WO1999043362A1 - Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen - Google Patents

Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen Download PDF

Info

Publication number
WO1999043362A1
WO1999043362A1 PCT/AT1999/000046 AT9900046W WO9943362A1 WO 1999043362 A1 WO1999043362 A1 WO 1999043362A1 AT 9900046 W AT9900046 W AT 9900046W WO 9943362 A1 WO9943362 A1 WO 9943362A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
virus
filtration
pathogens
solution
filter
Prior art date
Application number
PCT/AT1999/000046
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Noel Barrett
Friedrich Dorner
Yendra Linnau
Gerhard Pölsler
Hans-Peter Schwarz
Wolfgang Teschner
Original Assignee
Baxter Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Aktiengesellschaft filed Critical Baxter Aktiengesellschaft
Priority to AU25028/99A priority Critical patent/AU2502899A/en
Publication of WO1999043362A1 publication Critical patent/WO1999043362A1/de

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
    • A61L2/0017—Filtration

Definitions

  • the present invention relates to a method for the depletion of pathogens from protein-containing solutions by filtration and pharmaceutical preparations produced by this method, which is free of parvovirus according to a detection by means of quantitative PCR.
  • Virus inactivation methods include heat treatment, solvent / detergent treatment, surfactant treatment and photo inactivation of viruses, each of which specifically affects certain viruses. It is therefore recommended to combine different inactivation methods.
  • the physical depletion processes of pathogens include various filtration processes, e.g. ultrafiltration, nanofiltration and chromatographic processes.
  • Nanofiltration uses filters whose pore diameter is smaller than the average diameter of the viruses to be separated. As a result, the viruses are retained and a preparation is obtained from the filtrate that is free of such viruses.
  • pathogens such as viruses, viroids and prions
  • viruses are mixed with a ligand or receptor which reacts with a receptor or ligand of the pathogen, whereby a ligand / receptor complex is formed which, via nanofilters or depth filters, has an exclusion volume of 35-100 nm is separated.
  • the viruses are treated with antibodies and the complex is separated off using ultrafilters. It should be noted, however, that if the pore sizes of nanofilters are too small or the cut-off of ultrafilters is too small, high-molecular proteins are also retained. Imrounglobulins (IgG 150 kD) can e.g. only pass filters with a larger exclusion size.
  • EP 0 798 003 A relates to the use of structured depth filters for depleting viruses, but the results show that depletion, especially of parvovirus, is insufficient for pharmaceutical preparations.
  • Depth filters are commonly used to clarify liquids and generally have a larger pore diameter than the average diameter of the virus. Viruses are believed to be deposited inside the filter.
  • protein-containing solutions are mixed with adsorbents as the solid phase, the viruses adsorbing on this solid phase.
  • the solid phase with the viruses adsorbed thereon is then removed by filtration or centrifugation.
  • the task is specified in a method of the beginning - 3 -
  • the duration of the incubation i.e. The contact between the inorganic particulate, surface-active cleaning agent and the protein-containing solution can vary from 0.1 to 48 hours, 0.2-2 hours has proven to be particularly favorable for achieving optimal depletion.
  • a suspension of the particulate, surface-active cleaning agent is passed over the depth filter while avoiding sedimentation - 4 - will. Sedimentation can be avoided, for example, by omitting centrifugation, by shaking or by stirring, resulting in intimate contact between the protein-containing solution and inorganic particulate, surface-active detergent.
  • Inorganic particle auxiliaries can also be used as inorganic particulate, surface-active cleaning agents.
  • Filter aids are usually used in suspensions with contaminating solids or in suspensions containing slimy solids to enable the formation of a filter cake. They are used, inter alia, to clarify turbid solutions, as in US 4,305,870 A. Filter aids can on Basi s-silica, such as Aerosil ® (Degussa), kieselguhr, such as Celite ® (Johns Manville Corp.), Clay minerals, such as bentonite, or mixtures thereof.
  • the filter aids used according to the invention preferably have an active surface area of at least 50 m 2 / g.
  • Aerosil ® preferably used in the inventive method is composed of amorphous spherical particles having a diameter of 10 - possess nm 20th With a volume of only 15 ml, 1 g of Aerosil has a surface area of 100 - 400 m 2 .
  • the method according to the invention is particularly suitable. for the production of pharmaceutical preparations from plasma, such as human plasma, plasma fractions or cell cultures.
  • a plasma pool as the starting material, which is produced from at least 1000, most preferably from at least 2000, donors.
  • An immunoglobulin preparation produced from such a plasma pool contains, for example, a broad spectrum of antibodies which come from the large number of different immunized plasma donors.
  • the method according to the invention can also be used for the production of virus-safe preparations based on blood coagulation factors, - 5 - how factors II, VII, VIII IX, X, XIII are used as activated factors or zymogens, as well as vWF.
  • Factors of fibrinolysis and thrombolysis such as protein C and protein S, orosomucoid, and albumin, immunoglobulins, fibrinogen, prothrombin complex, activated prothrombin complex, inhibitors such as a - antitrypsin, antithrombin III and C esterase inhibitor are further examples of preparations which can be made virus-proof by the method according to the invention.
  • surface-active materials it was surprisingly found that plasma proteins that were modified and activated by active surfaces, such as kaolin, could also be obtained in native form.
  • the method is preferably used in the production of intravenously tolerable immunoglobulin preparations.
  • Immunoglobulins are required to i.v. tolerated, low anti-complementary activity, e.g. of less than 20 ACA, which is essentially achieved by a high monomer content in the preparation.
  • An immunoglobulin preparation produced by the process according to the invention has a monomer content of at least 97%, preferably at least 98%, most preferably at least 99%, the sum of monomer and dimer being considered as monomers. It was also possible to show that no aggregates were formed by the process according to the invention and that a monomer content of at least 99% could be obtained.
  • an immunoglobulin preparation produced by the method according to the invention has a purity of 98%, determined by electrophoresis, and preferably does not contain any conventional stabilizers, e.g. selected from the group sugar or sugar alcohols.
  • the pathogens that can be separated by the method according to the invention include, in particular, human pathogenic viruses, such as, for example, HAV, HBV, HCV, HIV, HEV, HDV, HGV, CMV, PRV and parvovirus, but also prions, such as, for example, the causative agent of Creutzfeld-Jakob disease.
  • human pathogenic viruses such as, for example, HAV, HBV, HCV, HIV, HEV, HDV, HGV, CMV, PRV and parvovirus
  • prions such as, for example, the causative agent of Creutzfeld-Jakob disease.
