CH655227A5 - Procede de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes. - Google Patents

Description

La présente invention concerne un procédé de conditionnement et de conservation d'œufs de parasites oophages du genre Trichogramme tel qu'il est défini dans la revendication 1. Dans le domaine de l'agriculture, plus particulièrement celui de la protection des plantes contre les insectes nuisibles, par voie biologique, on sait qu'il est fait appel à des parasites oophages du genre Trichogramme dans la lutte contre certains déprédateurs. Pour ces déprédateurs, le mode de lutte consiste à produire en masse les Trichogrammes à partir des œufs d'un hôte d'utilisation, généralement choisi parmi les Lépidoptères des denrées alimentaires, puis à transférer ces œufs, une fois parasités, dans les champs où ils donnent naissance à des Trichogrammes adultes qui parasitent les œufs des déprédateurs à détruire.

Une des limites de ce mode de lutte biologique réside dans la difficulté de stocker les productions journalières de l'Entomophage et de les conserver. Par ailleurs, on sait que les Trichogrammes présentent dans la nature un arrêt de développement hivernal dans leurs œufs-hôtes qui leur permet de passer plusieurs mois à l'état de vie ralentie, soit par simple quiescence, soit par diapause. Certains auteurs tels que Zorin (1927) et Telenga (1954-1956) ont montré par ailleurs qu'il était nécessaire, pour le maintien de toutes les potentialités biotiques du parasite, de le faire entrer en diapause.

Cependant, malgré les études consacrées à la diapause du Trichogramme (voir travaux de Telenga 1956, Maslennekova -Tsybus'skaya-Kapustina 1974), il n'est pas possible à l'heure actuelle (voir en particulier les travaux de Cherkasov de 1976) de conserver en hiver des Trichogrammes qui resteraient performants au printemps. Les travaux de Cherkasov ont cependant permis d'envisager un mode de conservation du Trichogramme qui se déroule de la façon suivante: on fait parasiter les œufs de 1 d de la Noctuelle Hadena sordida ou de l'Aleucite des céréales Sitotroga cerealella à raison d'un parasite pour 5 œufs à 23-25: C, 70-80% d'humidité relative et une photopériode de 16 h pendant 3 d. On place ensuite ces œufs à 10 C avec une photopériode de 12 h et une humidité relative de 70-80% jusqu'au noircissement des œufs. A ce stade, on conserve ces œufs à 37 C et à une humidité relative de 70-80%. Ce procédé permet, après 250 d de conservation, d'obtenir 36 à 48% d'émergence de parasites. La fécondité de ces derniers est réduite, voisine de 20 œufs par femelle et la sex-ratio est en faveur des mâles. Les inconvénients de ce procédé de production de Trichogramme à fécondité réduite, à pourcentage élevé de mâles et de brachyptères à longévité réduite à 2 ou 3 d, n'autorise pas l'utilisation de tels Trichogrammes pour les lâcher dans les champs.

La présente invention vise à remédier à ces inconvénients en fournissant un procédé de conditionnement et de conservation des Trichogrammes par le froid, tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces Entomophages stockés de 3 à 12 mois, de prélever des échantillons d'œufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage d'ailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux des individus non stockés. Deux variantes du procédé selon l'invention permettent respectivement d'obtenir un stockage long, c'est-à-dire de 3 à 12 mois, et un stockage court, c'est-à-dire jusqu'à 45 d environ.

Le procédé selon l'invention est caractérisé par le fait que l'on part d'œufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, en particulier d'Ephestia kuhniella, ayant subi un conditionnement préalable,

qu'on fait parasiter ces œufs par des adultes de Trichogrammes, qu'on soumet les œufs ainsi parasités à une période d'incubation d'au moins 24 h à 20 C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80%, qu'on soumet les œufs ainsi incubés à une période d'induction de 6 à 80 d environ, à une température inférieure à 15e C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, et une humidité relative de 70% environ, puis qu'on met à conserver les œufs ainsi obtenus à 3; C, avec photo-période de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80%.

