UA52951A - Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ - Google Patents
Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ Download PDFInfo
- Publication number
- UA52951A UA52951A UA2001128944A UA2001128944A UA52951A UA 52951 A UA52951 A UA 52951A UA 2001128944 A UA2001128944 A UA 2001128944A UA 2001128944 A UA2001128944 A UA 2001128944A UA 52951 A UA52951 A UA 52951A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- toxicity
- biological
- cells
- culture
- determining
- Prior art date
Links
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 title claims abstract description 26
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 101150004367 Il4i1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 14
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 208000003243 intestinal obstruction Diseases 0.000 description 5
- 238000007468 re-laparotomy Methods 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 2
- 241000223785 Paramecium Species 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 206010056375 Bile duct obstruction Diseases 0.000 description 1
- 241000252983 Caecum Species 0.000 description 1
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 241001071795 Gentiana Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 201000005264 laryngeal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ включає витримування біологічної рідини з тестовою культурою та визначення в подальшому характеру змін клітин тестової культури. Як тестову культуру використовують культуру ракових клітин організму людини, а після витримування її у біологічній рідині визначають якісні та кількісні зміни з боку культури клітин і по співвідношенню змінених та незмінених клітин судять про ступінь токсичності біологічного середовища.
Description
Опис винаходу
Спосіб відноситься до галузі біологічних наук і може бути використаним в медицині для діагностики 2 патологічних станів біологічних середовищ при різноманітній патології органів і систем, наприклад, для визначення токсичності крові та кишкового вмісту у хворих з непрохідністю кишечника та поширеним перитонітом.
Після усунення джерел кишкової непрохідності або поширеного перитоніту шляхом проведення своєчасного та адекватного оперативного втручання, однією з головних ланок у патогенезі порушень, що розвиваються в 70 подальшому, є синдром ентеральної недостатності. Наслідком ентеральної недостатності є накопичення у просвіті кишечника застійного, токсичного вмісту з розвитком гіперколонізації умовнопатогенних та патогенних мікроорганізмів. Ступінь вираженості та тривалість протікання даного синдрому багато в чому визначає характер інтоксикації, подальший розвиток захворювання та його прогноз. Слід зазначити, що інтоксикаційний синдром є найбільш частою причиною летальних випадків серед хворих з непрохідністю кишечника та поширеним 72 перитонітом. В таких умовах визначення токсичності крові та кишечного вмісту є важливим діагностичним заходом, що дозволяє адекватно визначити ступінь патологічних змін з боку вищезгаданих середовищ та в процесі лікування простежити ефективність проведення і доцільність використання певних лікувальних маніпуляцій та процедур.
Найбільш близьким до заявляємого, є спосіб визначення токсичності біологічних середовищ, який полягає у визначенні тривалості життя найпростіших одноклітинних мікроорганізмів Рагатесішт сацдайт під впливом досліджуваного середовища (парамеційний тест) /В.П. Андрющенко, С.Т. Федоренко. Клінічна хірургія. - 1997. -
Ме9 - 10. - с. 18 - 20; Ю.Б. Куцик. Клінічна хірургія. - 1998, - Мод. - с. 23 - 25//
Недоліком даного способу є нестабільність результатів та великий відсоток похибок, пов'язаних зі способом культивування, особливостями харчування та фазою життєвого циклу найпростіших, що використовуються у 29 досліді. «
Задачею винаходу є створення такого способу визначення токсичності біологічних середовищ, в якому шляхом використання певних засобів досягається простота, адекватність та точність діагностики патологічного стану вищезгаданих середовищ.
Зазначена задача досягається тим, що в способі визначення токсичності біологічних середовищ, який -- включає витримування біологічної рідини з тестовою культурою та визначення в подальшому характеру змін ою клітин тестової культури, згідно винаходу, в якості тестової культури використовують культуру ракових клітин організму людини, а після витримування їх у біологічній рідині визначають якісні та кількісні зміни з боку о культури клітин і по співвідношенню змінених та незмінених клітин судять про ступінь токсичності біологічного су середовища.
