WO1995018141A1

WO1995018141A1 - Composition medicinale inhibitrice de la resorption osseuse et favorisant l'osteogenese

Info

Publication number: WO1995018141A1
Application number: PCT/JP1994/002303
Authority: WO
Inventors: Hu Zheng; Lingling Weng
Original assignee: Iskra Industry Co., Ltd.; Institute Of Pharmacology
Priority date: 1993-12-29
Filing date: 1994-12-28
Publication date: 1995-07-06
Also published as: JPH07242548A; US5698542A; EP0688787A1; RU2136275C1; EP0688787A4

Description

明細 .書骨吸収抑制 · 骨形成促進用医薬組成物技術分野

本発明は、新規な骨吸収抑制 · 骨形成促進用医薬組成物に関する, 背景技術

骨の正常な維持は骨吸収と骨形成とのバランスにより達成されており、骨吸収が促進されれば骨成分が溶解 · 減少し、骨粗しょう症等の骨疾患の原因となる。エストロゲン等の性ホルモンが骨吸収を抑制する作用を有することが知られており、このため骨粗しょう症の予防 · 治療剤として欧米においては使用されている。しかしながら、これらのホルモンは骨に集中することは確認されていない。これらのホルモンの単独投与に起因する発癌の危険も否定できない。他方、テトラサイクリン系抗生物質は骨に集中する性質を有する力骨吸収抑制作用及び骨形成促進作用のいずれも有していない。わずかに、米国特許第 4 9 2 5 8 3 3号にはテトラサイクリンが、細胞レベルの実験において、骨蛋白質の合成を促進することが記載されている。しかしながら、骨蛋白質の合成は骨形成のために必要ではあるが、骨蛋白質の合成のみによって骨形成が促進されるものではない。

現在まで、骨形成促進作用を有し、骨疾患予防又は治療剤として使用することができる物質は知られていない。

従って本発明は、好ましくは相剰的に、骨吸収抑制作用及び骨形成促進作用を有し、且つ骨に集中することができる骨疾患治療剤を提供しょうとするものである。発明の開示

本発明者らは、上記の課題を解決すべく種々検討した結果、テトラサイクリン系抗生物質とエストロゲン等のステロイド系性ホルモンをリンカ一により共有結合させてることにより得られる化合物が. 骨吸収抑制作用に加えて骨形成促進作用をも有し、しかも骨に集中する性質を有することを見出し、本発明を完成した。

従って、本発明の医薬組成物の活性成分は、次の式（ I ) ：

X - Y - Z ( I )

〔式中、 Xは次の式（II) ：

(式中、 R , は水素又はヒドロキシル基であり； R ₂ は水素又はヒドロキシル基であり； R ₃ は水素又はメチル基であり；そして R ₄ は水素、ハロゲン、又はジメチルァミノ基である）

により表わされる 1価基であり；

Yは次の式（III ) ， (IV) 又は（V) ：

(2)-CH₂-N N- (CH₂CH₂0)_n— CH₂CH₂— X— (3) (III)

CH:

(2) - CH₂— N— (CH₂CH₂0)_n - CH₂CH₂ - X— (3) (IV)

(式中、 nは 0〜 4であり、そして— X—は直接結合 _ 0—又は — NH—である）により表わされる 2価基又は 3価基でありそして

Zは次の式（VI) ：

(式中、 ' は HO—又は 0 =であり； R₂ ' は水素原子又はメチル基であり； R₃ ' は水素原子、フヱニル基又は置換フヱニル基であり； R₄ ' はメチル基又はェチル基であり； R₅ ' はヒドロキシル基、ケトン基又はァセチル基であり； R₆ ' は水素、ヒドロキシ基、メチル基、ェチニル基又はプロピニル基であり；あるいは R₅ と R₆ ' は一緒になって =0を構成し； R₇ ' は水素、ヒドロキシル基、又は =0であり、あるいは R₆ ' と R₇ ' は 2， 2—ジォキシプロピル基の酸素に結合しており；そして二は単結合又は二重結合を表わす）

で表わされる化合物の水素又はヒドロキシル基が除去された 1価基であり、この結合基は式（VI) の化合物の 2位、 3位、 4位、 6位、 7位又は 1 7位、あるいは 1 1位に結合したフヱニル基に存在し；式（II) の（ 1 ) と式（III ) 〜（V) の（ 2 ) とは直接連結されており、そして式（III ) 〜（V) の（ 3 ) と式（VI) の前記結合基のいずれかとが直接連結されている〕

により表わされる。

上記式（II) においてハロゲンは例えば弗素、塩素、臭素、又はヨウ素であり、好ましくは塩素である。図面の簡単な説明

図 1 は実験 3の結果を示す写真である。 '

図 2は実験 3の結果を示す写真である。

図 3は実験 3の結果を示す写真である。

図 1〜 3は同じ実験は 3回反復して実施した結果を示している。図 4は化合物 1 一 3が去勢雄ラッ卜の体重に与える影響を示すグラフである。

図 5は種々の量の化合物 1 一 3がラットの骨密度（B MD) に与える影響を示すグラフである。

図 6は種々の投与方法において化合物 1 — 3が DVXラットの骨密度（BMD) に与える影響を示すグラフである。

図 7は 0. 5 mg/日の化合物 1― 3が高カルシゥム食 DVXラットの骨密度（BMD) に与える影響を示すグラフである。発明を実施するための具体的な形態

本発明の医薬の活性成分である式（ I ) の化合物を構成する式

(II) の 1価基としては、例えば次のものが挙げられる。

次の式（II一 1 ) ：

(式（II) 中の、 R, が水素であり、 R₂ がヒドロキシル基であり . R 3 がメチル基であり、そして R₄ が水素である）により表わされるテトラサイクリンの 1価基。

次の式（II一 2 ) ：

(式（II) 中の R, がヒドロキシル基であり R 2 力くヒドロキシル基であり、 R₃ がメチル基であり、そして R₄ がメチル基である）により表わされるテラマイシンの 1価基。

次の式（II— 3 ) ：

(式（II) 中の R> が水素であり、 R₂ がヒドロキシル基であり、 R 3 がメチル基であり、そして R₄ が塩素である）により表わされるクロ口テトラサイクリンの 1価基。

次の式（ II— 4 ) ：

(式（II) 中の R, がヒドロキシル基であり、 R 2 が水素であり、 R 3 がメチル基であり、そして R₄ が水素である）により表わされるデォキシテトラサイクリン 1価基。

次の式（II— 5 ) ：

(式（II) 中の R が水素であり、 R₂ が水素であり、 R₃ が水素であり、そして R がジメチルァミノ基である）により表わされるァミノテトラサイクリンの 1価基。

本発明の医薬の活性成分である式（ I ) の化合物を構成する式 (VI) の化合物の 1価基としては、例えば次のものが挙げられる。次の式（VI— 1 ) ：

(式（VI) 中の R₅ ' と R₆ ' が一緒になって =0を表わし、そして R₇ ' が水素である）により表わされるエストロンの 1価基。次の式（VI— 2 ) ：

0H

(式（ I ) の R₅ ' がヒドロキシル基であり、 R₆ ' が水素でありそして R₇ ' が水素である）により表わされるエストラジオールの 1価 ¾ o

次の式（VI— 3 ) ：

(式（VI) 中の R がヒドロキシル基であり、 R₆ ' がェチニル基であり、そして R ' が水素である）エストロアルキノールの 1 価。

次の式（VI— 4 ) ：

(式（VI) 中の R₅ ' がヒドロキシル基であり、 R₆ ' が水素であり、そして R₇ ' がヒドロキシル基である）エストリオールの 1価上記式（VI) 〜（VI— 4 ) の化合物の結合基はそれらの 3位、 6 位又は 1 7位に存在する。

(VI) はさらに、例えば、次の化合物の水素又はヒドロキシル基を除去した 1価基であることもできる。

OH

従って、本発明の医薬の活性成分は、例えば次の式により表わされる

〔11— 1〕一 UII 〕一（ 3 ) 〔VI— 1〕（（）内の数字は式〔VI— 1〕の基の結合基の位置を示す。以下同じ）、〔II一 1〕一 cm 〕一 ( 6 ) 〔VI - 1〕〔II一 1〕一〔III 〕 - ( 1 7 )

〔VI - 1〕、〔II一 1〕一〕一（ 3 ) 〔VI - 2〕〔11- 1〕一〔III 〕一（ 6 ) 〔VI - 2 ) 〔11— 1〕一〔III 〕 - ( 1 7 )

CVI- 2〕、〔11— 1〕一〕一（ 3 ) [VI- 3〕〔11— 1〕一〔III 〕一（ 6 ) 〔VI— 3〕〔II一 1〕 - cm 〕 - ( 1 7 )

〔VI— 3〕〔II一 1〕一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI - 4〕〔11— 1〕

〕一 ( 6 ) 〔VI— 4〕、〔II一 1〕一〔m 〕 - ( 1 7 ) 〔VI - 4〕、

〔II一 1〕一〔IV〕一（ 3 ) 〔VI— 1〕、〔Π— 1〕 — 〔IV〕 ( 6 ) 〔VI - 1〕、〔11— 1〕一〔IV〕一（ 1 7 ) 〔VI— 1〕、〔11— 1〕〔IV〕一（ 3 ) (VI- 2 ) 、〔11— 1〕〔IV〕 ( 6 ) 〔VI - 2〕、〔11— 1〕 — 〔IV〕一 1 7 ) [VI- - 2〕、〔II一 1〕一〔IV〕 — （ 3 ) [VI- 3 ] , II- 1 ] 一〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 3〕、〔II一 1〕一〔IV〕一 1 7 ) [VI- - 3〕、〔II一 1〕 - 〔IV〕 — （ 3 ) [VI- 4 , 11- 13 - 〔IV〕一 ( 6 ) (VI- 4〕、〔II一 1〕一〔IV〕一 1 7 ) [VI- - 4〕、〔11— 1〕 — 〔V〕 — （ 3 ) [VI- 1〕〔II一 1〕 - - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 1〕、〔11— 1〕一〔V〕 — 1 7 ) [VI- - 1 〕、〔II一 1〕〔V〕一（ 3 ) (VI- 2 ) , II- n - 〔V〕 - ( 6 ) 〔VI - 2 〔II - 1 〕 - 〔V〕 - 1 7 ) [VI- - 2〕、〔II一 1〕 - 〔V〕 — （ 3 ) 〔VI - 3〕、 II- n 一〔V〕一 ( 6 ) (VI- 3〕、〔II一 1〕一〕 — 1 7 ) [VI- - 3 ) , 〔11— 1〕一〔V〕 — （ 3 ) 〔VI— 4〕、 II一 1〕 - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 4〕、〔II一 1〕一〔V〕一 1 7 ) [VI- - 4〕、 (II- 2 ] 一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI - 1 、〔II一 2〕

— ( 6 ) 〔VI— 1〕、 [II- 2 ) - [III - ( 1 7 ) 〔VI— 1〕〔II一 2〕 - 〔III 〕 — （ 3 ) 〔VI - 2〕 UI— 2〕一

— ( 6 ) 〔VI一 2〕、〔II一 2〕一〔III - ( 1 7 ) 〔VI - 2〕〔11— 2〕一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI— 3〕〔11— 2〕 - - 〔III 〕

— ( 6 ) 〔VI — 3〕、〔II一 2〕 — 〔III - ( 1 7 ) CVI- 3 ] 〔11- 2〕 - 〔III 〕 — （ 3 ) 〔VI - 4〕〔II一 2〕 - - 〔III 〕

— ( 6 ) 〔VI一 4〕、〔 11一 2〕一〔 111 - ( 1 7 ) 〔VI— 4〕

〔II一 2〕一〔 IV〕 — （ 3 ) [VI- 1 ) 〔II - 2〕 - - 〔IV〕 - ( 6 ) [VI- 1〕、〔11— 2〕一〔IV〕 — 1 7 ) [VI- -.1〕、〔11— 2〕一〔IV〕一（ 3 ) 〔VI— 2〕、 11一 2〕 - 〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 2〕、〔11— 2〕 — 〔IV〕 — 1 7 ) [VI- - 2〕、〔II一 2〕 - 〔IV〕 — （ 3 ) 〔VI - 3〕、 II— 2〕一〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI— 3〕、〔11— 2〕一〔IV〕一 1 7 ) [VI- - 3〕、〔 11一 2〕 - 〔IV〕一（ 3 ) 〔VI— 4〕、 (11- 23 - 〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 4〕、〔II一 2〕 — 〔IV〕 — ( 1 7 ) [VI- - 4〕、

