RU2332461C1 - Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности - Google Patents
Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2332461C1 RU2332461C1 RU2006139189/13A RU2006139189A RU2332461C1 RU 2332461 C1 RU2332461 C1 RU 2332461C1 RU 2006139189/13 A RU2006139189/13 A RU 2006139189/13A RU 2006139189 A RU2006139189 A RU 2006139189A RU 2332461 C1 RU2332461 C1 RU 2332461C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasma
- coagulating activity
- staphylococci
- hours
- solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической лабораторной диагностике инфекционных заболеваний. Способ предусматривает внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия. Полученную микробную взвесь инкубируют при температуре 37°С в течение 5 часов. Регистрируют электрическое сопротивление микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования. Причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности. Изобретение позволяет сократить сроки проведения исследований и повысить точность анализа.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологической лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
Плазмокоагулирующая активность является одним из основных признаков патогенности стафилококков (Staphylococcus aureus). До настоящего времени в периодической и патентной литературе не описано объективных методов регистрации плазмокоагулирующей активности бактерий, позволяющих с помощью приборов зарегистрировать коагуляцию плазмы микроорганизмами.
В микробиологической практике способность бактерий вызывать коагуляцию плазмы определяют визуально в течение 18 часов культивирования бактерий (Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., Медицина. - 1978. - С.167). Данный способ выявления фермента плазмокоагулазы у патогенных стафилококков выбран в качестве прототипа. Способ заключается в следующем: в две пробирки наливают по 0,5 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия, затем в каждую пробирку вносят по 1 петле 18-20-часовой культуры стафилококка. Одну пробирку (опытную) засевают исследуемой культурой бактерий, вторую (первый контроль) - заведомо патогенным, плазмокоагулирующим штаммом стафилококка. Засеянные пробирки выдерживают в течение 3 ч. Если за указанное время коагуляции плазмы в опытной пробирке не происходит, пробирки оставляют при комнатной температуре еще на 18 ч. Если и через это время свертывания плазмы не произойдет, исследуемая культура является коагулазоотрицательной. Одновременно в термостат ставят несколько пробирок с плазмой (второй контроль), в которые не вносят бактерии. Если в одной из пробирок второго контроля наступает коагуляция плазмы, обусловленная микробным загрязнением, результат опыта не учитывают.
Одним из существенных недостатков прототипа является субъективное определение изменения вязкости раствора в опытной пробирке по сравнению с контрольными. Окончательный учет наличия плазмокоагулирующей активности бактерий проводят через 18 часов, и в течение этого времени сотрудник лаборатории периодически (через каждые 10-20 мин) просматривает пробирки с посевами исследуемых культур для выявления плазмокоагулирующей активности бактерий. Если сотрудник лаборатории вовремя не просмотрел пробирки (в момент коагуляции плазмы), то процесс идет в обратном направлении, то есть из желеобразного состояния раствор приобретает жидкую консистенцию. В данном случае лаборатория может дать ложноотрицательный результат лабораторного исследования на наличие фермента плазмокоагулазы.
Задачей настоящего изобретения является разработка нового, объективного, экономичного экспресс-способа определения плазмокоагулирующей активности стафилококков.
Технический результат - простой, не требующий больших материальных затрат определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности, позволяющий сократить сроки проведения исследований, повысить точность проведения лабораторного анализа и создающий возможность автоматизации в процессе регистрации плазмокоагулирующей активности стафилококка, основанный на определении показателей электрического сопротивления микробной взвеси в растворе плазмы. Использован известный способ определения электрического сопротивления растворов по новому назначению, а именно для выявления патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности.
Технический результат достигается тем, что способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности предусматривает внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия, инкубирование микробной взвеси при температуре 37°С в течение 5 часов, регистрацию электрического сопротивления микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования, причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Сущность изобретения достигается тем, что использован объективный способ регистрации плазмокоагулирующей активности бактерий по показателям электрического сопротивления раствора, позволяющий автоматизировать процесс выявления патогенных штаммов стафилококков (S.aureus) по плазмокоагулирующей активности, в результате этого освобождается от работы сотрудник лаборатории, регистрирующий плазмокоагулирующую активность бактерий, экономится расход питательных сред и создается возможность объективно с высокой точностью за 5 часов проводить значительно большее количество лабораторных анализов по определению плазмокоагулирующей активности микробных взвесей.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Используют 12-ти часовую культуру стафилококка. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 107 КОЕ/мл, вносят в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирки с микробной взвесью вводят стальные электроды, соединенные с пишущим устройством, регистрирующим электрическое сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Микробную взвесь инкубируют при 37°С в течение 5 часов. При показаниях электрического сопротивления раствора от 64 до 84 кОм за период с 3-го до 5-го часа инкубирования микробной взвеси делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Предложенный способ определения патогенных стафилококков (S. aureus) по плазмокоагулирующей активности (по сравнению с прототипом) позволяет экономить расход питательных сред, сокращает время проведения лабораторных исследований, дает объективные результаты исследований и создает возможность автоматизировать процесс определения плазмокоагулирующей активности микробной взвеси.
