WO1981000037A1 - Procede de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes - Google Patents
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- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
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- A01N63/14—Insects
Definitions
- the present invention relates to a method of packaging and preserving eggs of insect-eating parasites.
- the method of control consists in mass production of the Trichogrammes from the eggs of a host of use, generally chosen from Lepidoptera of foodstuffs, then to transfer these eggs, once parasitized, in the fields where they give birth to adult Trichogrammes which parasitize the eggs of the pests to destroy.
- a host of use generally chosen from Lepidoptera of foodstuffs
- CHERKASOV's work made it possible to envisage a mode of conservation of the Trichograram which takes place from the following way: the day-old eggs of Noctuelle Hadena sordida or Cereal Aleucite Sitotroga cerealella are parasitized at the rate of one parasite for 5 eggs at 23-25 ° C, 70-80% relative humidity and a 16-hour photoperiod for 3 days. These eggs are then placed at 10 ° C with a 12 hour photoperiod and a relative humidity of 70-80% until the eggs are dark. At this stage, these eggs are stored at 3 ° C and at a relative humidity of 70-80%. This process allows, after 250 days of conservation, to obtain 36 to 48% of emergence of parasites.
- the fertility of the latter is reduced, close to 20 eggs per female and the "sex ratio" is in favor of males.
- the drawbacks of this method of production of the reduced fertility Trichogram, with a high percentage of males and brachyptera with reduced longevity to two or three days, does not allow the use of such Trichograms to drop them in the fields.
- Statement of the invention. aims to remedy these drawbacks by providing a method of conditioning and preserving Trichograms by cold, as it is possible at any time, from batches of these Entomophages stored for 3 to 12 months, to take samples of parasitized eggs which give a hatching rate, fecundity, longevity, a percentage of adults and a sex ratio not far from those of non-stocked individuals.
- Two variants of the. process according to the invention allow respectively to obtain a long storage, that is to say from 3 to 12 months, and a short storage, that is to say up to 45 days approximately.
- the method according to the invention is essentially characterized by the fact that one starts with Lepidoptera eggs from foodstuffs, in particular from Ephestia Kuhniella, having undergone prior conditioning, that in fact these eggs are parasitized by adults of Trichograms, that the eggs thus parasitized are subjected to a period incubation for at least 24 hours at 20 ° C, with photoperiod of 8 hours of light and 16 hours of darkness and at a relative humidity of 70 to 80%, that the eggs thus incubated are subjected to a period of induction from 6 to 80 days approximately, at a temperature below 15 ° C, with photoperiod of 8 hours of light and 16 h of darkness, and a relative humidity of approximately 70%, then that one starts to preserve the eggs thus obtained at 3 ° C, with photoperiod of 8 h of light and 16 h of darkness and at a relative humidity of 70 to 80%.
- Figure 1 is a graph indicating the percentage of releases depending on the age of Ephestia kuhnellia eggs, storage times at 3 ° C and the conditions of stay before induction;
- FIGS. 2 and 3 are graphs showing the percentage of exits as a function of the duration of induction, respectively for parasitisms and consequently incubations of 0 to 4 h and 0 to 24 h at 20 ° C of the parasitized eggs .
- the subject of the present invention is a conditioning of the Trichograms by cold as it is possible at any time, from batches of these Entomophages stored for 1 to 12 months at 3 ° C. depending on long storage. or from 0 to 45 days depending on short storage, to take samples of parasitized eggs which give a hatching rate, fertility, longevity, a percentage of adults and a sex ratio not far from those of individuals not stored.
- the invention consists on the one hand of bringing together at the optimal level all the factors which favor the induction of a developmental arrest, for example the feeding, the chronology of the offspring, the embryonic age, the conditioning of the egg by cold and ultraviolet rays, the abiotic conditions of breeding of the host, the conditions of the parental generation and the laying period, namely, temperature, light, humidity, as well as the pre-imaginal development of the parasite, the age of the parasite before entering induction, the chronology of the offspring, the lifespan without host, the parents' diet and the non-superparasitism of these oophages.
- a developmental arrest for example the feeding, the chronology of the offspring, the embryonic age, the conditioning of the egg by cold and ultraviolet rays, the abiotic conditions of breeding of the host, the conditions of the parental generation and the laying period, namely, temperature, light, humidity, as well as the pre-imaginal development of the parasite, the age of the parasite before entering induction, the chronology of the offspring,
- the method according to the invention also consists in strengthening, prolonging the induction beyond at the start of the observed developmental arrest. This reinforcement finally eliminates diapause completely and replaces it with a quiescence where the rotourer under favorable conditions triggers the evolution into a nymph then as an adult.
- eggs aged 0 to 24 hours killed by ultraviolet rays or by cold are used, coming from females of Ephestia kuhniella having preferably already had a number of descendants and coming from larvae which have undergone or not cold storage.
- parasitism is carried out after feeding on honey by primiparous adults raised between 20 and 23 ° C, aged a few hours and over a period of 4 to 24 hours, without superparasitism and in abiotic conditions around 20 ° C with photo period of 8 h of light and 16 h of darkness at 70% relative humidity.
- the eggs thus parasitized are left to incubate for 24 h at 20 ° C, with a photoperiod of 8 h of light and 16 h of darkness, at a relative humidity of 70%.