  • small viruses ie smaller than 50 nm, it has proven to be advantageous if the solution is specific - 6 -
  • antibodies which are specific for the pathogen to be separated, or their addition in the solution supports the separation of the pathogens.
  • a specific antibody was added to test virus MVM, after which the virus was no longer detectable in the filtrate.
  • Polyclonal antibodies were preferably used, e.g. humane. However, monoclonal antibodies with a high affinity or avidity can also be used.
  • a protein-containing solution with a concentration of 0.05 to 100 mg / ml, preferably 0.1 to 50 mg / ml and a pH of 3.5 to 8.5, preferably of 4 to 8, at a temperature of 4 to 37 ° C with up to 200 mg / 1000 mg protein, preferably with up to 100 mg / 1000 mg protein, particulate, surface-active detergent.
  • the preparation is passed through a depth filter at a pressure of 0.2 to 3 bar, preferably 2 bar, a clear solution being obtained.
  • Depth filters are usually based e.g. on sand, polypropylene, cellulose, fiberglass, porcelain or diatomaceous earth. They have a fibrous, granular or sintered matrix, which creates a random pore structure. Depth filters are used as pre-filters, among other things, to extend the life of final filters, usually surface filters or membrane filters. For example, depth filters based on sand are also used for virus depletion. However, such filters would be unsuitable for pharmaceutical products.
  • the clear solution obtained is subjected to a further nanofiltration step, preferably with nanofilter having a pore size of 35-100 nm, the safety of the products with regard to - 7 - filterable viruses is increased even more.
  • a further nanofiltration step preferably with nanofilter having a pore size of 35-100 nm, the safety of the products with regard to - 7 - filterable viruses is increased even more.
  • Suitable processes are described, for example, in WO 97/40 861 A.
  • a biological material is considered safely virus-removed if a reduction factor of> 10 7 is reached.
  • the virus titer is usually determined using a PCR method.
  • a method for determining the prions can be based on a conventional immunoassay.
  • the virus titer was determined after serial 1/2 log dilution in cell culture medium. In each case 100 ⁇ l of each serial dilution were placed in 8 wells of a microtiter plate which contained 2-5 ⁇ 10 4 cells per well (HIV: .AA-2, PRV: VERO). The plates were then incubated at 37 ° C for 7 days. After this incubation period, the cell-damaging effect (cytopathic effect, cpe) was determined microscopically. The TCID 5 was determined on the basis of the number of wells in the microtiter plate which showed a positive CPE.
  • the efficiency of the virus depletion process was expressed as a reduction factor (RF), according to that of the EC Committee - 8 - for Proprietary Medicine (Note for guidance on virus validation studies: The design, contribution and Interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses, Appendix II, CPMP / BWP / 268/95, 29.2.1998) :
  • virus titer After an hour of incubation with Aerosil there is already a slight reduction in virus titer (from 10 6 ' 0 to 10 5 ' 4 in HIV; from 10 5 ' 5 to 10 4 ' 8 in PRV). After filtration, the virus titer dropped below the detection limit ( ⁇ 10 0 ' 6 for HIV-1, ⁇ 10 0 ' 1 for PRV). This shows that viruses can be separated by the aerosil treatment according to the invention in combination with depth filter filtration.
  • a 2.5% immunoglobulin solution was mixed with HAV analogously to Example 1, stirred with Aerosil for one hour and then filtered through a CUNO SA90 filter.
  • .HAV is a small virus without a lipid envelope.
  • the immunoglobulin solution made from a plasma pool of more than 2000 individual donations, contains human antibodies against .HAV. This shows that even small viruses without a lipid envelope can be effectively separated by aerosil treatment and filtration. However, complete virus depletion only takes place in combination with deep filtration.
  • a 2.5% immunoglobulin solution was mixed with B19 analogously to Example 1, stirred with Aerosil for one hour and then filtered through a CUNO SA90 filter. Since B19 cannot be titrated using cell cultures, the number of B19 genomes per ml was determined using PCR.
  • the virus titer is reduced slightly (from 10 8 ' 3 to 10 5 ' 4 ) after an hour of incubation with Aerosil. After filtration, the virus titer dropped below the detection limit ( ⁇ 10 1.7 ).
  • B19 is a small virus without a lipid envelope.
  • the immunoglobulin solution which is made from a plasma pool of more than 2000 individual donations, contains human antibodies against Parvovirus B19.
  • this shows that even small viruses without a lipid envelope can be separated off by aerosil treatment and filtration. However, full virus administration only takes place here in - 10 -
  • Example 2 48 ml of a 2.5% immunoglobulin solution were mixed with 2 ml of B19. As in Example 1, Aerosil was added and then stirred for one hour. In contrast to Examples 1-3, Aerosil was then separated from the immunoglobulin solution by centrifugation (20,000 rpm, 30 minutes) and the number of B19 genomes per ml in the centrifugation supernatant was determined by means of PCR.
  • the virus titer is reduced slightly after 10 hours of incubation with Aerosil (from 10 9 ' 3 to 10 7 ' 8 ). After centrifugation, 10 6 ' 5 DNA copies / ml are found in the supernatant, which gives a reduction factor of 1.3. Virus depletion in the immunoglobulin solution is insufficient if Aerosil is separated by centrifugation.
  • a 2.5% immunoglobulin solution was mixed with MVM analogously to Example 1, stirred with Aerosil for one hour and then filtered through a CUNO SA90 filter.
  • 0.5% of a rabbit anti-MVM antiserum (RaMVM) was added. - 11 -
  • the virus titer is reduced slightly after an hour of incubation with Aerosil. After filtration, the virus titer dropped below the detection limit ( ⁇ 0.1) if antibodies were added at the start of the experiment.
  • MVM is a small virus without a lipid envelope.
  • the immunoglobulin solution does not contain any antibodies to MVM, a mouse parvovirus. This shows that small viruses without a lipid envelope can be separated more efficiently by the aerosil treatment and filtration according to the invention if specific antibodies against this virus are added.
  • Example 2 As in Example 1, 3.5 ml of high-titer HIV-I was applied to 346.5 ml of a 2.5% human immunoglobulin solution. The virus titer was determined from the mixture and the virus suspension. The immunoglobulin to which the virus had been added was stirred at room temperature for 1 hour without the addition of Aerosil 380. The aliquot of the virus was then determined. It was then filtered through a CUNO SA90 filter, clamped in a 47 mm filter holder. A sample was taken from the filtrate and titrated.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Beschrieben wird ein Verfahren zur Abreicherung von Pathogenen aus einer Lösung enthaltend plasmatische Proteine durch Filtration, wobei die Lösung in Gegenwart eines anorganischen partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittels inkubiert, über Tiefenfilter geleitet und eine klare Lösung erhalten wird, sowie eine gemäß diesem Verfahren hergestellte pharmazeutische Präparation, welche entsprechend einem Nachweis mittels quantitativer PCR frei von humanpathogenem Parvovirus B 19 ist.