Selon une mise en œuvre particulière de l'invention, pour le stockage long, on part d'œufs d'Ephestia kuhniella âgés de 24 h au plus, la durée de la période d'incubation étant de 24 h à 20: C et la durée de la période d'incubation étant de 40 à 80 d à une température continue ou alternée comprise entre 5 et 15 C environ;

pour le stockage court, on part d'œufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h environ, la durée de la période d'incubation à 20 C des œufs parasités étant de 96 h et la durée de la période d'incubation étant de 7 d environ à une température inférieure à 15" C;

le conditionnement préalable des œufs d'Ephestia kuhniella consiste à les tuer par les ultraviolets ou le froid et, éventuellement, à les faire séjourner à une température de 3' C pendant une durée inférieure à 14 d;

on parasite les œufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 20e C avec une photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité, nourris et fraîchement émergés, pendant une durée de 4 h environ.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux de la description qui va suivre, faite en regard des dessins annexés sur lesquels:

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la fig. 1 est un graphique indiquant le pourcentage de sorties en fonction de l'âge des œufs d'Ephestia kuhniella, des durées de stockage à 3' C et des conditions de séjour avant induction, et les fig. 2 et 3 sont des graphiques indiquant le pourcentage de sorties en fonction de la durée d'induction, respectivement pour des parasitismes et par conséquent des incubations de 0 à 4 h et de 0 à 24 h à 20e C des œufs parasités.

Comme mentionné ci-dessus, la présente invention a pour objet un conditionnement des Trichogrammes par le froid tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces Entomophages stockés de 1 à 12 mois à 3° C selon le stockage long ou de 0 à 45 d selon le stockage court, de prélever des échantillons d'œufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage d'ailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux des individus non stockés.

Dans le cas du stockage long, l'invention consiste d'une part à réunir au niveau optimal tous les facteurs qui favorisent l'induction d'un arrêt de développement, par exemple l'alimentation, la chronologie de la progéniture, l'âge embryonnaire, le conditionnement de l'œuf par le froid et les ultraviolets, les conditions abiotiques d'élevage de l'hôte, les conditions de la génération parentale et de la période de ponte, à savoir, température, lumière, humidité, ainsi que du développement pré-imaginal du parasite, l'âge du parasite avant d'entrer en induction, la chronologie de la descendance, la durée de vie sans hôte, l'alimentation des parents et le non-superparasitisme de ces oophages.

Le procédé selon l'invention consiste d'autre part à renforer, à prolonger l'induction au-delà du début de l'arrêt de développement observé. Ce renforcement permet finalement d'éliminer complètement la diapause et de la remplacer par une quiescence où le retour aux conditions favorables déclenche l'évolution en nymphe puis en adulte.

Conformément à une exécution particulière de l'invention, on utilise des œufs âgés de 0 à 24 h tués par les ultraviolets ou par le froid, provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid. Sur de tels œufs, ayant séjourné moins de 14 d à V C, on effectue le parasitisme après alimentation sur miel par des adultes primipares élevés entre 20 et 23° C, âgés de quelques heures et sur une période de 4 à 24 h, sans superparasitisme et dans des conditions abiotiques autour de 20° C avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité à 70% d'humidité relative. Il est à noter que, contrairement à la technique connue qui tend à multiplier les Trichogrammes dans le rapport 1 à 5 au maximum d'une génération à une autre et avec un superparasitisme élevé, il est possible selon l'invention d'atteindre un rapport 1 à 14 avec une tendance très marquée pour le monoparasitisme et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la descendance obtenue.

Les œufs ainsi parasités sont laissés à incuber pendant 24 h à 20J C, avec une photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, à une humidité relative de 70%. La fin de l'incubation, le développement larvaire, ainsi qu'une partie du blocage en fin de stade larvaire s'effectuent aux températures alternées ou constantes inférieures à 15° C et supérieures ou égales à 5° C, par exemple 14° C, pour une souche dite souche 16 (qui sera définie ci-après), une pho-topériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, ou bien une thermopériode de 5 à 12° C, avec photopériode de 8 h de lumière à 12° C et 16 h d'obscurité à 5° C, et une humidité relative élevée de 70 à 80% pendant 40 à 80 d. Le stockage a lieu ensuite à 3° C dans des conditions de photopériode de 8 h de lumière, 16 h d'obscurité et une humidité relative de 70 à 80%, pendant 3 à 12 mois sans baisse sensible du potentiel biotique. Le taux d'émergence des adultes, après réveil entre 23 et 25° C, est proche de 95% pour les durées de stockage de 3 à 6 mois et de 90% pour les durées de stockage de 6 mois à 1 an. Les délais d'émergence de l'ordre de 8 d à 25e C et de 13,5 d à 20e C pour 3 mois de stockage augmentent, en fonction de la durée de conservation au froid, de 1 à 3 d. La fécondité moyenne par femelle isolée est de l'ordre de 75 œufs, la longévité moyenne de 16 d et la sex-ratio de plus de 2 femelles pour 1 mâle.