- the end of the incubation, the larval development, as well as part of the blockage at the end of the larval stage take place at alternating or constant temperatures lower than 15 ° C and higher or equal to 5 ° C, for example 14 ° C , for a strain called "strain 16" (which will be defined below), a photoperiod of 8 h of light and 16 h of darkness, or a thermoperiod of 5 to
- 1 month can also be obtained by using eggs of Ephestia kuhniella having for example 72 h, incubated after parasitism for 96 h at 20 ° C before suitable induction such as 14 ° C with photoniod of 8 h for 7 days in the case of strain 16.
- the invention is completed by the use of an effect known as the F 1 effect of considerable reinforcement of the biotic potential of the descendants of the diapausants.
- the latter indeed have, compared to their parents, almost double fertility and longevity and increased host search activity.
- the possibility of obtaining both still effective diapausants after a year of storage and the discovery of the considerable potentialities of their descendants allow the use for releases in open fields of these two types of Trichograms with, for the dia pausing, all the transport and maintenance facilities provided by the cold chain.
- the control of the diapause is also sufficiently refined that it is possible to ensure, throughout its development, the quality control of the Trichograms produced and to detect this diapause by a simple and rapid test. It should be added that it is necessary to follow a diapause generation by one generation, and preferably two generations, with continuous development, in non-slowed down living conditions, if one wishes to introduce a diapause again. .
- the present invention thus makes it possible to have all the elements necessary, in terms of practical use in biological control, to cumulate the daily productions of Trichograms, to keep them for more than a year, to reuse them either as they are, either after awakening, or by using the increased potential of their descendants, or as inocula for parasitism of new host eggs.
- the use of such a stop therefore gives great flexibility to this type of biological control.
- Each batch is divided in turn into 11 elementary parts which are arranged at 20 ° C with photoperiod of 16 h of light and 8 h of darkness.
- An elementary part comprising 5 plates is removed every 4 h to be placed at the induction temperature. This is carried out at a temperature slightly above 15 ° C, which allows part of the population to continue its development. No storage is carried out at 3 ° C. and the whole test is carried out at 70% relative humidity.
- Table I summarizes the average fertility rates and the percentage of hatchings per female, whether or not they have been cold stored before parasitism.
- Example 4 The following test was carried out in order to check whether it is possible to discern a difference in diapause quality linked to two induction temperatures very close to each other.
- two durations of exposure of the parasites to their host were carried out, one of short duration (4 h), which corresponds to a continuous production of parasitized Ephestia kuhniella eggs, the other of long duration. (24 hours), closer to the usual production of Trichograms.
- Example 6 Effect F 1
- the purpose of this example is to show the influence of the awakening methods on the fertility of diapausing females and that of diapause on the fertility of descendants, the treatment notably comprising an induction period of 30 days at a temperature between 12 and 15 ° C.
- the methods of awakening, the effect of diapause on the descendant girls compared to two witnesses, one originating in the initial population, the other of the descendants of this witness, relate for each series to 25 females. Fertility was recorded on the second day by changing the platelets, then on the tenth day and, then, from week to week. The sex ratio was also noted. From the tenth day, dissections are carried out on 300 parasitized eggs every two days to determine the distribution of the various stages in the population. a) Distribution of stages at induction temperature (from the 10th to the 30th day)
- the method according to the invention therefore allows the mass production of Trichograms making it possible in particular to store the oophagus produced for a relatively long time, which allows distribution from the place of production to the field.
- the diapause of individuals is precisely a state that authorizes both cold storage, the use of the cold chain for transport and the accumulation of daily, monthly and even annual production.
- the production of the Trichogram makes it possible in particular to implement biological control in the form of flooding and seasonal releases, in particular on corn fields within the framework of the fight against the European corn borer Ostrinia nubilalis hubner.
- the strain No. 16 is a chalcid hymenopterous insect of the family Trichogrammatidae modified and adapted to the destruction of the eggs of Ostrinia nubilalis (corn borer).
- Trichogramma evanescens was described in 1833 by Westwood J.O. (Type locality: England), it is a parasitoid whose larvae live at the expense of lepidopteran eggs. The species was morphologically redescribed by
- Sex ratio (percentage of females) offspring from the first 3 days of lay: 0.69 ⁇ 0.04 offspring from the first 5 days of lay: 0.68 ⁇ 0.02 offspring from the first 7 days of lay : 0.64 ⁇ 0.03
- esterases By electrophoresis, certain enzymes have been characterized: esterases, malate-dehydrogenases and tetrazolium-oxidases. If the last two are not in the strain in a particular state, the esterases allow, on the other hand, a precise identification.
- strain n ° 16 of trichograms applicable to the process according to the invention and intended for the fight against the European corn borer is unique and recognizable.
- the method according to the invention makes it possible to implement a mode of biological control against lepidopteran predators of plants, in particular the corn borer, by means of the parasitic oophagous insect.
- this control method in which at least one annual spreading of the field of eggs-hosts of the oophagous parasite is carried out on the plants to be protected, a single spreading is advantageously carried out, at the period corresponding to the start of the laying of the lepidopteran, a dosed mixture of eggs hosts having undergone a conditioning such that some, of a first wave, contain the oophagus in last stage of evolution and the others, of a second wave, contain oophage in the pre-nymph stage, by means of which imagos from the eggs of the first wave emerge after 1 to 2 days and those from the second wave emerge after 15 to 20 days.
