WO1991002735A1 - Composes chimques a base d'une molecule de netropsine ou de distamycine couplee a un agent intercalant, procede de preparation desdits composes et compositions pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Composes chimques a base d'une molecule de netropsine ou de distamycine couplee a un agent intercalant, procede de preparation desdits composes et compositions pharmaceutiques les contenant Download PDF

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distamycin
intercalating agent
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Christian Auclair
Gilles Gosselin
Jean-Louis Imbach
Claude Paoletti
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Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs)
Institut Gustave Roussy
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    • C12N2310/321—2'-O-R Modification

Definitions

  • the present invention relates to chemical compounds with cytotoxic activity.
  • Netropsin and distamycin which have a polypyrrolecarboxamide structure are anti-viral agents of natural origin.
  • the present invention relates to chemical compounds, characterized in that they consist of a netropsin or distamycin molecule or derived from netropsin or distamycin chemically coupled to an intercalating agent.
  • molecule derived from netropsin or from distamycin is meant compounds having the polypyrrolecarboxamide structure of the type:
  • n is an integer from 1 to 4 .
  • said structure possibly comprising other substituents.
  • an intercalating agent which is preferably an intercalating chromophore
  • netropsin makes it possible to significantly increase its association constant for DNA without disturbing its ability to selectively recognize sequences rich in pairs of AT base.
  • the present invention relates to a chemical compound, characterized in that it consists of a netropsin or distamycin molecule or derived from netropsin or distamycin coupled to an intercalating chromophore of oxazolopyridocarbazole type or of psolene.
  • the coupling between these two molecules is preferably carried out via an alkylenyl radical, in particular comprising an essentially polymethylenic chain having from 1 to 10 carbon atoms.
  • the present invention therefore relates to conjugates of formula I
  • Y represents the intercalating agent
  • n ' represents an integer from 1 to 10
  • n an integer from 1 to 4,
  • X represents a pharmaceutically acceptable anion such as acetate or chloride.
  • - n ' represents an integer from 1 to 6
  • - R represents an amidine group
  • n is an integer from 2 to 6.
  • the present invention also relates to the process for the preparation of said compounds, characterized in that it comprises the coupling of a molecule of netropsin or of distamicin or derived from netropsin or of distamycin to an intercalating agent via a connecting element comprising an alkenyl radical and in particular an essentially polymethylenic chain.
  • the intercalating agent is synthesized separately, in particular of the oxazolopyridocarbazoie type or of the psoralene type, carrying a polyoxycarboxylic chain.
  • the polypyrrolecarboxamide chain is synthesized. that is to say the derivative netropsin or distamycin and, finally, the coupling of the latter with the preceding intercalating agent.
  • FIG. 1 An example, this synthesis with an intercalating agent of the OPC type is shown diagrammatically in FIG. 1. In particular, it is a process in which the coupling of a compound of structure is carried out:
  • Y represents the intercalating agent
  • n ' represents an integer from 1 to 10 atoms
  • n is an integer from 1 to 4
  • X is a pharmaceutically acceptable anion
  • the coupling is carried out in particular thanks to compounds ensuring the creation of an amide bond which are in particular widely used in the synthesis of peptides for example.
  • Compound (4c) thus has the property of binding to double stranded DNA in vitro and thus selectively recognizing sequences rich in AT base pairs. It also has a selective inhibitory effect on biological functions involving the recognition of DNA sequences rich in AT base and in particular on DNA cleavages catalyzed by restriction endonucleases. Eco type. This inhibition of restriction endonucleases is thus greater than that observed in the case of netropsin. It was also demonstrated a selectivity of action of this compound related to the nature of the sequence of the cleavage site. Finally, this compound (4c) also exhibits inhibitory activity in the integration of a pro-virus into the genome of a host cell.
  • the present invention also relates to the use of compounds of general formula I, as therapeutically active compounds and more particularly as anti-viral agents.
  • the invention further relates to compounds of general formula I, characterized in that they have the properties mentioned above, that is to say to selectively recognize the sequence of AT base pairs, an activity which inhibits activity EcoRI restriction endonuclease catalytic and / or inhibitory activity in the integration of a pro-virus into the genome of a host cell.
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions with antiviral activity based on at least one of the compounds according to the present invention. These compositions are particularly advantageous for applications in anti-viral chemotherapy.
  • FIG. 1 represents a diagram of synthesis of a compound according to the present invention.
  • FIG. 2 represents the evolution of EcoRI cut-off kinetics in the presence of a compound according to the present invention.
  • Figures 3a and 3b relate to the inhibition of insertion of pro-viral DNA (MNV) into the genome of a host cell (NIH3T3).
  • MNV pro-viral DNA
  • OPC valerate is carried out from the anti-tumor molecule derived from ellipticin 2N-methyl-9-hydroxyellipticinium (NMHE) according to the process described in references (1) and (2).
  • NMHE is oxidized in an aqueous medium (pH 7.00) by a system composed of peroxidase (Horse radish peroxidase, Sigma Chemical
  • NMHE 2N-methyl-9-OxoeIlipticinium reacts in position 10 with the primary amine of the acid to form OPC 3 valerate (overall yield 45%).
  • the compound is purified by chromatography on hydrophobic resin XAD2 (Serva Chemical Switzerland).
  • EXAMPLE 2 Preparation of compounds with cytotoxic activity according to the invention a) Preparation of 2-carboxylate methyl-1- (methyl-1-aminopyrrole-4-carboxamido-2) methyl pyrrole (2a) 13 ml of methanol cooled to -20 ° C are added to activated carbon (0.076 g) containing 10% palladium and then the compound (1a) (0.128 g, 0.44 mmol) is added. The solution is hydrogenated at atmospheric pressure and room temperature. After consumption of hydrogen corresponding to the calculated amount (approx. 12 h), the catalyst is removed by filtration and the methanol evaporated in vacuo. Evaporation is repeated in the presence of dimethylformamide (DMF).
  • DMF dimethylformamide
  • the purification of the compound (4a) is carried out by HPLC (nucleosil column C 18 SFCC 150x19mm id, particles of 10 ⁇ m, protected by a precolumn C 18 "Guard Pak", composition of the solvent: 60% acetonitrile in acetate d 0.1 M ammonium pH 6.5, isocratic conditions with a flow rate of 7.9 ml / min). After evaporation of the appropriate fractions, acetonitrile is added and the ammonium acetate is removed by repeated filtration on a HV-4 millipore filter. Evaporation of the acetonitrile followed by lyophilization of a solution in a dioxane-water mixture (7: 3 v / v) gives pure acetate (4a) (0.073 g, yield 26%).
  • Mass spectrum (FAB> O, glycerol matrix): 660 (M-CH 3 COO-);
  • the compound (4c) has the property of binding to double stranded DNA in vitro with, under the usual experimental conditions, (pH 7.00, 0.1 M NaCl ) an association constant greater than 10 7 M - 1 and to selectively recognize sequences rich in AT base pairs.
  • Experimental results are given by way of example in Table I.
  • the activity of the enzyme is measured by the estimation of the rate constant (k1) of the transformation of the form I (closed twisted) of the plasmid into form II (circular with a single strand cut) and the rate constant (k2), from the transformation of form II into form III (linear DNA).
  • the amounts of forms I, II and III are determined by gel electrophoresis according to standard published techniques. As an example, the kinetics of the appearance of form II in the presence of increasing concentration of (4c) are shown in FIG. 2.
  • Table II indicates the inhibitory activities on the constants k1 and k2 of the compounds (4c), (4a) and (4b) compared with netropsin.
  • the conjugate derivative (4c) therefore has an inhibitory effect on the activity of the restriction enzyme EcoRI greater than that of netropsin. Under the conditions used, the OPC chromophore has no detectable effect.
  • EXAMPLE 5 Inhibition of the insertion of proviral DNA (MHLV) into the genome of a host cell (NIH3T3) by a compound according to the present invention.
  • Recent studies (3) have shown that mutations limited at the level of the external sequence of LTRs and relating to repetitive sequences TTT result in the loss of the possibilities of integration of proviral DNA.