Зо Авторами даного винаходу, з урахуванням характеру змін з боку біологічних середовищ, підібраний такий о засіб, який дозволяє досягти зазначеного у задачі результату. Так, використання для діагностики культури ракових клітин, якій притаманні властивості тканин організму, дозволяє достовірно опосередковано простежити вплив токсинів, що їх вміщують біологічні середовища, на організм людини та адекватно визначити рівень « токсичності біологічного середовища. Характер культивування, спосіб забору, стандартність поживного З 0 середовища та умов культивування дозволяє запобігти похибок у результатах досліджень, притаманних с парамеційному тесту.
Із» Спосіб здійснюється наступним чином. Для визначення токсичності біологічних середовищ використовуємо перещепну культуру клітин Нер-2 (клітини карциноми гортані людини). Клітини культивуємо у середовищі росту наступного складу: середовище 199 - 250мл, середовище Ігла - 200мл, сироватка крупної рогатої худоби - 50мл, пеніцилін - Т00ОД/мл, стрептоміцин - 5Омкг/мл. Для досліджень використовуємо суспензію культури клітин у і-й посівній концентрації 40000Окл/мл в середовищі Ігла з 595 ембріональної сироватки телят. Відібране біологічне ка середовище центрифугуємо при 4000об/хв протягом ЗОхв. з метою відокремлення грубих домішок, з послідуючим фільтруванням через фільтри "Мійіроге" з розміром пор 0,22мкм для деконтамінації від супутньої і мікрофлори. З рідкої частини досліджуваного біологічного середовища готовимо 2Х кратні розведення у (9) 50 середовищі Ігла та вносимо в об'ємі 0О,Тмл до 4 лунок 96 луночного пластикового планшету для культури клітин. що В ті ж лунки додаємо суспензію культури клітин в об'ємі О0,1мл. До контрольних лунок (4шт.) вносимо суспензію клітин в об'ємі О,їмл та 0,їмл середовища Ігла. Планшети витримуємо в термостаті при 37"С з підвищеним вмістом СО». Попередній облік результатів можливий через 2 - 12 годин, що використовується при потребі експресної оцінки даних. Остаточний облік результатів здійснюється через 24 години візуально, з використанням 59 інвертованого мікроскопу та наступним фіксуванням і забарвленням клітинних моношарів 595 розчином генціан в. віолетового.
Про токсичність біологічного середовища свідчить цитопатична дія, яка настає під впливом досліджуваного середовища і проявляється руйнуванням 5095 (ЦПД - 5095) та більш клітинного моношару у 4 лунках 96 луночного планшету. Так, в контрольних лунках при нормальних умовах культивування культура клітин Нер-2 бо має вигляд рівномірно розташованих клітин у вигляді одного шару з чіткими контурами оболонок та зернистої цитоплазми (фіг.1). Під дією токсинів біологічного середовища частина клітин втрачає життєздатність, деформується, що візуально реєструється у вигляді зруйнованих клітин з ознаками зморщування, втрати цитоплазматичної мембрани та форми клітин (фіг.2). Про ступінь токсичності біологічного середовища свідчить кратність розведення досліджуваного матеріалу, в якій ще спостерігається руйнування 5095 та більш клітинного бо моношару у 4 лунках.
Приклад Мо1. Хворий Х., 1946р.н., І1.Х. Мо5357/01.
