UA127784C2 - Спосіб неруйнівного in ovo визначення статі птахів - Google Patents
Спосіб неруйнівного in ovo визначення статі птахів Download PDFInfo
- Publication number
- UA127784C2 UA127784C2 UAA201811754A UAA201811754A UA127784C2 UA 127784 C2 UA127784 C2 UA 127784C2 UA A201811754 A UAA201811754 A UA A201811754A UA A201811754 A UAA201811754 A UA A201811754A UA 127784 C2 UA127784 C2 UA 127784C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- embryo
- eggs
- biomarker
- sample
- egg
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 176
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 title claims description 9
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims abstract description 132
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 117
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- -1 amino compound Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 226
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 58
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 40
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 38
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 32
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 25
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 19
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 14
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 230000017448 oviposition Effects 0.000 claims description 12
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 10
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 7
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 claims description 6
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 claims description 6
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 238000009774 resonance method Methods 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 claims description 3
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 208000020329 Zika virus infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 abstract description 27
- 238000011524 similarity measure Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 96
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 65
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 45
- 241000894007 species Species 0.000 description 28
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 25
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 24
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 24
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 21
- 238000011161 development Methods 0.000 description 20
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 20
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 20
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 19
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 13
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 12
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 10
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 10
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 10
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 9
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 9
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 8
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 8
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 description 8
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 7
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 7
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 7
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 6
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 6
- 238000010239 partial least squares discriminant analysis Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 210000001643 allantois Anatomy 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 4
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 4
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 4
- 241001609213 Carassius carassius Species 0.000 description 4
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 4
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 4
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 4
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 4
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 230000020509 sex determination Effects 0.000 description 4
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- ZYVMPHJZWXIFDQ-LURJTMIESA-N alpha-methylmethionine Chemical compound CSCC[C@](C)(N)C(O)=O ZYVMPHJZWXIFDQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 3
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 241000473391 Archosargus rhomboidalis Species 0.000 description 2
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 2
- 241000124892 Barbus Species 0.000 description 2
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- 241000252210 Cyprinidae Species 0.000 description 2
- 241000723298 Dicentrarchus labrax Species 0.000 description 2
- 241000271571 Dromaius novaehollandiae Species 0.000 description 2
- 241000287824 Gallus sonneratii Species 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N L-ethionine Chemical compound CCSCC[C@H](N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000269779 Lates calcarifer Species 0.000 description 2
- 241000530454 Litopenaeus schmitti Species 0.000 description 2
- 241000276703 Oreochromis niloticus Species 0.000 description 2