Description

Verfahren zur .Abreicherung von Pathogenen aus proteinhalticren Lösuncren
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur .Abreicherung von Pathogenen aus proteinhaltigen Lösungen durch Filtration sowie durch dieses Verfahren hergestellte pharmazeutische Präparationen, welche entsprechend einem Nachweis mittels quantitativer PCR frei von Parvovirus ist.
Bei der Herstellung von biologischen Präparaten biogenen Ursprungs, wie aus Blut oder Plasma, ist eine Kontamination des Ausgangsmaterials mit Pathogenen als mögliches Risiko zu berücksichtigen. Daher werden während der Produktion von pharmazeutischen Präparationen verschiedenste Verfahren zur Inaktivierung und zur .Abreicherung bzw. Entfernung von potentiell vorhandenen Pathogenen in den Produktionsprozeß eingegliedert.
Im Stand der Technik sind verschiedene Verfahren zur Inaktivierung und Entfernung von durch Blut übertragbare Pathogenen bekannt. Als Virus-Inaktivierungsverfahren sind die Hitzebehandlung, die Solvent/Detergent-Behandlung, die Tensidbehandlung und die Photoinaktivierung von Viren zu nennen, wobei jedes dieser Verfahren spezifisch auf bestimmte Viren wirkt. Es wird daher empfohlen, verschiedene Inaktivierungsverfahren miteinander zu kombinieren.
Zu den physikalischen Abreicherungsverfahren von Pathogenen gehören verschiedene Filtrationsverfahren, wie z.B. die Ultrafiltration, die Nanofiltration und chromatographische Verfahren.
Bei der Nanofiltration werden Filter verwendet, deren Porendurchmesser kleiner ist als der durchschnittliche Durchmesser der abzutrennenden Viren. Dadurch werden die Viren zurückgehalten, und man erhält aus dem Filtrat eine Präparation, die von solchen Viren frei ist. Bei relativ kleinen Pathogenen, wie Viren, Viroiden und Prionen, besteht allerdings die Gefahr, daß diese nur schwer bzw. unvollständig abgetrennt werden. Daher wurde versucht, die Viren durch Bindung an Liganden zu vergrös- - 2 - sern und dadurch auch relative kleine Viren mittels Nanofilter effektiv abtrennen zu können.
In der WO 97/40 861 A werden Viren mit einem Liganden oder Rezeptor versetzt, der mit einem Rezeptor oder Liganden des Patho- gens reagiert, wodurch ein Ligand/Rezeptor-Komplex entsteht, der über Nanofilter oder Tiefenfilter mit einem Ausschlußvolumen von 35 - 100 nm abgetrennt wird.
Gemäß der EP 0 727 226 A werden die Viren mit Antikörpern versetzt und der Komplex über Ultrafilter abgetrennt . Dabei ist jedoch zu beachten, daß bei zu kleinen Porengrößen von Nanofilter bzw. einem zu geringen "cut off" von Ultrafiltern auch hochmolekulare Proteine zurückgehalten werden. Imrounglobuline (IgG 150 kD) können z.B. nur Filter mit größerer Ausschlußgröße passieren.
Die EP 0 798 003 A betrifft die Verwendung von strukturierten Tiefenfiltern zum Abreichern von Viren, wobei jedoch die Ergebnisse eine für pharmazeutische Präparationen nur ungenügende Abreicherung speziell von Parvovirus zeigen. Tiefenfilter werden üblicherweise zum Klären von Flüssigkeiten eingesetzt und besitzen im Allgemeinen einen größeren Porendurchmesser als der durchschnittliche Durchmesser der Viren. Es wird angenommen, daß Viren im Inneren des Filters abgeschieden werden.
Laut der Offenbarung der EP 0 679 405 A werden proteinhältige Lösungen mit Adsorbentien als feste Phase versetzt, wobei die Viren an dieser festen Phase adsorbieren. Die feste Phase mit den daran adsorbierten Viren wird anschließend durch Filtration oder Zentrifugation entfernt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es nun, ein verbessertes Verfahren zur Abtrennung von Pathogenen aus proteinhaltigen Präparationen mittels Filtration zur Verfügung zu stellen, sowie pharmazeutische Präparationen, die frei von durch Blut übertragbare Pathogene .sind.
Die Aufgabe wird bei einem Verfahren der eingangs angegebenen - 3 -
Art erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß die plasmatische Proteine enthaltende Lösung in Gegenwart eines anorganischen partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittel inkubiert wird und über Tiefenfilter geleitet wird, wobei eine klare Lösung erhalten wird.
Der Effekt der verbesserten Virusabreicherung im Verfahren der vorliegenden Erfindung war insofern überraschend, als sich gezeigt hat, daß es bei der erfindungsgemäßen Behandlung von kontaminierten Proteinlösung nur zu geringfügiger Adsorption der Pathogene an das Reinigungsmittel bzw. Filterhilfsmittel kommt. Dies konnte dadurch gezeigt werden, daß eine immunglobulinhäl- tige Lösung enthaltend Parvovirus B19 mit einem Filterhilfsmittel versetzt und das Filterhilfsmittel mittels Zentrifugation abgetrennt wurde. Parvovirus B19 war nach dem Zentrifugieren im Überstand nachweisbar und hatte offenbar nicht an der festen Phase adsorbiert. Der Nachweis für die Parvovirus-Genom-Kopienzahl wurde in einer quantitativen PCR-.Analyse wie von Dorner et al., (1994, 25. Hämophilie-Symposium, ed. Scharrer & Schramm, 5. 29 - 44) beschrieben, durchgeführt.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß durch die Zugabe eines anorganischen partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittels, wie beispielsweise eines Filterhilfsmittels, und anschließender Filtration über Tiefenfilter Parvovirus B19 vollständig aus einer immunglobulinhaltigen Lösung abgetrennt werden konnte. Im Filtrat war das Virus nicht mehr nachweisbar, sodaß ein wesentlich besserer Effekt als durch das Verfahren gemäß der EP 0 798 002 A erreichbar, erzielt werden konnte.
