WO1994001456A1 - Derives oligopeptidiques du collagene et leur utilisation pour la prevention de la cataracte secondaire - Google Patents

Derives oligopeptidiques du collagene et leur utilisation pour la prevention de la cataracte secondaire Download PDF

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WO1994001456A1
WO1994001456A1 PCT/FR1993/000670 FR9300670W WO9401456A1 WO 1994001456 A1 WO1994001456 A1 WO 1994001456A1 FR 9300670 W FR9300670 W FR 9300670W WO 9401456 A1 WO9401456 A1 WO 9401456A1
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alkyl
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ser
hydrogen atom
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Jean-Bernard Regnouf De Vains
Odile Chambon
Claude Bonne
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Laboratoire Chauvin
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Definitions

  • the present invention aims to provide means for the prevention of secondary cataracts.
  • Secondary cataract is the clouding which occurs in a large number of cases after extracapsular extraction of crystalline cataracts.
  • EP-A-0 299 467 To prevent secondary cataracts, it has already been proposed in EP-A-0 299 467 to instill in the anterior or posterior chamber of the eye, during or after the extraction of the lens, a conjugate of an antibody, such as than an anticollagen, and a cytotoxin capable of inhibiting the growth of epithelial cells.
  • an antibody such as than an anticollagen
  • a cytotoxin capable of inhibiting the growth of epithelial cells.
  • the present invention aims to provide new means for preventing secondary cataracts.
  • the present invention thus has for o: jet a method for preventing secondary cataract, which
  • X. represents a hydrogen atom, a Gly residue, an N-protecting group, in particular a group
  • R 3 being a C 1 -C 18 alkyl group, a C 3 -C 8 cycloalkyl group, an aryl group, in particular phenyl, an aryl group, in particular phenyl, carrying one or more substituents chosen from a C alkyl group - ⁇ C; , a hydroxy, alkoxy, C j -C 6 alkyl, C ⁇ - C 6 mono or polyhydroxylated, mono or poly (alkoxy, C.-C 6 alkyl) (C l -C 6) an amino group, a mono or di (alkyl C l -C 6) alkylamino, acetamido group and a sulfonamido group, or an aryl (al ⁇ kyle C ⁇ -C j), especially phenyl (C 1 -C 4 ), and X 2 represents a hydroxy group, a Ser residue, a Ser-Pro or Ser-Pro-Cys group,
  • R 2 R x and R 2 representing, independently of 1'un 1'autre a akyle group C.-C 18 cycloalkyl, C 3 -C ⁇ , an aryl (C 1 -C 4 ), especially phenyl (alkyl in
  • Ri and R 2 form together and with 1'atome nitrogen to which they are attached form a pyrrolidino group, piperidino or piperazinyl optionally substituted by an alkyl radical C ⁇ -C j or a 4-hydroxypiépridino, or a salt thereof addition with a pharmaceutically acceptable acid.
  • the present invention also relates to ophthalmic compositions containing in solution in an ophthalmic solvent a compound of formula I as defined above or one of its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid.
  • the present invention also relates to implants and crystalline handles in which are incorporated or on which are deposited a compound of formula I as defined above or one of its addition salts with a pharmaceutically acceptable acid.
  • the present invention also relates to new compounds for the implementation of the invention. These compounds are compounds of formula I in
  • X x represents an N-protecting group as defined above and
  • X 2 represents a group of formula R.
  • addition salts with pharmaceutically acceptable acids is meant the salts which give the biological properties of the free bases, without having an undesirable effect.
  • These salts can be in particular those formed with mineral acids, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid; acidic metal salts, such as disodium orthophosphate and monopotassium sulfate, and organic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, oxalic acid, fumaric acid, lactic acid, succinic acid, tartaric acid and pamoic acid.
  • mineral acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid
  • acidic metal salts such as disodium orthophosphate and monopotassium sulfate
  • organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, oxalic acid, fumaric acid, lactic acid, succinic acid, tart
  • the compounds of formula I can be prepared in a conventional manner by peptide synthesis in liquid or solid phase, by successive couplings of the various amino acid residues to be incorporated, from the C-terminal end to the N-terminal end, and whose the N-terminal ends and the reactive side chains are previously blocked by groups such as those mentioned below:
  • REPLACEMENT SHEET - lateral ends of the aspartyl blocked by an ester group such as benzyl ester, of the arginyl: blocked by an H + (protonation) or tosyle group.
  • the synthesis in liquid phase of a compound of formula I can be carried out in six stages, eight stages if the last amino acid, N-substituted arginine, is not obtained commercially.
  • the solvents used are most often dimethylformamide (DMF), tetrahydrofuran (THF), dioxane 1,4; coupling reagents dicyclohexyl carbodiimide (DCC), the catalyst hydroxybenzotriazole (HOBT).
  • the first step (step A) consists first of all in preparing the C ⁇ -amide analogues of an aspartic acid protected in N ⁇ - and C ⁇ by reaction on the latter of an amine HNR 1 R 2 in the presence of an agent for coupling and catalyst, in a suitable solvent. After purification and control of its purity, the product is deprotected (step B) with a deprotection reagent characteristic of the protective group GP1.
  • this amino acid derivative is transformed into a dipeptide (step C) by reaction of a protected glycine residue on its amino group (protective group GP4) in the presence of a coupling reagent and a catalyst in a suitable solvent.
  • a coupling reagent or of a hindered base
  • the protected dipeptide thus obtained is purified.
  • Step D is a specific deprotection step of the protective group GP4.
  • the dipeptide thus obtained, after purification is reacted with an arginine residue protected in N ⁇ and in N G (H * ) (step E) in the presence of a coupling agent and a catalyst, in an appropriate solvent, l addition of an equivalent of triethylamine is carried out when the deprotected dipeptide is obtained in protonated form.
  • the tripeptide product obtained is purified and then treated with a protective reagent for the protective group GP2, thereby releasing the carboxylate function from the aspartic residue (step F) to give the terminal tripeptide of formula I.
  • Each terminal tripeptide is studied in Fast Atom Bombardment Positive Mode (FAB + ) in a glycerol or thioglycerol matrix.