Діагноз: Гострий гангренозно-перфоративний апендицит. Периапендикулярний абсцес. Місцевий гнійний перитоніт. Рання післяопераційна злукова непрохідність кишечника. Розлитий серозний перитоніт. При виконанні релапаротомії, зважаючи на наявність показань, виконано назоінтестинальну інтубацію. Для визначення ступеню токсичності біологічних рідин хворого здійснювали забір крові з вени в об'ємі ТОмл та кишкового вмісту через зонд в об'ємі 20мл. З рідкої частини досліджуваних біологічних середовищ робили 2 кратні розведення у середовищі Ігла та вносили в об'ємі О0.їмл по одному розведенню до 4 лунок 96 луночного пластикового планшету для культури клітин. В ті ж лунки додавали суспензію культури клітин в об'ємі О,Тмл. До контрольних 70 лунок (д4шт.) вносили суспензію клітин в об'ємі О,1мл та 0,їмл середовища Ігла. Планшет вміщували у термостат з температурою 377"С та подачею СО». Облік результатів проводили через б годин. Так, на першу добу після релапаротомії токсичность крові (ЦПД - 5095) спостерігалась у розведенні 1:4, кишкового вмісту (ЦПД - 5090) - у розведенні 1:32. На фоні проведеної дезинтоксикаційної терапії на 2 добу після релапаротомії токсичність крові дорівнювала "0", що до кишечного вмісту ЦПД - 5095 спостерігалась у розведенні 1:16. Отримані 75 результати дали підставу для проведення детоксикації кишечника. На 5 добу після релапаротомії токсичність кишечного вмісту ЦПД - 5095 спостерігалась у розведенні 1:2, що може спостерігатися в нормі. Отриманий результат дав підстави для видалення інтубаційного зонду.
Приклад Мо2. Хвора П., 1959р.н., І.Х. Мо7460/01.
Діагноз: Перфоративна виразка цибулини 12-палої кишки. Загальний серозно-фібринозний перитоніт.
Ендотоксичний шок 1 - 2ст. При виконанні операції, зважаючи на наявність показань, виконано назоіїнтестинальну інтубацію. Для визначення ступеню токсичності біологічних рідин здійснювали забір крові хворої з вени в об'ємі їОмл та кишкового вмісту Через зонд в об'ємі 20мл з наступним центрифугуванням матеріалів. З рідкої частини досліджуваних біологічних середовищ робили 2Х кратні розведення у середовищі
Ігла та вносили в об'ємі О.їмл по одному розведенню до 4 лунок 96 луночного пластикового планшету для
Культури клітин. В ті ж лунки додавали суспензію культури клітин в об'ємі О,їмл. До контрольних лунок (4шт.) « вносили суспензію клітин в об'ємі О,їмл та О,їмл середовища Ігла. Планшет вміщували у термостат з температурою 377"С та подачею СО». Оцінку результатів проводили через 6 годин. Так, на першу добу після релапаротомії токсичность крові (ЦПД - 5095) спостерігалась у розведенні 1:8, кишечного вмісту (ЦПД - 50965) - у розведенні 1:64. На фоні проведеної дезинтоксикаційної терапії на З добу після операції токсичність крові -- дорівнювала "0", що до кишечного вмісту ЦПД - 5095 спостерігалась у розведенні 1:16. Отримані результати дали підставу для проведення детоксикації кишечника. На 5 добу після операції токсичність кишечного вмісту й
ЦПД - 5095 спостерігалась у розведенні 1:2, що може спостерігатися в нормі. Отриманий результат давопідстави с) для видалення інтубаційного зонду.