Des stockages de courte durée, de l'ordre de 1 mois, peuvent également être obtenus en faisant appel à des œufs d'Ephestia kuhniella ayant par exemple 72 h, mis à incuber après parasitisme pendant 96 h à 20° C avant induction convenable, telle que 14° C avec photopériode de 8 h pendant 7 d dans le cas de la souche 16.

Dans le cas du stockage court, il est possible d'atteindre des développements relativement longs sans stockage à 3° C, en faisant développer les Trichogrammes sur les œufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h, par exemple à des températures-seuils de 15 à 16° C, après séjour de 96 h à 20° C (stockage de 28 d) ou de 6 à 8 d à 25° C (stockage de 4 à 20 d). Ce dernier conditionnement aboutit à une émergence généralisée dans les quelques heures qui suivent la sortie des œufs parasités du froid à 15-16° C et qui se synchronise avec la climatologie du lieu du lâcher.

L'invention a pour conséquence un effet dit effet Fj de renforcement considérable du potentiel biotique des descendants des diapau-sants. Ces derniers présentent en effet, par rapport à leurs parents, une fécondité et une longévité presque doublées et une activité de recherche de l'hôte accrue. La possibilité d'obtemir à la fois des dia-pausants encore performants après un an de stockage et la découverte des potentialités considérables de leurs descendants autorisent l'emploi pour des lâchers en pleins champs de ces deux types de Trichogrammes avec, pour les diapausants, toutes les facilités de transport et de maintenance que procure la chaîne de froid. La maîtrise de la diapause est par ailleurs suffisamment affinée pour qu'il soit possible d'assurer durant tout son développement le contrôle de la qualité des Trichogrammes produits et de déceler par un essai simple et rapide cette diapause. Il y a lieu d'ajouter qu'il est nécessaire de faire suivre une génération à diapause par une génération, et de préférence deux générations, à développement continu, en conditions de vie non ralentie, si l'on désire à nouveau introduire une diapause.

La présente invention permet ainsi de disposer de tous les éléments nécessaires, sur le plan de l'utilisation pratique en lutte biologique, à cumuler les productions journalières de Trichogrammes, de les conserver pendant plus d'un an, pour les réutiliser soit tels quels, soit après un réveil, soit en utilisant le potentiel accru de leurs descendants, soit comme inoculums pour le parasitisme de nouveaux œufs-hôtes. L'exploitation d'un tel arrêt confère donc une grande souplesse à ce type de lutte biologique.

Les exemples suivants, donnés à titre illustratif mais nullement limitatif, feront mieux saisir la portée et l'intérêt de l'invention.

Exemple 1:

Effet de l'œuf-hôte

Cet essai a été réalisé afin de vérifier quel est le stade embryonnaire à'Ephestia kuhniella le plus favorable au développement de type rapide, de type quiescence ou de type diapause du Trichogramme. Les travaux de Daumal et coll. (1974) montrent que le stade sensible aux basses températures d'Ephestia kuhniella est de 0 à 17 h et le stade le plus résistant est à 72 h de développement embryonnaire à 20° C. Les essais ont porté sur ces stades vis-à-vis du développement du Trichogramme.

Pour la réalisation de cet essai, on dispose deux lots de 55 plaquettes que l'on fait parasiter par le Trichogramme à 20° C pendant 1 h, le premier lot étant constitué d'œufs de 0 à 17 h d'âge, le deuxième lot est constitué d'œufs de 72 h d'âge. Chaque lot est divisé à son tour en 11 parties élémentaires qui sont disposées à 20° C avec photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité. Une partie élémentaire comportant 5 plaquettes est retirée toutes les 4 h pour être placée à la température d'induction. Celle-ci est réalisée à une température légèrement supérieure à 15° C, ce qui permet à une partie de la population de poursuivre son développement. On ne procède à aucun stockage à 3° C et l'on effectue l'ensemble de l'essai à 70% d'humidité relative.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

655 227

4

Les résultats de cet essai sont résumés sur le graphique de la fig. 1 où l'on a porté en abscisses le temps de séjour en heures, à 20 C avant induction à 15: C, et en ordonnées, le pourcentage de sorties des individus. Sur ce graphique, les courbes F, A, B et C sont données à titre de références pour des durées de stockage en mois à 5 3: C, respectivement de 1, de 3, de 6 et de 9 mois. Les courbes E et D concernent le pourcentage de sorties en fonction de l'âge des œufs, respectivement de 0 à 17 h et de 72 h.

