WO1991004258A1 - Inositol derivative and production thereof - Google Patents

Description

明 細 書 ィ ノ シ ト ー ル誘導体お よ び そ の製法

技 術 分 野

本発明 は 、 新規 な イ ノ シ ト ー ル誘導体 、 特 に イ ノ シ ト ール - 1, 4, 5- 三 リ ン 酸 （ 以下 、 IP₃ ) 誘導体、 イ ノ シ ト ー ル - 1 , 3.4 - 三 リ ン 酸 （ 以 下 1.3 , 4 - I P ₃ ) 誘導 体 、 イ ノ シ ト ー ル - 1 , 3.4.5- 四 リ ン 酸 （以下 IP₄ ) 誘 導体 ま た は そ の薬学的 に 許容 さ れる 塩類、 な ら びに そ れ ら を有効成分 と す る 、 カ ル シ ウ ム イ オ ン の 関与 す る 生体 の 各 代謝過 程 を 調節 す る こ と に よ り 、 あ る い は IP₃、 1.3, 4-IPa, IP, 等 と 結合 し 、 あ る い は認識す る タ ン パ ク 質類 を調節 す る こ と に よ り 薬効 を示す 、 動物 の各種疾患の新規 な治療剤 に 関 す る 。 更 に本発明 は上 記の新規 な 、 イ ノ シ ト ール誘導体、 特に I P ₃ 誘導体 、 1.3.4-IPa 誘導体 、 IP₄ 誘導体 ま た は そ の薬学的 に許 容 さ れ る塩類の製造法お よ び、 IP₃、 1, 3, 4-IP₃、 IP, と 結合 し 、 あ る い は認識す る タ ン パ ク 質類 と 親和性 を 有す る 、 前記 イ ノ シ ト ー ル誘導体、 特に IP₃ 誘導体 、 1.3.4-IPa 誘導体 、 IP₄ 誘導体 を結合 し た 固相担体お よ びそ れ ら の製造法 に 関す る 。

技術的課題 と そ の解決方法 本発 明 に よ れば 、 本発明 の イ ノ シ ト ー ル誘導体 、 特 に I P ₃ 誘導体 の 合成 に は 、 図 1 お よ び 2 に 示す よ う に ィ ノ シ ト ー ル の糖水酸基及び リ ン 酸残基に お け る 水酸 基を適当 な保護基で保護 し た イ ノ シ ト ール - 4.5- ニ リ ン 酸誘導体の 1 ， 2 位の未反応水酸基に反応を加え 、 2 位に各種置換基を有す る イ ノ シ ト ール - 1, 4, 5- 三 リ ン 酸 （ IP₃)誘導体 を 製造 す る 。 1 位 の 未反応水 酸基 は 、 シ リ ル化試剤 な どで予め保護 し 、 し か る 後に 、 2 位 に未反応水酸基 を有す る IP₂ 誘導体を所望の反応基 と 反応さ せ る 。 本発明 に お いて は 2 位水酸基のカ ル ボ ン 酸エ ス テ ル体が も つ ば ら製造さ れる 。 カ ル ボ ン 酸 と し て は 、 ギ酸、 酢酸、 ブ ロ ピ オ ン酸、 ク ェ ン 酸、 フ マ ル酸、. マ レ イ ン 酸等の有機酸、 ま た安息香酸、 ナ フ タ レ ン 酸、 フ タ ル酸、 キ ノ リ ン カ ルボ ン酸な どの芳香族 カ ル ボ ン 酸、 複素環カ ルボ ン酸類、 及びア ミ ノ 基を有 す る ア ミ ノ 酸の よ う な有機酸、 ニ ト ロ 基を有す る芳香 族 カ ル ボ ン 酸 ま た は 複素璟カ ル ボ ン 酸類 が あ げ ら れ る 。 こ れ ら の 中で 、 特に各種 ア ミ ノ 酸類、 P-ニ ト ロ 安 息香酸が好適 に 用 い ら れる 。 反応媒体 と し て は、 ピ リ ジ ン 、 コ リ ジ ン 、 ピ コ リ ン な どの塩基性溶媒を用 い う る 。 反応温度 は 一 20°C〜 60^ 、 好 ま し く は 0 °C〜室温 が よ い 。 反応促進 剤 と し て 4 -ジ メ チ ル ァ ミ ノ ピ リ ジ ン 、 卜 リ エ チ ル ァ ミ ン な どの第 3 ァ ミ ン 、 フ ッ 化セ シ ゥ ム な どが用 い ら れ る 。 次に 、 適当 な媒体中で 、 I P ₂ 誘導体 の 1 位 の シ リ ル 基 の よ う な保護基 を と り は ず し 、 し か る 後 に適 当 な溶媒中で リ ン 酸化試剤 に よ り 1 位 を リ ン 酸化 し IP₃ 誘導体が製造 さ れる 。 反応は 一 78 で で ス タ ー ト し 、 次第 に室温程度 ま で反応温度 を あ げ る 。 そ の の ち 、 図 1 に お い て は 5 D の 2 位の p -ニ ト ロ 安息香酸エ ス テ ル基 を適当 な還元剤 で還元す る と 、 P- ァ ミ ノ 安息香酸エ ス テ ル基 と な り 、 同時に 、 糖水酸基 及び リ ン 酸残基 を保護 し て い た保護基 は脱離 し 6 D が 得 ら れ る 。 4 — ニ ト ロ 一 2 — ト リ フ リレ オ ロ ア セ チ ル ァ ミ ノ 安息香酸エ ス テ ル と し た場合 に は 6 a D ' が得 ら れ る 。 図 2 に お い て も 同様の還元反応に よ り 1 2 D 力⁵ 得 ら れ る 。 こ れ ら 反応 は 0 ~ 45 、 好 ま し く は室温付 近で行 う のが良 く 、 水素気流中で 12時間 も反応さ せれ ば定量的 に 目 的 と す る 化合物が得 ら れる 。 なお 、 図 1 お よ び 2 の各反応化合物は D 体で示 さ れて い る の で 、 D を付尾 し て い る 。 L 一 体 も 、 D L — 体 も D — 体 と 同 じ 反応条件で反応さ せ る こ と がで き る 。

こ こ ま で で得 ら れ る 代表的 な化合物は 、 6 D L の 2 -0- (4-ァ ミ ノ べ ン ゾ ィ ル ） -1, 4, 5_ ト リ - 0- ホ ス フ ォ ノ 一 ミ オ ー イ ノ シ ト ー ル三 ア ン モ ニ ゥ ム 塩 で あ る 。

6 D の化合物 を種 々 の条件で 、 更 に反応さ せ る と 、 図 3 の よ う に 7 D 、 8 D 、 9 D 等 の 化合物 が製造 さ れ る 。 6 D 、 7 D な ど のィヒ合物は 、 図 4 の よ う に 、 更 に 活性ィヒ さ れ た セ フ ァ ロ ース 、 ァ ガ ロ ー ス 、 セ フ ア デ ッ ク ス な ど と 反 応 さ せ る こ と に よ り 1 0 D 、 1 1 D の よ う な IP₃ 誘導 体 結 合 固 相 担体 が製造 さ れ る 。 更 に 6 D 、 7 D 、 1 2 D な ど の化合物 を 、 図 5 の よ う に各 種ケ 卜 ン 類 、 ア ル デ ヒ ド 、 イ ソ シ ァ ネ ー ト 、 ク ロ ル炭 酸 エ ス テ ル 、 カ ル ボ ン 酸 類 と 反応 さ せ て 、 1 3 D 、

- 1 4 D 、 1 5 D 、 1 6 D 、 1 7 等の化合物 を製造す る こ と が で き る 。 個 々 の反応条件の概略 も 図 5 に示す 。 な お 図 1 の 6 D の精製の際、 お よ び図 2 の 1 2 D の精 製の際 、 水 — ア ン モ ニ ア 一 ブ ロ パ ノ ール （1 :4: 5) 溶離 溶媒を 用 レ、 る セ ル ロ ー ス カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り 6 D お よ び 1 2 D を単離す る の で ア ン モニ ゥ ム塩 が製造 さ れ る 。 該 ア ン モ ニ ゥ ム塩を水に溶か し 、 こ れ を陽イ オ ン 交換樹脂 を通 し て 、 ナ ト リ ウ ム塩 6 D ' お よ び 1 2 D ' を製造す る こ と がで き る 。 ま た IP₃ 類 と 生体中の酵素、 受容体 と の結合 を標識 化合物 を 用 い て 標識 す る 試薬 を製造 す る こ と が で き る 。 た と え ば適 当 な ス ぺ一サ一 を介 し て IP₃ と ビ才 チ ン あ る い は蛍光物質の結合物 を製造 し え る 。 さ ら に本発明 に よ れば 、 本発明 の イ ノ シ ト ール誘導 体 、 特 に 1, 3, 4- IP₃ 誘導体、 IP₄ 誘導体の合成に は 、 図 1 0 お よ び 1 5 に 示 す よ う に 2, 4.10 -ト リ 才 キ サ 卜 リ シ ク ロ [ 3.3. 1.1³· ⁷] デ カ ン 6, 8, 9—ト リ オ ー ル (102) に べ ン ジ ル 才 キ シ メ チ ル ク ロ リ ド を作用 さ せて 化合物 （1 ) を 合成 し 、 LQJ に P -ニ ト ロ べ ン ゾイ ル ク ロ リ ド を作用 さ せ る と 、 8-0 -ベ ン ジ ル 才 キ シ メ チ ル - 9 -0- (4- ニ ト ロ べ ン ゾィ ル ） - 2.4.10 -卜 リ オ キ サ ト リ シ ク ロ [3, 3.1 , 1³· ⁷] -デ カ ン 6- オ ー ル （ HI ) 力⁵得 ら れ る 。 こ れ に ベ ン ジ ル ブ 口 ミ ド を 作 用 さ せ た 後 、 こ れ に 酸性 メ タ ノ ー ル 溶液 で 処理 す る と 、 2 - 0 - ( 4 -二 卜 口 ベ ン ゾ ィ ル ） - 6- 0 -ベ ン ジ ル ー ミ オ ー ィ ノ シ ト ー ル ( in. ) が得 ら れ る 。

111 に 0 -キ シ リ レ ン ジ ェ チ ル ホ ス ホ ア ミ ダ イ ト 、 m- ク ロ ル過安息香 酸 （ m C P B A ) を 作用 さ せ た 後 、 接 触水素化分解 す る と 2 位 に P-ァ ミ ノ ベ ン ゾ ィ ル基 を 有 す る ミ オ ー イ ノ シ ト ー ル （1, 3 , 4, 5) 四 リ ン 酸 （ iiJ ) が 得 ら れ る 。 更 に 還 元 を 行 い 2 位 に P-ア ミ ノ シ ク ロ へ キ サ ン 基 を有 す る ミ オ ー イ ノ シ ト ー ル （1.3.4, 5) 四 リ ン 酸 （in) が得 ら れ る 。

ミ オ ー イ ノ シ ト ー ル （1 , 3 , 4) 三 リ ン 酸誘導体 は 、 3 , 4-P -メ ト キ シ ベ ン ジ リレ -5 , 6- ジ ベ ン ジ ル ミ オ ー イ ノ シ ト ー ル に 、 ジ ブ チ ル鍚 才 キ シ ド 、 メ 卜 キ シ メ チ ル ク ロ リ ド （ M O M ) を 作用 さ せ て 、 1 位 を M O M基 で保護 し た 後 、 ニ ト ロ 基 を有 す る カ ル ボ ン 酸 と 反応せ し め 、 更 に 、 脱 メ ト キ シ ベ ン ジ ル 、 脱 M O M を 行 い 、 1 、 3 、 4 位 を リ ン 酸化後 、 還元 し て 2 位 の各種 カ ル ボ ン 酸エ ス テ ル 、 あ る い は シ ク ロ へ キ サ ン 環 を有 す る カ ル ボ ン 酸エ ス テ ル ί jj^ ) を得 る こ と が で き る 。 ま た 、 図 1 2 、 1 3 、 1 5 に あ る よ う に 、 活性ィヒ さ れ た セ フ ァ ロ ー ス 、 ァ ガ ロ ー ス 、 セ フ ア デ ッ ク ス な ど と 反応 さ せ る こ と に よ り iiJ、 H の よ う な IP 誘導体結 合 固 相担 体、 H の よ う な 1, 3, 4- IP₃ 誘導体結合固相担体が製 造 さ れ る 。

さ ら に本発明 に よ れば、 本発明 の ポ リ ペ プチ ド 、 タ ン パ ク 質 類 と の 結 合物質 で あ る ィ ノ シ ト ー ル誘導体 は 、 IP₃、 1, 3, 4-IP₃お よ び IP₄ の いずれを原料 と す る 場合に も 、 2 位の ア ミ ノ ベ ン ゾィ ル （ ァ ミ ノ 基は 、 特 に P 位 に あ る も の が望 ま し い ） エ ス テ ル化合物 を水系 媒体中 で低温下 、 す な わ ち 4 °C以下、 好 ま し く は 0 °C で 、 酸性条件下 、 亜硫酸ナ ト リ ウ ム を作用 さ せ 、 5 分 〜 30分間 、 好 ま し く は 10分〜 20分間撹拌す る 。 酸性条 件 に す る た め に 、 好 ま し く は 濃硫酸 な ど が 用 い ら れ る 。 つ い で 0.1M NaHC0₃溶液で上記反応液を中和 し 、 各種ポ リ ペプチ ド 、 蛋 白質の水溶液を加 え 、 低温で 、 好 ま し く は 0 で 、 10時間〜 120 時間、 好 ま し く は 15 時間〜 96時間反応さ せ る 。 こ の反応溶液を透析膜に移 し 、 水媒体中 で 、 冷蔵庫中で 3 〜 5 日 透析 し 、 反応産 物を精製 し 、 凍結乾燥 し て タ ン パ ク 質結合 ΙΡ₃、タ ン パ ク 質結合 - 1, 3.4-ΙΡ₃、 タ ン パ ク 質結合 - ΙΡ₄複合体が得 ら れる 。 各種 ポ リ ペプチ ド 、 蛋白質 と し て牛血清 ア ル ブ ミ ン （以下 BSA と 略記す る 。）、 ヒ 卜 血清ア ル ブ ミ ン (以下 HSA と 略記す る 。）、 マ ウ ス血清 ア ル ブ ミ ン （ 以 下 MSA と 略記す る 。） 、 卵 白 ア ル ブ ミ ン （ オ ボ ア ル ブ ミ ン ） 、 コ ラ ー ゲ ン 、 キ ー ホ ー ル リ ム ペ ッ ト へ モ シ ァ ニ ン ( keyhole limpet herao cy an i π - K LH)な ど力 用 い ら れ る 。 こ の よ う に し て製造 さ れ る 、 タ ン ノ、' ク 質結合 イ ノ シ ト ー ル リ ン 酸化合物類 は 、 I P ₃、 1.3.4 - I P ₃ 、 IP, の 生体 中 で の活性発現 を持続的 に 行わ し め る べ く 意図 さ れ製造 さ れ た も の で あ り 、 経 口 的 あ る い は注射等 に よ つ て生体 に 投与 す る こ と がで き る 。 ま た本発明 の タ ン ノぺ ク 質結合 イ ノ シ ト ー ル リ ン 酸化合物類 は 、 担体 タ ン ノ ク 質 と IP₃、 1 , 3, 4- IP₃、 IP₄ 等 を ノヽ ブ テ ン と し た ノ、 ブ テ ン 一 タ ン ノ、' ク 質複合体 と し て の機能 を持 ち 、 免疫 原性 コ ン ジ ュ ゲ ー ト と し て の用途 も 考 え ら れ る 。

本発明 の特徴 は 、 従来の考 え方で は 、 タ ン パ ク 質側 を 、 リ ン 酸緩衝液等の 中で 、 水溶性の カ ル ポ ジ イ ミ ド 系縮合剤 で あ る 1-ェチ ル -3- (3 -ジ メ チ ル ァ ミ ノ プ ロ ピ ル ） カ ル ポ ジ イ ミ ド · 塩酸塩等で活性化後 、 イ ノ シ 卜 ー ル リ ン 酸化合物 と 反応 さ せ 、 両者 を結合 し 複合体 を 製造 す る こ と が考 え ら れる が、 こ の よ う な方法 を 用 い る と 、 タ ン ノ ク 質中 に存在す る求核性の基がイ ノ シ ト ール リ ン 酸化合物 、 特 に 2 位変換イ ノ シ ト ール リ ン 酸 化合物 と の反応 に 先が け て 、 タ ン パ ク 質活性化部位 と 反応 し て し ま う こ と に な り 、 目 的 と す る タ ン パ ク 質結 合 イ ノ シ 卜 一 ル リ ン 酸化合物類が製造 し に く く な る の に 対 し て 、 本発明 で は 、 逆 に 、 'イ ノ シ ト 一 ル リ ン 酸化 合物の側 を 活性ィヒ し て 、 特に イ ノ シ ト ー ルの 2 位の水 酸基の p — ァ ミ ノ べ ン ゾィ ル カ ル ボ ン 酸類のエ ス テ ル ィ匕合物 を ジ ァ ゾ 力 ッ ブ リ ン グ等の方法 に よ り 、 タ ン ノぺ ク 質 と 確実 に 反応結合せ し め る こ と に よ り 、 化学構造 的 に 明確な ィ ノ シ 卜 一 ル リ ン 酸 —. タ ン パ ク 質複合体 を 製造す る こ と が で き る点に あ る 。 ま た タ ン ノ、' ク 質に ィ ノ シ ト ー ル リ ン 酸化合物を反応さ せ る 際、 そ の量比 を 自 由 に変 え る こ と に よ り 、 タ ン ノ ク 質に結合す る イ ノ シ 卜 一ル リ ン 酸化合物の数を コ ン 卜 ロ ールす る こ と が で き る点で も有用 で あ る 。

一般式 （ 1 )、 （π )、 （ ΠΙ ) の 化合物 は 以下 の 参考 例 、 実施例 で よ り 詳細 に説明 す る が、 一般 に た と え ば 晶出 、 蒸留 ま た は ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ーの よ う な物理的 方法、 あ る い は た と え ばア ルカ リ 付加塩の形成、 こ れ ら の 塩 の 晶 出 の よ う な 化学的方法 に よ っ て 精製 で き る 。