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Abstract
Un procede de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes, destines notamment a la lutte biologique contre certains depredateurs de plantes. Selon ce procede, on part d'oeufs de lepidopteres de denrees alimentaires, en particulier d'Ephestia kuhniella, ayant subi un conditionnement prealable, on fait parasiter ces oeufs par des adultes de trichogrammes, on soumet les oeufs parasite a une periode d'incubation, on soumet les oeufs incubes a une periode d'induction, puis on met a conserver au froid les oeufs ainsi obtenus. L'invention est applicable notamment a la lutte biologique contre la pyrale du mais Ostrinia nubilalis hubner.
Description
Procédé de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes Domaine technique.
La présente invention concerne un procédé de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes. Dans le domaine de l'agriculture, plus particulièrement celui de la protection des plantes contre les insectes nuisibles, par voie biologique, on sait qu'il est fait appel à des parasites oophages du genre Trichogramme dans la lutte contre certains déprédateurs. Pour ces déprédateurs, le mode de lutte consiste à produire en masse les Trichogrammes à partir des oeufs d'un hôte d'utilisation, généralement choisi parmi les Lépidoptères des denrées alimentaires, puis à transférer ces oeufs, une fois parasités, dans les champs où ils donnent naissance à des Trichogrammes adultes qui parasites les oeufs des déprédateurs à détruire. Technique antérieure.
Une des limites de ce mode de lutte biologique réside dans la difficulté de stocker les productions journalières de l'Entomophage et de les conserver. Par ailleurs, on sait que les Trichogrammes présentent dans la nature un arrêt de développement hivernal dans leurs oeufs hôtes qui leur permet de passer plusieurs mois à l'état de vie ralentie, soit par simple quiescencc, soit par diapause. Certains auteurs tels que ZORIN (1927) et TELENGA (1954-1956) ont montré par ailleurs qu'il était nécessaire, pour le maintien de toutes les potentialités biotiques du parasite, de le faire entrer en diapause. Cependant, malgré les études consacrées à la diapause du Trichogramme (voir travaux de TELENGA 1956, MASLENNEKOVA - TSYBUS ' SKAYA - KAPUSTINA 1974), il n'est pas possible à l'heure actuelle (voir en particulier les travaux de CHERKASOV de 1976) de conserver en hiver des Trichogrammes qui resteraient performants au printemps.
Les travaux de CHERKASOV ont cependant permis d'envisager un mode de conservation du Trichograrame qui se déroule de
la façon suivante : on fait parasiter les oeufs de un jour de la Noctuelle Hadena sordida ou de l'Aleucite des céréales Sitotroga cerealella à raison de un parasite pour 5 oeufs à 23-25°C, 70-80 % d'humidité relative et une photopériode de 16 heures pendant 3 jours. On place ensuite ces oeufs à 10°C avec une photopériode de 12 heures et une humidité relative de 70-80 % jusqu'au noircissement des oeufs. A ce stade, on conserve ces oeufs à 3°C et à une humidité relative de 70-80 %. Ce procédé permet, après 250 jours de conservation, d'obtenir 36 à 48 % d'émergence de parasites. La fécondité de ces derniers est réduite, voisine de 20 oeufs par femelle et la "sex-ratio" est en faveur des mâles. Les inconvénients de ce procédé de production du Trichogramme a fécondité réduite, à pourcentage élevé de mâles et de brachyptères à longévité réduite à deux ou trois jours, n'autorise pas l'utilisation de tels Trichogrammes pour les lâcher dans les champs. Exposé de l'invention. La présente invention vise à remédier à ces inconvénients en fournissant un procédé de conditionnement et de conservation des Trichogrammes par le froid, tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces Entomophages stockés de 3 à 12 mois, de prélever des échantillons d'oeufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage d'ailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux des individus non stockés. Deux variantes du. procédé selon l'invention permettent respectivement d'obtenir un stockage long, c'est-à-dire de 3 à 12 mois, et un stockage court, c'est-à-dire jusqu'à 45 jours environ.
Le procédé selon l'invention est essentiellement caractérisé par le fait que l'on part d'oeufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, en particulier d'Ephestia Kuhniella, ayant subi un conditionnement préalable, qu'en fait parasiter ces oeufs par des adultes de Trichogrammes, qu'on soumet les oeufs ainsi parasités à une période
d'incubation d'au moins 24 heures à 20 °C, avec photopériode de 8 heures de lumière et 16 heures d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80 %, qu'on soumet les oeufs ainsi incubés à une période d'induction de 6 à 80 jours environ, à une température inférieure à 15°C, avec photopériode de 8 heures de lumière et 16 h d'obscurité, et une humidité relative de 70 % environ, puis qu'on met à conserver les oeufs ainsi obtenus à 3°C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80 %.
