FR2460620A1

FR2460620A1 - Procede de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes

Info

Publication number: FR2460620A1
Application number: FR7917774A
Authority: FR
Inventors: Jean Desire Voegele; Pierre Emile Joseph Jourdheuil; Jeanine Marguerite Pizzol; Nee Dalmasso; Bernard Christian Ja Pintureau
Original assignee: Institut National de la Recherche Agronomique INRA
Current assignee: Institut National de la Recherche Agronomique INRA
Priority date: 1979-07-09
Filing date: 1979-07-09
Publication date: 1981-01-30
Also published as: WO1981000037A1; FR2460620B1; DE3049677C2; DE3049677T1; ATA906580A; AT367962B; US4370946A; CH655227A5

Abstract

L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE DE CONDITIONNEMENT ET DE CONSERVATION D'OEUFS DE PARASITES OOPHAGES D'INSECTES, DESTINES NOTAMMENT A LA LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE CERTAINS DEPREDATEURS DE PLANTES. SELON CE PROCEDE, ON PART D'OEUFS DE LEPIDOPTERES DE DENREES ALIMENTAIRES, EN PARTICULIER D'EPHESTIA KUHNIELLA, AYANT SUBI UN CONDITIONNEMENT PREALABLE, ON FAIT PARASITER CES OEUFS PAR DES ADULTES DE TRICHOGRAMMES, ON SOUMET LES OEUFS PARASITES A UNE PERIODE D'INCUBATION, ON SOUMET LES OEUFS INCUBES A UNE PERIODE D'INDUCTION, PUIS ON MET A CONSERVER AU FROID LES OEUFS AINSI OBTENUS. L'INVENTION EST APPLICABLE NOTAMMENT A LA LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE LA PYRALE DU MAIS OSTRINIA NUBILALIS HUBNER.

Description

La présente invention concerne un procédé de condi-

tionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages

d'insectes. Dans le domaine de l'agriculture, plus particulière-

ment celui de la protection des plantes contre les insectes nuisibles par voie biologique, on sait qu'il est fait appel à

des parasites oophages du genre Trichogramme dans la lutte con-

tre certains déprédateurs. Pour ces déprédateurs, le mode de lutte consiste à produire en masse les Trichogrammes à partir des oeufs d'un hôte d'utilisation, généralement choisi parmi les Lépidoptères des denrées alimentaires, puis à transférer ces oeufs, une fois parasités, dans les champs o ils donnent naissance à des Trichogrammes adultes qui parasitent les oeufs

des déprédateurs à détruire.

Une des limites de ce mode de lutte biologique ré-

side dans la difficulté de stocker les productions journalières de l'Entomophage et de les conserver. Par ailleurs, on sait que les Trichogrammes présentent dans la nature un arrêt de développement hivernal dans leurs oeufs h6tes qui leur permet de passer plusieurs mois à l'état de vie ralentie, soit par simple quiescence, soit par diapause. Certains auteurs tels que ZORIN (1927)et TELENGA "954-1956) ont montré par ailleurs qu'il était nécessaire,pour le maintien de toutes les potentialités

biotiques du parasitede le faire entrer en diapause.

Cependant, malgré les études consacrées à la diapause

du Trichogramme (voir travaux de TELENGA 1956, MASLENNEKOVA -

TSYBUS'SKAYA - KAPUSTINA 1974), il n'est pas possible à l'heure actuelle (voir en particulier les travaux de CHERKASOV de 1976)

de conserver en hiver des. Trichogrammes qui resteraient perfor-

mants au printemps. Les travaux de CHERKASOV ont cependant permis d'envisager un mode de conservation du Trichogramme qui se déroule de la façon suivante: on fait parasiter les oeufs de un jour de la Noctuelle Hadena sordida ou de l'Aleucite des céréales Sitotroga cerealella à raison de un parasite pour oeufs à 23-25 C, 70-80 % d'humidité relative et une photo- période de 16 heures pendant 3 jours. On place ensuite ces oeufs

à 10 C avec une photopériode de 12 heures et une humidité rela-

tive de 70-80 %a jusqu'au noircissement des oeufs. A ce stade,

on conserve ces oeufs à 3 C et à une humidité relative de 70-80%.

Ce procédé permet, après 250 jours de conservation, d'obtenir

36 à 48 %O d'émergence de parasites. La fécondité de ces der-

niers est réduite, voisine de 20 oeufs par femelle, et la' "sex-

ratio:lest en faveur des mâles. Les inconvénients de ce procédé

de production du Trichogramme à fécondité réduite, à pourcenta-

ge élevé de mâles et de brachyptères à longévité réduite à deux

ou trois jours, n'autorise pas l'utilisation de tels Tricho-

grammes pour les Jâche-rs dans les champs.