  • FAB + Fast Atom Bombardment Positive Mode
  • the dipeptide derivative I, C (8 g; 0.017 mol) is dissolved in ethyl acetate (300 ml) at 0 ° C. The solution is treated at this temperature by bubbling HCl gas. The deprotection reaction is followed by TLC over 2 hours. After degassing with nitrogen, the ethyl acetate is evaporated by half at room temperature under vacuum. The crystals formed are recovered by filtration, washed with ethyl ether and dried under vacuum (6.7 g; 0.0165 mole; 97%).
  • the finely pulverized N ⁇ -acetylarginine dihydrate (1.86 g; 0.00738 mole) and the compound obtained in d) (3 g; 0.00738 mole) are dissolved in DMF (200 ml) at room temperature. After 20 minutes of stirring, the DCC (1.52 g; 0.00738 mole) and the HOBT (0.998 g; 0.00738 mole) are added. The whole is stirred for 3 days. The insoluble material is filtered and the DMF is evaporated under vacuum. The residue is taken up in the minimum amount of dichloromethane and the insoluble material is filtered. The solvent is evaporated and the residue triturated with ethyl acetate, then ethyl ether.
  • the protected tripeptide obtained in e) (3 g; 0.005 Mole) is reduced in methanol (100 ml) with hydrogen in the presence of a 5% Pd / carbon catalyst (0.3 g) at room temperature overnight. The whole is then filtered through celite and the methanol evaporated to give the desired compound in the form of a hydroscopic white powder (2.3 g; 0.0045 mole; 90%).
  • 1.30-1.80 solid; 4H; 2CH 2 arg.); 1.86 (s; 3H; CH 3 acetyl); 2.65 (split AB; 2H; CH 2 Asp.); 3.09 (d + m; 2H; CH 2 Arg.); 3.72 (q.
  • Example 1 It is obtained as in Example 1. Its characteristics are as follows: NMR * H 1.00-1.80 (solid, 5 CH 2 cyclohexyl + 2 CH 2 Arg.); 1.88 (s, CH 3 acetyl); 2.50 (solid, DMSO + CH 2 Asp.); 3.10 (ill-defined q, CH 2 Arg.); 3.25-3.55 (s + solid, H 2 O + H cyclohexyl); 3.70 (d, CH 2 Gly.); 4.00-4.30 (m, CH Arg.); 4.50 (m, CH Asp.); 6.80-7.50 (solid + d, N-H + 4H guanidine); 8.00-8.20 (2 doublets, 2N-H); 8.40 (t, NH).
  • the lens is extracted from the bull's-eye via the posterior surface.
  • the lens is stored in phosphate buffer without calcium or magnesium (Phosphate Buffer Saline).
  • the lenses are frozen at -20 ° C at this stage, the anterior capsule is cut using small scissors and placed on the bottom of a culture dish. Incubation with 1% Triton XlOO for 30 minutes allows cells to take off crystalline epithelials adherent to the capsule.
  • the capsules are then rinsed three times with PBS. Before use, each capsule is observed under an optical microscope in order to verify the total absence of cells on the capsule.
  • the solution of DL [(4, 5) - 3 H] -leucine comes from Amersham, in aqueous solution 2% ethanol.
  • the specific activity is 25-50 Ci / mmol.
  • the 3 H-leucine solution used is diluted extemporaneously in DMEM culture medium (Dulbecco modified essential medium).
  • DMEM culture medium Dulbecco modified essential medium
  • 40 ⁇ Ci is used for 10 6 cells.
  • An incubation for 18 to 20 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator allows the incorporation of leucine into cellular proteins.
  • the cells are detached with 0.05% Trypsin-EDTA, the cells suspended in the
  • DMEMs are stored in a water bath at 37 ° C with stirring for 1 hour.
  • This protocol allows labeling of cells with a specific activity of 2-10 dpm / cell.
  • the capsules are cut with a No. 9 (18 mm) diameter cork borer and spread at the bottom of a well of a culture dish, multi-well 24 wells, 20 mm in diameter each.
  • a rubber O-ring is affixed to the bottom of the well to perfectly attach the capsule, the capsules are incubated in PBS + (10 mM CaCl 2 , 5 mM MgCl 2 ) until use.
  • Adhesion medium DMEM + culture medium 2mg / ml bovine albumin serum (DMEM + 0.2% BSA).
  • the concentrated solutions of compounds of formula I tested are prepared extemporaneously, they are diluted to the desired concentration in the adhesion medium.
  • 150 ⁇ l of total volume are deposited per well, they contain 10,000 cells in the presence of increasing concentrations of test compounds.
  • the compounds of formula I can be administered in particular in the form of: sterile solutions packaged in syringe, injected into the open eye during the surgical procedure,
  • ophthalmic compositions previously mentioned may be in the form of ready-to-use or extemporaneous solutions (lyophilisate and solvent) depending on the stability in aqueous medium of the compound of formula I used.
  • composition 4 Lyophilisate
  • a lyophilisate containing the active principle and a charge of dextran 70,000 or any other texturing agent.
  • Platelets are isolated from arterial rat blood drawn from the abdominal aorta.
  • the platelet-rich plasma (PRP) is prepared, then the platelet-poor plasma (PPP), by centrifugation (120 g ⁇ 10 min then 2000 g ⁇ 15 min).
  • the dilution of PRP and PPP is carried out in MICHAELIS buffer (Diagnostica Stago) in order to obtain with PRP a solution containing 3.10 5 platelets per microliter.

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Abstract

L'invention a notamment pour objet des composés de formule (I) dans laquelle: X1 représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule (II), R1 et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C1-C18, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl(alkyle en C1-C4), et R1 pouvant être H, ou R1 et R2 forment ensemble et avec l'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, pipéridino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C1-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable, pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention de la cataracte secondaire.

Description

DERIVES OLIGOPEPTIDIQUES DU COLLAGENE ET LEUR UTILISATION POUR LA PREVENTION DE LA CATARACTE SECONDAIRE.
La présente invention vise a fournir des moyens pour la prévention de la cataracte secondaire.
La cataracte secondaire est 1'opacification qui survient dans un grand nombre de cas après 1'extrac- 5 tion extracapsulaire de cristallins cataractes.
Pour prévenir la cataracte secondaire, on a déjà proposé dans EP-A-0 299 467 d'instiller dans la chambre antérieure ou postérieure de l'oeil, pendant ou après l'extraction de cristallin, un conjugué d'un 10 anticorps, tel qu'un anticollagène, et d'une cytotoxine capable d'inhiber la croissance de cellules épithéliales.