Selon d'autres caractéristiques : pour le stockage long, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 0 à 24 h, la durée de la période d'incubation étant de 24 h à 20 °C et la durée de la période d'induction étant de 40 à 80 jours à une température continue ou alternée comprise entre 5 et 15 °C environ ; pour le stockage court, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h environ, la durée de la période d'incubation à 20°C des oeufs parasités étant de 96 h et la durée de la période d'induction étant de 7 jours environ à une température inférieure à 15°C ; le conditionnement préalable des oeufs d'Ephestia kuhniella consiste à les tuer par les ultraviolets ou le froid et, éventuellement à les faire séjourner à une température de 3°C pendant une durée inférieure à 14 jours ; on parasite les oeufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 20 °C avec une photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité, nourris et fraîchement émergés, pendant une durée de 4 h environ. Brève description des dessins.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux de la description qui va suivre, faite en regard des dessins annexés sur lesquels: - la figure 1 est un graphique indiquant le
pourcentage de sorties en fonction de l'âge des oeufs d'Ephestia kuhnellia, des durées de stockage à 3°C et des conditions de séjour avant induction ; et
- les figures 2 et 3 sont des grapniques indiquant le pourcentage de sorties en fonction de la durée d'induction, respectivement pour des parasitismes et par conséquence des incubations de 0 à 4 h et de 0 à 24 h à 20°C des oeufs parasités. Meilleure manière de réaliser l'invention. Comme mentionné ci-dessus, la présente invention a pour objet un conditionnement des Trichogrammes par le froid tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces Entomophages stockés de 1 à 12 mois à 3°C selon le stockage long ou de 0 à 45 jours selon le stockage court, de prélever des échantillons d'oeufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage d'ailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux des individus non stockés.
Dans le cas du stockage long, l'invention cor.siste d'une part à réunir au niveau optimal tous les facteurs qui favorisent l'induction d'un arrêt de développement, par exemple l'alimentation, la chronologie de la progéniture, l'âge embryonnaire, le conditionnement ce l'oeuf par le froid et les ultraviolets, les conditions abiotiques d'élevage de l'hôte, les conditions de la génération parentale et de la période de ponte, à savoir, température, lumière, humidité, ainsi que du développement pré-imaginal du parasite, l'âge du parasite avant d'entrer en induction, la chronologie de la descendance, la durée de vie sans hôte, l'alimentation des parents et le non-superparasitisme de ces oophages.
Le procédé selon l'invention consiste d'autrepart à renforcer, à prolonger l'induction au-delà au début de l'arrêt de développement observé. Ce renforcement permet finalement d'éliminer complètement la diapause et de la remplacer par une quiescence où le rotour aux conditions favorables déclenche l'évolution en nymphe
puis en adulte.
Conformément à l'invention, on utilise des oeufs âgés de 0 à 24 h tués par les ultraviolets ou par le froid, provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid. Sur de tels oeufs, ayant séjourné moins de 14 jours à 3°C, on effectue le parasitisme après alimentation sur miel par des adultes primipares élevés entre 20 et 23 °C, âgés de quelques heures et sur une période de 4 à 24 h, sans superparasitisme et dans des conditions abiotiques autour de 20 °C avec photo période de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité à 70 % d'humidité relative. Il est à noter que contrairement à la technique connue qui tend à multiplier les Trichogrammes dans le rapport 1 à 5 au maximum d'une génération à une autre et avec un superparasitisme élevé, il est possible selon l'invention d'atteindre un rapport 1 à 15 avec une tendance très marquée pour le monoparasitisme et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la descendance obtenue.
Les oeufs ainsi parasités sont laissés à incuber pendant 24 h à 20 °C, avec une photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, à une humidité relative de 70 %. La fin de l'incubation, le développement larvaire, ainsi qu'une partie du blocage en fin de stade larvaire s'effectuent aux températures alternées ou constantes inférieures à 15 °C et supérieures ou égales à 5°C, par exemple 14 °C, pour une souche dite "souche 16" (qui sera définie ci-après), une photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, ou bien une thermopériode de 5 à
12°C, avec photopériode de 8 h de lumière à 12 °C et 16 h d'obscurité à 5°C, et une humidité relative élevée de 70 à 80 % pendant 40 à 80 jours. Le stockage a lieu ensuite à 3°C dans des conditions de photopériode de 8 h de lumière 16 h d'obscurité et une humidité relative de 70 à 80 %, pendant 3 à 12 mois sans baisse sensible du potentiel biotique. Le taux d'émergence des adultes
après réveil entre 23 et 25°C, est proche de 95 % pour les durées de stockage de 3 à 6 mois et de 90 % pour les durées de stockage de 6 mois à 1 an . Les délais d'émergence de l'ordre de 8 jours à 25 °C et de 13,5 jours à 20 °C pour 3 mois de stockage augmentent, en fonction de la durée de conservation au froid, de 1 à 3 jours. La fécondité moyenne par femelle isolée est de l'ordre de 75 oeufs, la longévité moyenne de 16 jours et la sex-ratio de plus de 2 femelles pour 1 mâle. Des stockages de courte durée, de l'ordre de
1 mois, peuvent également être obtenus en faisant appel à des oeufs d'Ephestia kuhniella ayant par exemple 72 h, mis à incuber après parasitisme pendant 96 h à 20 °C avant induction convenable telle que 14 °C avec photonériode de 8 h pendant 7 jours dans le cas de la souche 16.
Dans le cas du stockage court, il est possible d'atteindre des développements relativement longs sans stockage à 3°C, en faisant développer les Trichogrammes sur des oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h, par exemple à des températures-seuils de 15 à 16°C, après séjour de 96 h à 20°C (stockage de 28 jours) ou de 6 à 8 jours à 25°C (stockage de 4 à 20 jours) . Ce dernier conditionnement aboutit à une émergence généralisée dans les quelques heures qui suivent la sortie des oeufs parasites du froid à 15-16°C et qui se synchronise avec la climatologie du lieu du lâcher.