La présente invention vise a remédier à ces inconvé-

nientsen fournissant un procédé de conditionnement et de conser-

vation des Trichogrammes par le froid, tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces Entomophages stockés de 3 à 12 mois, de prélever des échantillons d'oeufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage d'ailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux

des individus non stockés. Deux variantes du procédé selon l'in-

vention permettent respectivement d'obtenir un stockage long, c'est-àdire de 3 à 12 mois, et un stockage court, c'est-à-dire

jusqu'à 45 jours envirpon.

Le procédé selon l'invention est essentiellement caractérisé par le fait que l'on part d'oeufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, en particulier d'Ephestia kuhniella, ayant subi un conditionnement préalable, qu'on fait parasiter ces oeufs par des adultes de trichoqrammes, qu'on soumet les oeufs ainsi parasités à une période d'incubation d'au moins 24 heures à 20 C, avec photopériode de 8 heures de lumière et 16 heures d'obscurité et à une humidité relative

de 70 à 80 %, qu'on soumet les oeufs ainsi incubés à une pério-

de d'induction de 6 à 80 jours environ, à une température infé-

rieure à 15 C, avec photopériode de 8 heures de lumière et 16 h d'obscurité, et une humidité relative de 70 % environ, puis

qu'on met à conserver les oeufs ainsi obtenus à 30C, avec photo-

période de 8 heures de lumière et 16 heures dI' obEscurité t à une

humidité relative de 70 à 80 %. -

Selon d'autres caractéristiques: pour le stockage long, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 0 à 24 heures, la durée de la période

d'incubation étant de 24 heures à 20 C et la durée de la période d'in-

duction étant de 40 à 80 jours à une température continue ou al-

ternée comprise entre 5 et 150 C environ; pour le stockage court, on part d'oeufs d'Ephestia

kuhniella âgés de 72 heures environ, la durée de la période d'in-

cubation à 20PC des oeufs parasités étant de 96 heures et la durée de la pé-

riode d'induction étant de 7 jours environ à une température inférieure à 15 C.

-le conditionnement préalable des oeufs d'Ephestia kuhniella consiste à les'tuer par;les ultra violets ou le froid et., éventuellement à les faire séjourner à une température de 30C pendant une durée inférieure à 14 jours on parasite les oeufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 200C avec une photopériode de 16 heures de lumière et 8 heures d'obscurité, nourris et

fraîchement 6merq6s,pendant une durée de 4 heures environ.

D'autres caractéristiques et avantages de l'inven-

tion ressortiront mieux de la description qui va suivre, faite

en regard des dessins annexés sur lesquels: la figure 1 est un graphique indiquant le pourcentage de sorties en fonction de l'âge des oeufs d'Ephestia kuhniella, des durées de stockage à 30C et des conditions de séjour avant induction; et les figures 2 et 3 sont des graphiques indiquant le pourcentage de sorties en fonction de la durée d'induction, respectivement pour des parasitismes et par conséquent des incubations de 0

à 4 heures et de 0 à 24 heures à 200C des oeufs parasités.

Comme mentionné ci-dessus, la présente invention a pour objet un conditionnement des Trichogrammes par le froid tel qu'il soit possible à tout moment, à partir de lots de ces

Entomophages stockés de 1 à 12 mois à 30C selon le stocka-

qe lonq ou de O à à5 jours selon le stockage court, de prélever des échantillons d'oeufs parasités qui donnent un taux d'éclosion, une fécondité, une longévité, un pourcentage diailés et une sex-ratio peu éloignés de ceux

des individus non stockés.

Dans le cas du stockage long, l'invention consiste d'une part à réunir au niveau optimal tous les facteurs qui favorisent l'induction d'un arrêt de développement, par exemple

l'alimentation, la chronologie de la progéniture, l'âge embryon-

naire, le conditionnement de l'oeuf par le froid et les ultra-

violets, les conditions abiotiques d'élevage de l'hôte, les conditions de la génération parentale et de la période de ponte,

à savoir, température, lumière, humidité, ainsi que du dévelop-

pement pré-imaginal du parasite, l'âge du parasite avant d'entrer

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en induction, la chronologie de la descendance, la durée de

vie sans hôte, l'alimentation des parents et le non-superparasi-

tisme de ces oophages.

Le procédé selon l'invention consiste d'autre- part à renforcer, à prolonger l'induction au-delà du début de l'ar- rêt de développement observé. Ce renforcement permet finalement d'éliminer complètement la diapause et de la remplacer par une quiescence o le retour aux conditions favorables déclenche

l'évolution en nymphe puis en adulte.

Conformément à l'invention, on utilise des oeufs âqés de 0 à 24 heures tués par les ultraviolets ou par le froid, provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid. Sur de tels oeufs, ayant séjourné moins de 14 jours à 3 C, on effectue le parasitisme après alimentation sur miel par des adultes primipares élevés entre 20 et 23 C, âgés de quelques heures et sur une période de 4 à 24 heures, sans superparasitisme et dans des conditions

abiotiques autour de 20 C avec photopériode de 8 heures de lu-

mière et 16 heures d'obscurité à 70 % d'humidité relative.