Dans WO-A- 89/12093, on a également proposé de prévenir la cataracte secondaire pour 1'administration d'anticorps monoclonaux spécifiques conjugués éventuel- 15 lement à des cytotoxines.
La présente invention vise à fournir de nouveaux moyens pour prévenir la cataracte secondaire.
La présente invention a ainsi pour o: jet un procédé pour prévenir la cataracte secondaire, qui
20 consiste à administrer un composé de formule :
Figure imgf000003_0001
dans laquelle :
X. représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly, un groupe N-protecteur, notamment un groupe
- C0R3 ou - CO - OR3
30 R3 étant un groupe alkyle en C1-C18, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryle, notamment phényle, un groupe aryle, notamment phényle, portant un ou plusieurs substituants choisis parmi un groupe alkyle en C-^C,;, un groupe hydroxy, un groupe alcoxy en Cj-C6, un groupe alkyle en Cα- C6 mono ou polyhydroxylé, un groupe mono ou poly(alcoxy en C.-C6) (alkyle en C.-C6), un groupe amino, un groupe mono ou di(alkyl en C.-C6) amino, un groupe acétamido et un groupe sulfonamido, ou un groupe aryl(al¬ kyle en Cj-C^), notamment phényl(alkyle en C1-C4), et X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule : RI
- N
^R2 Rx et R2 représentant, indépendamment 1'un de 1'autre, un groupe akyle en C.-C18, un groupe cycloalkyle en C3-Cβ, un groupe aryl(alkyle en C1-C4), notamment phényl(alkyle en
Figure imgf000004_0001
Ri et R2 forment ensemble et avec 1'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidono, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en Cj-C^ ou un groupe 4-hydroxypiépridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti¬ quement acceptable.
La présente invention a également pour objet des compositions ophtalmiques contenant en solution dans un solvant ophtalmique un composé de formule I tel que défini ci-dessus ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.
La présente invention a également pour objet des implants et anses cristalliniens dans lesquels sont incorporés ou sur lesquels sont déposés un composé de formule I tel que défini ci-dessus ou l'un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.
La présente invention a également pour objet des composés nouveaux pour la mise en oeuvre de 1'inven- tion. Ces composés sont des composés de formule I dans
FEUILLE DE REMPLACEMENT laquelle :
Xx représente un groupe N-protecteur tel que défini ci- dessus et
X2 représente un groupe de formule R.
- N
"^ R2 tel que défini ci-dessus, et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceuti- quement acceptables.
Par "sels d'addition avec des acides pharma¬ ceutiquement acceptables", on désigne les sels qui donnent les propriétés biologiques des bases libres, sans avoir d'effet indésirable. Ces sels peuvent être notam- ment ceux formés avec des acides minéraux, tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique; des sels métalliques acides, tels que 1'orthophosphate disodique et le sulfate monopotassique, et des acides organiques, tels que l'acide formique, l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide glycolique, l'acide oxali¬ que, l'acide fumarique, l'acide lactique, l'acide succinique, l'acide tartrique et l'acide pamoïque.
Les composés de formule I peuvent être préparés de manière classique par synthèse peptidique en phase liquide ou solide, par couplages successifs des différents résidus d'acides aminés à incorporer, de l'extrémité C-terminale vers l'extrémité N-terminale, et dont les extrémités N-terminales et les chaînes latérales réactives sont préalablement bloquées par des groupements tels que ceux mentionnés ci-dessous :
- extrémité N-terminale bloquée par les groupes BOC, Fmoc, Acyl
- extrémité C-terminale bloquée par les groupes ester, amiάe
FEUILLE DE REMPLACEMENT - extrémités latérales de 1'aspartyle : bloquée par un groupe ester tel que ester benzylique, de 1'arginyle : bloquée par un groupe H+ (protonation) ou tosyle.
On peut utiliser différentes méthodes de couplage :
1) couplage des résidus par les carbodiimides (exemple : DCC, EDC) avec ou sans catalyse (HOBT), ou autre agent couplant (EEDQ);
2) utilisation des anhydrides symétriques des acides aminés utilisés ;
3) utilisation des esters activés des acides aminés employés (exemple : HOBT, ester, p-nitro phény- lester).
La synthèse en phase liquide d'un composé de formule I peut être effectuée en six étapes, huit étapes si le dernier acide aminé, l'arginine Nα-substituée, n'est pas obtenue commercialement. Les solvants employés sont le plus souvent le dimethylformamide (DMF), le tetrahydrofurane (THF), le dioxane 1,4; les réactifs de couplage le dicyclohexyl carbodiimide (DCC), le catalyseur 1'hydroxybenzotriazole (HOBT).
On donnera ci-après un exemple de schéma de synthèse (schéma I) dans lequel GPX, GP2, GP3 et GP4 dési¬ gnent des groupes N-protecteurs. SCHEMA i
ection 1 B
Figure imgf000007_0001
Solvant
Figure imgf000007_0002
Déprotection 2
Etape F
Figure imgf000007_0003
La première étape (étape A) consiste tout d'abord à préparer les analogues Cα-amide d'un acide aspartique protégé en Nα- et Cβ par réaction sur ce dernier d'une aminé HNR1R2 en présence d'un agent de couplage et de catalyseur, dans un solvant approprié. Après purification et contrôle de sa pureté, le produit est déprotégé (étape B) par un réactif de déprotection caractéristique du groupe protecteur GP1.
Purifié, ce dérivé d'aminoacide est trans- formé en dipeptide (étape C) par réaction d'un résidu glycine protégé sur son groupement amino (groupe protec¬ teur GP4) en présence d'un réactif de couplage et d'un catalyseur dans un solvant approprié. L'addition d'un équivalent de triéthylamine (ou d'une base encombrée) est nécessaire si le dérive aspartyl est obtenu sous forme protonnée, le dipeptide protégé ainsi obtenu est purifié.
