RO134677A0 - Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia - Google Patents
Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia Download PDFInfo
- Publication number
- RO134677A0 RO134677A0 ROA202000387A RO202000387A RO134677A0 RO 134677 A0 RO134677 A0 RO 134677A0 RO A202000387 A ROA202000387 A RO A202000387A RO 202000387 A RO202000387 A RO 202000387A RO 134677 A0 RO134677 A0 RO 134677A0
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- vessel
- vitro
- urine
- tested
- viability
- Prior art date
Links
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims abstract description 11
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000005293 duran Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 4
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 4
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000723353 Chrysanthemum Species 0.000 description 2
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 2
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 2
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 208000020612 escherichia coli infection Diseases 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un sistem in vitro pentru testarea infecţiei urinare cu Escherichia coli şi la o metodă de testare. Sistemul conform invenţiei este constituit dintr-un vas (1) Duran cu volumul de minim 1 litru, prevăzut cu două orificii, care conţine urină artificială sterilizată, o pompă (2) peristaltică, pentru administrarea regulată de urină din vasul (1) cu un debit de 0,4 ml/min controlat printr-o priză cu temporizare, un punct (3) de inoculare cu tulpina testată realizat dintr-un sept din silicon, cultura stoc având o viabilitate minimă de 1 x 105 UFC/mL, în NaCl 0,9% steril, un furtun (4) din silicon cu diametrul de 0,45 μm terminat într-un filtru Millipore, un vas (5) de simulare in vitro a vezicii urinare, cu un volum de minim 250 mL, în care se află amestecul (6) de reacţie format din urină simulată, produsul testat şi tulpina microbiană, un sistem (7) de menţinere a temperaturii la 37°C, un cateter (8) urinar şi un vas (9) Duram steril prevăzut cu două orificii pentru colectarea probelor. Metoda conform invenţiei are o etapă iniţială de inoculare a mediului din vasul (5) de simulare, după care se adaugă produsul de testat prin septul (3) păstrând temperatura constantă la 37°C, asigurându-se un debit şi un timp de interacţiune constant odată cu colectarea probelor în vasul (9) şi cu determinarea viabilităţii.
Description
Metodă de testare a infecției urinare cu Escherichia coli și sistem in vitro pentru aplicarea acesteia
Sistemul propus, bazat pe o metodă in vitro, își propune brevetarea unui simulator al vezicii urinare destinat testării unor produse împotriva infecțiilor recurente cu Escherichia coli. Metoda presupune utilizarea unei tulpini control ca agent biologic pentru simularea infecției de la nivelul vezicii urinare umane. Efectul antimicrobian va exprima eficiența clinică a produsului testat in vitro, in vederea validării preclinice de la nivel de laborator.
Diverse modele in vitro sunt utilizate pentru a determina efectul unor suplimente funcționale sau medicamente asupra infecțiilor recurente cu tulpini uropatogene {Escherichia coli, Candida sp., Proteus mirabilis'). Cu toate acestea, formarea biofîlmului microbian in vivo este dificil de determinat și caracterizat. Pentru a elimina acest obstacol se utilizează modele in vitro care pot oferi o imagine a structurii biofîlmului ce se formează, dar și a eficienței produsului testat. Pentru a putea corela datele in vitro, cu cele in vivo, modelele cu o curgere constantă sau regulată sunt acceptate în literatura de specialitate [1].
Pentru astfel de studii se utilizează urină artificială sau poate fi utilizată și urină recoltată de la pacienți, sterilizată. A doua variantă poate fi destinată studiului personalizat, în situația în care se urmărește evoluția infecțiilor bacteriene la grupuri țintă de populație. Infecțiile urinare fac parte din categoria celor nosocomiale din cauza frecvenței ridicate din spitale. Ambele variante de mediu utilizat în simulare susține creșterea bacteriilor deoarece respectă toate cerințele unui mediu de cultură clasic [2].
Astfel, metoda și sistemul in vitro au un caracter inovativ prin introducerea unei noi modalități practice de evaluare a potențialului antimicrobian al unor produse biofarmaceutice. Această cerere de brevet propune o modalitate ușor de aplicat la nivel de laborator, în faza de concepere și testare a unui produs din industria biofarmaceutică. Sistemul in vitro elimină o problemă majoră, aceea a caracterizării efectului unui produs de tipul suplimentelor funcționale. Se va determina o imagine a eficacității și rolului unor produse noi, cu efect antimicrobian, cu rol în diminuarea formării biofîlmului de la nivel urinar.