〔11— 2〕 — 〔 V〕一（ 3 ) 〔VI— 1〕〔II一 2〕 - - 〔V〕一 ( 6 ) CVI- 1〕、〔11— 2〕 — 〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 1〕、〔11— 2〕一〔 V〕 — （ 3 ) 〔VI— 2〕、〔11— 2〕一〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 2〕、〔II一 2〕一〔V〕 ― ( 1 7 ) [VI- - 2〕、〔11— 2〕〔 V〕一（ 3 ) 〔VI - 3〕、〔II一 2〕 - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 3〕、〔11— 2〕一〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 3〕、〔II一 2〕一〔 V〕 — （ 3 ) 〔VI— 4〕、〔II一 2〕一〔V〕一 ( 6 ) (VI- 4〕、〔II一 2〕 — 〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 4〕、

〔II一 3〕一〔III 〕 — （ 3 ) [VI- 1 、〔II一 3〕 - 〔III 〕

- ( 6 ) 〔VI— 1〕、〔11— 3〕 — 〔III - ( 1 7 ) 〔VI - 1〕、〔II一 3〕一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI— 2〕 UI - 3〕 - - 〔III 〕一（ 6 ) 〔VI— 2〕、〔II一 3〕 — 〔III - ( 1 7 ) 〔VI - 2〕、〔11— 3〕一 CIII ] - ( 3 ) 〔VI - 3〕〔II一 3〕 - - 〔III 〕

— ( 6 ) 〔VI一 3〕、 UI - 3〕 — 〔III - ( 1 7 ) [VI- 3 、〔11— 3〕一〔III 〕 — （ 3 ) [VI- 4 ) 〔II一 3〕 - - 〔III 〕一（ 6 ) 〔VI一 4〕、〔II一 3〕 — 〔III - ( 1 7 ) 〔VI— 4〕、

〔II一 3〕一〔IV〕一（ 3 ) [VI- 1 ) 〔II一 3〕 - - [IV) - ( 6 ) 〔VI- 1〕、〔11— 3〕一〔IV〕一 ( 1 7 ) 〔V卜 - U 、〔II一 3〕一〔IV〕一（ 3 ) CVI- 2〕、〔II一 3〕 - 〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 2〕、〔II一 3〕一〔IV〕 — ( 1 7 ) [VI- - 2〕、〔11— 3〕 - 〔IV〕一（ 3 ) 〔VI - 3〕、〔11— 3〕一〔IV〕一 ( 6 ) (VI- 3〕、〔11— 3〕 — 〔IV〕一 ( 1 7 ) 〔Vト - 3〕、〔II一 3〕 - 〔IV〕一（ 3 ) 〔VI— 4〕、〔 II一 3〕一〔IV〕一 ( 6 ) [VI- 4〕、〔11— 3〕一〔IV〕一 ( 1 7 ) [VI- - 4〕、〔11— 3〕一〔 V〕一（ 3 ) 〔VI— 1〕〔11— 3〕 - - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 1〕、〔I 一 3〕一〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 1〕、 CII - 3 ) - 〔V〕一 3 ) 〔VI— 2〕、 [II- 3 ) 一〔V〕一 ( 6 ) 〔VI— 2〕、〔I 一 3〕一〔V〕一 ( 1 7 ) CVI- - 2〕、〔11— 3〕一〔V〕一 3 ) 〔VI— 3〕、〔11— 3〕 - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI - 3〕、〔I 一 3〕一〔V〕一 ( 1 7 ) (VI- - 3〕、〔11— 3〕一〔V〕一 3 ) 〔VI— 4〕、〔11— 3〕 - 〔V〕 ― ( 6 ) CVI- 4〕、〔I 一 3〕一〔V〕一 ( 1 7 ) 〔V卜 - 4〕、

[II- 4〕 - 〔III 〕 — ( 3 ) 〔VI - 1 、〔II一 4〕一〔III 〕一（ 6 ) 〔VI— 1〕、 II一 4〕一〔III - ( 1 7 ) CVI- 1〕、〔II一 4〕一〔III 〕一 ( 3 ) 〔VI - 2〕〔11— 4〕 - - 〔III 〕

— ( 6 ) 〔VI一 2〕、 II一 4〕 - [III - ( 1 7 ) [VI- 2 ] 、〔II一 4〕一 cm 〕 ( 3 ) 〔VI - 3〕〔11— 4〕 - - 〔III 〕

- ( 6 ) 〔VI一 3〕、 II一 4〕一〔III - ( 1 7 ) 〔VI— 3〕、〔II一 4〕〔ιπ 〕 - ( 3 ) 〔VI— 4〕〔11— 4〕 - - 〔III 〕一（ 6 ) 〔VI一 4〕、 II一 4〕一〔III - ( 1 7 ) 〔VI— 4〕、

〔II一 4〕一〔IV〕一 ( 3 ) [VI- 1 ) 〔II - 4〕 - - 〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 1 ) 、一 4〕 — 〔IV〕一 ( 1 7 ) [VI- - 13 、〔II一 4〕一〔IV〕一 3 ) 〔VI - 2〕、 C II- 4 ) 一 CIV 一 ( 6 ) 〔VI - 2 ) 、一 4〕一〔IV〕 — ( 1 7 ) 〔VI- - 2〕、〔II一 4〕一〔IV〕一 3 ) 〔V卜 3〕、 [II- 4 ] 一〔IV〕 ― ( 6 ) 〔VI - 3〕、一 4〕 — 〔IV〕一 ( 1 7 ) [VI- - 3〕、 [II- 4〕〔IV〕一 3 ) [VI- 4〕、 (II- 4 ) 一〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 4〕、 — 4〕 _ 〔IV〕一 ( 1 7 ) CVI- - 4〕、

〔II一 4〕一〔V〕 ( 3 ) 〔VI - 1〕〔Π - 4〕 - - 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI— 1 ) 、一 4〕一〔V〕一 ( 1 7 ) 〔V卜 - 1 ) . CII- 4 ) 一〔V〕一 3 ) 〔V卜 2〕、〔II一 4〕一〔V〕一 ( 6 ) 〔VI— 2〕、一 4〕一〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 2〕、〔I：一 4〕一〔 V〕一（ 3 ) 〔VI— 3〕、〔II一 4〕 - 〔V〕一 ( 6 ) (VI- 3〕、〔11— 4〕 — 〔V〕 ― ( 1 7 ) [VI- - 3〕、 CI 一 4〕一〔V〕 - ( 3 ) [VI- 4〕、〔II一 4〕一〔V〕 - ( 6 ) 〔VI— 4〕、〔II一 4〕一〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 4〕、

11— 5〕 — 〔III 〕 — （ 3 ) [VI- 1 、 [II- 5〕 - 〔III 〕 6 ) 〔VI一 1〕、〔11— 5〕 — 〔III - ( 1 7 ) 〔VI - 1〕、

〔I 一 5〕一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI - 2〕〔11— 5〕 - - 〔III 〕 6 ) 〔VI — 2〕、〔11— 5〕 — 〔III - ( 1 7 ) 〔VI— 2〕、

〔I 一 5〕一〔III 〕一（ 3 ) 〔VI— 3〕〔II一 5〕 - - 〔III 〕 6 ) 〔VI一 3〕、〔11— 5〕一〔III - ( 1 7 ) CVI- 3〕、 c i 一 5〕 - 〔III 〕一（ 3 ) [VI- 4 ) 〔II一 5〕 - - ΠΙΙ 〕 6 ) 〔VI — 4〕、〔II一 5〕 — 〔III 一 ( 1 7 ) 〔VI— 4〕、 II一 5〕一〔IV〕一（ 3 ) CVI- 1 ) 〔11— 5〕 - - 〔IV〕一

( 6 ) 〔VI - 1〕、〔11— 5〕一〔IV〕 — ( 1 7 ) [VI- - 、

CI 一 5〕一〔IV〕一（ 3 ) 〔VI— 2〕、〔II一 5〕〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI - 2〕、〔11— 5〕一〔IV〕 — ( 1 7 ) [VI- - 2〕、

CI 一 5〕一〔IV〕一（ 3 ) [VI- 3 ) . 〔II一 5〕〔IV〕一 ( 6 ) 〔VI— 3〕、〔II— 5〕 — 〔IV〕 — ( 1 7 ) {VI- - 3〕、〔I 一 5〕一〔IV〕一 ( 3 ) [VI- 4〕、〔11— 5〕〔IV〕一 ( 6 ) [VI- 4〕、〔11— 5〕 — 〔IV〕一 ( 1 7 ) 〔VI- - 4〕、

II一 5〕一〔V〕一（ 3 ) 〔VI - 1〕〔11— 5〕 - - 〔V〕一

( 6 ) 〔VI— 1〕、〔II一 5〕 — 〔V〕一 ( 1 7 ) CVI- - 1 ) . CI 一 5〕一〔 V〕一（ 3 ) 〔VI - 2〕、〔11— 5〕 ― 〔V〕一 ( 6 ) 〔VI— 2〕、〔II一 5〕一〔V〕一 ( 1 7 ) [VI- - 2〕、〔I 一 5〕一〔V〕 - ( 3 ) 〔VI - 3〕、〔II一 5〕 - 〔V〕一 ( 6 ) [VI- 3〕、〔II一 5〕 — 〔V〕 ― ( 1 7 ) [VI- - 3〕、〔I 一 5〕一〔 V〕一（ 3 ) 〔VI— 4〕、〔II一 5〕一〔V〕一 ( 6 ) [VI- 4 ] 、〔II一 5〕一〔V〕 - ( 1 7 ) 〔VI - 4〕。前記の化合物は、それ自体既知の方法により ^造することができる。例えば、まず、式（III ) 〜（V) で示されるリンカ一を式 (VI) で示されるステロイド化合物と結合せしめ、次にその結合生成物とテトラサイクリン系物質とを結合させればよい。

式（III ) 〜（V) のリンカ一と式（VI) のステロイド化合物の 3位と結合は、例えば次の反応式により行われる。

さらに、 R₅ ' がヒドロキシル基であり、 R₆ ' が水素又はェチル基である化合物は例えば次の反応により得'ることができる。

Rし

R' は HN \ _ NCH₂CH₂

/

又は

HNCH₂CH₂— また、式（III ) 〜（V) のリンカ一と式（VI) のステロイド化合物の 6位とを結合させるには、ステロイド化合物の 6位に =0基を導入した後、次の反応を行えばよい。

次に、リンカ一とステロイド化合物との反応生成物に、テトラサイクリン化合物を結合せしめるには、リンカ一の N原子とテトラサイクリン化合物のアミド基の N原子とをホルムアルデヒドにより架橋すればよい。

本発明の医薬は、経口投与、又は非経口投与、例えば静脈内注射皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射、等により投与することができる。ヒトに対する有効日用量は、経口投与において 0 . 2〜 2 0 0 mgであり、非経口投与において 0 . 1 〜 1 0 0 mgである。本発明の化合物は毒性が極めて低く、例えば、実施例 1 において製造される化合物 1 のマウスでの経口投与における L D ₅。は約 1 4 3 mgZ kgである。

本発明の医薬は、投与経路に応じた常用の剤'形をとることができる。例えば、経口投与の場合は、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、粉剤液剤等の形態をとることができる。これらは常法に従って製造することができる。例えば、液剤は、本発明の活性物質を適当な液体媒体、例えば水性緩衝液等に溶解又は懸濁すればよい。また、粉剤は本発明の活性成分を粉末状増量剤、例えば、澱粉、例えばトウモロコシ澱粉、及び/又は糖、例えばラクトース等と混合することにより製造される。