Die Zeitdauer der Inkubation, d.h. des Kontakts zwischen anorganischem partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittel und der proteinhaltigen Lösung kann dabei von 0,1 bis 48h variieren, 0,2 -2h hat sich zur Erzielung einer optimalen Abreicherung als besonders günstig erwiesen.
Günstig ist in diesem Zusammenhang auch, wenn eine Suspension des partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittels unter Vermeidung einer Sedimentation über den Tiefenfilter geleitet - 4 - wird. Die Sedimentation kann z.B. durch das Aussparen einer Zen- trifugation, durch Schütteln oder durch Rühren vermieden werden, wobei sich ein inniger Kontakt zwischen proteinhaltiger Lösung und anorganischem partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittel ergibt.
Als anorganische partikuläre, oberflächenaktive Reinigungsmittel können hierbei unter anderem auch anorganische Filterhilfsmittel eingesetzt werden. Filterhilfsmittel werden üblicherweise bei Suspensionen mit kontaminierenden Feststoffen oder bei Suspensionen enthaltend schleimige Feststoffe eingesetzt, um die Bildung eines Filterkuchens zu ermöglichen. Sie werden unter anderem zur Klärung von trüben Lösungen verwendet, wie gemäß US 4 305 870 A. Filterhilfsmittel können auf Basi-s von Kieselsäure, wie z.B. Aerosil® (Degussa), Kieselgur, wie z.B. Celite® (Johns- Manville Corp.), Tonmineralien, wie Bentonit, bzw. Mischungen hievon hergestellt sein. Die erfindungsgemäß verwendeten Filterhilfsmittel haben vorzugsweise eine aktive Oberfläche von mindestens 50 m2 /g.
Das im erfindungsgemäßen Verfahren vorzugsweise eingesetzte Aerosil® ist aus amorphen, kugelförmigen Teilchen aufgebaut, welche einen Durchmesser von 10 - 20 nm besitzen. Bei einem Volumen von nur 15 ml besitzt 1 g Aerosil eine Oberfläche von 100 - 400 m2.
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich v.a. für die Herstellung von pharmazeutischen Präparationen aus Plasma, wie Humanplasma, Plasmafraktionen oder Zellkulturen. Bevorzugt ist aus wirtschaftlichen Gründen die Verwendung eines Plasmapools als Ausgangsmaterial, welcher aus mindestens 1000, am meisten bevorzugt aus mindestens 2000 Spendern hergestellt wird. Ein aus einem solchen Plasmapool hergestelltes Immunglobulinpräparat enthält beispielsweise ein breites Spektrum von .Antikörpern, die von der Vielzahl der unterschiedlichen immunisierten Plasmaspendern stammen.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann auch für die Herstellung von virussicheren Präparaten auf Basis von Blutgerinnungsfaktoren, - 5 - wie die Faktoren II, VII, VIII IX, X, XIII, als aktivierte Faktoren oder Zymogene, sowie vWF herangezogen werden. Faktoren der Fibrinolyse und Thrombolyse, wie z.B. Protein C und Protein S, Orosomucoid, und Albumin, Immunglobuline, Fibrinogen, Prothrom- binkomplex, aktivierter Prothrombinkomplex, Inhibitoren, wie a - Antitrypsin, Antithrombin III sowie C -Esterase- Inhibitor sind weitere Beispiele für Präparate, die durch das erfindungsgemäße Verfahren virussicher zur Verfügung gestellt werden können. Trotz der Verwendung von oberflächenaktiven Materialien konnte überraschenderweise festgestellt werden, daß auch Plasmaproteine, die durch aktive Oberflächen, wie Kaolin, modifiziert und aktiviert werden, in nativer Form gewonnen werden konnten.
Bevorzugt wird das Verfahren bei der Herstellung von intravenös verträglichen Immunglobulinpräparationen angewendet. Immunglobuline müssen, um i.v. verträglich zu sein, eine geringe antikomplementäre .Aktivität, z.B. von weniger als 20 ACA haben, die im wesentlichen durch einen hohen Monomergehalt im Präparat erreicht wird. Ein nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestelltes Immunglobulinpräparat weist einen Monomergehalt von mindestens 97 %, vorzugsweise mindestens 98 %, am meisten bevorzugt mindestens 99 % auf, wobei als Monomere die Summe an Monomer und Dimer gelten. Es konnte auch gezeigt werden, daß durch das erfindungsgemäße Verfahren keine Aggregate gebildet wurden und ein Monomergehalt von mindestens 99% erhalten werden konnte. Im Gegenteil, geringe Aggregatmengen konnten durch die Tiefenfiltration abgetrennt werden, wodurch ein Monomergehalt von mindestens 99,4 % erreicht wurde. Außerdem besitzt eine nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellte Immunglobulinpräpa- ration eine Reinheit von 98 %, bestimmt durch Elektrophorese, und enthält vorzugsweise keine üblichen Stabilisatoren, z.B. ausgewählt aus der Gruppe Zucker oder Zuckeralkohole .
Zu den Pathogenen, die durch das erfindungsgemäße Verfahren abgetrennt werden können, gehören vor allem humanpathogene Viren, wie z.B. HAV, HBV, HCV, HIV, HEV, HDV, HGV, CMV, PRV und Parvovirus, aber auch Prionen, wie z.B. der Erreger der Creutzfeld- Jakob Krankheit. Bei kleinen Viren, d.h. kleiner als 50 nm, hat es sich als vorteilhaft erwiesen, wenn die Lösung spezifische - 6 -
Antikörper gegen die Pathogene enthält, oder solche spezifischen Antikörper zugesetzt werden.