Necesitatea dezvoltării unor sisteme in vitro pentru studiul infecțiilor recurente cu E. coli rezultă din interpretarea unor factori relevanți pentru evaluarea riscului de infecție prin folosirea unui cateter urinar și din evaluarea noilor strategii terapeutice împotriva creșterii z Rector USAMV Sorin Mihai Gmpeanu
Ir·, -,·· „·..,· .·. ·ύ XV*\
Ț--Τ''rr 1
RO 134677 AO rezistenței la antibiotice. Aceste sisteme respectă condițiile fizico-chimice de la nivelul vezicii urinare și trebuie să simuleze, cât mai exact, interacțiunea cu epiteliul uman, dar să și faciliteze posibilitatea colonizării microbiene. Modelul propus se dorește a fi unul dinamic, care permite o eliminare fiziologică a cantității de urină în 24 de ore [3]. Metoda și sistemul in vitro de simulare se bazează pe determinarea viabilității, dar pot fi luate în calcul și alte mecanisme ce pot să influențeze efectul biologic (de exemplu, stresul oxidativ). Acestă metodă poate fi utilizată, în funcție de scopul cercetărilor efectuate, și pentru alte tulpini microbiene, de exemplu microorganisme eucariote - Candida albicans.
Figura 1. Reprezentarea schematică a modelului in vitro dezvoltat prin cererea de brevet
In plus, aceste sisteme in vitro pot realiza și o testare a unor catetere inovative care să prevină formarea biofilmului, având în compoziția lor materiale cu proprietăți antimicrobiene (de exemplu, nanoparticule). La ora actuală nu există biomateriale utilizate pentru catetere urinare care să fie în totalitate biocompatibile cu epiteliul uman. Proprietățile materialului vor imprima și valoarea biologică. Acest aspect este important și în realizarea simulatorului care va trebui să permită colonizarea. Un alt aspect îl reprezintăjDăstrarea temperaturii fiziologice
CC/.Îc. - UU-U. /
Rector Dr. Sorin Mihai Qmpeanu
RO 134677 AO deoarece aceasta influențează dinamica microbiană, dar și efectul moleculelor de interes farmaceutic.
Punctul critic îl reprezintă montarea cateterului deoarece orice suprainfecție schimbă structura biofilmului, dar și răspunsul pe care îl vom avea la produsul administrat. Consumul resurselor disponibile nu va permite înțelegerea dinamicii tulpinii țintă in vivo, determinarea factorilor cheie, dar și a concentrației optime din produsul testat. Soluția tehnică propusă prin acest procedeu presupune activități uzuale de laborator și permite o cultivare în condiții de laborator. Nu implică materii prime dăunătoare pentru mediu și crește gradul de valorificare a unor molecule valoroase, provenite din surse naturale.
în Figura 1, este prezentată schema noului sistem in vitro. Etapele metodei și realizarea sistemului in vitro au următoarea succesiune:
1. Vas Duran (volum minim ÎL) prevăzut cu 2 orificii ce conține urină artificială sterilizată;
2. Pompă peristaltică pentru administrarea regulată de urină din vasul de punctul 1, debit
0.4 mL/min controlat printr-o priză cu temporizare;
3. Punctul de inoculare cu tulpina testată - sept din silicon (cultură stoc cu o viabilitate minimă 1 χ 105 UFC/mL, în NaCl 0.9% steril);
4. Furtul din silicon terminat într-un filtru Millipore, diametru 0.45 pm;
5. Vasul de simulare in vitro a vezicii urinare (volum minim 250 mL);
6. Amestecul de reacție (urină simulată, produsul testat, tulpina microbiană);
7. Sistem de menținere a temperaturii - 37°C;
8. Cateter urinar;
9. Vas steril de colectare probe -vas Duram prevăzut cu două orificii).
Sistemul de încălzire este bazat pe recircularea apei printr-un circuit ce înconjoară vasul principal de simulare. Sistemul cuprinde o plită cu încălzire și senzor de temperatură, o pompă peristaltică ce asigură un debit constant de 1 mL/min și un vas de adaos prevăzut cu un capac, cu trei orificii.
Sistemul propus spre brevetare are următoarele avantaje:
Poate fi utilizat și pentru teste ce folosesc tulpini patogene, deoarece poate fi coîhplef. sterilizat după fiecare utilizare; . Λ * Μ.'χ ? ?
