PT97782A - Processo para a preparacao de peptideos inibidores da protease do hiv - Google Patents

Description

Ο ΗΙν (vírus da imuncdsficifncia humana) é um retroví-rus que provoca o SIDA, doença que se revela geralmente fatal nos sares humanos» Apesar de actua1mente já ser possível minorar os efeitos de SIDA e- prolongar as vidas dos pacientes* não foram ainda descobertas composições farmacêuticas que combatam eficaz-mente este vírus como causa do S1BA, Um possível objeetivo no tratamento do SIDA consiste em evitar a propagação do HIV sem danificar simulianeamsnte os sistemas celulares ainda intactos do psclente» 0 genoma das duas variantes de HIV, HIV-1 e Ηϊν-Ξ, conhecidas até à data apresenta uma regilo com um código para uma “protèase de restrição Cgag protease)". Além disso, ambos os vírus apresentam uma região com um código para os antigénios com especificidade para grupos <gag), Os genes correspondentes sao expressados como proteínas precursoras s as proteínas de restrição propriamente ditas, as proteínas estruturais do núcleo virai p!7, p24, p9 e p7, slo libertadas proteo11ticamente pelas primeiras por acção da referida protèase de restrição, A protèase de restrição propriamente dita á também eacisada de uma proteína precursora que é origem de outras proteínas virais, tais como a trancriptase s a integrass reversas, Presuma-se que este processo prossegue autoproteoliticamente» Também é sabido que a protèase ds restrição cliva a principal proteína nucleica íp24) do HIV—i e do H!V-2, de preferência W-terminalmente na prolina, por exemplo em Fe—Pro, Leu—Pro ou Tir—Pro. uma p24 Pro—terminal encurtada deste modo é então utilizada em conjunto com outras proteínas estruturais virais na síntese do nucleocápsido e do revestimento virai do HIV-1 e do HlV-2, Também é sabido que a protease cie restrição do HIV—1 cliva as sequências Leu—Fe, Leu-Hia, net—riet e Fs—Leu com graus de eficiência variáveis, è evxdente que, além da sequência de aminoácidos, a conformação contribui para a especificidade da protèase de restrição.

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Se a acesa da protéass de restrição pudaísse ser inibida,: nem 33 proteínas estruturais funcionais nsm as enzimas virais necessárias estariam à disposição do vírus e a sua propagação seria impedida senão totalmente interrompida„ Urge por conseguinte descobrir inihidorss completos ou, pelo menos? parciais da protéass de restrição» Estes compostos poderiam desempenhar um papel importante coma agentes antivirais contra c SIDA ou outras doenças provocadas por retrovírus» >

Foi agora surqreendsnienisnte descoberto que os compostos ds acordo com o presente invento são adequadas como inibido-res de protéass de restrição uma vez que são capazes de inibir as protsasas de restrição mesmo em concentrações da ardem de grandeza n an oino i. ar

Os compostos de acordo com o presente invento são os compostos da fórmula I,

I R1 representa diCalquil inferior)amino-# pirrolidino, piperi-dino;i morfolino, tiomorfolino, ByS-diQKotiomorfolino, pipsrazinas N-íslquil inferior)piperazino» benziIgkí ou benziIokí substituído no anel fenilo com alquilo inferior ou com alcoid. inferior.

Α representa um radical bivaients de um dos aminoácidas valina e asparagina ligada M-terminalmente sq grupe --(0=0) e C-ierminslmente ao grupa -MH5 A0 representa ucn radical bivaients da um dos aminoácidos tirosina s fenilalanina ligado N-terminalroente ao grupo -(0=0) s C-tsrminalmsnts ao grupo -NH, s R^. representa OhU ou em que reprasanta hidrogénio ou alquile inferior* s também os sais destas compostos desde que neles este ja<m) presente(s) um ou mais grupoís) formadorCss) de sais* 0 presente invento dis igualmente respeita a processos para a preparação dos referidos compostos,. a composições farma-ctuticas que confim esses compostos e à utilização desses compostas cama medicamentas ou para a preparaçlo de composições farms-ciáticas*

Na memória descritiva do presente invento o termo "inferior” indica qus os grupes ou radicais deste modo designa-dos* por exemplo alquilo inferior ou alcoxi inferior, contim de preferfncia 1 a 7 átomos de carbono es especialmente, 1 a 4 átomos de carbono* As sKpressSes gerais t@m o seguinte significados

Alquilo inferior contém de prsfarincia i a 7 átomos de carbono e representa* par exemplo,, metilas sfcila, 3n-propilos isopropiloy n-butile, isobutilo, n-pentilo ou n-hexilo» Alquilo inferior em 0Ro representa especialmente meti lo« etilo ou •ώ. ^1. n-butilo e, em NHR2? representa especialmente n-propilo» Alquilo

inferior eí?5 diCslquil inferior)amino R. representa especialments meti Io ou etilo, mais especial mente meti lo = 0 substituinte preferido para alquilo inferior em benziloxi Ri á metilo« filcoxi inferior contém de prsfsrtncia 1 a 7 átomos de carbono e representa, por exsmp lo, metoxi, etoxi., isopropoxi ou t-hutoxi, especialmente metoKir. S-iS-dloxotiomorfolino designa o radical, ligado por intermédio de azoto* da sulfona 4-aza-l * l~dioKO--l-tiaciclohe>í“4-™ilo derivada de tiomorfolina. 0 substituinte alquilo inferior ou alcoxi interior em benziloxi R^ encontra-se na posição 2, 3 ou 4 do anel fenilo, de preferencia na posição 4* podendo ocorrer mais do que uma vez. BenziloKi substituído R, representa, por exemplo, 2-, 3- ou 4-matilbenziloxi, 2-, 3- ou 4-msto>?ibenziloxi, 2,4- ou 3,5-dime-tilbenziloxi cu 2,4-dimetoxibenziloxi *

Os termos valina (ácido e-aroinoisovalérico) e asparagi-na (4-amida do ácido α-aminosuccínico) A,s ou fenilalanina (ácido «-amino-jSf erti 1 propiónico) e tirosina (ácido a-amino-B-íp-hidroxi-fenil>propiónico) A0 designam os correspondemtes L-et—aminoácidos | que ocorrem nas proteínas naturais.

Ds sais são especialmente os sais farmaceuticsmente aceitáveis não tóxicos ds compostos da fórmula l contendo um ou mais grupos ácidos ou básicos formadores de sais. >

Estes sais são obtidos, por exemplo, a partir de compostos da fórmula 1 em que Fu representa hidrogénio e sao, .i£. “ especialmente, sais de metal alcalino adequados, por exemplo sais as sòdxo ou de potássio, ou sais de metal alcalino, por exemplo

sais da magnésio ou de cálcio, bem como sais de zinco ou de amónio» e ainda aqueles sais obtidos com aminas orgânicas, tais como mono-, di- ou iri~-alquilaminas não substituídas ou mono·- ou di-substituídas com hidroxi, por ©templo com dietilamina, di~C2~ •-hidroxieti 1 )afflir.a 5 tris ti lamina, N 5 W-d ime ti 1-N- < 2~hid τοκ ia t i 1 >-· smina, tri~,{2"*hidroKi©til )a»ina ou N-meti 1 HD-g 1 ucamina, Os compostos da fórmula I que confcfm um grupo básico, por exeippla um grupo amino» podem formar sais de adição de ácido, por exemplo com ácidos inorgânicos, por exemplo ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou. ácido fosfórico, ou com ácidos carboxílicos, sul fónicos ou sulfoácides orgânicos, por exemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido suecínico» ácido maleico, ácido bidroximaleico, ácido mstilmalsico, ácida fumârica, ácido málicc, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido bensóico, ácido cinisico, ácido fumárico, ácido málico, ácida tartàrico, ácido cítrico, ácido henzóico, ácido cinSmico, ácido mandêlico, ácido salicilico, ácido 4-aminossalicí1ica» ácida 2-fenoxibenzóica, ácido 2-acetoxibenaóico3 ácido embónicc, ácido nicobínico ou ácido isonicotínico, e ainda com a~aminoácidosP s com ácido mstanossulfónico? ácido etanossulfónico, ácido 2-hidroxietanos-sulfónico3 ácido stano-152-dissulfónico, ácida benssncssu1 fónico, ácido 4-msiilbenzenossuifónico ou ácido naftalena-~2-sul fónico, ou com outros compostos orgânicos ácidos, tais coma ácido ascórbica. Os compostos da fórmula I que cont@m grupos ácidos e básicos também podem formar sais internos.

Se o propósito for o isolamento ou a purificação também se podem utilizar sais farmaceuticamente não adequados»

Os compostos de acordo com o presente invento exibem efeitos inibidores das protéases de restrição. Em particular, inibem a acção da protéase de restrição do HIV-1 e do HIV-2 em concsntraçóes taci baixas quanto as da ordem ds grandeza

nanomolarj, sendo consequentemerste adequados coíbo agentes contra doenças causadas por estes retrovírus ou por vírus aparentados, par exemplo contra a SIDA» A capacidade dos compostos da fórmula I de inibirem a actividade proteolítica da, par exemplo» pratéase da HIV-1 pode ser demonstrada» por exemplo, por um método semelhante ao descrito por J» Bansen e outros em The EMBO Journal 7, pp, 1785-í 79i» 1983» A inibição da seção da protéase da restrição ê medida sobre um substrato que é uma proteína de fusão, manifestada em E» coi i» da proteína precursora d® restrição e MB-2» 0 substrato e os seus produtos da remoção são separados mediante electroforése em gsl poliacriiamida s tornados visíveis mediante imunomarcação com o auxilio de anticorpos monoclonsis relativaments a MS-2»

Num testa ainda mais simples de efectuar s que permite fazer ®firmações quantitativas exactas utiliza-se como substrato para a protéase de restrição um icosapeptideo sintético que corresponde ao local de remoção da proteína precursora de restrição» Este substrato s os seus produtos de remoção podam ser medidos mediante cromatografia liquida sob alta pressão CCLAP). neste teste, os compostos de acordo com o presente invento exibem efeitos inibidores em concentrações de 10 '"Vmol.

Noutro teste pode mostrar-se que os compostos de acordo com o presente invento protegem as células que são normal mente infectadas pelo HIV contra uma tal iníecçac, ou pelo menos retardam essa infecçlo» Neste teste, a linha celular HT-2 das células T humanas (Science 229. p» 5ó3, 1985) que é extrema-mente sensível ao efeito citopatogénico do HIV, á incubada apenas com o HIV ou com o Hiv na presença de compostos de acordo com o presente invento, sendo a viabilidade das células examinada após alguns dias» Ds compostos de acordo com o presente invento

skibem efeitos inibidores da infscçSo em conceniraçSes ίθ “/mal.

Preferem-se os compostos da fórmula 1 em que Rj representa diCalquil infsriar/amxno» piper.idino5 morfolino5 tiomorfo-· lino, S?S'~dio;«otiomorf olinc ou bensiloKi* A., representa o radical bivalente ric aminoácido vslina, A,-* representa o radical bivalente Λ’. do aminoácidG tirosina e representa 0R„, em que representa •w* ’ jâ. alquila inferior»

Também sao preferidos os compostos ria fórmula I em que R., representa diCalquil inferiarlamino* piperidino, marfolino, tiomorfoIinos B,S-dicKotiomo-r f ol ino ou benslic^i, A. representa o radical bivalente da aminoácido asparagina oa valina, A0 representa o radical bivalente da aminoácido fenilalanina ou tirosina s R-j. representa OR^» em que R.., representa alquilo inferior» ou

•J NHRu» em que R0 representa hidrogénio ou alquilo inferior»

Sito muito espacialmente preferidos os compostos da fórmula I em que R^ representa morfelino, iiomorfolino, S,S-dio~ Koiiomorfolino qu bensilOKi, A* representa o radical bivalente do aminoácido valina» A^ representa o radical bivalente do aminoáci-do tirosina e representa DR^3 em que R0 representa alquilo inferior, especialmente metilo»

Também sSa muita especialmente preferidos os ccsmposfcos da fórmula I em que R» representa marfelino ou benHiloí-íi =, Ai representa 0 radical bivalente do aminoácido asparagina,; A 2 representa 0 radical bivalente do aminaácido tirosina e ^3 representa OR.^,, sm que R2 representa alquilo inferior,, especial-mente meti lo»

São igualmente muito especialmente preferidos os compostos da fórmula I em que R.j representa morfolino5 ft1 representa o radical bivalente do aminoácido asparagina ou valina, «»· representa o radical bivalente da aminoácido fenilalanina ou tirosina e reoresenta era que R, reprssenta hidroaènio ou

·/;* ' £' jL alquilo inferior;: especialmente hidrogénio ou n-propilo.