В цілому зазначений спосіб був застосований у 23 хворих із кишковою непрохідністю та розповсюдженим см перитонітом, серед яких у 10 мала місце злукова непрохідність кишечника, у 6 - обтураційна непрохідність юю пухлинного генезу, у 7 мав місце розповсюджений перитоніт, як наслідок перфоративної виразки цибулини 12-палої кишки, гострого деструктивного апендициту та гнійних гінекологічних захворювань. У всіх випадках рівень токсичності крові та кишечного вмісту відповідав рівню інших клініко-лабораторних показників і « відображав важкість захворювання. Визначення рівня токсичності в динаміці дало можливість обгрунтувати кількість, тривалість та простежити ефективність застосування сеансів дезінтоксикаційної терапії, що дало - с можливість більш ефективно та раціонально проводити післяопераційну консервативну терапію та в цілому а скоротити термін перебування хворих у стаціонарі на 2-3 доби. "» Заявлений спосіб визначення токсичності біологічних середовищ простий у виконанні, але дає можливість адекватно та достовірно визначити рівень токсичної дії вищезгаданих середовищ на організм людини, тому може бути використаним у всіх випадках, коли наслідки захворювання та результати лікування залежать від характеру 1 впливу патологічно змінених біологічних середовищ на функцію органів і систем пацієнтів. іме) с
Claims (1)
- Формула винаходу с 50 | шк | Й | | шо Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ, який включає витримування біологічної рідини з - тестовою культурою та визначення в подальшому характеру змін клітин тестової культури, який відрізняється тим, що як тестову культуру використовують культуру ракових клітин організму людини, а після витримування її у біологічній рідині визначають якісні та кількісні зміни з боку культури клітин і по співвідношенню змінених та незмінених клітин судять про ступінь токсичності біологічного середовища.Р Фіг1 Фіг260 ние й й й -Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2003, М 1, 15.01.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України.б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001128944A UA52951A (uk) | 2001-12-24 | 2001-12-24 | Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001128944A UA52951A (uk) | 2001-12-24 | 2001-12-24 | Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA52951A true UA52951A (uk) | 2003-01-15 |
Family
ID=74173460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001128944A UA52951A (uk) | 2001-12-24 | 2001-12-24 | Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA52951A (uk) |
-
2001
- 2001-12-24 UA UA2001128944A patent/UA52951A/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Smyth et al. | Procedures for testing the viability of human hydatid cysts following surgical removal, especially after chemotherapy | |
| EP0138833B1 (en) | Cell viability assay methods and apparatus | |
| CN101268364A (zh) | 利用人类组织进行药物测试和筛选的新的增强方法 | |
| JPS6170972A (ja) | 細胞培養法及び装置 | |
| CN107557426A (zh) | 基于三维微组织水平的抗肿瘤药物筛选试剂盒及其使用方法 | |
| TW201109653A (en) | Microfluidic device | |
| JP4047391B2 (ja) | 不純物のない全血に基づいたミクロ病理学的患者レプリカ | |
| WO2020073043A1 (en) | Artificial human pulmonary airway and methods of preparation | |
| CN103981085A (zh) | 一种自设度梯度药物筛选器官芯片及其制备方法 | |
| Moreira et al. | Ozonation of bovine peritoneal membrane for preservation: preliminary investigation | |
| UA52951A (uk) | Спосіб визначення токсичності біологічних середовищ | |
| CN109929797A (zh) | 鸡胚移植瘤模型建立方法及其在药物敏感性检测中的应用 | |
| BRPI0615754A2 (pt) | processos novos e aperfeiçoados para teste de medicamentos incluindo fatias de tecido neoplástico e produtos relacionados | |
| JP2013027384A (ja) | 顕微鏡用細胞収容器 | |
| Morman | Clinical pathology in America, 1865-1915: Philadelphia as a test case | |
| RO134677A0 (ro) | Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia | |
| WO2024020527A1 (en) | Effluent for cell-culture assays | |
| CN108918898A (zh) | 体外检测脂多糖对红细胞变形能力影响的方法及其应用 | |
| RU2759413C1 (ru) | Способ выявления микобактерии туберкулеза из резецированной ткани легкого | |
| RU2732222C1 (ru) | Способ диагностики бактериемии | |
| JP2009505662A (ja) | 化学療法感受性試験機 | |
| CN115011480A (zh) | 一种从动物组织中分离微生物的方法及其用途 | |
| RU2602916C1 (ru) | Способ микробиологической диагностики парапротезной инфекции | |
| RU2553307C1 (ru) | Способ выявления форм урогенитальных трихомонад | |
| CN117511734A (zh) | 一种用于评估肿瘤转移性的肿瘤类器官芯片及方法 |