., Zamethkin A.,- Zahn T., Hommer D., Hong W., Kaysen D., Albus K.E., and Rapoport J.L. Childhood onset schizophrenia : a NIMH study in progress. Schizophr. Bull 1994 ; 20 : 697-712.
9. Asarnow R.F., Caplan R., and Asarnow J.R. Neurobehavioural studies of schizophrénie children : a developmental perspective on schizophrénie disorders. In : Hàfner H. and Gattaz W.F. (eds) Searchfor the causes of schizophrenia. Springer-Verlag : Berlin Heidelberg, Vol. 3, 1995, pp 87-113.
10. Rapoport J.L., Giedd J., Jacobsen L.K., Kumra S., Smith A., Lee P., Nelson J., and Hamburger S. Childhood onset schizophrenia : progressive ventricular enlargment during adolescence on MRI brain rescan. Arch Gen Psychiatry 1997 ; 54 : 897-903.
11. Jacobsen L.K. and Rapoport J.L. Childhood onset schizophrenia : implications of clinical and neurobiological research. J. Child Psychol. Psychiatry 1997, in press.
12. Trottier Y., Lutz Y., Stevanin G., Imbert G, Devys D., Cancel G., Saudou F., Weber C, David G., Tora L., Agid Y., Brice A., and Mandel
J.L. Polyglutamine expansion as a pathological epitope in Huntington' s disease and four dominant cerebellar ataxia. Nature 1995 ; 378 : 403-406.
13. Schalling M., Hudson T.J., Buetow K.H., and Housman D.E., Direct détection of novel expanded trinucleotide repeats in the human génome. Nature Genêt. 1993 ; 4 : 135-139.
14. Imbert G, Saudou F., Yvert G., Devys D., Trottier Y., Garnier J.M., Weber C, Mandel J.L. and Cancel G, Abbas N., Dϋrr A., Didierjean O., Stevanin G., Agid Y., Brice A. Cloning of the gène for spinocerebellar ataxia 2 reveals a locus with high sensitivity to expanded CAG/glutamine repeats. Nature Genêt. 1996 ; 14 : 285-291. 15. Néri C, Albanèse V., Lebre A.S., Holbert S., Saada C, Bougueleret L., Meier-Ewert S., Le Gall L, Millasseau P., Bui H., Guidicelli C, Massart C, Guillou S., Gervy P., Poullier E., Rigault P., Weissenbach J., Lennon G., Chumakov L, Dausset J., Lehrach H., Cohen D., and Cann H. Survey of CAG/CTG repeats in human cDNAs representing new gènes : candidates for inherited neurological diseases. Hum Mol. Genêt. 1996 ; 5 : 1001-1009.
16. Bulle F., Chiannilkulchai N., Pawlak A., Weissenbach J., Gyapay G., and Guellaen G. Identification and chromosomal localization of human gènes containing CAG/CTG repeats expressed in testis and brain. Génome Res. 1997 ; 7 : 705-715.
17. Margolis R.L. Abraham M.R., Gatchell S.B., Li S.H., Kidway A.S., Breshel T.S., Stine O.C., Callahn C, Mclnnis M. G., and Ross C.A. cDNAs with long CAG trinucleotide repeats from human brain. Hum. Genêt. 1997 ; 100 : 114-122.
18. Gastier J.M., Brody T., Pulido J.C., Businga T., Sunden S., Hu X., Maitra S., Buetow K.H., Murray J.C., Sheffield V.C., Boguski M., Duyk G.M., and Hudson T.J. Development of a screening set for new (CAG/CTG)n dynamic mutations. Genomics 1996 ; 32 : 75-85. 19. Moises H.W., Yang L., Kristbjarnarson H., Wiese C, Byerley W., Macciardi F., Arolt V., Blackwood D., Liu X., Sjogren B., Ashauer H.N., Hwu H.G., Jang K., Livesley W.J., Kennedy J.L., Zega T., Ivarsson O., Bui M.T., Yu M.H., Havsteen B., Commenges D., Weissenbach J., Schwinger E., Gottesman II, Pakstis A.J., Wetterberg L., Kidd K.K., and Helgason T. An international two-stage génome wide search for schizophrenia susceptibility gènes. Nature Genêt. 1995 ; 11 : 321-324. 20. Jones A.L., Middle F., Guy C. Spurlock G., Cairns N.J., McGuffin P., Craddock N., Owen M., and O'Donovan M.C. No évidence for expanded polyglutamine séquences in bipolar disorder and schizophrenia. Molecular Psychiatry 1997 ; 2 : 478-482. 21. Chandly K.D., Fantino E., Wittekindt O., Kalman K., Tong L.L., Gutman G.A., Crocq M.A., Ganguli R., Nimgaonkar V., Morris- Rosendahl D.J., and Gargus J.J. Isolation of a novel potassium channel gen hSKCa3 containing a polymorphic CAG repeat : a condidate for schizophrenia ? Molecular Psychiatry 1998 ; 3 : 32-37.
22. Sidransky E., Burgess C, Ikeuchi T., Lindbald K., Long R.T., Philibert R.A., Rapoport J., Schalling M., Tsuji S., and Ginns E.I. A triplet repeat on 17q accounts for most expansions detected by the repeat expansion détection technique. Am. J. Hum. Genêt. 1998 ; 62 : 1548- 1551.
23. Gallat A. and Rioux V. Convergence of amino acid composition of certain groups of proteins aids in their identification on two- dimentiosnal electrophoresis gels. Electrophoresis 1997 ; 18 : 443-451.
24. White J.K., Auerbach W., Duyao M.P., Vonsattel J.P., Gusella J.F., Joyner A.L. & MacDonald M.E. hutingtin is required for neurogenesis and is not impaired by the Huntington' s disease CAG expansion. Nature Genetics Vol. 17 december 1997.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de classification de patients atteints de schizophrénie - comprenant : - l'analyse d'un extrait protéique préparé à partir d'au moins une lignée de cellules lymphoblastoïdes desdits patients, par western blot avec un anticorps monoclonal, et la sélection desdits patients pour lesquels l'analyse a révélé l'existence d'une protéine acide présentant une masse relative de 52 à 57 kDa et comprenant une expansion de polyglutamines.
2. Procédé de classification selon la revendication 1, dans lequel l'anticorps monoclonal est choisi dans le groupe comprenant : 1C2, 1F8 ou tout autre anticorps spécifique des expansions de polyglutamines.
3. Procédé de classification selon l'une des revendications 1 à 2 comprenant après l'étape de sélection, une étape de détermination du profil clinique de chaque patient sélectionné.
4. Procédé de classification selon la revendication 3, dans lequel le profil clinique est déterminé au moyen de critères choisis dans le groupe comprenant : l'âge d'apparition de la pathologie, la sévérité de la pathologie et la réponse du patient à certains médicaments.
PCT/FR1999/001891 1998-08-06 1999-07-30 Procede de classification de patients atteints de schizophrenie WO2000008470A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR98/10126 1998-08-06
FR9810126A FR2782167B1 (fr) 1998-08-06 1998-08-06 Procede de classification de patients atteints de schizophrenie et identification d'une cible therapeutique potentielle pour cette maladie