Weiters konnte gezeigt werden, daß die Anwesenheit von Antikörpern, welche für das abzutrennende Pathogen spezifisch sind, bzw. deren Zusatz in der Lösung die Abtrennung der Pathogene unterstützt. So wurde zu Testvirus MVM ein spezifischer .Antikörper zugesetzt, wonach das Virus im Filtrat nicht mehr nachweisbar war. Vorzugsweise wurden polyklonale .Antikörper eingesetzt, z.B. humane. Es können aber auch monoklonale .Antikörper mit einer hohen Affinität oder Avidität eingesetzt werden.
Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird eine proteinhältlge Lösung mit einer Konzentration von 0,05 bis 100 mg/ml, bevorzugt 0,1 bis 50 mg/ml und einem pH-Wert von 3,5 bis 8,5, vorzugsweise von 4 bis 8, bei einer Temperatur von 4 bis 37°C mit bis zu 200 mg/ 1000 mg Protein, bevorzugt mit bis zu 100 mg/1000 mg Protein, partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittel versetzt. Nach 0,1 bis 48 h Inkubation wird die Präparation bei einem Druck von 0,2 bis 3 bar, bevorzugterweise 2 bar, über ein Tiefenfilter geleitet, wobei eine klare Lösung erhalten wird.
Von einem Tiefenfilter spricht man, wenn Teilchen im Inneren des Filtermittels abgeschieden werden. Tiefenfilter basieren üblicherweise z.B. auf Sand, Polypropylen, Zellulose, Fiberglas, Porzellan oder Diatomeenerde. Sie haben eine faserige, granuläre oder gesinterte Matrix, welche eine zufällige Porenstruktur bewirkt. Tiefenfilter werden unter anderem als Vorfilter verwendet, um die Lebensdauer von Endfiltern, üblicherweise Oberflächenfilter oder Membranfilter, zu verlängern. Beispielsweise werden Tiefenfilter auf Basis von Sand auch zur Virusabreiche- rung eingesetzt. Für pharmazeutische Produkte wären solche Filter jedoch ungeeignet.
In einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird die erhaltene klare Lösung einem weiteren Nanofiltrations- schritt unterzogen, vorzugsweise mit Nanofilter der Porengröße von 35 - 100 nm, wobei die Sicherheit der Produkte bezüglich - 7 - filtrierbarer Viren noch mehr erhöht wird. Geeignete Verfahren sind z.B. in der WO 97/40 861 A beschrieben.
In Analogie zu den Kriterien für Sterilfilter bei Bakterien gilt ein biologisches Material als sicher virusentfernt, wenn ein Reduktionsfaktor von > 107 erreicht wird. Der Virustiter wird üblicherweise mit einer PCR-Methode bestimmt. Eine Methode zur Bestimmung der Prionen kann auf Basis eines üblichen Immunassays erfolgen.
Die vorliegende Erfindung wird nun anhand der folgenden Beispiele bzw. Vergleichsversuche näher erläutert.
Beispiel 1:
.Abreicherung von HIV-1 und PRV durch Inkubation mit Aerosil und anschließende Filtration
346,5 ml einer 2,5 %igen human-Immunglobulin-Lösung wurde mit 3,5 ml hochtitrigem HIV-1 bzw. PRV beaufschlagt. Von der Mischung und der Virussuspension wurde der Virustiter bestimmt. Dem mit Virus beaufschlagtem Immunglobulin wurde Aerosil 380 zugesetzt (15 mg pro g Protein) und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Daraufhin wurde von einem Aliquot der Virustiter bestimmt. Anschließend wurde über ein CUNO SA90 Filter, eingespannt in einem 47mm Filterhalter, filtriert. Vom Filtrat wurde eine Probe entnommen und titriert.
Der Virustiter wurde nach erfolgter serieller 1/2 log Verdünnung in Zellkulturmedium bestimmt. Jeweils 100 μl jeder seriellen Verdünnung wurden in 8 Vertiefungen einer Mikrotiterplatte gegeben, die 2-5 x 104 -Zellen pro Vertiefung enthielt (HIV:.AA-2, PRV:VERO) . Die Platten wurden anschließend 7 Tage bei 37 °C inkubiert. Nach dieser Inkubationszeit wurde der zeilschädigende Effekt (cytopathic effect, cpe) mikroskopisch bestimmt. Die TCID5 wurde auf der Basis der .Anzahl der Vertiefungen der Mikrotiterplatte, die einen positiven CPE zeigten, ermittelt. Die Effizienz des Prozesses der Virusabreicherung wurde als Reduktionsfaktor (R.F.) ausgedrückt, der nach der vom E.C. Committee - 8 - for Proprietary Medicine (Note for guidance on virus validation studies : The design, contribution and Interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses, Appendix II, CPMP/BWP/268/95, 29.2.1998) empfohlenen Formel berechnet wurde:
RF = log10 Probenvol. vor Behandl . x Virustiter vor Behandlung
Probenvol . nach Behandl. x Virustiter nach Behandlung
HIV-1 PRV
Virus-Stock-Titer 108'0 107'7
Virus-Titer im Produkt 106'0 105'7
Virus-Titer nach 1 Stunde 105'4 104'8mit mit Aerosil
Virus-Titer im Filtrat <100'6 <100'1
Reduktionsfaktor >5,4 >5,6
Nach einer Stunde Inkubation mit Aerosil erfolgt bereits eine geringfügige Reduktion des Virustiters (von 106'0 auf 105'4 bei HIV; von 105'5 auf 104'8 bei PRV). Nach der Filtration ist der Virustiter unter die Nachweisgrenze gesunken (<100'6 bei HIV-1, <100'1 bei PRV) . Dies zeigt, daß Viren durch die erfindungsgemäße Aerosilbehandlung in Kombination mit Tiefenfilter-Filtration abgetrennt werden können.
Beispiel 2 :
.Abreicherung von H.AV durch Inkubation mit Aerosil und anschließende Filtration
Eine 2,5 %ige Immunglobulin-Lösung wurde analog Beispiel 1 mit HAV versetzt, mit Aerosil eine Stunde gerührt und dann über ein CUNO SA90-Filter filtriert.
HAV Virus-Stock-Titer 108'3
Virus-Titer im Produkt 105'4
Virus-Titer nach 1 Stunde mit Aerosil 103'8 Virus-Titer im Filtrat <100'1