一般式 （ i )、 （n )、 （ m ) の化合物お よ びそ の薬学 的 に許容さ れる塩類 は細胞内の小胞体か ら の Ca^{2 +}ィ ォ ン の遊離を行わ し め た り 、 Ca^{2 +}イ オ ン の遊離 を阻害 し た り す る こ と に よ り 、 様 々 な薬理効果を示 し た り 、 そ の細胞あ る い は組織あ る い はそ の個体固有の生理学的 状態 （ た と え ば疾患状態） を調節す る こ と に よ っ て治 療効果を発揮 し た り す る こ と がで き る 。 あ る い は一般 式 （ 1 )、 UI )、 （ III ) の化合物の う ち 、 固相担体結合 物 は 、 前記 し た よ う な イ ノ シ ト ール 一 リ ン 酸化合物類 と 結 合 し あ る い は 認 識 す る タ ン ノヽ ' ク 質類 、 す な わ ち IP₃-5 -ホ ス フ ァ タ 一ゼ 、 IP₃-3—キ ナ ーゼ、 1, 3, 4— ίΡ ₃- 3 -ホ ス フ ァ タ 一 ゼ 、 1.3.4— IP₃-5 -キ ナ ー ゼ 、 IP₄— 3 ホ ス フ ァ タ 一 ゼ 、 IP₄- 5 -ホ ス フ ァ タ ー ゼ等 お よ び IP₃ 受 容体 、 1 , 3, 4- IP₃ 受容体、 IP₄ 受容体等 を 分離、 精製 す る の に き わ め て有用 で あ る 。

一般式 （ I )、 （ II )、 （ ΠΙ ) の化合物の毒性 は低 く 、 多 く の も の は急性毒性 が SOOmg/kg以上 で あ る 。

本発 明 の一般式 （ 1 )、 （ Π )、 ( ΠΙ ) の化合物の IP₃- 5-ホ ス フ ァ タ ー ゼ 、 IP₃— 3 -キ ナ 一 ゼ 、 1.3.4-IP₃_3 -ホ ス フ ァ タ ー ゼ 、 1 , 3.4-IP₃- 5 -キ ナ ー ゼ 、 IP₄— 3 -ホ ス フ ァ タ ー ゼ 、 I P ₄ - 5 -ホ ス フ ァ タ 一ゼ等 と の反応性、 小胞 体 Ca^{2 +}イ オ ン 遊離能、 IP₃ 結合蛋白質 （受容体） 、 1, 3.4-IPs 結合蛋 白 質 （受容体 ） 、 IP₄ 結合蛋 白質 （受 容体） 等 と の反応性な ど を実験例に例示す る 。

—般式 （ I )、 （ II )、 （ ΠΙ ) の イ ノ シ ト ー ル誘導体化 合物 ま た は そ の薬学的 に許容 さ れる塩類は蒸留水、 グ ル コ ー ス 、 ラ ク ト 一 ス 、 デ ン プ ン 、 セ リレ ロ ー ス類、 ス テ ア リ ン 酸 マ グ ネ シ ウ ム 、 タ ル ク 、 ア ラ ビ ア ゴ ム 、 レ シチ ン等 リ ポ ソ ー ム類等 々 の医薬 と し て適 当 な担体 と 混 合 し て あ る い は 組 み 合 わ せ て 含 む 医薬組成物 と し て 、 患者や動物 に 提供 · 適用 さ れる 。

こ れ ら 医 薬 組 成物 は 単位剤 型 あ た り 、 活性成 分 を O. lmg な い し 200mg を含有す る 。 ま た錠剤 、 カ ブセ ル 剤 、 座剤 、 注射剤 、 飲用 剤 、 経鼻剤 、 点眼剤等 々 の形 態で患者や動物 に 1 日 、 1 回〜 6 回 、 経 口 的 、 ま た は 直腸経路 あ る い は他の非経口経路 に よ り 投与で き る 。 以下 に本発明 を参考例、 実施例、 実験例 を も っ て具 体的 に説明 す る が 、 本発明 は こ れ ら に 限定 さ れな い。 参考例 1

1 D の製造法 を引 用 及び略記す る 。

前 の 出願 特開昭 63-198642 の

実施例 1 で で き る 化合物 3 ( 1 , 2 -シ ク ロ へ キ シ リ デ ン -3, 5- ジ -0- ベ ン ジ ル ー ミ オ ー ィ ノ シ 卜 一 ル ） 実施例 17で で き る 化合物 14 [ 3, 6-ジ ベ ン ジ ル -4， 5- ビ ス （ ジ ベ ン ジ ル ホ ス ホ ） - 1 , 2 -シ ク ロ へ キ シ リ デ ン ー ミ ォ ー イ ノ シ ト ー ル ]

i

実施例 18で で き る化合物 15 ( 3, 6-ジ ベ ン ジ ル - 4, 5 _ ビ ス （ ジ ベ ン ジ ル ホ ス ホ ） 才 イ ノ シ 卜 ー リレ ） = 1 D L に あ た る 。

一般式 （ I ) の化合物の う ち 合成経路 1 の 6 D 、 6 D ' 、 合成経路 2 の 1 2 D 、 1 2 D ' 、 合成経路 3 の 7 D 、 7 D ' 、 8 D 、 8 D 、 9 D 、 9 D ' 、 合 成経路 4 の 1 0 D ' 、 1 1 D ' . 合成経路 5 の 1 3 D ' 、 1 4 D ' 、 1 5 D ' 、 1 6 D ' な どが代表的 な 化合物で あ る 。 D — 体の代表的化合物 を例示す る 。 L 体 は最初の D を L に か え 、 ま た 、 ラ セ ミ 体の場合 は最 初の D を と り 、 他の記述は 同 じ であ る 。 ID: ID- 3.6-di -0-benzyl -4.5 - di - 0 - dibenzylphos phoryl - myo - inositol

2D: 1 D - 3.6-di -0-benzyl - .5-di -0-dibenzylphos

phoryl - 1 - 0 - triethylsilyl - myo - inositol

D： ID - 3, 6-di -0-benzyl -4.5 - di - 0 - dibenzylphos

phoryl - 2 - (4 - nitrobenzoyl) - 1 - 0 - triethyl silyl - myo - inositol

D： ID - 3， 6 - di - 0 - benzyl - 4， 5 - di - 0 - dibenzylphos

phoryl - 2 - 0 - (4 - nitrobenzoyl) - myo - inositol D： lD-3.6-di-0-benzyl-1.4, 5-tri-0-dibenzyl

phosphor 1 -2-0- (4 - nitrobenzoyl) - myo - inositol D： ID - 2 - 0 - (4 -ami nobenzo 1 ) -1.4.5-tri - 0 - phosphono-myo-inositol triammonium salt

D '： ID - 2 - 0 - (4-aniinobenzoyl) -1.4, 5-tri-0 - phosphono-myo-inositol trisodium salt

D： 1 D - 2 - 0 - (4-aminocyclohexanecarbonyl) -1, 4 , 5 - tri-0 -phosphono-myo-inositol triammonium salt D : lD-2-0- (4-azidobenzoyl) -1.4.5-tri-0- phosphono-niyo-inositol triammonium salt

D： ID - 2 - 0 [4 - (5-acylaminoethyl-2-hydroxy

phen 1 azo ) benzo l] - 1 , .5 - tri-O - phosphono -myo-inositol triammonium salt

OD : ID - 2- 0- [4 - (5-aminoethyl-2-hydroxyphenyl

azo) benzoyl ] -1, 4， 5 - tri - 0 - phosphono - myo - inositol triaramonium salt - Sepharose 4 B 11 D : ID - 2-0 - (4-arainocyclohe anecarbonyl) - 1.4 , 5 - tri - 0 -phosphono- myo - inositol t r i am ra o

n i urn salt - Sepharose 4 B

1 O D は上記化合物の ァ ミ ノ 基 と セ フ ァ ロ ー ス が結合 し た も の と 表現で き る 。

1 1 D に つ い て も 上記の ァ ミ ノ 基 と 結合 し た も の と い え る 。

図面に つ いて の簡単な説明 図 1 は合成経路 1 を 、 図 2 は合成経路 2 を 、 図 3 は 合成経路 3 を 、 図 4 は 合成経路 4 を 、 図 5 は合成経路 5 を そ れぞれ示 し 、 図 3 に お レ、て 6 D 、 7 D 、 8 D 、 9 D の NI を Na に か え た も の を 6 D ' 、 7 D ' 、 8 D ' 、 9 D ' と し 、 図 5 に お い て 6 D ' 、 7 D 、 1 2 D ' を RNH₂と 略 し 、 各化合物の NH₂ に 相 当 す る 部 分 を波線で示 し そ れ以外の部分 を R で示 す 。

図 6 は 図 5 の具体例 を示す 図 で あ る 。

r 図 7 は ビ 才 チ ン と 7 D ' の縮合の反応 を示す 図 で あ る 。

図 8 は ピ オ チ ン 一 チ ラ ミ ン ー 6 の複合体の合成経路 を示す 図 で あ る 。

図 9 は光分解性基 と ビ 才 チ ン あ る い は蛍光体を有す る IP₃ の合成経路 を示す 図で あ る 。

図 1 0 は 図 9 に あ る 6 0 の別途合成経路 を示す 図 で あ る 。

図 1 1 は IP₄- 2 位 P — ァ ミ ノ ベ ン ゾィ ル体の製造 ブ 口 セ ス を示す 図 で あ る 。

図 1 2 は 2- P-ァ ミ ノ ベ ン ゾィ ル - IP₄の化学変換 を示 す 図 で あ る 。

図 1 3 は IP₄ -チ ラ ミ ン含有セ フ ァ ロ ース系 ァ フ ィ 二 テ ィ 一力 ラ ム の製造法 を示す図で あ る 。

図 1 4 は エ ポ キ シィヒセ フ ァ ロ ース を 用 い る ァ フ ィ 二 テ ィ 一 力 ラ ム の製造法 を示す 図で あ る 。

図 1 5 は 1, 3, 4- IP₃ 誘導体の製造 を示す 図 で あ る 。 * 図 1 6 は 1.3, 4- IP₃ ァ フ ィ 二 テ ィ ー カ ラ ム め製造法

_ を示す 図 で あ る 。

更 に 、 図 1 7 は各種 I P ₃ の ア ナ ロ グ濃度 と I P ₃ - 5 -ホ ス フ ァ タ 一ゼ活性度の 関係を示す 図 で あ り 、 図 1 8 は各種 IP₃ の ア ナ ロ グ濃度 と [³H] IP₃_3-カ イ ネ ー ス活性度の 関係 を示す 図 で あ る 。

図 1 9 は各種 I P ₃ ア ナ ロ グ濃度 と [ ³ H ] I P ₃ 結合 ( % ) の 関係を示 す 図 で あ り 、

図 2 0 は各種 IP₃ ア ナ ロ グ濃度 と Ga^{2 +}放出 ％ の 関係 を示す 図 で あ り 、

図 2 1 は 1 0 D ' お よ び 1 1 D ' を つ め た カ ラ ム で の IP₃ 関連蛋 白質の分離精製に お い て試験管番号 と そ の蛋 白 質濃度 （ rag/m £ ) の関係を示す 図で あ る 。

図 2 2 は各種の 1? 4 お よ び IP₃ の ア ナ ロ グ を示す図 で あ る 。

図 2 3 は 、 各種 IP₃ お よ び IP₄ の ア ナ ロ グ 濃度 と IP₄-5 -ホ ス フ ァ タ ーゼ活性 と の関係を示す 図で あ り 、 図 2 4 は各種 IP₃ お よ び IP₄ の ア ナ ロ グ濃度 と IP₄- 3- ホ ス フ ァ タ ーゼ活性 と の関係を示す図で あ り 、 図 2 5 は各種 IP₃ お よ び IP- の ア ナ ロ グ濃度 と IP₃- 5 -ホ ス フ ァ タ 一ゼ活性の 関係を示す図で あ る 。

図 2 6 は 各種 IP- の ア ナ ロ グ 濃度 と [³H] -IP₄結合 ( % ) と の関係を示す 図で あ る 。

実 施 例

実施例 1

DL-3.6- ジ — 0— ベ ン ジ ゾレ 4.5- ジ — 0— ジ ベ ン ジ リレ ホ ス ホ リ ル 一 ミ オ ー ィ ノ シ ト ー ル の キ ラ ル セ ル 0Dに よ る 光学分割

DL-3, 6- ジ - 0- ベ ン ジ ル -4, 5- ジ - 0- ジ ベ ン ジ ル ホ ス ホ リ ル ー ミ オ ー ィ ノ シ ト ー ノレ 200mg を キ ラ ル セ ル 0D (分取用 ） を 用 い て 光学分割 を行な っ た 。

溶 離 溶 媒 n-Hexane 5 ： i-PrOH 1

流 速 10 m £ /mi n

圧 力 18 atm

チ ャ ー ジ量 20〜 30 rag

[ α ]：³ = - 21.0° 10〜 15mg

( C=l .10. CHCl a )

[ α ] =³ = + 21.0° 10〜 ； I5mg 得 ら れた 。

( C = 1.05 , CHCl a ) - H-NMR (CDCl a . 270 MHz)

δ 2.4~ 2.5 (br 2H -OH) 3.47 (dd 1H H₃ )

3.53 (dd 1H H , ) 3.88 (t 1H H₆) . 08 ( t 1 H H₂ ) 4. 52 (d IH -C-0CH₂Ph)

4. 50 (ddd IH H₅) 4. 61 (d IH -C0CH₂Ph)

4. 74 (d IH C0CH₂Ph) 4 , 85 ( d IH - CO - CH₂Ph)

4. 71 5.08 (m 9H P0CH₂Ph x 8 , H₄

7. 03 〜 7. 35 (Ar 30H)

IR (nujol) 3450. 1236. 1120， 980. 880. 703

667 cm" ¹ 実施例 2 2 の製造

D— 1 , 2—ジ 才 一 レ 74mg、 L- 1. 2—ジ 才 一 (レ 70mgを そ れぞれ 別 の 反 応容器 に 計 り と り 、 両者 と も 別 々 に 以下 の 操 作 に 付 し た 。 無 水 ピ リ .ジ ン で 3 回 程度共沸 さ せ た 。 残査 に無水 ピ リ ジ ン 3 m £ を加 え 、 N ₂気流中 、 0 °C に 冷却 し 、 卜 リ エ チ ル シ リ ル ク ロ ラ イ ド 0. 019 g ( 1. 5 eq ) 、 0. 0I 8g ( 1. 5eq)を 滴下 し た 。 滴下後室温で 3 時間反応 さ せ た 。 反応終了 後 、 減圧下で ピ リ ジ ン を留去 し 、 残 査 は 酢 酸 ェ チ ル で 抽 出 後 水 で 3 回 洗 浄 、 Sat KHS0- soln 2 回洗浄 、 水洗浄、 Sat NaHCO ₃ sol n 1 回 、 H₂0 洗浄後 、 硫酸ナ ト リ ウ ム上 で乾燥 さ せ 、 溶媒 を減圧留 去さ せ た 。 残査 を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ っ て 精製 し 、 そ れぞれ 2 D が 86% 、 2 L 85% の取率で得 ら れた 。

¹ H-N R (CDC 1 a , 270 MHz) δ 0.46 ~ 0.57 (m 6H - CH 2 CH 3 3) 0.83 (t 9H -CHzCHs 3)

2.35 〜 2.45 (br 1H -OH) 3.42 (dd 1H H₃) 3.53 (dd 1H Hi) 3.70 (dd 1H H₂) 3.8 (t 1H H₆)

0

II

4.4〜 5.1 (ro 14H 0CH₂Phx 2 -P0CH₂Ph x 4 ,

H₄. H₅) 7.0 X 7.2 (m 30H Ar) IR (nu jol) 3400, 1568. 1229, 1082, 880 640 cm" ¹

実施例 3 3 の製造

D-2—モ ノ 才 一 )V 52. 9 m g . L— 2 -モ ノ オ ール 49. 4mgを それ ぞれサ ン プ リ ン グ し 、 実施例 2 同様に両者 と も 別 々 に 以下の操作に付 し た。 無水 ピ リ ジ ン で 3 回程度共沸さ せ すこ 。 残査に無水 ピ リ ジ ン 3 m & を加え 、 N ₂気流中 、 O t に 冷却 し 、 P -ニ ト ロ フ エ ニルカ リレボニ Oル ク ロ ラ イ ド 0. 197g ( 20eq)、 0. 184g (20eq)を加え る 。 続いて触媒 量の ジ メ チ ル ァ ミ ノ ピ リ ジ ン を加 え 0 ^DC か ら室温 に て —夜反応さ せ た 。 反応終了後、 減圧下で ピ リ ジ ン を留 去 し 、 残 査 は 酢 酸 ェ チ ル で 抽 出 後 、 水 で 洗浄 、 Sat KHS0₄ sol n洗浄、 H₂0 洗浄、 Sat NaHC0₃ soln 洗浄、 H₂0 洗浄後 、 硫酸ナ 卜 リ ゥ ム上で乾燥さ せ 、 溶媒 を減 圧下留去 さ せ た 。 残査をカ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一 に 付 し 、 そ れぞれ 3 D が 92 %、 3 L が 92 % の収率で得 ら れた 。 H-NMR (CDCl a . 270 MHz)

δ 0. 26 〜 0.57 (m 6H -CH2 CH₃ X 3)

0. 83 (t 9H -CHz CH 3 x 3) 3. 67 (dd 1H H

3. 83 (dd 1H H , ) 3.93 (t 1H H₆)

4.5— 5.1 (m 14H H₄. H₅. -0CH₂Ph x 2.

POCH₂Ph x 4) 5.75 (t 1H H 7.03— 7.38

IR (nu jol) 1700cm 実施例 4 4 の製造

4し

D - 2 -ァ シ ル 体 55mg、 L— 2 -ァ シ ソレ体 52mgを 、 そ れ ぞ れ ク ロ 口 ホ ル ム 1 π ·β に 溶解 さ せ'、 室温 で 80 % 酢酸 3 m Ά 、 ノヽ ' ラ 卜 ノレェ ン ス リレ ホ ン 酸 23mg (2. 5eq)、 21mg (2. 5 eq) を加 え た 。 3 時間反応後、 酢酸ェチ ル抽 出 、 H₂0 洗浄、 Sat NaHCOa soln 洗浄、 H₂0 洗浄 し 、 硫酸ナ 卜 リ ウ ム乾燥、 濃縮 し て残査を カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ —で精製 し た 。 4 D が 91 %、 4 L が 90% の収率で得 ら れた 。

¹ H-NMR (CDCla . 270 MHz) δ 3. 7 (dd 1H H₃) 3.8 (dd 1H H, )

3. 9 (t 1H H 4. 5 5. 1 (in 14H H₄， H₅.