< i .. S ···»,
Rector USAMV București Prof. Univ. Dr. Sorin Mihai Cîmpeanu /
Conf dr. Vam'anu Emanuel
RO 134677 AO
Determinare in vitro a capacității antimicrobiene a unui produs fără utilizarea de teste in vivo;
Parametrii simulării pot fi modificați fără a afecta structura sistemului;
Inițierea unor studii interdisciplinare și multidisciplinare ce vizează microbiota de la nivelul tractului urinar.
Experiment 1.
S-a utilizat ciprofloxacină (în ser fiziologic steril), care a reprezentat proba martor pentru verificarea inițială a funcționalității sistemului. Viabilitatea determinată la 24 de ore de funcționare a fost de 8.20±0.03 UFC/mL. Pe ansamblu, scăderea determinată în 24 de ore de funcționare a fost de ~ 1.00 UFC/mL. Nu s-a observat formarea de biofilm, celulele bacteriene fiind eliminate treptat odată cu urina artificială.
Experiment 2.
S-a utilizat un extract realizat din petale de crizantemă (în alcool etilic 50%), a reprezentat proba test pentru stabilirea parametrilor de funcționare generală în cazul testării unor produse naturale. Viabilitatea determinată la 24 de ore de funcționare a fost de 8.20±0.05 UFC/mL. Pe ansamblu, scăderea determinată în 24 de ore de funcționare a fost de ~ 0.40 UFC/mL. In schimb, s-a observat formarea parțială de biofilm, celulele bacteriene nefiind complet eliminate. Diferențele au fost interpretate și prin existența unor compuși ce stimulează proliferarea celulară. Prezența lor este determinată de compoziția eterogenă a unui extract natural.
. * ·’ ... -Sj f,, \ \ ί ,i .·' ’ ' ·.· ·’ ·- L V '
Rector USAMV București Prof. Univ. Dr. Sorin Mihai Cîmpeanii X .
Conf dr. Var^snu Emanuel
RO 134677 AO
Revendicare:
Metoda și sistemul in vitro de aplicare, conform revendicării 1, utilizează o biomasă de Escherichia coli în NaCl 0.9% steril. Utilizarea sistemului in vitro presupune: realizarea urinei artificiale, realizarea sistemului de alimentare cu urină artifială, realizarea vasului de simulare a vezicii urinare, realizarea sistemului bazat pe recircularea apei pentru menținerea temperaturii constante pe durata simulării.
Rector USAMV București Prof. Univ. Dr. Sorin Mihai Cîmpeanu
Conf dr. Vamanâ Emanuel
RO 134677 AO
DESCRIERE MODIFICATĂ
Sistem in vitro pentru testarea infecției urinare cu Escherichia coli și metodă de testare
Sistemul propus, bazat pe o metodă in vitro, își propune brevetarea unui simulator al vezicii urinare destinat testării unor produse împotriva infecțiilor recurente cu Escherichia coli. Metoda presupune utilizarea unei tulpini control ca agent biologic pentru simularea infecției de la nivelul vezicii urinare umane. Efectul antimicrobian va exprima eficiența clinică a produsului testat in vitro, in vederea validării preclinice de la nivel de laborator.
Diverse modele in vitro sunt utilizate pentru a determina efectul unor suplimente funcționale sau medicamente asupra infecțiilor recurente cu tulpini uropatogene {Escherichia coli, Candida sp., Proteus mirabilis'). Cu toate acestea, formarea biofilmului microbian in vivo este dificil de determinat și caracterizat. Pentru a elimina acest obstacol se utilizează modele in vitro care pot oferi o imagine a structurii biofilmului ce se formează, dar și a eficienței produsului testat. Pentru a putea corela datele in vitro, cu cele in vivo, modelele cu o curgere constantă sau regulată sunt acceptate în literatura de specialitate [1],
Pentru astfel de studii se utilizează urină artificială sau poate fi utilizată și urină recoltată de la pacienți, sterilizată. A doua variantă poate fi destinată studiului personalizat, în situația în care se urmărește evoluția infecțiilor bacteriene la grupuri țintă de populație. Infecțiile urinare fac parte din categoria celor nosocomiale din cauza frecvenței ridicate din spitale. Ambele variante de mediu utilizat în simulare susține creșterea bacteriilor deoarece respectă toate cerințele unui mediu de cultură clasic [2].