- YDBYJHTYSHBBAU-YFKPBYRVSA-N S-methyl-L-methioninate Chemical compound C[S+](C)CC[C@H](N)C([O-])=O YDBYJHTYSHBBAU-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 2
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 2
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000000084 barbel Anatomy 0.000 description 2
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 2
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000013145 classification model Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008144 egg development Effects 0.000 description 2
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 2
- 238000010238 partial least squares regression Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 2
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 2
- 210000004974 shell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- AIFYCUKWFYJXJO-YFKPBYRVSA-N (2r)-2-(propan-2-ylamino)-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(C)N[C@@H](CS)C(O)=O AIFYCUKWFYJXJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JNHATNWAMGXQJQ-AKGZTFGVSA-N (2s)-2-amino-3-methyl-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC(C)[C@H](N)C(O)=O JNHATNWAMGXQJQ-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 1
- MQSDGAKLSVITHP-UHFFFAOYSA-N 2,2-diethoxyethanethioamide Chemical compound CCOC(C(N)=S)OCC MQSDGAKLSVITHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWQNFXDYOCUEER-UHFFFAOYSA-N 2,3-ditert-butyl-4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1C(C)(C)C QWQNFXDYOCUEER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YAXAFCHJCYILRU-UHFFFAOYSA-N 2-(methylazaniumyl)-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound CNC(C(O)=O)CCSC YAXAFCHJCYILRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAVACCZQLOLHTO-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-methyl-3-sulfanylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)(S)C(N)C(O)=O KAVACCZQLOLHTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNHATNWAMGXQJQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-methyl-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC(C)C(N)C(O)=O JNHATNWAMGXQJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYVMPHJZWXIFDQ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-2-methyl-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound CSCCC(C)(N)C(O)=O ZYVMPHJZWXIFDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYSXZQIOOACQRG-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-propan-2-ylsulfanylpropanoate Chemical compound CC(C)SCC(N)C(O)=O RYSXZQIOOACQRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVRXCPBNKJSGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-propan-2-yl-1,2-thiazolidine 1,1-dioxide Chemical compound CC(C)N1CCCS1(=O)=O XVRXCPBNKJSGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMOYOUMVYICGCA-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butyl-4-hydroxyanisole Chemical class COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C IMOYOUMVYICGCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MRBKEAMVRSLQPH-UHFFFAOYSA-N 3-tert-butyl-4-hydroxyanisole Chemical class COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 MRBKEAMVRSLQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ICTHGQKQYABWMV-UHFFFAOYSA-N 4-(2,2-dimethylpropyl)phenol Chemical compound CC(C)(C)CC1=CC=C(O)C=C1 ICTHGQKQYABWMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIPKWPPCKXBHEO-UHFFFAOYSA-N 5-amino-6-sulfanylhexanoic acid Chemical compound NC(CCCC(=O)O)CS ZIPKWPPCKXBHEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000239223 Arachnida Species 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000239250 Copepoda Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 description 1
- 241000283323 Delphinapterus leucas Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000160777 Hipparchia semele Species 0.000 description 1
- 241000235789 Hyperoartia Species 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000442132 Lactarius lactarius Species 0.000 description 1
- 241000269795 Lateolabrax japonicus Species 0.000 description 1
- 241001157775 Litopenaeus stylirostris Species 0.000 description 1
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 description 1
- 241001124325 Marsupenaeus japonicus Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 241000142520 Myxine Species 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 241001327682 Oncorhynchus mykiss irideus Species 0.000 description 1
- 241000276701 Oreochromis mossambicus Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241001600434 Plectroglyphidodon lacrymatus Species 0.000 description 1
- GGLZPLKKBSSKCX-UHFFFAOYSA-N S-ethylhomocysteine Chemical compound CCSCCC(N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WAAGBMYUYFBZIW-UHFFFAOYSA-N S-propylcysteine Chemical compound CCCSCC(N)C(O)=O WAAGBMYUYFBZIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000277263 Salmo Species 0.000 description 1
- 241000316146 Salmo trutta trutta Species 0.000 description 1
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 1
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 1
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 1
- 241000238371 Sepiidae Species 0.000 description 1
- 241001494106 Stenotomus chrysops Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000011166 aliquoting Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000001076 estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFSJZXMDTNDWIX-UHFFFAOYSA-N homomethionine Chemical compound CSCCCC(N)C(O)=O SFSJZXMDTNDWIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000003116 impacting effect Effects 0.000 description 1