L'invention se complète par l'exploitation d'un effet dit effet F1 de renforcement considérable du potentiel biotique des descendants des diapausants. Ces derniers présentent en effet, par rapport à leurs parents, une fécondité et une longévité presque doublées et une activité de recherche de l'hôte accrue. La possibilité d'obtenir à la fois des diapausants encore performants après un an de stockage et la découverte des potentialités considérables de leurs descendants autorisent l'emploi pour des lâchers en pleins champs de ces deux types de Trichogrammes avec, pour les dia
pausants, toutes les facilités de transport et de maintenance que procure la chaîne de froid. La maîtrise de la diapause est par ailleurs suffisamment affinée pour qu'il soit possible d'assurer durant tout son dêveloppement le contrôle de la qualité des Trichogrammes produits et de déceler par un essai simple et rapide cette diapause. Il y a lieu d'ajouter qu'il est nécessaire de faire suivre une génération à diapause par une génération, et de préférence deux générations, à développement continu, en conditions de vie non ralentie, si l'on désire à nouveau introduire une diapause.
La présente invention permet ainsi de disposer de tous les éléments nécessaires, sur le plan de l'utilisation pratique en lutte biologique, à cumuler les productions journalières de Trichogrammes, de les conserver pendant plus d'un an, pour les réutiliser soit tels quels, soit après un réveil, soit en utilisant le potentiel accru de leurs descendants, soit comme inoculums pour le parasitisme de nouveaux oeufs hôtes. L'exploitation d'un tel arrêt confère donc une grande souplesse à ce type de lutte biologique. Possibilités d'application industrielle.
Les exemples suivants, donnés à titre illustratif mais nullement limitatif, feront mieux saisir la portée et l'intérêt de l'invention. Exemple 1
Effet de l'oeuf hôte
Cet essai a été réalisé afin de vérifier quel est le stade embryonnaire d'Ephestia kuhniella le plus favorable au développement de type rapide, de type quiescence ou de type diapause du Trichogramme. Les travaus de DAUMAL et ses Collaborateurs (1974) montrent que le stade sensible aux basses températures d'Ephestia kuhniella est de 0 à 17 h et le stade le plus résistant est à 72 h de développement embryonnaire à 20 °C. Les essais ont porté sur ces stades vis-à-vis du développement du Trichogramme.
Pour la réalisation de cet essai, on dispose deux lots de 55 plaquettes que l'on fait parasiter par le Trichogramme à 20°C pendant 1 h, le premier lot étant constitué d'oeufs de O à 17 h d'âge, le deuxième lot est constitué d'oeufs de 72 h d'âge. Chaque lot est divisé à son tour en 11 parties élémentaires qui sont disposées à 20°C avec photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité. Une partie élémentaire comportant 5 plaquettes est retirée toutes les 4 h pour être placée à la température d'induction. Celle-ci est réalisée à une température légèrement supérieure à 15°C, ce qui permet à une partie de la population de poursuivre son développement. On ne procède à aucun stockage à 3°C et l'on effectue l'ensemble de l'essai à 70 % d'humidité relative.
Les résultats de cet essai sont résumés sur le graphique de la figure 1 où l'on a porté en abscisses le temps de séjour en heures, à 20°C avant induction à 15°C, et on ordonnées, le pourcentage de sorties des individus. Sur ce graphique, les courbes F, A, B et C sont données à titre de références pour des durées de stockage en mois à 3°C, respectivement de 1 mois, de 3 mois, de 6 mois et de 9 mois. Les courbes E et D concernent le pourcentage de sorties en fonction de l'âge des oeufs, respectivement de O à 17 h et de 72 h. D'après les courbes D et E, il apparaît une grande différence entre les taux d'émergence des deux séries d'âges de l'hôte. Il semble que les oeufs de 72 h soient les meilleurs pour un développement continu aux températures critiques. Ils constituent par contre, comme corollaire, des conditions de milieu très défavorable à la diapause puisque les Trichogrammes évoluent au-delà du stade susceptible d'être stocké à 3°C. Inversement, les oeufs de 0 à 17 h semblent les plus favorables à la diapause, particulièrement pour des durées d'incubation de 4 à 56 h avant induction.
On a également cherché à vérifier l'influence des différentes durées d'incubation à une température d'induction légèrement inférieure à 15°C, à savoir 14°C
pour les hôtes de 0 à 17 h pour une durée d'induction de 40 jours et des durées de stockage au froid à 3°C de 1, 3, 6 et 9 mois. On voit d'après le graphique que c'est après 3 mois de stockage que le taux des émergences est le meilleur, à savoir 98 %. Il est encore de 90 % après 9 mois. A un mois de stockage à 3°C, le taux d'émergence est très bas, le plus souvent inférieur à 10 %.
Il résulte de ces essais que le taux d'émergence dépend de manière hautement significative du stade de développement avant induction et de la durée du stockage au froid. A noter cependant que les séries ayant incubé plus de 52 h à 20°C avant induction ont un faible pourcentage d'émergence, de l'ordre de 1 à 2 % à la fin de l'induction. Pour le stockage long notamment, il est donc avantageux d'utiliser des oeufs de 0 à 24 h, tués par les ultraviolets ou par le froid et provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid. Exemple II
Le tableau I qui suit résume les taux de fécondité moyenne et le pourcentage d'éclosions par femelle, ayant subi ou non un stockage au froid avant parasitisme.