Os compostos da fórmula I de acordo com o presente invento e os sais daqueles entre estes compostos que possuem peio menos um grupo formador de sais podem ser obtidos de acordo com processos em si. conhecidos» por exemplos mediante a condensação de um fragmento de ura composto da fórmula I que possua um grupo carboxi terminal ou um derivado ácido reactivo desse fragmento coro um fragmento que seja complementar em relação ao composto da fórmula e possua um grupo amino livre ou cora ura seu derivado reactivo que possua um grupo amino activado de modo a formar uma ligação amida, enconirando-se cs grupos funcionais presentes nos reagentes, com excepção dos grupos que participam na reacção, facultativamente sota a forma protegida, se desejado, mediante a remoção dos grupos protectores presentes num composto que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento e/ou a conversão de um composto da fórmula I que possa ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento e que possua um grupo formador d© sais no seu sal ou a conversão de ura sal que possa ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento no composto livre ou num sal diferente e/ou a separação d® misturas isomêricas que possam ser facu1 ta ti vamen te obtidas e/cu a conversão de um composto ca fórmula I de acordo cora o presente invento num ii ii

composto da fórmula I do acordo com o prsssnts invento diferente» SSd fragmentos de um composto da fórmula 1 com um grupo carboxi terminal que podem ser condensados com um fragmenta complementar em relação ao composto da fórmula I de modo a formarem uma ligsçlo amidas por exemplo,, os compostos das fórmulas 1 a VI5

ο Rí Η ΟΗ Η

Sm que as radicais t?m os significadas anisriorments rsfáridos,; os ésteres activsdos ou os anidridos reactivos derivados destes compostos s também as amitías rsactivas cíclicas. Os derivados ácidos reactivos também podem ser formados in situ» São ésteres activados especialmente os ésteres nlo saturados no átomo de carbono de ligação do radical

esterificsnts, por exemplo do tipo éster vinil,1co». tais como ésteres vinílicDs <obtidoss per exsmpla mediante a transesieriíi~ cação de uíb correspondente éster com acetato de vinile - método do éster vinílieo activado), ésteres carbamoilvinílicos íobtidoss por exemplo, mediante o tratamento do correspondente ácido com um reagente isonazólio - método do i,2-cxazéIio ou de Woodward) g ou ésteres Í---(aIeoxi inferior) vinílicos (obtidos, por exemplo» mediante o tratamento do ácido correspondente com um (alcoxi infsriorJacsiilsno - método do etoxiacetilano) ? ou ésteres do tipo amidino? tais como ésteres amidino N»N'"dissubstituído (obtidos, por exemplo3 mediante a tratamento do correspondente ácido com uma carbodi-ímida N,M' --dissubstituida adequada, por exemplo íM,N' -diciclobexilc:arbodi--imida --· método da carbodi-imida) ou ésteres amidino NJ\i-díssubstituido íobtidos.,· por exemplo,, mediante o tratamento do ácido correspondente com uma cianamida NyW-dissubstituidâ - método da cianamida) , ésteres arí. 2 icos adequados, espec ia1men te ésteres fertíl ices substituídos com sabstituintes que atraem alectrSes (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento tío correspondente ácida com um fenol adequadamen-te substituído, por exemplo 4-nitrofsnol, 4-metilsulfonilfenol, 254,5---tricIorofenoI, 2,3,4,5,6-psntaclarofenol ou 4-feniIdiacafe-· nol, na presença de um agente de condensação, tal como N,N‘-dici-clobexilcarbodi-imida - método dos ésteres arí licos activados) 5 ésteres eianomeiílicos (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento do correspondente ácido com cloroacetonitrilo na presença de uma base - método dos esteres cianometílicos), tioésteres, especialmente feniΪtioêsteres nSo substituídos ou substituídos, por exemplo com nitro (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento do correspondente ácido com tiofenolss não substituídos ou substituídos,, por exemplo, com nitro, com o auxilio, entre outros, cio método do anidritío ou da csrbodi—ímida — método dos tioésteres), ou sspecialmente amino- ou asuidaéstsres (obtidos,, por exemplo, mediante a tratamento do correspondente ácido com um

composto N-hidroxismino ou Ix-hi droxismido csu seus derivados aclivados, por exemplo N.....bidroxisuccinxmidas íM-hidroxipiperioina, imída do ácido N—hidraxiftalimida, M—hidrpxi-5-narborneno~ ou --norbDrnano-SjS-dicarbcxílicDp l-hioroxibenzotrlazole du sais de benzoíriazol—i—iloxifosfónio ou sais de O-bsncotriazol —1—iluró— nio.3 ou sais de 3~hidroKi-394~di-hidra-~i ?2g3~bers2otria2in-4~orias por exemplo de acordo com o método da anidrido ou da carbodi··-· imída - método dos N-hidroKiéstsres activadas)»

Os anitíridos de ácidos podem ser simétricos ou, cie pref erfncia, anidridos mistos daqueles ácidos, por exsifiplo anidridos coffi ácidos inorgânicos, tais como haletas ácidos, especia1mente cloretos ácidos (obtidos, por exemplo, mediante p tratamento do correspondente ácido com cloreto de tionilo, psntaclorsto de fósforo ou cloreto de oxalilo ou, facu1tativamen-te, mediante o tratamento de um álcool ou smina com fosgénio método do cloreto ácido), acidas (obtidas, por exemplo, a partir de um éster ácido correspondente por intermédio da correspondente hidracida e o tratamento desta com ácido nitroso - método da sida), anidridos com semi-ésteres de ácido carbónico, por exemplo semi-ésteres alquílicos inferiores de ácido carbónico (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento do corrsspondsnte ácido com ésteres alquílicos inferiores de ácida clorofórmio», ou com uma 1-Calcoxi inferiorlcarbonil-2-(alcoxi inferior>~i s2-di“hidraqui-nolina, por exemplo :l-etoxicarbonil~2-etoKi-l ,2-di-hidroquinolina método dcs anidridos mistos do ácido O-alquiIcarbónico) anidridos com ácido fosfórico di~ha1ogenado, espec i a1men te com riiclorinado (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento do correspondente ácido com oxicloreto de fósforo — método do oxicloreto de fósforo), anidridos com outros derivados de ácido fosfórico (por exemplo os que pedem ser obtidos com fenil-N-fe-nilfosforamidocloridato) ou com derivados de ácido fosforoso, ou anidridos com ácidos orgânicos, tais como anidridos mistos

ácidos carboxilicos orgânicos (obtidos, por sMeropIo, mediante o tratamento do correspondente ácido com um haleto de ácido (alcano inferiar5carbo>;iIico ou haleto do ácido fanii (alcano inferior)-carboxilico substituído ou nlo substituído, por exemplo cloreto da ácido fsnilacéfcico, cloreto do ácida pivâlico ou cloreto do ácido triflucroacètico - método dos anidridos mistos de ácido carboxilico) ou com ácidos sulfónicos orgânicas (obtidas, par exemplo, mediante o tratamento de um sal,. tal cama um sal de metal alcalino, da correspondente ácido com um haieto do ácido sulfónica orgânico adequado, tal como um cloreto do ácido (alcano inferior)sulfónica ou clareta do ácida arilsulfónica? por exemplo cloreto do ácido metano- ou p—toluencss-ulfónica - método dos anidridos mistos do ácido sul fónico) e anidridos simétricos (obtidos, por exemplo, mediante a condensação do correspondente ácida na presença de uma carbodi-imida ou de 1-dietilaminopropina - método dos anidridos simétricas)» São amidas cíclicas adequadas especia 1 mente as amidas que contêm diazaciclos com cinco membros de carácter aromático, tais como amidas com imidazoles, por exemplo Imidacaj.es (obtidos, por exemplo, mediante o tratamento do correspondente ácido com Ν,Μ* —csrhaniIdi-imidazole - método da imidazale) f ou pirasol.es, por exemplo 3a5~d.iffieiiXpirszoIe (obtido, por exemplo, por intermédio da hidrasida ácida mediante o tratamento com acetilacetona - método da pirazolida) ·,

Os fragmentos com um grupa amino livre que são complementares em relaçSc ao composto da fórmula I são, por exemplo, compostos das fórmulas VII a XI,

ί 6 - Η2Ν —R2 (XI). em que os radicais t£m os significados atrás referidos, 0 grupe amino que está presente num fragmento complementar em relação a um composta da fórmula I e que participa na reacção encontra-se preferenciaimsnts sob a forma livre, especial mente se o grupo carboxi que com ele reage se encontra sob a sua forma reactiva, também pode, contudo, ser ele próprio deriva-tizadoj por exemplo mediante a reacçSo com um fcsfito5 tal como clorofosfito de distilo, clorofosfito de í ?2-fenileno, dicloro-fosfita de e-tilo, clorofosfito ds stileno ou pirofosfito de tetraetilo. U<n derivado de um destes fragmentos complementares com um grupo amino é5 por enemplo? também um haleto ou isocianato

da ácido carbâffiico, em que o grupo amino participante na reaccao é substituída com halocarbonilo, por sksíbpíc? c 1 Drocsrbcni 1 o, ou modifiçado para a forma d© um grupa isocianata.

Os grupos funcionais em compostos de partida, cuja reacçlo deve ser evitada, especialmente grupos carboxi, amino ou hidroxi, podem ser protegidos por grupos protectares adequados vulgarmente utilizados na síntese de compostos peptítíeos, mas também de cefalosporinas e penicilinas. Estes grupos protectores podem estar já presentes nos precursores e destinam-se a proteger os grupos funcionais em questão contra reacçoes secundárias indesejadas, tais como acilação, sterificaçSo, esterificarão, oxidação, solvólise, etc.* Os grupos protectores podem, contudo, estar também presentes nos produtos finais. Os compostos da fórmula I que contlrn grupos funcionais protegidos podem ter uma estabilidade metabólica superior aos correspondentes compostos que eont@® grupos funcionais livres. A protecçlo dos grupos funcionais por estes grupas protectores, os próprios grupos protectores e as reacçSes que permitem removi*-los são descritos, por exemplo, em obras de refertncia tais como em J, F« W. McOmie, "Protective Broups in Organic Chemistry" (Grupas Protectores em Química Orgânica), Plenum Press, Londres e Nova Iorque, 1973, em Th. W. Sreene, "Protective Groups in Organic Synthesisu (Grupos Protectores em Sintess Orgânica), Wiley, Nova Iorque, 1981, sm “The Peptides” Cus Peptidsos) <sd„ organizada por E. Sross e J, Heisnhofsr), Hcademic Press, Londres e Nova Iorque, 1981 a em “Msthoden der organischen Chemia", Houben-Neyl, 41 edição, vol. 15/I, Gsorg Thieme Verlag, Estugarda, 1974,

Um grupo carboxx é protegido, por exemplo, sob a forma de um grupo éster que seja selsctivamente removível sob condições

suaves. Um grupo carboxi protegido sob a forma ssterifiçada ê esterifiçado especialmente com um grupo alquilo inferior ramificado na posição 1 do grupo alquilo inferior ou substituído nas posiçSes 1 qu 2 do grupo alquilo inferior com substituintss adequados.

Um grupa carboxi protegida esterifiçada com um grupo alquilo inferior ramificado na posição 1 do grupo alquilo inferior é:; por exemplo,, t-Calcoxi inferior Icarbonilo,, por exemplo t-butoMicarbonilo, ou arilmetoxicarbonilo com um ou dois radicais arilo em que ariio á ísnilo não substituído ou fenilo mono-, di~ ou tri-sufcstifcu£tíQs por exemplo com alquilo inferior., por exemplo t-Calquilo inferior), tal como t-butilo5 alcoxi inferior,, por exemplo metoxi, hitiroxi, halogéneo, por exemplo cloro, e/ou nitro,, por exemplo bensiloxicarbonilo, benciloxicarbonilo substituído com os substituintes mencionados, por exemplo 4-nitrobenzi-loxicarbonilo ou 4-metDxibensiloxicarbonilo,, difenilrnstoxicarbo-nilo ou difenilmetoxicarbonilo substituído com os substituintes mencionados, por exemplo di-í 4-metDxi fanil Imetoxicarbonilo,,

Um grupo carboxi protegido esterifiçado com um grupo alquilo inferior que está substituído com um substituinte adequado na posição l ou 2 do grupo alquilo inferior é5 por exemplo,, l~\aicQxi inferior)(alcoxi inferior)carbon i 1 o, por exemplo metoximetoxicarbonilo? 1-metoxietoxicarbonilo ou 1-etoxietoxicar— bonilo, l-Calqui! inferior) tioíalcoxi inferior)carbonilo., por e x emp lo 1 -me tilt i ometa x i c a r bon i 1 o ou :l ™eti 11 i oe t o x i c s r bon ilo, por aroilmetoxicarbonilo, por exemplo tsnaciloxicarbcnilo, 2--halo(al-~ coxi inferior>csrbonilo5 por exemplo 2,2*2~iricloroeiaxicartooni-lo» 2—bramoetoxicarbanilo du 2— i odoetox icarbon i1o« e também 2~triíalqux1 infsrior)sili1< aIcoxi inferior)carbonilo, exemplo 2-trimetiIsililetoxi ca rbon i1o *

Um grupo carboxi também pode estar protegido sob a forma de um grupo sililoxicarbonilo orgânico» Um grupo sililoxi-carbonilo orgânico é, por exempla um grupo triíalquil inferior)-sililoxicarboniio, por exemplo trimetilsililoxicarbonilo.