錠剤は、増量剤、例えば上記の増量剤及び結合剤、例えば澱粉糊と混合した後、錠剤形成機により圧縮することにより製造される。顆粒剤は、活性成分を、増量剤、結合剤等と混合して、液体、例えば水及び又はグリセリン等と共にこね合わせた後、篩を通して顆粒化し、それを乾燥することにより製造される。カプセル剤は、前記の粉末又は顆粒剤を適当な大きさのカプセルに封入することにより製造される。

非経口投与剤は、活性成分を注射用媒体、例えば生理食塩水、緩衝液、例えばリン酸緩衝液、等に溶解又は懸濁することにより製造される。非経口投与剤はまた、使用前に溶解又は懸濁するための凍結乾燥物であってもよく、凍結乾燥のための担体として、例えばラクトース等の糖類、あるいはその他の常用の凍結乾燥担体を用いることができる。実施例

以下に、本発明による化合物の具体的な実施例を述べる。但し、本発明の主体範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。

1 g 合成例 1 ：

1 — 1. 3 —クロルエトキシ一 1 7 —ォキシ 'エストラー 1， 3 , 5 ( 1 0 ) — トリェン（化合物 1 — 1 ) の合成：

エストロン 2 7. l g、 3 —クロ口エトキン一 1 7 —ォキシエストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェン 2 2. 2 g及び少量のトリェチルァ二リン塩酸塩を混合した、トルエン溶液の中に、 N a O H溶液を加え、 pHを約 1 0 に調整し、 4時間反応させ、溶剤を蒸発させる。固型物をアルコールで結晶させ、化合物（ 1 一 1、 R ₇ = H) が得られる。その時の収率は 7 9 %、 m p 8 6 - 8 8 °C、元素分析は C 7 2. 4 0 H. 4 3 C 1 1 0. 7 1 である。

1 — 2. N— 〔 1 7 —ォキシ一エストラ一 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕ピぺラジン（化合物 1 一 2 ) の合成：上記化合物（ 1 — 1 ) 7. 8 g、無水ピぺラジン 4 6. 6 g及びジメチル ' ホルムアミド（DMF) 1 2 0 mlを、 8 0〜 1 0 0 で 5時間反応させ、 DMFを蒸発、除去させ、得られた固型物を、ァルコールとアセトンで再び結晶させ、白色結晶性化合物（VI) を得る。収率は 8 5 %、 m pは 1 4 0 - 1 4 2 °C、元素分析は C 7 5. 1 0 H 9. 2 0 N 7. 4 0である。

1 — 3. N - 4 - 〔 1 7 —ォキシ一エストラー 1 , 3， 5 ( 1 0 ) - トリェンー 3 —ォキシェチル〕ーピペラジン一 1 ーメチレン一テトラサイクリン（化合物 1 一 3 ) の合成：

上記化合物（ 1 — 2 ) 3. 8 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 1 5 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させ、テトラサイクリン 3. 5 gを加え、撹拌し、 5時間反応させる。反応が終わった後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物（化合物 1 一 3 ) (その 1^ = 1^ = 11， R 0 H, R = C H ) が得られる。収率は 9 5 %、 m pは 1 6 0 °C ( d e c ) . 元素分析は C 6 2 1 H 7. 1 2 N 6 6 7である。

合成例 2 ：

2 — 1 . N— 〔 1 7 yS—ヒドロキシ一エストラー 1 , 3， 5 ( 1 0 ) 一トリェン一 3 —才キシェチル）ピぺラジン（化合物 2 — 1 ) の合成：

実施例 1 の化合物（ 1 一 2 ) 3. 8 gをメチルアルコール中に溶かし、ァルカリ条件下で、ポタンゥムボロハイドレート 0. 5 gを加えて、加熱回流して、 3時間反応させる。反応液を酸で中和させ. メチルアルコールを蒸発し、得られた固型粗成分を、アルコールで再結晶させる。最後に白色の結晶（化合物 2 — 1、 R ₇ = H) が得られる。収率は 9 1 %、 m pは 1 4 1 — 1 4 2 °C、元素分析は C 7 5. 2 1 H 9. 2 3 N 7. 1 4である。

2 — 2. N— 4 一〔 1 7 yS—ヒドロキシ一エストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) 一トリェン一 3 —ォキシェチル〕一ピペラジン一 1 —メチレン一テトラサイクリン（化合物 2 — 2 ) の合成：

上記化合物（ 2 — 1 ) 3. 8 4 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させ、テトラサイクリン 3. 5 gを加えて、撹拌し、 5時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄するその後淡黄色の固型物（化合物 2 — 2 ) (R , = R ₄ = H, R 2 = 0 H, R a = C H 3 ) を得る。収率は 9 5 %、 m pは 1 6 5 °C ( d e c ) 、元素分析は C 6 7. 3 0 H 7. 3 4 N 6. 5 4である

合成例 3 ：

N— 4 一〔 1 7 )5—ヒドロキシ一エストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) - トリェン一 3 —才キシェチル〕一 1 ーピペラジン一 1 ーメチレン —ォキシテトラサイクリン（化合物 3 — 1 ) の合成：

実施例 2の化合物（ 2 — 1 ) 3. 8 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させ、テラマイシン 3. 5 gを加え、撹拌し、 5時間反応させる。反応後は実施例 1 一 3 と同様に処理して、淡黄色の固型物（化合物 3 ) (R , = R 2 = O H, R a = C H a ， R 4 = H) を得る。収率は 9 3 %、 m pは 1 7 1 °C ( d e c ) 、元素分析は C 6 5. 6 2 H 7. 1 0 N 6. 6 7である。 CONHCH2

合成例 4 ：

4 一 1 . ビス一 N N— 〔 1 7 —ォキシ一エストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) 一トリェン 3 —才キシェチル〕ァミン（化合物 4 — 1 ) の合成：

塩化マスタゲン 3 6 g、エストロン 1 2 g、トリェチルァニリン 4 g、水、トルエン等を、撹拌しながら、 N a O H溶液を加える, その後 5時間回流させた後、溶剤を蒸発させる。その固型分をアルコールで再結晶させた後、目的物を得る。収率は 7 2 %、 m pは 2 5 6〜 2 5 9 、元素分析は〇 7 8. 5 0 H 8. 6 0 N 2 3 1である。

4 — 2. ビス一 N, N— 〔 1 7 —ォキシ一エストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕アミノメチレンーテトラサイクリン（化合物 4 _ 2 ) の合成：

上記化合物（ 4 一 1 ) 6. 1 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させた後、テトラサイクリン 3. 5 gを加え、撹拌して 8時間反応させる。反応終了後、例 1 — 3の如く、淡黄色の固型物（化合物 4 一 2 ) (R r = R 4 = H, R 2 = 0 H, R 3 = C H 3 ) が得られる。収率は 6 8 %、 010は 1 8 3 （（1 6 € 、元素分析は C 7 1 . 1 0 H 7. 2 1 3. 8 9である。その構造は以下の分子式であらわされる。 '

合成例 5 ：

5 - 1 . ビス一 N, N - 〔 1 7 yS—ヒドロキシーエストラ一 1 , 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕ァミン（化合物 5 一 1 ) の合成：

上記化合物（ 4 — 1 ) 6. l gにメチルアルコールを加え、アルカリ条件下で、ポタシゥムボロハイドレート 0. 5 を加え、回流して、 5 時間反応させる。次に酸で中和させ、メチルアルコールを蒸発する。固体はアセトンとアルコールの溶液で精製する。得た化合物（ 4 — 1 ) 中の、エストロン— 1 7 —ケトンは、一 1 7 )δ —水酸基の白色物に還元する。収率は 8 2 %、 m ρは 1 9 3〜 1 9 7 °C、元素分析は C 7 8. 4 1 H 8. 5 1 2. 3 3である。

5 — 2. ビス一 N， N - 〔 1 7 ^5—ヒドロキシーエストラ _ 1， 3 , 5 ( 1 0 ) — トリェン一 3 —才キシェチル〕アミノメチレン一テトラサイクリン（化合物 5 — 2 ) の合成：

上記化合物（ 5 — 1 ) 5. 4 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させた後、テトラサイクリン 3. 5 gを加え、撹拌して 8時間反応させる。反応終了後、実施例 1 一 3の如く、淡黄色の固型物'（化合物 5 — 2 )

(R！ = R = H, R 0 H, . R = C H ) が得られる。収率は 9 4 %、 m pは 1 7 1 °C ( d e c ) 、元素分析は C 7 1 . 0 2 H 7. 0 2 N 3. 9 8である。その構造は以下の分子式であらわれる。

合成例 6 ： -

6 — 1 . ビス一 N, N— 〔 1 7 ^9—ヒドロキシ一 1 7 一ェチニルーエストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕ァミン（化合物 6 — 1 ) の合成：

実施例 4の化合物（ 4 一 1 ) 6. l gをテトラヒドロフラン 1 0 0 ml及び水酸化カリウム末 1 . 0 gの中に溶解し、激しく撹拌して、 0 °Cの条件下で、アセチレンガスを導入し、完全に反応させる。それから、酸で PH4に中和させ、溶剤を蒸発する。その後、水で洗浄し、乾燥させる。また、アルコール及びクロ口ホルムで再結晶させ、白色固型物（ 6 — 1 ) を得る。収率は 7 8 %、 m pは 2 0 1 〜 2 0 5 °C、元素分析は C 7 9. 2 1 H 8. 5 8 N 2. 1 8である。そ,の構造は以下の分子式であらわされる。

6 - 2. 上記の化合物（ 6 — 1 ) 6. 6 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 6 0 °Cで 2時間反応させた後、テトラサイクリン 3. 4 gを加え、撹拌して 8時間反応させる。反応終了後、例 1 一 3の如く、淡黄色の固型物（化合物 6 — 2 ) ビス一 N， N - 〔 1 7 /5— ヒドロキシ一 1 7 一ェチニル一ェストラ一 1 ， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕アミノメチレン一テトラサイクリン（R , = R 4 = H， R 2 = O H， R = C H a ) を得る。収率は 9 3 %、 m pは 1 7 8 °C ( d e c ) 、元素分析は C 7 2. 1 H 7. 1 2 3. 9 0である。その構造は以下の分子式であらわされる。

合成例 7 ：

7 — 1 . N— 〔 1 7 —ォキシ一エストラ一 1，· 3， 5 ( 1 0 ) — トリェン一 3 —ォキシェチル〕一 N—メチルァミン（化合物 7 — 1 ) の合成：

エストロン 2. 7 g、クロロェチルメチルァミン l g、及び少量のトリェチルァニリンを、トルエン溶液に混和し、水酸化ナトリウム溶液を加え、 pHを約 1 0 にし、 4時間反応させる。その後、溶剤を蒸発させ、アルコールで固型物を再結晶させ、化合物（ 7 — 1、 R 7 = H) を得る。収率は 7 1 %、 m pは 2 6 2〜 2 6 6て、元素分析は C 7 5. 2 4 H 9. 4 1 N 4. 2 8である。その構造は以下の分子式であらわされる。

7 - 2. 上記の化合物（ 7 — 2 ) 3. 3 g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロパノール 2 0 mlを、 6 0 °Cで 2時間反応させた後、テトラサイクリン 3. 5 gを加え、撹拌して 8時間反応させる。反応終了後、例 1 一 3の如く、淡黄色の固型物（化合物 7 一 2 ) N— 〔 1 7 —ォキシ一エストラ一 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリエン一 3 —ォキシェチル〕一 N—メチルアミノメチレン一テトラサイクリン（R , = R 4 = H, R 2 = 0 H, R a = C H 3 ：) を得る。収率は 9 0 %、 m pは 1 9 0 °C ( d e c ) 、元素分析は C 6 8. 8 H 7. 2 2 N 3. 6 2である。その構造は以下の分子式であらわされる。

合成例 8 ：

8 — 1 . N— 〔 3 , 1 7 S—ジヒドロキシ一エストラー 1 , 3 , 5 ( 1 0 ) 一トリェン一 6 —アミノエチル〕ピぺラジン（化合物 8 一 1 ) の合成：