D'après les courbes D et E, il apparaît une grande différence entre les taux d'émergence des deux séries d'âges de l'hôte. Il semble io que les œufs de 72 h soient les meilleurs pour un développement continu aux températures critiques. Ils constituent par contre,

comme corollaire, des conditions de milieu très défavorables à la diapause puisque les Trichogrammes évoluent au-delà du stade susceptible d'être stocké à 3" C. Inversement, les œufs de 0 à 17 h sem- 15 blent les plus favorables à la diapause, particulièrement pour des durées d'incubation de 4 à 56 h avant induction.

On a également cherché à vérifier l'influence des différentes durées d'incubation à une température d'induction légèrement inférieure à 15; C, à savoir 14° C pour les hôtes de 0 à 17 h pour une 20 durée d'induction de 40 d et des durées de stockage au froid à 3° C

de 1, 3, 6 et 9 mois. On voit d'après le graphique que c'est après 3 mois de stockage que le taux des émergences est le meilleur, à savoir 98%. Il est encore de 90% après 9 mois. A 1 mois de stockage à 3 * C, le taux d'émergence est très bas, le plus souvent inférieur à 10%.

Il résulte de ces essais que le taux d'émergence dépend de manière hautement significative du stade de développement avant induction et de la durée du stockage au froid. A noter cependant que les séries ayant incubé plus de 52 h à 20' C avant induction ont un faible pourcentage d'émergence, de l'ordre de 1 à 2% à la fin de l'induction.

Pour le stockage long notamment, il est donc avantageux d'utiliser des œufs de 0 à 24 h, tués par les ultraviolets ou par le froid et provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid.

Exemple 2:

Le tableau I qui suit résume les taux de fécondité moyenne et le pourcentage d'éclosions par femelle, ayant subi ou non un stockage au froid avant parasitisme.

Tableau I

Jours de stockage des œufs

Stockage des parasites à 3~ C (durée en jours)

Od

30 d

90 d

180 d

Ephestia stockées (chenilles)

0

Fécondité moyenne/femelle

24,26

19,2

25,4

20,46

% éclosions

8,24

15,27

97,11

98,69

7

Fécondité moyenne/femelle

31

29

25,6

22,46

% éclosions

8,6

8,73

99,21

98,51

28

Fécondité moyenne/femelle

19,86

9,73

13,3

% éclosions

2,41

30,82

94,5

63

Fécondité moyenne/femelle

7,06

7,2

6,33

% éclosions

0

14,81

78,94

Ephestia non stockées (chenilles)

0

Fécondité moyenne/femelle

19,93

26

22,2

13,6

% éclosions

3,01

5,62

98,49

99,01

7

Fécondité moyenne/femelle

29

27,93

29,13

24,8

% éclosions

7,56

6,68

99,77

99,46

28

Fécondité moyenne/femelle

16,86

19,86

13,13

% éclosions

8,69

18,12

95,93

63

Fécondité moyenne/femelle

10,13

6,4

5,06

% éclosions

0,65

8,33

89,47

On constate que le parasitisme le plus efficace intervient sur des œufs ayant séjourné moins de 14 d à 3: C.

Exemple 3:

On a cherché à vérifier si l'élevage des parents à diverses températures peut avoir un effet sur la diapause de la progéniture induite par différentes températures et photopériodes en fonction de différentes durées d'induction. On a également cherché l'influence possible de la méthode de collage des œufs à l'eau ou à la colle sur la qualité de cette diapause.

a) Préparation des inoculums (génération parentale)

On dispose 3 lots de 96 tubes contenant chacun un inoculum de 100 œufs parasités en 24 h à 23: C, l'un à 15, l'autre à 20-23' C et le troisième lot à 23-27; C.

55 b) Préparation des œufs-hôtes pour la génération fille

Au moment de l'émergence des adultes parentaux, on introduit dans chaque tube deux plaquettes de 500 œufs traités aux ultraviolets, l'une comportant des œufs collés à l'eau, l'autre comportant des œufs collés à l'aide d'une solution aqueuse de gomme arabique à 60 30%.

c) Mode d'induction

On plaque une moitié de chaque lot à 13,5° C et l'autre moitié à 10r C. A chacune de ces températures, l'effectif est à son tour divisé en deux parties: l'une est soumise à la photopériode de 8 h de 6S lumière-16 h d'obscurité et l'autre à 16 h de lumière-8 h d'obscurité, chacun pour moitié jusqu'au grisement, l'autre jusqu'au grisement plus 2 semaines. On dispose ainsi de 48 lots élémentaires de 12 plaquettes qui sont stockées à 3 C.