  • the sequence of the site responsible for integration at the proviral DNA level is AATT as indicated in FIG. (3a).
  • proviral DNA on the integration of proviral DNA consists of a murine 3T3 cellular transfectant (NEOA4) whose genome has integrated the proviral DNA of Moloney virus deleted from the encapsulation sequence psi (MMLV psi2) and a construction in which the LTRs frame the psi sequence and the neo gene coding for resistance to genitricin (FIG. 3b).
  • NEOA4 murine 3T3 cellular transfectant
  • the viral RNA coding for neo and having the psi sequence can be packaged and give rise to infectious virions whose DNA can be integrated into a cell genome.
  • the integration test consists in bringing NIH3T3 cells into contact with a supernatant of NEOA4 cells containing the infectious psi-neo virions.
  • the integration of the proviral DNA of these virions confer on the host cells NIH3T3, the phenotype of resistance to geniticin. Measuring the number of resistant clones therefore makes it possible to estimate the integration of the proviral DNA.
  • Compound (4c) has a protective effect against infection of 3T3 cells by the murine Moloney virus (MMLV). This protective effect results in an inhibition of the integration of the provirus in the genome of the host cell which can reach 100% at the concentration of 10 microM. It is verified that there is no toxicity of the compound (4c) on the 3T3 cells in the absence and in the presence of geniticin.
  • MMLV murine Moloney virus
  • two hybrid molecules 4 and 7 were synthesized from the derivative of netropsin 2c and from two differently substituted psoralens 5 and 6.
  • This compound was obtained (Scheme 6) in two stages starting from 12. Firstly, 12 was reacted with potassium phthalimide in anhydrous DMF to give compound 13 after chromatography on a column of silica gel , carrying in 4 ′ an N-methylphthalimide group, with a yield of 98%. In a second step, this compound 13 is reacted with hydrazine hydrate in ethanol to lead, after acid treatment of the reaction crude, to hydrochloride 14 with a satisfactory yield (88%). The treatment of 14 with an aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, leads to the desired free amine 9 pure.
  • the psoralen derivative 6 was obtained by condensation of intermediate 9 with succinic anhydride (Scheme 7). This reaction was carried out in anhydrous dichloromethane in the presence of triethylamine and led to the expected pure derivative 6 with an excellent yield (96%).
  • REPLACEMENT SHEET [N-methyl (N-methyl sulfate of carboxamidopropionamidine-2 carboxamido-4 pyrrole) -2 ((oxypropylcarboxamido-1,3) -4) pyrrole] -8 psoralen: 4.
  • This reagent was prepared from methoxyacetic acid, according to the method described by Stadlwieser [9]. Chloromethyl- 4 'trimethyl- 4.5', 8 psoralen: 12.
  • the thin layer chromatography (c.c.m) was carried out on Merck 60F 254 silica plates (art. 5554). The products were revealed in ultraviolet light at 254 nm, and by spraying with ninhydrin for those comprising an amine function.
  • the melting points were taken on a Gallenkamp apparatus.
  • Proton NMR spectra were recorded at room temperature with Bruker AC 250 or WM 360 WB instruments.
  • the samples were solubilized in DMSO-d 6 or in pyridine-d 5 .
  • the chemical shifts ( ⁇ ) are expressed in ppm relative to the signals of DMSO-d 5 taken as internal reference and fixed 2.49 ppm or to those of pyridine-d 4 whose most intense peak is fixed at 8.71 ppm (the other two peaks of pyridine-d 4 are at 7.55 and 7.19 ppm).
  • the coupling constants are given in Hz.
  • the multiplicity of signals is indicated by one or more lowercase letters:
  • the mass spectra were recorded using a JEOL JMS-DX 300 device, the ionization method being FAB, in positive or negative mode.
  • the matrices used were glycerol, a 50:50 v / v glycerol-thioglycerol mixture, or the m-nitro benzyl alcohol.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • the analytical HPLC devices used are made up of Waters-Millipore and Philips equipment.
  • the HPLC system is made up of Waters equipment:

Abstract

La présente invention se rapporte à un composé chimique caractérisé en ce qu'il est constitué d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine, couplée chimiquement à un agent intercalant qui est de préférence un chromophore intercalant. La présente invention concerne également un procédé de préparation dudit composé, ledit composé à titre d'agent thérapeutiquement actif et/ou d'agent anti-viral, et les compositions pharmaceutiques à activité anti-virale le contenant.

Description

COMPOSES CHIMIQUES A BASE D'UNE MOLECULE DE NETROPSINE OU DE DISTAMYCINE COUPLEE A UN AGENT INTERCALANT, PROCEDE DE PREPARATION DESDITS
COMPOSES ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES LES CONTENANT
La présente invention se rapporte à des composés chimiques à activité cytotoxique.
La netropsine et la distamycine qui possèdent une structure polypyrrolecarboxamide sont des agents anti-viraux d'origine naturelle.
Ces molécules semblent détenir leurs propriétés pharmacologiques de leurs propriétés d'interaction particulière avec l'ADN double brin. Ces composés se fixent en effet avec des constantes d'association élevées au niveau du petit sillon de l'ADN et présentent une extrême sélectivité pour les séquences riches en paires de base AT, en particulier la séquence AATT. De ce fait, la netropsine et la distamycine sont capables de perturber un certain nombre de fonctions biologiques impliquant dans leur mécanisme, la reconnaissance sélective de ce type de séquence.
La présente invention se rapporte à des composés chimiques, caractérisés en ce qu'ils sont constitués d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine couplée chimiquement à un agent intercalant.
Par "molécule dérivée de la netropsine ou de la distamycine", il faut entendre des composés présentant la structure polypyrrolecarboxamide de type :
Figure imgf000003_0001
où n est un nombre entier de 1 à 4. ladite structure pouvant comporter d'autres substituants. En particulier, les inventeurs ont en effet mis en évidence que la conjugaison de la netropsine (n = 2), ou d'un de ses dérivés, à une autre molécule, possédant elle-même une affinité élevée pour l'ADN sans présenter de préférence significative pour des zones riches en paires de base AT ou GC, permettait d'obtenir une augmentation très importante des propriétés pharmacologiques de la netropsine.
La conjugaison d'un agent intercalant, qui est de préférence un chromophore intercalant, à la netropsine permet d'augmenter de manière significative sa constante d'association pour l'ADN sans perturber son aptitude à la reconnaissance sélective, des séquences riches en paires de base AT.
Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à un composé chimique, caractérisé en ce qu'il est constitué d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine couplée à un chromophore intercalant de type oxazolopyridocarbazole ou de type psolène.
Le couplage entre ces deux molécules est de préférence réalisé par l'intermédiaire d'un radical alkylényl, notamment comportant une chaîne essentiellement polyméthylénique ayant de 1 à 10 atomes de carbone.
La présente invention a donc pour objet des conjugués de formule I
Figure imgf000004_0001
dans laquelle,
Y représente l'agent intercalant,
n' représente un entier de 1 à 10,
n représente un entier de 1 à 4,
X représente un anion pharmaceutiquement acceptable tel que acétate ou chlorure.
On peut citer plus particulièrement les dérivés de neptrosine pour lesquels n = 2.
Parmi ces composés, on mentionnera tout particulièrement les composés répondant à la formule générale II
Figure imgf000005_0001
dans laquelle :
- n' représente un entier de 1 à 6,
- R représente un groupement amidine, et
- X représente un ion associé pharmaceutiquement acceptable et de
préférence un anion acétate en chlorure. Parmi les composés de formule I ou II, on citera encore plus particulièrement les composés pour lesquels n' = 3, X est un anion acétate ou chlorure et R représente
Figure imgf000006_0002
Parmi les composés du type psoralène à titre d'agent intercalant on peut citer notamment le méthoxy-5 psoralène (5-MOP), le méthoxy-8 psoralène (8-MOP), tous deux d'origine naturelle [4] et le dérivé synthétique connu sous le nom de trioxsalène (triméthyl-4, 5', 8 psoralène (TMP)] [5].