I1 est à noter que contrairement à la technique connue qui tend à multiplier les Trichogrammes dans le rapport 1 à 5 au-maximum d'une génération à une autre et avec un superparasitisme élevé, il est possible selon l'invention d'atteindre un rapport 1 à 15 avec une tendance très marquée' pour le monoparasitisme et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la descendance obtenue. Les oeufs ainsi parasités sont laissés à incuber pendant 24 heures à 20 C, avec une photopériode de 8 heures de lumière et 16 heures d'obscurité, à une humidité relative de %. La fin de l'incubation, le développement larvaire, ainsi qu'une partie du blocage en fin de stade larvaire s'effectuent aux températures alternées ou constantes inférieures à 15 C et supérieures ou égales à 5 C, par exemple 14 C, pour une souche dite

"souche 16" (qui sera définie ci-après), une photnpériode de 8 heures de luriliè-

re et 16 heures d'obscurité, ou bien une thermopériode de 5 et 12 C, avec photo-

p6riode de 8 heures de lumière à 12 C et 16 heures d'obscurité à 5 C, et une humidité relative élevée de 70 à 80 O% pendant 40 à 80 jours. Le stockage a lieu

ensuite à 3 C dans des conditions de nhotoD6riode de 8 heures de lumière -

16 heures d'obscurité et une humidité relative de 70 à 80,n,

pendant 3 à 12 mois sans baisse sensible du potentiel biotique.

Le taux d'émergence des adultes après réveil entre 23 et 250C, est proche de 95 '% pour les durées de stockage de 3 à 6 mois et de 90 % pour les durées de stockage de 6 mois à 1 an. Les délais d'émergence de l'ordre de 8 jours à 250C et de 13,5 jours à 200C pour 3 mois de stockage augmentent, en fonction

de la durée de conservation au froid, de 1 à 3 jours. La fécon-

dité moyenne par femelle isolée est de l'ordre de 75 oeufs, la longé-

vité moyenne de 16 jours et la sex-ratio de plus de 2 femelles

pour 1 mâle.

Des stockages de courte durée, de l'ordre de 1 mois, peuvent également être obtenus en faisant appel -à des oeufs d'Ephestia kuhniella ayant par exemple 72 heures, mis à incuber après parasitisme pendant 96 heures à 200C avant induction convenable telle que

141C avec photopériode de 8 heures pendant 7 jours dans le cas de la souche 16.

Dans le cas du stockage court, il est possible d'at-

teindre des développements relativement longs sans stockage à C, en faisant développer les Trichogrammes sur des oeufs

d'Ephestia kuhniella âgés de 72 heures, par exemple à des températures-

seuils de 15 à]60C, après séjour de 96 heures à %C (stockage de 28 jours) ou de 6 à 8 jours à 250C (stockage

de 4 à 20 jours). Ce dernier conditionnement aboutit à une émer-

gence généralisée dans les quelques heures qui suivent la sortie des oeufs parasités du froid à 15-16oC et qui se synchronise

avec la climatologie du lieu du lâcher.

L'invention se complète par l'exploitation d'un effet dit effet F1 de renforcement considérable du potentiel

biotique des descendants des diapausants. Ces derniers présen-

tent en effet, par rapport à leurs parents, une fécondité et une longévité presque doublées et une activité de recherche

de l'hâte accrue. La possibilité d'obtenir à la fois des dia-

pausants encore performants après un an de stockage et la dé-

couverte des potentialités considérables de leurs descendants autorisent l'emploi pour des lâchers en pleins champs de ces deux types de Trichogramme avec, pour les diapausants, toutes les facilités de transport et de maintenance que procure la chaîne de froid. La maîtrise de la diapause est par ailleurs suffisamment affinée pour qu'il soit possible d'assurer durant

tout son développement le contrôle de la qualité des Tricho-

grammes produits et de déceler par un essai simple et rapide cette diapause. Il y a lieu d'ajouter qu'il est nécessaire de faire suivre une génération à diapause par une génération, et de préférence deux générations, à développement continu, en conditions de vie non ralentie, si l'on désire à nouveau

induire une diapause.

La présente invention permet ainsi de disposer de tous les éléments nécessaires, sur le plan de l'utilisation

pratique en lutte biologique, à cumuler les productions journa-

lières de Trichogrammes, de les conserver pendant plus d'un an, pour les réutiliser soit tels quels, soit après un réveil, soit en utilisant le potentiel accru de leurs descendants, soit comme

inoculums pour le parasitisme de nouveaux oeufs hâtes. L'exploi-

tation d'un tel arrêt confère donc une grande souplesse à ce

type de lutte biologique.

Les exemples suivants, donnés à titre illustratif mais nullement limitatif, feront mieux saisir la portée et

l'intérêt -de l'invention.