Um grupa carboxi protegido é, de preferencia» t-<alcoxi inferiorIcarhonilo-, por exemplo t-butoxicarbonile, 4-niirobenci-loxicarboni. lo ou difenilmetoxicarfeoniio»

Um grupo amino pode estar protegido, por exemplo sob a forma da um acilamino, ariImetilamino» mercaptoamino eterifiçado ou sililamino»

Num correspondente grupo acilamino acilo e, por exemplo, o radical acilo de um ácido carboxilico orgânico com um número de átomos de carbono, por exemplo, não superior a 18, especialmentede um ácido <alcano inferior)carboxí1ico nSo substituído ou substituído, por exemplo, com halogéneo ou arilo, ou de ácido bensóico nSo substituído ou substituído, por exemplo, com halcgáneo, alcoxi inferior ou nitro, ou praferencialmente de um semi-éster de ácida carbónico, Estes grupos acilo são, por exemplo, alcanoílo inferior, tal como formilo, acetilo, propio-nilo ou pivaloílo, haloíalcanoílo inferior), por exemplo 2-ha-loacetilo, tal coma 2-cloro-, 2-bromc—, 2-iado-, 2,2,2-trifluoro-ou 2,2,2-t.ricloroacetilo, bencoílo não substituída ou substituído, por exemplo, com halogénea, alcoxi inferior ou nitro, por exemplo bancai, lo, 4-c 1 orohsnsai 1 o, 4-metaxi bancai lo ou 4-nitro-bencoílo ou (alcoxi inferior)carbcnilo ramificado na posição 1 do radical alquilo inferior ou adsquadamants substituído na posição 1 ou 2, por exemplo t-Calcoxi inferiorJcarbonilo, tal como t-butoxicarbonilo, ari1metoxicarbonilo com um ou dois radicais arilo que são fsnilo não substituído ou mona- ou polissubsti-cuido, por exemplo com alquilo inferior, por exemplo t-<alquilo

inferior), tal como t-butilo, alcoxi inferior* tal como metoxi, hidroxi, halogénec, tal como cloro,. e/ou com nitro* por exemplo benziloxicarbortilo, 4~nit.rotaensilox i c arbonilo, difenilroetoxicar-bonilo* di-~<4~metoxifanil Imetoxicarhonilo ou 9-fluoreni1metoxi~ carfaonilo, arailmetoxicarbonilo, por exemplo íermciloxicarbonilo, 2-haloíalcoxi inferiorlearbonilo, por exemplo 2-c1oroetoxicarbo-«ilo, 2,2s2“triclQrcsetoxicarbonilo, 2-taromoetOí-íicarbonilo ou 2~iodoetoKÍcarbonilo? 2-tri Calquil inferiorlsililoCalcoxi infe-riorjcarbonilo, por exemple 2---trimebilsil iletoxicarbonilo, ou 2-triarilsilil(alcoxi inferiorJcarhoniio, por exemplo 2-trife™ nilsililetoxicarhonilo»

Um grupo arilinstilamino s, por exemplo,, mono-, di- ou especial mente trifenilmetilamino, por s?xemplo benzil--·* difenilme--· til- ou tritilamino. Num grupo Cmarcapto sterifiçadolamino o grupo mercapto sterificado é espscialments ariltio substituído* por exemplo um grupo triíalquil inferior)si1ilamino * por exemplo trimstilsililamino» J ) São grupos protectores de amino preteridos os radicais acilo de semi-és teres de ácido carbónico, especialmente fc---butoxi~ carboniio, benziloxicarbonilo não substituído ou substituído, por e x emp 1 o 4-n i t r o ben z i 1 o x i c a r bon ilo, d i f en i1metox icarbon i1o, 2-haloCalCQxi infariorlcarhcnilo, por exemplo 2,:2,2~triclorostQ-~ xicarbonilo, e também tritilo s formilo»

Um grupo hidroxi pode ser protegido, por exemplo, com um grupo alcanoílo inferior substituído com halogénso, por exemplo cloro, por exemplo 2,2-dic1oroacetilo, ou especialmente com um radical acilo de um semi-éster de ácido carbónico já referido a propósito dos grupos amino protegidos* Um grupo protector ds hidroxi preferido é, por exemplo, 2~c1oroetoxicarbo— nilo, 2,2,2~tric1oroetoxicarboni1o, 4“nitrobenziloxicarbonilo ou

difenilmetoxicarbonilo* Ura grupo hidroxi também pode ser protegido com trKsIquil inferior)sililo, por exemplo trimetilsililo ou, de preferencia, i-hutildimsiíIsilila, um grupo alquilo facilmente removível, tal como t—íslquilo inferior) , por exemplo t-outilo, um radical Hidrocarbonstc tia-alifático ou —cicloaiifá— tico, por exemple l-Calcoxi inferior)(alquilo inferior) ou i-Calquil inferior) fcioíalquilc inferior), por exemplo roeto>íií»etilo, l-metoxietiloj, 1-etoxistilo, meti 1 tiometilo, l-meiiltioetilo ou t-etiltioetilo, ou 2-axa·- cju 2-tia-cicloalquilo com 5 a 7 átomos no anel, por exemplo 2-tetrahidrofurilo ou 2-tetrahidropi-ranllo, ou um correspondente análogo tia, ou ainda com 1-fenil— (alquilo inferior), por exemplo bensilo, difenilmetilo ou tri-tila, podendo as radicais fenilo estar substituídos, por exemplo com halogéneo, por exemple cloro, aleoxi inferior, por exemplo mstoxi., e/ou nitra, A condensação para a produção da ligação amida pode ser efectuada de modo em si conhecido, por exemplo tal como vera descrito em obras de referencia tais como "Methoden der organischsn Chensie'5 (Métodos da Química Orgânica), Houben Weyl, 4ê edição, vol» 15/1, Beorg Thieme Verlag, Estugarda, 1974, “The Peptides“ COs Peptideas), ed» arg, por E„ Gross e Js Meienhofer), vol, 1 e 2, ficadsfflic Press, Londres e Nova Iorque, 1979/1980, ou SI» Bodanscky, “Principies of Peptide Synthesis”, Springer verlag, Berlim, 1984, A condensação d® um ácido carboxílico livre cara a correspondente amina pode ser efectuada na presença de um dos agentes de condensação usuais» São agentes de condensação usuais, por exemplo, as carbodilmidas, por exemplo dietil--·, dipropil- ou N-etil-M' - (3—dimetilaminopropil Jcarbodiimida ou especialmente dicilohexilcarbodiimiria, e também compostos de carhonxlo adequados, par exemplo csrboniIdi-imidasole, compostos

da i ,2-axazéIio, por exemplo 3' -sul fanata de 2-~etii-5-"fenil-í , 2™ --oxszólio s percloraio da 2-t-butil-5"-mstilisoxazóIio, cu um composto acilamino adaquado3 par exempla 2-eioxií-eb3xicarbcnil--1 ,2-di-hidraqyinolina, ou derivadas da ácida fosfórico activado, oor exempla acida de tíifeniIfasfcrila, cianeto de dietiifosfori-lo5 fenil-M-fenilfosforamidocloridato, cloreto do ácido bis<2-oxo--3-oxazol.idinil)fosfinicG ou hexafluorofosfato de l-bsnzotriazo-1 i loKÍ--tris (dimstilamino) f osf énio.

Se desejado, adic:iana~ss uma base orgânica, por exempla tri í alqu.il inferior )amina contendo radicais volumosos, par exemplo sfcildi-i.sopropi.lamina, ou uma base hsterocíclica, por exempla piridina, 4-dimetilami.nopiridina ou, de preferência, N-metiImortalina« A condensaçlo das ésteres activados, snidridos reacti-vqs ou amidas cíclicas rsactivas com as correspondentes amimas é geralmente ©fectuada na presença de uma base orgânica, por exempla triíalquil infsrior)aminas, par exemplo trietilamina ou fcributilasnina, ou uma das bases orgânicas atrás mencionadas. Se desejado, também se pode usar um agente de condensaçlo tal coma a descrito em relaçUo aos ácidos carboxilicos livres, A condensaçlo das anidridos ácidos com sminas poda ser eíectuada, por exemplo, na presença de carbonatos inorgSnicos, por exempla carbonatas ou hidrogenocarbonatos de metal alcalina, tais como carbonato de sódio ou de potássio ou hid rogenoc a r bana to ds sódio ou de potássio (em geral conjunfcamente com um sulfato),

Ds cloreto ds ácido carboxílico, por exemplo os derivadas da ácida c1oracarfoánico derivados do ácido da fórmula II, sao condensados com as correspondentes aminas de preferência na

presença de uma smina orgânica, por exempla as atrás mencionadas triCalquil inferior)afflinas ou bases heterocíc i icas« A condensação é preferencia Ingente efsciuatía num solvente ou numa mistura ds solventes inertes? polares? apróticos? preferenc i a1men te anidros? por exemplo numa amida de ácido carboxílico, por exemplo formamida ou dimeti1formamida , um hidrocarboneto hsloçenado? por exemplo cloreto ds meti leno? tetracloreto de carbono ou clorobenzeno, uma cetona, por exemplo acetona? um éter cíclico? por exemplo tetrahidrofurano? um éster? por exemplo acetato de etilo? ou um nitri lo? por exemplo acetoni-trilo? ou em misturas destes compostos, facultativaroente a temperaturas reduzidas ou elevadas? por exemplo a temperaturas compreendidas entre -40°C ε 4·ίθΘ°0? de preferência entre aproxi-madamente -10°C e aproximadamente +5ô°C, e tacultativaments sob uma atmosfera de gás inerte? por exemplo uma atmosfera de azoto»

Os derivadas ácidas resctivos também pedem ser obtidos in situ. Assim? por exemplo, os ésteres amidino N?N'-dissubsti-buídos podem ser formados in situ mediante a reacçâo da mistura do fragmento com um grupo carboxi livre e do fragmenta complementar com um grupo amino na presença de uma carbodi-imida dissubs-tituída adequada? por exemplo diciclohexilcarbodi-imida. Os ésteres amino ou amido destes ácidos também podem ser formados na presença da componente amino a ser acilatía, mediante a reacçSo da mistura do correspondente composto de partida ácido s amino na presença ds carbodi-imida dissubstituída? por exemplo diciclohe— xiicarbodi-imida? e uma M-hidroxilamina ou M-hidroxiamida* por exemplo N—hidroxibenzotriazole, H-hidroxisuccinimida ou imida do ácido M-hidroxinorbornano-2?3-dicarboxí1ico? facultativaments na presença de uma base adequada? por exemplo 4—diroetilaminopiridi-na? rí-msti 1 morfo 1 ina ou etildi-isopropilamina.

A condensação eis um ácida carbaxílico com a earrsspon-denis fragmento que é complementar em relação ao composto da fórmula I s tem um grupa smina livre também pode ser efectuada ds um modo em si conhecido usando enzimas* por exemplo tal como descrita por H = ---0== Jakubke a outras sm finqswandte Chemie 97, q = 795 1985=· São enzimas adequadas* por exemplo, a termalisina, a carboxipsptidass Y, a papaína, a quimotripsina* a tripsina ou a pepsina* A reacção ê efectuada preferenciaXmente em água ou em misturas de água com solventes orgânicos, por exemplo com alca-néis inferiores* tais como etanol, dimetllformamida, sulíóxido de dimatilo, éteres, tais como tetrahidrofursno? dioxano ou 1*2—di-metoxietano* acetona, acetonitrilo ou polialcoéis, por exemplo stiienoglicol ou di-, tri- ou polietilenoqlical, mas também pode ser efectuada com solventes orgânicos não miscíveis, por exemplo cloreto de metileno ou acetato de etila, a um pH compreendido entre 5 e B, de preíerfncia aproximado do ponto neutro, a temperaturas compreendidas entre 0OC s 50OC» Os solventes e as condições de reacçlo slo escolhidas preferencialmente de modo a que o composto desejado se precipite ou seja extraído para a fase orgânica nlo miscível © assim retirado ao estado de equilíbrio da reacçlo* Também é possível efectuar a condensação com encimas, tais como as atrás mencionadas, iraobilIsadas sobre um suporte adequado, nos solventes orgânicos mencionados em mistura com uma pequena quantidade de água, 0 processo também pode ser efectuada ds forma automatizada em si conhecida, por exemplo de acordo com s. técnica conhecida coma síntese em fase sólida que foi concebida por R» tlerrifield e se encontra descrita, por exemplo, em fingewandte kíliM 2Z? PP- 801-812* 1985* Natur^íssanschaf fcen 71, pp« 252-258* 1984 ou no artigo de R. A== Houghton em Proc, Matl, Acarf« Sci,,^ 82* pp. 5131-5135, 1985 =

Os fragmentes do composto da fórmula I slo condensadas uns com os outros ds acordo com o referido processo e podem ser usados sob a forma de racematos ou sob a forma ds misturas diastereoméricas. As misturas diastsrsoméricas que ccntlíii compostos da fórmula I sSo formados e de ser submetidos á separação de diastereèrneros de acordo com o tratamento subsequente descrito adiante»

Num'comdosto da fórmula 1 que pode ser obtido pelo processa cie acordo com o presente inventa, um grupo carboxi COOR^ presente sob a forma livre ou sob a forma raactiva pode ser esterificado e um grupo carboxi esterificado COOR^ pode ser convertido no grupo carboxi livre»

Para efsetuar a ssteriíicaçla do grupo carboxi num composto da fórmula I, pode usar-se o ácido ou pode converter-se o ácido livre num dos derivados reactivos atrás mencionados e fazer-ss reagir este com um álcool, ou pode fsssr-ss reagir o ácido livre ou um seu sal reactivo, por exemplo o sal ds césio, com um derivado reactivo de um álcool» For exemplo, pode fazer--se reagir o sal ds césio ds um ácido carboxilico com o haIsto ou éster de ácido sulfónico que corresponde ao álcool» A esterifi-csçSo do grupo carboxi também pode ser sfectuada com outros agentes de alquilaçao usuais, por exer?=plo com diazomstano, sais de rlaeriAjein ou 3-ariltriazsnos substituídos na posição 1„

Um dos métodos descritos adiante e referentes 4 remoção dos grupos protestares de carboxi ou, se desejado, a hidrólise alcalina sob as condiçSes de reacçSo mencionada em "urçanikum”, 17ê edxçao» VES Deutscher verlag der Wissenschaften, Berlim (Leste), 1988, podem ser usados para converter um grupo carboxi estsrxTxeaso num composto da fórmula I num grupo carboxi livre»