Figure imgf000006_0001
On peut aussi citer en particulier les conjugués de formule I dans laquelle Y-(CH2)n'-CO représente
Figure imgf000007_0001
où n' est entier de 2 à 6.
La présente invention se rapporte également au procédé de préparation desdits composés, caractérisé en ce qu'il comprend le couplage d'une molécule de netropsine ou de distamicine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine à un agent intercalant par l'intermédiaire d'un élément de liaison comportant un radical alkenyl et notamment une chaîne essentiellement polyméthylénique.
Suivant l'invention, on synthétise séparément l'agent intercalant notamment de type oxazolopyridocarbazoie ou de type psoralene, portant une chaîne poiyméthylénique carboxyiique. On procède ensuite à la synthèse de la chaîne polypyrrolecarboxamide. c'est-à-dire le dérivé netropsine ou distamycine et, enfin au couplage de celui-ci avec l'agent intercalant précédent. Un exemple, cette synthèse avec un agent intercalant du type OPC est représentée schématiquement en figure 1 . En particulier, il s'agit d'un procédé dans lequel on effectue le couplage d'un composé de structure :
Y-(CH2)n,-COOH
avec
Figure imgf000008_0001
où Y représente l'agent intercalant, n' représente un entier de 1 à 10 atomes, n est un nombre entier de 1 à 4, et X est un anion pharmaceutiquement acceptable.
Le couplage est effectué notamment grâce à des composés assurant la création d'une liaison amide qui sont notamment largement utilisés dans la synthèse de peptides par exemple.
L'étude de l'activité biologique des composés selon l'invention et plus particulièrement du composé (4c) met en évidence les propriétés intéressantes de ce type de composé.
Le composé (4c) possède ainsi la propriété de se fixer sur l'ADN double brin in vitro et de reconnaître ainsi sélectivement les séquences riches en paires de base AT. Il présente également un effet inhibiteur sélectif sur des fonctions biologiques mettant en jeu la reconnaissance de séquences de l'ADN riches en base AT et en particulier sur les coupures de l'ADN catalysées par les endonucléases de restriction de type Eco. Cette inhibition des endonucléases de restriction est ainsi supérieure à celle observée dans le cas de la netropsine. Il a également été mis en évidence une sélectivité d'action de ce composé reliée à la nature de la séquence du site de coupure. Enfin, ce composé (4c) présente également une activité inhibitrice dans l'intégration' d'un pro-virus dans le génome d'une cellule hôte.
Il apparaît que la conservation du groupement amidine de la netropsine ou de distamycine est déterminant dans le processus de reconnaissance des paires de base AT ainsi que dans les propriétés pharmacologiques.
La présente invention se rapporte également à l'utilisation de composés de formule générale I, à titre de composés thérapeutiquement actifs et plus particulièrement à titre d'agents anti-viraux.
L'invention concerne de plus des composés de formule générale I, caractérisés en ce qu'ils présentent les propriétés précédemment citées, c'est-à-dire de reconnaître sélectivement la séquence de paires de base AT, une activité inhibitrice sur l'activité catalytique de l'endonucléase de restriction EcoRI et/ou une activité inhibitrice dans l'intégration d'un pro-virus dans le génome d'une cellule hôte.
De par ces propriétés, ces composés sont tout particulièrement utiles pour les manipulations en bio-génétique.
La présente invention se rapporte également aux compositions pharmaceutiques à activité anti-virale à base d'au moins un des composés selon la présente invention. Ces compositions sont tout particulièrement intéressantes pour des applications en chimiothérapie anti-virale.
D'autres avantages et caractéristiques de la présente invention seront mis en évidence à la lecture des exemples et figures donnés ci-dessous.
La figure 1 représente un schéma de synthèse d'un composé selon la présente invention.
La figure 2 représente l'évolution d'une cinétique de coupure EcoRI en présence d'un composé selon la présente invention. Les figures 3a et 3b se rapportent à l'inhibition de l'insertion d'ADN pro-virale (MNV) dans le génome d'une cellule hôte (NIH3T3).
EXEMPLE 1 : Préparation d'un chromophore intercalant, l'acide 7, 10,
12-triméthyl (6H-[1,3] oxazolo [5,4-C] pyrido [3,4-g]-carbazole)2-pentanoîque (ou valérate d'OPC) (3)
La préparation du valérate d'OPC s'effectue à partir de la molécule antitumorale dérivée de l'ellipticine 2N-méthyl-9-hydroxyellipticinium (NMHE) selon le procédé décrit dans les références (1) et (2).
La NMHE est oxydée en milieu aqueux (pH 7.00) par un système composé de peroxydase (Horse radish peroxydase, Sigma Chemical
Co.) et de peroxyde d'hydrogène. La forme oxydée de la NMHE 2N-méthyl- 9-OxoeIlipticinium réagit en position 10 avec l'aminé primaire de l'acide pour former le valérate d'OPC 3 (rendement global 45 %). Le composé est purifié par chromatographie sur résine hydrophobe XAD2 (Serva Chemical Switzerland).
EXEMPLE 2 ; Préparation de composés à activité cytotoxique selon l'invention a) Préparation du carboxylate-2 méthyl-1-(méthyl-1-aminopyrrole-4-carboxamido-2)pyrrole de méthyle (2a) 13 ml de methanol refroidis à -20°C sont ajoutés sur du charbon actif (0,076 g) contenant 10 % de palladium puis le composé (1a) (0,128 g, 0,44 mmol) est ajouté. La solution est hydrogénée à pression atmosphérique et température ambiante. Après une consommation d'hydrogène correspondant à la quantité calculée (env. 12 h), le catalyseur est éliminé par filtration et le methanol évaporé sous vide. L'évaporation est répétée en présence de diméthylformamide (DMF). L'aminé intermédiaire présumée (2a) n'est pas purifiée à cause de sa faible stabilité mais utilisée directement pour la préparation du composé (3a). b) Préparation du composé à activité cytotoxique (4a) : acétate du carboxylate-2 méthyl-1-(méthyl-1-[(triméthyl-7,10,12-oxazolo-6H-[1,3]pyrido [5,4-c]carbazole[3,4-g]-2-butylcarboxamido-4]-4-carboxamido-2-pyrrole)-4-pyrrole de méthyle (4a)
A une suspension d'acide 7,10,12-triméthyl-6H-[1,3] oxazolo [5,4-C]pyrido[3,4-g]-carbazole 2-pentanoîque (OPC-Valérate) (3) (0,18 g, 0,39 mmol) dans du DMF anhydre (13 ml) sont ajoutés consécutivement duchlorhydrate de N-[(diméthylamino)propyl]-N'-éthylcarbodiimide (EDC) (0,149 g, 0,78 mmol) et du 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) (0,105 g, 0,78 mmol). Le mélange est maintenu sous agitation sous argon pendant 4 h à température ambiante puis refroidi à 0°C. Une solution du composé (2a) (préparée à partir de 0,128 g de (la) 0,44 mmol) dans du DMF anhydre (2 ml) est ajoutée et le milieu réactionnel maintenu sous agitation pendant 1 heure à 0°C, puis pendant 30 heures à température ambiante. Après dilution dans l'eau, un résidu est obtenu par évaporation du solvant. La purification du composé (4a) est effectuée par HPLC (colonne nucleosil C 18 SFCC 150x19mm i.d., particules de 10μm, protégée par une précolonne C 18 "Guard Pak", composition du solvant : 60 % d'acétonitrile dans de l'acétate d'ammonium 0,1 M pH 6,5, conditions isocratiques avec un débit de 7,9 ml/min). Après évaporation des fractions appropriées, on ajoute de l'acétonitrile et on élimine l'acétate d'ammonium par filtrations répétées sur filtre millipore HV-4. L'évaporation de l'acétonitrile suivie de la lyophilisation d'une solution dans un mélange dioxanne-eau (7:3 v/v) donne l'acétate pur (4a) (0,073 g, rendement 26 %).