0

-0CH₂Phx 2. -^OCHzPh x 4) 5. 75 (t 1H H

7.03 〜 7.38 (ro Ar 30H) 8.1 (d N0₂- oVc

実施例 5 5 の製造

D— 1—モ ノ 才 一 レ 45. 3mg、 L- l -モ ノ 才 一 リレ 42. 3mgそ れ ぞ れ サ ン プ リ ン グ し 、 無水 THF 3 m 、 無 水 ピ リ ジ ン 0. 5m £ を加 え 、 N₂気流中 、 一 78 °C に冷却す る 。 撹拌 し なが ら三塩ィヒ リ ン 12mg (2eq)、 l lmg (2eq) を加 え る 。

1 時 間 反 応 後 、 一 78 °C で べ ン ジ ル ア ル コ ー ル 28 m g ( 6 eq) , 27mg (6eq)を力 Π え る 。 1 時間反応後、 一 78°C で t- ブチ ル ハ イ ド ロ ノヽ ·一才 キ サ イ ド 16mg (4eq)、 15mg (4eq) を加 え 、 反応温度 を徐 々 に室温 ま で上昇さ せ た 。 1 時 間 〜 2 時 間 反応 後 、 酢 酸ェ チ ル で 抽 出 、 H ₂0 洗浄 、 Sat KHS0₄ soln洗浄、 H₂0 洗浄、 Sat NaHCO ₃ soln 洗 浄、 H₂0 洗浄後 、 硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥、 濃縮後、 力 ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で 、 5 D 力 80%、 5 L が 81 % の収率 で得 ら れ た 。

1 H-NMR (CDC 13. 270 MHz) δ 3. 7 (dd 1H H₃ 4. 1 (t 1H H

4. 6~ 5. 1 (ra 19H H i . H₄. H₅. -OCH₂Ph x 2

実施例 6 6 の製造

N0

D 体 46. 5mg、 L 体 42. 5mgを 、 それぞれ eOH (4) ： H₂0 (1) 溶液 5 m £ に溶かす 。 そ の中 に 5 % Pd- Cをそれぞ れ 50mg加 え 、 H₂気流中 1 気圧で 12時間反応さ せ た 。 反 応終了後触媒 を 口 過 し 、 減圧下で溶媒を留去す る 。 残 査 を セ ル ロ ー ス カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り 、 溶 離液 と し て 水 一 ア ン モ ニ ア 一 n -ブ ロ ノ ノ ー ル （ 1 :4 : 5) を 用 い 、 6 D 、 6 L を そ れぞ れ定量 的 に 単離 し た （ ァ ン モ ニ ゥ ム 塩 ） 。

6L

mp > 280 実施例 7 6 D ( 6 L ) か ら 6 D ' ( 6 L ' ) へ の変 換

ア ン モ ニ ゥ ム 塩 を Na塩 に 交換 し た 。 陽 イ オ ン 交換樹 脂 DOWEX 50W-X2 ( H ⁺ ) に 10% の ピ リ ジ ン 溶液 を通 し て ピ リ ジ ン F 0 R Mに か え た 。 そ の樹脂 に ィ ノ シ 卜 一 ル ァ ン モ ニ ゥ ム 塩 を 通 し て 、 イ ノ シ ト ー ル の ピ リ ジ ニ ゥ ム 塩 に か え た 。

陽 イ オ ン 交換樹脂 に 10% の NaOH溶液 を 通 し て Na+ F0 RMに か え る 。 そ の 樹脂 に ィ ノ シ ト ー ル の ピ リ ジ ニ ゥ ム 塩 を通 し て 、 イ ノ シ ト ー ル の Na塩 と し た

上記 6 D ' 、 6 L ' が定量的 に得 ら れた 。

- 'H-NMR (D₂0 270 MHz)

δ 3.8 (dd 1Η H₃) 3.9 (br 2H H₅. H₆) 4. 1 (br 1H H , ) 4. 25 (br 1H H₄)

IR KBr法

3350, 1680. 1600, 1280. 1040. 920cm rap 280 °C'以上 実施例 8 光学不活性 6 D L の ナ ト リ ウ ム塩 6 D L の製造

の合成

Na

D. L 体 （ 5 D L ) 70mgを HeOH (4) ： H₂0 (1 ) 5 m £ に溶 解 さ せ 、 5 % Pd-C 100mg、 AcONH₄ 70rag を加え 、 水素 気流 中 、 大気圧 で 12時 間反応 し た 。 5 % Pd-Cを 濾過 し 、 水 を減圧下留去 し 、 残査 を セ ル ロ ース カ ラ ム単離 に よ っ て 6 D L を定量的 に得 た 。

光学活性体の時の操作 と 同様に 、 Dowex 50W- X2を使 う こ と に よ っ て NH₃塩か ら Na塩 に交換 し た。 ス ペ ク ト ル は一致 し た 。 実施例 9 7 の製造

6 D 10rag、 6 L 9 mgを ぞれぞれ水 5 m£ に溶か し 、 そ れぞれに 酸化ル テ ニ ウ ム 10mg、 ま た lOragを力 B え 、 ォ ー ト ク レ ーブ中水素 80atm、 60°C で 2 〜 3 時間反応を行 な っ た 。 触媒'を瀘過後、 水を減圧留去 し 、 残査を D0W EX 50W-X2 ( 陽 イ オ ン 交換樹脂） を使 っ て ア ン モ ニ ゥ ム塩カ ら N a塩 に か え た 。 7 D 力 5 90 % 、 7 L が 95 % の収 率で生成物が得 ら れ た 。

mp と も に 280 °C以上

•H-NMR (D₂0 270 MHz) δ

H

3. 1 (br 1H H

H

3.8〜 4.2 (m 5H H .. H ₃ , H ₄. H ₅. H

5.6 (t 1H H 実施例 1 o 光 学 不 活性 7 D L の ナ ト リ ウ ム 塩 7 D L ' の製造

6 D L 20mgを H₂0 5m £ に溶か し た。 酸化ル テ ニ ウ ム を 加 え 、 オ ー ト ク レ ーブ中 、 80気圧に水素圧を上げ、 60 で 2 時間反応 し た 。 触媒を瀘過 し 、 水を減圧下留去 し 、 残査を イ オ ン 交換樹脂に通 し 、 定量的 に 7 D L ' が得 ら れた 。

」 Na

7DL 7DL *

DOWEX 50W- X2を使 う こ と に よ っ て 、 NH₃ 塩力、 ら Na塩に 交換 し た 。 ス ペ ク ト ル 一致 し た 。

実施例 1 1 8 お よ び 8 a の製造 B

Dし の合成

6DL (B = H) .6aDL (B = NHC0CF₃

」 NH

8DL (B = H) , 8aDL (B = NHC0CF₃

6 D L 30ragを 水 3m £ に 溶 か し 、 濃塩 酸 Ο. ΐιη β を 加 え た 。 こ れ を 0 °C に 冷却 し た 。 混合液 を か き ま ぜな が ら 亜硝酸ナ 卜 リ ゥ ム 10nig/H₂0 0.5m£ 溶液を滴下 し た 。

1 時間撹 は ん後 、 よ う 化カ リ ウ ム デ ン プ ン試験紙で青 紫色 を確認後 、 ア ジィヒナ ト リ ウ ム 7 nigを加 え た 。 1 時 間反応後 、 溶媒 を減圧留去後 、 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単 離 し た と こ ろ 、 定量的 に生成物が得 ら れた 。

- ¹ H-NMR (D ₂0 270 MHz)

δ 3.7 (dd 1H H₃ ) 3.8 (br 2H H , . H₆)

3.9 (br 1H H_s) 4.2 (br 1H H₄)

- IR (KBr法 )

3200. 2100. 1700, 1600, 1400 , 1260 1100cm- ¹

8 a に つ いて も 全 く 同様の操作で合成 し た。

• IR (Nu jol)

3200, 2100. 1750, 1700cm" ¹ 実施例 1 2 9 お よ び 9 a の製造

DL 成

9DL (B = C = H) .9aDL (B = NHC0CF₃. C-N₃)

6DL

9DL (B=C=H) . 9aDL (B=NHC0CF₃. C=N₃ 原料 30mgを 水 3 m £ に 溶 か し 、 濃塩 酸 50 w £ を 加 え た 。 こ れを 0 °C に 冷却 し 混合液をか き ま ぜ な が ら亜硝 酸ナ ト リ ウ ム 10mg/H₂0 0. 5in £ 溶液を滴下 し た 。 1 時 間撹拌後、 よ う 化カ リ ウ ム デ ン プ ン試験紙で青紫色 を 確認後、 チ ラ ミ ン · 塩酸塩 13. 2mgを加え る 。 2 時間反 応後、 分液 に よ っ て過剰のチ ラ ミ ン を取 り 除 き 、 水層 を減圧留去 し た 。 残査 は セル ロ ース カ ラ ム に よ っ て単 離 し 、 生成物 を DMF/H₂0 溶液 2m に溶か し て N-ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン イ ミ ド エ ス テ ル （ 安 息 香 酸 エ ス テ ル ） と 反応さ せ た 。 2 時間反応後、 反応溶液 を減圧下 留去 し 、 残査 を セ ル ロ ー ス カ ラ ム単離 を行 な う こ と で ト 一 タ ル 20% の収率で生成物が得 ら れた 。

- I R (Nu jol)

3200， 2100. 1745. 1650cm 実 施 例 1 3 1 0 の 製 造

Activated CH-Sepharose 4 B

し P0

6D '

1 ODL ゲル 1 g に チ ラ ミ ン 3 mgを通常の方法で 力 ッ ブ リ ン グ さ せ た A と ア ミ ン カ ら得た ジ ァ ゾ二 ゥ ム塩 B を 力 ッ プ リ ン グ さ せ る こ と に よ っ て 1 0 D L が得 ら れた 。 実施例 1 4 Activated CH-Sepharose 4B を用 い る 7 D — セ フ ァ ロ 一 ス 1 1 D の製造

ゲル 1 g を グ ラ ス フ ィ ル タ ー （ G 3 ) 上で 1 mM HC1 200 m を使 っ て膨潤 、 洗浄 し た 。 カ ツ ブ リ ン グノヽ ' ヅ フ ァ ー ( NaHC0₃ 0.1M pH8.0) 6m£ に 7 D

溶解 し た。 同 バ ッ フ ァ 一で ゲ

ル を す ばや く 洗浄 し た 。 ゲル懸濁液 と リ ガ ン ド 溶液を 室温で 1 時間撹拌 し 、 混ぜた。 過剰の 7 D を （ 0.05M 卜 リ ス 、 pH8.0、 0.5M NaCl ) と （ 0.05M ギ酸 、 pH 4.0、 0.5M NaCl) soln で交互に洗っ た。 （ グ ラ ス フ ィ ル タ 一上で ） ゲル を集め た。

7D ( 合成経路 3 を参照） 実施例 1 5

K 塩

" は リ ン 酸が遊離の状態、 す なわ ち何物 と も 塩 を形成 し て い な い こ と を示す 。 フ リ ー の IP₃ (1.4 , 5) 2 位 0^〇^NH₂ 体化合物 （6") 0. 030g (0. 056ramol)を DMF 2 m £ に と か し た 。 こ れに ァ セ ト ン 1 m £ (過剰 ） を加 え 、 室温で 1 日 間反応さ せ た 。 反応終了後、 真空 ポ ン プで減圧下 DMF お よ び過剰 の ア セ ト ン を溜去 し た 。 残査を CC-31 セ ル ロ ース カ ラ ム で単離 し た 。 NH₃ 塩 を Dowex 50W-X イ オ ン 交換樹脂 を使 っ て K 塩 に 交換 し た 。 生成物 0. 012g、 収率は 31 % で あ っ た 。

I R 1650cm— ¹吸収力⁵得 ら れた 。 - 実施例 1 6

ラ ネ 一 ニ ッ ケ ルノ H

60 a t m

PO EtOH 室温

(17-6"-1 )

P

(13-6-1) 才 ー 卜 ク レ ー ブ に フ リ 一 の ィ ミ ン （17-6 "- 1 ) 0. 020 g (0. 034mmol) を入れ、 エ タ ノ ール 5 m £ に溶か し た。 こ れに触媒量の ラ ネ ーニ ッ ケ ルを加 え 、 水素圧 60atm で 12時間反応さ せた。 反応終了後、 触媒を瀘過、 滹液 を濃縮、 残査を CC-31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単離、 NH₃ を Dowex 50W-X ィ オ ン交換樹脂を使っ て K 塩 に交換 し た 。 生成物 0. 020g 、 収率 84% で得 ら れた。 1 H-N R (D ₂0. 270 MHz) δ 1. 05 (d J = 6. 0Hz 6H) 実施例 1 7 Ph

K 塩

(6 , 14-6-1 上言 S Na塩 （6 ' ) 0.030g (0.050ramol) ¾： H ₂0 2m£ に溶力 し た 。 こ れ NaHC0₃ 0.012 g (0.14mmol) , フ エ ニ ゾレ イ ソ シ ア ナ 一 ト 0.012g (0.10niniol)を加え 、 2 日 間反応さ せ た 。 反応終了後、 H₂0 を溜去 し 、 残査 を陽イ オ ン交換 を通 し た 。 H₂0 を 溜去後 、 CC-31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で 単離 、 NH₃ 塩 を Dowex 50W-X イ オ ン 換樹脂を使 っ て NH₃ 塩か ら K 塩に 交換 し た 。 生成物 0.023g、 収率は 60 % で あ っ た 。

I R 1660cra" ' 実施例 1 8

ヽ CH

K 塩

(7" 17-7-1 (7") 0.030g (0.055ramol) ¾r DMF 2m£ に溶力 し た。 こ れ に ア セ ト ン l m£ を加え 、 1 日 反応 さ せた 。 反応終了 後、 真空 ポ ン プで減圧下 DMF、 ア セ ト ン を溜去 し 、 残 査を CC-31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単離、 NH₃ 塩 を Dow ex 50W-X イ オ ン 交換樹脂 を使 っ て K 塩 に交換 し た。 生成 物 0.015g、 収率 39% で得 ら れた。

IR 1655 cm- ¹ 実施例 1 9

才 ー 卜 ク レ ー ブ に フ リ 一 の ィ ミ ン （ 17— 7"— l) 0.030g (0.051mBol) を加 え Et0H 10m_e に溶か し た。 こ れに触 媒量の ラ ネ ーニ ッ ケ ル を加え 、 水素圧 60atm で 12時間 反応 さ せ た 。 反応終 了 後 、 触媒 を 瀘過 し 、 瀘液 を 濃 縮、 残査を CC-31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単離、 NH₃ 塩を Dowex 50W-X イ オ ン 交換樹脂を用 いて NH ₃ 塩か ら K 塩 に交換 し た 。 生成物 0.021g、 収率 70% で得 ら れた 。

1 H-NMR (D ₂0. 270MHz)

δ 1.0 (d J = 6.0Hz 6H) 実施例 2 0

7 * 16-7-1 上言己 Na塩 （7 ' ) 0. 030g ( 0. 049 mmol)を H ₂0 2 m £ に 溶力 し た 。 こ れ に NaHC0₃ 0. 042 g (0. 50mmol ) を方 ί! え た 。 続 レゝ て べ ン ゾ ィ ル ク 口 ラ ィ ド 0 - 020g ( 0. 15 mmo 1 ) を 加 え て 、 室温で 6 時間反応 さ せ た 。 反応終了後、 H₂0 を溜 去 し 、 残査 を陽 イ オ ン 交換樹脂に通 し た あ と 、 CC- 31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム単離、 Dowex 50W-X イ オ ン交換樹脂 で NH₃ 塩か ら K 塩 に 交換 し た 。 生成物 0. 027g、 収率 は 71 % で あ っ た 。

IR 1665 cm- ¹ 実施例 2 1

7， 上言 S Na塩 （7 ' ) 0.030g (0.049mmol) ¾: H ₂0 2m£ に溶力 し た 。 こ れ に NaHC0₃ 0. 042g (0. 50.mmol) を カ卩 え た 。 続 い て 、 ベ ン ジ ル 才 キ シ カ ル ボ ニ ル ク ロ ラ イ ド 0. 025 g (0.147inmol) を加 え て 、 室温で 6 時間反応 さ せ た 。 反 応終 了後、 H₂0 を溜去 し 、 残査 を陽イ オ ン 交換樹脂に 通 し た 。 CC- 31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム単離、 Dowex 50W- x イ オ ン 交換樹脂で NH₃ 塩か ら K 塩 に交換 し た。 生成物 0.021g、 収率 55% で得 られた。

IR 1725cra- ¹ 実施例 2 2

·— P

(7 * (14-7-1) 上言己 Na塩 （7 ' ) 0.030g ( 0.049ramol) ¾ H₂0 2m£ に溶力 し た 。 こ れに NaHC0₃ 0.012g (0.14mmol) を 加 え すこ 。 続い て 、 フ ェ ニ ル イ ソ シ ア ナ 一 卜 0.012g (0. 10mmol)を カロ え 、 2 日 間反応 さ せ た 。 反応終了後、 H₂0 を溜去 し 、 残査を陽イ オ ン 交換樹脂に通 し た。 CC-31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単離、 Dowex 50W-X イ オ ン 交換樹脂で NH₃ 塩 か ら K 塩 に 交換 し た 。 生成物 0.018g、 収率 47% で 得 た

I R 1650 cm

実施例 2 3

(BnO)

N₂ガ ス 中 2 D 1. Og (1. Oramol)を無水 ピ リ ジ ン 20ra£ に 溶か し た 。 こ れを氷 一 水で冷却 し た。 こ れに N-Z フ エ 二 ル ァ ラ ニ ン塩ィヒ物 0.84g (3.0ramol)を加え た 。 そ し て 触媒量の DMAPを加え 、 温度 を氷 一 水か ら室温 に し 、 一 夜反 応 さ せ た 。 反 応終 了 後 、 H₂0 を 加 え 30分撹拌 し た 。 エ ー テ ル を加え 抽出 、 H₂0 洗浄、、 10% KHS0₄溶液 洗浄 、 H₂0 洗浄、 Sat NaHC0₃溶液洗浄、 H₂0 洗浄、 有 機層 を MgSO- で乾燥 、 濾過 を し 、 エ ー テ ル層 を 、 エ バ ポ レ ー ト し 、 .残査 を カ ラ ム ク ロ マ 卜 で単離 し た 。 生成 物 1 · 053 g、 収率 85 % で得 た I R 1730cm- '

実施例 2 4

12D ' 3 D — 1 か ら 1 2 D ' ま で は 3 D か ら 6 D ' に至 る 操 作 と 同様 に し て誘導 し た 。

1 2 D ' ：

I R 1735 cm— ¹ 実施例 2 5

17-12-2) 原料 1 2 " 0.050 g ( 0. 088mmol) を （ dry ) DMFに 溶 カ し た 。 こ れに へ キ サ ナ 一ル 0.088g (0.88inmol)を加え た 。 室温で 2 日 間反応 さ せ た 。 反応終 了後、 真空ポ ン プで 減圧下 DMF を溜去 し た 。 .残査 を CC- 3】 セル ロ ース カ ラ ム で 精製 し 、 Dowex 50W-X ィ オ ン 交換樹脂で K 塩 に 交 換 し た 。 生成物 0.027g、 収率 40% で得 た 。