On constate que le parasitisme le plus efficace intervient sur des oeufs ayant séjourné moins de 14 jours L 3°C. Exemple 3
On a cherché à vérifier si l'élevage des parents à diverses températures peut avoir un effet sur la diapause
de la progéniture induite par différentes températures et photopériodes en fonction de différentes durées d'induction. On a également cherché l'influence possible de la méthode de collage des oeufs à l'eau ou à la colle sur la qualité de cette diapause. a) Préparation des inoculums {génération parentale)
On dispose 3 lots de 96 tubes contenant chacun un inoculum de 100 oeufs parasités en 24 h à 23°C, l'un à 15°C, l'autre à 20-23°C et le troisième lot à 23-27°C. b) Préparation des oeufs hôtes pour la génération fille
Au moment de l'émergence des adultes parentaux, on introduit dans chaque tube deux plaquettes de 500 oeufs traités aux ultraviolets, l'une comportant des oeufs collés à l'eau, l'autre comportant des oeufs collés à l'aide d'une solution aqueuse de gomme arabique à 30 %. c) Mode d'induction
On place une moitié de chaque lot à 13,5ºC et l'autre moitié à 10 °C. A chacune de ces températures, l'effectif est à son tour divisé en deux parties : l'une est soumise à la photopériode de 8 h de lumière-16 h d'obscurité et l'autre à 16 h de lumière- 8 h d'obscurité, chacun pour moitié jusqu'au grisement, l'autre jusqu'au grisement plus 2 semaines. On dispose ainsi de 48 lots élémentaires de 12 plaquettes qui sont stockées à 3°C. d) Mode de stockage
Par traitement élémentaire, 4 plaquettes sont stockées 1 mois, 4 plaquettes pendant 3 mois et 4 plaquettes pendant 6 mois. Après stockage, on effectue la réactivation à 23-27°C et l'on calcule le taux d'émergences sur 100 oeufs. Durant toutes les phases de ces essais, on maintient l'humidité relative à 70 %. On constate tout d'abord que l'élevage de la souche moldave de Trichogramma evanescens à 15°C aboutit à un pourcentage important de diapausants et, de ce fait,
on élimine le lot destiné à produire des imagos parentaux à cette température.
Il ressort de cet essai que le mode de collage n'interfère pas sur le taux d'émergence, que ce facteur soit considéré isolément ou en interaction avec les autres facteurs. La température d'élevage des parents ne montre pas d'effet significatif, isolément, mais elle présente par contre une interaction de la génération fille. Cette interaction se renforce d'ailleurs avec une interaction de troisième ordre hautement significative avec la température d'induction et significative avec la photodiode d'induction. Ce dernier facteur présente par ailleurs, toujours associé à la température d'élevage des parents, une interaction de troisième ordre avec la durée de stockage à 3°C.
Les facteurs les plus influents sont finalement, d'une part, les conditions d'induction de la génération fille, photo-période, durée et température d'induction et d'autre part, le mode de stockage à 3°C, isolément, et en interaction avec la température et la durée d'induction. L'effet de la température d'induction est, par ailleurs, renforcé de manière hautement significative par la photopériode et la durée d'induction. Exemple 4 On a réalisé l'essai qui suit dans le but de vérifier s'il est possible de discerner une différence de qualité de diapause liée à deux températures d'induction très proches l'une de l'autre. Par ailleurs, on a effectué deux durées d'exposition des parasites à leur hôte, l'une de courte durée (4 h), qui correspond à une production en continu d'oeufs d'Ephestia kuhniella parasités, l'autre de longue durée (24 heures), plus proche de la production habituelle des Trichogrammes. Dans le premier type, le superparasitisme est presque inexistant. Dans le second type, il est plus fréquent. Dispositif expérimental :
On expose aux Trichogrammes 132 plaquettes
d'oeufs d'Ephestia kuhniella passés aux ultraviolets, 62 plaquettes sont retirées après 4 h de parasitisme, les autres après 24 h. Ces deux séries de plaquettes ainsi parasitées sont placées à une température légèrement inférieure à 15°C, avec photopériode de 8 h de lumière-16 h d'obscurité, à 70 % d'humidité relative. Chaque jour, on passe à 13,5°C un lot de 6 plaquettes de chaque série, avec photopériode de 8 h de lumière16 h d'obscurité et à 70 % d'humidité relative, jusqu'au noircissement des oeufs plus 10 jours. On place ensuite ces plaquettes à 3°C et on les retire après 1 mois, 3 mois et 6 mois de stockage respectivement. On effectue la réactivation à 23-27°C, à 70% d'humidité relative. Après réveil pour chaque traitement élémentaire, on isole 5 femelles afin de connaître leur fécondité en 7 jours.
Les résultats de ces essais sont indiqués sur les graphiques des figures 2 et 3 où l'on a porté en abscisses la durée d'induction en jours, sur deux échelles respectivement à 14,9°C et 13,5°C, et en ordonnées le pourcentage de sorties des individus. Sur ces graphiques, les courbes G, H et I correspondent respectivement à 1 mois, 3 mois et 6 mois de stockage à 3°C. Il résulte de ces essais qu'il existe une différence hautement significative entre les deux durées de parasitisme, celle de 4 h conduisant dans presque tous les cas à une meilleure diapause. Ces différences peuvent être attribuées soit au fait d'un superparasitisme plus important après 24 h d'exposition des oeufs d'Ephestia kuhniella aux Trichogrammes, superparasitisme conduisant à freiner l'induction d'une diapause, soit à une meilleure compétence des premiers oeufs du parasite pour la diapause. On a pu remarquer en outre que, dans les cas où il n'y avait pas de superparasitisme et pour des périodes d'induction plus longues, de l'ordre de 40 jours, on pouvait obtenir un très bon pourcentage (supérieur à 95 %) d'émergence dans le cas de 24 h de parasitisme.