Exemple 1

Effet de l'oeuf hôte Cet essai a été réalisé afin de vérifier quel est le stade embryonnaire d'Ephestia kuhniella le plus favorable au développement de type rapide, de type quiescence ou de type

diapause du Trichogramme. Les travaux de DAUMAL et ses Collabo-

rateurs (1974) montrent que le stade sensible aux basses tempé-

ratures d'Ephestia kuhniella est de 0 à 17 heures et le stade le plus résistant est à 72 heures de développement embryonnaire

à 200C. Les essais ont porté sur ces stades vis-à-vis du dévelop-

pement du Trichogramme.

Pour la réalisation de cet essai, on dispose deux lots de 55 plaquettes que l'on fait parasiter par le Trichogramme à 200C pendant 1 heure, le premier lot étant constitué d'oeufs de 0 à 17 heures d'âge, le deuxième lot est constitué d'oeufs de 72 heures d'âge. Chaque lot est divisé à son tour en Il parties élémentaires qui sont disposées à 20 C avec photopériode de

16 heures de lumière et 8 heures d'obscurité. Une partie élémen-

taire comportant 5 plaquettes est retirée toutes les 4 heures pour être placée à la température d'induction. Celle-ci est

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réalisée à une température légèrement supérieure à 151C, ce

qui permet à une partie de la population de poursuivre son dé-

veloppement. On ne procède à aucun stockage à 30C et l'on ef-

fectue l'ensemble de l'essai à 70 % d'humidité relative.

Les résultats de cet essai sont 'résumés sur le graphique de la figure 1 o l'on a porté en abscisses le temps

de séjour en heures, à 200C avant induction à 15 C, et en or-

données le pourcentage de sorties des individus. Sur ce graphi-

que, les courbes F, A, B, C sont données à titre de références pour des durées de stockage en mois à 3 C, respectivement de 1 mois, de 3 mois, de 6 mois et de 9 mois. Les courbes E et D concernent le pourcentage de sorties en fonction de l'âge des

oeufs, respectivement de O à 17 heures et de 72 heures.

D'après les courbes D et E, il apparaît une grande différence entre les taux d'émergence des deux séries d'âges

de l'hôte. Il semble que les oeufs de 72 heures soient les meil-

leurs pour un développement continu aux températures critiques.

Ils constituent par contre, comme corollaire, des conditions

de milieu très défavorable à la diapause puisque les Trichogram-

mes évoluent au-delà du stade susceptible d'être stocké à 30C.

Inversement, les oeufs de O à 17 heures semblent les plus favo-

rables à la diapause, particulièrement pour des durées d'incuba-

tion de 4 à 56 heures avant induction.

On a également cherché à vérifier l'influence des différentes durées d'incubation à une température d'induction légèrement inférieure à 150C, à savoir 140C pour les hâtes de O à 17 heures pour une durée d'induction de 40 jours et des durées de stockage au froid à 30C de 1, 3, 6 et 9 mois. On voit d'après le graphique que c'est après 3 mois de stockage que le taux des émergences est le meilleur, à savoir 98 %. Il est encore de 90 A après 9 mois. A un mois de stockage à 30C, le

taux d'émergence est très bas, le plus souvent inférieur à 10 %.

Il résulte de ces essais que le taux d'émergence

dépend de manière hautement significative du stade de dévelop-

pement avant induction et de la durée du stockage au froid. A noter cependant que les séries ayant incubé plus de 52 heures à C avant induction ont un faible pourcentage d'émergence, de

l'ordre de 1 à 2 % à la fin de l'induction.

Pour le stockage long notamment, il est donc avantageux

d'utiliser des oeufs de 0 à 24 heures, tués par les ultra-

violets ou par le froid et provenant de femelles d'Ephestia kuhniella ayant déjà eu de préférence un effectif de descendants

et issues de larves ayant subi ou non un stockage au froid.

Exemple II

Le tableau I ci-dessous résume les taux de fécondité moyenne et le pourcentage d'éclosions par femelle, ayant subi

ou non un stockage au froid avant parasitisme.

TABLEAU I

_. _ _ |.

lours dE 3tockag de? peu s Stockage Oj I des parasites à 3 C jours) j 90 j (dur6e en j Féc.moy./femelle 24,26 19,2 25,4 20,46 éclosions 8,24 15,27 97,11 98,69 Féc.moy./femelle 31 29 25,6 22,46 % éclosions 8,6 8,73 99,21. 98,51 Féc.moy./femelle 19,86 9,73 13,3

28.. é 2,4 3,2

é éclosions 2,41 30,82 94,5 Féc.moy./femelle O éclosions Féc.moy./femelle O éclosions 7,06 3,01 7,2. 14,81 ,62 6,33 78,94 22,2 98,49 13,6 99,01 Féc. moy./femelle 29 27,93 29,13 24,8 % éclosions 7,56 6,68 99,77 99,46 Féc. moy./femelle 16,86 19,86 13,13

28 _ _ _.