Num composta da fórmula is um grupa csrbo?d estsrificado pode ser convertido num grupo carfooxamida da fórmula -CO-NHR,., mediante aminólise com amónia ou uma <alquil inferior)amina. A aminólise pode ser efectuada sob as condiçSes de reacçlo mencionadas para estas reacções em "Organikum", 15ã edição, VEB Deutscher Verlag dar Wissenscha f ten * Berlim (Leste)* 1976* ou preferencialmente mediante a reacção num solvente inerte c?u especialmente sem a adição de um solvente* sob pressão normal ou elevada* por exemplo num tubo de Csrius, a uma temperatura compreendida entre 0°C e iô©°C9 de preferência entre 2©°C e S0°C,:

Num composto tía fórmula I que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento* o grupo tio de tiomor-folino R, pode ser oxidada de modo a obter-se um grupa sulfonilo» A oxidação para se obter o grupo sulfonilo pode ser efectuada com a maior parte dos agentes oxidantes usuais. é preferível usar aqueles agentes de oxidação que oxidam o grupo tio selectivamente na presença de outras grupas funcionais* por exemplo a função amida e o grupo hidroxi * do composto da fórmula In por exemplo ácidos peroxicarboxilicos aromáticos ou aiifáti-cos, por exemplo ácido perbenzóico, ácido monoperfbélico, ácido m-cloroperhenséico* ácido peracético* ácido perfórmico ou ácido trifluoroperacático» A oxidação com ácidos peroxicarboxilicos é realizada nas solventes usuais adequados a este fim, por exemplo nidrocarbonafcos clorinadcs, por exempla cloreto de metileno ou clorofórmio, éter dietillco* acetato de etilo* etc., a temperaturas compreendidas entre -78°C a a temperatura ambiente* por exemplo entre ~2&°C e ·*-ϊ0°Ο* de preferfncia a aproximadamente Ô*C. 0 ácido perox icarbox í 1 ico também pode ser formado in.___si tu. por exemplo com peróxido de hidrogénio sa ácido acético ou ácido társacoj cada um dos quais contêm facultativamente anidrido acético* por exemplo com peróxido de hidrogénio a 30% ou a 9©% em

(ácido acético) / < anidrido acético):. Outros compostos peroxo sao também adequados, por exempla peroxamanassulfata de potássio em misturas da alcanol inferior s água, por exemplo metanol e água ou etanol e água, ou em ácido acético aquoso, a temperaturas compreendidas entre ™7@°C e -f-30°C,. por exemplo entre -20°C e a temperatura ambiente, e também metaoeriodato em metanol ou em misturas de metanol s água a temperaturas compreendidas entre 8*0 e 50*0» por exemplo a uma temperatura aproximada tía ambiente»

Se desejado, o grupo sulfonilo de S,S-diaxotiomorfQlino R» num composto da fórmula I que poda ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento pode ser reduzido para um grupo tio, por exemplo com o auxilio de hidrato de fli-isobuii1sménio em éter dietilico ou am teirahidrofurano»

Num composto da fórmula I que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento sm que um ou mais grupos funcionais se encontram protegidos, estes grupos, por exemplo grupos carboxi, amino ou hidroxi, podem ser libertados da um modo em si conhecido, facultativamente em etapas ou simui ta-neamente, mediante solvélise, especialmente hidrólise, íacultati-vamente hidrólise snzimática, alcoólise ou acidôlise, ou mediante redução, especialmente hidrogenóliss, ou reacçlo química» A remoção dos grupos protectores encontra-se descrita nas obras de referencia atrás mencionadas na secção "grupos protectores"»

Por exemplo, carboxi. protegido, por exemplo t-íalcoxi inferior >carboni1d. Calcoxi inferior>carbonilo substitu .ido na posição 2 com um grupo siliio orgânico ou na posição I com alcoxi inferior ou íalquil inferior)tio» ou difenilmetoxicarbonilo não substituído ou substituído, pode ser convertido no carboxi livre mediante o tratamento com um ácido adequado, per exemplo ácido térmico ou ácido trifluoroacético, faeultativamente com adição de

um composto nucleofílico, por exemplo ferml ou anisole, Benzi Io-Kicarbcnilo náo substituído ou substituído pode ser libertado, por exemplo, mediante hidrogenólise, isto é, mediante o tratamento com hidrogénio na presença de um catalisador de hidrogenação metálico, tal coma um catalisador paládio. Benziloxicsrbonilo adequadamente substituído., tal como 4~nitrobenziloKÍcarbonilo? também pode ser convertido no carboxi livre ínetíiante redução, por exemplo mediante o tratamento com um ditioneto de metal alcalino, por exemplo ditioneto de sódio, ou com um metal redutor, por exemplo zinco, ou um sal metálico redutor, tal como sal de crómio (II), por exemplo cloreto de crómio (ΙΪ), em geral na presença de um darfor de hidrogénio que, em conjunto com d metal, seja capaz de produzir hidrogénio nascente, tal como um ácido, especialmente um ácido carboxílico, tal como ácido Caicano infsrior)carboxÍlico nSo substituído ou substituído, por exemplo com hidroxi, por exemplo ácido acético, ácido fórmico, ácido qlicólico, ácido difenilglicólico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido 4-cloro-mandélico ou ácido tartârico, ou um álcool ou tiol, sendo de prefertncia adicionada água* Também é possível converter um S-haloCalcoxi infsrior)carboni 1 o <facultativamente após conversão tíe um grupo 2-bromoíalcoxi inferior/carbonilo no correspondente grupo Ξ-iodoCaIcoxi inferior)carbonilo) ou aroilmetoxicarbonilo no carboxi livre mediante d tratamento com um metal redutor ou um sal de metal redutor, tal como atrás se descreveu, firoilmetoxi--carbonilo também pode ser removido mediante o tratamento com um reagente nucleofílico, preferencialmente formador de sais, tal como tiofenolato de sódio ou iodeto de sódio. 2-tri(Alquil interior)si1iloíaIcoxi inferiorlcarbonilo também pode ser convertido no carboxi livre mediante o tratamento com um sal do acido tluorídrico que liberte o aniSo fluoreto, tal como um fluoreto de metal alcalino, por exemplo fluoreto de sódio ou de potássio, f acul tativamente na presença de um poliáter jnacrocíclico (“éter Crown”), ou comum fluoreto de uma base quaternária orgânica, tal

como fluoreto de tstraCalquil inferior)amónia ou fluoreto de tri Calquil inferiorlarilCalquil inferior)amónio, por exemplo fluoreto de teirastilamónio cm fluoreto de tetrabutilaménio, na presença de um solvente aprético polar, tal como euIfóxido de tíimstiio ou N,N~dimetilacetamida. Carhoxi esterificada com um grupa sililo orgânico, tal como triCalqu.il infariorlsiiila,, por exemplo trimetiisililo, pode ser libertado do modo usual mediante solvólise, por exemplo mediante o tratamento com água, um álcool ou um ácido, ou ainda um fluoreto, tal como atrás se descreveu., CarboKi esterificada pode ser ainda removida ensimaticamente, por exemplo arginina ou Usina ssterifiçadas, tal como éster metxiico cie lisina, pode ser removido mediante tripsina»

Um grupo amino protegido é libertado da um modo em si conhecido e por diversos métodos, consoante a natureza dos grupos proiectores, mas preferencia1mente mediante solvólise ou redução, 2-HaloCalcoxi inferior)carbonilamino Cfacultativamente após conversão de um grupo 2-bromoCalcoxi inferiorlcarbonilamino num grupo 2-íouoCaicoxi inferior>carbonilamina), aroi1metoxicarboni1-amino ou 4-nitrobenzi1oxicarbonilamino podem ser removidos, por exemplo, mediante o tratamento com um agente redutor adequado, tal como zinco na presença ds um ácido carboxílico adequado, tal como ácido acético aquoso,, Arai Imetaxicar bani lamina também pode ser removido mediante o tratamento com um reagente nucleofilico pref erenc ia1men te formador ds sais, tal como tiofenolato de sódio, e 4-nitrabenziloxicarbonilamino ainda mediante o tratamento com um ditionsio da metal alcalino, por exemplo ditioneto de sódio* Difenilmetoxicarbonilamino nâa substituído ou substituído , t-Calcoxi inferiar)carbonilamina ou 2~triCalquil inferiorlsi-lillalcoxi inferior>carbonilamino potíe ser libertado mediante o tratamento coai um ácida adequado, por exemplo ácido fóniíico ou por exemplo. mediante ácido trifluoroacético, benziloxicarbonilamino não substituído ou substituído pode ser libertado,

hidrogenóliss, isto è, mediante o tratamento com hidrogénio na presença de um catalisador de hidragertaçSo adequado, tal como um catalisador paládio, triarilmstilamino ou formilamino não substituídos ou substituídos podsiií ser libertados, por exemplo, mediante o tratamento com U0§ ácido, tal como am ácido mineral, por exemplo ácido clorídrico, ou um ácido orgânico, por exemplo ácido térmico, ácido acético ou ácido trifluoroacético5 faoultativamen-te na presença de água, e um grupo arnino protegido com um grupo sililo orgânico pode ser libertado, por exempla, mediante hidrólise ou alcoólise. Um grupo amino protegido com 2-haloacetilo, por exemplo 2-c1oroaceti1o, pode ser libertado mediante o tratamento com tioureía na presença de uma base, ou com um sal tiola-to, tal como um tiolato de metal alcalino de tioureia, e mediante a subsequente solvólise, tal como alcoólise ou hidrólise, do produto de substituição resultante» Um grupo amino protegido com 2-triialqui1 inferiorIsililísicoxi inferiorícarbonilo também pode ser convertido no grupo amino livre mediante o tratamento com um sal de ácido fluoridrico que õ§ origem a aniSes fluoreto, tal como ss indicou atrás em relação à libertação tíe um correspondente grupo carboKi protegido» Sililo, tal como trimetilsilílo, ligada dirpctamente a um hetsraáiomo, tal como asoto, também pode ser removido com o auxilio de iões flucreto.

Um grupo hidroxi protegido com um grupo acilo adequado, um grupo sililo orgânico ou com t-fenil{alquilo inferior) não substituído ou substituído é 1ibsrtada de modo análogo ao correspondente grupo amino protegido» Um grupo hidroxi protegido com 2,2—dxcíoroacatilo é libertado, por exemplo, mediante hidrólise básica, enquanto que um grupo hidroxi protegido com t-alquilo inferior ou com um radical hidrocarboneto 2-oxa- ou 2-tia-alifá-tico ou -cicloalifético ê libertado mediante acidólise, por exemplo mediante o tratamento com um ácida mineral ou um ácido carboxilíco forte, por exemplo ácido trifluoroacético» Um grupo

sililo, por exempla um grupe trimstilsiliic? ou um grupa t-butil-dimetilsililo, é igual mente removido mediante acidóliss, por exemplo por um ácido mineral , de prefer®ncia ácido fluoridrico, ou um ácido carboxilico forte» 2~Haloíalcoxi inferior)carbonilo é removido com o auxilio dos agentes redutores atrás mencionados, por exemplo metais redutores, tais como zinco» sais de metais redutores, tais como sais de crómio (II), ou de compostos de enxofre, por exemplo ditioneto de sódio ou, preferencialmenie, sulfureto de sódio e dissu.lfureto de carbono»

Os sais da compostos da fórmula 1 que conttm grupos formadores de sais podem ser preparados de um modo em si conhecido, Por exemplo» os sais de compostos da fórmula I que conttm grupos ácidos podem ser obtidos, por exemplo» mediante o tratamento com compostos metálicos» tais como sais de metal alcalino de ácidos orgânicos adequados, por exemplo o sal da sódio do ácido 2~sti1hexanóico» ou com sais de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso inorgânicos, por exemplo hidrogenocarbonato de sódio, ou com amónia ou uma amina orgânica adequada» sendo preferencialmente utilizadas quantidades estequiométricas ou apenas um pequeno excesso do agente formador de sais» Os sais de adiçSo de ácido dos compostos da fórmula I slo obtidos do modo usual, por exemplo mediante o tratamento com um ácido cu um reagente de permuta aniénica adequado» Os sais internos dos compostos da fórmula I que cont§'m, por exemplo, um grupo carboxi íivre s um grupo amino livre podem ser obtidos, por exemplo, mediante a neutralização de sais» tais como sais de adiçlo de ácido, até atingirem o ponto isoeléctrico, por exemplo com o auxilio de bases fracas, ou mediante o tratamento com agentes de permuta iónica»

Os sais podem ser convertidos do modo usual nos compostos livress os sais metálicos e de amónio, por exemplo, mediante

o tratamento com ácidos adequados s os sais de adição de ácido, por exemplo, medi ante o tratamento com um agente básico adequado,,

As misturas estereoméricss, especialmente as misturas diastereoméricas, podem ser separadas nos isómeros individuais de um modo em si conhecido, por exemplo mediante cristalização fraccionada, crcmatografia, etc».

Os racematos podem ser separados de um modo em si conhecido, por exempla após conversão dos antípodas ópticos nos d iasiereómeros, por exemplo mediante reacçlo com ácidos ou bases opiicamenie activos» 0 presente invente diz também respeito àquelas formas da processo em que um composta que pode ser obtido como interme-diário sm qualquer uma das etapas dc; processo é utilizado como material de partida e se efectuam os passos remanescentes ou em que o processo ê interrompido em qualquer etapa ou sm que um composto que pode ser obtido cie acordo com o processo do presente invento ê obtido sob as condiçoss do processo e ulteriermente processado in situ.