Примеры конкретного выполнения предлагаемого способа
Пример 1
У больного К. 37 лет, находящегося на лечении в отделении гнойной хирургии Областной клинической больницы (ОКБ) №1 г.Тюмени, из раны выделена культура S.aureus. Идентификация возбудителя проведена до вида в бактериологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области» по общепринятым тестам для стафилококков: наличие гемолизинов, пигментов, лецитиназы на желточно-солевом агаре, плазмокоагулазы, каталазы, ферментации маннита в аэробных и анаэробных условиях, ферментации глюкозы в аэробных и анаэробных условиях.
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура стафилококка, выделенного от больного. Концентрацию микробной взвеси готовили по стандартной методике (МУК 4.2.1890-04). Использовали стандарт 0,5 по МакФарланду. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 107 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода, соединили их с пишущим устройством, регистрирующим сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Микробную взвесь инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 15 мин визуально установлена коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания самопишущего устройства, регистрирующего электрическое сопротивление раствора. Показания регистрирующего устройства - 64 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Пример 2
Больной В. 57 лет, находился на лечении в Областной клинической больнице №19 г.Тюмени по поводу гнойного конъюнктивита. Из гнойного отделяемого выделена культура S.aureus. Идентификация возбудителя проведена до вида в бактериологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области» по общепринятым тестам для стафилококков: наличие гемолизинов, пигментов, лецитиназы на желточно-солевом агаре, плазмокоагулазы, каталазы, ферментации маннита в аэробных и анаэробных условиях, ферментации глюкозы в аэробных и анаэробных условиях.
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура выделенного стафилококка. Концентрацию микробной взвеси определяли по МакФарланду, используя стандарт 0,5. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 107 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода и определяли электрическое сопротивление раствора в пределе 2000 кОм, используя цифровой мультиметр М-832. Микробную взвесь инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 50 мин визуально установлена коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания электрического сопротивления раствора 74 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Пример 3
При плановом бактериологическом исследовании на наличие S.aureus на объектах внешней среды отделения гнойной хирургии Областной клинической больницы №1 г.Тюмени проведен смыв с рук сотрудника отделения больницы К. 32 лет. В бактериологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области» у сотрудника К. с рук выделена культура S.aureus. Идентификация возбудителя проведена до вида по общепринятым тестам для стафилококков.
Для определения плазмокоагулирующей активности с помощью предложенного способа взята 12-часовая культура выделенного стафилококка. Концентрацию микробной взвеси определяли по МакФарланду, используя стандарт 0,5. Микробную взвесь в количестве 0,1 мл, содержащую 107 КОЕ/мл, внесли в пробирку с 0,3 мл плазмы, разбавленной 1:5 изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку с микробной взвесью поместили два стальных электрода, соединили их с пишущим устройством, регистрирующим сопротивление раствора в пределе 2000 кОм. Взвесь бактерий инкубировали при 37°С в течение 5 часов. Через 3 часа 40 мин визуально установлена в растворе коагуляция плазмы. Одновременно зарегистрированы показания самопишущего устройства, регистрирующего электрическое сопротивление раствора, которое составило 84 кОм. Выделенную культуру бактерий отнесли к плазмокоагулирующей.
Приведенные примеры иллюстрируют возможность применения предложенного способа для определения патогенных штаммов Staphylococcus aureus по плазмокоагулирующей активности. Способ апробирован на базе бактериологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области». Проведено определение плазмокоагулирующей активности 10 штаммов Staphylococcus aureus, выделенных от больных и с объектов окружающей среды в больничных помещениях. Результаты исследований представлены в таблице.