é éclosions 8,69 18,12 95,93 Féc.moy./femelle ÀO éclosions I ,13 0,65 16,4 8,33 r. ,06 89,47 _. -- ____ - _______________ J-______ ______ I _______ j _______ --t Co a sO G_ oi cn a, E o O) -C -P so Co hJ a) t O s t E C a) o r- a) a, c. o c -P- w CO - Co -t a) a, -C o- LU I -

On constate que le parasitisme le plus efficace inter-

vient sur des oeufs ayant séjourné moins de 14 jours à 30C.

Exemple 3

On a cherché à vérifier si l'élevage des parents à di-

verses températures peut avoir un effet sur la diapause de la

progéniture induite par différentes températures et photo-

périodes en fonction de différentes durées d'induction. On a également cherché l'influence possible de la méthode de collage

des oeufs à l'eau ou à la colle sur la qualité de cette diapause.

a) Préparation des inoculums (génération parentale)

On dispose 3 lots de 96 tubes contanant chacun un ino-

culum de 100 oeufs parasités en 24 heures à 230C, l'un à 15 C,

l'autre à 20-23%C et le troisième lot à 23-270C.

b) Préparation des oeufs hôtes pour la génération fille

Au moment de l'émergence des adultes parentaux, on in-

troduit dans chaque tube deux plaquettes de 500 oeufs traités aux ultraviolets, l'une comportant des oeufs collés à l'eau, l'autre comportant des oeufs collés à l'aide d'une solution

aqueuse de gomme arabique à 30 6.

c) Mode d'induction On place une moitié de chaque lot à 13,50C et l'autre moitié à 100C. A chacune de ces températures, l'effectif est à

son tour divisé en deux parties: l'une est soumise à la photo-

période de 8 heures de lumière-16 heures d'obscurité et l'autre à 16 heures de lumière - 8 heures'd'obscurité, chacun pour moitié

jusqu'au grisement, l'autre jusqu'au grisement plus 2 semaines.

On dispose ainsi de 48 lots élémentaires de 12 plaquettes qui

sont stockées à 30C.

d) Mode de stockage Par traitement élémentaire, 4 plaquettes sont stockées 1 mois, 4 plaquettes pendant 3 mois et 4 plaquett s pendant 6 mois. Après stockage, on effectue la réactivation à 23-27%C et l'on calcule le taux d'émergences sur 100 oeufs. Durant toutes les phases de ces essais, on maintient l'humidité relative à

70 %.

On constate tout d'abord que l'élevage de la souche moldave de Trichogramma evanescens à 15%C aboutit à un pourcentage important de diapausants et, de ce fait, on élimine le lot

destiné à produire des imagos parentaux à cette température.

Il ressort de cet essai que le mode de collage n'inter-

fère pas sur le taux d'émergence, que ce facteur soit considéré isolément ou en interaction avec les autres facteurs. La tempé- rature d'élevage des parents ne montre pas d'effet significatif, isolément, mais elle présente par contre une interaction de la génération fille. Cette interaction se renforce d'ailleurs avec une interaction de troisième ordre hautement significative

avec la température d'induction et significative avec la photo-

période d'induction. Ce dernier facteur présente par ailleurs, toujours associée à la température d'élevage des parents, une

interaction de troisième ordre avec la durée de stockage à 30C.

Les facteurs les plus influents sont finalement, d'une part, les conditions d'induction de la génération fille, photo-période, durée et température d'induction et d'autre part, le mode de stockage à 30C, isolément, et en interaction avec la température et la durée d'induction. L'effet de la température d'induction est, par ailleurs, renforcé de

manière hautement significative par la photopériode et la du-

rée d'induction.

Exemple 4

On a réalisé l'essai qui suit dans le but de vérifier s'il est possible de discerner une différence de qualité de diapause liée à deux températures d'induction très proches l'une de l'autre. Par ailleurs, on a effectué deux durées d'exposition des parasites à leur hôte, l'Lne de courte durée (4 heures), qui correspond à une production en continu d'oeufs d'Ephestia kuhniella parasités, l'autre de longue durée (24

heures), plus proche de la production habituelle des Trichogrammes.

Dans le premier type, le superparasitisme est presque inexistant.

Dans le second type, il est plus fréquent.

Dispositif expérimental: On expose aux Trichogrammes 132 plaquettes d'oeufs d'Ephestia kuhniella passés aux ultraviolets. 62 plaquettes sont

retirées après 4 heures de parasitisme, les autres après 24 heu-

res. Ces deux séries de plaquettes ainsi parasitées sont placées à une température léqèrement inférieure à 15 IC, avec photopfriode de 8 heures de lumière-16 heures d'obscurité,à 70% d'humiditM relative.Chaque jour,on nasse il

à 13,50C un lot de 6 plaquettes de chaque série, avec photo-

période de 8 heures de lumière - 16 heures d'obscurité et à % d'humidité relative, jusqu'au noircissement des oeufs plus jours. On place ensuite ces plaquettes à 30C et on les retire après 1 mois, 3 mois et 6 mois de stockage respectivement.