5

655 227

d) Mode de stockage

Par traitement élémentaire, 4 plaquettes sont stockées 1 mois, 4 plaquettes pendant 3 mois et 4 plaquettes pendant 6 mois. Après stockage, on effectue la réactivation de 23-27? C et l'on calcule le taux d'émergences sur 100 œufs. Durant toutes les phases de ces s essais, on maintient l'humidité relative à 70%.

On constate tout d'abord que l'élevage de la souche moldave de Trichogramma evanescens à 15 C aboutit à un pourcentage important de diapausants et, de ce fait, on élimine le lot destiné à produire des imagos parentaux à cette température. io

Il ressort de cet essai que le mode de collage n'interfère pas sur le taux d'émergence, que ce facteur soit considéré isolément ou en interaction avec les autres facteurs. La température d'élevage des parents ne montre pas d'effet significatif, isolément, mais elle présente par contre une interaction de la génération fille. Cette interac- 15 tion se renforce d'ailleurs avec une interaction de troisième ordre hautement significative avec la température d'induction et significative avec la photodiode d'induction. Ce dernier facteur présente par ailleurs, toujours associé à la température d'élevage des parents, une interaction de troisième ordre avec la durée de stockage à 3° C. 20

Les facteurs les plus influents sont finalement, d'une part, les conditions d'induction de la génération fille, photopériode, durée et température d'induction et, d'autre part, le mode de stockage à 33 C, isolément, et en interaction avec la température et la durée d'induction. L'effet de la température d'induction est, par ailleurs, renforcé 25 de manière hautement significative par la photopériode et la durée d'induction.

Exemple 4:

On a réalisé l'essai qui suit dans le but de vérifier s'il est possible 30 de discerner une différence de qualité de diapause liée à deux températures d'induction très proches l'une de l'autre. Par ailleurs, on a effectué deux durées d'exposition des parasites à leur hôte, l'une de courte durée (4 h), qui correspond à une production en continu d'œufs d'Ephestia kuhniella parasités, l'autre de longue durée (24 h), 35 plus proche de la production habituelle des Trichogrammes. Dans le premier type, le superparasitisme est presque inexistant. Dans le second type, il est plus fréquent.

Dispositif expérimental:

On expose aux Trichogrammes 132 plaquettes d'œufs à.'Ephestia kuhniella passés aux ultraviolets, 62 plaquettes sont retirées après 4 h de parasitisme, les autres après 24 h. Ces deux séries de plaquettes ainsi parasitées sont placées à une température légèrement inférieure à 15 C, avec photopériode de 8 h de lumière-16 h d'obscurité, à 70% d'humidité relative. Chaque jour, on passe à 13,5° C un lot de 6 plaquettes de chaque série,'avec photopériode de 8 h de lumière-16 h d'obscurité et à 70% d'humidité relative, jusqu'au noircissement des œufs plus 10 d. On place ensuite ces plaquettes à 3° C et on les retire après 1, 3 et 6 mois de stockage respectivement. On effectue la réactivation à 23-27"' C, à 70% d'humidité relative. Après réveil pour chaque traitement élémentaire, on isole 5 femelles afin de connaître leur fécondité en 7 d.

Les résultats de ces essais sont indiqués sur les graphiques des fig. 2 et 3 où l'on a porté en abscisses la durée d'induction en jours, sur deux échelles, respectivement à 14,9 et 13,5° C, et en ordonnées le pourcentage de sorties des individus. Sur ces graphiques, les courbes G, H et I correspondent respectivement à 1, 3 et 6 mois de stockage à 3° C. Il résulte de ces essais qu'il existe une différence hautement significative entre les deux durées de parasitisme, celle de 4 h conduisant dans presque tous les cas à une meilleure diapause. Ces différences peuvent être attribuées soit au fait d'un superparasitisme plus important après 24 h d'exposition des œufs d'Ephestia kuhniella aux Trichogrammes, superparasitisme conduisant à freiner l'induction d'une diapause, soit à une meilleure compétence des premiers œufs du parasite pour la diapause.

On a pu remarquer en outre que, dans les cas où il n'y avait pas de superparasitisme et pour des périodes d'induction plus longues, de l'ordre de 40 d, on pouvait obtenir un très bon pourcentage (supérieur à 95%) d'émergence dans le cas de 24 h de parasitisme.