Astfel, metoda și sistemul in vitro au un caracter inovativ prin introducerea unei noi modalități practice de evaluare a potențialului antimicrobian al unor produse biofarmaceutice. Această cerere de brevet propune o modalitate ușor de aplicat la nivel de laborator, în faza de concepere și testare a unui produs din industria biofarmaceutică. Sistemul in vitro elimină o problemă majoră, aceea a caracterizării efectului unui produs de tipul suplimentelor funcționale. Se va determina o imagine a eficacității și rolului unor produse noi, cu efect antimicrobian, cu rol în diminuarea formării biofilmului de la nivel urinar.
Necesitatea dezvoltării unor sisteme in vitro pentru studiul infecțiilor recurente cu E. coli rezultă din interpretarea unor factori relevanți pentru evaluarea riscului de infecție prin folosirea unui cateter urinar și din evaluarea noilor strategii terapeutice împotriva creșterii rezistenței la antibiotice. Aceste sisteme respectă condițiile fizico-chimice de la nivelul vezicii
Rector USAMV București PrafCUniv. Dn ȘdnnșMihai Cîmpeanu
Conf dr, Vi mănu Emanuel
RO 134677 AO
DESCRIERE MODIFICATĂ urinare și trebuie să simuleze, cât mai exact, interacțiunea cu epiteliul uman, dar să și faciliteze posibilitatea colonizării microbiene. Modelul propus se dorește a fi unul dinamic, care permite o eliminare fiziologică a cantității de urină în 24 de ore [3]. Metoda și sistemul in vitro de simulare se bazează pe determinarea viabilității, dar pot fi luate în calcul și alte mecanisme ce pot să influențeze efectul biologic (de exemplu, stresul oxidativ). Acestă metodă poate fi utilizată, în funcție de scopul cercetărilor efectuate, și pentru alte tulpini microbiene, de exemplu microorganisme eucariote - Candida albicans.
în plus, aceste sisteme in vitro pot realiza și o testare a unor catetere inovative care să prevină formarea biofilmului, având în compoziția lor materiale cu proprietăți antimicrobiene (de exemplu, nanoparticule). La ora actuală nu există biomateriale utilizate pentru catetere urinare care să fie în totalitate biocompatibile cu epiteliul uman. Proprietățile materialului vor imprima și valoarea biologică. Acest aspect este important și în realizarea simulatorului care va trebui să permită colonizarea. Un alt aspect îl reprezintă păstrarea temperaturii fiziologice deoarece aceasta influențează dinamica microbiană, dar și efectul moleculelor de interes farmaceutic.
Punctul critic îl reprezintă montarea cateterului deoarece orice suprainfecție schimbă structura biofilmului, dar și răspunsul pe care îl vom avea la produsul administrat. Consumul resurselor disponibile nu va permite înțelegerea dinamicii tulpinii țintă in vivo, determinarea factorilor cheie, dar și a concentrației optime din produsul testat. Soluția tehnică propusă prin acest procedeu presupune activități uzuale de laborator și permite o cultivare în condiții de laborator. Nu implică materii prime dăunătoare pentru mediu și crește gradul de valorificare a unor molecule valoroase, provenite din surse naturale.
în Figura 1, este prezentată schema figurativă a noului sistem in vitro, în care: la 1 este un vas Duran (volum minim ÎL) prevăzut cu 2 orificii ce conține urină artificială sterilizată, la 2 o pompă peristaltică pentru administrarea regulată de urină din vasul de punctul 1, debit 0.4 mL/min controlat printr-o priză cu temporizare, la 3 punctul de inoculare cu tulpina testată - sept din silicon (cultură stoc cu o viabilitate minimă IxlO5 UFC/mL, în NaCl 0.9% steril), la 4 un furtul din silicon terminat într-un filtru Millipore, diametru 0.45 pm, la 5 este vasul de simulare in vitro a vezicii urinare (volum minim 250 mL), 6 reprezintă amestecul de reacție (urină simulată, produsul testat, tulpina microbiană); la 7 se află sistemul
Rector USAMV București Prof. Univ. Dri Sprin Mihai Cîmpeanu
Confdr, lanu Emanuel
RO 134677 AO
DESCRIERE MODIFICATĂ de menținere a temperaturii - 37°C, 8 este cateterul urinar, iar 9 este vasul steril de colectare probe -vas Duram prevăzut cu două orificii).