RMN du proton (DMSO d6),δ ppm : 1,74 (s, 3H CH3COO), 1,80 et 1,90 (2m, 2H chacun, CH2-CH2-CH2-CH2-CO), 2,39 et 3,10, (2t, 2H chacun CH2-(CH2)2CH2-CO ; J≃7, 1 Hz chacun), 2,78 (s, 3H, CH3-7), 3,66 (s, 3H, CH3-12), 3,72 (s, 3H, CO-CH3), 3,80 et 3,81 (2s, 3H chacun, N-CH3- 1 ' et 1"), 4,35 (s, 3H, NCH3-10), 6,6 et 7,3 (s, 1H, NH-6), 6,86, 6,89, 7,15 et 7,41 (4d, 1H chacun, H-3', 3", 5' et 5"; J = 1,7 Hz chacun), 7,64 et 7,81 (2d, 1H chacun, H-4 et 5 ; J = 8,6 Hz chacun), 8,1 (m, 2H H-8 et 9), 9,68 (s, 1H, H-11), 9,93 et 10,00 (2s 1H chacun, 2 CONH) ;
Spectre de masse (FAB>O, matrice glycérol) : 660 (M-CH3COO-) ;
HPLC analytique (colonne nucieosil C18 SFCC, 100 x 4,6 mm i.d., particule de 3 μm, protégée par une précolonne C18 "Guard Pak" ; composition du solvant : 60 % d'acétonitrile dans de l'acétate d'ammonium 0,1 M, pH 6,5, conditions isocratiques avec un débit de 1 ml/min) : temps de rétention = 214 secondes ; UV Lambda max : 315 et 243 nm, pureté spectrophotométrique à 315 nm :> 98%. c) Préparation du composé à activité cytotoxique (4b) , acétate du (méthyl-1[méthyl-1-[(triméthyl-7,10,12-oxazolo-6H-[1,3]pyrido[5,4-c]carbazole [3-4-g]butylcarboxamido-2]-4-carboxamido-2-pyrrole]-4-carboxamido-2-pyrrole-4)-3-propionitri!e
Méthode A : Ce composé a été synthétisé (selon le même procédé que celui décrit lors de la préparation de (4a) à partir de l'acide (3) (0,03 1 g, 0,067 mmol) dans du DMF (2,5 ml) en présence d'EDC (0,026 g, 0,14 mmol) et d'HOBT (0,018 g, 0,13 mmol) et à partir de (2b) (0,023 g, 0,07 mmol) dans du DMF (0,8 ml). Le temps de la réaction a été de 72 heures. Après purification par HPLC (débit 6,8 ml/min), la lyophilisation à partir d'un mélange dioxanne-eau (5:5, v/v) donne l'acétate pur (4b) (0,021 g, rendement 41 %).
RMN du proton (DMSO d6) δ ppm = 1,76 (s,3H, CH3COO-), 1,8 et 1 ,95 (2m, 2H chacun, CH2-CH2-CH2-CH2-CO), 2,39 et 3,10 (2t, 2H chacun, CH2-(CH2)2-CH2-CO ; J _ 7,1 Hz), 2,72 et 3,39 (2t, 2H chacun CH2-CH2-CN ; J = 6,3 Hz chacun), 2,76 (s, 3H, CH3-7), 3,64 (s, 3H, CH3-12), 3,79 et 3,80 (2s, 3H chacun, N-CH3-1 ' et 1"), 4,35 (s, 3H, NCH3-10), 6,9 et 7,2 (2m, 2H chacun, H-3', 3", 5', 5"), 7,62 et 7,81 (2d, 1H chacun, H-4 et 5 ; J 8,7 Hz chacun), 8,1 (m, 2H, H-6 et 9), 8,32 (t, 1H, CONH-CH2 ; J = 5,5 Hz), 9,68 (s, 1H, H-11), 9,88 et 9,98 (2s, 1H chacun, 2 CONH) ;
Spectre de masse (FAB>0, matrice glycérol + thioglycérol) :
698 (M-CH3COO-)
HPLC analytique (même colonne et conditions opératoires que pour (4a)) : temps de rétention = 130 s ; UV lambda max. 315 et 243 nm ; pureté spectrophotométrique à 315 nm : > 99 %
Méthode B
A un mélange composé de l'acide (3) (0,12 g, 0,26 mmol), de l'aminé 2B3 (0,088 g, 0,28 mmol) et de benzotriazol-1 yloxytris (diméthylamino) phosphonium hexafluorophosphate4 (BOP ; 0,124 g, 0,28 mmol) dans du DMF anhydre (10 ml), on ajoute de la diisopropyléthylamine (0,142 ml, 0,84 mmol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 1,5 heure sous argon. Après purification par HPLC, la lyophilisation à partir d'une solution dioxanne-eau et la précipitation dans une solution de méthanol-acétate d'éthyle (2:8 v/v) donne l'acétate pur (4b) (0,05 g, rendement 25 %). Le composé est identique en tous points à celui obtenu par la méthode A. d) Préparation du composé à activité cytotoxique (4c), le Bis-(acétate) du (méthyl-1[méthyl-1[(triméthy1-7,10,12-oxazolo-6H-[1,3]pyrido[5,4-c]carbazole [3,4-g])butylcarboxamido-2]-4-carboxamido-2-pyrrole]-4-carboxamido-2-pyrrole-4]-3-propionamidine (4c)
Ce composé a été préparé (selon le même procédé que celui décrit lors de la préparation de (4b) selon la méthode B) à partir de l'acide
(2) (0,12 g), 0,26 mmol) et de l'amine (2c) (0,103 g, 0,28 mmol) dans du DMF
(10,5 ml) et en présence de BOP (0,124 mg, 0,28 mmol) et de diisopropyl éthylamine (0,142 ml, 0,84 mmol). Après purification par HPLC, une précipitation dans de l'acétone donne le produit pur sous forme de diacétate (4ç) (0,07 g, rendement 32 %). RMN du du proton (DMSO-d6), δ ppm : 1,71 (s, 6H, 2CH3COO-), 1,8 et 1,9 (2m, 2H chacun, CH2-CH2-CH2-CH2-CO) 2,38 et 3,1 1 (2t, 2H chacun, CH2-(CH2)2CH2-CO) ; J = 7,1 Hz chacun) 2,56 et 3,46 (2m, 2H chacun, NH-CH2-CH2-), 3,67 (s, 3H, CH3-12), 3,79 et 3,80 (2s, 3H chacun, N-CH3-1 ' et 1" ), 4,37 (s,3H,N-CH3-10) 6,9 et 7,2 (2m, 2H chacun, H-3', 3", 5', 5"), 7,63 et 7,84 (2d, 1H chacun, H-4 et 5 ; J = 8,4 et 8,7 Hz), 8,2 (m, 2H, H-8 et 9), 8,4 (br, s, 1H, CONH-CH2-), 9,73 (s, 1H, H-11), 9,84 et 9,93 (2s, 1H chacun, 2 CONH) ;
Spectre de masse (matrice glycérol + thioglycérol) , FAB> 0:715 (M-CH3COO-CH3COOH) ;
HPLC analytique (colonne C18 "radial Pack", 100 x 8 mm i.d., taille 10 μm, utilisée dans un système à compression radiale Waters RCM 100 protégée par une précolonne "Guard Pack", avec le même éluant et les mêmes conditions isocratiques que celles décrites pour (4a), débit : 3 ml/min) ; temps de rétention 445 s ; UV lambda max = 315 et 243 nm, pureté spectrophotométrique à 315 nm : >99 %.
EXEMPLE 3 : Interaction d'un composé cytotoxique selon l'invention avec les polynucléotides synthétiques.
Parmi les composés préparés suivant la méthode décrite ci-dessus, le composé (4c) présente la propriété de se fixer sur l'ADN double brin in vitro avec, dans les conditions expérimentales habituelles, (pH 7,00, 0,1 M NaCl) une constante d'association supérieure à 107 M- 1 et de reconnaitre sélectivement les séquences riches en paires de bases AT. Des résultats expérimentaux sont donnés à titre d'exemple dans le tableau I.
Figure imgf000015_0001
Conditions expérimentales : Tampon cacodylate 10 mM pH 7,0, contenant NaCl 100 mM. Les constantes d'association sont déterminées par fluorescence directe du chromophore OPC.