Exemple 5:

Le but des essais résumés dans les tableaux II et III qui suivent est de montrer qu'il est possible d'atteindre un rapport 1 à 15 avec une tendance marquée pour le monoparasitisme et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la descendance à partir d'œufs d'Ephestia kuhniella parasités par le Trichogramme.

Tableau II

20" C 70% humidité relative

Nombre d'œufs-hôtes/femelle

1

2

5

10

20

40

% de femelles qui pondent de la 1" à la 20e h

9

4

7

20

40

88

% d'œufs noirs entiers parasités en 24 h

29,16

40,19.

42,68

66,52

77,8

73,5

% d'œufs parasités éclos

78,57

65,8

69,5

88,12

93,8

98

„ . nombre mâles Sex-ratio . c ,, nombre femelles

2

1

0,72

0,41

0,2

0,2

Fécondité moyenne par femelle

40,5

54,65

59

62,16

Durée du développement en jours (premières émergences)

17

17

16

15

+ 6 h

15

+ 2h

15

(Tableau III en page suivante)

Exemple 6:

Effet F,

Le but de cet exemple est de montrer l'influence des modalités de réveil sur la fécondité des femelles diapausantes et celle de la diapause sur les fécondités des descendants, le traitement comprenant notamment une durée d'induction de 30 d à une température comprise entre 12 et 15° C. Les modalités de réveil, l'effet de la diapause sur les descendantes filles comparées à deux témoins, l'un originaire de la population initiale, l'autre des descendants de ce témoin, portent pour chaque série sur 25 femelles. Les fécondités ont été relevées le deuxième jour par changement des plaquettes, puis le 60 dixième jour et, ensuite, de semaine en semaine. On a également relavé la sex-ratio. A partir du dixième jour, on effectue des dissections sur 300 œufs parasités tous les deux jours pour connaître la distribution des divers stades dans la population.

65 a) Distribution des stades à la température d'induction (du 10e au 30e jour)

1er au 10e jour: tous les individus sont au stade fin de 3e stade larvaire, prénymphe. Les œufs sont de couleur gris moyen.

655 227

6

2e au 14e jour: apparition de 17 nymphes hyalines.

3e au 16e jour: apparition de 20 nymphes hyalines.

4e au 19e jour: apparition de 13 nymphes hyalines, apparition de 7 nymphes yeux rouges.

5e au 22e jour: apparition de 13 nymphes hyalines, apparition de 7 nymphes yeux rouges.

6e au 25e jour: apparition de 14 nymphes hyalines, apparition de 2 nymphes yeux rouges, apparition de 2 nymphes en tout début de sclérification.

7e au 30e jour: apparition de 18 nymphes hyalines, apparition de 4 nymphes yeux rouges, apparition de 2 nymphes nettement scléri-fiêes.

b) Les pourcentages de sorties sont, pour les trois modes de réveil RI, R2, R3 (voir ci-après), respectivement de 61,7, 63,8 et 54,5%.

L'apparition des premiers adultes a lieu 10 d après la sortie des œufs parasités de leur stockage au froid. La sex-ratio est élevée: environ 1 mâle pour 2 femelles, alors que, pour la génération Fl5 elle est de 1 mâle pour 6 femelles (voir ci-après).

5 L'étalement des sorties se fait pratiquement sur 4 d et 85% des sorties ont lieu en 2 d.

Les modes de réveil sont résumés de la façon suivante:

R: : réveil à 23-27 C io R2 : réveil à 20 C, pendant 3 d, puis 23-27 C R3: réveil à 15 C, pendant 3 d, puis 23-27 C F, : génération fille élevée à 23-27; C T : témoin élevé à 20 C F,T: génération du témoin élevé à 23-27 C.

Tableau III

0-24 h parasitisme à 20 C, 70% H.R.