ィ匕合物（ 8 — 0 ) 5. 2 gをテトラヒドロフラン 1 2 0 mlの中に溶かし、アミノエチル · ピペラジン 3. 2 gを加え、回流し、 2時間反応させる。 T H Fを蒸発し、除去させ、メチルアルコール 1 0 0 mlとぎ酸アンモニゥム 2. 8 g加え、更に回流し、 3時間反応させ、メチルアルコールを蒸発し、除去させ、残りをアルコールで再結晶させ、化合物 8 — 1 を得る。 m p ： 1 7 2〜 1 7 マ ⁰ C。

8 — 2. N— 4 — （ 3 , —ジヒドロキシ一エストラーし 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 6 —アミノエチル〕一ピペラジン一 1 ーメチレン一テトラサイクリン（化合物 8 — 2 ) の合成：

上記化合物（ 8 — 1 ) 4. l g、メタホルムアルデヒド 0. 0 3 g、イソプロノール 2 0 mlを混合し、 5 0 °Cで 2時間反応させ、テトラサイクリン 3. 5 gを加え、撹拌し、 5 時間反応させる。反応が終了後、濾過し、イソプロパノールとェチルエーテルで洗浄し、真空で乾燥させ、淡黄色の固形物（化合物 8 — 2 ) を得る。 m pは 1 6 7 °C ( d e c ) s 収率は 8 1 . 2 %である。 C0NHCH₂N NCH₂CH₂

\ _ /

OH

H₃C OH N(CH₃)₂

化合物（ 8 — 0 ) は次の様にして製造する。

1 . 1 7 S—エストロアルキノールの調製

エストロン 4 gをメチルアルコールに溶かし 3 0 °C位の状態に、ポタシゥムボロハイドレート 0. 8 g、水酸化ナトリウム 1 . 7 6 g、水 8. 8 mlの混合液を点滴して入れる。それを終わったご 2時間反応させ、稀酢酸で中和し、中性までさせ、水で薄める。固体を生成した後、濂過、水洗い、乾燥を行う。また、含水アルコールで再結晶させ、白色の結晶体を得る。 m p 1 7 3〜 1 Ί 4 °C、収率は 9 7. 2 %である。

2. 1 7 5—エストロアルキノ一ル ' ジアセテートの調製

1 7 yS—エストロアルキノール 1 0 gをピリティンに溶かし、 3 5 ml酢酸カンを入れ、 1 時間回流、反応させ、氷水に流して固体を生成した後、濾過、乾燥を行う。無水アルコールで再結晶をさせ、白色の結晶体を得る。 m p 1 2 6〜 1 2 8 °C、収率は 9 7 %である, 3. 6 —カルボ二ルー 1 7 —エストロアルキノ一ル，ジァセテ一ト（化合物（XII)) の調製

1 7 β—エストロアルキノール ' ジァセテート 5 gをベンゼンに溶かし、冷却の状態に 0. 4 5 g三酸化クロムを点滴して入れ、 3 0 mlの氷酢酸、 2 0 mlの酢酸と 3 0 mlのベンゼン混合液に溶かす。終了後、暫く撹拌を行い、水の中に流して行き、ェチルエーテルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗い、また、水洗を行う。乾燥、濃縮した後、シリカゲルで分離させ、産物を得る。 m p 1 7 3〜 1 7 5 °C、収率は 4 0 %である。

合成例 9 ：

N— 4 — 〔 1 7 —ォキシ一エストラー 1 , 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —才キシェチル〕 ― 1 ーピペラジン一 1 ーメチレン一ドキシサイクリン * H C 1 (化合物 9 ) 合成：

化合物（ 1 一 2 ) 2. 2 g、ポリホルムアルデヒド 0. 2 0 g、イソプロパノール 1 0 0 mlを 6 0 °Cで 1 . 5時間加熱、撹拌し、塩酸ドキシサイクリン 3 gを加え、 6 0 °Cで保温し、 2. 5時間撹拌する。反応後、濾過し、イソプロパノールとェチルエーテルで洗浄し、乾燥させ、淡黄色の固形物（化合物 9 ) m p l 7 2 °C ( d e c . を得る。収率は 8 7 %である。

0

合成例 1 0 ：

N— 4 — 〔 1 7 —ォキシ一エストラ一 1， 3 , 5 ( 1 0 ) — トリェン一 3 —ォキシェチル〕一ピペラジン一 1 ーメチレン一ォキシテトラサイクリン（化合物 1 0 ) の合成：

ィ匕合物（ 1 一 2 ) 0. 9 1 g、ポリホルムアルデヒド 8 0 mg、ィソプロパノール 5 0 mlを 6 0 °Cで撹拌し、 2時間反応させ、テラマイシン 1 . O gを加え、 6 0 °Cで保温し、 3時間撹拌する。濾過しイソプロパノールとェチルエーテルで洗浄し、 '乾燥させ、淡黄色の固形物（化合物 1 0 ) m p 1 7 5 °C ( d e c . ：) を得る。収率は 8 9 %である。

合成例 1 1 ：

N— 4 一〔 1 7 — ヒドロキシ一エストラ一 1， 3 , 5 ( 1 0 ) — トリエンー 3 —ェトキシェチル〕ーピペラジン一 1 ーメチレンーテトラサイクリン（化合物 1 1 ) の合成：

N— （ 1 7ハイドロキシエストロン 1， 3， 5 ( 1 0 ) トリェン一 3 —ォキシェチル）ピぺラジン 4. 1 g、ポリホルムアルデヒト 0. 5 g、イソプロパノール 5 0 mlを 6 0 °Cで撹拌し、 2時間反応させ、テトラサイクリン 4 gを加え、 4 0 °C〜4 5 °Cで保温し、 3 時間反応させ、濾過し、イソプロパノールとェチルエーテルで洗浄し、淡黄色の固形物（化合物 1 1 ) m p 1 5 4 °C ( d e c . ) を得る。収率は 6 8. 6 %である。

合成例 1 2 ：

1 7 — ヒドロキシーアンドロスト一 4 —ェン一 3 —ォキシェチルアミノメチレン一テトラサイクリンの合成

3 —アミノエトキシー 1 7 — ヒドロキシ一アンドロスト一 4 —ェン 3. 3 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 4 0 mlを、 6 0 で 4時間反応させ、テトラサイクリン 4. 5 gを加え、攪拌し、 5時間反応させ、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 2 %、元素分析は C 6 6. 7 8 , H 7. 4 1， N 5. 3 8である。合成例 1 3 ：

1 7 — ヒドロキシ一アンドロスト一 4 一ェン 3 —オン一 6 —メチレンォキシェチルァミノメチレン一テトラサイクリンの合成

6 —アミノエトキシメチレン一 1 7 — ヒドロキシーアンドロスト一 4 —ェンー 3 —オン 3. 6 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、テトラサイクリン 4. 5 g、アセトン 3 5 mlを、光を避け、常温で 2 4時間攪拌し、反応させる。反応終了後、濾過し、アセトン及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 6 %、元素分析は C 6 7. 9 0， H 7. 6 7， N 5. 1 8である

合成例 1 4 ：

1 7 —ヒドロキシーアンドロスタン 3 —ォキシェチルアミノメチレン一テトラサイクリンの合成

3 —アミノエトキシ一 1 7 —ヒドロキシ一アンドロスタン 3. 3 5 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、テトラサイクリン 4. 5 g アセトン 3 0 mlを、光を避け、常温で 3 0時間攪拌し、反応させる反応終了後、濾過し、アセトン及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 5 %、元素分析は C 6 6. 6 1 ， H 7. 6 8， N 5. 4 0である。

合成例 1 5 ：

1 7 —ヒドロキシー 1 8 —メチル一 1 9 一ノルアンドロスト一 4 —ェン一 3 —オン一 1 7 な一ブチニレンアミノメチレン一テトラサイクリンの合成

1 7 α—アミノエチルェチニルー 1 7 /S—ヒドロキシ一 1 8 —メチル一 1 9 —ノルアンドロスト一 4 一ェンー 3 二オン 3. 7 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 3 0 mlを、 6 0 °C で 4 時間反応させ、テト.ラサイクリン 4. 5 gを加え、攪拌し、 6 時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 5 %、元素分析は C 6 8. 5 1， H 7. 1 1 , N 5. 1 7である。

合成例 1 6 ：

1 6 ， 1 7 S—ジヒドロキン一エストラ一 1 ， 3 , 5 ( 1 0 ) 一トリェン一 3 —ォキシェチルアミノメチレン一テトラサイクリンの合成

0H

3 —アミノエトキシー 1 6 α , 1 7 /δ —ジヒドロキシーエストラ一 1 ， 3 , 5 ( 1 0 ) — トリェン 3. 3 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 0 mlを、 8 0 °Cで 2時間反応させ、 4 0 °Cまで冷却して、テトラサイクリン 4. 5 gを加え、 6 時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 5 %、元素分析は C 6 5. 4 8 , H 6. 8 2， N 5. 1 3である。合成例 1 7 ：

1 8 —メチル一 1 7 —ォキシエストラ一 1， 3 5 ( 1 0 ) — トリエンー 3 —ォキシェチルァノメチレン一テトサイクリンの合成

3 —アミノエトキシ一 1 8 メチル一エストラー 1， 3， 5 ( 1 0 ) 一トリェン一 1 7 —オン 3. 3 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、アセトン 5 0 mlを、 3 0 °Cで光を避け、 4 8時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 2 . 元素分析は C 6 7. 4 5， H 6. 8 6 , N 5. 2 7である。

合成例 1 8 ：

3 —才キ

3 —アミノエトキシー 1 7 α—ヒドロキシープレダナー 4 —ェン一 2 0 —オン 3. 8 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 0 mlを、 6 0 °Cまで加熱し、 2時間反応させ、 4 0 °Cまで冷却して、テトラサイクリン 4. 5 gを加え、 6 0 °Cで 5時間反応させる。反応終了後、濾過し、アセトン及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 7 %、元素分析は C 6 6. 5 2 , H 7. 3 7 , N 5. 0 1である。

合成例 1 9 ：

プレグナー 5—ェンー 2 0—オン一 3 —ォキシェチルアミノメチレンーテトラサイクリンの合成

3—アミノエトキシ一プレグナ一 5—ェンー 2 0—オン 3. 6 g メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 4 0 rolを、 8 0 °Cまで加熱し、 2時間反応させ、 4 0 °Cまで冷却して、テトラサイクリン 4. 5 gを加え、 4 0 °Cで 6時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後固型物が得られる。収率は 9 3 %、元素分析は C 6 7. 7 0， H 7 , 3 6， N 5. 0 5である。

合成例 2 0 ：

1 7 — ヒドロキシーアンドロスト一 1 , 4 一ジェン一 3 —ォキシェチルアミノメチレン一ドキシサイクリン

3 —ァミノ一エトキシ _ 1 7 yS—ヒドロキシアンドロスト 1 . 4 一ジェン 3. 3 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 O mlを、 8 0 °Cで 2時間反応させ、 4 0 T;まで冷却して、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 4 時間反応させる。反応終了後、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 9 %、元素分析は C 6 7. 2 3， H 7. 2 5， N 5. 2 8である。

合成例 2 1 ：

1 7 一メチル一 1 7 —ヒドロキン一アン 'ドロスト 4 ーェン - 3 一オン一 6 —メチレンォキシェチルァミノメチレンドキシサイクリンの合成

6 —アミノーエトキシメチレン一 1 7 なーメチルー 1 —ヒドロキシーアンドロスト一 4 一ェンー 3 —オン 3. 8 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 2 5 mlを、 6 0 °Cで 4時間反応させ、加熱反応後、 4 0 °Cまで冷却して、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 8時間反応させる。反応終了後、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 6 %、元素分析は C 6 3. 6 2， H 7. 0 2， N 5. 1 3である。

合成例 2 2 ：

1 7 な一メチル一 1 7 /3—ヒドロキシ一アンドロスタン一 3 —才ンー 2 —ォキシェチルアミノメチレン一ドキシサイクリンの合成

2 —アミノエトキシ一 1 7 α—メチル一 1 7 3—ヒドロキシーアンドロスタン一 3 —オン 3. 6 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g イソプロパノール 3 0 mlを、 6 0 °Cで 2時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、反応させる。反応終了後、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 1 %、元素分析は C 6 5. 9 1 , H 7. 5 1 ， N 5 , 0 7である。