Предложенный способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности не требует больших материальных затрат, легко воспроизводим, сокращает сроки проведения исследований, создает возможность автоматизировать процесс выявления патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности и дает объективные данные лабораторных исследований, позволяющих выявлять патогенные штаммы стафилококков по плазмокоагулирующую активности с точностью 100%.
Claims (1)
- Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности, предусматривающий внесение 12-часовой культуры стафилококка в плазму, разведенную изотоническим раствором хлорида натрия, инкубирование микробной взвеси при температуре 37°С в течение 5 ч, регистрацию электрического сопротивления микробной взвеси с 3-го до 5-го часа инкубирования, причем при показателях сопротивления раствора 64-84 кОм делают заключение о патогенности стафилококка по наличию плазмокоагулирующей активности.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006139189/13A RU2332461C1 (ru) | 2006-11-08 | 2006-11-08 | Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006139189/13A RU2332461C1 (ru) | 2006-11-08 | 2006-11-08 | Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006139189A RU2006139189A (ru) | 2008-05-20 |
| RU2332461C1 true RU2332461C1 (ru) | 2008-08-27 |
Family
ID=39798344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006139189/13A RU2332461C1 (ru) | 2006-11-08 | 2006-11-08 | Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2332461C1 (ru) |
-
2006
- 2006-11-08 RU RU2006139189/13A patent/RU2332461C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛАБИНСКАЯ А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. - М.: Медицина, 1978, с.166-168. ЛАБИНСКАЯ А.С. Практикум по микробиологическим методам исследования. - М.: Медгиз, 1963, с.234-237. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006139189A (ru) | 2008-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8420347B2 (en) | Test mixture for detecting the presence or absence of methicillin resistant Staphylococcus aureus directly in a first generation test sample | |
| RU2707925C1 (ru) | Штамм бактерий salmonella enterica subsp. enterica serovar typhi в качестве контрольного штамма для фенотипических и молекулярных исследований при диагностике брюшного тифа | |
| Roberts | Procurement, interpretation, and value of postmortem cultures | |
| Wuthiekanun et al. | Quantitation of B. pseudomallei in clinical samples | |
| Gedikoglu et al. | Detection of Brucella melitensis by BACTEC NR 730 and BACTEC 9120 systems | |
| RU2393229C1 (ru) | Способ определения адгезии staphylococcus spp. к гемопротеинам | |
| US8546103B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of pathogenic Staphylococci in a test sample, including test mixture with micro particles | |
| RU2332461C1 (ru) | Способ определения патогенных стафилококков по плазмокоагулирующей активности | |
| KR20180113445A (ko) | 실내공기의 미생물 오염 잠재성을 예측하는 온습도 응답 장치 및 그 제조 방법 | |
| RU2262533C2 (ru) | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания | |
| RU2433186C1 (ru) | СПОСОБ ИНДИКАЦИИ ГОСПИТАЛЬНЫХ ШТАММОВ P.aeruginosa, S.aureus, E.cloacae | |
| Sande et al. | Comparison of the Three Phenotypic Methods to Detect Biofilm Production in Coagulase Negative Staphylococci | |
| RU2292398C2 (ru) | Способ индикации госпитальных штаммов стафилококков | |
| US20220145371A1 (en) | Viability detection and quantification assay of waterborne pathogens by enrichment | |
| RU2324936C1 (ru) | Способ индикации эпидемических штаммов шигелл | |
| US20200208200A1 (en) | Viability detection and quantification assay of waterborne pathogens by enrichment | |
| RU2110579C1 (ru) | Способ диагностики госпитального штамма синегнойной палочки pseudomonas aeruginosa | |
| RU2470075C2 (ru) | Способ определения максимальной концентрации живых бактерий | |
| RU2666257C1 (ru) | Способ определения чувствительности бактериальных гемокультур к антибиотикам | |
| Abbas | Antibiotics Susceptibility and Bacterial Profiles of Urinary Tract Infected Patients in Ramadi City Hospital, Iraq. | |
| Kapur et al. | Rapid sensor based technology: a novel tool for direct antimicrobial susceptibility testing in urinary tract infection | |
| Miao et al. | Microbial Culture and Its Clinical Application | |
| UA140217U (uk) | Спосіб дослідження чутливості м. tuberculosis до вторинних метаболітів стрептоміцетів | |
| UA136814U (uk) | Спосіб експрес-диференціації pseudomonas aeruginosa за допомогою уф-світла | |
| RU2021370C1 (ru) | Штамм bacteriophagum shigellosum б 5, активный в отношении shigella boydii 5 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20090401 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20091109 |