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2000008470A1 true WO2000008470A1 (fr) 2000-02-17

Family

ID=9529471

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1999/001891 WO2000008470A1 (fr) 1998-08-06 1999-07-30 Procede de classification de patients atteints de schizophrenie

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR2782167B1 (fr)
WO (1) WO2000008470A1 (fr)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996032106A1 (fr) * 1995-04-11 1996-10-17 Samuel Bogoch Produits aglyco
WO1996037780A1 (fr) * 1995-05-24 1996-11-28 Deth Richard C Compositions et procedes pour deceler la schizophrenie
WO1997017445A1 (fr) * 1995-11-10 1997-05-15 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Methode de traitement de maladies neurodegeneratives mettant en oeuvre un anticorps 1c2, un fragment ou derive de celui-ci et compositions pharmaceutiques correspondantes
US5723301A (en) * 1995-11-03 1998-03-03 Duke University Method to screen compounds that affect GAPDH binding to polyglutamine

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996032106A1 (fr) * 1995-04-11 1996-10-17 Samuel Bogoch Produits aglyco
WO1996037780A1 (fr) * 1995-05-24 1996-11-28 Deth Richard C Compositions et procedes pour deceler la schizophrenie
US5723301A (en) * 1995-11-03 1998-03-03 Duke University Method to screen compounds that affect GAPDH binding to polyglutamine
WO1997017445A1 (fr) * 1995-11-10 1997-05-15 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Methode de traitement de maladies neurodegeneratives mettant en oeuvre un anticorps 1c2, un fragment ou derive de celui-ci et compositions pharmaceutiques correspondantes