EXEMPLE 4 :
Inhibition des endonucléases de restriction par un composé selon la présente invention. Cette propriété se traduit par un effet inhibiteur sélectif sur des fonctions biologiques mettant en jeu la reconnaissance de séquences de l'ADN riche en base AT et en particulier les coupures de l'ADN catalysées par les endonucléases de restriction de type Eco. Cet effet est supérieur à celui observé dans le cas de la nétropsine (tableau II). On mesure cet effet en utilisant comme substrat le plasmide pBR322 purifié et comme enzyme, l'endonucléase d'origine bactérienne Eco RI commerciale (Boheringer, Mannheim). On mesure l'activité de l'enzyme par l'estimation de la constante de vitesse (k1) de la transformation de la forme I (supertorsadée fermée) du plasmide en forme II (circulaire avec une coupure simple brin) et la constante de vitesse (k2), de la transformation de la forme II en forme III (ADN linéaire). Les quantités de formes I, II et III sont déterminées par gel d'électrophorèse selon des techniques standards publiées. A titre d'exemple, il est montré dans la figure 2 la cinétique de l'apparition de la forme II en présence de concentration croissante de (4c).
Le tableau II indique les activité inhibitrices sur les constantes k1 et k2 des composés (4c), (4a) et (4b) comparées à la netropsine.
Figure imgf000016_0001
Le dérivé conjugué (4c) présente donc un effet inhibiteur de l'activité de l'enzyme de restriction EcoRI supérieur à celui de la netropsine. Dans les conditions utilisées, le chromophore OPC n'a pas d'effet détectable.
Afin de tester la sélectivité de l'action inhibitrice du dérivé
(4c) en relation avec la nature de la séquence du site de coupure, des expériences identiques à celles décrites dans le tableau II ont été effectuées avec l'endonuclease NrUI dont le site de coupure est composé d'une séquence CGCG (tableau III). Le tableau III indique d'une manière comparative les effets de la netropsine et de composés selon l'invention sur les activités enzymatiques de Eco RI et Nrul. Les résultats indiquent que dans les conditions opératoires utilisées on ne peut détecter d'effet inhibiteur du composé (4c) sur l'activité enzymatique de Nrul ce qui indique la sélectivité d'action reliée à la nature de la séquence du site de coupure. On constate qu'en revanche, la netropsine présente un effet inhibiteur sur
Nrul mesurable et donc une sélectivité inférieure.
Figure imgf000018_0001
EXEMPLE 5 : Inhibition de l'insertion de l'ADN proviral (MHLV) dans le génome d'une cellules hôte (NIH3T3) par un composé selon la présente invention. Des travaux récents (3) ont montré que des mutations limitées au niveau de la séquence externe des LTR et portant sur les séquences répétitives TTT se traduisaient par la perte des possibilités d'intégration de l'ADN proviral.
Dans le cas du rétrovirus de leucémie murine Virus de Moloney, (MMLV), la séquence du site responsable de l'intégration au niveau de l'ADN proviral est AATT comme indiquée dans la figure (3a).
Le système retenu pour tester l'effet inhibiteur du composé
(4c) sur l'intégration de L'ADN proviral se compose d'un transfectant cellulaire 3T3 murin (NEOA4) dont le génome a intégré l'ADN proviral du virus de Moloney délété de la séquence d'encapsulation psi (MMLV psi2) et une construction où les LTR encadrent la séquence psi et le gène neo codant pour la résistance à la génitricine (figure 3b).
Après transcription et traduction, l'ARN viral codant pour neo et possédant la séquence psi peut être encapsidé et donner naissance à des virions infectieux dont l'ADN est intégrable dans un génome cellulaire.
Cependant, en l'absence des gènes gag pol et env le cycle viral ne peut se poursuivre après intégration.
Le test d'intégration consiste à mettre en contact des cellules NIH3T3 avec un surnageant de cellules NEOA4 contenant les virions infectieux psi-neo. L'intégration de l'ADN proviral de ces virions confèrent aux cellules hôtes NIH3T3, le phénotype de résistance à la géniticine. La mesure du nombre de clones résistants permet donc l'estimation de l'intégration de l'ADN proviral.
Les résultats obtenus à l'aide de ce test sont indiqués dans le tableau IV.
Figure imgf000020_0001
Le composé (4c) possède un effet protecteur contre l'infection de cellules 3T3 par le virus murin de Moloney (MMLV). Cet effet protecteur se traduit par une inhibition de l'intégration du provirus dans le génome de la cellule hôte pouvant atteindre 100 % à la concentration de 10 microM. On vérifie qu'il n'existe aucune toxicité du composé (4c) sur les cellules 3T3 en absence et en présence de géniticine. EXEMPLE 6 : Conjugués netropsine - psoralène
Dans cet exemple, deux molécules hybrides 4 et 7 ont été synthétisées à partir du dérivé de la netropsine 2c et de deux psoralènes différemment substituées 5 et 6.
Figure imgf000021_0001
Synthèse de la molécule mixte netropsine-alkoxy-8 psoralene (4).
L'élaboration de ce composé, pour lequel le psoralene porte un groupement alkoxyle en position 8, a été ralisée par condensation du synton 2c de la netropsine avec le dérivé 5 du psoralène.
La condensation de 5 et de 2c (Schéma 3) a été effectuée dans le DMF anhydre, en présence de diisopropyléthylamine et de (benzotriazo1-yl)- 1, 1, 3, 3 tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU), un nouvel agent de couplage pétidique mis au point en 1989 par R. Knorr et coll. [6].
Figure imgf000022_0001
Après purification du brut réactionnel par CLHP semi-préparative, les fractions correspondantes au composé 4 ont été rassemblées, évaporées à sec et redissoutes dans de l'eau chaude. Le dérivé 4 a été ensuite précipité sous forme de sel de sulfate par addition d'une solution aqueuse saturée de sulfate de sodium. Après filtration et lavage à l'eau, il a été obtenu pur avec un rendement de 48 %.
Figure imgf000023_0001
Synthèse de la molécule mixte netropsine-trioxsalène (7).
Cette molécule est obtenue par condensation du synthon 2c de la netropsine avec le dérivé du psoralène 6. Ce dernier n'ayant jamais été décrit à ce jour, il a, dans un premier temps, fallu mettre au point sa synthèse. a) Synthèse du dérivé du psoralène 6.
La stratégie adoptée pour préparer ce dérivé 6 a consisté à fonctionnaliser le trioxsalène (8) (commercial) avec un groupement aminométhyl en 4', puis à faire réagir l'intermédiaire 9 obtenue avec l'anhydride succinique.
Figure imgf000024_0001
Fonctionnalisation du trioxsalène.
L'intermédiaire 9 a été obtenu en trois étapes à partir du trioxsalène (8). Dans un premier temps, 8 a été alkylé en 4' par un groupement chlorométhyle au moyen du chlorométhyl méthyléther
(C2CH2OMe). L'action successive du phtalimidure de potassium puis de hydrazine (réaction de Gabriel), permet d'aboutir à l'aminé recherchée 9. . Préparation du chlorométhyl méthyléter.
Ce réactif a été obtenu suivant une voie de synthèse décrite dans la littérature [7]. Ainsi (Schéma 4), l'acide méthoxyacétique (commercial) est chauffé avec un excès de chlorure de thionyle pour donner le chlorure d'acide correspondant 1 1. Ce dernier, soumis à l'action du chlorure d'aluminium (AlCl3), subit une décarbonylation pour donner le chlorométhyl méthyléther (10).
Figure imgf000025_0001
. Chlorométhylation du trioxsalène.
La réaction du chlorométhyl méthyléther avec le trioxsalène dans l'acide acétique (Schéma 5) [8], conduit au produit attendu 12. Celui-ci précipite dans le mélange réactionnel ; il est obtenu pur par filtration avec un rendem ent de 62 %.
Figure imgf000025_0002
Synthèse de l'aminométhyl-4' triméthyl-4, 5', 8 psoralène (9).