合成例 2 3 ：

1 7 な一メチルー 1 7 S—ヒドロキシー 1 9 一ノルアンドロスト一 4 — ェン一 3 —オン一 6 —メチレンォキシェチルァミノ一ドキシサイクリンの合成

4 l 6 —アミノエトキシメチレン一 1 7 一メチル一 1 7 ;9—ヒドロキシ一 1 9 —ノル一アンドロスト一 4 一ェン一 '3 —オン 3. 7 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、アセトン 5 0 mlを、 3 0 °Cで 2 時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 3 0時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 7 %、元素分析は C 6 3. 6 4， H 7. 0 3 , N 5. 1 8である。

合成例 2 4 ：

1 7 一ェチニルー 1 7 ;3—ヒドロキシ一アンドロスト一 5 ( 1 0 ) —ェン一 3 —オン一 6 —メチレンォキシェチルァミノメチレン - ドキシサイクリンの合成

6 —アミノーエトキシメチレン一 1 7 なーェチニル一 1 Ί β—ヒドロキシーアンドロストー 5 ( 1 0 ) —ェン一 3 —オン 3. 7 g_s メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 0 mlを、 6 0 °Cで 2時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 4 0 °Cで 8時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 7 %、元素分析は C 6 6. 8 1 , H 7. 0 6 , N 5. 0 1である。合成例 2 5 ：

1 7 α—プロピレン一 1 7 /5—ヒドロキシ一 1 1 —ジメチルアミノフエ二ルーアンドロスト一 4， 9 —ジェン一 3 —オン一 6 —メチレン一ォキシェチルアミノメチレン一ドキシサイクリン

C— CH 3

6 —ァミノ一エトキシメチレン一 1 1 一（ 4 ' —ジメチルァミノフエニル）一 1 7 α—プロピレン一 1 7 ^—ヒドロキシーアンドロスト一 4. 9 —ジェン一 3 —オン 5 g、メタホルムアルデヒド 0.

3 g、イソプロパノール 4 0 mlを、 8 0 で 2時間加熱反応させ、

4 0 °Cまで冷却して、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 6時間反応させる。反応終了後、濂過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 0 %、元素分析は C 6 8. 7 6， H 6. 8 8 , N 5. 7 2である。

合成例 2 6 ：

1 6， 1 7 —イソプロピリデン 1 6 , 1 7 —ジォキシエストラ — 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェン 3 —ォキシェチルァミノメチレン一ドキシサイクリンの合成

1 6， 1 7 —イソプロピリデンー 1 6 , 1 7 —ジォキシーェストラ一 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 3 —アミノエチルエーテル 3 7 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 0 mlを 6 0 °Cで 2時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 8時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 5 %、元素分析は C 6 6. 6 1 , H 6. 9 0， N 5. 1 8である

合成例 2 7 ：

3， 1 7 —ジヒドロキシ一エストラ一 1， 3'， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 1 7 —アセテート一 7 —メチレンォキシェチルアミノメチレンードキシサイクリンの合成

7 —アミノエチルォキシメチレン一エストラ一 3. 1 7 —ジェン一 1 7 —ァセテ一十 3. 8 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、ィソプロパノール 5 0 mlを、 6 0 °Cで 4 時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 4 時間反応させる。反応終了後、濾過しイソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 8 %、元素分析は C 6 5. 3 4， H 6. 6 8， N 4. 9 5である。

合成例 2 8 ：

1 7 α—ヒドロキシ一プレグナ一 4 —ェン一 0 —オンォキシェチルアミノメチレン一ドキシサイクリンの合成

3 —アミノエトキシー 1 7 α—ヒドロキシプレグナ一 4 一ェンー 2 0 —オン 3. 7 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 4 0 mlを、 6 0 °Cで 2 時間加熱反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 4時間反応させる。反応終了後、濾過し、ィソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 2 %、元素分析は C 6 6. 4 1， H 7. 4 0， N 5. 1 4である。

合成例 2 9 ：

プレグナ一 4 ーェン 3， 2 0 —ジオン一 6 '—メチレン一ォキシェチルアミノメチレンドキシサイクリンの合成

CH_S

CO

6 —アミノエトキシメチレンープレグナー 4 —ェン一 3， 2 0 - ジオン 3. 9 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロノ、。ノ一ル 5 0 mlを、 6 0 °Cで 3 時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 4 時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 9 3 %、元素分析は C 6 7. 7 7， H 7. 3 6 , N 4 , 5 9である。

合成例 3 0 ：

3， 1 7 —ジヒドロキシーエストラ一 1， 3， 5 ( 1 0 ) — トリェンー 1 1 一（ 4 —フエノキシ一ェチルアミノ）一メチレンードキシサイクリンの合成

1 1 — ( 4 ' 一アミノエトキシフエ二ル）一 3 , 1 7 —ジヒドロキシーエストラー 1 , 3， 5 ( 1 0 ) — トリェン 4 g、メタホルムアルデヒド 0. 3 g、イソプロパノール 5 0 mlを、 6 0 °Cで 2 時間反応させ、塩酸ドキシサイクリン 4. 5 gを加え、 8時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 9 %、元素分析は C 6 8. 1 3 , H 6. 6 9， N 4. 7 3である。

合成例 3 1 ：

1 7 /S—ヒドロキシ一 1 7 なーメチルーアンドロスタノ（ 3 , 2 - C ) ーピラゾールー N—メチレンーテトラサイクリンの合成

1 7 S—ヒドロキシー 1 7 α—メチルーアンドロスタノ一（ 3， 2 — C ) —ピラゾール 3. 2 9 g、メタホルムテルデヒド 0. 3 g イソプロパノール 3 0 mlを、 4 0 °Cで 2時間反応させ、テトラサイクリン 4. 5 gを加え、攪拌し、 6時間反応させる。反応終了後、濾過し、イソプロパノール及びェチルエーテルで洗浄する。その後黄色の固型物が得られる。収率は 8 9 %、元素分析は C 6 7. 4 8 , H 7. 0 7 , N 7. 3 0である。

実験例 1. 化合物の体内分布

合成例 1 一 3において製造した化合物 1 一 3を ³Hにより放射能標識し（ 0. 3 4 mCi/mg) 、これを 2 0 Ci/ 2 0 gの量でマウス尾静脈に注入した。注射後、 1分、 5分、 1 5分、 3 0分、 1 時間、 4時間、 6時間、 2 4時間、 4 8時間、及び 7 2時間目にマウスを 5匹ずつ殺し、眼窩から 5 0 // 1 の血液を採取し、さらに心臓. 卵巣、子宮、小腸、骨（大腿骨）等を採取し、組織 5 0 mg (血液は 5 0 t/ 1 ) をプラスチック製試験管に入れ、さらに過塩素酸 0. 2 ml、過酸化水素 0. 4 ml及び n—才クチルアルコールを 1滴加えて 7 5 °Cの水浴に 4 5分間置いた。この消化液 0. 1 mlを取り、閃輝液を入れたビンに入れ、さらに 5 mlの 0. 5 %閃輝液を混合した。透明になつてから F J 2 1 0 5液体シンチレーシヨンカウンターに入れ、放射能を測定してサンプルの c p mを決定した。これとは別に、 4組の動物から得られた 5 2のサンプルの d p mを測定した (外部標準法）。

組織内薬物量を次の様にして求めた。

サンプル cpm

組織内薬物量（cpmZmg) =

消化組織量（mg)

サンプル cpmZmgx 6

組織内薬物量（// g/mg) =

計数効率 X 2.22 X 10⁷ X 0.34mCi/mg (E) (比放射能）

4 Θ 結果は次の通りであった。

表 1

血中の薬物濃度の変化（各時間毎の 5匹の動物の平均値） H—化合物 1 一 3静脈注射後血中薬物濃度変化（cpmZ50 z 1 )

表 2

組織内薬物量の変化（cpmZmg組織）

*五匹の動物の平均値表 3

組織内薬物量の変化（/z gZmg組癍）

*五匹動物の平均値

実験例 2. 急性毒性試験

( 1 ) サンプル：化合物 1 一 3 は淡黄色の結晶性粉末で、口ット番号 9 3 0 1 1 3である。その溶液は淡黄色の透明液で、濃度： 5 0 mg/ml pH：約 5。華西医科大学薬学院骨粗鬆症研究所から提供されるものである。

( 2 ) 動物：昆明種マウス、健康一級、体重 1 8 〜 2 1 g、雄雌それぞれ半数。華西医科大学実験動物センターから提供されたもの、め 0

( 3 ) 半数致死量（L D ₅。）の測定：予備試験から得られた 0 % 〜 1 0 0 %の致死量範囲内に等比で（ 1 : 0. 7〜 0. 8 ) 4 〜 5 つの投与組を作る。経口投与の薬物は固体薬物を 1 % C M C N a で懸濁液を作る。注射投与の薬物は化合物 1 3を生理食塩水で低比重希釈法によって濃度の違う溶液を作る。動物は絶食（水制限しない） 2 0時間後に性別、体重に拘らず、無作為配分で 1 0匹を 1 組とする。投与容積 0. 2 ml/ 1 0 g、 1 回投与後 7 日間観察し、死亡した動物を解剖し、肉眼で病変を観察する。

( 4 ) 試験結果

( a ) マウス化合物 1 一 3経口投与の最大許容量測定：予備試験時、死亡が見られなかった場合の最大許容量を測定する。マウス 2 0匹（雄雌それぞれ 1 0匹）に 1 回経口最大濃度、最大容積の薬物を投与した後、 7 日間を観察した結果は動物には何らかの異常もなく、死亡例もない。最大許容量（MT D) は > 6 gZkg。

( b ) マウス尾静脈に化合物 1 一 3を注射した後の結果は次の表の通り：

表 4

計算処理： Bliss法

LD₅ o = 143. llmg/kg

LD₅。 95%の信頼限界の範囲： 132.95〜154.05mgZkg

( 5ノ結論

化合物 1 一 3のマウスの一回服用量の最大許容量（MT D) は 6 gZkg以上で、毒性は極めて低い。マウスの尾静脈注射 L D ₆₀は 1 4 3. 1 l mgZkgである。静脈注射後、活動が減少、その後飛び跳ねだし、けいれんし、眼球が突出し、白色に変わり、大小便の失禁があり、中毒者の大多数は即死するが、ごく少数の一部は 2 4時間内に死亡し、 2 4時間以上生存したものは 7 日間内には死亡しなかった。死亡した動物の性別の差は見られず、死亡したものの解剖では、肉眼ではいかなる病変もみられなかった。試験室の室温は 1 7 °しであった

実験例 3. 骨形成実験（ 1 )

実験用細胞として、ウィスターラット（雌、 6 ヶ月齢）の頭蓋冠由来骨芽細胞初代培養系を用い、培養開始後、 2 日目及び 3 日目 (増殖期）に培地に 1 日 1 回、 1 0 —⁶M, 1 0 — ⁸M又は 1 0 — ⁹Mの被験化合物（化合物 1 一 3 ) を添加し、あるいは培養開始後 7 日目から 4 日間（石灰化期）に、培地に 1 日 1回前記の量の化合物 1 一 3を添加した。培養開始 1 4 日目に細胞を v o n K o s s a染色し、リン酸塩の検出を行って茶褐色に染色した骨結節の面積を視覚により確認し、骨形成の指標とした。結果は次の通りとなった。

表 5

化合物 1 一 3の骨形成促進作用添加濃度（M) 増殖期石灰化期

10- ⁹ 个 10— ⁸ † 个

10— ⁶ † 横向きの矢印は骨形成が存在しなかったことを示し、上向きの矢印は骨形成の促進を示す。

また、 3回繰返した結果を図 1 〜図 3 に示す。図中、 Aは無添、 .Bは 1 0 _⁹M添加、 Cは 1 0 — ⁸M添加、 Dは 1 0— ⁶M添加の結果を示す。