I R 1725. 16.40 cm- ¹ 実施例 2 6 4CH

13-12-2) 才 一 ト ク レ ー ブに原料の ィ ミ ン （ フ リ ー ） （17-12-2) 0.020 g (0.031mmol) お よ び ェ タ ノ 一ソレ 10m £ を 入 れ た 。 こ れに触媒量の ラ ネ ーニ ッ ケ ル を加え 、 水素圧 60 atm で 24時間反応さ せ た 。 反応後、 触媒を濾過 し 、 瀘 液 を濃縮 、 残査 を CC-31 セル ロ ース カ ラ ム で精製 し 、 Dowex 50W-X イ オ ン 交換樹脂で K 塩に交換 し た。 生成 物 0.013 g、 収率 55 % で得た。

IR 1735cm- ¹

実施例 2 7 n

(12 * (15-12-1 原料 （12 ' ) ' 0. 030g ( 0. 047mmol ) を H₂0 2m £ に 溶 力 し すこ 。 こ れ ίこ NaHC0₃ 0. 040g (0.47nimol) を力 Π え た 。 続レヽ て べ ン ジ ル ォ キ シ カ リレ ボ ニ ル ク ロ リ ド 0. 024 g ( 0. 141 mmol) を 加 え 、 一夜反応 さ せ た 。 反応後 、 水 を 溜去 し 、 残査を陽イ オ ン交換樹脂に通 し た 。 CC-31 セ ル 口 ー ス カ ラ ム で単離 し 、 NH₃ 塩 を Dowex 50w-x イ オ ン 交

- 換樹脂で K 塩 に交換 し た 生成物 0. 029g、 収率 75% で 得 た 。

IR 1720cm- ¹ 実施例 2 8

16-12- 1 ) 原 料 （ 12 ' ) 0. 030 g ( 0. 047 m m o 1 ) を H ₂0 2 m £ に 溶 力 し た 。 こ れに NaHC0₃ 0.040g (0.47mmol) を力 11 え た 。 続 い て べ ン ゾ イ ル ク ロ リ ド 0.033g (0- 24mmol)をカ卩 え て 、 室 温で 一夜反応 さ せ た 。 反応後、 H₂0 溜去 し 、 残査 を陽 イ オ ン 交換樹脂 に通 し た 。 CC- 31 セ ル ロ ース カ ラ ム で 単離 し 、 K 塩 に Dowex 50w-x イ オ ン 交換樹脂で交換 し すこ 。 生成物 0.025 g、 収率 80 % で得た 。

IR 1650 cm' ¹ 実施例 2 9

(51) d-Biotin 0 · 300 g ( 1 · 22 ram o 1 ) に無水 DMF 5.4πι·β をカロ え る 。 続 レヽ て 、 ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ン イ ミ ド 0.155g (1.35m mol)、 ジ シ ク ロ へ キ シ ル カ ル ボ ジ イ ミ ド 0.251g (1.22m mol)を加 え た 。 室温で 、 10 hr 反応後、 冷蔵内で l hr 〜 2 hr放置 し た 。 析 出 し た DCC ウ レ ァ を瀘過 し 、 少量 の DMF で 洗浄 し た 。 瀘液 は 真空 ポ ン プ で 減圧下溜去 し 、 残査は イ ソ プ ロ ノぺ ノ ール よ り 再結晶 を行な っ た 。 生成物 0.3709g 、 89% の収率で得 ら れた。 融点 200 〜 202 °C 一 —

DMSO-CDCl a 270 MHz

'Η NMR 6.307 ( 1 H s i 6.274 (IH s

4.391 (IH broad

Nヽ

4.228 (IH broad 0 )

-Nメ

3.119 (IH broad

2.85 (2H broad

2.66 (2H t CH₂CH₂CH₂CH₂C0 )

0

1.6 (6H m CH₂CH₂CH₂CH₂C0 )

IR (nujol) 3200, 2900, 1820. 1780, 1740.

1720. 1700, 1070, 840 cm一 ¹ 実施例 3 0

L-P

(7D ' )

(52)

IP 1 . 4. 5 ) 2 位 - NH₂ 0. 030g ( 0. 049mmol) を

H ₂0 2ro に溶解 さ せ た 続い て NaHC0₃ 0. 012g (0. 14πι m o 1 )、 B i o t 0. 034g (0. lOnraol)カロえ 、 室温

で 6 日 間反応 さ せ た 。 反応終了後、 H₂0 を溜去 し 、 残 査 を陽 イ オ ン 交換樹脂を通 し た 。 H₂0 を溜去 し 、 残査 を CC - 31 セル ロ ー ス カ ラ ム （溶離溶媒 ： Π-ΡΓ0Η 6 ： C0NC

NH^OH 3 ： Η₂0 1)で分離 し た。 溶媒を溜去 し 、 イ オ ン 交換樹脂 Dowex 50W-X を通 し て NH₃ 塩か ら K 塩にかえ た 。 生成物 11. 5mg、 収率 25% で あ る 。 'H NUR (D₂0 270 MHz) 5. 500, 5. 415 (1H 2 位）

4. 45 ( 1H broad

4. 27 ( 1H broad

3.40— 4.20 ( 7H

3.19 ( IH broad

2.60 (IH s ^Sし ) 2.08 (2H CH₂CH₂CH₂CH₂C

0

1.6 (6H m CH₂CH₂CH₂CH₂C- 実施例 3 1

d-Biotin CO

51

d-B o t i n NCH₂CH₂<§)-0H

(53)

d-Biotin 0.1766g (0.52mmol) を dry DMF 2m £

に溶解 さ せ た 。 続い て 、 チ ラ ミ ン塩酸塩 0.090g (0.52m mol)、 Triethylamine 0. 157g (1.56mmol^ を 加 え 、 室温 で 48 hr 反応 さ せ た 。 反応終了後、 DMF を真空 ポ ン ブ で減圧下溜去 し た 。 残査 を シ リ カ ゲル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 に 付 し 単 離 を 行 な っ た （ 溶 離溶 媒 ： CH₂C1₂ 10 ： MeOH 1)。溶媒 を溜去 し 、 残査 を陽イ オ ン 交換樹脂 を通 し て 精製 し た 。 生成物 0. 138g、 収率 70% で得 ら れ た 。 ' H— NMR (CD₃0D/CDC 1₃ 270MHz)

H

3. 40 (2H m NH C H ₂ CH 〇)~0H

3. 15 (IH broad J )

'

0 )

？ H

2. 13 (2H t CH₂CH₂CN

0

H

1. 60 (4H m CH₂CH₂CH₂CH₂CN

0

f li

1. 38 2H broad CH ₂ CH ₂ CH ₂ CHCN IR (nu jol ) 3300. 2900. 1670. 1630, 1530.

1500, 1220, 1160, 820， 710 cm 実施例 3 2

(54) 原料 0.030g (0.050mmol) を H₂0 2ιη·β に溶解 し 、 氷 一 水 で冷却 し た 。 そ の 中 に C0NC HC1 0.018g/41 & (0.50 mmol) を 加 え た 。 続 い て 、 亜硝 酸 ナ ト リ ウ ム O. OlOg (0.14inmol) / H₂0 lm£ 溶液を加 え た 。 30分撹は ん後、 よ う 化 力 リ ゥ ム デ ン プ ン 試験紙 で 青紫色 を 確認 後 、 NaHC0₃ 0.045g (0.54ramol) を 加 え た 。 p H 試験紙で ァ ル カ リ '注を確認後 、 ΗΟ- θ VCH₂CH₂NC Biotin 0.027g (0.075mmol) を加 え た 。 反応温度 を 0 °C ^室温 に 温度 を 上 げ て 、 3 時 間 反応 さ せ た 。 反応終 了 後 、 H ₂0 を 溜去 し 、 残査 を 陽 イ オ ン 交換樹脂 を通 す 。 溶 出 液 に C0NC

NH- OH 水 を 加 え 、 H₂0 溜去 し 、 残査 を CC- 31 セ ル 口 — ス カ ラ ム で 単離 し た （ 溶離 溶媒 ： n- PrOH 6 ： cone NH₄0H 3 ： ΗζΟ 1)。 溶離溶媒 を溜去 し 、 残査を Dowex 50W-X イ オ ン 交換樹脂を通 し て NH ₃ 塩か ら K 塩 に か え た 。 生成物 34. 4mg、 収率 71 % で得 ら れた。 ¹ H-NMR (D ₂0 270MHz)

8. 03 (2H broad

7. 72 (2H broad )

7.42 (IH broad

7. 15 (IH broad

6.8 (IH broad )

5. 75 ( IH s H₂ ) 3. 75— 4. 40 ( 5H m H , , H₃. H₄. H₅. He) 3. 35 (2H broad HO \〇 >~CH ₂ C -—H ₂ N

2. 35— 2. 8 (5H m S-CH₂ S-CH H0~(〇ト CH₂CH₂N H

1. 95 (2H t -CH₂ CH ₂ CH₂CH₂ i;N )

0

I 、

1. 15 (4H broad - C H ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CNH )

0

0. 75 ( 2H broad - C H ₂ CH ₂ C H ₂ CH ₂ ^NH )

^{3 1} P-NMR ( 270MHz , D₂0)

0. 759 (H i ) 2. 210 (H₅) 2.913 (H₄) 実施例 3 3

I P ₃ 2 位 ア ナ ロ グ体 （ リ ジ ン ノ、·一 卜 ） の合成 ε -Boc - リ ジ ン の合成

„ _{v l} 、

(_n C_iH₁ a ) C LH^z CuCO a Cu (OH) ₂ (Boc) ₂0 H₂ S

H z N

• HC1 CO OH ^{H z}°

H

H

BocN (CH₂)

C00H

(55)

L -リ ジ ン塩 18. 3g (0. lmol) を熱水 250m £ に溶力 し た 。 こ れ ίこ CuC0₃ Cu (OH) ₂ · Η₂0 12g (0. 05raol ) を力 Πえ て約 10 分 間 煮沸 し 、 濾過 、 瀘液 を 冷却 し 、 こ の 中 に NaHC0₃ 8. 4g ( 0. lmol ) と （Boc) ₂0 24g (0. 1 lmol ) (D ジ 才 キ サ ン 溶 液 250m β を加 え た 。 さ ら に室温で 2 時間か き 混ぜ た あ と 、 析出 し た Lys (Boc) ^: ½ Cuを瀘取、 水洗 、 乾燥 さ せ た 。 こ の銅塩 14 g (0. 05mol ) を水 300m ·β に懸濁 し 、 氷 冷下 に 2 Μ - ΝΙΚ 0Η 50 m £ を加 え た 。 H₂S を 3 時間通 し 、 2 M -AcOH 75 m £ を加 え た の ち 、 H₂S 臭 の な く な る ま で空気 を通 じ た 。 CuS を濾去 し 、 瀘液 を濃縮 、 冷 蔵庫内放置 し 、 沈殿 を十分析出 さ せ たの ち 、 瀘取、 少 量の水で洗 っ た 。 瀘液 は 同 じ 操作を く り 返 し 、 合わせ て l l g 、 88% の収率で得 ら れた 。 m p 230 231 実施例 3 4

r , t

(55)

(56)

ε — Boc— リ ジ ン 0. 17g (0- 69miBol) を無水 DMF 2m £ lこ溶 か し た。 こ れに 4 -ア ジ ド 安息香酸 N-ヒ ド ロ キ シス ク シ ン ィ ミ ド エ ス テ ル 0. 18g (0. 69mmol) を加え室温で 6 時 間反応 さ せ た 。 反応終了後 、 真空ポ ン プで DMF を溜去 し 、 残査に ク ロ 口 ホ ル ム を加え抽出 、 10% NaHC0₃ で 分液、 水層 に 1 M - HC1水 を加え 、 ク ロ 口 ホ ル ム抽出 を 行 な っ た 。 有機層 に H₂0 を 加 え 、 洗浄 、 MgS0₄ で 乾 燥、 瀘過、 CHC1₃ を溜去 し 、 生成物が 0- 25 g 、 収率 93 % で得 ら れた 。 ¹ H-NMR (CDC1 a . 90 MHz

4. 70 (1H broad - CH

(^OOH

H

3. 0 (2H broad B o cNCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH CH )

H

1.85 (2H broad B o cNCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH

H I 、

1. 35 (13H m B o cNCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH )

IR (neat) 3350. 2950 , 2500, 2100. 1700. 1640 1600. 1530. 1480. 1360. 1280. 1180 1100. 840 , 740 era— ¹ 実施例 3 5

H

BocN (CH₂)

C<0>-N

n

0

(57) カ リレ ボ ン 酸 0 - 1136g (0.29mmol) を DMF 2m £ に 溶 力、 し た 。 こ れ iこ N - Hydroxy Succinimide 0.037g (0.32mmol) と DGC 0.062g (0- 30mmol)をカロ え た。 室温で 4 時間反応 後、 DC 尿素 を瀘過 、 瀘液 を真空ポ ン プで減圧下溜去 し た 。 残査に AcoEt を加え抽 出 、 H₂0 洗浄、 MgS0₄ で 乾燥、 瀘過 し 、 AcoEt を溜去、 残査 0.145gを単離精製 せず次の反応に進ん だ 。

IR (neat) 3900, 2950. 2850. 2100. 1800, 1780.

1730， 1680. 1640. 1600. 1480, 1440， 1360， 1280， 1200, 1070， 840.

750 cm 実施例 3 6

OH

(58) ス ク シ イ ミ ド エ ス テ ル 0. 14g (0. 29raraol ) を 無水 塩化 メ チ レ ン 2 m に 溶 か し た 。 こ れ に チ ラ ミ ン 塩 酸 塩 0. 050g (0. 29mmol) と Et₃N 0. 035g (0. 34mmol) をカロ え 、 室温 で 3 時間反応 さ せ た 。 反応終了後、 CH₂C1₂を加 え 抽出 、 H₂0 洗浄、 10% し ゅ う 酸洗浄、 H₂0 洗浄、 10% NaHCOa 水溶液洗浄、 H₂0 洗浄、 MgSO- 乾燥、 瀘過 、 CH₂C1₂溜去、 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り （ シ リ 力 ゲル C-300 9 g 溶離溶媒 CH₂C1₂ 1 ： Et ₂0 2 ) 生成 物 0. 085g、 収率 60% で得 られた。

)

H I

1.5 ( 15H m Boc, B o c N C H ₂ CH ₂ C H ₂ C H ₂ CH )

IR (nu jol) 3300. 2950. 2100, 1680. 1630， 1530， 1500. 1220, 1160. 820. 710 era 実施例 3 7

Boc リ ジ ン 0.080g (0- 16mnol)を塩ィ匕メ チ レ ン 1 mlに溶 か し た 。 こ れを 氷 一 水で冷却 し 、 こ の中 に TFA ( 卜 リ フ ル ォ ロ 酢酸 ） 1 m 1を加 え室温で 1 時間反応さ せ た。 反応終了後 、 TFA お よ び CH₂C1₂を溜去 し 、 残査を真空 ポ ン プで減圧下乾燥 さ せ た 。 残査 0.075gを単離精製せ ず次の反応に進ん だ 。 一

① ァ ミ ン 塩 0. 035g (0. 067mmol) を無 水 塩 化 メ チ レ ン 2 m £ に 溶 か し た 。 こ れ に ダ ン シ ル ク 口 ラ イ ド 0. 022 g (0.080mmol) を 加 え た 。 続 レ、 て Ε Ν 0. 02 Og (0.201m raol)を 加 え 、 室 温 で 一夜反応 さ せ た 。 反応終 了 後 、 CH₂C1₂を カロ え 抽 出 、 H₂0 洗浄 、 Sat NaHCO ₃ soln 洗 浄、 H₂0 洗浄、 MgSO- で乾燥、 濾過、 CH₂C1₂溜去 、 残 査 を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に付 し （ シ リ カ ゲル 6 g 、 溶離溶媒 CHC1₃ 7 ： MeOH 1 ) 、 生成物 0.026g、 収率 60% が得 ら れ た 。

, it

ώ？

CH ⁰旦

〃 (0>-N (60a

¹ H-N R (D SO d ₆ 270 MHz)

8.52 ( 1H d 1) 8.29 ( 1H d ) - 8.15 ( 1H d 3)

7.85 (2H d 16) 7.45 (2H m 2, 5)

7.20 (1H d 6) 7.05 (2H d 15) 7.00 (2H d 17)

6.75 (2H d 14) 5.60 (1H broad 18)

4.65 ( 1H broad 11) 3.40 (2H t 12)

2.95 (8H s \ 7J 2.65 (2H t 13)

1.85 (2H broad 10) 1.45 (4H broad 8, 9)

② ァ ミ ン塩 0- 030g (0- 057raraol) を無水 DMF 2 m -β tこ溶力 し た れに d - Biotin 0.021g ( 0.063mmol) を

カロ え た。 続い て Et₃N 0 - 009g (0.086mmol)カロ え て 、 12時 間反応さ せた 。 反応終了後、 DMF を真空ポ ン プで減圧 下溜去 し 、 カ ラ ム ク ロ マ ト で単離 （ シ リ カ ゲ ル 6 g 溶離溶媒 CH₂C1₂ 7： MeOH 1 MeOH) 、 生成物 0.025g、 収率 70% で得 ら れた 。

H

( &0b) ¹ H-N R (DMSO-de 270MHz)

8.21 ( 1H d 4) 8. 00 (2H d 16)

7.53 (1H broad 5) 7.10 (2H d 17)

7.05 (2H d 20 ) 6.85 ( 2 H d 20)

4.45 (2H m 3， 15) 4.25 (1H broad 6

3.40 (2H t 18) 3. 10 (3H m 11, 1) 2.75〜 3.0 (4Η m 2, 19) 2.10 (2Η t 10)

1.35— 1.80 ( 12 H m 7, 8, 9, 12. 13， 14 実施例 3 8

0

K

IP₃ (1 , 4, 5) 2 位 0.020g (0.032nnnol) を H₂0

2m£ に 溶 力 す 。 氷 一 水 で 冷去！] し 、 CONC HClO. OlZgZ Z? Ά (0.32mmol) を 力 Π え た 。 続 い て NaN0₂ 0.004g/ H₂0 lm £ ( 0.064mmol) を カロ え た 。 30分 間 0 °C で 撹 は ん 後 、 よ う 化力 リ ゥ ム デ ン プ ン試験紙で青紫色 を確認後、 Na HC0₃ 0.027 g (0.32raraol) をカロえ た。 pH試験紙で ア ル力 リ 性 を確認後 、 リ ジ ン ノ ー ト 0.021g (0- 032mmol) を加 え た 。 室温で 3 時間反応後 H₂0 を溜去 し 、 残査を陽ィ 才 ン交換樹脂を通 し た 。 溶出液を濃 ア ン モニ ア水 を加 え溜去 し 、 残査 を CC- 31 セ ル ロ ース カ ラ ム で単離 し た