CoíEPOslc ões._fa r «D.aç fu 11 c as, s

Os compostos de acordo com α presente invento farmaco— logicamente aceitáveis, especialments os compostos da fórmula I obtidos pelos procedimentos atrás descritos, podem ser usadas, por exemplo, para a preparação de composições farmacêuticas que contêm uma quantidade eficaz da ingrediente activcj em conjunto ou ©m mistura com uma quantidade significativa de suportes farmaceu-cicamente aceitáveis inorgânicos ou orgânicos, sólidos ou líquidos»

As composições farmacêuticas de acordo com o presente invento destinam-se a administração peia via entérica, tal como nasal 5 rectal ou oral:, ou à administração pela via parentérica, tal como intramuscular ou intravenosa, a seres vivos de sangue quente (humanos e animais) s contam uma dose eficsc do ingrediente farmacoiogieaments activo isoiadamente ou em conjunto com uma quantidade significativa da um suporte farmaceuticamente aceitável . A dose do ingrediente activo dependa; da espécie da animal de sangue quente, do seu peso corporal, da sua idade e do seu estado de saúde., da doença a ssr tratada 0 ainda da via de administração,. 0 presente invento dis igualments respeito a um método para o tratamento de doenças causadas por retrovirus,, por exemplo o SIDA,, csractsrisado por se administrar uma quantidade do composto da fórmula 1 de acordo com d presente inventa qus seja terapeuiicamente eficaz contra essas doenças» As doses a serem administradas a animais de sangue quente, especialmente a animais de sangue quente qus sofram d® doenças causadas por retrovirus, por exemplo seres humanos com um peso corporal aproximada de 7Φ kg, estio compreendidas entre cerca de 3 mg e cerca de 3 g, de 1 preferência entre cerca de 1Θ mg ® cerca de 1,5 g, por exemplo entre cerca de 3Φ® mg e cerca de ίΦΦΦ mg, por pessoa por dia, divididas prefersncialmsnte por 1 a 3 doses que podem, por exemplo,: ser iguais entre si „ As crianças é geral mente administrada metade da dose destinada a adultos»

As novas composições farmacêuticas contêm percentagens tío ingrediente activo compreendidas entre aproximadamente 1% e aproximadamsnte 95%, de preferência entre aproximadamente 20% e aproximadamente 9C>%„ As composições farmacêuticas de acordo com α presente invento podem, por exemplo, tomar a forma de doses

unitárias, tais como ampolas, frascos, supositórlos, dragsias, comprimidos ou cápsulas»

As composições farmacêuticas d© acordo com o presente invento são preparadas d© um modo em si conhecido, por exempla mediante procedimentos de dissolução, Iioíilizaçfo, misturaçSo, granulação ou confecção convencionais»

Usam-se ds preferência soluções do ingrediente activo, e também suspensões, especialmsnte soluções ou suspensões aquosas isotónicas, sendo possível, por exemplo no caso de composições liofilizatías que contêm o ingrediente activo isoladamente ou em conjunto com um suporte, por exemplo manitol, prepará-las antes da utilização» As composições farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou conter excipisntes, por exemplo conservantes, estabilizam iss, agentes molhantes e/ou emulsionantes, solubilicantes, sais para a regulação da pressão osmótica e/ou tampões, e são preparadas ds modo em si conhecido, por exemplo mediante procedimentos de dissolução ou liofilisação convencionais» As soluções ou suspensões mencionadas podem conter substâncias que aumentam a viscosidade, tais como carboximetilcelulose ds sódio, carboxime-tilcelulose, dextranc, polivinilpirrolidona ou gelatina.

As suspensões em óleo contêm como componente oleosa os óleos vegetais sintéticos ou semi-sintéticos usuais para efeitos de injecção. Podem mencionar-ss como exemplos especialmente os ésteres de ácido gordo líquidos que contêm como componente ácida um ácido gordo de cadeia longa com 8 a 22, especiaImante 12 a 22, átomos ds carbono, tais como, por exemplo, ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mlristico, ácido pentadscilico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquidico, ácido bshénicD ou os correspondentes ácidos insaturados, tais como» por exemplo ácido oleico, ácido elaídico, ácido enkico, ácido

brsssídico ou ácido linoleico» A componente alcoólica destes ésteres de ácido gordo contém pelo menos 6 átomos de carbono e é um álcool mono- ou poli-hidrico, par exemplo mor?o-, di- ou tri-hídrico» por exemplo metanol, etanol, propanol, butanol ou pentanol ou os seus isómeros, mas sspecialsnente clicol ou glice--roí = Podem, consaqusntsnisnts s mencionar—ss como exemplos de ésteres de ácidos gordoss oleato de atilo, miristato de isopropi-lo5 paImitato de isopropilo? “Labrafil M 2735” (triglicerideo de ácidos gordos saturados com S a 12 átomos de carbono na cadeia produzido por Battefossé, Paris), “Hyglycol 812" \trig1icerideo de ácidos gordos saturados com 8 a 1.2 átomos de carbono na cadeia produzido por Chemische Werke Witten/Ruhr5 Alemanha), mas espe-cíalmente óleos vegetais, tais como óleo ds semente tíe algodão, óleo de amêndoa,, aceite, óleo de rícino, óleo de sésamo, óleo de soja e, especialmente, óleo de amendoim» A preparação das composições para injseção é efectuada do modo usual sob condições de esterilidade, tal como a sua introdução nas ampolas ou frascos e a selagem dos recipientes»

As composições íarmac®yticas destinadas â administração por via oral podem ser obtidas mediante a combinação do ingrediente activo com suportes sólidos, a granulação facultativa da mistura resultante s, se necessário ou desejado s após a adição dos excipientes adequados, o processamento da mistura ou granulado ds modo a obter-se comprimidos ou núcleos de drapeias» Também podem ser incorporadas em suportes plásticos que libertam os ingredientes activos ou que permitem a sua difusão de um modo controlado» São suportes adequados especialments os agentes de sncmssnio. tais como açúcares, por exemplo lactose, sacarose, raanitol ou sorbitol, preparações celulósicas s/ou fosfates de

cálcio, par exempla fosfata tricálcica ou hidragenofosfato d<5 cálcio, bem como agentes de ligação, tais como pastas de amido, por exempla amido de milho, de triga, de arroz ou de batata, gelatina, tragacanfco, metilcelulose, hidroKipropilmeiilcelulose, carbaximefcilcelulase de sódio e/au polivinilpirrQlidona, s5 se desejado, agentes de desintegração, tais como os amidos atrás mencionados, s ainda amido carboximetilico, polivíniJ.pirralidona de ligação cruzada, agar, ácido algínico ou um seu sal, tal como aJ.ginato de sódio» SSo excipientss sm geral as agentes reguladores do fluxo e os lubrificantes, por exemplo sílica, talco, ácido esteárico ou seus sais, tais como estearata de magnésio ou sstearatQ de cálcio, e/ou glicol tíe polietileno* Os núcleos das drageias são providos de revestimentos adequados que podem ser resistentes aos sucos gástricos, podendo usar-se, entre outras, soluçoes de concentrados de acúcar que podem conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, glicol de polietileno s/ou dióKido de fciilínio, soluçSes de laca em solventes orgânicos ou misturas de solventes adequados ou, no caso tíos revestimentos resistentes aos sucos gástricos, soluçSss ds preparações celulósicas adequadas, tais como ftalato de stileelulose ou ftalato de hidroxipro-pilmetilcsluloss» Podem adicionar~ss corantes ou pigmentos aos comprimidos ou revestimentos das drageias, por exemplo com o propósito de identificar doses de ingrediente actiνα diferentes»

Cmpostos_.de partida s

Os compostos da partida utilizados s as condignas da rsacçSo escolhidas são tais que permitam obter preferencia!mente aqueles compostos mencionadas como sendo preferidos» us compostos de partida utilizáveis no processo de acordo com o presente invento são conhecidos ou podem ser preparados por processos em si conhecidos, por exemplo a partir dos

aminoácidos relevantes e mediante condensação efectuada de um modo análogo ao processo* descrito precedentemente« Por exemplo, um composto de uma das fórmulas IV, VP VIs VII ou VIII pode ser preparado rie um modo análogo ao processo descrito nos pedidos de patente europeia n2 143 746 (publicado em 15 de Junho de 1985) ou nQ 258 183 (publicado sm 2 de Março de 1988)n

Os Exemplos que se seguem destinam-se a ilustrar o presente invento, nao pretendendo de modo algum limitar o seu '.'Π:C,: fts temperaturas slo indicadas em graus Cslsius,, Os valores E.f sao determinados em placas; de gel de silica para cromatoqcafia em camada fina nos seguintes sistemas solventess A (acetato de atilo)/n-hexano 1 s 1 B (acetato de etilo)/n-hexano 1 s2 C (acetato da atilo)/n-hsxano Ís4 D (acetato de etilo)/n-hexano ísé E (acetato da atilo)/n-hexano is9 F (cloreto de metilsno)/metanol Í9si 6 íc1areto de metileno)/metanol 9sl H (cloreto de metilsno)/metanol 4 s 1 I (cloreto de metileno)/metanol/água 3ΘΘ zíΘ s1 J (cloreto de metilsno)/éter dietílico 4 s 1 K (cloreto de metileno)/metanol/água 14 2ÒÍ! *. L clorofórmio/mstanoi/água/(ácido acético glacial) Í7@s26s3

Por exemplo* a abreviatura "R^íA)" designa o valor R, determinado no sistema A» A razão sntrs gs solventes é em partes volumétricas *

As mesmas abreviaturas são utilizadas para os sistemas eluentes usaclos na cromatografia "flash" s na cromatografia sob média pressão.

Os resultados da ©spectroscopia da infravermelhos ílv) são indicados em cm “. Os resultados da espectroscopia da ressonância magnética nuclear protónica < AH~RMM> são indicados em ppm (partes por milhão) © referidos ao padrão interno tetramstil-silanon s-singleto, d~dupletoP t=tripletoP q=*qusrtetoP m-mu1tipi eto? dd--dupleto duploP lç=largo» Na espectrometria de massa mediante bombardeamento com átomos rápidos CEM-BAR)„ os resultados referem-se è massa protonada ΉΉΗ)"1 = 0 radical designado por -Cha-^Val- é o radical bivalen··-te do ácido <2Ss,4SP5B)”5-amino-6-cicloh©Kil-4“-hidroKi~2-isopropi-ihsxanáico e tem a fórmula

ϋ radxcal designado por —Cha—'“'Vai— deriva do radical -Cha—'"vai- mediante a ligação de MH e OH através da pente constituída por um grupo isapropilideno e tem a fórmula

As abreviaturas convencional mente utilizadas na química dos peptideos sSo utilizadas para designar radicais bivalentes cie a---aníinoácidQs naturais. Os radicais tirosina ssterifiçados ou eterifiçados no grupo hidroni fenólico com d radical R sSo designados por TiríR),

Outras, abreviaturasg afos = absoluto (anidro) DCCI SC dicicloheKilcarbodi-imicia DCU = dicicloheHilursia DliF dimeti1formamida DfiSO =r. diffietilsulfóxidQ éter cr. éter distilicQ Fmoc rx 9-f1uorsni1metoKicarboni1o HOBi ΪΪΙ 1 - h i d r ο κ i b e η z o t r i a z o 1 s Mo cr: mstilo min •jx minuto(s) P-f = ponto de fusSo Tcp cr. 2 ?4 p5™tric1orafeni1o THF = tetrahidrofurarto Z benziIdkicarbonilo

Exemplo.....U......S..^S~diOMQ.t.ioroor.folirtacarbQnil"Val-Cha"wVal~VaI.~Ti.r~QMe 34j,8 μΐ de tristilamina e depois íò9ò mg <©,083 mmol) de cloreto de S.,S—dloxotiomorfol inocarbonilo em 2 ml de cloreto de meti leno são adicionados à temperatura ambiente a 45 mg < © , 069 mmol) de H-Va 1 -Cha-cVa 1 -Ma 1 -T ir-OMe dissolvidos em 2 ml de DnF. A mistura é agitada durante 2 horas á temperatura ambiente e depois concentrada s o resíduo é digerido numa pequena quantidade de éter di-isopropílico» 0 produto bruto à purificado mediante cromatograíia em gel de sílica <eluente B)« R «0,42= EM-BARs íM+Hi^eoe,