上記の結果から明らかな通り、本発明の化合物は骨形成促進作用を示した。

実験例 4 . 骨形成実験 2

実験用細胞として、ウィスターラット（雌、 6 ヶ月齢）の大腿骨由来骨髄細胞初代培養系を用い、培養開始後 7 日、 9 日及び 1 1 曰目（石灰化期）に培地に 1 日 1 回、 1 0 — ⁸ M又は 1 0 — ⁶ Mの化合物 1 一 3を添加し、実験例 3の場合と同様に評価を行った。その結果は次の表に示す通りとなった。

表 6

化合物 1 一 3の骨形成促進作用添加量（M ) 骨形成促進

10一⁸ †

10- ⁶ 上記の表から明らかな通り、本発明の化合物は骨形成促進作用を示した。

実験例 5 . 化合物 1 一 3の抗骨粗鬆症薬理研究

一、実験設計：

化合物 1 一 3の抗去勢ラット骨粗鬆症の薬効果学実験設計の臨床観察によつて、閉経後の女性のエスト口ゲン不足による骨量紛失は骨粗鬆症を引起こす可能性があることが明らかにされた。エストロゲンで治療すれば、比較的満足な治療効果が得られるが、長期的に使用すると、子宮内膜癌、乳腺癌などを誘発する危険性があるので臨床での応用が制限されている。その欠点を克服し、治療効果を高める為、華西医科大学薬学院はエストロゲンの構造を改善し、抗骨粗鬆症の化合物 1 一 3を合成した。毒性実験を完了した上で、去勢ラット骨粗鬆動物の模型及び培養成骨細胞 UMR 1 0 6を利用して薬物の骨粗鬆模型及び細胞に対する作用を観察し、更に化合物 1 一

3の骨粗鬆症に対する治療効果及び作用効能を確定し、その薬の臨床応用の為に基礎を定めた。

二、材料と方法：

(一）薬物：

化合物 1 一 3 (華西医科大学薬学院が合成したもの）。 0. 1 N H C 1 を使って 1 0 mgZmlの貯蔵液を調合し、実験濃度は蒸留水で薄める。

エストラジオール（華西医大） 1 0 0 mgに 9 0 %のアルコール 5 mlと 2 0 mlのポリエチレングリコール 4 0 0を加え、水に入れ、 9 0 °Cまで加熱し溶解した。そして、蒸留水で 1 0 0 mlまで薄め、 1 mg/mlの貯蔵液を調製した。

カルシウム剤（炭酸カルシウム、クェン酸は全て北京化学工場が生産したもの）。 1 0 0 mMの炭酸カルシゥムに 1 0 0 mMのクェン酸を加えた（ 1 gの炭酸カルシウムに 2. l gのクェン酸を加え、 1 0 0 mlの蒸留水に入れた。使う前に調合した）。 ³H— T d R (中国科学院放射能研究所）によりラベルした。

その他の必要な試剤及び薬物は全て A R級（北京化学試剤公司）でのる。

(二）動物：

W i s t a rラット雌 8 0匹、雄 2 0匹、生後 5〜 6 力月、体重 2 6 0 ± 1 0 g (中国医科院動物研究所）にっき、実験開始前、全ての動物の体重を測定し、記録する。

(三）動物実験分類：

1. 健康の W i s t a r雌ラットを 1 0群に分類し、一群に 6匹づっを以下の図に基いて番号を付けた。 1 0組は以下の通りである。

( 1 ) 7段手術群

( 2 ) 手術対照群

( 3 ) 低用量（化合物 1 一 3 5 0 g 匹 Z曰）

( 4 ) 中用量（化合物 1 一 3 5 0 0 匹日）

( 5 ) 高剤量（化合物 1 一 3 5 mg 匹ノ曰）

( 6 ) 化合物 1 _ 3、 5 0 0 / gノ匹 + C a 0 5 ml

( 7 ) エストラジオール 0. S mgZ匹日

( 8 ) エストラジオール 0. 5 mgZ匹ノ日 + C a 0 5 ml

( 9 ) 化合物 1 — 3、 5 0 0 〃匹/日 + C a 0 5 ml (手術後 5週目に投与）

( 1 0 ) 化合物 1 一 3、 5 0 0 // g (手術後 5週目）腹腔投与

1〜 8群は手術後 1週間経口投与する。 9群は手術後 5週間経口投与する。 1 0群は手術後 5週目から腹腔投与した。

2. 健康な W i s t a r雄ラットを 3群に分類し、番号付けは第 1 1群（仮手術）、第 1 2群は睾丸摘出手術対照、第 1 3群は睾丸摘出後 1週間化合物 1 一 3 5 0 0 / 匹日を投与した。

3. 各群の動物に対し週 6回投与し、対照群には蒸留水を与え、 1 3週目に全部頭を切断し、致死させ、同時に血液及び組織サンプルを採取した。

(四）動物模型の作成：

実験用の W i s t a r雌ラットは中国医学科学院動物研究所より提供されたもので、生後 5〜 6 力月、体重 2 6 0 ± 1 0 gである。手術前 1 2時間絶食した。ベントバルピタールナトリウム（ 3 5 mg /kg) を腹腔より注射して麻酔した状態で手術板に固定し、腹部を上向きにし、下腹部の真中に約 3 3 nunぐらいの穴を開け、ピンク色の Y字型の子宮を露出した。子宮の上部には夫々濃い赤色の囊包状の球があり、これが卵巣である。絹糸で底部を結紮し、鋏で両側の卵巣を切除した。出血していないのを確認してミ筋肉、皮廣を縫合わせ、子宮を元の位置に戻した。仮手術群はただ子宮を露出しただけで、切除しなかった。手術後、腹部にベニシリン（ 8万単位匹）を注射し、感染を予防した。数時間後、ラットは正常な状態に戻つ実験用雄 W i s t a rラットに対して、同じ麻酔方法で睾丸を切除し、仮手術群は睾丸の一部の皮膚を切り開いた後縫合わせ、切除しなかった。そして、局部に対して消毒した。

(五）観察指標：

1. 体重：週に一回体重を測定した。

2. 子宮塗布：雌ラットに対し、 1 0週目から 6 日間連続で子宮塗布を行い観察した（発情前期、発情期、間隔）。

3. 2 4時間の尿（ 1 2週目）を収集し、尿 C a， P、クレアチニンを観察した。

4. 1 3週目に殺す前に各群のラットの骨密度（骨科所）を測定した。

5. 1 3週目に動物を殺し、以下の指標を観察した。

( 1 ) 血清を取り、 C a , P、アルカリ · ホスファターゼの含有量を測定した。

( 2 ) 子宮を取り、重量を秤った。

( 3 ) 肝臓と肾臓を取り、夫々薬物毒性を観察し、そして薬物が受容されたかどうかを観察した。

( 4 ) 右大腿骨の骨応力（骨科所）を測定した。

( 5 ) 左大腿骨に 2 0 %の硝酸脱カルシウムを加え、形態学的観祭行った。

( 6 ) 右脛骨を灰化し、骨灰の重量を計り、 C a， Pを測定する。 ( 7 ) 左脛骨に対し受容体実験を行った。

(六）細胞の培養 '

3 7 °C、 5 % C 0₂ の培養条件で、 1 0 % F C Sを含む DMEM ノ H a m F— 1 2の培養液の中で UMR 1 0 6細胞を培養した。 3 日毎にトリプシン一 E D T Aで一回消化し、継代した。

1. ³H— T d Rを混ぜ、実験を行った。

消化細胞を 2 0 0 0 rpm x 1 0 min で遠心し、 7. 5 % C S - F C S ( 4 g 1^ 0 1" 1 1 八炭+ 1 0 01111 F C S ) を含む DMEM /H a m F - 1 2 ノー ' フヱノールレツド培養液を加え、細胞 3 x 1 0 ⁴ Zmlを 2 4穴プレート 1 ml,穴で計測した。 2 4時間後 0. 2 % F S Aを含む DMEMZH a m F— 1 2 ノー · フヱノールレツド培養液で取り換えた。

4 8時間培養後、薬物（エストラジオール、化合物 1 — 3 ) を投与した。 ³H— T d R 0. 5 uCi Z穴を 3 2時間投与した。 4 8 時間投与後 P B S液で 5〜 6回洗浄し、 0. 2 N N a OH 1 ml Z穴を加え、 2 4時間後トルェン一トリトン ' シンチレーシヨン液を使って発光させ、その数値を計測した。

2. 細胞数計測

2 4穴プレート中の細胞に投与後 4 8時間、トリブシン一 E D T Aで消化し計測した。

3. 細胞が分泌した A T Pの活性を測定した。

2 4穴プレートの細胞に投与後 4 8時間、培養液を吸収し、生化学比色法で A T Pを測定した。

―、 TP

(一）ラットに対し子宮塗布を行ない、細胞変化を観察した。

1. 判定の標準：

手術後 1 0週目に、連続 6 日間子宮塗布を行ない、顕微鏡で検査した。

発情期指標：大量の大きくて不規則な角化上皮細胞が現れ、その中には少量の上皮細胞も含まれていた。

発情期間隔指標：大量の多核白細胞が現れ、その中には少量の上皮細胞も含まれていた。

2， d 果： n = 5

分類 ―週間に発情する日数仮手術対照群 3

0VX 1 2

+化合物 1一 3 0. 05mgZ匹 d 5 6

+化合物 1一 3 0. 5mg /匹 d 5

+化合物 1一 3 5 mg/匹 d 5 6

+化合物 1一 3 0. 5mgZ匹 d 4 6

+ E 2 0. SmgZ匹 d 5 6

+ E ₂ 0. 5mgZ匹 d + Ca 5 6

+化合物 1一 3 0. 5mg/匹 d + Ca 5 6

(投与 5週間後）

+腹腔化合物 1 - 3 0. 5mg/匹 d 4 5

(投与 5週間後）総括：仮手術群の場合、週に 3回発情期変化が現れた。手術後 1 週間内に 1〜 2回の発情期変化が現れたが、手術後投与した各群は 1週間内に全て 4〜 6回の発情期変化が現れた。これは化合物、 E がラットの発情期変化に対して影響があることを明した。

(二）体重の変化：

手術群と仮手術群の体重の変化にはあまり差がないが、手術後 E 治療群の体重の増加は明らかに手術群より高かった。手術後化合物 1 一 3 0 . 0 5 mgZ日及び手術後化合物 1 — 3 0 . 5 mg /曰を 5週間後投与した群及び 5週間後に腹腔より投与した群の体重の増加も明らかに手術群より高かった。化合物 1 一 3 0 . 5 mg ノ日及び 5 mgZ日の群の体重の増加は仮手術群とはあまり差がなかつナ：。

化合物 1 一 3の去勢雌ラッ卜の体重に対する影響（表 8を参照） _c 表 8 ：ィ匕^ 11一 3力ットに及ぼす体重変化 m (g) 啶

ノ

群別 X±SD X±SD 回数 m 51 ±5.0 302±5.4 6 9 mm 57±6.0 298±6.5 6 9 ィ匕^ 11 - 3経口投与 5 mg/E d 59±5.0 297±5.6 6 9

0. 47±5.0 *308±5.1 6 9

0.05mg E d *94±8.0 312±8.8 6 9 ィ匕^ 11—3 0.5mg+Ca 54±6.0 304±6.0 6 θ

5週間後化^ 11—3 0.5mg+Ca ネ 73±9.0 302±9.4 6 9

E₂ ネ 73±8.0 305±7.9 6 9

E₂ +Ca #72±10.0 320±10.3 6 9 ィ匕^ 11一 3 ip0.5mg/d 86±12.0 **324±12.1 6 9 注：と赚した、 *Ρ<0.05 **Ρ<0.01

雄ラット 0 . 5 mg化合物 1 一 3経口投与群及び手術対照群を仮手術群と比較すると、体重が明らかに増加した（P < 0 . 0 1 ) 力前者の投与群と対照群の体重の増加にはあまり差異がなかった。

化合物 1 一 3が去勢雄ラッ卜の体重に及ぼす影響（図 4を参照） , (三）子宮重量の変化：

1. 仮手術群と比較した。 '

手術群手術後、化合物 1 一 3 5 mg/ d . 0. 5 mg/ d 0. 0 5 mg/ dを 1 2週間経口投与し、 0. 5 mg, dを 6週間腹腔投与しそして E ₂ を補充した。ラットの子宮の重量は全て明らかな減少があった。