L'étape D est une étape de déprotection spécifique du groupe protecteur GP4. Le dipeptide ainsi obtenu, après purification est mis en réaction avec un résidu arginine protégé en Nα et en NG(H*) (étape E) en présence d'un agent de couplage et d'un catalyseur, dans un solvant approprié, l'addition d'un équivalent de triéthylamine est effectué lorsque le dipeptide déprotégé est obtenu sous forme protonnée. Le produit tripeptidique obtenu est purifié puis traité par un réactif de dépro¬ tection du groupe protecteur GP2, libérant ainsi la fonction carboxylate du résidu aspartique (étape F) pour donner le tripeptide terminal de formule I.
Les exemples suivants illustrent la prépara- tion des composés de formule I.
Dans ces exemples, les méthodes de caractéri- sation employées sont les suivantes :
1) Chromatographie en couche mince : - support silice Merck 5719 avec détection UV et I2 - solvants de migration :
- CH2C12:CH30H (16/1 à 16/4) pour les intermédiaires de synthèse
- CH3OH:AcOH pour les produits terminaux (Rf compris entre 0,3 et 0,5).
2) RMN1!! :
- 250 MHz Brϋcker.
Contrôle de la pureté à 1-2 % près par étude spectroscopique de tous les intermédiaires et produits finis.
3) Spectroscopie de masse :
Chaque tripeptide terminal est étudié en Mode Fast Atom Bombardment Positif (FAB+) en matrice glycérol ou thioglycérol.
EXEMPLE
Préparation du chlorure de [Nα-acétyl-NG(H*)~ arginyl]-glycyl-[Cβ(H)-Cα-benzyl]-aspartamide (Xx = acétyle, X2 = -NH-CH2-^ )
a) Préparation du [Nα-(t-butoxycarbonyl)-Cβ - benzyles er]-benzyl aspartamide.
On dissout à 0-5° C l'acide [Nα-(t-Boc)-Cβ - (benzylester)] aspartique (8g ; 0,025 mole), l'hydroxy- benzotriazole (3,37 g ; 0,025 mole) dans 160 ml de THF. On additionne à ce mélange une solution de DCC (5,15 g; 0,025 mole) dans un minimum de THF et la solution est laissée sous agitation. Au début de formation du préci¬ pité de DCU, la benzylamine (2,68 g ; 0,025 mole) est additionnée. On laisse alors le mélange revenir à température ambiante et sous agitation pendant 24 heures. Le DCU est enfin filtrée et le THF évaporé. Le résidu est repris par un excès d'éther ethylique et 1'insoluble est filtré. L'éther est évaporé et le résidu chromatographie (Si02; CH2C12:CH30H 90/10) pour donner l'amide souhaité (9 g : 87 %).
RMN1H:(CDC13). 1,42 (sing; 9H; BOC) ; 2,93 (AB dédoublé; 2H ; CH2asp. ) ; 4,39-4,70 (q. dédoublé + massif ; 3H : H asp + CH2 benzylamide) ; 5,13 (s ; 2H ; CH2 benzylester) ; 5,69 (d large ; 1H : NH carbamate) ; 6,80 (d large ; 1H ; NH benzylamide) ; 7,19-7,5 (massif ; 10 H ; H ar. ) CCM:Si02; CH2C12:CH30H 90/10 ; Rf = 0,8-0,9;
b) Préparation du chlorhydrate du [Cβ -benzy- lester-Cα -benzyl]-aspartamide.
On dissout le dérivé aspartique précédent (9 g ; 0,0218 mole) dans l'acétate d'éthyle (200 ml) à 0-5° C. on fait ensuite passer à travers la solution du HC1 gazeux à cette température et on laisse agiter pendant 4 heures. Le précipité formé est alors filtré et séché pour donner le chlorhydrate souhaité sous forme d'une poudre blanche (7 g ; 0,02 mole ; 92 %). M^H^DMSO-de). 2,98 (t ; 2H ; CH2 asp. ) ; 4,12 (t ; 1H; H asp.) ; 4,30 (d ; 2H ; CH2 benzylamide) ; 5,14 (s ; 2H; CH2 benzylester) ; 7,10-7,15 (massif ; 10H ; H ar.); 8,28 (s. large ; 3H ; H ammonium) ; 8,95 (t ; 1H ; H amide). CCM:Si02; ne migre pas.
c) Préparation du [Nα -( -butyloxycarbonyl)- glycyl]-[Cβ -benzylester-Cα -benzyl]-aspartamide
On dissout à 0-5 ° C dans le THF (40 ml) la Nα -(t-BOC)-glycine (3,5 g ; 0,02 mole), le HOBT (2,7 g ; 0,02 mole), puis le DCC (4,12 g ; 0,02 mole). Le tout est agité pendant 20 minutes à cette température puis on ajoute un mélange du produit obtenu en b) et de triéthy¬ lamine (équimolaire ; 7 g de produit obtenu en b) (0,02 Mole) ; 2 g de NEt3 (0,02 mole)) dans le minimum de THF (# 10ml).
L'ensemble est agité pendant 24 heures (contrôle CCM) puis la DCU formée est filtrée. Le THF est évaporé et le résidu repris à l'éther ethylique. Le précipité qui se forme à nouveau (DCU) est éliminé par filtration et le solvant est évaporé. Ce dernier résidu est dissout dans CH2C12, filtré à nouveau et chromato- graphie (Si02; CH2C12:CH30H 9/1) pour donner le produit souhaité (8 g ; 0,017 mole ; 85 %) sous forme d'une huile qui cristallise par trituration à l'éther de pétrole. RMN1H;(CDC13).1,39 (s.; 9H ; BOC); 2,94 (AB dédoublé disymétrique; 2H ; CH2 asp. ) ; 3,72 (t ; 2H ; CH2 gly- cyl); 4,42 (d. dédoublé ; 2H ; CH2 benzylamide); 4,88 (m; 1H ; H asp) ; 5,11 (d ; 3H ; CH2 benzylester + NH BOC); 7,0 - 7,50 (massif ; 12 H ; Har + 2 NH). CCM : Si02; CH2C12:CH30H 95/5 ; Rf = 0,5-0,6.
d) Préparation du chlorhydrate du (glycyl)-
[Cβ -benzylester-Cα -benzyl]-aspartamide.