Nombre d'œufs

Nombre émergés

Parasités

Parasités affaissés

Blancs affaissés

Jaunes affaissés

10 femelles — 10 œufs

6 2 5 1 0

4

6 3

7 9

2 2

1

6

2

3 0

10 femelles — 20 œufs

2

14

15 6 4

2

3

2

17 6 5 11 10

1 4

2

9 11

2

3

10 femelles — 50 œufs

28 13 18 23 23

8 6 3 5

9

12

20

21

16

17

4 13 6 3

17 9 14

16

17

10 femelles — 100 œufs

51 50 77 60 82

11 10 2 15

2

21 30 11 27 18

8 4

2

39 39 75 49 80

10 femelles — 200 œufs

156 150 197 104 128

4

1

2 2

4

56 -35 -30 -42 -28

148 138 190 92 122

10 femelles — 400 œufs

285 296 319 292 278

1

œufs blancs encore en bon état

279 288 316 287 272

Tableau IV Tableau V

Fécondité en nombre moyen d'œufs pondus

Longévité moyenne

par femelle

55

en jours

totale

0-2 d

0-10 d

Ri

19,44

Ri

81,6

22,8

65,6

R2

16,72

r2

80,8

28,2

65,8

R3

19,52

r3

87,6

31,6

66,7

60

F,

23,56

Fj

152,1

56,8

112,6

T

22,76

T

75

28,5

57,4

F,T

21,84

FjT

124,7

44,6

93,8

Le procédé selon l'invention permet donc la production en masse 65 des Trichogrammes permettant notamment de stocker l'oophage Longévité produit pendant un temps relativement long, qui permet la distribu-

Aux 6 traitements examinés pour la fécondité correspondent les tion du lieu de production au champ. La diapause des individus est longévités moyennes données dans le tableau V qui suit: précisément un état qui autorise à la fois le stockage par le froid,

7

655 227

l'utilisation de la chaîne du froid pour les transports ainsi que le cumul des productions journalières, mensuelles et même annuelles. La production du Trichogramme permet notamment de mettre en œuvre la lutte biologique sous forme de lâchers inondatifs et saisonniers, en particulier sur des champs de maïs dans le cadre de la lutte contre la pyrale du maïs Ostrinia nubilalis hubner.

Comme mentionné plus haut, une souche 16 de Trichogramme, spécialement adaptée par la titulaire, convient particulièrement dans la mise en œuvre du procédé décrit ci-dessus.

Conformément à la présente invention, la souche N° 16 est un insecte hyménoptère chalcidien de la famille des Trichogrammatidae modifié et adapté à la destruction des œufs d "Ostrinia nubilalis (pyrale du maïs).

Trichogramma evanescens fut décrit en 1833 par Westwood J.O. (localité du type: Angleterre). Il s'agit d'un parasitoïde dont les larves vivent aux dépens des œufs de Lépidoptères.

L'espèce fut morphologiquement redécrite par Nagarkatti (S) et Nagaraja (H) en 1971.

Comme mentionné plus haut, les Trichogrammes sont déjà employés en lutte biologique dans de nombreux pays, mais jamais une souche active et très bien définie comme la souche N° 16 n'a été obtenue. Celle-ci a été découverte en Moldavie (URSS) par Jean Voegele d ns des œufs d'Ostrinia nubilalis sur maïs. La titulaire a conduit 1\ evage, à l'aide d'œufs d'Ephestia kuhniella, de manière à sélectionner les individus les plus féconds et à obtenir une consanguinité totale. Il ne s'agit donc pas d'une population naturelle mais d'un lot renouvelable d'individus tous identiques. Cette souche N° 16 est unique. Il s'agit de Trichogramma maidis qui s'inclut dans ce groupe général Trichogramma evanescens.

On donne ci-dessous les caractères d'identification quantitatifs de cette souche N° 16 (conditions abiotiques: 25" C, 70% H.R., 16 h de lumière par jour).

1) Fécondité

Elle est exprimée par la fertilité (nombre d'enfants adultes obtenus).

Femelles fécondées

Femelles vierges

3 premiers jours de ponte 5 premiers jours de ponte 7 premiers jours de ponte

33,53 ±2,02 44,67 ±2,58 51,87 ±2,31

46,47 ±3,27 46,56 ±3,62 61,53±3,54

2. Sex-ratio (pourcentage de femelles)

Progéniture issue des 3 premiers jours de ponte: 0,69 ±0,04 Progéniture issue des 5 premiers jours de ponte: 0,68 ±0,02 Progéniture issue des 7 premiers jours de ponte: 0,64±0,03 Sex-ratio totale = 0,60.

3) Pourcentage d'émergence 82,0%

4) Longévité

Longévité des femelles fécondées: 10,4±0,3 d Pourcentage d'individus morts avant 8 d:

Femelles vierges 0%

Femelles fécondées 6,2%

Mâles 81,2%

5) Pourcentage de stérilité

5 Femelles: 2,97%. Mâles: 7,69%

6) Capacité de recherche de l'hôte standard (Ephestia kuhniella)

10

Femelles

Mâles

Imo11

1,6

0,4

1er21

10,7

0,9

Iat3)

9,1

0,5

" Imo : indice de mobilité

211er: indice de capacité de recherche

31Iat: indice d'attractivité

On donne ci-dessous les caractères d'identification qualitatifs.