Os compostos de partida sSo preparados do seguinte modo? s> ɧ.tar^t,iU£ig-.A9...JcidQ____21.S>-benziIqxicar.bcni 1 amino-5-cic 1 ohs- xiiprpplón ico 243 g da ácido 2í3}~bsn2ilQxicarboniIamina-3~ciclahe- xilpropiónico (preparaçãos Helvetica Ghimica__Acta 57^ p. 21í, 1974) são colocados em 6ΘΘ ml de talueno s 9¾½ ml de etanol= A mistura de rescção é arrefecida até ©* e sao-lhe adicionados gota a gota S8;:3 g de cloreto de tionilo no decurso de 3© min. 0 banho de arrefecimento é reníovido s s r?5istura é agitada durante 18 horas. A mistura de reacção à filtrada e o filtrado é concentrado. 0 resíduo é separado mediante cromatograíia "flash" (2 kg de gel de sílica 60, 40-63 pm, eluente E). As fracçSes contendo o produto são combinadas, concentradas por evaporação s secadas sob alto vácuo» 0 composto em epígrafe è obtida sob a forma de um óleo ligeiramente amarelado. R*ÍE)=0,2. R^ÍB)=0,52. b> 2(8)-ffgnziloMicarteonilaminor-lrCLic 116,1 g de éster etílico do ácido 2< S>--benzi loKicarbo- nilaúiino---3"-ci.cloheí;ilpropióníca slo colocados em 2,2 litros de tolueno e arrefecidos até —65°» 836 ml de hidreto de di-isobu- tilamónio sâo adicionados gota a gota no decurso de 3ô min s a mistura resultante é agitada durante 20 min. Em seguida, 84,2 ml de metanol slc adicionados gota a gota no decurso de 10 min a -65° e, subsequentemente, 825 ml de solução aquosa de tartraio de sódio s potássio sSo adicionados sem arrefecimento» A mistura de reacçao é descarregada sobre 3 1 de (solução de tartrato de potássio e sódio)/gelo s extraída com 5 1 de étsr» A fase etérea é lavada com 2 1 de água, imediatamente a seguir é vertida sobre uma solução que consiste em i®6 g de hidrocloreto de semicarbasi-da © 158,5 g de acetato de sódio em 62Θ ml de água s 62® ml de etanol. A mistura de reacção ê então agitada á temperatura ambiente durante 1 hora, subsequsntemente separada num funil de separação s a fase aquosa resultante é extraída com 2x1,5 1 de éter. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio e concentrada por evaporação» 0 produto bruto á purificado mediante eromaiografia “flash" (2 kg de gel de sílica, 40-63 pm, elusnte A) „ A concentração por evaporação das fracçSes que contam o produto combinadas dá origem á semicarbacona do composto em epígrafe, Rf ¢8)=0,51,= 13® g desta semicarbasona são dissolvi das em i I de THF ε à solução resultante sãp adicionados 282 ml de solução de forroaldeído a 37% s em seguida, a í®°, 143 ml de HC1 0,5N. a mistura da reacçao ê agitada á temperatura ambiente durante 2 noras s ê filtrada, e o filtrado é lavado com ®,5 1 da água, t?,5 1 de NaHCOT s ©,5 1 de água,, As fases aquosas são extraídas com 6Θ© ml da atar» As fases etéreas são secadas sobre sulfato ae magnésio e concentradas por evaporação. 1©® ml de tolueno são adicionados ao resíduo a a mistura é concentrada por

evaporação, danclo origem ao composto em epígrafe»' tsts última é isaediatemente processado» C 5 (1 (S)-Benzi. I oh.icar bgni Iam inq-2-cicloheyi.l e_t.il 2 agirapg. ÍB?9 g de dispersKc de hidreto de sódio ía 55% em óleo) s!c» libertados do óleo num balão de sul fonação seca sob árgon mediante a sua agitação por trfs vezes em 5© ml de éter de petróleo <p.en 40-60°) e a respectiva subsequente decantação do solvente» Após secagem sob alto vácuo, obtém-se um pó cinzento que è colocado em 500 ml de THFs 55? 6 g de iodeto de trimefciisul-foKónio slo-lhe adicionados5 elevando-se a temperatura até cerca de 40°= A suspensão cinzenta resultante é aquecida até è temperatura de refIuko s mantida a essa temperatura durante uma hora e em seguida? no decurso de 5® min a -70°, é-lhe adicionada uma solução de 103?6 g de 2íS)-benziloKÍcarbonilamino-3-ciclohes<il-propanal em 250 ml de THF. A suspensão amarela é agitada a 0° durante 2 horas» A solução turva amarelada é vertida sobre 50Θ g de gelo, A solução aquosa ê θκtraída com 2?5 1 de éter e a fase orgSniea é lavada com água e? após ter sido secada sobre sulfato ds sódio? é concentrada par evaporação» 0 resíduo oleosa é separado mediante cromatografia S!flash!i <2,5 kg de gel de sílica 6®, 40-03 pm:i eluente C)« As fracçSes que contêm α produto são combinadas, concentradas por evaporação e secadas sob alto vácuo, 0 composta «em epígrafe (mistura diastsreomériea? aprowimadamsnte 4sl) è obtido sob a forma de um óleo ligeiramente amarelado» (1)=0,71, Β_,.<0~:Θ? 16. d) Iamino~4~-cic 1 ohsKi 1 - i -iodofautan-2 (R, S) -ol e a 42,3 q ds <i<S)-benciloKicarboniIafiiino-2-cicIahexil-etil>OKirano são adicionados em 20Θ ml de acetonitrilo

solução resultante é arrefecida até ®0 = Após a adição da 2®=9 g d© iodsto de sódio sdicionsín-se gots a gota* no decurso de 3® min5 i757 ml de trimstilclorossilano» A mistura é agitada a uma temperatura compreendida entre ©° © 3®° durante 40 minutos e depois vertida para dentro de 70ê ml da água gelada» A mistura aquosa é extraída com éter e a fase orgânica é lavada com 75Θ ml ds uma soluçlo aquosa a 5¾ de tiossulfato de sódio e 75Θ ml de solução aquosa saturada de cloreto de sódio» Após secagem sobre sulfato de sódio e concentração por evaporação obtém-se uma mistura oleosa do composto em epígrafe que é directamente processada»

I © > 3-agnzilpxicarbonilamino-4<S>-eicloheyilmet.il-2«2-à.iingt:il- :^Jll3ÍSdQ|tó^ 49,3 g do composto da alínea d) do Enemplo 1 e 1*07 g de monohidrato do ácido p—toluenossulfónico slo agitados em 14Θ ml ds 252~dimetoiíípropano s 45Φ ml ds cloreto ds mstileno durante 3 horas è temperatura ambiente,: A mistura é sstraída mediante a sua agitação era conjunto com í 1 de cloreto ds mstileno e 5ΘΦ ml de solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sédio» A fase orgânica é lavada com água, secada sobre sulfato ds sédio s concentrada por evaporação» 0 produto bruto é purificado median te cramatagrafia "flash" <3 kg de gel de sílica 60, 40-63 μ«ι, eluente D)» A concentração por evaporação das fracções que contlni o produto combinadas dá origem ao composto sm epígrafe sob a forma de um óleo ligeiramsnts amarelado» R (0)=0,55, R(0)=0,46. f > Éster.....ffletifíço........do.....ácido........2(R.,.S>-C3-benzi 1 okicarboní 1 -4<S)-ci-, tirico 14,3 ml ds di-isopropilamina são dissolvidos sob uma atmosfera ds árgon em 2ΘΘ ml ds Th’F abs« s arrefecidas até 0*» Em seguida, a uma temperatura compreendida entre 0° s 5°, 65,8 ml de uma solução 1,6n tíe n—butil—lítio em he>;ano slo adicionados gota a gota â mistura no decurso de 20 min e a mistura resultante é agitada durante 20 min. Em seguida, a uma temperatura compreendida entre -70° s -75*, 13,3 ml ds éster meti1ico do ácido isovalêrico são adicionados gota a gota e a mistura resultante é agitada durante 1,5 horas a -75°,, A uma temperatura compreendida entre -è®y e -75°, 2Φ ml ds triamida do ácido he>?smet.il fosfórico sáo adicionados gota a gota e sob agitação» A suspensão resultante é agitada durante 1® minutos e, finalmente, a uma

temperatura compreendida entre -·7Θ° e -·75°? uma solução de 43,4 g da composto da alínea e) do Exemplo 1 em li® ml de tetrahidrofu-rano é adicionada gota a gota no decurso de 5 min» A mistura de reacçSo á agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas e finalmente vertida sobre uma mistura de 1 I de solução aquosa saturada de clorato de amónio e 5Θ® g de gelo* A fase aquosa é extraída com 2 1 de acetato de etilo a a fase orgânica é lavada com água s secada sobre sulfato de sódio» Após concentração por evaporação, a mistura diastereomérica do composto em epígrafe é obtida sob a forma ds um óleo amarelo» RfCC)»ô,3ó» Rf(E)=®,2i (valores relativos à componente menos polar)» 9 > ácido...........2<R, 8)-(3Benziloxicarboni 1 -4 < S) -c ic. 1 omefi 1~2„3-dimeti 1 ~ zl a 3=o%a z ol i d. i n i ljç5, íS) - ms t i._l t i 1 bu. ti r i c o 1,77 ml de água são adicionados a aproximadamente cerca de 5° a lé55 g de t—butanolato de potássio em 25® ml de éter» A suspensão branca é agitada num banho de gelo durante mais í® min e, em seguida, adicionam-se-lhe 35,8 g da composta da alínea f> do Exemplo 1 (mistura diastereomérica) em 25® ml de éter, sendo a temperatura mantida em valores inferiores a 10°. A mistura de reacção ê então agitada è temperatura ambiente durante 18 horas e, finalmente, ê vertida para dentro de 5®@ ml de solução aquosa saturada da clorato ds amónio» A fase aquosa é extraída com acetato de etilo s a fase orgânica à lavada com solução aquosa saturada ds cloreto de sódio, secada sobre sulfate de sódio o concentrada por evaporação» 0 produto bruto oleoso é separado mediante cromatografia "flash" (2,5 kg de gel de sílica 6®, 4®-63μπ», eluente C)» Z-Cha-1-*Va 1 -OH, a componente menos polar do composto em epígrafe com a desejada configuração do átomo de carbono ligado ao grupo isopropilo (configuração S>, è obtido sob a forma de um óleo amarelo» R^í I )=:®g2®» R^(J)~0;i35» h) HC1°H-va1—Ti r-Qfde ÍÔ?© g de Z-Va 1 -Tir-DMe são hidrogsnado-s sota pressão normal e â temperatura ambiente em 2Θ© ml de metanol s 24 ml de HC1 IN na presença de 1 ?0 g de pa1ádio—sobre—carbono ÍPd a 10%) até ser atingida a saturação. A mistura de reacção ê filtrada e o filtrado ê concentrado por evaporação e secado,; R^. <K.)~0564k i> 2i£!iiz.fi.ll^ãÃz^sJdtlÍJizQQs

Uma mistura de 2,06 g ds HC1»H-Val~Tir”OMe5 3,12 g ds Z-Cha-ciíVal~QH, 1,74 g de DCCI, 1,33 g de HOBt, 0,73 g de N-me-tilieorfolina e 50 ml ds DMF è agitada à temperatura ambiente durante 16 horas,, A DCU á eliminada por filtração s o filtrado á concentrado e secado sob alto vácuo. 0 resíduo á purificado mediante cromatografia “flash" (1ΘΘ g de gel de sílica 60>9 eluents B). R^íA>=0j3ó. j> H-Cha-cVa1-Va1-Tir-PMe r~ *:,f _ _ 3,6 g oe Z-Cha~ ''val-Val-j ir-Uíls são hidrogenados sob pressão normal e à temperatura ambiente em 8Φ ml de metanol/égua 9si na presença de 360 mg de paládio-sobre-carfaono (Pd a 10%) até ser atingida a saturação. A mistura de reacção é filtrada ε o filtrado é diluído com 3Θ ml de água e agitado á temperatura ambiente durante 5 horas. Após evaporação do solvente, o composto em epígrafe è obtido por liofilização a partir de dioKana/água 9:1. Rf(H>=0,10. k > Fíiioc-ya 1 -Cha-c:Va 1 - Va 1 --Tir-One 3,0 g (5,48 mmol) ds H-Cha-^val-Vai-Tir-OMs são dissolvidos em 75 ml cie I)MFa 3,69 g (7,12 mmol) de Fmoc-Val-OTcE? e

dispais 477 mg íé>?©3 mmol) de eiiídi-isopropilamina são adicionados à solução* A mistura è agitada durante? 5 horas á temperatura ambiente., é depois concentrada por evaporação e o resíduo é digerido em éter distílico num banho de ultrassons» 0 produto á isolado por filtração e depois lavado com éter dietílico e secado» IV ÍKB r)s 330Θ, 1495=, 1645, EH-BAR s <M+H )^=870. R^ÍL)=0,5. i> H~Vai-Cha—cVa 1 ~Va 1 -Ti r-Qftfe 7Θ ml de piperidina sao adicionados a uma suspensão ds 3,62 g de (4,17 mmol) de Fmoc-Va 1 -Cha-'"Va 1 -Va 1 -Tij—DMe em 70 mi de BMF. A mistura é agitada durante 2 horas è temperatura ambiente» obtendo-ss uma solução límpida» A solução ê concentrada por evaporação3 o resíduo é digerido em éter di-isopropí1ico e o produto é isolada por filtração a depois lavada com êter di-isopropílico ε secado» IV (KBr)n 2920, 1750, 1650» EM-BARs <W+H>+«647. m> fcBmgllgjlicarboriilticmorvolina 1,74 g <16 mmol) ds éster bsncílico do ácido clorafér-mico são adicionados gota a gota, sob agitação & no decurso da 5 min s 1,03 g <10 mmol) ds tiomorfolina em 30 ml de água» A mistura heterogénea é agitada durante 30 min., período durante o qual g pH é constantemente mantido no intervalo 9-10 mediante a adição contínua ds NaOH 1M» 0 produto é εκtraído com acetato ds stilo, a fase orgânica é lavada co??? água, secada sobre MgSO^ e concentrada por evaporação, s o resíduo à cromatografadc sobre gel ds sílica, ÍV (CH^Cl-lii 1682, 1415= tCDCl0>! 2,50-2,76 (n, 4H), 3,70-3,84 <m, 4H), 5,15 <s, 2H), 7,30 ís, 5H).