On dissout dans l'acétate d'éthyle (300 ml) le dérivé dipeptidique I,C (8 g ; 0,017 mole) à Oo C. La solution est traitée à cette température par bullage d'HCl gazeux. La réaction de déprotection est suivie par CCM sur 2 heures. Après avoir dégazé à l'aide d'azote, 1'acétate d'éthyle est évaporée de moitié à température ambiante sous vide. Les cristaux formés sont récupérés par filtration, lavés à l'éther ethylique et séchés sous vide (6,7 g ; 0,0165 mole ; 97 %).
RMN^^DMSO-d . 2,80 (AB dédoublé ; 2H ; CH2 asp.) ; 3,61 (q ; 2H ; CH2 glycyl) ; 4,27 (d ; 2H ; CH2 benzylamide); 4,76 (q ; 1H ; H asp.) ; 5,10 (s ; 2H ; CH2 benzylester); 7,0-7,50 (massif ; 10H ; Har); 8,20 (s large ; 3H ; ammonium) ; 8,70 (t; 1H ; NH benzylamide); 8,89 (d ; 1H; NH amide) . CCM:Si02 ; ne migre pas.
e) Préparation du chlorure de [Nα -acétyl- NG(H*)-arginyl]-glycyl-[Cβ -benzylester-Cαbenzyl]-aspar- tamide
On dissout dans le DMF (200 ml) la Nα-acétyl- arginine dihydrate finement pulvérisée (1,86 g ; 0,00738 mole) et le composé obtenu en d) (3g ; 0,00738 mole) à température ambiante. Après 20 minutes d'agitation, la DCC (1,52 g ; 0,00738 mole) et l'HOBT (0,998 g ; 0,00738 mole) sont ajoutés. L'ensemble est agité pendant 3 jours. L'insoluble est filtré et le DMF est évaporé sous vide. Le résidu est repris par le minimum de dichlorométhane et l'insoluble est filtré. Le solvant est évaporé et le résidu trituré par l'acétate d'éthyle, puis 1'éther ethylique. Le solide ainsi obtenu est filtré, séché pour donner le composé souhaité (3 g ; 0,005 mole; 67 %).
Figure imgf000012_0001
1,30-1,80 (massif ; 4H ; 2CH2 Arg. ) ; 1,85 (s ; CH3 acétyl) ; 2,79 (AB dédoublé ; 2H ; CH2 asp.); 3,08 (d. large ; 2H ; CH2 Arg. ) ; 3,75 (q. dédoublé ; 2H ; CH2 glycyl); 4,10-4,40 (d+ m ; 3H ; CH2 benzylamide + H arg.) ; 4,72 (m ; 1H ; H asp.) ; 5,08 (s, 2H ; CH2 benzylester) ; 6,7-7,5 (m ; 15 H ; H ar. + guanidinium) ; 7,76 (t. large ; 1H ; NH) ; 8,80-8,70 (m; 3H ; 3 NH). CCM;Si02;CH2Cl2:CH3OH 80/20; Rf = 0,1
f) Préparation du chlorure de [Nα-acétyl-
NG(H+)-arginyl]-glycyl-[Cβ(H)-Cα-benzyl]-aspartamide
Le tripeptide protégé obtenu en e) (3g ; 0,005 Mole) est réduit dans le methanol (100 ml) par l'hydrogène en présence de catalyseur 5% Pd/charbon (0,3 g) à température ambiante pendant une nuit. L'ensemble est alors filtré sur célite et le methanol évaporé pour donner le composé désiré sous forme d'une poudre blanche hydroscopique (2,3 g ; 0,0045 mole ; 90 %).
Figure imgf000012_0002
1,30-1,80 (massif ; 4H ; 2CH2 arg. ); 1,86 (s ; 3H ; CH3 acétyl); 2,65 (AB dédoublé ; 2H ; CH2 Asp.); 3,09 (d + m ; 2H ; CH2 Arg.); 3,72 (q. dédoublé; 2H ; CH2 glycyl) ; 4,10-4,50 (d+m ; 3H ; CH2 benzylamide + H arg.); 4,61 (q ; 1H ; H Asp. ) ; 7,24 (massif ; 10 H; H ar. + guanidinium) ; 7,80 (massif ; 1H ; NH); .8,10-8,60 (massif ; 3H ; 3 NH) ; 12,38 (s large ; 1H ; COOH). FAB+ : pour [C21H32N706]*, Cl" : [M]+ = 478; CCM:Si02 ; CH3OH ; AcOH 99,75/0,25 Rf = 0,5-0,6.
EXEMPLE 2 Préparation du chlorure de [Nα -acétyl-NG(H*)- arginyl] glycyl-[Cβ (H)-Cα -isopropyl]aspartamide (Xx = acétyle, X2 = -NH-CH(CH3)2)
Il est obtenu comme à l'exemple 1. Ses caractéristiques sont les suivantes : RMNXH
1,00-1,20 (2 doublets, 2 CH3 isopropyl); 1,45-1,80 (massif, 2 CH2 arg.);l,90 (s, CH3 acétyl) ; 2,60 (AB dédoublé, CH2 Asp.) ; 3,10 (q mal défini, CH2 Arg.); 3,70 (q, CH2 Gly.) ; 3,85 (m, H isopropyl) ; 4,20 (q. mal défini, CH Arg. ); 4,50 (q mal défini, CH Asp.) ; 6,80- 7,60 (massif + d, 4H guanidine+N-H); 7,80 (t mal défini, N-H); 8,05 (d* N-H) ; 8,25: (d,N-H) ; 8,35 : (t, N-H). CCM : Si02, MeOH-AcOH(20:0,05); Rf=0,45. FAB* : pour [C17H32N706]+, Cl" : [M]+ = 430
EXEMPLE 3
Préparation du chlorure de [Nα -acétyl-Nc(H*)- arginyl] glycyl-[Cβ (H)-Cα -cyclohexyl) aspartamide (Xt = acétyle, X2 = -NH- )
Il est obtenu comme à l'exemple 1. Ses caractéristiques sont les suivantes : RMN*H 1,00-1,80 (massif, 5 CH2 cyclohexyl + 2 CH2 Arg. ) ; 1,88 (s, CH3 acétyl); 2,50 (massif, DMSO + CH2 Asp. ); 3,10 (q mal défini, CH2 Arg. ); 3,25-3,55 (s + massif, H20 + H cyclohexyl); 3,70 (d, CH2 Gly. ); 4,00-4,30 (m, CH Arg. ); 4,50 (m, CH Asp. ); 6,80-7,50 (massif + d, N-H+4H guanidi- ne); 8,00-8,20 (2 doublets, 2N-H); 8,40 (t, N-H).