On effectue la réactivation à 23-27 C, 70 'O d'humidité relative.

Après réveil pour chaque traitement élémentaire, on isole femelles afin de connaître leur fécondité en 7 jours.

Les résultats de ces essais sont indiqués sur les gra-

phiques des figures 2 et 3 o l'on a porté en abscisses la durée d'induction en jours, sur deux échelles respectivement à 14,9 C et à 13, 50C, et en ordonnées le pourcentage de sorties

des individus. Sur ces graphiques, les courbes G, H et I corres-

pondent respectivement à 1 mois, 3 mois et 6 mois de stockage à 30C. Il résulte de ces essais qu'il existe une différence hautement significative entre les deux durées de parasitisme, celle de 4 heures conduisant dans presque tous les cas à une meilleure diapause. Ces différences peuvent être attribuées soit au fait d'un superparasitisme plus important après 24

heures d'exposition des oeufs d'Ephestia kuhniella aux Tricho-

grammes, superparasitisme conduisant à freiner l'induction d'une diapause, soit à une meilleure compétence des premiers

oeufs du parasite pour la diapause.

On a pu remarquer en outre que dans les cas o il n'y avait pas de superparasitisme et pour des périodes d'induction plus longues, de l'ordre de 40 jours, on pouvait obtenir un très bon pourcentage (supérieur à 95 %) d'émergence dans le

cas de 24 heures de parasitisme.

Exemple 5

Le but des essais résumés dans les tableaux II et III

ci-dessous est de montrer qu'il est possible d'atteindre un rap-

port 1 à 15 avec une tendance marquée pour le monoparasitisme

et une sex-ratio ainsi qu'une fécondité optimales pour la des-

cendance obtenue à partir d'oeufs d'Ephestia kuhniella parasités

par le Trichogramme.

TABLEAU Il

Nombre d'oeufs hâtes/femellç

C 70 % humidité _..

relative 1 2 5 if 20 40 A de femelles qui pondent de la lre à la 20e heure 9 4 7 20 40 88 % d'oeufs noirs entiers parasités en 24 heures 29,16 40,19 42,68 66,52 77,8 73,5 A d'oeufs parasités éclos 78,57 65,8 69,5 88, 12 93,8 98 Sex- Nombre mâles ratio Nombre femelles 2 1 0,72 0,41 0,2 0,2 Fécondité moyenne par femelle 40,5 54,65 59 62,16 Durée du développement en J (premières émergences)

TABLEAU III

0-24 h para- Nombre d'oeufs Nombre sitisme à 20 C, Para- Parasi- blancs Jaunes émergés % H.R. sites tés af- affais- affaiss6s faissés ss femelles - 6 4 6 oeufs 2 6 2

3 2 3

1 7 2 O

0 9 1

femelles- 2 17 1 2 oeufs 14 2 6 9

5 11

6 3 11 2

4 2 10 4 3

femelles - 28 8 12 4 17 oeufs 13 6 20 13 9

18 3 21 6 14

23 5 16 3 16

23 9 17 17

femelles - 51 11 21 8 39 oeufs 50 10 30 4 39

77 2 11 75

15 27 49

82 2 18 2 80

femelles - 156 4 56 148 oeufs 150 1 ^35 138 197 2 v30 190 104 2 v42 92

128 4 I28 122

femelles - 285 oeufs 279 400 oeufs 296 1 blancs 288 319 encore 316 292 en bon 287 278 état 272

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Exemple 6

* Effet F1 Le but de cet exemple est de montrer l'influence des modalités de réveil sur la fécondité des femelles diapausantes et celle de la diapause sur les fécondités des descendants, le traitement comprenant notamment une durée d'induction de

jours à une température comprise entre 12 et 151C.Les moda-

lités de réveil, l'effet de la diapause sur les descendantes

filles comparées à deux témoins, l'un originaire de la popula-

tion initiale, l'autre des descendants de ce témoin, portent

pour chaque série sur 25 femelles. Les fécondités ont été re-

levées le deuxième jour par changement des plaquettes, puis

le dixième jour et, ensuite, de semaine en semaine. On a égale-

ment relevé la sex-ratio. A partir du dixième jour, on effectue des dissections sur 300 oeufs parasités tous les 2 jours pour

connaître la distribution des divers stades dans la population.

a) Distribution des stades à la température d'induction (du 10e au 30e jour) ler au 10e jour: Tous les individus sont au stade fin de 3e stade larvaire, prénymphe. Les oeufs sont de

couleur gris moyen.