( 溶離溶媒 ： n-PrOH 6 ： CONC NH₄0H 3 ： H₂0 1)。 solvent を溜去 し 、 残査を Dowex 50W-X ィ 才 ン交換樹 脂を通 し て NH₃ 塩か ら K 塩に かえ た。 生成物 0.025g、 収率 60 % で得 ら れた 。

一 —

H-NMR (D₂0， 270MHz) 8.52 ( IH d 15) 8.29 (IH d 18) 8. 15 ( IH d 17) 8. 03 (4H broad 1. 9

6.80~ 7.80 (10H m 2.3.4.5, 10, 16.19, 20)

5.80 (IH s H₂) 3.80 〜 4.60 (6H m H , , H₃. H₄

H₅， H₆, 8) 3.40 (2H broad 7)

3.00 (8H s 14. 21) 2.65 (2H broad 6)

1.85 (2H broad 11) 1.40 (4H broad 12， 13)

実施例 3 9

(6D '

iotin

K

0

IP₃ (1 , 4, 5) 2 位 -C-Q - H ₂ 0.020g (0.032mmol)を H₂0 2ra£ に溶か し た 。 氷 — 水で冷却 し 、 C0NC HC10.012gZ 27 μ. Ά ( 0. 32 mm ol ) を カ卩 え た 。 続 い て NaN0₂ 0. 004 g/ H ₂0 lm -β ( 0. 064mmol) をカロ え た ₆ 30分間 0 。C で撹は ん 後 、 よ う 化 デ ン プ ン 試験紙で青紫色 を確認後 、 NaHC0₃ 0. 027g (0. 32mniol )を加 え た。 pH試験紙で ア ル力 リ 性を 確認後 、 リ ジ ン ノ 一 卜 0. 020g (0. 032mmol) を加 え た 。 室温で 3 時間反応後 H₂0 を溜去 し 、 残査を陽イ オ ン交 換樹脂 を 通 し た 。 溶 出 液 を CONC 水 を 加 え 溜去 し 、 残査を CC- 31 セ ル ロ ー ス カ ラ ム で単離 し た 。 （溶 離溶媒 ： n-PrOH 6 ： CONC NH4OH 3 ： H₂0 1 ) solven t を溜去 し 、 残査 を Dowex 50w-x イ オ ン 交換樹脂 を使 つ て NH ₃塩か ら K 塩に かえ た。 生成物 0.023g、 収率 55 % で得 ら れた 。

P

Biotin

(61b)

ゾ

H-N R (D₂0 270MHz)

2

8. 03 (4H broad 1 , 9) 7. 72 (2H broad 2)

H 3

7. 42 ( IH broad 5) 7. 15 (IH broad 3) 7, 7. 05 (2H d 10) 6.8 (IH bro /ad 4) 5. 75 (IH S H₂) 3. 75 — 4. 60 (8H n H H i , H . H

/

H

H₅ , H_e , 8. 21. 24) 3. 35 (2H broad 7)

/

2. 35〜 3.2 (7H m 6, 14. 20. 19)

H /

H

2. 00 (2H t 15)

1. 50 (12H m 11 , 12. 13. 16. 17, 18) 2. 00 (2H t 15)

1. 50 (12H m 11 , 12, 13, 16, 17. 18)

実施例 4 0

別 法

Boc

(62) カ ル ボ ン 酸 0. 2755g (0. TOmmol) を塩化メ チ レ ン 2m £ に 溶か し た 。 こ れを氷 一 水で冷却 し 、 TFA を 2 m ·β 加 え 室温 で 1 時 間 反応 さ せ た 。 反応終 了 後 、 TFA お よ び CH₂C1₂を溜去 し 、 残査 を真空ポ ン プで減圧下乾燥さ せ すこ 。 残査 0. 2700 g を単離精製せず次の反応に進ん だ 。

(Me) ₂N

Et₃N. DMF Et₃N, DMF

63a: (63b)

① ②

①ァ ミ ン 塩 0. 1001g (0. 247mniol)を無水 DMF 2m β に溶力 し た 。 こ れ に ダン シ ル ク 口 ラ イ ド 0. 080g (0. 296romol) を 加 え た 。 続 い て Et ₃N 0. 075 g (0. 741ramol) を 加 え た 。 12時間反応後 、 真空 ボ ン ブ に て減圧下 DMFを溜去 し 、 残査 に ク ロ 口 ホ ル ム を加 え 、 抽出 、 有機層 に Sat NaHCO a soln を 加 え 分液操作 に つ て水層 に 2 N -HC1 solnを 加 え 、 ク ロ 口 ホ ル ム 抽 出 を 行 な っ た 。 H₂0 洗 浄、 MgSO で有機層乾燥、 濾過 、 CHC1₃ 溜去 し 、 生成 物 0. 0574 g 、 収率 44% が得 ら れた。 ¹ H

8. 29 ( 1H d ' 3) 8. 19 (1H d 4)

0

7. 18 (1H d 1 ) 6. 97 (2H d -C-(0>-N

、 .■ベ

4. 62 (1H broad -CH

H I

2.90 (8H s (Me) ₂N. SNCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ C H

1.8 (2H broad CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH )

1.4 (4H broad NCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH

② ァ ミ ン塩 0. 040g (0. 099mmol) を無水 D F 1 m -β tこ溶力 す 。 こ れ に ビ 才 チ ン N -ヒ ド ロ キ シ ス ク シ ニ イ ミ ド エ ス テ ル 0- 034g (0. 099mmol) をカロえ た。 続レ、 て Et₃N 0. 020 g (0. 198mniol )を加 え て室温で 20時間反応さ せ た 。 反応 終了後 、 真空 ボ ン ブ に て DMF を溜去 し 、 残査 を カ ラ ム ク ロ マ ト 単離 し た 。 （溶離溶媒 CHC1₃ 7 ： MeOH 3 ： conc H4OH 0. 3) 溶媒を溜去後、 陽イ オ ン 交換樹脂で カ ル ボ ン 酸 と し て取 出 し た 。 生成物 0. 043g、 収率 84% で得 ら れ た 。

¹ H-NMR (DMSO-de - 270 MHz)

ti? 〃

8. 00 (2H d N₃ ) 7. 53 (1H broad 4

.

ー¾

o_H

3. 13 (3H m CH₂CNCH₂CH₂ , 5

2.80 (2H m 1. 2) 2. 15 (2H t - CH₂ 1 H

N- 11

YH

1. 90 (2H broad CNNCH₂CH₂CH₂CH₂CH- )

H

1. 50 (10H m 8. 9. 10 NCH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ) 実施例 4 1

63a)

64a) 力 Jレ ホ - ン 酸 0. 050g (0. 095ramol) を無水 DMF lm £ に 溶力 > す 。 HOSu 0. 012g (0. 105minol) と DCC 0. 02 Og (0. 095 mmol) を加 え て 、 室温で 10時間反応さ せ た 。 反応後沈 殿物 を 瀘過 し 、 真空 ポ ン プ に て DM F を 減圧下溜去 し た 。 残査 0· 060gを単離精製せず、 次の反応に進ん だ 。

I R ( n u j 01 ) 3900 , 2950 , 2850. 2100. 1800,

1780. 1730. 1680. 1600. 1480 ,

1440. 1360. 1280, 1200. 1070.

840, 750 cm^{- 1} 実施例 4 2

(Me

(65a) ィ ミ ド エ ス テ ゾレ 0.060g (0.095mmol) を無水 DMF lm£ iこ 溶か し た 。 こ れに チ ラ ミ ン塩酸塩 0.016g (0.095mraol) お よ び E"N 0.014g (0. 143ntmol)を力 tl え て室温 で 12時間 反応 さ せ た 。 反応終 了後 、 真空 ポ ン プ に て 減圧下 DMF を 溜 去 、 残 査 に CH₂C1₂を 加 え 抽 出 、 H₂0 洗 浄 、 sat NaHC0₃水 溶液 洗 浄 、 H₂0 洗浄 、 MgS0₄ で 乾燥 、 瀘過 CH₂C1₂溜去、 残査 を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に付 し ( シ リ カ ゲ ル 、 溶離溶媒 ： CHC1₃ 7 ： MeOH 1 ) 、 生 成物 0.030gを収率 50% で得 た 。

H-NMR (DMSO-de 270 MHz) H

8.52 (IH d 〜 1) 8.29 (IH d - 4) 8.15 (IH d 〜 3)

7.85 (2H d 1 J 7.45 (2H n 2. 5j

7.20 (IH d 6) 7.05 (2H d 15) 7.00 (2H d 17)

6.75 (2H d 14) 5.60 ( IH broad 18)

.65 (IH broad 1 '1一) 3.40 (2H t 12)

2.95 (8H s 19, 7) 2.65 (2H t 13)

1.85 (2H broad 10J 1. 5 (4H broad 8. 実施例 4 3

HOHOVCH₂CH₂NH -HC1

Et ₃N DMF

(65b) カ ソレ ボ ン 酸 0- 040g (0.077mmol) を 無水 DMF lm £ に 溶 力 す 。 HOCu 0. 010g (0.084mmol) と DCC 0.016g (0.077 ramol) を 加 え て 室 温 で 10時 間 反応 さ せ た 。 反応終 了 後 、 沈殿物 を瀘過 し 、 真空ポ ン プに て減圧下 DMF を溜 去す る 。 残査 に無水 DMF lm を加え溶か し た 。 こ れに チ ラ ミ ン 塩 酸 塩 0 - 013g (0.077mmol) と Et₃N 0. 012g (0.116mraol) を加 え て室温で 15時間反応さ せ る 。 反応 終了 後 DMFを溜去 し 、 残査を カ ラ ム ク ロ マ 卜 し （溶離 溶媒 ： CH₂C1₂ 7 ： MeOH MeOH) 、 生成物 を 0.031g、 収率 63% で得 た 。 一 —

8.21 (IH d 4) 8.00 (2H d 16)

7.53 (IH broad 5) 7.10 (2H d 17)

7.05 (2H d 20) 6.85 (2H d 20)

4.45 (2H m 3' 15) 4.25 (IH broad 6)

3.40 (2H t 18) 3.10 (3H m 11. 1)

2.75〜 3.0 (4H m 2, 19) 2.10 (2H t 10)

— >

1.35— 1.80 (12H m 7, 8, 9, 12, 13, 14) 実施例 4 4 8-0 -ベ ン ジ ル 才 キ シ メ チ ル - 9, 0- (二 卜 口 べ ン ゾ イ リレ ） - 2 , 4 , 10 - ト リ オ キ シ シ ク ロ （ 3. 3, 1 , 1³· ⁷) デ カ ン - 6- ォ 一 ル (103)

ィヒ合物 il (652.6mg. 2.200mmol)を無水ベ ン ゼ ン で 共 沸 し た 後 、 窒素雰 囲 気下 、 無水 ピ リ ジ ン に 溶 解 さ せ 0 °C で P · 二 卜 口 べ ン ゾ イ ル ク 口 リ ド （ 119. 8mg, 2.240mmol)お よ び触媒量 の 4 · ジ メ チ ル ァ ミ ノ ピ リ ジ ン を加 え て室温 で 2 時間撹拌 し た。

エ ー テ ル で.抽 出 し 、 水 、 飽和硫酸カ リ ウ ム 水溶液 、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム水溶液、 飽和塩化ナ 卜 リ ゥ ム 水溶液で洗浄 し 、 有機層 に無水硫酸マ グ ネ シ ウ ム を加 え て乾燥 さ せ 、 濾過濃縮後残査を カ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ ー （ 酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 2 ) で単離 し 化 合物 ill を得 た 。

化合物 103

収量 763.6mg ( 78¾)

Rf値 0.45 ( 酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 / 1 )

1 H-NMR ( δ in CDC"， 90MHz)

4.05 - 4.65 ( 6H. ra . H, -H₆) 4.95 (2H. s, PhCH₂)

5.45 (1H. s. CH) 7.23 (5H, s, Ph)

8.20 (4H. s. PhCO)

I R 3420.2900.1700， 1590.1510， 1440， 1360，

1335.1255， 1150.1120.1090, 1080, 1035. 990, 940， 920， 840， 740.710.690 cm - ¹

実施例 4 5 8 -ベ ン ジルォ キ シ メ チ ル -9- (4 -ニ ト ロ ベ ン ジ ル ） -6- ベ ン ジ ル -2, 4.10 -卜 リ オ キ サ 卜 リ シ ク 口 （ 3, 3.1， 1⁵- ⁷) デ カ ナ 一 ル （110)

化合物 i l ( 853.6rag. 1 - 92raraol) を無水ベ ン ゼ ン で 共沸 し た後 、 窒素雰囲気下 N. N -ジ メ チ ル ホ ル ム ア ミ ド に 溶 解 さ せ 、 0 °C で 酸 銀 （ I ) ( 2222.4 m g, 9.59m mol)お よ びべ ン ジ ル ブ 口 ミ ド （2.28ml. 19.2mmol)をカ卩 え て室温 で 一晚撹拌 し た 。 酢酸ェチ ルで抽 出 し 、 水、 1 N - HC1 soln, 飽和炭酸水素ナ ト リ ウ ム 、 飽和塩化 ナ 卜 リ ゥ ム 水溶液で 洗浄 し 有機層 に無水硫酸マ グ ネ シ ゥ ム を加 え て 乾燥 さ せ 、 濾過濃縮後残査 を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ エ ー テ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 4 ) で単 離 し 化合物 を 得 た 。

化合物 110

収量 479. 6mg (47%)

R f 0. 6 (酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 2 )

'H-N R ( δ in CDC1 a， 90MHz)

4. 10-4. 30 (5H. m, H , -H₆) 4. 40 (4H. s. PhCH₂) 5. 07 ( 1H. s. CH) 5. 35 (1H. t. H₂)

7. 10 (10H. Ph) 8. 10 (4H. m, PhCO)

実施例 4 6 2- (4- ニ ト ロ べ ン ゾィ ル ） -6- ベ ン ジ ル 一 ミ オ ー イ ノ シ 卜 一 ル (111)

ィヒ合物 UJ ( 278. Omg, 0. 519mmol)を少量の無水 ジ ク ロ ロ メ タ ン に 溶 解 し O t: で 無水 5 M HC1Z無 水 MeOH soln (25m & ) を加 え て室温で一晚撹拌 し た 。 メ タ ノ —ル で デカ ン テ 一 シ ヨ ン し て留去 し た。 残査を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ メ タ ノ ールノジ ク ロ ロ メ タ ン =

1 / 20) で単離 し 化合物 を得た 。

化合物 111

収量 139. 2mg (66%) '

R f 0. 18 ( eOH/CH₂Cl = 1/10)

¹ H-NMR ( δ in CDaOD -f CDCl a . 270MHz)

3. 50 (4H. m) 4. 15 ( 1H. m) 4. 75 ( 2 H . m . PhCH₂) 5. 50 ( 1H， ra, H₂) 7. 20 ( 5 H . s . Ph )

8. 05 (4H. d. PhCO)

実施例 4 7 2- (4 -ニ ト ロ べ ン ゾィ ル ） - &- ベ ン ジ ル - 1 '， 5 'ジ ヒ ド ロ - （2 ' - 4 ' - 3 ' - ベ ン ゾ ジ 才 キ サ ホ ス フ エ ピ ニ ル ） ミ オ イ ノ シ ト ー ル ( 112)

ィヒ合物 HI ( 127. 3mg. 0. 314mmol)を窒素雰囲気下、 0 °C で テ 卜 ラ ゾー ル （ 264. lmg. 3 - 769mmol ) をカロ え て 無水 ジ ク ロ ロ メ タ ン に懸濁 さ せ 1 , 5 -ジ ヒ ド ロ - 3- ジ ェ チ ル ァ ミ ノ - 2 , 4 , 3- ベ ン ゾ ジ ォ キ サ ホ ス フ ェ ビ ア ン ( 450.9mg, 1. 885mraol) を力 [I え て そ の後室温で 30分間 撹拌 し た。 室温で 水 を加え 10分間撹拌後 一 42°C に冷却 し て m — ク ロ 口 過安息香酸 （ 542. lmg. 2 - 513mmol) を 加 え O t; で 30分間撹拌 し た 。 ジ ク ロ ロ メ タ ン で抽出 し 10%亜硫酸ナ 卜 リ ゥ ム 水溶液、 飽和炭酸水素ナ 卜 リ ゥ ム水溶液、 水 、 飽和塩化ナ ト リ ウ ム の順に 洗浄 し 有機 層 に無水硫酸ナ 卜 リ ゥ ム を加 え て乾燥さ せ瀘過濃縮後 残査を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （酢酸ェチ ルノへ キ サ ン = 2 ノ 1 一 メ タ ノ ー ル Ζジ ク ロ ロ メ タ ン = 1 ノ 30) で精製 し て化合物 U を得 た。

化合物 112

収量 341. 8mg (95¾) '

R f 0.43 (MeOH/CH₂Cl ₂ = 1/10)

¹ H-N R ( δ in CDC 1₃ , 90MHz)

4. 30 - 5. 50 (24H. ra ) 7. 0 (21H. m) 8. 0 (4H. d) I R 3370.2900.2850. 1725. 1500. 1440. 1360.