CCM: Si02, MeOH:AcOH (20:0,05); Rf = 0,5. FAB+ : pour [C20H36N7O6] + , Cl" [M]* = 470.
EXEMPLE 4 Préparation du chlorure de (Nα-acétyl-NG(H+)- arginyl ] glycyl- [ Cp (H) -Cα diéthyl] aspartamide i — X1 ≈ acétyle, X2 = -N )
Il est obtenu comme à l'exemple 1. Ses caractéristiques sont les suivantes : RMNXH
0,99 (t, CH3 éthyl); 1,14 (t, CH3 éthyl ); 1,35-1,80 (massif,2CH2Arg. ); 1,89 (s, CH3, acétyl); 2,22-2,80 (AB dédoublé, disymétrique centré sur 2.50, CH2 Asp. ); 2,95- 3,50 (massif, H20 + 2 CH2 éthyl + CH2 Arg. ); 3,69 (d, CH2 Gly.); 4,25 (massif, CH Arg.); 4,95 (q, CH Asp. ); 6,70- 7,60 (massif large, 4H guanidine); 7,95 (s large, H* guanidinium); 8,10 (d, N-H Asp. ou Arg.); 8,22 (t, N-H Gly); 8,32 (d, N-H Arg. ou Asp.).* CCM: Si02, MeOH:AcOH (20:0,05); Rf = 0,3. FAB+: pour [C18H34N706]+, Cl' :[M]+ = 444 + dimère à 887 (5 %)•
EXEMPLE 5 Préparation du chlorure de [Nα-benzoyl-NG(H*) arginyl] glycyl-[Cp (H)-Cα -benzyl]aspartamide (Xx = acétyle, X2 = -NH- -^ ^ )
RMN*H
1,40-2,00 (massif, 2 CH2 Arg. ); 2,79 (massif, CH2 Asp. ); 3,12 (q, CH2 Arg. ); 3,79 (m, CH2 Gly. ); 4,29 (d, CH2phé- nyl); 4,44 (m, CH, Arg. ); 4,60 (q, CH, Asp. ); 6,75-8,12 (massif, 10 H ar. + 5 H guanidinium); 8,29 (massif, 2N- H); 8,40 (t mal défini, N-H Gly); 8,64 (d, N,H). CCM : Si02, MeOH:AcOH (20:0,05); Rf = 0,75. FAB+ : pour [C26H34N706] + , Cl' : [M]+ = 540
EXEMPLE 6
Préparation du chlorure de [N -Boc-NG(H*) arginyl] glycyl-[C (H)-C benzyl]aspartamide (Xï ≈ Boc, X2 = -NH-CH2-^>)
RMN:H
1,20-1,80 (massif + s, 3 CH3B0C + 2CH2 Arg. ); 2,55-3,20
(massif, CH2 Arg. + CH2 Asp. ); 3,75 (d mal défini, CH2
Gly.); 3,92 (m, CH Arg. ); 4,20-4,70 (d+m, CH2-phényl + CH Asp.); 6,70-7,60 (massif, 5H Ar. + N-H B0C+4H guanidine);
7,70 (t mal défini, N-H); 8,05-8,40 (massif, 2N-H).
CCM:Si02, MeOH:AcOH (20:0,05); Rf=0,8 (décompose).
FAB* : pour [C24H38N707]\ Cl. : [M]+ = 436.
On donnera ci-après des résultats d'essai mettant en évidence 1 ' intérêt des composés de formule I dans la prévention de la cataracte secondaire.
Essai d'inhibition de l'adhésion des cellules épithéliales sur des capsules cristalliniennes a) Préparation des capsules cristalliniennes bovines
Le cristallin est extrait de l'oeil de boeuf par la face postérieure. Le cristallin est stocké dans du tampon phosphate sans calcium ni magnésium (Phosphate Buffer Saline). Les cristallins sont congelés à -20° C à cette étape, la capsule antérieure est découpée à l'aide de petits ciseaux et déposée sur le fond d'une boîte de culture. Une incubation avec du Triton XlOO 1% pendant 30 minutes permet de décoller les cellules épithéliales cristalliniennes adhérentes à la capsule. Les capsules sont ensuite rincées trois fois avec du PBS. Avant l'utilisation, chauqe capsule est observée au microscope optique afin de vérifier 1 ' absence totale de cellules sur la capsule.
b) Marquage des cellules épithéliales cristalliniennes bovines à la 3H-leucine
La solution de D.L[(4, 5)-3H]-leucine provient d'Amersham, en solution aqueuse 2 % éthanol. L'activité spécifique est de 25-50 Ci/mmole.
La solution de 3H-leucine utilisée est diluée extemporanément dans du milieu de culture DMEM (Dulbecco modified essential médium). Pour le marquage des cellules, on utilise 40 μCi pour 106 cellules. Une incubation de 18 à 20 heures à 37° C dans une étuve à C02 permet l'incorporation de la leucine dans les protéines cellulaires. Après 3 lavages avec du DMEM, les cellules sont décollées avec la Trypsine-EDTA 0,05 %, les cellules en suspension dans le
DMEM sont conservées au bain-marie à 37° C sous agitation pendant 1 heure.
Ce protocole permet un marquage des cellules avec une activité spécifique de 2-10 dpm/cellule.
c) Adhésion des cellules épithéliales cris¬ talliniennes bobines sur capsules
Les capsules sont découpées avec un perce- bouchon de diamètre n° 9 (18 mm) et étalées au fond d'un puits d'une boîte de culture, multipuits 24 puits, de 20 mm de diamètre chacun. Un joint torique en caoutchouc est apposé au fond du puits pour accoler parfaitement la capsule, les capsules sont incubées dans du PBS+ (10 mM CaCl2, 5 mM MgCl2) jusqu'à utilisation. Milieu d'adhésion = milieu de culture DMEM + 2mg/ml sérum albumine bovine (DMEM+0,2 % BSA).
Les solutions concentrées de composés de formule I testés sont préparées extemporané ent, elles sont diluées à la concentratior voulue dans le milieu d'adhésion.