2e au 14e jour: Apparition de 17 nymphes hyalines.

3e au 16e jour: Apparition de 20 nymphes hyalines.

4e au 19e jour: Apparition de 13 nymphes hyalines.

Apparition de 7 nymphes yeux rouges.

e au 22e jour: Apparition de 13 nymphes hyalines. Apparition de 7 nymphes yeux rouges.

6e au 25e jour: Apparition de 14 nymphes hyalines

Apparition de 2 nymphes yeux rouges.

Apparition de 2 nymphes en tout début de sclérification.

7e au 30e jour: Apparition de 18 nymphes hyalines.

Apparition de 4 nymphes yeux rouges.

Apparition de 2 nymphes nettement sclérifiées.

b) Les pourcentages de sorties sont, pour les trois modes de réveil Rl, R2, R3 (voir ci-après) respectivement de 61,7, 63,8 et 54,5 %. L'apparition des premiers adultes a lieu jours après la sortie des oeufs parasités de leur stockage au froid. La sex-ratio est élevée: environ 1 mêle pour 2 femelles, alors que pour la génération F1, elle est de 1 mâle pour 6

femelles (voir ci-après).

L'étalement des sorties se fait pratiquement sur

4 jours et 85 des sorties ont lieu en 2 jours.

Les modes de réveil sont résumés de la façon suivante: R: réveil à 2327 C R2:réveil à 20 C, pendant 3 jours, puis 23-270C R: réveil à 15 C, pendant 3 jours, puis 23-27 C F1:génération fille élevée à 23-27 C T:témoin élevé à 20 C

F1T: génération du témoin élevé à 23-27 C.

TABLEAU IV

Fécondité totale en nombre moyen d'oeufs femelle 0 - 2 jours pondus par 0 - 10 jours

R1 81,6 28,2 65,6

R2 80,8 28,2 65,8

R 87,6 31,6 66,7

F1 152,1 56,8 112,6

T 75 28,5 57,4

F1T 124,7 44,6 93,8

Longévité:

Aux 6 traitements examinés pour la fécondité, cor-

respondent les longévités moyennes données dans le tableau V ci-dessous:

TABLEAU V

Le procédé selon l'invention permet donc la produc-

tion en masse des Trichogrammes permettant notamment de stocker l'oophage produit pendant un temps relativement long, qui permet la distribution du lieu de production au champ. La diapause des individus est précisément un état qui autorise à la fois le stockage par le froid, l'utilisation de la chaîne du froid

pour les transports ainsi que le cumul des productions journa-

lières., mensuelles et même annuelles. La production du Tricho-

gramme permet notamment de mettre en oeuvre la lutte biologique sous forme de lâchers inondatifs et saisonniers, en particulier sur des champs de maïs dans le cadre de la lutte contre la

pyrale du mais Ostrinia nubilalis hubner.

Comme mentionné plus haut, une "souche 16" de Trichogram-

me, spécialement adaptée par le Demandeur, convient particulière-

ment dans la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus.

Longévité moyenne en jours

R1 19,44

R2 16,72

R3 19 52

l1 23,56

T 22,76

F1T 21,84

17 2460620

Conformément à la présente invention, la souche N 16 est un insecte hyménoptère chalcidien de la famille des Trichogrammatidae modifié et adapté à la destruction des oeufs

d'Ostrinia nubilalis (pyrale du mais).

Trichogramma evanescens fut décrit en 1833 par Westwood J.O. (Localité du type: Angleterre), il s'agit d'un parasitoide

dont les larves vivent aux dépens des oeufs de lépidoptères.

L'espèce fut morphologiquement redécrite par Nagarkatti

(S) et Nagaraja (H) en 1971.

Comme mentionné plus haut, les trichogrammes sont déjà employés en lutte biologique dans de nombreux pays mais jamais une souche active et très bien dérinie comme la souche N 16 n'a été obtenue. Celle-ci a été découverte en Moldavie (U.R.-S.S.)

par Jean VOEGELE dans des oeufs d'Ostrinia nubilalis sur mais.

Le Demandeur a conduit l'élevage, à l'aide d'oeufs d'Ephestia k hniella de manière à sélectionner les individus les plus féconds et à obtenir une consanguinité totale. Il ne s'agit donc pas d'une population naturelle mais d'un lot renouvelable d'individus tous

identiques. Cette souche N 16 est unique.

On donne ci-dessous les caractères d'identification quantitatifs de cette souche N 16 (conditions abiotiques: 25 C,

% H.R., 16 heures de lumière par jour).

1) Fécondité -

Elle est exprimée par la fertilité (nombre d'enfants

adultes obtenus) -

Femelles fécondées Femelles vierges 3 premiers jours de ponte 33,53 + 2, 02 46,47 + 3,27 premiers jours de ponte 44,67 + 2,58 46,56 + 3,62 7 premiers jours de ponte 51,87 + 2,31 61,53 + 3,54 2) Sex-ratio (pourcentage de femelles) Progéniture issue des 3 premiers jours de ponte: 0,69 + 0,04 Progéniture issue des 5 premiers jours de ponte: 0,68 + 0,02 Probéniture issue des 7 premiers jours de ponte: 0,64 + 0,03

Sex-ratio totale = 0,60.