Par électrophorèse, certaines enzymes ont été caractérisées : esté-rases, malate-déshydrogénases et têtra-zolium-oxydases. Si les deux dernières ne se trouvent pas dans la souche dans un état particulier, 25 les estérases permettent, par contre, une identification précise.

Aucun polymorphisme n'est décelé. Cinq bandes, correspondant à 5 locus, présentent des mobilités électrophorétiques de 0,10, 0,22, 0,28, 0,50 et 0,53. La première et les deux dernières sont les plus intenses.

30 Sur 28 souches analysées, y compris 2 provenant comme la souche N° 16 des cultures de maïs, aucune ne possède de tels caractères estêrasiques.

Il résulte des données ci-dessus que, à l'aide de l'ensemble de ces caractères, il n'est pas possible de confondre la souche N° 16, d'une 35 part, avec l'une quelconque des 150 lignées connues et, d'autre part, avec une population naturelle.

La souche N° 16 de Trichogrammes, applicable au procédé selon l'invention et destinée à la lutte contre la pyrale du maïs, est unique et reconnaissable.

40 Le procédé selon l'invention permet de mettre en œuvre un mode de lutte biologique contre les Lépidoptères déprédateurs de plantes, notamment la pyrale du maïs, par l'intermédiaire de l'insecte parasite oophage. Selon ce mode de lutte, dans lequel on effectue au moins un épandage annuel du champ d'œufs-hôtes du parasite 45 oophage sur les plantes à protéger, on réalise avantageusement un épandage unique, à la période correspondant au début de la ponte du Lépidoptère, d'un mélange dosé d'œufs-hôtes ayant subi un conditionnement tel que les uns, d'une première vague, renferment l'oo-phage au dernier stade d'évolution et les autres, d'une seconde 50 vague, renferment l'oophage au stade prénymphe, moyennant quoi des imagos issus des œufs de la première vague émergent au bout de 1 à 2 d et ceux issus de la seconde vague émergent au bout de 15 à 20 d.

Il est bien entendu que la présente invention n'a été décrite et re-55 présentée qu'à titre explicatif mais nullement limitatif et qu'on pourra y apporter toute modification utile dans le domaine des équivalences techniques sans sortir de son cadre.

1 feuille dessins

Claims (7)

655 227

1. Procédé de conditionnement et de conservation d'œufs de parasites oophages du genre Trichogramme, destinés à la lutte biologique contre les Lépidoptères déprédateurs de plantes, caractérisé par le fait que l'on part d'œufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, ayant subi un conditionnement préalable, qu'on fait parasiter ces œufs par des adultes de Trichogrammes, qu'on soumet les œufs ainsi parasités à une période d'incubation d'au moins 24 h à 20 C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80%, qu'on soumet les œufs ainsi incubés à une période d'induction de 6 à 80 d environ, à une température inférieure à 15"' C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité, et une humidité relative de 70% environ, puis qu'on met à conserver les œufs ainsi obtenus à 3: C, avec photopériode de 8 h de lumière et 16 h d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80%.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage long, on part d'œufs d'Ephestia kuhniella âgés de 24 h au plus, la durée de la période d'incubation du parasite étant de 24 h à 20: C et la durée de la période d'induction étant de 40 à 80 d à une température comprise entre 5 et 15 C environ.

2

REVENDICATIONS

3 d environ à 20° C.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage court, on part d'œufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 h environ, la durée de la période d'incubation étant de 96 h à 20 C et la durée de la période d'induction étant de 6 à 8 d à une température inférieure à 15" C.

4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3. caractérisé par le fait que le conditionnement préalable des œufs d'Ephestia kuhniella consiste à les tuer par les ultraviolets ou le froid et, éventuellement, à les faire séjourner à une température de 3 C pendant une durée inférieure à 14 d.

5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'on parasite les œufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 20; C avec une photopériode de 16 h de lumière et 8 h d'obscurité, nourris et fraîchement émergés pendant une durée de 4 à 24 h environ.

6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que l'on effectue le réveil des œufs conservés à 3" C, à une température comprise entre 23 et 27; C, avec éventuellement un palier de

7. Procédé selon l'une des revendications I à 6, caractérisé par le fait que l'on exploite plus particulièrement, en vue de la lutte biologique, la deuxième génération des Trichogrammes issus des œufs-hôtes conservés à 3; C.