- 108010059642 isinglass Proteins 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000238565 lobster Species 0.000 description 1
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960001913 mecysteine Drugs 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960005173 methiosulfonium chloride Drugs 0.000 description 1
- JIDVGUQUQSOHOL-UHFFFAOYSA-N myxin Chemical compound C1=CC=C2[N+]([O-])=C3C(OC)=CC=CC3=[N+]([O-])C2=C1O JIDVGUQUQSOHOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000009372 pisciculture Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- AZDDIYKMQFIXBW-UHFFFAOYSA-N propyl 2-amino-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCCOC(=O)C(N)CS AZDDIYKMQFIXBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182852 proteinogenic amino acid Natural products 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010223 real-time analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000013179 statistical model Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
- 235000014692 zinc oxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K43/00—Testing, sorting or cleaning eggs ; Conveying devices ; Pick-up devices
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/08—Eggs, e.g. by candling
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/4833—Physical analysis of biological material of solid biological material, e.g. tissue samples, cell cultures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу неруйнівної ідентифікації характеристики ембріона Gallus gallus domesticus in ovo, що передбачає: (a) отримання зразка матеріалу, асоційованого з яйцем, що містить ембріон, та (b) вимірювання значення оцінки на наявність та концентрацію щонайменше першого біомаркера у зразку, що вказує на характеристику ембріона, та (c) застосування порога до значення оцінки та концентрації, отриманих на стадії (b), для ідентифікації характеристики для ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією біомаркера, при цьому щонайменше перший біомаркер містить аміносполуку, що має молекулярну масу у діапазоні від 140 до 190 г/моль; при цьому стадія (с) додатково передбачає: (і) кореляцію кожного відповідного сигналу або сигнатури біомаркера з еталонним біомаркером шляхом зіставлення спектра кожного кореляційного сигналу з очікуваним спектром кореляційного еталонного біомаркера із застосуванням міри подібності для визначення щонайменше одного позитивно кореляційного сигналу; (іі) вимірювання інтенсивності кожного позитивно кореляційного сигналу та оцінку його абсолютної та/або відносної інтенсивності сигналу; та (ііі) застосування порога до значення оцінки, отриманої з функції подібності, для визначення корельованої характеристики ембріона.
Description
абсолютної та/або відносної інтенсивності сигналу; та (ії) застосування порога до значення оцінки, отриманої з функції подібності, для визначення корельованої характеристики ембріона.
Даний винахід відноситься до способу неруйнівного визначення іп омо статі у видів яйцекладних, зокрема, у видів птахів, більш конкретно, у виду СайПи5 дав. Спосіб за даним винаходом, крім того, відноситься до відбору яєць чоловічої статі та яєць жіночої статі, а також до отримання груп живих тварин із застосуванням цих відібраних яєць.
Яйцекладні тварини відкладають яйця з нетривалим ембріональним розвитком в організмі матері або взагалі без такого. Вирощування яйцекладних тварин та їх яєць забезпечує постійно зростаючу частину світового виробництва білку, а також різні інші великі промислові процеси, такі як виробництво вакцин. На даний час найбільш важливі способи вирощування яйцекладних тварин включають в себе розведення видів птахів, таких як домашня птиця, та культивування водних організмів, тобто вирощування водних організмів, таких як риба, ракоподібні та молюски.
Зокрема, курка, а точніше джунглева курка, тобто вид Са дайив дотевіїси5, безумовно, є найбільш вирощуваним видом яйцекладних у світі.
Попередній рівень техніки даного винаходу
Запліднені курячі яйця мають тенденцію забезпечувати приблизно рівне розподілення самців та самиць тварин. Однак за різними причинами при керуванні інкубаторно-птахівничою станцією може бути бажаним розподілення тварин за різними характеристикам, зокрема, за статтю. Наприклад, при комерційному виробництві домашньої курки та яєць інкубація та вирощування курчат чоловічої статі вкрай небажані, що призводить до вибраковування мільярдів курчат чоловічої статі кожен рік.
На даний час в обох випадках змішані популяції курчат, що вилупилися, піддаються розподілу за статевою ознакою шляхом візуальної оцінки молоді тварин, а іноді навіть дорослої популяції, у тих випадках, коли молодь не має відповідних ознак. У будь-якому випадку це дуже трудомісткий процес, що потребує висококваліфікованих операторів та, як правило, дуже стресовий для тварин.
Більш того, для комерційного виробництва яєць інкубація та вирощування курчат чоловічої статі вкрай небажані, що призводить до вибраковування мільярдів курчат чоловічої статі кожен рік. Крім того, є відсоток яєць, які не запліднені або не містять життєздатного ембріона на початок інкубаційного періоду, що значно знижує продуктивність інкубаторів на інкубаторно- птахівничих станціях.