η 3 N-benζi 1 ο>;icarbonII tiomorfoilnarS,Jgrriióxido 1,84 g (3,0 mmol) de Oxons (marca registada) (sal triplo iiionopersulfato ds potássio, Fluks) sm 1Θ ml da água são adicionados gota a gota, a uma temperatura compreendida entre 5° s 8* e no decurso de 15 min, a 51Θ mg <2,15 mmol) de hl—benzilo™ xicarboniItiomorfolina em ii ml de metanol= A mistura é agitada durante 3# min à temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etilo» Os entractos orgânicos são secados sobre MqSG^, s concentrados por evaporação, obtendo-se o composto &m epígrafe sob a forma de um sólido cristalino» EM—BftRs (M+H)+=27®. iH-RMN ÍCBCl-^s 2,9-3,1 Cm, 4Hí , 3,95-4,00 Cm, 4H) , •J- 5 „ 15 <s, 2H), 7,38 ts, 5HK o 3 Tiomorfolina-S.S-dióxido 544 mg <2,02 mmol) de N-foanxiloxicarfeoni1tiomorfolina--S,S-dióaido slo hidrogenados durante 18 horas á temperatura ambiente em 3® mi de metanol na presença de paládio—sobre-carbono (Pd a 5%).= G catalisador ê retirado por filtração, o filtrado é concentrado por evaporação s o resíduo é cristalizado a partir de éter/benzeno» P.f» 66-68°» P> ÇlSmto_de_SaS^dioxotiomorfolinicarboni 1 o 246 mg (1,82 mmol) da tiomorfα1ina-S,S~d ióxido, dissolvidos em 1® ml de tolueno, sSo adicionados gota a gota e a uma temperatura compreendida entre 5° e 2®° a uma solução de 3,83 mmol de fosgénio a 20% sm tolueno» A mistura é agitada durante 1 hora à temperatura ambiente» 0 resultante hidroclorsto de tiomorfolina-S,S-dióKido é isolado por filtração e depois lavado com tolueno, 0 filtrado é concentrado por evaporação, na fase finai sob alto vácuo, e o composto em epígrafe é processado

'-ν directamente, IV ÍCH0Cl0)s 1725, 1320* 1120» 1 2H~RHN CCDCl^)s 3,09-3,20 <m, 4H5 4,05-4,30 íns, 4ΗΪ.

Elíemglq_2..s. Tionorf GliHçr:arbgni^ 23,3 μΐ de trietilamina e depois ama solução de 9,2 g (0,055 mmal) de cloreto de tiomorfolinocarbonilo (preparado a partir de tiomorfolina e fosgénio de um modo análogo ao descrito na alínea p) do Exemplo 1) em 1 ml de clorato de meti leno são adicionados à temperatura ambiente a 30 mg <0,046 mmol) de H-val-Cha-^Val-val-Tir-OMe (alínea 1) do EKempIo 1 > dissolvidos em I ml de DMF,, A mistura é agitada durante 6 horas á temperatura ambiente, compleiamente concentrada por evaporação e o resíduo á digerido numa pequena quantidade de éter di-isopropí1ico= 0 produto bruto é purificado mediante cromatografia em gel de sílica (eluente F)s R^ÍL)=0,43« EM-BAR: ÍM+H)^-776,7= 1 23,2 μΐ de trietilamina s, em seguida, uma solução de 3,3 mg (0,055 mmal) de cloreto de morfolinocartaonilo (preparado a partir de morfolina e fosgénio de um modo análogo ao descrito na alínea p) do Exemplo 1) em í ml de cloreto da metileno são adicionados à temperatura ambiente a 30 mg (0,,046 mmol) de H-vai—Cha-2~val—Vai—Tir—One (alínea 1 do EKemplo 1) dissolvidos em 2 nu da DMF. A mistura é agitada durante 3 horas â temperatura ambiente, completamente concentrada por evaporação e o resíduo é digerido numa pequena quantidade de éter di-isopropilico* 0 produto bruto é purificado mediante cromatografía em gel de sílica (eluente F) =, R^íL):::::0548s EM-BARs írH-H)*=760,6,

iKmPlG- 4 j..,.^nVeI^a.;rC va 1 - V a I_-T ir-Ong 25,8 ml de trietilaraina e i®56 μΐ de cloreto de bsnzi-loKicarbonilo (éster hsnzilico do ácido cloroférmicot; Z-Ci > s§c adicionados a 4© mq ds H-Val—Cha—^Val—Var-Tir-OMe (alínea 1) do Exemplo í) em 1 nil ds DMF» A mistura ds raacçáo é agitada à temperatura ambiente até ao dia seguinte s depois é concentrada por evaporação» 0 produto bruto é purificado em gel ds sílica usando o eluente F. As fracções que conttm o produto são concentradas por evaporação e o resídua é digerido com éter di-isopro-p.í 1 i.co e secado» IV iKBr) η 33©θ» 2?ίβ, 164«. EM-BAR (M+H)^-781«

Eli®M&lo...5·.!!.....Morto linocarbon i 1 ~Va l-Çha-^ Va 1 - Vai -IirrMHrn~pro.B.i lo 65 mg do composto em epígrafe do Exemplo 3 são dissolvidos em 5 ml de n-propi. lamina s agitados, primeiro durante 18 noras á temperatura ambiente, depois durante 24 horas num tubo de vácuo a è5*„ Após concentração num svaporador rotativo sob pressão reduzida5 o produto bruto é purificado mediante cromato-grafia em coluna de gel de sílica (eluente L)« Rf(L)-©s4Í» EM-BAR 5 (M+H) ^=787 . £>Lgnj^o_4?..._MQr f o 1 inoça r bori i 1 -Vai ~u Vai -Val-Fe-NH^ 2 ml ds uma solução ds 53,5 mg de morfolinocarboni1·*· -Vai-OH em DHF, 102s7 mg ds cloreto do ácido bis(2-oKO-3-oxazodi-nil)fosfínico s 53,9 mg de trietilamina são adicionados sucessivamente a uma solução de 10Θ mg de H-val-cVal-val-Fe-NH„ em 5 ml ds Drfi-» A solução é agitada durante 3© min à temperatura ambiente e depois ê concentrada sob alto vácuo s a 40o» 0 resíduo é digerido em éter di-isopropílico. 0 produto bruto é purificado mediante oromatografia em coluna de gel de sílica (eluente L>„ 8^(1.)=0,43- EM-BARs (S1+H)+=729. do seguinte

Os compostos de partida são preparados a) N~ ΐ 5 (5 > -fiz ido-ó-c ic 1 ohe κ i 1 - 4 (S) -t~bu.tlldi.met ilsmioóil^lS) -limerag llhe>;anol 1) rVaJ...rFe-MH5. 192 mg de ácido 5(8) szidQ--ò"-cicIohe;d.l-~4çS>-"t---hutildi'- ísetilsililoííi~2(S)-isopropil-heKanéico ÍÇL.____Ora,___Chem .. 54.. p. 117S, 1989) slo dissolvidos em 4 ml de DMF e Ξ27 mg de cloreto do ácido bisC2-OKG-3”OKasolidinil)fosfinico, è9, mg de HOBt e 154 μΐ de N-mstilmorfolina são-lhe adicionadas sucessivamente. Após agitação durante 2® min è temperatura ambiente, 2ΦΦ mg de H-Val~ (hidrocloreto, Sachem, Suíça) são adicionados à mistura. Após agitação durante 3® min ã temperatura ambiente, a mistura é concentrada mediante uma bomba de alta vácuo e o resíduo resultante é tomado em cloreto de meti lano a lavado duas vezes com solução aquosa de hidrogenocarbonato da sódio. Após uma nova eKtracçSo dos extractos aquosos com cloreto de metileno, as fases orgânicas combinadas são secadas sobre sulfato de sódio s concentradas por evaporação. 0 produto bruto è agitado em n-hexa-no/íacetato de stilo) 1=1 iv:v), retirado por filtração, por sucção e depois lavado com n-hexano/íacetato de etilo).= R#(L)~®3Ó5. EM-BARs <M+H)+=è57„

b) HzChar^Val-Va 1 -Fe-Mí-L Só® mg do composto em epígrafe da alínea a) do Exemplo ó saa dissolvidos em i@® ml de metanol. 43® mg de paládio—sobra— —carbono (Pd a 5%) sao adicionados á solução e a mistura é reaucida com hidrogénio. Após 4 horas· & temperatura ambiente o catalisador é retirado por filtração, a solução é concentrada e o resxdua e digerido em ster. Após separação par filtração e

R.f<L>=@583. secagem obtêm-se q composta em spigrafe» tri-í· H )^=517.

Exemplo 1 i 2~ftsn-Cha-uVal~Vai~.Tir~DHg @,25 ml as stildi-isopropilamina e 232,4 mg de Z-Asn-ONP (ONF-éster or to-n i trofen £ 1 ico > são adicionados em _ f porções e sucsssivssnsnts a uma saluçaa de 2/4 mg de H-Cha-“vaI™ -Vai-Ti?—OWe (alínea j > do Euemplo i) em DrIF» Após agitação durante 1 hora á temperatura afisbisnie, a mistura é concentrada sob pressão reduzida a o resíduo e digerido em éter e separado por filtração» Em seguidas o sólida é novamente agitado em metanol, isolado por filtração s lavado com metanol s éter» Após secagem sob alto vácuo, obtêm-se o composto em epígrafe» Rç{B > ~@,57. EM—BftR: <M+H)^=79ó.

ExaraglP... sS ΜΰΓ.ίο 1 inocarboni 1 -Asn-Cha-^Va 1 va 1 -Tir-QMe 2@@ mg de H“Asn-Cha-'"Val-Val-Tir-OMe em DMF slo convertidos no composto em epígrafe de modo análogo ao descrito no

Enempla 3 com 9@,4 mg de cloreto de moi-folinocarboni 1 o e @,15 ml de trietilamina» 0 produto bruto é purificado mediante cromato-grafia em gel de sílica íeluente L). Rf<S)«@,45. EM-BARs ÍM+H)+=775. 0 composto de partida é preparado do seguinte modos H-rAsnrCha-,1:Va 1 - Va 1 -Tir-QMe i@22 mq da composto em epígrafe do Exemplo 7 são dissolvidos E-iTt IS© ml de metanol, á solução resultante são adicionados 29Θ mg de pa1ádio-sobre-carbono (Pd a 5%) e a mistura e reduzida coso hidrogénio» Após 2,5 horas á temperatura

ambiente* o catalisador é removida por filtração* a solução é concentrada e o resíduo ê tratado coo éter num banho de ultrassons = Após separação por filtração e nova lavagem com éter efectua~se a secagem sob alto vácuo* íL)=0 *07» EH™ BAR í í H+H)*=662.

ExemBlQ-g-S......Mggíaà inqçar bani 1 8Θ mg do composto em epígrafe do Exemplo 8 são agitados durante 3® horas a uma temperatura compreendida entre 65° e 70® em 5 ml de N-propilamina e 2 ml de DliF num tubo de vácuo» Após arrefecimento a concentração sob alto vácua* a resíduo é digerido em éter* isolado por filtração e purificado mediante cromatogra-· fia em coluna <-sluente L). (1.)=0,21» EM-BARs (M+H) ’ =802» 3 mg 150*0 mg 4*7 mg em hjj^slo^ix_Sute^.cia.....seca.......estéril,.....garajjxiecção 5 ma de S5S~dioímtiamorfolinocarbonil-Val-Cha-^Val-Val--Tir-OM© são dissolvidos a® 1 ml da uma solução aquosa com 2Θ mq de manitol. A solução é filtrada em condições de esterilidade, introduzida, sob condições assépticas, em ampolas com 2 ml de capacidade, congelada ε liofiixzatís* Antes da utilização, a substância liofilizada é dissolvida em 1 ml de água destilada ou 1 ml de solução salina fisiológica» A solução é administrada intramuscularmente ou intravenosamenteEsta formulação também pode ser introduzida em ampolas de injecção de Câmara dupla» EKemplo._12iÍ.........81 Sor ay», nasal 5Θ0 mg de S,S-diasiotiomorfol ínocarboni 1 -va 1 -Cha-1·Va 1 -~Va1-Tir~OMe finamente moído <<5,0 um) são suspendidos numa mistura de 3,5 ml de Myglyoi 812 Cmarca registada) e 0,08 g de álcool benziXico» A suspensão é introduzida num recipiente munido de uma válvula de doseamento. 5,o g de Freon (marca registada) 12 são introduzidos no recipiente sob pressão através da válvula. Mediante agitação, o Freon (marca registada) ê dissolvido na mistura Kyglyol/(álcool benzílico)* 0 recipiente “spray" contém aproaimadamente 1&& doses unitárias que podem ser administradas iβο1adamente«

Eaemplο 13s Comprimidos rgvgstidos......çamjm&_mÚAÇ)âlM.

Os seguintes componentes são processados de modo a obter-se í& ΘΘΦ comprimidos., contendo cada um 1&Θ mg de ingrediente activos

SjS-dioKotioínorfoIinacarbonil-val-Cha-^Val-yal-Tir-OMe ΙΘΘΘ g amido de milho 68® g sílica coloidal 2ΘΘ g es-iearato de magnésio 2© g ácido esteárico 5® o amido carboximetilico de sédio 25© g água q,s.