Reduktionsfaktor >5,3 - 9 -
Wie bei Beispiel 1 erfolgt bereits nach einer Stunde Inkubation mit Aerosil eine geringfügige Reduktion des Virustiters (von 105'8 auf 103'8). Nach der Filtration ist der Virustiter unter die Nachweisgrenze gesunken (<10υ'1) . .HAV ist ein kleines Virus ohne Lipidhülle. Die aus einem Plasmapool von mehr als 2000 Einzelspenden hergestellte Immunglobulinlösung enthält humane Antikörper gegen .HAV. Dies zeigt, daß auch kleine Viren ohne Lipidhülle durch Aerosilbehandlung und Filtration effektiv abgetrennt werden können. Eine vollständige Virusabreicherung erfolgt jedoch auch hier erst in Kombination mit der Tiefenfiltration.
Beispiel 3 :
Abreicherung von Parvovirus B19 durch Inkubation mit Aerosil und anschließende Filtration
Eine 2,5 %ige Immunglobulin-Lösung wurde analog Beispiel 1 mit B19 versetzt, mit Aerosil eine Stunde gerührt und dann über ein CUNO SA90-Filter filtriert. Da B19 nicht mittels Zellkulturen titriert werden kann, wurde hier die Anzahl der B19-Genome pro ml mittels PCR bestimmt.
B19 (DNA copies/ml) Virus-Stock-Titer 109'7
Virus-Titer im Produkt 108'3
Virus-Titer nach 1 Stunde mit Aerosil 105'4 Virus-Titer im Filtrat <101'7
Reduktionsfaktor >6,6
Wie bei Beispiel 1 und 2 erfolgt bereits nach einer Stunde Inkubation mit Aerosil eine geringfügige Reduktion des Virustiters (von 108'3 auf 105'4). Nach der Filtration ist der Virustiter unter die Nachweisgrenze gesunken (<101,7). Wie H.AV ist auch B19 ein kleines Virus ohne Lipidhülle. Die aus einem Plasmapool von mehr als 2000 Einzelspenden hergestellte Immunglobulinlösung enthält humane Antikörper gegen Parvovirus B19. Dies zeigt wie Beispiel 2, daß auch kleine Viren ohne Lipidhülle durch Aerosilbehandlung und Filtration abgetrennt werden können. Eine vollständige Virusverabreicherung erfolgt jedoch auch hier erst in - 10 -
Kombination mit der Tiefenfiltration.
Referenzbeispiel :
Adsorption von Parvovirus B19 an Aerosil und anschließende Zen- trifugation
48 ml einer 2,5 %igen Immunglobulin-Lösung wurden mit 2 ml B19 versetzt. Wie in Beispiel 1 wurde Aerosil zugegeben und danach eine Stunde gerührt. Im Unterschied zu den Beispielen 1-3 wurde dann Aerosil von der Immunglobulinlösung durch Zentrifugation abgetrennt (20.000 rpm, 30 Minuten) und im Zentrifugationsüber- stand die Anzahl der B19-Genome pro ml mittels PCR bestimmt.
B1 (DNA copies/ml)
Virus-Stock-Titer 109'7
Virus-Titer im Produkt 109'3
Virus-Titer nach 1 Stunde mit Aerosil 107'8
Virus-Titer im Zentrifugationsüberstand 106'5
Reduktionsfaktor 1,3
Wie bei Beispielen 1-3 erfolgt bereits nach einer Stunde Inkubation mit Aerosil eine geringfügige Reduktion des Virustiters (von 109'3 auf 107'8). Nach der Zentrifugation werden im Überstand 106'5 DNA-Kopien/ml gefunden, was einen Reduktionsfaktor von 1,3 ergibt. Die Virusabreicherung in der Immunglobulin-Lösung ist ungenügend, wenn Aerosil mittels Zentrifugation abgetrennt wird.
Beispiel 4 :
Abreicherung von MVM durch Inkubation mit Aerosil und Antikörper und anschließende Filtration
Eine 2,5 %ige Immunglobulin-Lösung wurde analog Beispiel 1 mit MVM versetzt, mit Aerosil eine Stunde gerührt und dann über ein CUNO SA90-Filter filtriert. Zusätzlich wurde noch 0,5 % eines Kaninchen-anti-MVM-.Antiserums (RaMVM) zugefügt. - 11 -
Versuch 1 Versuch 2 Zugabe von RaMVM
Virus-Stock-Titer 109'3 109'3
Virus-Titer im Produkt 107'8 107'4
VIrus-Titer nach 1 106'0 106'0 Stunde mit Aerosil
Virus-Titer im Filtrat <100'1 <100'1
Reduktionsfaktor >7,7 >7,3
Wie bei den vorigen Beispielen erfolgt bereits nach einer Stunde Inkubation mit Aerosil eine geringfügige Reduktion des Virustiters. Nach der Filtration ist der Virustiter unter die Nachweisgrenze gesunken (<0,1), wenn bei Versuchsbeginn Antikörper zugesetzt wurden. MVM ist ein kleines Virus ohne Lipidhülle. Die Immunglobulinlösung enthält keine .Antikörper gegen MVM, einem Maus-Parvovirus. Dies zeigt, daß kleine Viren ohne Lipidhülle durch die erfindungsgemäße Aerosilbehandlung und Filtration noch effizienter abgetrennt werden können, wenn spezifische Antikörper gegen dieses Virus zugesetzt werden.
Referenzbeispiel 2 :
Inkubation von Immunglobulin mit HIV mit anschließender Filtration
Wie bei Beispiel 1 wurden 346,5 ml einer 2,5 %igen human- Immunglobulinlösung mit 3,5 ml hochtitrigem HIV-I beaufschlagt. Von der Mischung und der Virussuspension wurde der Virustiter bestimmt. Das mit Virus versetzte Immunglobulin wurde ohne Zusatz von Aerosil 380 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Daraufhin wurde von einem Aliquot der Virustiter bestimmt. Anschließend wurde über ein CUNO SA90-Filter, eingespannt in einen 47 mm Filterhalter, filtriert. Vom Filtrat wurde eine Probe entnommen und titriert .
Virus-Stock-Titer 108'1
Virus-Titer im Produkt 106'3
VIrus-Titer nach 1 Stunde 106'4 Inkubation bei Raumtemperatur - 12 -
Virus-Titer im Filtrat 103'6
Reduktionsfaktor 2,7
Nach einer Stunde Inkubation bei Raumtemperatur ohne Aerosil ist keine Abnahme des Virustiters zu beobachten. Durch die nachfolgende Filtration nimmt der Virustiter auf 103'^ ab (Reduktionsfaktor 2,7) . Dies zeigt, daß für eine vollständige Abreicherung von HIV-1 eine Inkubation mit Aerosil vor der Filtration nötig ist .