Зо Крім того, якщо дорослих тварин розподіляють за статтю, то усі популяції необхідно вирощувати до мінімального віку, у той час як тільки половина вирощених таким чином тварин використовується для розмноження після розподілу. Інші проблеми можуть виникати, коли наявність, наприклад, чоловічої популяції може призводити до зниження продуктивності, наприклад, через канібалізм та зниження щільності фермерського господарства.
Крім того, є відсоток яєць, які не запліднені або не містять життєздатного ембріона на початок інкубаційного періоду, що значно знижує продуктивність інкубаторів, які застосовують на інкубаторно-птахівничих станціях, зокрема, для яєць домашньої птиці.
В результаті потрібна виробнича потужність інкубатора, яка щонайменше вдвічі перевищує необхідну, якщо не можливий ранній відбір за статтю, що дозволяє відбирати в основному тільки чоловічі або жіночі ембріони.
Відповідно, це буде мати велике значення для довкілля завдяки зменшенню кількості енергії та інших необхідних ресурсів, а у рівному ступені і задля усунення непотрібних тварин шляхом вибракування, а також для зниження стресу тварин, що недавно вилупилися, якщо спосіб був доступним на ранній стадії, що дозволило визначити стать ембріонів птахів до стадії інкубації, що також дозволило значно збільшити виробничу потужність інкубаторно-птахівничої станції.
Додатковою перевагою могло стати те, що цей спосіб також дозволяв би відбирати життєздатних ембріонів у порівнянні з незаплідненими та/або іншим чином нежиттєздатними яйцями, що ще більше підвищило б ефективність процесу вилуплення.
У літературі розкриваються різні способи, що стосуються визначень статі пташиного ембріона за допомогою виявлення деяких метаболітів в яйцях, наприклад, за допомогою ЯМР- спектроскопії, наприклад, див. М. Репу єї аїЇ., Аррі. Мадп. Незоп. (2007), 32,257-268; за допомогою аналізу НРІ С, див. Си О.-0. єї аіІ., Спіпезе доштпаї ої Апіта! бсієпсе, Мої. 7, 23-25, а також за допомогою застосування біомаркера, який специфічно зв'язує цільові молекули та який дозволяє проводити кількісну флуоресцентну мікроскопію, див., наприклад, УУО 2006/124456 для визначення присутності естрогенної стероїдної сполуки у якості маркера. Зазвичай відмічають, що стероїди є доволі великими молекулами, які насилу випаровуються.
Недолік більшості способів, згаданих вище у даному документі, полягає у тому, що вони не здатні забезпечувати неруйнівне визначення статі курки, оскільки потрібні великі кількості метаболітів, що може не дозволити ембріону існувати та повністю розвиватися після забирання 60 зразка. Крім того, для цих способів потрібне застосування обладнання, яке зазвичай не застосовується на птахофермі через вартість або складність, не кажучи вже про забезпечення відповідної продуктивності для комерційного вирощування курей.
В МО 2014/021715 розкривається спосіб неруйнівного визначення статі, стадії розвитку та/або життєздатності пташиного ембріона в яйці, що передбачає (а) виявлення щонайменше першої сполуки-маркера розвитку, вибраної з цукрів та/або амінокислот, їх попередників та метаболітів, в яйці у період часу від початку інкубації яйця до вилуплення; (Б) вимірювання кількості щонайменше першої сполуки-маркера розвитку та, що виявляють, (с) порівняння кількості з базовою лінією, встановленою для чоловічої статі та жіночої статі, стадії розвитку ембріона та/або живого та мертвого або нерозвинутого ембріона, для визначення у ембріона життєздатності, чоловічої статі або жіночої статі та/або стадії розвитку ембріона. Хоча розкритий спосіб дуже корисний для визначення статі, віку та стадії розвитку ембріона, він потребує відносно великих кількостей зразків через низьку чутливість деяких методів кількісного вимірювання. Крім того, деякі автоматизовані способи важко реалізовувати у режимі безперервного реального часу процесу вилуплення, наприклад, із застосуванням методів ядерного резонансу або методів спектрального резонансу, в том числі спектроскопії комбінаційного розсіювання світла. Інші способи, хоча і швидкі, потребують наявності відносно дорогого обладнання та/або застосування спеціальних хімікатів, таких як маркери флуоресценції, для конкретних біомаркерних молекул.