Ce composé a été obtenu (Schéma 6) en deux étapes à partir de 12. Dans un premier temps, 12 a été mis en réaction avec du phtalimidure de potassium dans le DMF anhydre pour donner après chromatographie sur colonnne de gel de silice le composé 13, portant en 4' un groupement N-méthylphtalimide, avec un rendement de 98 %. Dans une seconde étape, ce composé 13 est mis en réaction avec de l'hydrate d'hydrazine dans l'éthanol pour conduire après traitemnt acide du brut reactionnel, au chlorhydrate 14 avec un rendement satisfaisant (88 %). Le traitement de 14 avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, conduit à l'aminé libre recherchée 9 pure.
Figure imgf000026_0001
B) Transformation de l'aminométhyl-4' trioxsalène en son dérivé succinique 6.
Le dérivé du psoralène 6 a été obtenu par condensation de l'intermédiaire 9 avec l'anhydride succinique (Schéma 7). Cette réaction a été effectuée dans le dichlorométhane anhydre en présence de triéthylamine et a conduit au dérivé attendu 6 pur avec un excellent rendement (96 %).
Figure imgf000027_0001
b) Synthèse de la molécule mixte Trioxsalène- Netropsine (7).
Cette molécule a été obtenue (Schéma 8), par condensation du dérivé 6 possédant une fonction acide carboxylique libre avec l'aminé aromatique 2c. Cette réaction, réalisée dans le DMF anhydre en présence de TBTU et de diisopropyle éthyiamine, a conduit au composé 7 pur avec un rendement de 76 %.
Figure imgf000028_0001
La pureté de l'ensemble des composés décrits dans la deuxième partie de ce chapitre a été vérifiée par chromatographie sur couche mince de silice et/ou par CLHP. Leurs structures ont été confirmées sans ambiguité par l'étude de leurs spectres de RMN H1 et de masse.
FEUILLE DE REMPLACEMENT [N-méthyl (N-méthyl sulfate de carboxamidopropionamidine-2 carboxamido-4 pyrrole)-2 ((oxypropylcarboxamido-1,3)-4) pyrrole]-8 psoralène: 4.
A une solution de (carboxy-3-propoxy)-8 psoralene 5 (86,5 mg, 0,3 mmoles), d'aminé 2c (132 mg, 0,36 mmoles) et de (benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3- tétraméthyluronium tétrafluoroborate TBTU (96,3 mg, 0,3 mmoles) dans 3 ml de DMF anhydre, est ajoutée de la diisopropyl éthylamine (77,5 mg, 0,6 mmoles). La solution est protégée de la lumière puis agitée 10 minutes à température ambiante sous atmosphère d'argon. L'analyse du brut reactionnel par chromatographie sur couche mince de silice (éluant: méthanol en présence de traces d'acide acétique), indique la disparition quasi-totale de l'acide de départ 5. Le brut réactionnel est concentré à un très petit volume puis purifié par CLHP semi-préparative (conditions isocratiques; 4 % d'acétonitrile dans une solution tampon d'acétate d'ammonium 0,05 M, pH: 5,9 avec un débit de 6,75 ml/mn). Les fractions (TR= 15,6 mn) sont recueillies, les solvants sont évaporés sous pression réduite, et le résidu obtenu est redissous dans de l'eau chauffée à 50 °C. Une solution saturée de sulfate de sodium est ensuite ajoutée. Après centrifugation, le précipité obtenu est lavé avec de l'eau puis redissous dans un minimum de DMF. Cette solution est ajoutée goutte à goutte sur de l'éther éthylique agité. Le produit 4 précipite. Il est ensuite lavé trois fois avec de l'éther puis séché sous vide. Il est obtenu pur (74 mg, 48 % de rendement).
-FAB positif (glycérol + thioglycérol): 602 (MH+ - HSO4-); FAB négatif (glycérol + thioglycérol): 600 (M- HSO4-- H-), 97 (HSO4-).
-RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 2,06 (m, 2H,
Figure imgf000030_0001
1 2 3
J2-1= J2-3= 6,7 Hz), 2,50 (t, 2H,
Figure imgf000030_0002
J3-2= 6,7 Hz), 2,58 (lt, 2H, -CH2-CH2-CNH(NH2)), 3,47 (1m,
-CH2-CH2-CNH(NH2)), 3,79 et 3,80 (2 s, 3H chacun, 2 N-CH3), 4,44 (t, 2H,
Figure imgf000030_0003
J1-2= 6,7 Hz), 6,42 et 8'13 (2 d, 1H chacun, H (Ar)- 4 et 3 respectivement, J= 9,6 Hz), 6,86, 6,88, 7,14 et 7,19 (4 s, 1H chacun, H du cycle pyrrole), 7,08 et 8,08 (2 d, 1H chacun, H (pyranne) 4' et 5' respectivement, J= 1,8 Hz), 7,68 (s, 1H, H (Ar)-5), 8,2 (lt, 1H, CONH-CH2-), 9,85 (ls, 2H, -CH2-C0NH et (Pyrrole)2- CONH). -Analyse CLHP de 4:
.Colonne c, appareil B:
.Gradient de 0 à 90 % d'acétonitrile dans une solution tampon d'acétate d'ammonium 0,1 M, pH: 5,9 en 20 mn. .Débit: 1 ml/mn.
.Pureté spectrophotométrique: >99 % à 300, 274 et 254 nm.
.UV λ max: 245 et 302 nm.
.Temps de rétention: 13,57 mn.
Ether de méthyl et de chlorométhyl.
Ce réactif a été préparé à partir de l'acide méthoxyacétique, selon le procédé décrit par Stadlwieser [9 ]. Chlorométhyl- 4' triméthyl- 4,5',8 psoralène: 12.
Ce produit a été synthétisé à partir du triméthyl4,5',8 psoralène 8 et du chlorométhyl méthyl éther, suivant le procédé décrit par Isaacs et coll. [ 8],
N-phtalimidométhyl-4' triméthyl- 4,5',8 psoraléne: 13.
Un mélange de chlorométhyl-4' triméthyl-4,5',8 psoralène (8), (200 mg, 0,73 mmoles) et de phtalimidure de potassium (165 mg, 0,89 mmoles) dans 20 ml de diméthylformamide anhydre est chauffé pendant 3 heures à 100 °C. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu obtenu est ensuite dissous dans 50 ml de chloroforme puis extrait trois fois avec de l'eau. La phase organique est alors séchée sur du sulphate de sodium puis évaporée à sec. Une flash chromatographie sur gel de silice du brut obtenu, en effectuant un gradient de 0 à 2 % de methanol dans le dichlorométhane, conduit au composé 13 pur, (278 mg, 98 %).
Chlorhydrate de méthylammonium- 4' triméthyl- 4,5',8 psoralène: 14.
Une suspension de N- phtalimidométhyl- 4' triméthyl-4,5',8 psoralène 13 (1,106 g, 2,86 mmoles), d'hydrate d'hydrazine (80 % dans l'eau , 0,66 ml) dans 131 ml d'éthanol 95 est mise à reflux pendant 4 heures. 0,66 ml d'hydrazine est de nouveau ajoutée. L'analyse par chromatographie sur couche mince de silice du brut réactionnel (5 % de méthanol dans du dichlorométhane) indique la disparition totale de 13 après 5 heures 30 minutes de réaction . L'éthanol est évaporé sous pression réduite, puis 260 ml d'une solution aqueuse de NaOH 0,1 N est ajoutée. Le mélange obtenu est extrait avec trois fois 110 ml de chloroforme. La phase organique est évaporée à sec puis 364 ml d'acide chlorhydrique 1,2 N est ajouté. Le précipité formé est filtré, lavé avec 20 ml d'eau, 20 ml d'acétone et enfin 100 ml de chloroforme pour donner 14 pur, 738 mg (88 %). -FAB positif (glycérol-thioglycérol): 258 (M-Cl)- , 241 (M-Cl-NH3)-.
-RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 2,49 (m, 9H, CH3 4, 5', 8), 4,18 (s, 2H, CH2-NH3), 3,36 et 8,14 (2 s, 1H chacun, H (5) et H (3) respectivement), 8,34 (ls, 3H,
Figure imgf000032_0001
-Analyse CLHP de 14 :
.Colonne: c, appareil: B.