2. 手術群と比較した。

術後、化合物 1 — 3 5 mg/ d及び 0. 0 5 mg/ dを 1 2週間経口投与した群は、子宮の重量が少し増加した。これは薬物が術後の子宮の重量に対して増加作用があることを意味する。

(四）骨密度の測定：表 9を参照。

1 . 手術群の骨密度は仮手術群より明らかに低下した。

2. 0. 5 mg E ₂ を胃より注入し、 1 2週間後手術群と比較すると、骨密度が明らかに高くなつたが、仮手術群と比較すると、あまり差がなかった。

3. 化合物 1 _ 3 は術後の骨密度の変化に対しては明らかな影響がある。そして、用量依存関係を現した（図 5を参照）。

4. 化合物 1 一 3 0. 5 mgを E ₂ 0. 5 mgと比較すると、骨密度は明らかに高くなつた（図 5を参照）。

5. 化合物 1 一 3を経口投与及び腹腔投与した場合、両方とも骨密度は著しく増加し、差がない（図 6を参照）。

6. 術後 1週間投与及び術後 5週間投与した場合、両方とも骨密度は明らかに増加した（図 7を参照）。表 9 ：骨密度測定結果

BMD(mg/cm²) 手術群

Ά 類

X土 SD との比較仮手術群 291±8 n = 6 P < 0.05 手術群 276±3 n = 6

0.05mg化合物 1一 3 287±8 n = 6 P < 0.05

0.5mg化合物 1一 3 295±6 n = 6 P < 0.01

5 mg化合物 1 ― 3 292± 2 n = 5 p < 0.01

0.5mg化合物 1一 3 + Ca^{2 +} 287±6 n = 6 P < 0.05

0.5mg E a 289±6 n = 6 P < 0.01

0.5mg E 2 +Ca^{2 +} 287±8 n = 6 P < 0.05

0.5mg化合物 1一 3 +Ca^{2 +} 289土 10 n = 6 Pぐ 0.05 (手術 5週間後投与）

0.5mg化合物 1一 3 284±9 n = 5 P < 0.05 (手術 5週間後腹腔より投与）

(五）カルシウム、燐の結果：

ラットの卵巣が取除かれた後、血中カルシウムが高くなり、血中燐が低くなつたが、著しい差異はなかった。投与して治療した後、血中 C a , Pの変化を観察した。

1. 血中 C a ²⁺：化合物 1一 3 5 mgZ日で血中カルシウムを正常なレベルに回復させた。治療群と手術対照群を比較すると、明らかな差異があり、 P < 0. 0 1である。化合物 1 — 3 0. 0 5 mg Z日の群は影響がなかった。

E 2 治療： E ₂ を単独或いはカルシウム剤と一緒に投与すると、両方とも O V Xラットの血中カルシウムを回復させた。 E ₂ + C a 群を手術対照群と比較すると、明らかな差異があり、 P < 0. 0 1 であった 0 2. 血中 P ：化合物 1 一 3 0. 5 mg /日と 5 mgZ日、両方とも血中 Pを回復させたが、 0. 0 5 mgZ日の方が明らかである。治療群を手術対照群と比較すると、明らかな差異があり、 P < 0. 0 1 ある。

(六）血清ォステオカルシン（B G P ) 結果：

ラットの卵巣を除去した後、血清 B G Pはやや上昇し、化合物 1 一 3を使って治療後、 B G Pが下がり、そして用量効果依存関係が現れた。その中、化合物 1 一 3 5 mg/日の群を仮手術群及び手術群と比較すると、全て明らかな下降があり、 P < 0. 0 5である。化合物 1 一 3 0. 0 5 mgZ日の治療群は O V X対照群より明らかな下降があり、 P < 0. 0 5であった。

(七）血清 A L P変化：

O V Xラットの血清 A L Pは仮手術群よりやや上昇し、 E ₂ 0. 5 mgノ日の治療群は手術群よりやや下降したが、明らかな差異がない。化合物による治療は O V Xラッ卜の血清 A L Pを増加させ、用量効果依存関係を現した。化合物 1 一 3 0. 5 mgZ日、 5 mgZ日の治療群を仮手術群と比較すると、夫々 Pく 0. 0 5、 Pく 0. 0 0 1 であった。

(八）骨応力の変化：

動物の頭を切断し、大腿骨を整理し、生理食塩水の入った小瓶に入れ、ラベルを貼って番号をつけた。電子万能試験機でテストした, 大腿骨の力学指標条件をテストした。

1. 方法：簡単にけたをたてる形で三点弯曲のテストを行った。

2. 方向：前から後ろへ

3. テストの距離： 2 5 mm。

4. 抗破壊強度を破壌荷重とし、 kgで表す。

5. 抗弯強度が破壊荷重で、作用点にある変位を kg, nunで表す。化合物 1 一 3が雌及び雄ラッ卜の大腿骨力学指標に対する影響に対して、各群の間で Tテスト及び方差分析を行らたが、明らかな差が現れなかつた。

I組から V組まで化合物 1 一 3を経口投与し大腿骨の力学指標を観察したが、大腿骨の材料選びが不合格だったので、橾返し試験する必要がある。その他の各群は統計学によって処理した結果、明らかな差異が現れなかった。それは動物の数が少なかったためである, 更に繰返し試験する必要がある。

注：抗弯強度を最大破壊弯矩と称し、その値を計算する。

1 ( 2 5 mm) P L

X P =

4 4

(九）化合物の UMR 1 0 6細胞に対する影響

1. ³H— T d Rの混入： E ₂ 1 0 -'° Mは UMR 1 0 6細胞 ³ H— T d Rの混入に対して影響がない。 E ₂ 1 0—⁹M〜 1 0—⁷N i UMR 1 0 6細胞 ³ H— T d Rを混入した後のピーク値を明らかに刺激し、ピーク値は 1 0— ⁷Mに変わり、対象群より 3 3 %増加した, E ₂ 群と比較すると、化合物 1 一 3 1 0 -' ⁰ M, 1 0— ⁸Mの UM R 1 0 6細胞 ³H— T d Rの混入に対する刺激作用が明らかに強まり、夫々 P < 0. 0 0 1 と？ < 0. 0 5であるが、化合物 1 — 3 1 0 -⁹M, 1 0— ⁷Mも E ₂ より夫々 1 3 %と 9 %高くなつた。

2. 細胞数計測： E ₂ 1 0 _^{1 D} Mは細胞計測数に対して影響がないが、 1 0— ⁹M〜 1 0— ⁷Mは細胞計測数を増加させ、ピーク値は 1 0一⁷ Mにあった。化合物 1 一 3 1 0 ⁰ M〜 l 0 _⁷Mは両方とも明らかに細胞計測数を増加させ、ピーク濃度は 1 0 _⁷Mである。化合物 1 一 3の効果は E ₂ より強いが、両者を比較すると、明らかな差異がなかった。 3. A L P活性の測定：

( 1 ) 羊水 AL P活性の測定： E₂ 1 0 -¹⁽⁾'Mは羊水 AL P活性に対して影響がなかった。 E₂ 1 0 -^βΜ〜 1 0 _⁷Μは AL P活性を明らかに増加させ、用量効果依存関係を示した。化合物 1 — 3 1 0一 ^{1 β} M〜 1 0 _⁷Mも羊水 A L P活性を明らかに増加させ、用量効果依存関係を示した。そして、各濃度での作用は全て E₂ より強く、明らかな差異があった（ Pく 0. 0 0 1 ) 。

( 2 ) 培養液から分泌された A L P活性の測定： E ₂ 、化合物 1 - 3 1 0— ^aM〜 l 0 -⁷Mはすべて UMR 1 0 6細胞から分泌された AL P活性を明らかに刺激し、 E₂ は 1 0 -^ie Mである時、酵素に対して影響がないが、化合物 1 _ 3 1 0 -¹⁰ M, 1 0 _⁷Mは E₂ 群より酵素の活性が夫々 2 9 %、 2 3 %高くなった。化合物 1 一 3 1 0 _⁹， 1 0 _⁸も E₂ 群より作用が明らかに強くなつた。

実施例 6. 化合物 1 一 3の去勢ラットの骨粗鬆症に対する薬効に関する実験報告

1. 材料

1 一 1 薬物この実験に使う全ての薬品は鄭虎教授研究組より提供され、要求に基いて調合されたものである。

1 一 2 動物 S D雌ラット、生後 3 力月、体重 1 8 0〜 2 2 0 g、華西医科大学実験動物センターより提供。

2 · 実験方法

2 - 1. 動物の群別及び投与

実験前一週間観察し合格した動物 1 5 0匹を、 1群 1 5匹、 1 0 群に分類した。

1群（S h am) ：仮手術群。腹腔を開け、又閉じる手術を行い、週に 3回、 1回毎に 1匹に対し生理食塩水 1 mlで灌胃した。

2群（OVX) ：去勢群。両側卵巣を切除し、週に 3回、 1回毎

6 5 訂正された用紙規則 91 に 1匹に対し生理食塩水 1 mlで灌胃した。

3群（口 E ₂) ： E 2 を経口投与した群。両側卵巣を切除し、週に 2回灌胃し、 1 回毎に —エストラジオール 0. 8 mg/ 1 mlのみ投与した。

4群（口低）：化合物 1 一 3を経口投与した低用量群。両側卵巣を切除し、週に 3回灌胃し、 1 回毎に 1匹に対し 5 mgZ 1 mlのみ投与した。

5群（口中）：化合物 1 一 3を経口投与した中用量群。両側卵巣を切除し、週に 2回灌胃し、 1 回毎に 1匹に対し 2 0 mg/ 1 mlのみ投与した。

6群（口高）：化合物 1 一 3を経口投与した高用量群。両側卵巣を切除し、週に 3回灌胃し、 1 回毎に 1匹に対し 8 0 mg/ 1 mlのみ投与した。

7群（注 E ₂) ： E ₂ を注射した群。両側卵巣を切除し、週に 2回注射し、前の 4週間は 1 回毎に 1匹に対し 2 0 0 gZ 0. 2 mlを. 後の 6週間は一回毎に 1匹に対し 7. 5 g / 0 . 2 mlに変更した ₍

8群（注低）：低用量を注射した群。両側卵巣を切除し、週に 2 回注射し、前の 4週間は 1 回毎に 1匹に対し 1 mgZ 0. 2 mlを、後の 6週間は 1 回毎に 1匹に対し 0. 1 mgZ 0. 2 mlに変更した。

9群（注中）：中用量を注射した群。両側卵巣を切除し、週に 2 回注射し、前の 4週間は 1 回毎に 1匹に対し 3. 7 5 mg/ 0. 2 ml を、後の 6週間は 1 回毎に 1匹に対し 0. 3 7 5 mg/ 0. 2 rolに変更した。

1 0群（注高）：高用量を注射した群。両側卵巣を切除し、週に 2回注射し、前の 4週間は 1 回毎に 1匹に対し 1 5 mg/ 0. 2 mlを. 後の 6週間は 1 回毎に 1匹に対し 1 . 5 mgZ 0. 2 mlに変更した。 2 - 2 . 動物の致死及び観察

実験が 1 1週目になった時、股動脈から血を出し、動物を致死させた。子宮を分離し、両側大腿骨及び両側脛骨に対し、夫々右脛骨双光子骨密度の測定、左脛骨病理組織学的検査、右脛骨計量学の測定、左大腿骨生物力の測定、右大腿骨灰重量及び生化学的測定、子宮重量の測定等を行った。

2 - 3 . 統計分析

全ての定量パラメータ一は全て X土 S Dで表示する。各群の指標は全て去勢群と比較し、統計水準は 0 . 0 5である。

3 . 結果

3 - 1 . 化合物 1 - 3が去勢ラットの体重及び全身状況に及ぼす影響

実験開始後最初の 4週間、化合物 1 一 3を経口投与した高用量群. 及び注射した低用量群と中用量群、 E ₂ を注射した群のラッ卜に毛髮直立、動きが鈍い、脱毛などの現象が現れたので、全ての実験動物に対し 1週間投与を中止した。後の 6週間、注射した動物に対し減量投与した結果、上記症状は軽減し、或いはなくなった。実験終了後、化合物 1 一 3を高用量経口投与した群の体重の増加が抑制