Uma mistura de S5S™diOKOtiomorfolinQcarbonil-Val-Cha~ -1"Var-Val-Tir-OMe« 5© g de amido de milhe e sílica coloidal s processada com uma pasta cie amido constituída par 25® q de amido de milho e 2=,-2 kg de água desmineralizada de modo a obter-se uma massa húmida. Esta massa ê forçada através de um crivo com malhas de 3 mm e secada durante 3© min a 45* num secador de leito fluida, 0 granulada seco é forçado através de um crivo com malhas ds 1 mms misturado com uma mistura previamente passada através de um crivo (crivo com malhas de 1 mm) da 3© g de amido de milho,, o estearato de magnésio? o ácido esteárico e o amido csrDoxiíRStí 1 ica ds sódio s é comprimido ds modo a obter—se comprimidos 1igeiramente biconvexos.

Os comprimidos sãa revestidos numa tina ds revestimento com 4b cm de diâmetro mediante a sua pulverização uniforme durante 3© min com uma soluçáo de 2® g de goma-laca e 4© q ds hidroKipropilmetilcelulose (baixa viscosidade) sís il© q de metanol s 135© g ds cloreto tía metíleno, A secagem é realizada simultaneamente por vsntilaçlo com ar a 6©°,

Em ves dos ingredientes aciivos mencionados nos Exemplos 5 a 8, á também possível utilizar nestes Exemplos a mesma quantidade de um ingrediente aetivo diferente entre as dos Exemplos precedentes» .....dg......resiriçfe ^ 1® ui de uma solução de protáase da restrição do HIV--Í Cextractc? em acetona de uma protéase de restrição manifestada em E.: coli do modo descrito por J„ Hansen e outros em lha ErIBQ Journal 7, p» 1785, 1988) e 19© μΐ de solução tampão do ãcids β-morfoiinoetanossu 1 fónico pH 6 contendo ®?©1% de 2-amino--4-r?i-trofenol como padrão interno são incubados a 37*. 1® μΐ de uma solução ©s24mM era DMSO do substrato H-Arg-Arg-Ssr~ftsn~81n-Va1~ -Ser-Sln-Asn-Tir-rro-Ile-Val-GIn-SIi-Arg-Arg-OH (icosapeptidso descrito por J» Schneider e outros am Cal1 54, p. 63, 1988) preparados num aparelha de síntese automática de peptídeos com unidades aminoácido Frooc-protegidas) s i® μΐ de urna solução em DMSQ do composto a ser investigado quanto à sua acçlo inibitíora, numa concentração de 22xi© Ί1 ou 22x1© WM, são adicionados simultâneamente» Após uma hora» 5® μ! de uma solução de rsacção slo tomados, 5 μϊ de ácido perclórico ®,3H são-lhe adicionados s a mistura é centrifugada. A quantidade de substrato não consumido e os produtos da separação na solução sobrenatíante são determinados mediante CLEF' e a inibição percentual para e ί€Γ&Η à calculada a partir desses dados»

Na análise mediante CLEP usa-se uma coluna da 125x4,6 mm de Nucleosil marca registada) 5 μ em fase reversa» um gradiente <acetonitrilo a I®% em água)/Cácido trifluoroacético a 1©% em água) —> (acetonitrilo a 25% em águaJ/íácido trifluoroacético a e,®8% em água) em 3Θ min» caudal 1,5 mi/min»

Os compostos das Exemplos precedentes possuem, numa -4 concentração de 1© Ms uma acção xnxbxtòrxa superior a 80¾ e9 numa concentração de 1© uma acçlo inibitória superior a 50%,

Exempla.....15j____Pratecção__fiaoicft.......j^JllíSSClB_Bilfí_HIV____num____teste mlMlãL. A linha celular MT“2 utilizada é uma célula T leucémics humana que foi transformada com H7LV--1 a que produz continuaroent© HLTV--1, o que torna as células extremamente sensíveis ao efeito citopaiogènico do HIV (Science 229, ρ» 563, 1985), As células MT-2 são cultivadas em meio RPMI 164Θ contendo soro de vitelo fetal desactivado por acção do calor a 12% (Beromed Biochrom f<85 Berlim, República federal alemã), gluiamina e antibióticos padrão. As células são mantidas a 37° numa atmosfera húmida contendo CD^ a 5% em ar e são utilizadas em fase de crescimento logarítmico no teste celular, O HIV LAV-03 (AIDS Research and Reference Reagsnt Program, NIH, Bsthssda, MD, E=u=A=) é cultivado em células A 3*01, 0 titula é determinado num ensaio de transeripiase reversa, Para a carga usada o seu valor é 2x10' UI/ml, 4Θ 000 células ITT-2 em crescimento exponencial em 50 μΐ d® meio de cultura são introduzidas em cada uma das concavidades de uma placa de titulação de base circular 96« Os compostos a serem investigados são adicionados5 na concentração indicada em 5Θ μΐ de meio de cultura e, imediatamente após, é adicionado o HIV em 100 μ! de meio de cultura» 1&Θ μΐ de meio de cultura sem HIV slo adicionados a exemplos de comparação. As placas de titulação são incubadas durante seis dias» A viabilidade das células infectadas com o H.CV © das células de comparação é então avaliada num teste MTTs o teste HTT haseía-se na redução do

brometo cie 3”C4;i5~-dimetiI tiazol-2-il )~2¥5-difenil tetrazalio de cor amarela (MTT? Sigma,, 3t. Louis? por desidrogenases mitocSndricas de células metabolicamsnte activas em que é obtido formazan azul que pode ser medido espectrofotonsetricamente para 54® níB (J- Viroloqical rlethads 2®, 3®9? 1988)=, A viabilidade das células de comparação e das células infectadas com o HIV é também determinada microscopicamente num hemocitómetro pelo método de exclusão do azul tripan,

Os compostos dos Exemplos precedentes investigados tsnifaens uma acção protectora contra a infecçSo pelo HIV em concentrações de í& mol/L i

Claims (3)

1. RgivinrficacSess lã» - Procss»q para a preparaçao de um composto da fórmula ίϊ)„

   em Ri representa dKalquil inferior lamino, pirrolidina-;1 piperi-dino, morfolino, tiomorfolino, S ?S-dioKotiomorfoi ino , piperazinos N-Calqu.il inferior) pipsrazino, faenziloKi ou benziIqkí substituído no anel fenilo com alquilo inferior ou com aicoMi inferior, representa um radical bivalente de um dos aminoácidos valina e asparaqina ligado N-~terminal mente ao grupo --(0=0) e C-terminalmente aa grupo -NH? A-, representa um radical bivalente de um dos aminoácidos tirosina e fenilalanina ligado N-ternsinalmente ao grupo ~<C=G'í e C-terminalmente ao grupo —MH, e &-? representa 0Rn ou NHFb-,, em que R2 representa hidrogénio ou alquilo inferior,

   ou as um sal deste composta, caracterizada por ss condensar um fragmento de um composto da fórmula í contendo um grupe carboxi terminai, ou um derivado ácida reactíva desse fragmento, com um fragmento que é complementar do composto da fórmula I s contêm um grupa «mino livre, ou com um seu derivado contendo um grupo assino estivado, de modo a obter-se uma Xiqaçlo amida, estando os grupos funcionais presentes nos reagentes, com excepçlo dos grupos que participam na reacçSo, facultativamente sob a forma protegida, e, ss desejado, se remover os grupos protectares presentes num composto que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento e/au se converter um composto da fórmula I que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento e contém ucn grupo formador de sais no seu sal correspondente ou se converter um sal que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento no composto livra correspondente ou num sal diferente e/ou se separar misturas isoméricas que podem ser obtidas pelo processo de acorda com o presente invento e/ou se converter um composto da fórmula I que pode ser obtido pelo processo de acordo com o presente invento num diferente composto da fórmula I de acordo com o presente invento. 2ϋϋ. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-tsrizado por os compostos tíe partida serem escolhidos de modo a preparar—ss um composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, em que R, representa diialquil inferiorJamino, piperidino, mortali— no, tiaiBQrfQlino, S,S-dioj<QtiDfliorfolino ou benziloxi, A, representa o radical bivalente do aminoâcido valins., A*3 representa α radical bivalente do aminoécido tirosina e

   H~y_ representa OR,-., em que w -C. R,, representa alquilo inferior* •d. 3ã. - Processo de acordo com a reivindicaçSo i? carac-terizado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composto da fórmula I da acordo com a reivindicaçSo 1 , em que R.j representa aiCalqyil inferior)amino5 piperidino, morfoli-no* tiomorfolino, S^S-dioxotiomorfolino ou benzi lcn:i* Ai representa o radical bivalsnte dos aminoácidos asparsgina ou vaiina, A.-, representa o radical bivalente dos aminoácidos fenilala--nina ou tirosina e representa OR*,, em que R._, representa alquilo inferior, ou NHR^, em que R^ representa hidrogénio ou alquilo inferior* 4§» - Processo d® acordo com a reivindicação i5 carac-tsrizado por os compostos de partida serem escolhidos cie modo a prsparar-~se uiTs composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1s em que R| representa morfelino* tiomorfolino* S,S-dioKotiomorfolino ou benziloKi,

   A* representa o radical bivalente do aminDáeido valina,, Ar, representa o radical bivalente do aminoácido tirosins s representa OFU em que O ’ R_, representa alquilo inferior» À. 5§:« - Processo de acordo com a reivindicação i, carac-terizada por as compostos de partida sarem escolhidos de modo a preparar-se um composto da formula 1 do acordo com a reivindica-elo i5 em que R^ representa «norfolino ou benziloxi, A., representa o radical bivalente do aminoácido asparaçina, A„ representa α radical bivalente do aminoácido tirosina e <£* RT representa ORK·,, em que representa alquilo inferior» jL ésã. - Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-terizado par as compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se u.m composto da fórmula I de acordo com a reivindicação íem que R.{ representa mortalino, Aj representa o radical bivalente dos aminoácidos valina ou asparagina»

   A.-, representa ο radical bivalente dos aminoácidos fenilala-·· nina ou tiresina s representa NHFU ,= em que R.~, representa hidrogénio ou alquilo inferior* 7§* - Processo de acordo com a reivindicação 1 => csrac-tsrizado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar—se um composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1s em que R.j representa S?B-dioKotiamDrfDlínos A1 representa o radical bivalente do aminoácido valina5 representa o radical bivalente do aminoácido tirosin® s R-r representa metoni» Sl* - Processo de acordo com a reivindicação 1¥ carac-terizado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composto cia fórmula ! de acordo com a reivindicação 1em que Rj representa tiomorfolino* A.| representa o radical bivalente do aminoácido valina» A^j representa o radical bivalente do aminoácido tirosina s Rt* representa metoni*

   ?ã» - Processo de acordo com a reivindicação i, carac-terisado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composta da fórmula í de acorrio com a reivindicação i, sm que FL representa morfolino, A, representa o radical bivalente do aminoécido valina, representa o radical bivalente do aminoáeido tircsina e representa metoKi» i®â.= ~ Processo de acordo com a reivindicação 1, caractsrizsdD par os compostas de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composto da fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1em que Rj representa benziloxi, ft| representa o radical bivalente do astiinoácido valina, A? representa o radical bivalente do aminoécido tirosina e íta representa metoKi» •J» ilãu - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado per os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar—se um composto da fórmula í de acordo com a reivindicação i5 em que Rt representa <norfolino5

   Aj representa o radical bivalente do aminoácido valina, representa o radicai bivalente do auiinoácida tirasiria a R-t representa n-propilaminQ,
2. 121. - Processo de acordo com a reivindicação 15 carsctsrizado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar—se um composto da fórmula 1 de acordo com a reivindicação 15 em que R.} representa morfolino,, representa o radical bivalente da aminoácido vslina. Pi.-, representa o radical bivalente da aminoácido fenilalanina e representa amino,
3. 131, - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterisado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composto da fórmula 1 de acordo com a ) reivindicação !„ sm que Rj representa benziloni, A1 representa d radical bivalente do aminoácido asparagina, η- representa o radical bivalente do aminoácido tiresina e R-? representa metoKi*

   j.41r. - Processo de acordo com a reivindicação i;. caractsrisado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar-se um composto da fórmula I de acordes com a reivindicação 1, em que representa mortalino. representa o radical bivalente dO aminoécido ::'l 'Çj-izt £ 'li Π hf·. « A2 representa o radical bivalente do aminoécido tirosina e R.; representa mstDKi. 151= - Processo da acordo com a reivindicação 15 caracterizado por os compostos de partida serem escolhidos de modo a preparar—se um composto da fórmula 1 de acordo com a reivindicação i, em que Rj representa morfolino, Aj representa o radical bivalente da aminoécido asparagina, A.-* representa o radical bivalente do aminoécido tirasins e R^. representa n-propi 1 amino- lél= - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incorporar na referida composição um composto da fórmula I obtido do modo descrito na reivindicação 1, em conjuntes com um suporte farmaceuticamente adequado» 171= - Processo de acordo com a reivindicação 16 para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizsdc? por se incorporar na referida eomposiçio uma percentagem de um composto da fórmula I obtida pela processo descrita na reivindicação í conspreendida entre 1% e 95%» 18ã« - nátodo para o tratamento terapêutico do corpo humanos em particular de doenças causadas por refcravirus, utili-2ando um composto preparado de acordo com a reivindicaçSo i,= caractsrisadD per se administrar uma dose de desde apronimadamen-te 1® mg até aproximadamsnte 3 g do composto eficaz por dia, Lisboa, 29 de Maio de 1.991

   J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 10-A 3.» 1200 LISBOA