Claims

- 13 -P A T E N T A N S P R Ü C H E :
1. Verfahren zur Abreicherung von Pathogenen aus einer Lösung enthaltend plasmatische Proteine durch Filtration, dadurch gekennzeichnet, daß die Lösung in Gegenwart eines anorganischen partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittel inkubiert wird und über Tiefenfilter geleitet wird, wobei eine klare Lösung erhalten wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Suspension des partikulären, oberflächenaktiven Reinigungsmittels unter Vermeidung einer Sedimentation über den Tiefenfilter geleitet wird.
3. Verfahren nach .Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die plasmatische Proteine enthaltende Lösung Humanproteine enthält .
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß als partikuläres, oberflächenaktives Reinigungsmittel ein Filterhilfsmittel ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus anorganischen Filterhilfsmitteln, wie Kieselsäure, Kieselgur oder Tonmineralien und Mischungen hievon verwendet wird.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die plasmatische Proteine enthaltende Lösung Antikörper spezifisch für die Pathogene enthält.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß die nach Filtration über den Tiefenfilter erhaltene klare Lösung weiters einer Nanofiltration unterzogen wird.
7. Pharmazeutische Präparation auf Basis von Immunglobulinen, erhältlich ausgehend von einem Plasmapool mit einer Größe von mindestens 1000 Plasmaspendern, vorzugsweise mindestens 2000 Plasmaspendern, durch Fraktionieren und .Anwendung des Verfah- - 14 - rens nach einem der .Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Präparation entsprechend einem Nachweis mittels quantitativer PCR frei von humanpathogenem Parvovirus B 19 ist.
8. Immunglobulinpräparation hergestellt gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Präparation eine Reinheit von 98 %, bestimmt durch Elektrophorese, aufweist und vorzugsweise frei von üblichen Stabilisatoren, vorzugsweise aus der Gruppe Zucker oder Zuckeralkohole, ist .
PCT/AT1999/000046 1998-02-25 1999-02-24 Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen WO1999043362A1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU25028/99A AU2502899A (en) 1998-02-25 1999-02-24 Method for the elimination of pathogens from solutions containing proteins

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ATA341/98 1998-02-25
AT34198A AT406873B (de) 1998-02-25 1998-02-25 Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1999043362A1 true WO1999043362A1 (de) 1999-09-02

Family

ID=3488031

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/AT1999/000046 WO1999043362A1 (de) 1998-02-25 1999-02-24 Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen

Country Status (3)

Country Link
AT (1) AT406873B (de)
AU (1) AU2502899A (de)
WO (1) WO1999043362A1 (de)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1250929A1 (de) * 1999-12-20 2002-10-23 Mitsubishi Pharma Corporation MITTELS PORöSER MEMBRAN BEHANDELTE, VIREN-FREIE PLASMAPROTEIN-VERBINDUNG UND DEREN HERSTELLUNGSPROZESS
US7094541B2 (en) 2001-08-31 2006-08-22 Gen-Probe Incorporated Assay for detection of human parvovirus B19 nucleic acid
WO2007017242A2 (de) * 2005-08-08 2007-02-15 Csl Behring Gmbh Neuartiges virusreduktionsverfahren basierend auf detergentien und scherkräften
US8772462B2 (en) 2010-05-26 2014-07-08 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US8796430B2 (en) 2010-05-26 2014-08-05 Baxter International Inc. Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US8940877B2 (en) 2010-05-26 2015-01-27 Baxter International Inc. Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
EP2670429B1 (de) 2011-02-04 2018-04-04 Octapharma AG Verfahren zur inaktivierung/entfernung von gerinnungsfaktoren mittels fällung