Отже, зберігається потреба у білош швидкому та більш чутливому способі неруйнівного визначення статі, а також стадії розвитку та/або життєздатності ембріона яйцекладних тварин іп омо.
Коротке розкриття даного винаходу
Тому мета даного винаходу полягає у забезпеченні способу неруйнівної ідентифікації характеристики ембріона Саїи5 даПйи5 дотевіїсив іп омо, при цьому спосіб передбачає: (а) отримання зразка матеріалу, асоційованого з яйцем, що містить ембріон, та (б) вимірювання значення оцінки на наявність та концентрацію щонайменше першого біомаркера у зразку, що вказує на характеристику ембріона, та (с) застосування порога до значення оцінки та кількості, отриманому на стадії (Б), для ідентифікації характеристики для ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією
Зо біомаркера, при цьому щонайменше перший біомаркер містить аміносполуку, що має молекулярну масу у діапазоні від 140 до 190 г/моль, та при цьому наявність та концентрація біомаркера корелює з вірогідністю розвитку ембріона у дорослу особину чоловічої статі або у дорослу особину жіночої статі.
Наступна мета полягає у забезпеченні системи, здатної виконувати аналіз яйця в режимі реального часу у віддалених місцях розташування, таких як інкубаторно-птахівничі станції або об'єкти культивування водних організмів. Ці та інші цілі вирішуються за допомогою пристрою та способу за даним винаходом.
Відповідно до наступного аспекту спосіб, що заявляється, також відноситься до множини життєздатних яєць жіночої статі, забезпечуючи відбір яєць переважно чоловічої статі або яєць переважно жіночої статі. Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до популяції молоді тварин, яку отримують способом за даним винаходом.
Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до застосування множини яєць, які отримують даним способом, для отримання продуктів харчування для тварини та/"або людини, для отримання та/(або виділення косметичних, лікарських та/або поживних сполук, для отримання метану за допомогою ферментації, для отримання вакцин та/або для отримання високоякісних добрив.
Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до системи виявлення та аналізу статі ембріонів яйцекладних тварин, що містить переважно повністю автоматизований пристрій для здійснення способів, що заявляються.
Даний винахід також відноситься до системи, в якій засіб ідентифікації статі реалізують в програмному забезпеченні на електронному пристрої, сполученому з спектроскопічною системою, та переважно в якій засіб ідентифікації містить засоби програмного забезпечення, що знаходяться у комп'ютері.
Короткий опис графічних матеріалів
Далі даний винахід описується більш докладно з посиланням на додані графічні матеріали, в яких показано переважний варіант здійснення даного винаходу. Даний винахід, однак, може бути здійснений у багатьох інших формах та не має бути обмежений варіантами здійснення, викладеними у даному документі; скоріше дані варіанти здійснення представлені для того, щоб дане розкриття було докладним та повним, а також повністю представляло обсяг даного винаходу фахівцям в даній галузі.
На фіг. 1 зображено А) модель класифікації логістичної регресії за однією ознакою, що представляє собою концентрацію 3-(2-аміноетил)сульфаніл|бутанової кислоти, з точністю більш ніж 90 95 для прогнозування статі; та В) логістична регресія за 2 ознаками, при цьому при застосуванні моделей логістичної регресії за двома біомаркерами точність може бути підвищена до 295 95 точності з дня 10.
На фіг. 2 показано спектр ГОРО біомаркера за даним винаходом в серійному тесті, автоматизованому високопродуктивному тесті. Спосіб забезпечує не тільки вимірювання наявності біомаркера, але також і абсолютної концентрації протягом менш ніж 10 секунд на окремому зразку.