1250. 1140. 1000.830.720cm- '

実施例 4 8 2- (4 -ァ ミ ノ べ ン ゾ ィ ノレ ） ミ オ イ ノ シ ト — ノレ - 1 , 3 , 4 , 5— 卜 リ ホ ス フ ェ 一 卜 （ JJJ )

ィ匕 合物 il (271.7mg. 0.237 mm ol) に メ タ ノ ー ル /水 = 4 / 1 (V/V) の 混 合溶媒 と 塩化 ジ ク ロ ロ メ タ ン を 少 量加 え て 溶解 さ せ 5 % ノ、' ラ ジ ウ ム 一 炭 素 を ス ノ、' チ ユ ラ 2 杯分加 え て 撹拌 し 減圧 し て 水素置換 し た 。 室温 で 24 時 間撹拌 し た 後濾過 し 、 水 で 十分洗浄 し た 。 瀘液 を 濃 縮 し 残査 を セ ル ロ ー ス カ ラ ム ( CC-31. n-PrOH/conc. NH₃aq. /H₂0= 5/4/1 ) で 精製 し 化合物 を 得 た 。 化合物 113

収量 79.9mg (50¾)

R f 0. 17 (n— PrOH/conc. NH₃aq/H₂0 = 5/4/l )

1 H-NMR ( δ in D₂0, 270MHz)

3· 93 (1H, t， H₆) 4.07 ( 1H, dt, H , ) 4. 10 (1H m, H_s) 4. 15 (1H, dt. H₃) 4.39 ( 1 H . q . H ₄ )

5.70 (1H. t. H₂) 6.69 (2H. d) 7.79 (2H. d)

実施例 4 9

ゲ ゾレ （ Activated CH Sepharose 4B) を 1 g 精手平 し 、 チ ラ ミ ン （ 1. 56mg. 9 u mol) を 試 験 管 中 力 ヅ ブ リ ン グ ノヽ' ッ フ ァ ー ( 0. 1 M NaHCO 3 溶 液 、 0. 5MNaClを 含 む ）

( 6m £ ) で 溶 解 し 、 1 時 間振 と う さ せ た 。 同 時 に 化 合 物 113 (4.05mg. 6 i mol) を 水 （500 u £ ) に 溶解 し 濃塩 酸 （ 2 を加 え て 酸性条件下、 亜硝酸ナ ト リ ウ ム (0.92mg. 1.2 X 10" ²mraol) をカロ え撹拌す る 。 1 時間撹 拌後 ヨ ウ 化 力 リ ゥ ム デ ン プ ン 紙で青紫色で あ る こ と を 確認後、 ジ ァ ゾ二 ゥ ム塩を得 た 。 こ の ジ ァ ゾ二 ゥ ム塩 を試験管中の ゲル に加 え て少量の 力 ッ プ リ ン グバ ッ フ ア ー ツ ク ス で洗浄 し て （ ゲル Zカ ツ プ リ ン グノヽ' ッ フ ァ - = 3ni£ / 6mfi ) さ ら に室温 で 1 時間振 と う し た 。 こ れを グ ラ ス フ イ リレ タ ー （ G 3 ) 上 に移 し 、 過剰の リ ガ ン ド を （ 0.05M 卜 リ ス塩酸バ ッ フ ァ 一 、 PH8.0、 0.5M NaClを含む ） と （ 0.05M ギ酸ノヽ' ッ フ ァ ー 、 PH4.0、 0.5 M NaCl を含む ） の溶液で交互 に数回洗浄 し 乾燥後ゲ ル 114 を集め冷蔵庫中 で保存 し た。

実施例 5 0

ィ匕合物 ill (14.9mg. 0.0221mraol) ¾r H ₂0 ( 3.75m£ ) に加 え 、 オ ー ト ク レ ーブ中 80atmに水素圧を上げ、 60 °C で 2 時間反応す る 。 触媒を瀘過 し 水 を減圧留去 し 、 残査を セ リレ ロ ー ス カ ラ ム ( n-PrOH/conc. NH₃aq. /H₂0 = 5/4/1)で精製 し 、 化合物 H を得た 。

化合物 115

収量 14.3mg (96.8%)

R f 0.24 (n-Pr0H/conc. NH₃aq/H₂0=5/5/l)

1 H-N R ( δ in D₂0， 270MHz)

3.7-4.3 (5H. m, H , -H₆)

5.6 ( 1H. m. H₂ )

実施例 5 1 ,

ィ匕合物 H ( 10.6mg. D- 0157mmol)を水 （ 1 · 1 m 1 )に 溶 か し 0 °C で濃塩酸 （9.7 ϋ ·β , 0.315mraol)を加 え撹拌す る 。 こ の懸濁液 に亜硝酸ナ ト リ ウ ム （ 2.4mg. 0.0315 inmol) を 加 え 撹拌 し た 。 ア ジ 化 ナ ト リ ウ ム （ 2. 3mg, 0.0315mmol) を加え た 。 2 時間反応後溶媒 を減圧留去 し て セ ル ロ ー ス カ ラ ム ( n-PrOH/conc. NH₃aq. /H₂0 = 5/4 /1) で単離す る と 化合物 U1 が得 ら れた 。

化合物 116

収量 7.6mg (69%)

R f 0.36 (n-Pr0H/conc. NH₃aq. /H₂0=5/5/l)

1 H-NMR ( δ in D ₂0. 270MHz)

3.9-4.5 (5H. m. Hに H₆)

5.8 ( 1 H， s , H ₂ )

実施例 5 2

ゲ >レ （ Activated CH Sepharose 4B) 1 g を精手平 し 、 グ ラ ス フ ィ ル タ ー （ G 3 ) 上 で l mM-HClsoln. (200 m£ ) を 用 い て そ れを膨潤 し 洗浄 し た。 カ ッ プ リ ン グ バ ッ フ ァ 一 （ 0.1M NaHC0₃、 PH8.3) 6 m £ に リ ガ ン ド 115 (5.8mg. 8.7 jLi raol)を溶解 し た 。 同 バ ッ フ ァ ーで す ばや く ゲ ル を洗浄 し 、 ゲル懸濁液 と リ ガ ン ド 溶液を室 温で 1 時間振 と う し た 。 こ れを グ ラ ス フ ィ ル タ 一 （ G 3 ) 上に移 し 過剰の リ ガ ン ド を （ 0.05 M 卜 リ ス塩酸バ ッ フ ァ ー 、 PH8.0、 0.5M NaCl を含む ） と （ 0.05M ギ 酸バ ッ フ ァ 一 、 ΡΗ4· 0、 0.5Μ NaCl を含 む ） の溶液で 交互 に数回洗浄 し 、 乾燥後ゲ ル U1 を集め冷蔵庫中 で 保存 し た 。

実施例 5 3

ゲ ル ( Epoxy - activated Sepharose 6B) 1 g を精秤 し 、 グ ラ ス フ ィ ル タ ー （ G 3 ) 上で蒸留水 （ 100m を 用 い て そ，れ を膨潤 し 洗浄 し た 。 蒸留水 （500 ） に リ ガ ン ド 1_15 (4. Img) を溶解 し た。 同溶液でゲ ル懸濁 一 一

液 を手早 く 洗浄 し 試験管 に移 し室温 、 PH 9 で 16時間振 と う し 反 応 さ せ た 後 、 こ れ を グ ラ ス フ ィ ル タ ー （ 3 G ) 上 に 移 し 過剰 の リ ガ ン ド を蒸留水 、 炭酸バ ッ フ ァ - (0. lMNaHC0₃, PH8. 0)、酢酸水溶液 ( 0. 1M CH₃ C00H、 PH 4 ) で 交互に 洗浄 し 、 ' 1 Mエ タ ノ ール ァ ミ ン に 4 時 間放置 し て活性基 を ブ ロ ッ ク し た 。 そ の後乾燥 し た ゲ ル 118 を集め冷蔵庫中 に保存 し た。

実施例 5 4

3 , 4-ジ —0- (4—メ ト キ シ ベ ン ジ ノレ ） -1 , 2 : 5. 6—ジ — 0- シ ク ロ へ キ シ リ デ ン ー ミ オ イ ノ シ ト ー ル （ )

ィ匕 合 物 12_1 ( 452. 8mg, 1 - 33rarao 1 ) を ベ ン ゼ ン 共 沸 し 、 N , N -ジ メ チ ル ホ ル ム ア ミ ド （ 7 m £ ) 中 に 溶解 し た 。 0 で で 50% 水 素化 ナ 卜 リ ゥ ム ( 140. 6rag. 2. 93m mol)お よ び P — メ ト キ シベ ン ジ ル ク ロ リ ド

3.33nimol) を一晩反応 さ せ た。 一 テ ル で抽出 し 、 飽 和塩化ナ ト リ ウ ム 溶液 （ 7 回 ） 洗浄 し た。 有機相 に無 水硫酸ナ ト リ ウ ム を加 え乾燥さ せ、 減圧濃縮す る 。 こ れを フ ラ ッ シ ュ カ ラ ム （酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 9 一 1 ノ 4 ) で単離 し 化合物 を得 た 。

化合物 122

収量 632. 6mg (82¾)

Rf値 0. 35 (酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 / 4 )

1 H-NMR ( δ in CDC" , 90MHz)

1. 10- 1. 90 (b. C 6 Η , ο . 20Η) 3 - 20-4. 30 (m 環 H. 6H)

3. 78 (s. - OCH , 6H)

4. 70-4. 81 (m . - CH₂ - Ph, 4H)

実施例 5 5

3. 4—ジ -0- (4 -メ 卜 キ シ ベ ン ジ ノレ ） - 1. 2- 0— シ ク ロ へ キ シ リ デ ン ー ミ オ イ ノ シ ト ー ル ( 123)

化 合物 122 ( 142. 8mg , 0. 246mmo l )を べ ン ゼ ン 共沸 し 、 密栓 し た 。 室温で 0. 5 % 1₂Z MeOH溶液 （1. 75m £ ) を加 え 、 注意深 く 反応系を確認 し なが ら 3 時間撹は ん し た 。 反応終了後、 亜硫酸ナ ト リ ウ ム · 5 水和物 を水 に 溶 解 さ せ た 溶液 を 系 中 に 滴下 し 、 ヨ ウ 素 を 還 元 し た。 酢酸ェチ ル で抽 出 し 、 飽和炭酸水素ナ ト リ ウ ム溶 液 、 飽和塩化ナ ト リ ウ ム溶液 （ 2 回 ） で洗浄 し 、 有機 層 を無水硫酸マ グ ネ シ ウ ム で乾燥す る 。 こ れを瀘過濃 縮後 、 フ ラ ッ シ ュ カ ラ ム （ 酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1

/ 1 ) で単離 し 、 化合物 を得 た。

化合物 123

収量 309. 6mg ( 74%) Rf値 0.43 ( MeOH/CH_zCl 2 = 1/10)

1 H-NMR ( S in CDCl ₃. 90MHz)

1.13-1.85 (b. C₆H , ₀, 1 OH)

2.50-2.75 ( 1 -OH. 2H)

3.20-4.80 (m. 環 H.- 6H)

3.62 (s, -OCH₃. 6H)

4.45-4.80 (m. -CH₂ -Ph. 4H)

実施例 5 6

3, 4 -ジ - 0- (4 -メ 卜 キ シ ベ ン ジ ル ） -5, 6- ジ - 0- ベ ン ジ ル - 1 , 2 _ 0 - シ ク ロ へ キ シ リ デ ン 一 ミ 才 ィ ノ シ 卜 一 ル (124)

ィヒ 合物 12_3 ( 309. 6mg. 0.618mmol)を ベ ン ゼ ン 共 沸 し 、 窒 素雰 囲 気 下 、 N . N - ジ メ チ ル ホ ル ム ア ミ ド

( 5 m £ ) 中 に 溶解 し た 。 こ れ に 0 °C で べ ン ジ ル ク ロ リ ド （164 jLt £ . 1.42mmol) お よ び 50% 水素ィヒ ナ 卜 リ ゥ ム

( 65.3mg. 1 - 36mraol) を加 え 、 40 °C に 上げ 2.5 時間撹 は ん し た 。 エ ー テ ル で 抽 出 し 、 飽和塩化 ナ ト リ ウ ム 溶 液 （ 7 回 ） で 洗浄 し 、 有機層 を無水硫酸ナ ト リ ウ ム で 乾燥 さ せ濾過濃縮後 、 フ ラ ッ シ ュ カ ラ ム （酢酸ェ チ ル /へ キ サ ン = 1 ノ 6 ) で 単離 し.、 化合物 124 を得 た 。 化合物 124

収量 361. lmg (87¾)

Rf値 0.54 ( 酢酸ェ チ-ルノへ キ サ ン = 1 / 2 ) 1 H-NMR ( δ in CDCl 3. 90MHz)

1.37 - 1.80 (b , C₆H , ₀, 1 OH)

3.25 -4.25 (in. 環 H, 6H)

実施例 5 7

3, 4-ジ -0- (4-メ ト キ シベ ン ジ ル ） — 5.6- ジ - 0- ベ ン ジ ル ー ミ オ イ ノ シ ト ー ル (125)

ィ匕 合物 124 (367. lmg. 0.539mmol)を ベ ン ゼ ン 共沸 し 、 密栓下 、 少量 ジ ク ロ ロ メ タ ン に溶解 し た。 さ ら に 0 °C で 0. 1M HCl/MeOH溶液 ( 5 m £ ) を加 え 4 時間撹は ん し た 。 こ れを減圧下溶媒を留去す る 。 残査を フ ラ ッ シ ュ カ ラ ム （酢酸ェ チ ルダへ キ サ ン = 1 ノ 2 ) で精製 一 — し 、 化合物 JJ を 得 た 。

化合物 125

収量 165. lmg ( 51%)

Rf値 0. 45 ( 酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 2 / 1 )

¹ H-NHR ( δ in CDCl ₃. - 90MHz)

2.60 (m. OH, 2H)

3. 32-4. 12 (m. 璟 H, 6H)

3. 80 (s. -0CH₃. 6H)

4. 62 - 5. 00 (in. -CH₂-Ph. 8H)

14H)

実施例 5 8

1 -0 -メ ト キ シ メ チ ノレ - 3, 4- ジ - 0- (4 -メ ト キ シ ベ ン ジ ル ） — 5, 6- ジ — 0- ベ ン ジ ル 一 ミ オ イ ノ シ ト ー ル （ 1 ) ィ匕 合物 1_2_5 ( 165. lmg. 0. 275mmol ) を ベ ン ゼ ン 共沸 し 、 無水 メ タ ノ ー ル に 溶解 し た 。 塩化 カ ル シ ウ ム 管 を つ け 、 蒸留塔 で 反応 さ せ た 。 室温 で 、 π -ジ ブ チ ル チ ン ォ キ シ ド （ 75. 5mg. 0. 304mmol )を 作 用 さ せ 、 2 時 間還 流 さ せ 2 、 3 回 メ タ ノ ー ル を 留 去 し た 。 そ の 後 メ タ ノ — ル を 完全 に 留 去 し 、 N . N -ジ メ チ ル ホ ル ム ア ミ ド に 溶 解 し た 。 こ れに 系外で 、 P -メ ト キ シ メ チル ク ロ リ ド （1 32 M -β ) お よ び ト リ ェ チ ル ァ ミ ン （244 /M £ ) を加 え て 塩 に し た も の を反応系内 に加 え た。 60 °C で 6 時間加熱 し た 。 反応終了後 、 水 に 溶解 し た フ ッ 化カ リ ウ ム を加 え た 。 酢酸ェ チ ル で抽 出 し 、 飽和塩化ナ ト リ ウ ム溶液 ( 5 回 ） で洗浄 し 、 有機層 を無水硫酸マ グ ネ シ ウ ム で 乾燥 さ せ た 。 減圧留去後 、 残査を薄相 ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ ー （酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 2 ノ 3 ， 2 度） で精製 し 、 化合物 1 を得た 。

化合物 126

収量 42.4mg (24¾)

Rf値 0.42 ( 酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 2 )

実施例 5 9

1-0—メ ト キ シ メ チ ル — 2— 0— (4 -二 卜 口 べ ン ゾ ィ ソレ ） - 3, 4- ジ -0- (メ ト キ シ ベ ン ジ ル ） - 5.6- ジ - 0- ベ ン ジ ル ー ミ オ イ ノ シ ト ー ル (127)

ィヒ 合 物 1 6 (42.4rag, 0- 0706mmol)を べ ン ゼ ン 共沸 し 、 窒素雰囲気下 ピ リ ジ ン 中 に溶解 し た。 0 ^DC で P-二 卜 口 べ ン ゾ イ ル ク ロ リ ド （ 14.4mg. 0.0776mmol) お よ び触媒量の 4 -ジ メ チ ル ア ミ ノ ピ リ ジ ン を加 え 、 室温で 3 時間撹 は ん し た 。 酢酸ェ チ ルで抽出 し 、 飽和硫酸水 素 カ リ ウ ム水溶液 （ 2 回 ） 、 飽和炭酸水素ナ ト リ ウ ム 水溶液 、 飽和塩化ナ ト リ ウ ム （ 2 回 ） で洗浄 し 、 有機 層 を無水硫酸マ グネ シ ウ ム で乾燥 し た。 瀘過濃縮後、 残査 を 薄相 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ 酢酸ェチ ルズへ キ サ ン = 1 ノ 2 ) で 精製 し 、 化合物 in.を得 た 。

化合物 127

収量 41. 6mg (79%)

Rf値 0· 41 (酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 1 ノ 2 ) 1 H-NMR ( δ in CDC1₃， 90MHz)

3. 35 - 3. 70 (ra, 環 H， 5H)

3. 80 (s, -0CH₃. 9H)

4. 69-4.95 (ra, - CH₂ - Ph. 1 OH)

5.90 (t. H₂. 1H)

7. 05 - 7. 33 (m. Ph. 18H)

実施例 6 0

2-0— (4 -二 卜 口 べ ン ソ'イ リレ ） -5. 6 -ジ -0— ベ ン ジ ル ー ミ オ イ ノ シ ト ー ル ( 129)

ィ匕合物 HI (38. 4mg, 0. 0555ramol) に 0 °C で ジ ク 口 口 メ タ ン 水 = 18ノ 1 (v/v) に 溶解 し た 。 こ れに 2, 3-ジ ク ロ 口 - 5. 6- ジ シ ァ ノ -1. 4- ベ ン ゾ キ ノ ン （DDQ) (31. 5 mg. 0. 139mmol)を カロ え 、 7. 5 時間撹 は ん し た 。 ジ ク ロ ロ メ タ ン で抽 出 し 、 飽和炭酸水素ナ ト リ ウ ム 溶液 （ 3 回 ） 、 飽和塩化ナ ト リ ウ ム溶液で 洗浄 し 、 有機層 に無 水硫酸マ グ ネ シ ウ ム で乾燥 し 、 瀘過濃縮後、 残査 128 を少量の ジ ク 口 口 メ タ ン に 溶解 し 5 M -HCl/MeOH 溶液 ( Ι ια β ) を加 え て 3 時間撹はん し た 。 減圧留去後薄相 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ 酢酸 ェ チ ル ノ へ キ サ ン = 2 ノ 1 ) で精製 し 、 化合物 i l を得た 。

化合物 129

収量 13. 7rag ( 58¾)

Rf値 0. 36 (酢酸ェ チ ルノへ キ サ ン = 2 ノ 1 ) 1 H-NMR ( S in CDC1 a + CD₃0D. 90MHz)

3. 38 -3. 89 (m, 5H. 環 H)

4. 70-4. 83 (m . 4H， Ph - GH₂ - )

5. 55 (t, 1H, H₂ )

7. 05-7. 30 (d. 10H. Ph)

H H

7. 92 -8. 10 (d. 4H, -0C^N0₂ )