( 1 . 4 % ) されたのを除いて、他の群の増加率は大体 3 0〜 4 0 %であった。

3 - 2 . 化合物 1 一 3が去勢ラッ卜の骨生物力学に及ぼす影響仮手術群ラットの大腿骨の抗湾曲強度は 9 7ニュートンで、去勢群は 8 0ニュートンまで低下した。この 2群に明らかな差異（ Pく 0 . 0 5 ) があった。 E ₂ を経口投与及び注射した群のラットの大腿骨の抗湾曲強度は夫々 1 0 1 と 9 0ニュートンに上がり、去勢群と比較すると、明らかな差があった。化合物 1 一 3を経口投与した低、中、高用量群のラッ卜の大腿骨の抗湾曲強度は夫々 1 0 5 , 1 0 5 と 7 4 ニュートンで、去勢群と比較すると、低、中用量群が上昇し、明らかな差があつた。化合物 1 — 3を注射した低、中、高用量群のラットの大腿骨の抗湾曲強度は夫々 8 3， 1 0 3 と 9 7二ユートンで、中、高用量群は去勢群と比較すると、明らかな差があつた。この実験は西南交大生物力学実験室の協力で完成したものでめ 0

3 — 3. 化合物 1 一 3が去勢ラッ卜の脛骨密度に及ぼす影響去勢群の脛骨密度（ 0. 0 3 7 g/cm) は仮手術群（ 0. 0 7 2 g/cm) より明らかに低下し、 E ₂ を経口投与及び注射した群のラットの骨密度は夫々 0. 0 5 7 と 0. 0 6 5 g / cmに増加した。ィ匕合物 1 一 3を経口投与した低、中、高用量群のラッ卜の骨密度は夫々 0. 0 5 6， 0. 0 6 2 , 0. 0 6 4 g Zcmであった。化合物を注射した低、中、高剤量組のラットの骨密度は夫々 0. 0 5 4 , 0. 0 6 6， 0. 0 8 5 gZcmで、どれも去勢群より高く、そして用量一効果関係があった。

3 - 4. 化合物が去勢ラッ卜の大腿骨灰の重量に及ぼす影響仮手術群ラットの大腿骨灰の重量は平均 0. 2 4 6 gZ匹で、去勢群は 0. 2 2 7 匹まで低下し、明らかな差（Pく 0. 0 5 ) があった。 E ₂ 及び化合物 1 一 3を経口投与及び注射した各群の大腿骨灰の重量は全て去勢群より明らかに増加し、仮手術群のレベルに達したか或いは越えた。

3 - 5. 化合物 1 一 3が去勢ラットの大腿骨カルシウムに及ぼす影響

去勢群ラットの大腿骨カルシウムの含有量は仮手術群及び各治療群より明らかに（ P < 0. 0 5 ) 下がった。仮手術群の大腿骨カルシゥムの含有量は 3 0 8 mg/ gで、去勢群は 2 0 9 で、 E ₂ を経口投与及び注射した群は夫々 3 1 9 mg/ g , 3 3 O mgZ gで、化合物 1 一 3を経口投与した低、中、高用量群は夫々 3 1 5， 3 2 し 3 2 2 mg/ gで、化合物 1 ― 3を注射し /"こ低、中、高用量群は夫々 3 1 2 , 3 1 5 , 3 2 2 mgZ gである。化合物 1 一 3を経口投与或いは注射した場合、大腿骨カルシウム含有量の影響には全て一定程度の用量一効果関係が存在していた。

3 - 6. 化合物 1 一 3が去勢ラットの脛骨病理学に及ぼす影響仮手術群の骨筋が正常。去勢群の骨筋がやや疎らで、幅が狭くなり、ボタン式の骨筋が増えた。一部の骨筋のところに隙間がみられ. 骨髄腔が明らかに拡大した。一部の骨筋の表面に吸収窪みが増え、破骨細胞が明らかに増え、活動した。骨筋成骨細胞も増え、活動したが、成骨より破骨のほうが大きい。 E ₂ 及び化合物 1 一 3による各治療群の骨筋の密度と幅に夫々一定程度の増加があつたが、ボタン式の骨筋が明らかに減少し、活動した成骨と破骨細胞は減少しつつある。

3 - 7. 化合物 1一 3が去勢ラットの子宮重量に及ぼす影響去勢群ラットの子宮が明らかに縮み、重量が減り（ 0. 1 7 g ) . 仮手術群（ 0. 3 7 g) より明らかに低下した。 E ₂ を経口投与及び注射した場合、子宮の重量が明らかに（ 0. 4 0 , 0. 2 1 ) 増加した。化合物 1 一 3を経口投与した低、中、高用量群の場合、子宮の重量は夫々 0 , 3 3 , 0. 4 5， 0. 4 8 gである。化合物 1 一 3を注射した低、中、高用量群の場合、子宮の重量は夫々 0. 1 2， 0. 2 3 , 0. 4 0 gである。化合物 1 一 3を経口投与及び注射した低用量群を除いて、中、高用量群の子宮の重量は明らかに去勢群より高かった。

3 - 8. 化合物 1 一 3による各実験群と去勢群との比較に関する各指標の変化は表 1 0を参照。

6 9 丁正された用紙 (規則 91) 4 . 中間総括

4 一 1 . 化合物 1 — 3を経口投与及び注射し/こ場合、去勢ラットの骨筋含有量、骨密度、骨生物力学特性及び骨カルシウム含有量に対して、全て顕著な作用があり、有効的に去勢後の骨質の安定を維持することが出来た。去勢群と比較すると顕著な差異があった。ある指標は仮手術群のレベルに達し或いは越えた。今回の実験から、化合物 1 一 3を高用量経口投与した群が例え中毒症状を呈しても骨量は相変わらず増加しているが、骨の抗湾曲強度は非常に弱いこと力くわ力、つナ：。

4 - 2 . 化合物 1 一 3を経口投与或いは注射した場合、去勢ラットの骨量、骨密度、骨生物力学、骨灰の重量及び骨カルシウム含有量に対する影響は一定程度の用量一効果関係があつた。

4 - 3 . この実験条件下で、化合物 1 一 3の去勢ラットの骨質に対する作用は E ₂ の治療効果に達し或いは越えた。

4 - 4 . 化合物を低用量経口投与或いは注射した場合、去勢ラッ卜の骨質の各種パラメ一ターに対し、全て顕著な改善作用があった ₍ 化合物を低用量経口投与した群の場合、子宮が軽い程度で増殖したが、仮手術群のレベルには達しなかった。化合物 1 一 3を低用量注射した場合、ラットの子宮の重量に対しては影響がなかった。これは、化合物 1 一 3の去勢ラットの失骨を予防治療する作用が有効用量の場合、軽度の子宮刺激作用を持つか、或いは持たなくても良いと言うことを表した。表 10：化合物 1一 3各実験群と 0VX群との比較に関する各指標の変化

\指標骨密度骨病理骨灰重骨カルシウム骨抗湾曲度子宮湿重体調増加群別 \ (双光子） (骨筋密度、幅）（g/匹） (mg/ g ) (二ユウトン） (g) (%)

Sham ― ― 一一一 ― ―

OVX

PE₂ t t f † 个 † 个口低 † 个个 i † 口中化合物个 † 1〜 3

口高 † t t † 个个注 E₂ † † † † 个个注低个个 † 个个注中化合物 † 个卜 3

注问个个注：正常 = = "一" ；減少或いは降下 = T ；増加 = "Γ ；体重増加率〉 20%は "†

个 i 少し増加あり

Claims

請求の範囲

1. 次の式（ I ) ：

X - Y - Z ( I )

〔式中、 Xは次の式（II)

(式中、 R , は水素又はヒドロキシル基であり； R ₂ は水素又はヒドロキシル基であり； R₃ は水素又はメチル基であり；そして R ₄ は水素、ハロゲン又はジメチルァミノ基である）

により表わされる 1価基であり；

Yは次の式（III ) , (IV) 又は（V) ：

(2)-CH₂-N N- (CH₂CH₂0)_n-CH₂CH₂-X- (3) (III)

\ _ /

CH_;

(2)-CH₂-N- (CH₂CH₂0)_n— CH₂CH₂ - X -（3) (IV)

_/ (CH₂CH₂0)„-CH₂CH₂-X- (3)

(3)-CH₂-N (V)

\(CH₂CH₂0)_n_CH₂CH₂— X— (3)

(式中、 nは 0〜 4であり、そして— X _は直接結合、一 0—又は一 N H—である）

により表わされる 2価基又は 3価基であり；そして

Zは次の式（VI) ：

(式中、 R , ' は HO—又は 0 =であり； R₂ ' は水素原子又はメチル基であり； R₃ ' は水素原子、フヱニル基又は置換フヱニル基であり； R₄ ' はメチル基又はェチル基であり； R₅ ' はヒドロキシル基、ケトン基又はァセチル基であり； R ₆ ' は水素、ヒドロキシ基、メチル基、ェチニル基又はプロピニル基であり；あるいは R ₅ と R₆ ' は一緒になって = 0を構成し； R₇ ' は水素、ヒドロキシル基、又は =0であり、あるいは R₆ ' と R₇ ' は 2 , 2—ジォキシプロピル基の酸素に結合しており；そして二は単結合又は二重結合を表わす）

で表わされる化合物の水素又はヒドロキシル基が除去された 1価基であり、この結合基は式（VI) の化合物の 2位、 3位、 4位、 6位、 7位又は 1 7位、あるいは 1 1位に結合したフヱニル基に存在し；式（II) の（ 1 ) と式（III ：) 〜（V) の（ 2 ) とは直接連結されており、そして式（III ) 〜（V) の（ 3 ) と式（VI) の前記の結合基のいずれかとが直接連結されている〕

により表わされる化合物を含んで成る医薬組成物。

2. 式（II) で表わされる 1価'基が、 R , が水素であり、 R₂ 力《ヒドロキシル基であり、 R ₃ がメチル基であり、そして R ₄ が水素であるテトラサイクリン化合物の 1価基である、請求項 1に記載の医薬組成物。

3. 式（II) で表わされる 1価基が、がヒドロキシル基であり、 R ₂ がヒドロキシル基であり、 R ₃ がメチル基であり、そして R がメチルであるテラマイシンの 1価基である、請求項 1に記載の医薬組成物。

4. 式（II) で表わされる 1価基が、 R, が水素であり、 R₂ がヒドロキシル基であり、 R ₃ がメチル基であり、そして R ₄ が塩素であるクロ口テトラサイクリンの 1価基である、請求項 1に記載の医薬組成物。

5. 式（II) で表わされる 1価基が、 R, がヒドロキシル基であり、 R₂ が水素であり、 R₃ がメチル基であり、そして R₄ が水素であるデォキシテトラサイクリンの 1価基である、請求項 1に記載の医薬組成物。

6. 式（II) で表わされる 1価基が、 R, が水素であり、 R₂ が水素であり、 R₃ が水素であり、そして R₄ がジメチルァミノ基であるアミノテトラサイクリンの 1価基である、請求項 1に記載の医薬組成物。

7. 式（VI) で表わされる 1価基が、 R₅ ' と R₆ ' が一緒になつて =0を表わし、そし TR₇ ' が水素であるエストロンの 1価基である、請求項 1〜 6のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

8. 式（VI) で表わされる 1価基が、 R₅ ' がヒドロキシル基であり、 R₆ ' が水素であり、そして R₇ ' が水素であるエストラジオールの 1価基である、請求項 1〜 6のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

9. 式（VI) で表わされる 1価基が、 R₅ ' がヒドロキシル基であり、 R₆ ' がェチニル基であり、そして R₇ ' が水素であるエストロアルキノールの 1価基である、請求項 1〜 6のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

10. 式（VI) で表わされる 1価基が、 R₅ ' がヒドロキシル基であ,り、 R ' が水素であり、そして R₇ ' がヒドロキシル基であるエストリオールの 1価基である、請求項〜 ₆のいずれか i項に記載の医薬組成物。 '