.Gradient de 0 à 90 % d'acétonitrile en 20 mn dans une solution tampon d'acétate d'ammonium 0,1 M, pH: 5,9. .Débit: 1 ml / mn.
.Temps de rétention: 11,59 mn.
.Pureté spectrophotométrique: >99 % à 254, 265 et 300 nm.
.uv (λmax): 249, 299 nm.
Aminomethyl- 4' triméthyl- 4,5',8 psoralène: 9.
Au composé 14, (738 mg, 2,51 mmoles) dissout à chaud dans 150 ml d'eau, est ajoutée une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium; le produit 9 précipite. Il est ensuite filtré, lavé avec de l'eau puis séché sous vide. On le redissout dans 15 ml de dichlorométhane et le fait précipiter par addition de 200 ml de cyclohexanne. Après filtration et lavage avec du cyclohexanne, il est obtenu pur (534 mg, 83 %).
Les propriétés physicochimiques (spectres de RMN 1H et de masse ) des produits 12, 13 et 9 sont en accord avec la littérature [8].
(Carboxamidométhyl- 4' triméthyl- 4,5',8 psoralène)- 2 carboxylique éthylène: 6.
A une solution de 9, (129 mg, 0,5 mmoles) , de triéthylamine anhydre (0,75 mmoles, 105 μL) dans 6,25 ml de dichlorométhane anhydre, est ajoutée de l'anhydride succinique, (75 mg, 0,75 mmoles). La solution ainsi obtenue est agitée 1 heure à température ambiante sous atmosphère d'argon. Le solvant est ensuite évaporé sous pression réduite et le résidu est coévaporé trois fois avec de l'eau. 30 ml d'eau est ajouté et le mélange est laissé une nuit à 4 ºC. Le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau puis avec du dichlorométhane. Il est séché sous vide à 80 ºC pour être obtenu pur (171 mg, 96 %).
-RF= 0,3 (30 % MeOH + 1 % NEt3 dans CHCI3).
-FAB négatif (glycérol + thioglycérol): 356 (M-H)-.
-RMN 1H ( Pyrdine-d5) δ ppm: 2,30, 2,36 et 2,48 (3 s, 3H chacun, CH3- 4,5',8), 2,86 et 3,05 (2 t, 2H chacun, CH2-CH2-COOH, JCH-CH = 6,6 Hz), 4,73 (d, 2H, CONH-CH2, J= 5,6 Hz), 6,21 et 7,98 (2 s, 1H chacun, H (3) et H (5) respectivement), 9,13 (lt, 1H, CONH).
-Analyse CLHP de 6 :
·Colonne: b, appareil A.
.Gradient de 0 à 90 % d' acétonitrile en 20 mn dans une solution tampon d'acétate d'ammonium 0,1 M, pH: 5,9. .Débit: 2 ml / mn.
·Temps de retention: 11,33 mn.
.Pureté spectrophotométrique: >99 % à 260 et 300 nm.
.UV (λmax): 249, 300 nm. (Carboxamidométhyl- 4' triméthyl- 4,5',8 psoralène)- 2 [(N-méthyl chlorhydrate de carboxamidopropionamidine- 2 carboxamido- 4 pyrrole)- 2 carboxamido- 4 pyrrole]- 1 éthylène: 7.
A une solution de 6, (35,7 mg, 0,1 mmoles), de l'aminé 2c (40,5 mg, 0,11 mmoles) et de (benzotriazol- 1-yl)- 1,1,3,3 tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU),
(32 mg, 0,1 mmoles) dans 2 ml de diméthylformamide anhydre. est ajoutée de la diisopropyl éthylamine (0,2 mmoles, 34 μl). Le mélange réactionnel est agité 30 minutes à température ambiante sous atmosphère d'argon. La solution est ensuite concentrée à mi-volume sous pression réduite, puis versée dans 20 ml d'acétone agitée. Le précipité obtenu est lavé trois fois avec de l'acétone, séché sous vide à 80 ºC pour donner 7, (51 mg, 76 % de rendement).
-FAB positif (glycérol + thioglycérol): 671 (M-Cl)-.
-RMN 1H (DMSO-d6) δ ppm: 2,39 (t, 2H, ,
Figure imgf000034_0001
CH2 (1 ou 2) J1-2= 7,1 Hz), 2,48 (m, 11H, CH3 -4,5',8 et CH2 (1 ou 2)), 2,62 (t, 2H,
Figure imgf000034_0002
, JCH-CH= 6,3
Hz), 3,5 (m, 2H, CONH-CH2-CH2-, JCH-NH= 5,7 Hz, JCH-CH= 6,3 Hz), 3,68 et 3,7 (2 s, 3H chacun, N-CH3), 4,35 (d, 2H, CONH-CH2-(furanne), JCH-NH= 5,7 Hz), 6,30 et 7,85 (2 s, 1H chacun, H (3) et H (5) respectivement), 6,82, 6,94, 7,05 et 7,16 (4 d, 1H chacun. H-(pyrroles)), 8,19 et 8,4 (2 t, 1H chacun, (pyrrole)-CONH-CH2 et CONH-CH2-(furanne) respectivement, JNH-CH= 5,7 Hz), 8,60 et 8,96 (2 bs, 2H chacun,
Figure imgf000034_0003
9,82 (s, 1H, pyrrole-CONH-pyrrole). -L'analyse CLHP de 7 a été faite dans les mêmes conditions que celles adoptées pour le composé 6.
.Temps de rétention: 13,87 mn.
.Pureté spectrophotométrique: >99 % à 260 et 300 nm. .UV (λmax): 247, 299 nm. CONDITIONS GENERALES:
Les chromatographies sur couche mince (c.c.m) ont été réalisées sur plaques de silice Merck 60F 254 (art. 5554). Les produits ont été révélés à la lumière ultraviolette à 254 nm, et par pulvérisation de ninhydrine pour ceux comportant une fonction aminé.
Les chromatographies sur colonne de gel de silice ont été effectuées avec de la silice Merck 60H (art. 7736) sous faible pression d'azote.
Les points de fusion ont été pris sur un appareil Gallenkamp.
Les spectres de RMN du proton ont été enregistrés à température ambiante avec des appareils Bruker AC 250 ou WM 360 WB. Les échantillons ont été solubilisés dans le DMSO-d6 ou dans la pyridine-d5. Les déplacements chimiques (δ) sont exprimés en ppm par rapport aux signaux du DMSO-d5 pris comme référence interne et fixés 2,49 ppm ou à ceux la pyridine-d4 dont le pic le plus intense est fixé à 8,71 ppm (les deux autres pics de la la pyridine-d4 sont à 7,55 et 7,19 ppm). Les constantes de couplage sont données en Hz. La multiplicité des signaux est indiquée par une ou plusieurs lettres minuscules:
m: multiplet; q: quadruplet; t: triplet;
d: doublet; s: singulet; 1: large.
Les spectres de masse ont été enregistrés à l'aide d'un appareil JEOL JMS-DX 300, la méthode d'ionisation étant du FAB, en mode positif ou négatif. Les matrices utilisées ont été le glycérol, un mélange glycérol-thioglycérol 50:50 v/v, ou l'alcol m-nitro benzylique.
Les analyses par chromatographie liquide haute performance (CLHP) ont été effectuées sur trois types de colonne: -Colonne a:
-SFCC Nucléosil C18 (∅= 4,6 mm; 1= 100 mmm), de granulométrie 3 μm, protégée par un préfiltre et une précolonne Guard-Pak C18. -Colonne b:
-Waters Radial-Pak C18 (∅= 8 mm; 1= 100 mm), de granulométrie sphérique de 10 μm, insérée dans un module à compression radiale RCM:100, et protégée par un préfiltre et une précolonne Guard-Pak C18. -Colonne c:
-Beckman C18 XLODS (∅= 4,6 mm; 1= 70 mm), à garnissage ultrasphérique (3 μm), protégée par une précolonne XLODS (∅= 4,6 mm; 1= 5 mm) de granulométrie 3 μm.