H H 実施例 6 1

2— 0- (4 -二 卜 口 ベ ン ソ' ィ レ ） 5 , 6 ジ — 0— ベ ン ジ Jレ 一 ミ オ イ ノ シ ト ー ル - 1. 3 , 4- 卜 リ - 0 - キ シ リ レ ン ホ ス フ ヱ 一 卜 ( 130) 化合物 1 ^ ( 14. 3mg. 0. 309mraol ) を窒素雰囲気下 、 0 °C で テ 卜 ラ ゾー ル （ 19. 5rag, 0 - 278mmo l )をカロ え て無 水 ジ ク ロ ロ メ タ ン に懸濁 さ せ 1. 5 -ジ ヒ ド ロ - 3- ジェ チ ル ァ ミ ノ - 2, 4, 3- ベ ン ゾ ジ ォ キ サ ホ ス フ エ ピ ン （ 33.3 mg. 0. 139mmol)を力!] え て そ の後 、 室温で 30分間撹 は ん 後 、 水 （100 ) を加 え て そ の後一 42 °C に冷却 し て m- ク ロ 口 過安息香酸 ( 39.9mg. 0. 185mmol)を加え て 0 °C で 30分撹 は ん し た 。 ジ ク.ロ ロ メ タ ン で抽出 し 10% 亜硫 酸 ナ ト リ ウ ム 水溶 液 、 飽和 炭 酸 水 素 ナ ト リ ウ ム 水 溶 液 、 水飽和塩化ナ ト リ ウ ム水溶液 、 の順 に洗浄 し 有機 層 に 無水 硫 酸 ナ 卜 リ ゥ ム を 加 え て 乾燥 さ せ 瀘過 濃縮 後 、 残査 を薄相 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ メ タ ノ ー ルメ ジ ク ロ 口' メ タ ン = 1 , 10) で 精製 し て 化 合物 JJ を 得 た 。

化合物 130

収量 15.2mg (95¾)

Rf値 0.43 (MeOH/CH₂Cl 2 ) = 1/10)

実施例 6 2

2-0- (4 -ァ ミ ノ ベ ン ゾ ィ ル ） -ミ オ イ ノ シ ト ー ル - 1. 3.4 -三 リ ン 酸 （ ϋΐ )

化合物 Hi (15.2mg. 0.0151mmol) に メ タ ノ ー ルノ水 = 4 / 1 (v/v) の 混合溶媒 と 塩化 ジ ク ロ ロ メ タ ン を少 量加 え て 溶解 さ せ 5 % パ ラ ジ ウ ム 一炭素を 2 杯分加 え て撹 は ん し 減圧 し て 水素置換 し た 。 室温で 24時間撹は ん し た 後濾過 し 水 で十分洗浄 し た 。 瀘液を濃縮 し 残査 を セ ル ロ ー ス カ ラ ム （ CC— 31. n-PrOH/conc. H₃aq. /

H₂0 = 5/4/Uで 精製 し 化合物 ill を 得 た 。 化合物 131

収量 9.4mg (quant )

Rf値 0.28 (n-PrOH/conc. NH₃aq. /H20 = 5/4/1) 1 H-N R ( δ in D₂0, 270MHz)

3.40 (t. 1H. H₆) -

3.63 ( t . 1H, H_s)

3.85 -4.20 (BI, 3H. Η» , H₃, H₄)

5.50 (s. 1H, H₂)

実施例 6 3

ゲ レ （ Activated CH-Sepharose 4B)を 1 g 精秤 し 、 チ ラ ミ ン （ 1.5mg, 8.6 raol)を試験管中 カ ツ ブ リ ン グ ノ ッ フ ァ ー ( 0.1M NaHCO 3 溶液 、 0.5MNaClを 含 む ）

( 6m£ ) で溶解 し 1 時間振 と う さ せ た。 同時に化合物 131 (約 4 mg、 6- 7 X 10— ³ramol) を水 （200 ίΐ β ) 【こ溶解 し 濃塩酸 （ 2 £ ) を加 え て 酸性条件下亜硝酸ナ 卜 リ ゥ ム （ l rag. 1.4 X l 0_²ramol ) を加 え撹は んす る 。 1 時間撹は ん後 ョ ゥ 化 カ リ ゥ ム デ ン プ ン 紙で青紫色 で あ る こ と を確認後、 ジ ァ ゾ二 ゥ ム塩 を得た。 こ の ジ ァ ゾ 二 ゥ ム 塩 を 試験管中 の ゲ ル に 力 Π え て 、 少量 の 力 ッ ブ リ ン グ ノ ッ フ ァ ー で 洗浄 し て （ ゲ ル ノ-カ ツ プ リ ン グ ノヽ' ッ フ ァ ー Sm^e Z Gm^ ) さ ら に 、 室 温 で 1 時 間振 と う し た 。 こ れ を グ ラ ス フ ィ ル タ 一 （ G 3 ) 上 に 移 し 、 過剰 の リ ガ ン ド を （ 0 - 05 M ト .リ ス 塩酸ノヽ' ッ フ ァ ー 、 PH 8 - 0. 0. 5M NaCl を 含 む ） と （ 0. 05M ギ 酸 ノ、' ッ フ ァ ー 、 PH 4.0, 0.5M NaClを 含 む ） の溶液 で 交互 に 数 回洗浄 し 、 乾燥後 ゲ ル 132 を 集 め 冷蔵庫 中 に 保存 し た 。 施 例 A iPa-タ ンパク質複合体

0.1M NaHCO

2-p-T ミ ノ ベ ン ゾィ ル - IP

( 1 ) 実施例 6 4

B S A

実施例 6 5 IP₃ -タ ン パ ク 質複合 体

M S A

実施例 6 6

K L H 実施 例 6 4 ィ匕 合物 （ 1 ) 10rag (0- 016mmo l) を 水 2m £ に 溶 力 し た 。 こ れ を 氷 一 水 で 冷 却 し 、 .cone. HC1 水 0. 025ml ( 0 . 3 3 m m 0 1 ) を加 え た 。 p H試験紙で酸性を確認後 、 NaN0_z 2- 2mg (0.032mtnol)を加 え た„ つ い で 20分〜 30分 撹拌 し た 。 KIよ う 素で ん-ぶん試験紙で紫色 を確認 し 、 0.1 M NaHC0₃ 水溶液 を加 え 、 ア ルカ リ 性に し た。 こ の中 に B S A ( Sigma 社製） 40mg (0.6 x l0- ³ramol) を 加 え 、 氷 一 水あ る い は冷蔵庫内 で 3 日 間反応さ せ た。 反応終 了後 、 透析膜 に反応溶液を移 し 、 冷蔵庫内 で 4 日 間透析 し た 。 時 々 、 水 を交換 し た 。 最後 に反応溶液 を凍結乾燥に よ っ て取 り 除い た。 生成物 48mgを得た 。 実施例 6 5

実 施 例 6 4 の B S A の 力 わ り に M S A (Organon Technika社製） 40mgを加 え る 他 は実施例 6 4 と 同様 に し て 、 反応 を行い 、 生成物 47.6mgを得た。

実施例 6 6

ィ匕 合物 （ 1 ) 10mg (0.016niniol) を 水 2m £ に 溶 か し た 。 こ れ を 氷 一 水 で 冷 却 し 、 cone. HC1 水 0. 025ml ( 0 . 3 3 ra m o l ) を加 え た。 p H試験紙で酸性を確認後、 NaNO ₂ 2.2rag (0.032mraol)を力 Π え た 。 つ い で 20分〜 30分 撹拌 し た 。 KIよ う 素で ん ぷ ん試験紙で紫色 を確認 し 、 0.1 M NaHC0₃ 水溶液 を加 え 、 ア ル カ リ 性に し た 。 こ の中 に K L H ( Sigma 社製） 40mgを 加 え 、 氷 一 水あ る い は 冷蔵庫内 で 3 日 間反応 さ せ た 。 反応終了後 、 '透析 膜 に反応溶液を移 し ， 冷蔵庫内 で 4 日 間透析 し た 。 時 々 、 水 を交換 し た 。 最後 に反応溶液 を凍結乾燥に よ つ て取 り 除 い た 。 生成物 47mgを 得 た 。

1 , 3, 4-IP₃ -タ ン パ ク 質複合体

0. 1M NaHCO

( 2 ) 実施例 6 7

B S A

実施例 6 8 1 , 3, 4-IP₃ -タ ン パ ク 質複合体

M S A

実施例 6 9

K L H 実施例 6 7

ィ匕合物 ( 2 ) 1 mg ( 0.00149mraol) を水 100 u 中 に 溶解 し 、 0 °〇 で 濃 塩 酸 （0. 5 £ . 0.0149mraol) を カロ え 、 酸性条件下 、 亜硝酸ナ ト リ ウ ム （0- 23mg. 0.00298 mmol) を作用 さ せ 、 15分間撹拌 し た 。 ヨ ウ 化カ リ ウ ム デ ン プ ン 試験紙で青紫色で あ る こ と を確認後 、 0. 1 M NaHC0₃水溶液 ( H 8.3) で 中和 し 、 B S A 30mg (0.45 10" ³raraol) を 水 0- 5ra に 溶解 し 、 系 内 に 加 え た 。 0 °C に保 っ た ま ま 19時間撹拌 し た 。 こ の反応溶液 を透 析膜 に移 し 、 水 （ 200 m £ X 2 ) 中 で冷蔵庫中 に保存 し て 48時 間 透析 し 、 精 製 し た 。 反 応液 を ナ ス フ ラ ス コ (50m£ ) に移 し 、 凍結乾-燥 し て精製物 1.3, 4- IP₃ -タ ン ノ ク 質 （ B S A ) 複合体 28.6mgを得た。

実施例 6 8

実施例 6 7 の B S A の かわ り に M S A 30mgを加え る 他は実施例 6 7 と 同様 に し て 、 反応を行い 、 生成物 28 m gを得 た 。

実施例 6 9

ィ匕合物 （ 2 ) 0- 5mg ( 0.00075raraol)を水 100 £ 中 に 溶解 し 、 0 で濃塩酸 （ 0.25 μ £ ) を加え 、 酸性条件 下、 亜硝酸ナ 卜 リ ウ ム （0- 12mg- 0.00149mmol) を水 50 μ £ に 溶解 し て反応 さ せ 、 15分間撹拌 し た 。 ヨ ウ ィヒカ リ ゥ ム デ ン プ ン試験紙で青紫色で あ る こ と を確認後 、 0.1 M NaHC0₃水溶液 （ pH 8.3) で 中和 し た 。 こ の反応 溶液の 1/5 (ィヒ合物 （ 2 ) を O. lmg 含 む ） に 水 2m£ を力 Π え 、 こ の 中 に K L H 13.9mgを力 Π え 、 さ ら に 0 °C で 21時 間撹拌 し た 。 こ の反応溶液 を透析膜に移 し 、 水 （ 200 m£ X 2 ) 中 で 、 冷蔵庫中 に保存 し て 72時間透析 し 精 製 し た 。 反応液を ナ ス フ ラ ス コ （30m ) に移 し 、 凍結 乾燥 し て 1 , 3, 4- IP₃ -タ ン パ ク 質複合体 （10- lmg ) が得 ら れた 。 IP^ -タ ン パ ク 質複合体

0. 1M NaHCO

( 3 ) 実 施 例 7 0

Β S A

実施例 .7 1 IP₄ -タ ン パ ク 質複合体

M S A

実施例 7 2

K L H 実施例 7 0

ィ匕合物 （ 3 ) Img ( 0. 00149ramol) ¾r H₂0 1 m £ に 溶力 > し た 。 こ れ を 氷 一 水 で 冷 却 し 、 cone . HC1 水 0. 5 μ £ (0. 0149mmol )を 加 え た 。 pH試験紙 で 酸性 を 確認後 、 NaNO ₂ 2. 23mg (0. 0030nimol)を力 Π え た 。 20分〜 30分撹拌 後 、 KIよ う 素で んぷん試験紙で紫色 を確認 し 、 0. 1 M NaHCO ₃水 溶 液 を 加 え 、 ア ル カ リ 性 に し た 。 こ の 中 に B S A 30mgを加 え 、 冷蔵庫内 で 3 日 間反応 さ せ た 。 反 応終 了後 、 透析膜 に 反応溶液 を 入れ、 冷蔵庫内 で 4 曰 間透析 し た 。 時 々 、 H ₂0 を交換 し た 。 最後 に反応溶液 を 凍 結 乾燥 に よ っ て 取 り 除 い た 。 生 成物 28. 6m_gを 得 た 。

実施例 7 1

実施例 7 0 の B S A の 力 わ り に M S A 30mg を を加 え る 他 は実施例 7 0 と 同-様に し て 、 反応 を行 い 、 生成 物 28. 1 ra gを得 た 。

実施例 7 2

ィヒ合物 （ 3 ) 0 - 5mg を H₂0 0.1m£ に溶力 し た 。 こ れ を 氷 一 水 で 冷 却 し 、 cone. HC1 水 0. 25 ί £ を 加 え すこ 。 ρΗ試験紙 で 酸性 を 確認後 、 NaN0₂ 0. 12mgを 加 え た 。 20分〜 30分撹拌後 、 KIよ う 素で んぷん試験紙で紫 色 を確認 し 、 0.1 M NaHC0₃ 水溶液を加え ア ル力 リ 性 に し た 。 こ の 中 に K L H 13.9nig 、 水 2πΐ·β を加え 、 冷 蔵庫内 で 3 日 間反応 さ せた。 反応終了後、 透析膜に反 応 溶 液 を 入 れ 、 冷 蔵庫 内 で 4 日 間 透析 し た 。 時 々 、 Η₂0 を交換 し た 。 最後 に反応溶液を凍結乾燥に よ っ て 取 り 除 い た 。 生成物 10.2 を得た 。

実験例 1 IP₃- 5 -ホ ス フ ァ タ ー ゼ と の相互作用

ヒ 卜 赤血球 ゴ ー ス ト お よ び ラ ツ ト 脳抽 出 細胞質液

( c y t 0 s 01 )の I P ₃ - 5 -ホ ス フ ァ タ ー ゼ の 活 '性 を 涌1 定'し 7こ 。 Dowriesり の 方 法 ( Downes, C. P. e t al： Bi ochem .

J- . i , 169 - 177 ( 1982 ) ) に従 い ヒ 卜 血液 よ り 赤血 球 ゴ ー ス ト を 集 め 、 酵素活性 は 2 つ の 方 法 で 測 定 し た 。 】 つ は Downesら の上記論文記載の方法で 、 放射化 学的測定 を行 っ た 。 も う 1 つ の方法 は 0.1 «πΜ の各 I Ρ ₃ 類化 合物 と 赤血球 ゴ ー ス ト （ 〜 0.5. mg) あ る い は ラ ッ 卜 脳抽 出細胞質液 （ 22 " g) と を イ ン キ ュ ベ ー ト し て 、 遊離 の無機 リ ン を Youngburg ら の方法 ( Youngburg, G. E- and Youngburg. M. V. ； J. Lab. Clin. Med. , 1_6. 158 - 168 (1930) )で漁 j定 す る も の で あ る 。

[³²P] IP₃ (比放射活性〜 2000 Ci/mmol) は Amersham 社 よ り 入手 し た 。 対照の IP₃ は Sigma 社の ホ ス フ ォ イ ノ シ チ ド 画分 を Grads and Bal 1 ou の 方法 ( Grads. C . an d Bal lou, C. E. ； J. Biol . C h e m . , 236, 54 - 60 (1961) )に従 い ア ル 力 リ 分解 し て調製 し 、 SAX カ ラ ム を 用 い HPLCで精製 し て 用 い た 。 結果を表 1 に示す 。

表 1 IP₃- 5-ホスファターゼとの相互作用 赤血球ゴース卜 脳抽出細胞質液

化合物

Ki 加水分解量 Ki 加水分解】 nmoi nmol

8 D Lの化合物 2.1^a 1.7¹ 15.6: 3.6'

6 D Lの化合物 3-0 3.8 11.8

9 D L (IT=ペンセ 5.6 4.8 ND 4.1

ン） の化合物

IP₃ 14.2 16.7 57 12.5

7D Lの化合物 16 9.6 52.7 5.6

a Ki値 は Lineweaver-Burk ブ ロ ッ 卜 よ り 算出 し た。 各値は 2 回の実験の平均値で あ る 。 b 37Τ: 、 60分イ ン キ ュ ベー ト し た。 c 37 、 10分イ ン キ ュ ベー ト し た 。 と も に 3 回 の実験の平均値を示す 。 d 実施せず 。 実験例 2 IP₃-3-キ ナ ーゼ と の相互作用 ラ ッ 卜 の 全脳 を 50mll食 塩 、 lOmM Hepes緩衝 液 ( _PH 7· 4)お よ び lOraM /3 — メ ルカ ブ ト エ タ ノ ー ル を含 む溶 液 に 入 れ Dounceホ モ ジ ナ イ ザ 一 で ホ モ ジ ナ イ ズ し 、 100.000 g , 60分遠心 し て上清を得、 細胞質液 （ cyto sol ) と し た 。 酵素活性 は本発明者の一人 ら が先に報告 し た方法 amagucn i . K . , H i r a t a . M . e t al； Biochem. J. , 24 . 787 - 791 ( 1987)及び Kiraura. Y. , Hirata. M. et al： Arch. Biochem. Biophys. . 257, 363-369

( 1987) )で 測 定 し すこ 。 [³H】 IP₃ ( 比放 射活性 17 Ci/ mmolあ る レ、 は 1 Ci/mmol)は Amersham社 よ り 入手 し た 。 結果 を表 2 に示す 。 表 2 IP₃-3 -キ ナ ーゼ と の相互作用 化合物

< 0.01 M Ca 17 u M Ca

IP₃ 1.0 0.99

90 L (R"=ベンゼン） 0.36 2.0

の化^!