Exemple 5
Le but des essais résumés dans les tableaux II et III qui suivent est de montrer qu'il est possible d'atteindre un rapport 1 à 15 avec une tendance marquée pour le monoparasitisme et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la descendance à partir d'oeufs d'Ephestia kuhniella parasités par le Trichogramme.
Exemple 6 Effet F1 Le but de cet exemple est de montrer l'influence des modalités de réveil sur la fécondité des femelles diapausantes et celle de la diapause sur les fécondités des descendants, le traitement comprenant notamment une durée d'induction de 30 jours à une température comprise entre 12 et 15 °C. Les modalités de réveil, l'effet de la diapause sur les descendantes filles comparées à deux témoins, l'un originaire de la population initiale, l'autre des descendants de ce témoin, portent pour chaque série sur 25 femelles. Les fécondités ont été relevées le deuxième jour par changement des plaquettes, puis le dixième jour et, ensuite, de semaine en semaine. On a également relevé la sex-ratio. A partir du dixième jour, on effectue des dissections sur 300 oeufs parasités tous les deux jours pour connaître la distribution des divers stades dans la population. a) Distribution des stades à la température d'induction (du 10e au 30e jour)
1er au 10e jour : tous les individus sont au stade fin de
3e stade larvaire, prénymphe. Les oeufs sont de couleur gris moyen. 2e au 14e jour : apparition de 17 nymphes hyalines 3e au 16e jour : apparition de 20 nymphes hyalines 4e au 19e jour : apparition de 13 nymphes hyalines apparition de 7 nymphes yeux rouges 5e au 22e jour : apparition de 13 nymphes hyalines apparition de 7 nymphes yeux rouges 6e au 25e jour : apparition de 14 nymphes hyalines apparition de 2 nymphes yeux rouges apparition de 2 nymphes en tout début de sclérification 7e au 30e jour : apparition de 18 nymphes hyalines apparition de 4 nymphes yeux rouges apparition de 2 nymphes nettement sclérifiées
b) Les pourcengages de sorties sont, pour les trois modes de réveil R1, R2, R3 (voir ci-après) respectivement de 61,7, 63,8 et 54,5 % . L'apparition des premiers adultes a lieu 10 jours après la sortie des oeufs parasités de leur stockage au froid. La sex-ratio est élevée : environ 1 mâle pour 2 femelles, alors que pour la génération F1, elle est de 1 mâle pour 6 femelles (voir ci-après).
L'étalement des sorties se fait pratiquement sur 4 jours et 85 % des sorties ont lieu en deux jours.
Les modes de réveil sont résumés de la façon suivante
R1 réveil à 23-27°C
R2 réveil à 20°C, pendant 3 jours, puis 23-27°C
R3 réveil à 15°C, pendant 3 jours, puis 23-27°C
F1 : génération fille élevée à 23-27°C T : témoin élevé à 20°C
F1T: génération du témoin élevé à 23-27°C.
Aux 6 traitements examinés pour la fécondité, correspondent les longévités moyennes données dans le tableau V qui suit :
Le procédé selon l'invention permet donc la production en masse des Trichogrammes permettant notamment de stocker l'oophage produit pendant un temps relativement long, qui permet la distribution du lieu de production au champ. La diapause des individus est précisément un état qui autorise à la fois le stockage par le froid, l'utilisation de la chaîne du froid pour les transports ainsi que le cumul des productions journalières, mensuelles et même annuelles. La production du Trichogramme permet notamment de mettre en oeuvre la lutte biologique sous forme de lâchers inondatifs et saisonniers, en particulier sur des champs de maïs dans le cadre de la lutte contre la pyrale du maïs Ostrinia nubilalis hubner.
Comme mentionné plus haute, une "souche 16" de Trichogramme, spécialement adaptée par le Demandeur, convient particulièrement dans la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus.
Conformément à la présente invention, la souche n°16 est un insecte hyménoptère chalcidien de la famille des Trichogrammatidae modifié et adapté à la destruction des oeufs d'Ostrinia nubilalis (pyrale du mais).
Trichogramma evanescens fut décrit en 1833 par Westwood J.O. (Localité du type : Angleterre), il s'agit d'un parasitoïde dont les larves vivent aux dépens des oeufs de lépidoptères. L'espèce fut morphologiquement redécrite par
Nagarkatti (S) et Nagaraja (H) en 1971.
Comme mentionné plus haut, les trichogrammes
sont déjà employés en lutte biologique dans de nombreux pays, mais jamais une souche active et très bien définie comme la souche n°16 n'a été obtenue. Celle-ci a été découverte en Moldavie (U.R.S.S.) par Jean VOEGELE dans des oeufs d'Ostrinia nubilalis sur maïs. Le Demandeur a conduit l'élevage, à l'aide d'oeufs d'Ephestia kuhniella de manière à sélectionner les individus les plus féconds et à obtenir une consanguinité totale. Il ne s'agit donc pas d'une population naturelle mais d'un lot renouvelable d'individus tous identiques. Cette souche n°16 est unique.