Les appareils CLHP analytiques utilisés sont composés de matériels Waters-Millipore et Philips.
-Appareil A:
-Deux pompes 6000 A (Waters-millipore). -Un programmateur M 720 (Waters-millipore). -Un injecteur U6K (Waters-Millipore).
-Un réfractomètre R 401 (Waters-millipore). -Un détecteur U.V multicanal PU 4021 (Philips).
-Un centre de contrôle vidéo PU 4850 (Philips).
-Une imprimante PU 4900/20 (Philips).
-Appareil B: (Waters-Millipore).
-Deux pompes 6000 A.
-Un programmateur M 680.
-Un injecteur U6K.
-Un détecteur U.V à barette de diodes 990.
-Un calculateur enregistreur NEC APC HZ.
-Une imprimante Waters 990.
Les purifications par CLHP ont été effectuées sur colonne SFCC Nucleosil (∅= 19 mm, 1= 150 mm) C18 de granulométrie spherique 10 μm. Cette colonne est protégée par un préfiltre et par une précolonne C13 Guard-Pack C18. Le système CLHP est composé de matériel Waters:
-Un injecteur U6K.
-Deux pompes M-510 EF.
-Un programmateur M-720.
-Un détecteur U.V. M-481 fixé à 254 nm.
-Un réfractomètre différentiel M-R-401 et un calculateur-enregistreur M-730.
Avant purification par CLHP, les échantillons injectés ont été filtrés sur une unité Millex HV-4 (Millipore).
Abréviations:
-TR: temps de rétention.
-PF: point de fusion.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1 Auclair, C., Voisin, E., Banoun, H., Paoletti, C., Bernadou, 3. and Meunier B. Potential antitumor agents : synthesis and biological properties of aliphatic amino-acid-9-hydroxyellipticinium derivatives. J. Med. Chem. 1984, 27, 1 166.
2 Gouyette, A., Auclair, C. and Paoletti, C. A revised structure of the antitumor drug Ellipticinium-Amino(acid) adducts. Biochem, Biophys. Res. Commun. 1985, 614. 3 Colicelli, 3. and Goff, S. P. Mutants and pseudoravertants of Moloney murine, leukemia virus with alterations at the intégration site. Cell 42: 573-580, 1985. 4
J.A. Parrish, R.S. Stern, M.A. Pathak, T.B. Fitzpatrick, dans "the Science of Photomedecine" ; J.D. Regan, J.A. Parrish, eds., Plénum, New-York, pp: 595 (1982). 5
T.B. Fitepatrick, J.A. Parrish, M.A. Pathak, dans "Sunlight and Man" ; M.A. Pathak, L.C. Harber, M. Seiji, A. Kukita, Eds., University of Tokyo Press, Tokyo, pp: 783 (1974). 6
R. Knorr, A. Trzeciack, W. Bannwarth, D. Gillessen, Tetrahedron Letters, 30, 1927 (1989).
7 J. Stadlwieser, Synthesis, 490 (1985).
8
S. T. Isaacs, C.3. Shen, J.E. Hearst, H. Rapoport, Bio-chemistry, 16, 1058 (1977). 9 A. Eliadis, D.R. Philips, J.A. Reiss, A. Skorobogaty, J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1049 (1988).

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé chimique, caractérisé en ce qu'il est constitué d'une molécule de netropsine ou de distamycine ou dérivée de la netropsine ou de distamycine couplée chimiquement à un agent intercalant.
2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'agent intercalant est un chromophore intercalant.
3. Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'agent intercalant est un dérivé oxazolopyridocarbazole.
4. Composé selon l'une des revendications 1 à 2 caractérisé en ce que l'agent intercalant est un dérivé de psoralène.
5. Composé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la molécule de netropsine ou distamycine ou dérivée de la netropsine ou de la distamycine est couplée à un agent intercalant par l'intermédiaire d'un radical alkylenyl notamment comportant une chaîne essentiellement polyméthylénique ayant de 1 à 10 atomes de carbone.
6. Composé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il répond aux formules générales I :
Figure imgf000039_0001
dans laquelle,
- Y représente l'agent intercalant
- n' est un entier de 1 à 10
- n représente un entier de 1 à 4,
- X représente un anion pharmaceutiquement acceptable tel que acétate ou chlorure.
7. Composé selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale II
Figure imgf000040_0001
dans laquelle :
- n' représente un entier de 1 à 6,
- R représente un groupement amidine et,
- X représente un ion associé pharmaceutiquement acceptable tel que un anion acétate ou chlorure.
8. Composé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un composé dans lequel n' = 3, X représente un anion acétate et
Figure imgf000040_0002
9. Composé selon la revendication 6 caractérisé en ce que J
ou
Figure imgf000041_0001
avec n' = 2 à 6.
10. Procédé de préparation d'un composé selon les revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il comprend le couplage d'une molécule de netropsine ou de la distamycine à un agent intercalant par l'intermédiaire d'une chaîne essentiellement poiyméthylénique.
11. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'on effectue le couplage d'un composé de structure :
Y— (CH2)n'— COOH où Y et n' ont les significations données de la revendication 6
12. A titre de composé thérapeutiquement actif, un composé selon l'une des revendications 1 à 9.
13. Utilisation des composés selon l'une des revendications 1 à 9, en tant qu'agent présentant la propriété de reconnaître sélectivement la séquence de paires de base AT, une activité inhibitrice sur l'activité catalytique de l'endonuclease de restriction EcoRI et/ou une activité inhibitrice dans l'intégration d'un pro-virus dans le génome d'une cellule hôte.
14. A titre d'agent antiviral, un composé selon l'une des revendications 1 à 9.
15. Composition pharmaceutique à activité antivirale, caractérisée en ce qu'elle comprend à titre de principe actif au moins un composé selon les revendications 1 à 9.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000053809A2 (fr) * 1999-03-09 2000-09-14 Applied Gene Technologies, Inc. Methode de marquage d'un amplicon d'acide nucleique assortie d'une prevention simultanee de toute contamination
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Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, Vol. 99, No. 9, 29 Aout 1983, (Columbus, Ohio, US), M.A. KRIVTSOVA et al.: "Solvent Effect on the Absorption Spectra of Distaxins", voir page 570, Resume No. 70049r, & Zh. Org. Khim. 1983, 19(4), 889-890 *
Comptes Rendus de l'Academie des Sciences, Vol. 302, serie II, No. 4, 28 Janvier 1986, Academie des Sciences, Paris (FR) G. PRATVIEL et al.: "Synthese de Molecules Fonctionnalisees dans la serie de l'Ellipticine", pages 167-169, voir page 168, ligne 1- page 169, ligne 6 *
Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 78, No. 11, Novembre 1989, American Pharmaceutical Association, Washington, DC (US) C. BAILLY et al.: "Design, Synthesis, DNA Binding, and Biological Activity of a series of DNA Minor-Groove-Binding Intercalating Drugs", pages 910-917, voir page 910, colonne de gauche, lignes 33-41 *
Journal of the Chemical Society, Chemical Communications, No. 15, 1er Aout 1988, Royal Soc. of Chemistry, Londres (GB) A. ELIADIS et al.: "The Synthesis and DNA Footprinting of Acridine-Linked Netropsin and Distamycin Bifunctional Mixed Ligands", pages 1049-1052, voir page 1050, colonne de gauche, lignes 1-13 (cite dans la demande) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000053809A2 (fr) * 1999-03-09 2000-09-14 Applied Gene Technologies, Inc. Methode de marquage d'un amplicon d'acide nucleique assortie d'une prevention simultanee de toute contamination
WO2000053809A3 (fr) * 1999-03-09 2002-02-07 Applied Gene Technologies Inc Methode de marquage d'un amplicon d'acide nucleique assortie d'une prevention simultanee de toute contamination
US6423497B1 (en) 1999-03-09 2002-07-23 Applied Gene Technologies, Inc. Method of labeling a nucleic acid amplicon with simultaneous contamination prevention
US6620586B2 (en) 2001-02-20 2003-09-16 Applied Gene Technologies, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acids

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