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JONES, A. L. ET AL: "No evidence for expanded polyglutamine sequences in bipolar disorder and schizophrenia.", MOLECULAR PSYCHIATRY, vol. 2, no. 6, October 1997 (1997-10-01), pages 478 - 482, XP002101890 *
JOOBER, R. ET AL: "Polyglutamine-containing proteins in schizophrenia.", MOLECULAR PSYCHIATRY, vol. 4, no. 1, January 1999 (1999-01-01), pages 53 - 57, XP002101892 *
MORINIERE, S. ET AL: "Detection of polyglutamine expansion in a new acidic protein: a candidate for childhood onset schizophrenia.", MOLECULAR PSYCHIATRY, vol. 4, no. 1, January 1999 (1999-01-01), pages 58 - 63, XP002101891 *
STEVANIN G ET AL: "SCREENING FOR PROTEINS WITH POLYGLUTAMINE EXPANSIONS IN AUTOSOMAL DOMINANT CEREBELLAR ATAXIAS", HUMAN MOLECULAR GENETICS, vol. 5, no. 12, 1 December 1996 (1996-12-01), pages 1887 - 1892, XP002027564 *
TROTTIER Y ET AL: "POLYGLUTAMINE EXPANSION AS A PATHOLOGICAL EPITOPE IN HUNTINGTON'S DISEASE AND FOUR DOMINANT CEREBELLAR ATAXIAS", NATURE, vol. 378, no. 6555, 23 November 1995 (1995-11-23), pages 403 - 406, XP002009617 *

Also Published As

Publication number Publication date
FR2782167B1 (fr) 2000-11-03
FR2782167A1 (fr) 2000-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Brandscheid et al. Altered gut microbiome composition and tryptic activity of the 5xFAD Alzheimer’s mouse model
US9896729B2 (en) Method for diagnosing a neurodegenerative disease
Saito et al. Somatic mosaicism of CIAS1 in a patient with chronic infantile neurologic, cutaneous, articular syndrome
Lossos et al. Fe/S protein assembly gene IBA57 mutation causes hereditary spastic paraplegia
Rothman et al. Human Alzheimer’s disease gene expression signatures and immune profile in APP mouse models: a discrete transcriptomic view of Aβ plaque pathology
US20120230976A1 (en) Rothia species glutamine endopeptidases and use thereof
JPH05508919A (ja) スペクトリン又はその崩壊生成物の分析による細胞壊死検出
JP6051241B2 (ja) Ｔｄｐ−４３蛋白質症に関連した配列およびその使用法
EP3013371A1 (fr) Syndrome de rett et ses traitements
Toomey et al. Investigation of pathology, expression and proteomic profiles in human TREM2 variant postmortem brains with and without Alzheimer’s disease
Wakil et al. Exome sequencing: mutilating sensory neuropathy with spastic paraplegia due to a mutation in FAM134B gene
Guissart et al. Genes for spinocerebellar ataxia with blindness and deafness (SCABD/SCAR3, MIM# 271250 and SCABD2)
EP0980427B1 (fr) Utilisation des proteines ulip dans le diagnostic et la therapie des cancers et des syndromes neurologiques paraneoplasiques
Ohta et al. Novel dominant-negative mutant of GATA3 in HDR syndrome
WO2000008470A1 (fr) Procede de classification de patients atteints de schizophrenie
WO2022118944A1 (fr) Composition pour prévenir ou traiter la détérioration de la fonction cérébrale ou maintenir ou améliorer la fonction cérébrale
CA2574224A1 (fr) Technique diagnostique moleculaire et traitement de la demence a corps de lewy
WO2014122290A1 (fr) Marqueur dyrk1a pour la maladie d&#39;alzheimer
Gallo et al. Novel MAPT Val75Ala mutation and PSEN 2 Arg62Hys in two siblings with frontotemporal dementia
US20050177881A1 (en) Methods of identifying genetic risk for and evaluating treatment of alzheimer&#39;s disease by determining single nucleotide polymorphisms
CA2401438C (fr) Nouvelle proteine ulip/crmp humaine et son utilisation dans le diagnostic et la therapie des cancers et des syndromes neurologiques paraneoplasiques
CN108715838B (zh) 原发性家族性脑钙化症致病基因myorg及其应用
Illarioshkin et al. Molecular genetic analysis of hereditary neurodegenerative diseases
Whatley et al. THE GENETICS OF ALZHEIMER'S DISEASE.
EP1250931A1 (fr) Nouvelle utilisation du neuronal calcium sensor-1 (ncs-1) pour le traitement de troubles du système nerveux central et pour le développement d&#39;agents thérapeutiques

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): CA JP US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
122 Ep: pct application non-entry in european phase