3) Pourcentage d'émergence

82,0 %

4) Longévité Longévité des femelles fécondées: 10,4 + 0,3 jour Pourcentage d'individus morts avant 8 jours: Femelles vierges O Femelles fécondées 6,2 Mâles 81,2 O ) Pourcentaqe de stérilité =1 Femelles: 2, 97 'O Mâles: 7,69 %

6) Capacité de recherche de l'hâte standard (E. k hniel-

la) Femelles Mâles Imo 1,6 0,4 Icr 10,7 0,9 Iat 9,1 0,5 On donne cidessous les caractères d'identification qualitatifs.

Par électrophorèse, certaines enzymes ont été caracté-

risées: estérases, malate-déshydrogénases et tétrazolium-oxydases.

Si les deux dernières ne se trouvent pas dans la souche dans un état particulier, les estérases permettent, par contre une

identification précise.

Aucun polymorphisme n'est décelé. Cinq bandes, corres-

pondant à 5 locus, présentent des mobilités électrophorétiques de O,10; 0, 22; 0,28; 0,50 et 0,53. La première et les

deux dernières sont les plus intenses.

Sur 28 souches analysées, y compris 2 provenant comme la souche NI 16 des cultures de mais, aucune ne possède de tels

caractères estérasiques.

Il résulte des données ci-dessus qu'à l'aide de l'en-

semble de ces caractères, il n'est pas possible de confondre la souche N 16, d'une part, avec l'une quelconque des 150 lignées

connues et, d'autre part, avec une population naturelle.

La souche N 16 de trichogrammes applicable au procédé selon l'invention et destinée à la lutte contre la pyrale du maïs

est unique et reconnaissable.

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Il est bien entendu que la présente invention n'a été décrite et représentée qu'à titre explicatif mais nullement limitatif et qu'on pourra y apporter toute modification utile dans le domaine des équivalences techniques sans sortie de

-5 son cadre.

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé de conditionnement et de conservation d'oeufs de parasites oophages d'insectes, destinés notamment à la lutte biologique contre certains déprédateurs de plantes, du type comportant le parasitage d'un oeuf-hôte et la conservation au froid, caractérisé par le fait que l'on part d'oeufs de Lépidoptères de denrées alimentaires, en particulier d'Ephestia kuhniella, ayant subi un conditionnement préalable, qu'on fait parasiter ces oeufs par des adultes de Trichogrammes,

qu'on soumet- les oeufs ainsi parasités à une période d'incuba-

tion d'au moins 24 heures à 200C, avec photopériode de 8 heures -

de lumière et 16 heures d'obscurité et à une humidité relative de 70 à 80 %, qu'on soumet les oeufs ainsi incubés à une période d'induction de 6 à 80 jours environ, à une température inférieure à 150C, avec photopériode de 8 heures de lumière et 16 heures d'obscurité, et une humidité relative de 70 % environ, puis

qu'on met à conserver les oeufs ainsi obtenus à 30C, avec photo-

période de 8 heures de lumière et 16 heures d'obscurité et à

une humidité relative de 70 à 80 %.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage long, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 0 à 24 heures, - la durée de la période d'incubation du parasite étant de 24 heures à 200C et la durée de la période d'induction étant de 40 à 80 jours à une température comprise entre

5 et 150C environ.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que, pour le stockage court, on part d'oeufs d'Ephestia kuhniella âgés de 72 heures environ, la durée de la période d'incubation étant de 96 heures à 200C et la durée de la période

d'induction étant de 6 à t jours à une température inférieure à 150C.

4. Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 à 3, caractérisé par le fait que le conditionnement préalable des oeufs d'Ephestia kuhniella consiste à les tuer par les ultraviolets ou le froid et éventuellement, à les faire séjourner

à une température de-30C pendant une durée inférieure à 14 jours.

5. Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 à 4, caractérisé par le fait qu'on parasite les oeufs d'Ephestia kuhniella en les exposant à des Trichogrammes élevés à 200C avec une photopériode de 16 heures de lumière et 8 heures d'obscurité, nourris et fraîchementémergés pendant une durée

de 4 à 24 heures environ.

6. Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 à 5, caractérisé par le fait que l'on effectue le réveil des oeufs conservés à 30C, à une température comprise entre 23 et 271C, avec éventuellement un palier de trois jours environ à C.

7. Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 à 6, caractérisé par le fait que l'on exploite plus particu-

lièrement, en vue de la lutte biologique, la deuxième génération

des Trichogrammes issus des oeufs-hôtes conservés à 31C.