150 μl de volume total sont déposés par puits, ils contiennent 10 000 cellules en présence de concentrations croissantes de composés testés.
Après une incubation de 1 h à 37° C dans l'étuve à C02, les puits sont lavés trois fois avec du PBS calcium, magnésium. Une solubilisation d'une nuit avec 1,5 ml de NaOH 0,2N et sodium dodécyl sulfate de sodium 1 % permet le comptage au compteur à scintilla¬ tion. d) Résultats
Pour chaque composé testé, les courbes d'adhésion en fonction de la concentration en composé sont tracées. La dose à laquelle on observe une inhibi¬ tion de l'adhésion de 50 % (IC50) est calculée.
Le tableau suivant résume les résultats :
Figure imgf000017_0001
Les composés de formule I peuvent être administrés notamment sous forme : de solutions stériles conditionnées en seringue, injectées dans l'oeil ouvert pendant l'intervention chirurgicale,
- d'implants cristalliniens dans la matrice desquels ces composés ont été préalablement incorporés ou dont la surface est imprégnée avant mise en place,
- de collyres stériles conditionnés en flacons unidose ou multidose et instillés pendant la période post-opéra¬ toire.
Les compositions ophtalmiques précédemment citées peuvent se présenter sous forme de solutions prêtes à l'emploi ou extemporanees (lyophilisât et solvant) selon la stabilité en milieu aqueux du composé de formule I mis en oeuvre.
Elles répondent aux critères de stérilité, de neutralité et d'isotonie imposés par l'usage ophtalmique. On donnera ci-après des exemples de solutions ophtalmiques.
Composition 1
Composé de formule I 1,00 g
Chlorure de calcium anhydre 0,01 g Chlorure de potassium 0,02 g
Dihydrogénophosphate de potassium 0,02 g
Chlorure de magnésium hexahydraté 0,01 g
Chlorure de sodium 0,80 g
Sodium hydrogénophosphate heptahydraté 0,22 g Eau purifiée q.s.p 100,00 ml
Solution ophtalmique dont la composition correspond au tampon phosphate salin. Composition 2
Composé de formule I 1,00 g
Hydrogénophosphate de sodium 1,04 g
Dihydrogénophosphate de sodium 0,24 g Chlorobutanol 0, 50 g
Eau purifiée q.s.p 100,00 ml
Collyre prêt à 1 'emploi multidose dont la conservation est assurée par le chlorobutanol ou tout autre agent antibactérien.
Composition 3
Composé de formule I 1,00 g
Hydrogénophosphate de sodium 1,04 g
Dihydrogénosphosphate de sodium 0,24 g Hydroxypropylmethyl cellulose 0, 50 g
Eau purifiée q.s.p 100,00 ml
Collyre prêt à l'emploi unidose dont la viscosité est obtenue par 1'hydroxypropylmethyl cellulose ou tout autre agent épaississant.
Composition 4 Lyophilisât
Composé de formule I 2, 500 g
Dextran 70.000 2,500 g Chlorure de calcium anhydre 0,025 g
Chlorure de potassium 0,050 g
Dihydrogénophosphate de potassium 0,050 g
Chlorure de magnésium hexahydraté 0,025 g
Hydrogénophosphate de sodium heptahydraté .... 0,550 g Eau purifiée q.s.p 100,00 ml
Solvant
Chlorure de sodium 0,80 g
Chlorure de benzalkonium 0,01 g
Eau purifiée q.s.p 100,00 ml Collyre extemporané constitué : .
. d'un lyophilisât contenant le principe actif et une charge de dextran 70.000 ou tout autre agent de texture . d'un solvant renfermant un agent antibactérien le chlorure de benzalkonium et permettant la réhydratation du lyophilisât avant usage.
En outre, les composés nouveaux selon la présente invention se sont avérés présenter une activité intéressante d'inhibition de l'agrégation plaquettaire. Cette activité a été mise en évidence dans le test suivant :
Test d'inhibition de 1'agrégation plaquettaire :
a) Préparation des plaquettes.
Les plaquettes sont isolées à partir de sang de rat artériel prélevé dans l'aorte abdominale. On prépare le plasma riche en plaquettes (PRP), puis le plasma pauvre en plaquettes (PPP), par centrifugation (120 g x 10 mn puis 2000 g x 15 mn). La dilution du PRP et du PPP est effectuée dans du tampon de MICHAELIS (Diagnostica Stago) afin d'obtenir avec le PRP une solution contenant 3.105 plaquettes par microlitre.
b) Inhibition de l'agrégation plaquettaire.
Dans la microcuve de 1'agrégomètre 300 μl de PRP sont incubés avec 10 μl des différents peptides à tester; une minute après, les plaquettes sont stimulées avec 10 μl d'ADP 6,25 μM. Les résultats montrant 1'effet antiagrégant des composés sont indiqués dans le tableau suivant. La dose à laquelle on observe une inhibition de 1'agrégation plaquettaire de 50 % a été calculée (CI50).
Figure imgf000021_0001

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation des composés de formule : Xx - NH - CH - CO - NH - CH2 - CO - NH - CH - CO - X2
Figure imgf000022_0001
dans laquelle :
Xx représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe
Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
- N
R2 Rλ et R2 représentant, indépendamment 1'un de 1'autre, un groupe alkyle en C.-C^, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl(alkyle en C.-C4), R pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou
R et R2 forment ensemble et avec 1'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C1-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti¬ quement acceptable, pour la fabrication d'un médicament destiné à la préven¬ tion de la cataracte secondaire.
2. Composition ophtalmique comprenant un composé de formule : X1 - NH -
Figure imgf000022_0002
NH *2- dans laquelle Xx représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-proteσteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
RI
Rx et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C.-C18, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl(alkyle en C.-C4), R-, pouvant en outre re- présenter un atome d'hydrogène, ou
R. et R2 forment ensemble et avec 1 'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C.-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti¬ quement acceptable, dans un solvant ophtalmique.
3. Implants et anses cristalliniens compre¬ nant un composé de formule :
XΑ - NH
Figure imgf000023_0001
dans laquelle :
Xx représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe
Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
RI " N""
Rj et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C. - -,8 , un groupe cycloalkyle en C-^-Cg, un groupe aryl(alkyle en C± -C Λ ), R I pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou R. et R2 forment ensemble et avec l'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C1-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti- quement acceptable.