Sistemul de încălzire 7 este bazat pe recircularea apei printr-un circuit ce înconjoară vasul principal de simulare 5, format dintr-o plită cu încălzire și senzor de temperatură, o pompă peristaltică ce asigură un debit constant de 1 mL/min și un vas de adaos prevăzut cu un capac, cu trei orificii.
Sistemul propus spre brevetare are următoarele avantaje:
- Poate fi utilizat și pentru teste ce folosesc tulpini patogene, deoarece poate fi complet sterilizat după fiecare utilizare;
- Determinare in vitro a capacității antimicrobiene a unui produs fără utilizarea de teste in vivo;
Parametrii simulării pot fi modificați fără a afecta structura sistemului;
- Inițierea unor studii interdisciplinare și multidisciplinare ce vizează microbiota de la nivelul tractului urinar.
Metoda de testare a infecției cu E. coli, în vederea testării unor suplimente funcționale, conform invenției, constă în inocularea vasului de simulare 5 prin intermediul punctului de inoculare 3 cu o seringă sterilă, în raport de 1% cultură microbiană (viabilitate minimă D105 UFC/mL), temperatura se păstrează constantă la 37°C, cu ajutorul sistemului de încălzire 7, iar produsul de testat (extract funcțional sau antibiotic - martor) se adaugă tot prin punctul de inoculare 3 cu o seringă sterilă în raport de 1 mg/mL la 12 ore. Probele se recoltează în timp real, atunci când nivelul amestecul de reacție 6 trece peste nivelul balonului cateterului urinar 8, iar probele se recoltează în vasul steril de colectare 9 și se analizează după minim 24 de ore. Pentru analiză se determină viabilitatea și se utilizează mediu McConkey turnat în plăci Petri. Plăcile inoculate se introduc la 32°C, timp de 24 - 48 de ore și se determină viabilitatea (UFC/mL).
RO 134677 AO
DESCRIERE MODIFICATĂ
Experiment 1.
S-a utilizat ciprofloxacină (în ser fiziologic steril), care a reprezentat proba martor pentru verificarea inițială a funcționalității sistemului. Viabilitatea determinată la 24 de ore de funcționare a fost de 8.20±0.03 UFC/mL. Pe ansamblu, scăderea determinată în 24 de ore de funcționare a fost de ~ 1.00 UFC/mL. Nu s-a observat formarea de biofilm, celulele bacteriene fiind eliminate treptat odată cu urina artificială.
Experiment 2.
S-a utilizat un extract realizat din petale de crizantemă (în alcool etilic 50%), a reprezentat proba test pentru stabilirea parametrilor de funcționare generală în cazul testării unor produse naturale. Viabilitatea determinată la 24 de ore de funcționare a fost de 8.20±0.05 UFC/mL. Pe ansamblu, scăderea determinată în 24 de ore de funcționare a fost de ~ 0.40 UFC/mL. în schimb, s-a observat formarea parțială de biofilm, celulele bacteriene nefiind complet eliminate. Diferențele au fost interpretate și prin existența unor compuși ce stimulează proliferarea celulară. Prezența lor este determinată de compoziția eterogenă a unui extract natural.
RO 134677 AO
DESCRIERE MODIFICATĂ
Bibliografie
1. M. NEGRI, S. SILVA, M. HENRIQUES, J. AZEREDO, T. SVIDZINSKI, R. OLIVEIRA. Candida tropicalis biofilms: artificial urine, urinary catheters and flow model. Medical Mycology 2011, 49, 739-747.
2. T. Brooks, C.W. Keevil A simple artificial urine for the growth of urinary pathogens. Letters in Applied Microbiology 1997, 24, 203-206.
3. M. Maierl, M. Jorger, P. Rosker, A. Reisner In vitro dynamic model of a catheterized bladder and biofilm assay. Bio-protocol 2015, 5, 2.
Rector USAMV Bucuresti\Prof. Univ. Dr. Sorin Minai Cîmpeanu
Conf dr. Vamanu Emanuel
Claims (2)
1. Sistem in vitro pentru testarea infecției urinare cu Escherichia coli, caracterizat prin aceea că, este constituit dintr-un vas (1) Duran cu volumul minim ÎL, prevăzut cu 2 orificii, care conține urină artificială sterilizată, o pompă (2) peristaltică pentru administrarea regulată de urină din (1), debit 0.4 mL/min controlat printr-o priză cu temporizare, un punctul de inoculare (3) cu tulpina testată - sept din silicon (cultură stoc cu o viabilitate minimă lxlO5 UFC/mL, în NaCl 0.9% steril), un furtul (4) din silicon terminat într-un filtru Millipore, diametru 0.45 pm, un vas (5) de simulare in vitro a vezicii urinare (volum minim 250 mL), unde se află amestecul de reacție (6 - urină simulată, produsul testat, tulpina microbiană), Sistem (7) de menținere a temperaturii - 37°C, Cateter urinar (8), Vas steril (9) de colectare probe -vas Duram prevăzut cu două orificii).