6DLの化^！ 2.4 K 33.9

1 •

Ki値 （ 【³H】 IP₃ の リ ン 酸化を 阻害す る ） は Lin ewe aver-Burk プ ロ ッ ト よ り 算出 し た 。 各値は 2 回の 実験の平均値で あ る 。 実験例 3

IPs 結合能への影響お よ び Ca^{2 +} 遊離能

Worleyら の方法 （Worley, P. F. et al : Nature, 325. 159 - 161 ( 1987 ) ) に 従 い 、 ラ ッ ト 小脳の ミ ク ロ ゾ ー ム を 調製 し 、 ミ ク ロ ゾ ー ム へ の [³H] IP₃ 結 合 を 測 定 し た 。 ま た 牛 副 腎 cortexの ミ ク 口 ゾ ー ム 画分 を 用 い た Amersham社 キ ッ 卜 （ TRK.1000) を 用 い て [³H] IP₃ の binding assa も 行 っ た 。 一方、 本発明者の一人 ら が 先に 幸 β告 し た方法 ( Hirata. M. et al； Mo 1. Pharma- col. , 23. 78- 85 (1983) )に よ り 、 サ ポニ ン 処理 を行い 形質膜 を透過性に し た モ ル モ ッ 卜 腹腔マ ク ロ フ ァ ー ジ を得 、 Ca² *の取 り 込みお よ び遊離 を 別 に報告 し た方法 (Hirata. M. et al： Biochem. J - . 223, 229 - 236 ( 198 4) ) に よ り 検討 し た 。 結-果を表 3 に示す 。 表 3 IPs 結合能への影響お よ び Ca^{2 +}遊離能

I P ₃ 結合能 I C _s。 ^a

化合物 Ca遊離能 ヅ 卜 Amersham h EC₅0

キ ッ ト nU n

IP₃ 15 1.4 0.2

95 5 0.9

9DL(7Xヒ^ 3 55 6.8 0.3

7DLの化^ 3 85 4.2 1 - 6

ヒ^ J 44 3 1.2 a [³H] IP₃ 結合能の阻害活性。 各 々 2 回の実験 の平均値 を示す 。 実験例 4

1 0 D ' お よ び 1 1 D ' を 用 い た IP₃- 5 -ホ ス フ ァ タ ーゼ 、 IP₃- 3 -キ ナ ー ゼお よ び IP₃ 結合蛋 白質の分離 • 精製

ラ ッ 卜 脳顆粒画分 を 1 % の TritonX- 100 で 4 。C 、 30 分抽 出 し 、 抽 出液 （ 4.9 mg/m£ X 6 m β ) を 3 ιπΰ の 1 0 D ' を つ め た カ ラ ム に 充填 し た 。 吸着蛋白 質 を溶 出 さ せ る た め 0. 2 M あ る い は 0. 5 M の 食塩 水 を 流 し た 。 3 m £ フ ラ ク シ ョ ン ずつ 10本集め 、 更 に 11本 目 よ り 1 m £ ずつ集め た 。 3 本の フ ラ ク シ ョ ン （ Νο· 2、 12 お よ び 22 ) の ΙΡ₃ -5_ホ ス フ ァ 夕 一 ゼ 活性 お よ び [ ³Η] ΙΡ₃ 結合活性を 、 そ れぞれ IP₃ 10 /z M あ る い は 3. 5nM 濃度 で 測定 し た 。 抽 出物の比活性 は 、 前者 は 42nraol/ rag/min, 後者は 78. 5 fmol/mgで あ っ た 。 0. 5M食塩水 で の溶出液は 、 初 め て の抽出液に 比べ 3 〜 5 倍両活性 に つ い て 濃縮 さ れて い た。 ま た I P ₃ - 3 -キ ナ ーゼ活性に つ い て も 濃縮さ れて い た 。 図 6 A に結果を示す。 他の 2 回 の実験 も 同様の結果で あ っ た 。

一方 1 1 D ' をつめ た カ ラ ム に お い て は吸着蛋 白質 は ご く わ ずかで あ り 、 0. 2 M食塩水で は測定で き る ほ ど の蛋 白 質は溶出せず 、 0. 5M食塩水で す べ て の蛋 白 質が溶出 さ れた 。 [³H】 IP₃ 結合の比活性は初め の抽出 液の 95倍 ま で に上 っ た 。 他方 IP₃-5-ホ ス フ ァ タ ーゼ活 性は カ ラ ム を素通 り し た。 即 ち ラ ッ 卜 脳 Triton抽 出液 ( 4. 1 mg/ x 13 m £ ) を 3 m £ の 1 1 D ' をつ め た カ ラ ム に 充 て ん し 、 3 m フ ラ ク シ ョ ン ず つ 10本集 め 、 更 に 11本 目 よ り 1 πΐ·β ずつ集め た 。 2 本の フ ラ ク シ ヨ ン （ No. 2お よ び 12) の IP₃ -5 -ホ ス フ ァ タ 一 ゼ活性 お よ び [ ³H] IP₃ 結合活性を 、 そ れぞれ ΙΡ₃ Ι Ο ίχ Μ お よ び 60ηΜで測定 し た 。 は じ めの抽出物の比活性は そ れぞ l 38.9ninol/ing/min あ る い は 0.51pmol/mgで あ っ た 。 結果 を 図 6 B に示す 。 他の 2 回 の実験 も 同様の結果で あ っ た 。

実験例 5 IP₄- 5 -ホ ス フ ァ タ ーゼ と の相互作用

ヒ 卜 赤血球 ゴ一 ス 卜 の- IP₄- 5 -ホ ス フ ァ タ ーゼ の活性 を測定 し た 。 実験例 1 の Dowriesら の方法に従い 、 血液 よ り 赤血球 ゴー ス ト を集め 、 酵素活性 を放射化学的 に 測定 し た 。 反応液 （ 0.2n«£ ) に は 、 20mM Hepes緩衝液 ( pH7.0) 、 5 mU MgCl₂、 0 - 2mg/ mfi サ ポ ニ ン お よ び 370 Bq [³H] I P4 を含む 1 ίΐ Μ D-IP₄ が含 ま れる 。 37 °C で 2 分間 前保温を行 っ た後、 150 g の赤血球 ゴ一 ス 卜 を 加 え て 反応 が 開始 さ れ る 。 そ し て 15分反応 を続 け 、 同量の 20% ト リ ク ロ ル酢酸を加え て 、 反応を止め た 。 除 タ ン パ ク 後、 3 m£ の ジェチ ルェ一テ ルで 3 回 抽 出 し 、 [³H】 IP₄ の減少を HPLCの SAX カ ラ ム に サ ン ブ ル を 充て ん し て測定 し た。 結果を表 4 お よ び図 2 3 に示す 。

実験例 6 IP₄- 3-ホ ス フ ァ タ ーゼ と の相互作用

実験例 1 お よ び 5 と 同様に し て ヒ 卜 赤血球 ゴー ス 卜 を用 い る 系 で試験 を行 つ た。 IP₄- 5 -ホ ス フ ァ タ ーゼの 測定系 と 異 な る と こ ろ は MgCl₂ の かわ り に 2 mM EDTA を含む こ と と 、 反応時間 を 40分 と し た こ と で あ る 。 結 果を表 4 お よ び図 2 4 に示す 。

実験例 7 I P ₃ - 5 -ホ ス フ ァ ク ー ゼ と の相互作用 実験例 1 に従 い 、 試験を行 っ た 。 基質の [³H】 IP₃ は 10 M 濃度 を 用 い た 。 ア ナ ロ グと IP₃ ア ナ ロ グの 阻害活性の比較 も 行 え た 。 結果を表 4 お よ び図 2 5 に 示 す 。

実験例 8 [³H] IP, 結合能への影響

ラ ッ 卜 小脳 の ミ ク ロ ゾ ー ム を 実験例 3 に 従 い 調製 し 、 ミ ク ロ ゾ ー ム への [³H] IP 結合 を測定 し た 。 反応 液 （ 0.5ιπ·β ) に は 50mMの 2- (N-モ ル ホ リ ノ ） エ タ ン ス ノレ ホ ン 酸 ( es, pH5.0) 緩衝液、 Hepes 緩衝液、 Tris -HC1緩衝 液 の 中 か ら 選 ば れ る 緩衝液 、 1 inM EDTA 、 1.18ηΜ [³Η] ΙΡ₄お よ び の ミ ク ロ ゾ ー ム画分が 含 ま れ る 。 反応を氷上で 15分間行い 、 そ の後、 反応液 を減圧下 、 Whatman GF/Cグ ラ ス ー フ ァ イ ノ、'一 フ ィ ル タ 一 を通 し た 。 こ の瀘紙を 2 m£ の緩衝液で洗 い 、 乾燥 し 、 放射能 を測定 し た 。 結果を図 2 6 に示す 。

4 IP₄-5-ホスファターゼおよび IP₃-ホスファターゼ

に対する IP₄ アナログの効力

Ki Ki IP₄-5- 化合物 [³H]IP₄- 5- [³H]IP₄-3- 1.4.5-[³H] ホスファタ ~

ホスファターゼ ホスファターゼ IPa-5- による

ホスファターゼ 加水分解 nniol

IP₄ 5.2^a 2.8^b 2.5^a l.l^c

KG194 0.8 1.4 0.7 0.70

KG210 12.8 3.3 6 0.74

a 見力 け の Kiは Dixon プ ロ ッ 卜 か ら 決定 し た 。 各 値 は 2 回 の実験の平均値で あ る 。

b ICs。は 図 2 4 よ り 算出 し た 。

c ヒ 卜 赤血球 ゴ ー ス ト （ 0- 34mg) を lO M の IP₄ ア ナ ロ グ と 37で 、 60分間 イ ン キ ュ ベー ト し た 。 各値は duplicate に よ る 3 回 の試験の平均値で あ る 。

産業上の利用 分野

本発 明 の ィ ノ シ ト ール誘導体は 医薬 と し て の利 用 分 野 を も ち 、 更 に イ ノ シ ト ール誘導体 と ボ リ ブブチ ド 、 タ ン パ ク 質類 と の結合物質は研究試薬、 医薬診断薬、

(健康 ） 食品 な ど と し ての利用 分野を有す る 。 す なわ ち 、 本発明 の I P ₃ 誘導体は 、 そ の生物活性に お い て 、 IPs そ の も の と 大 き く か わ ら ぬ活性 を 有 す る も' の 、 IP₃ の 作 用 等 に 対 し て 阻害活性 を 有 す る 化 合物 で あ り 、 そ れ 自 体 、 生 体 に 、 外部 か ら 投与 す る こ と に よ り 、 生体内 で生産 さ れ る IP₃ 同様の作用 あ る い は生体 内 で生産 さ れた IP₃ に拮抗的 に 作用 す る こ と に よ り 医 薬 と し て の活性を現わ す。 一方、 本発明の IP₄ 誘導体 も 、 そ の生物活性に お いて 、 IP- そ の も の と 大 き く か わ ら ぬ活性 を有す る も の 、 IP₃ の作用等あ る い は IP₄ の 作 用 等 に 阻害活性 を 有 す る 化 合物 で あ り 、 そ れ 自 体、 生体に 、 外部か ら 投与す る こ と に よ り 、 生体内で 生産 さ れ る IP₃、 1, 3, 4-IP₃あ る い は IP₄ 同様の作用 、 あ る い は生体内 で生産 さ れた ΙΡ₃、 1, 3, 4- ΙΡ₃あ る い は IP, に拮抗的 に作用 す る こ と に よ り 医薬 と し て の活性 を現わ す 。 更 に ま た本発明 は 、 IP₃ 類、 IP< 類の生体 内代謝 に 関与す る IP₃ ホ ス フ ァ タ ーゼ、 IP₄ ホ ス フ ァ タ 一 ゼ、 IP₃ キ ナ ー ゼ 、 IP₄ キ ナ ーゼ 、 IP₃ レ セ プ タ 一 、 IP. レ セ ブ タ ー な どの蛋白質の分離 - 精製 に有用 な IP₃ 誘導体結合固相担体、 IP₄ 誘導体結合固相担体 も 提供 し 、 こ れ ら 蛋 白 質の活性部位、 IP₃ 類化合物、 IP4 類化合物 と の結合部位の解析、 更に は こ れ ら 蛋 白 質の遺伝子解析、 細胞 、 菌体に よ る 遺伝子工学的生産 に道 を 開 く こ と に な る 。

ま た 、 本 発 明 の IP₃、 1.3.4-IP3. IP₄等 の ビ 才 チ ン 、 蛍光物質結合物質 は 、 イ ノ シ ト ー ル リ ン 酸化合物 関連の ホ ス フ ァ タ ー ゼ 、 キ ナ ーゼ 、 レ セ ブ タ ー等の親 和性 タ ン パ ク の活性部位の探索、 作用 機序や構造ー活 性相 関 な どの研究を す る う え で有用 で あ る 。 即 ち 、 光 照射 で ナ イ ト レ ン を 発生さ せ 、 活性点の近傍の ァ ミ ノ 酸残基 と I P ₃ 等 と を共有結合 さ せ 、 そ の部位の検索の 指標 と し て ビ 才 チ ン 一 ァ.ビ ジ ン複合体プ ロ ーブあ る い は蛍光 を利用 し た プ ロ ー ブが製造 さ れた。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 一般式 （ I )

[ こ こ で A は （CH₂ ) _n CH (R ' ) NH₂ ( 即 ち 、 カ ル ボ ン 酸 の つ い た も の が α 、 β 、 Ύ 、 δ ま た は ε - ア ミ ノ 酸

R ¹

(CH₂) „CH (R ' ) N = C: (CH₂) „CH (R ' ) NHCH

R²

(CH CH (R ' NHCONHR (CH₂) „CH (R * ) NHCOOR⁴ (CH CH (R * NHCOR⁵、

NHCONHR COOR"

R ¹

NHCOR C

NHCONHR

NHCOOR⁴ NHCOR

ま た は

く^^ で あ り 、 R ' は 水素原子 、 炭素数 1 〜 5 の低級 ア ル キ ル基 、 低 級 ヒ ド ロ キ シ ア ル キ ル基 、 低級 ア ミ ノ ア ル キ ル基 、 フ ェ ニ ル基 、 p -ヒ ド ロ キ シ フ エ ニ ル基 、 ベ ン ジ ル基 、 P- ヒ ド ロ キ シ ベ ン ジ ル基 、 3 -メ チ ルイ ン ド ー ル基 ま た は 5 -メ チ ル イ ミ ダ ゾ ー ル 基等 々 で あ り 、 n = 0 〜 5 、 R ' 〜 R ⁵ は 水素原子 、 ア ル キ ル基 、 ア ル ケ ニ ル 、 ァ ル キ ニ ル 、 フ エ ニ ル基 で あ り 、 フ エ ニ ル基お よ び シ ク 口 へ キ シ ル 基 に あ っ て は 、 炭 素数 1 〜 4 の ア ル キ ル 基 、 ノヽ ロ ゲ ン で 、 モ ノ ー な い し テ 卜 ラ ー 置換 さ れ て い て も よ レ、 。 B は 水 素 原 子 、 NH₂ ま た は NHG0CF₃ で あ る 。 ®は フ リ ー な い し 保護基 で保護 さ れ た リ ン 酸基で あ る 。 ] で 表 わ さ れ る イ ノ シ ト ー ル誘導体 ま た は そ の 薬学 的 に 許容 さ れ る 塩類 。

2 . —般'式 （ I ) で 表わ さ れ る イ ノ シ ト ー ル誘導体 を結 合 し た 固 相担体 。

3 . ィ ノ シ 卜 一 ル -4， 5- ニ リ ン 酸誘導体の 1 位の水 酸基 を シ リ ル化試剤 で予め保護 し 、 し か る の ち に 、 各 種 カ ル ボ ン 酸類 、 特 に 1 個の ア ミ ノ 基 な い し は 二 ト ロ 基 を有 す る カ ル ボ ン 酸類 と を反応せ し め 、 更 に脱 シ リ ル基反応 を行 い 、 次 に 1.位に リ ン 酸化反応を行 い 、 2 位の各種カ ル ボ ン 酸エ ス テ ル置換ィ ノ シ ト ール - 1.4.5 - 三 リ ン 酸誘導体 と し て 、 更に還元剤 を反応さ せ る こ と に よ り 、 2 位の各種 ア ミ ノ 基置換カ ル ボ ン 酸エス テ ル置 換 ィ ノ シ ト ー ル - 1 , 4.5 - 三 リ ン 酸 0 塩 類 と し た 後 、 還元 、 亜硝酸類 と ア ジ ド 化合物 と の反応、 亜硝酸 類 と P -ア ミ ノ エ チ ル フ エ ノ ーリレ と 酸類 と の反応、 ア ル デ ヒ ド 類 と の反応、 ケ ト ン類 と の反応、 イ ソ シ ァ ネ ー 卜 類 と の反応、 ク ロ ル炭酸エ ス テ ル類 と の反応あ る い は カ ル ボ ン 酸類 と の反応に よ り 得 ら れ る一般式 （ I ) の塩類の製造方法。

4 . 一般式 （ II ) ま た は （ ΠΙ )

( Π ) ( ΠΙ )

( こ こ で A は （CH₂) _nCH (R ' ) NH₂ (即 ち 、 カ ル ボ ン 酸が つ い た も の が 、 α — 、 /3 — 、 了 一 、 δ — 、 ε — ァ ミ ノ 酸類で あ る ）

で あ り 、 R ' は水素原子、 炭素数 1 〜 5 の低級ア ル キ ル基、 低級 ヒ ド ロ キ シ ア ルキ ル基、 低級 ア ミ ノ ア ル キ ル基、 フ エ ニ ル基、 P -ヒ ド ロ キ シ フ エ ニル基、 ベ ン ジ ル基、 P -ヒ ド ロ キ シベ ン ジル基、 3 -メ チル イ ン ド ール 基 ま た は 5 -メ チ ル イ ミ ダゾ一ル基等 々 で あ り 、 n = 0 〜 5 、 R ' 〜 R ⁵ は水素原子、 ア ル キル基、 ア ルケニ ル基、 ア ル キ ニ ル基又は フ エ ニル基で あ り 、 フ エ ニ ル 基お よ び シ ク ロ へ キ シ ル基に あ っ て は 、 炭素数 1 〜 4 の ア ル キ ル基 、 ノヽ ロ ゲ ン で 、 モ ノ ー な い し テ ト ラ ー 置換 さ れ て い て も よ い 。 B は 水素原子 、 NH₂ ま た は NHCOCFa で あ る 。 （ は フ リ ー な い し 保護基で保護 さ れ た リ ン 酸基で あ る 。 ） で表わ さ れる イ ノ シ ト ール誘導 体 ま た は そ の薬学的 に許容 さ れる塩類。

5 . —般式 （ II ) 又 は （ ΠΙ ) で表わ さ れる イ ノ シ 卜 ー ル誘導体を結合 し た 固相担体。

6 . 5 、 6 位 ま た は 6 位をベ ン ジル基又は置換ベ ン ジ ル基 、 2 位 を ァ シ ル基 で 保護 し た ミ オ イ ノ シ ト ー ル を リ ン 酸 化 す る こ と を 特 徴 と す る 一 般 式 （ Π ) 又 は ( ΠΙ ) の 製造 法 。

7 . —般 式 （ I ) 、 （ II ) あ る レゝ は （ m ) で 表 わ さ れ る イ ノ シ ト ー ル誘導体-と 、 ポ リ ペ プ チ ド 、 タ ン ノヽ ' ク 質類 と の 結合物質 。

8 . 特許請求項 1 の 結合物質 の製造方法 。

( ι ) ( II ) ( πι )

[ こ こ で Α は （CH ₂ ) _n CH ( R ' ) ΝΗ ₂ ( 即 ち 、 カ ル ボ ン 酸 の つ い すこ も の が a 、 β 、 丫 、 δ ,、 ε — ア ミ ノ 酸類 ） 、

H ₂CH₂NHC-((^J)

で あ り 、 B は水素原子、 NH₂ ま た は NHC0CF₃ で あ る 。