4. Composés de formule :
X, - NH
Figure imgf000024_0001
NH2 dans laquelle :
X. représente un groupe N-protecteur, et
X2 un groupe de formule : ^ RI
- N \
R2 Rx et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C^C.g, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl(alkyle en C.-C_,), R. pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou
Ri et R2 forment ensemble et avec 1 'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C1-C1 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, et leurs sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.
5. Composés selon la revendication 4, de formule I dans laquelle : χχ représente un groupe - C0R3 ou - CO - 0R3 R3 étant un groupe alkyle en C-L-C^, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryle, un groupe aryle portant un ou plusieurs substituants choisis parmi un groupe alkyle en C.-C, , un groupe hydroxy, un groupe alcoxy en C1-C6, un groupe alkyle en Cx-C6 mono ou polyhydroxyle, un groupe mono ou poly(alcoxy en C1-C6) (alkyle en C1-C6), un groupe amino, un groupe mono ou di(alkyl en C.-C6) amino, un groupe acetamido et un groupe sulfonamido, ou un groupe aryl(alkyle en C.-C4). 6. Composé de formule I selon la revendica¬ tion 4, dans laquelle X. est un groupe acétyle et X2 est un groupe benzylamino.
7. Composé de formule I selon la revendica¬ tion 4, dans laquelle Xx est un groupe acétyle et X2 est un groupe cyclohexylamino.
REVΕ-NDICATIONS MODIFIEES
[reçues par le Bureau international le 24 Novembre 1993 (24.11.93) ; revendication 4 modifiée ; revendications 8-11 ajoutées ; autres revendications inchangées ( 5 pages ) ]
1 . Utilisation des composés de formule :
Xx - NH -
Figure imgf000026_0001
C=NH
5 2 dans laquelle :
X1 représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe 0 Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
RI - N
R2 5 x et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C.-C18, un groupe cycloalkyle en C3-Ca, un groupe aryl(alkyle en Cj-C^ ) , R pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou
R. et R2 forment ensemble et avec l'atome d'azote sur 0 lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C.-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti¬ quement acceptable, 5 pour la fabrication d'un médicament destiné à la préven¬ tion de la cataracte secondaire.
2. Composition ophtalmique comprenant un composé de formule :
X. - NH - CH - CO - NH - CH2 - CO - NH - CH - CO - X2 (CH2)3 C-H2
NH COOH ( I )
I
C≈NH
NH2 dans laquelle : X. représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
RI - N
"^R2 Rx et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C.-C18, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl( alkyle en C.-C,) , R pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou
R. et R2 forment ensemble et avec 1 'atome d 'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C.-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti¬ quement acceptable, dans un solvant ophtalmique.
3. Implants et anses cristalliniens compre¬ nant un composé de formule :
X, - NH -
Figure imgf000027_0001
dans laquelle :
X, représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe
Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule :
RI " "'"
Rj et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C.-C.p, un groupe cycloalkyle en C^ -CQ , un groupe aryKalkyle en C1~C4), Rχ pouvant en outre re¬ présenter un atome d'hydrogène, ou R. et R2 forment ensemble et avec l'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C^C^ ou un groupe 4-hydroxypipéridino, ou un de ses sels d'addition avec un acide pharmaceuti- quement acceptable.
4. Composés de formule :
X, - NH - CH - CO - NH - CH, - CO - NH - CH - CO - X, I ι
(CH2)3 CH2
NH OOH ( I ) C=NH
NH2 dans laquelle :
X. représente un groupe N-protecteur, et X2 un groupe de formule : RI
- N
^ R2 Rx et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C^C^, un groupe cycloalkyle en C3-Ce, un groupe benzyle , R, pouvant en outre, représenter un atome d'hydrogène, ou
R. et R2 forment ensemble et avec 1 'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C1-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, et leurs sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.
5. Composés selon la revendication 4, de formule I dans laquelle : χ représente un groupe - C0R3 ou - CO - 0R3 R3 étant un groupe alkyle en Cj-C.g, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryle, un groupe aryle portant un ou plusieurs substituants choisis parmi un groupe alkyle en C.-Cg , un groupe hydroxy, un groupe alcoxy en C1-C6, un groupe alkyle en C.-C6 mono ou polyhydroxyle, un groupe mono ou ρoly(alcoxy en C.-C6) (alkyle en C.-C6), un groupe amino, un groupe mono ou di(alkyl en C.-C6) amino, un groupe acetamido et un groupe sulfonamido, ou un groupe aryl(alkyle en C^-C^).
6. Composé de formule I selon la revendica¬ tion 4, dans laquelle Xx est un groupe acétyle et X2 est un groupe benzylamino.
7. Composé de formule I selon la revendica¬ tion 4, dans laquelle Xx est un groupe acétyle et X2 est un groupe cyclohexylamino.
8. Procédé pour prévenir la cataracte secondaire qui consiste à administrer une quantité therapeutiquement efficace d'un composé choisi parmi les composés de formule
X. - NH - CH - CO - NH - CH2 - CO - NH - CH - CO - X2
Figure imgf000029_0001
NH2 dans laquelle : χl représente un atome d'hydrogène, un résidu Gly ou un groupe N-protecteur, et
X2 représente un groupe hydroxy, un résidu Ser, un groupe Ser-Pro ou Ser-Pro-Cys, ou un groupe de formule : RI
- N
R, Rx et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, un groupe alkyle en C..-C18, un groupe cycloalkyle en C3-C8, un groupe aryl(alkyle en C.-C4), R. pouvant en outre représenter un atome d'hydrogène, ou R. et R2 forment ensemble et avec l'atome d'azote sur lequel ils sont fixés un groupe pyrrolidino, piperidino ou pipérazinyle éventuellement substitué par un radical alkyle en C.-C4 ou un groupe 4-hydroxypipéridino, et leurs sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.
9. Procédé selon la revendication 8, qui comprend l'administration dans l'oeil dudit composé.
10. Procédé selon la revendication 9, qui comprend l'administration d'une solution stérile dudit composé pendant 1 ' intervention chirurgicale destinée à extraire le cristallin.
11. Procédé selon la revendication 9, qui comprend l'administration d'un collyre stérile après l'extraction du cristallin.
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