2. Metoda conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că, în etapa inițială se inoculează mediul din vasul de simulare (5), se adaugă produsul de testat prin septul (3) și se păstrează temperatura constantă la 37°C, asigurându-se un debit și un timp de interacțiune constant, odată cu colectarea probelor în vasul (9) și determinarea viabilității.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA202000387A RO134677A0 (ro) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA202000387A RO134677A0 (ro) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO134677A0 true RO134677A0 (ro) | 2021-01-29 |
Family
ID=74222388
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA202000387A RO134677A0 (ro) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO134677A0 (ro) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113189315A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-07-30 | 山东省医疗器械产品质量检验中心 | 一种评价抗菌导尿管抗菌活性的体外动态模型及其使用方法 |
-
2020
- 2020-07-07 RO ROA202000387A patent/RO134677A0/ro unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113189315A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-07-30 | 山东省医疗器械产品质量检验中心 | 一种评价抗菌导尿管抗菌活性的体外动态模型及其使用方法 |
| CN113189315B (zh) * | 2021-04-13 | 2024-01-23 | 山东省医疗器械产品质量检验中心 | 评价抗菌导尿管抗菌活性的体外动态模型及其使用方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gomes et al. | Standardized reactors for the study of medical biofilms: a review of the principles and latest modifications | |
| McBain | In vitro biofilm models: an overview | |
| Nett et al. | Candida albicans biofilm development, modeling a host–pathogen interaction | |
| Djeribi et al. | Characterization of bacterial biofilms formed on urinary catheters | |
| Mack et al. | Biofilm formation in medical device-related infection | |
| Pavlovsky et al. | Effects of temperature on the morphological, polymeric, and mechanical properties of Staphylococcus epidermidis bacterial biofilms | |
| de Avila et al. | Effect of titanium and zirconia dental implant abutments on a cultivable polymicrobial saliva community | |
| RO134677A0 (ro) | Metodă de testare a infecţiei urinare cu escherichia coli şi sistem in vitro pentru aplicarea acesteia | |
| Lleo et al. | Adhesion to medical device materials and biofilm formation capability of some species of enterococci in different physiological states | |
| Ionescu et al. | A new urinary catheter design reduces in-vitro biofilm formation by influencing hydrodynamics | |
| Rajkumar et al. | Evaluation of different phenotypic techniques for the detection of slime produced by bacteria isolated from clinical specimens | |
| CN109486679A (zh) | 一种体外血管支架评测用微流控芯片及应用 | |
| Nuryastuti et al. | Ica-status of clinical Staphylococcus epidermidis strains affects adhesion and aggregation: a thermodynamic analysis | |
| Asfaw | Biofilm Formation by Enterococcus Faecalis and Enterococcus Faecium | |
| Lombardi et al. | Central vascular catheter infections in a Hospital of Central Italy | |
| Apostolakis | Use of focused ultrasound (sonication) for the diagnosis of infections in neurosurgical operations: a systematic review and meta-analysis | |
| CN114480122A (zh) | 一种基于微流控芯片的血脑屏障与脑胶质瘤共培养模型的建立方法及应用 | |
| Wang et al. | Preclinical performance testing of medical devices with antimicrobial effects | |
| RU2732222C1 (ru) | Способ диагностики бактериемии | |
| RU2231554C2 (ru) | Способ определения эффективности антибиотика для лечения воспалительных заболеваний микробной этиологии | |
| RU2659155C1 (ru) | Способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования | |
| CN101857893B (zh) | 一种细菌群相同步培养的方法及试剂盒 | |
| Özdemir et al. | Biofilm reactor design and optimization of biofilm diagnostic test method on implant surface. | |
| Lum et al. | Connecting molecular mechanisms of biofilm formation and functional biomaterials | |
| Lewis | 3D-printed culture plate insert with agarose barrier for the evaluation of stem-cancer cell signaling. |