On donne ci-dessous les caractères d'identification quantitatifs de cette souche n° 16 (conditions abiotiques : 25°C, 70 % H.R., 16 h de lumière par jour).
1) Fécondité
Elle est exprimée par la fertilité (nombre d'enfants adultes obtenus)
2) Sex-ratio (pourcentage de femelles) progéniture issue des 3 premiers jours de ponte : 0,69±0,04 progéniture issue des 5 premiers jours de ponte :0,68±0,02 progéniture issue des 7 premiers jours de ponte : 0,64±0,03
Sex-ratio totale = 0,60
3) Pourcentage d'émergence 82,0 %
4) Longévité
Longévité des femelles fécondées : 10,4 ± 0,3 jour Pourcentage d'individus morts avant 8 jours : Femelles vierges 0 % Femelles fécondées 6,2 % Mâles 81,2 %
5) Pourcentage de stérilité Femelles : 2,97 % Mâles : 7,69 %
6) Capacité de recherche de l'hôte standard (E. kuhniella)
On donne ci-dessous les caractères d'identification qualitatifs .
Par électrophorèse, certaines enzymes ont été caractérisées : estérases, malate-déshydrogénases et tétrazolium-oxydases. Si les deux dernières ne se trouvent pas dans la souche dans un état particulier, les estérases permettent, par contre, une identification précise.
Aucun polymorphisme n'est décelé. Cinq bandes, correspondant à 5 locus, présentent des mobilités électrophorétiques de 0,10 ; 0,22 ; 0,28 ; 0,50 et 0,53. La première et les deux dernières sont les plus intenses.
Sur 28 souches analysées, y compris 2 provenant comme la souche n° 16 des cultures de maïs, aucune ne possède de tels caractères estérasiques.
Il résulte des données ci-dessus qu'à l'aide de l'ensemble de ces caractères, il n'est pas possible de confondre la souche n° 16, d'une part, avec l'une quelconque des 150 lignées connues et, d'autre part, avec une population naturelle.
La souche n° 16 de trichogrammes applicable au procédé selon l'invention et destinée à la lutte contre la pyrale du maïs est unique et reconnaissable.
Le procédé selon l'invention permet de mettre en oeuvre un mode de lutte biologique contre les lépidoptères déprédateurs de plantes, notamment la pyrale du maïs, par l'intermédiaire de l'insecte parasite oophage. Selon ce mode de lutte, dans lequel on effectue au moins un épandage annuel du champ d'oeufs-hôtes du parasite oophage sur les plantes à protéger, on réalise avantageusement un épandage unique, à la période correspondant au début de la ponte du lépidoptère, d'un mélange dosé d'oeufs
hôtes ayant subi un conditionnement tel que les uns, d'une première vague, renferment l' oophage en dernier stade d'évolution et les autres, d'une seconde vague, renferment l'oophage au stade pré-nymphe, moyennant quoi des imagos issus des oeufs de la première vague émergent au bout de 1 à 2 jours et ceux issus de la seconde vague émergent au bout de 15 à 20 jours.
Il est bien entendu que la présente invention n'a été décrite et représentée qu'à titre explicatif mais nullement limitatif et qu'on pourra y apporter toute modification utile dans le domaine des équivalences techniques sans sortir de son cadre.
Claims
1. Procédé de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes, destinés notamment à la lutte biologique contre certains déprédateurs de plantes, du type comportant le parasitage d'un oeufhôte et la conservation au froid, caractérisé par le fait que l'on part d'oeufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, en particulier d'Ephestia kuhniella, ayant subi un conditionnement préalable, qu'on fait parasiter ces oeufs par des adultres de Trichogrammes, qu'on soumet les oeufs ainsi parasités à une période d'incubation d'au moins 24 h à 20°C, avec photopëriode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80 % , qu'on soumet les oeufs ainsi incubés à une période d'induction de 6 à 80 jours environ, à une température inférieure à 15°C, avec photopëriode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, et une humidité relative de 70 % environ, puis qu'on met à conserver les oeufs ainsi obtenus à 3°C, avec photopëriode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80 i.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage long, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 0 à 24 h, la durée de la période d'incubation du parasite étant de 24 h à 20°C et la durée de la période d'induction étant de 40 à 80 Tours à une température comprise entre 5 et 15 °C environ.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage court, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h environ, la durée de la période d'incubation étant de 96 h à 20 °C et la durée de la période d'induction étant de 6 à 8 jours à une température inférieure à 15°C.
4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le conditionnement préalable des oeufs d'Ephestia kuhniella consiste à les tuer par les ultraviolets ou le froie et éventuellement, à les faire séjourner à une température de 3°C pon dant une durée inférieure à 14 jours.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'on parasite les oeufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 20 °C avec une photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité, nourris et fraîchement émergés pendant une durée de 4 à 24 h environ.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on effectue le réveil des oeufs conservés à 3°C, à une température comprise entre 23 et 21 ° C , avec éventuellement un palier de trois jours environ à 20 °C.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que l'on exploite plus particulièrement, en vue de la lutte biologique, la deuxième génération des Trichogrammes issus des oeufs-hôtes conservés à 3°C.
8. Souche de Trichogramme adaptée à la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée notamment par le fait qu'elle a pour localité d'origine la Moldavie et qu'elle présente des propriétés estérasiques propres.
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