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0679405A1 (de) * 1994-04-25 1995-11-02 Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk Verfahren zur Abtrennung von Viren aus Proteinlösungen
WO1996035710A1 (en) * 1995-05-08 1996-11-14 Suomen Punainen Risti Veripalvelu Preparation of immunoglobulin
EP0798003A2 (de) * 1996-03-21 1997-10-01 Bayer Corporation Verwendung von strukturierten Tiefenfiltern zur Entfernung von Viren

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0679405A1 (de) * 1994-04-25 1995-11-02 Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk Verfahren zur Abtrennung von Viren aus Proteinlösungen
WO1996035710A1 (en) * 1995-05-08 1996-11-14 Suomen Punainen Risti Veripalvelu Preparation of immunoglobulin
EP0798003A2 (de) * 1996-03-21 1997-10-01 Bayer Corporation Verwendung von strukturierten Tiefenfiltern zur Entfernung von Viren

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1250929A1 (de) * 1999-12-20 2002-10-23 Mitsubishi Pharma Corporation MITTELS PORöSER MEMBRAN BEHANDELTE, VIREN-FREIE PLASMAPROTEIN-VERBINDUNG UND DEREN HERSTELLUNGSPROZESS
EP1250929A4 (de) * 1999-12-20 2004-12-29 Mitsubishi Pharma Corp MITTELS PORöSER MEMBRAN BEHANDELTE, VIREN-FREIE PLASMAPROTEIN-VERBINDUNG UND DEREN HERSTELLUNGSPROZESS
US7094541B2 (en) 2001-08-31 2006-08-22 Gen-Probe Incorporated Assay for detection of human parvovirus B19 nucleic acid
WO2007017242A2 (de) * 2005-08-08 2007-02-15 Csl Behring Gmbh Neuartiges virusreduktionsverfahren basierend auf detergentien und scherkräften
WO2007017242A3 (de) * 2005-08-08 2007-04-26 Zlb Behring Gmbh Neuartiges virusreduktionsverfahren basierend auf detergentien und scherkräften
US8921520B2 (en) 2010-05-26 2014-12-30 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US9708391B2 (en) 2010-05-26 2017-07-18 Baxalta Incorporated Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US8889838B2 (en) 2010-05-26 2014-11-18 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US8772462B2 (en) 2010-05-26 2014-07-08 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US8940877B2 (en) 2010-05-26 2015-01-27 Baxter International Inc. Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US8993734B2 (en) 2010-05-26 2015-03-31 Baxter International Inc. Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US9468675B2 (en) 2010-05-26 2016-10-18 Baxalta Incorporated Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US8796430B2 (en) 2010-05-26 2014-08-05 Baxter International Inc. Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US11891431B2 (en) 2010-05-26 2024-02-06 Takeda Pharm Limited ceutical Company Limited Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US10208106B2 (en) 2010-05-26 2019-02-19 Baxalta Incorporated Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US11136350B2 (en) 2010-05-26 2021-10-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US10875906B2 (en) 2010-05-26 2020-12-29 Baxalta Incorporated Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
US10640548B2 (en) 2011-02-04 2020-05-05 Octapharma Ag Method for inactivation/removal of coagulation factors by precipitation
EP2670429B1 (de) 2011-02-04 2018-04-04 Octapharma AG Verfahren zur inaktivierung/entfernung von gerinnungsfaktoren mittels fällung

Also Published As

Publication number Publication date
ATA34198A (de) 2000-02-15
AU2502899A (en) 1999-09-15
AT406873B (de) 2000-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4808864B2 (ja) ウイルスの不活化方法
DE69735974T2 (de) Verwendung von strukturierten Tiefenfiltern zur Entfernung von Viren
US5221483A (en) Process and apparatus for removal of DNA, viruses and endotoxins
DE60224310T2 (de) Verfahren zur Herstellung von virusinaktiviertem humanem Gammaglobulin G
JP2008500959A (ja) ウイルスについて安全な免疫グロブリンの製造方法
DE102011105525B4 (de) Verfahren zur Abtrennung von Biopolymer-Aggregaten und Viren aus einem Fluid
DE2801123A1 (de) Verfahren zur herstellung eines intravenoes applizierbaren serumeiweiss- praeparates
CN101821381A (zh) 处理用于生物反应器的细胞培养基的方法
WO1998038219A1 (de) Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie
AT406873B (de) Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen
DE69530761T2 (de) Methode und poröser träger zur entfernung von verunreinigungen
EP0413187B1 (de) Verfahren zur Herstellung nicht modifizierter intravenös verabreichbarer IgM- und/oder IgA-haltige Immunglobulinpräparate
AT403477B (de) Biologisches material frei von viralen und molekularen pathogenen und verfahren zur herstellung
US5696236A (en) Method for the removal of viruses from protein solutions
EP0727226A2 (de) Entfernen von Viren durch Ultrafiltration aus Proteinlösungen
EP1390126B1 (de) Verfahren zur verringerung einer adsorptionsneigung von molekülen oder biologischen zellen an einer materialoberfläche
DE69627319T2 (de) Herstellung von immunglobulin
AT407159B (de) Verfahren zur abreicherung von viralen und molekularen pathogenen aus einem biologischen material
DE102005047301A1 (de) Verfahren zum Nachweis der Virenabreicherung für die Validierung von Filtern und Filtrationsprozessen
DE69324681T2 (de) Entproteinisierung mit azlacton-gekoppelten funktionsträgern
CN107916205A (zh) 一种去除白酒中杂质的生物化学方法
DE602004008488T2 (de) Entfernung von prionen durch den gebrauch von metalloxid partikeln
WO2007054297A2 (de) Verwendung hydrophober interaktionschromatographie zur virusabreichung
US5912328A (en) Method for the removal of viruses from protein solutions
JPH02223531A (ja) 日本脳炎ワクチンの製造法

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY CA CH CN CU CZ DE DK EE ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MD MG MK MN MW MX NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK SL TJ TM TR TT UA UG US UZ VN YU ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW SD SZ UG ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: KR

REG Reference to national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8642

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: CA

122 Ep: pct application non-entry in european phase