На фіг. З показано хроматограми сполук з різними піковими значеннями мас, що варіюють від 220 до 145, виділеними за 850 секунд із зразків чоловічої статі (темно-сірий колір) та жіночої статі (світло-сірий колір).
Докладне розкриття даного винаходу
Якщо не зазначено інше, усі технічні та наукові терміни, що застосовуються у даному документі, мають те саме значення, що зазвичай відоме пересічному фахівцю в галузі, до якої належить даний винахід. Термінологія, що застосовується в описі даного винаходу, наводиться у даному документі виключно з метою опису конкретних варіантів здійснення та не призначена для обмеження даного винаходу.
Застосовні у даному документі терміни "пташині" та "птах" включають в себе особин чоловічої статі або особин жіночої статі будь-яких видів птахів, але головним чином охоплюють домашніх птахів, яких комерційно вирощують для яєць або м'яса. Отже, терміни "пташині" та "птах", зокрема, охоплюють червону та сіру джунглеву курку, курча, індичок, качок, гусаків, перепела, голубів, страуса, ему та фазанів.
Застосовний у даному документі термін "інкубація" відноситься до способу, яким птахи висиджують свої яйця, та до розвитку ембріона в яйці після виходу з тракту несучки. Період інкубації у даному документі відноситься до безперервного проміжку часу, протягом якого конкретне яйце піддається умовам, що імітують висиджування до вилуплення, тобто появи
Зо птахів, у тому числі будь-якій обробці або переміщенню, наприклад, з інкубатора на інкубаторно-птахівничу станцію, при умові, що розвиток птаха не припинено.
Застосовний у даному документі термін "їіп омо" відноситься до ембріонів, що містяться в яйці до вилуплення. Даний винахід може застосовуватися на практиці з птахами будь-якого типу, у тому числі без обмеження з яйцями (одомашненої) курки, індички, качки, гусака, перепела та фазана.
Застосовні у даному документі терміни "ін'єкція" та "ін'єктгування" охоплюють способи введення пристрою (як правило, подовженого пристрою) в яйце або ембріон, у тому числі способи доставляння або впорскування речовини в яйце або ембріон, способи вилучення речовини (тобто зразка) з яйця або ембріона та/або способи введення детекторного пристрою в яйце або ембріон.
Застосовний у даному документі термін "мас-спектрометрія" відноситься до аналітичної методики, яка сортує іони на підставі їх мас. Мас-спектрометрію, як правило, застосовують для хімічного аналізу у багатьох ситуаціях, та вона може бути застосована для будь-якого зразка від комплексної суміші нафтових продуктів до продуктів генної інженерії. Простіше кажучи, мас- спектр дасть картину точного хімічного складу зразка.
Дана заявка відповідно до першого аспекту відноситься до визначення однієї або декількох аміносполук, що мають молекулярну масу у діапазоні від 140 до 190 г/моль, переважно від 150 до 170 г/моль.
Заявники даного винаходу несподівано з'ясували, що специфічний метаболіт, структурний ізомер етіоніну, вказує на те, чи буде ембріон розвиватися у пташеня чоловічої статі або жіночої статі. Переважно, біомаркерна сполука характеризується формулою Н-ЗСА'НСВ"НСООН (І), в якій переважно В' являє собою СНз, Н, МН», В? являє собою СН», Н, МН», а ВЗ являє собою - (СНг)-МН», або її структурними ізомерами. Більш переважно, біомаркерна сполука характеризується формулою СеєНізМО25. Більш переважно, вона може бути вибрана з амінокислот, таких як 2-аміно-4-етилсульфанілбутанова кислота (що також називається етіоніном) або її структурні ізомери, у тому числі без обмеження 4-(метилсульфаніл)ізовалін, 4- (метилсульфаніл)ізовалін (також відомий як 2-аміно-2-метил-4-(метилсульфаніл)бутанова кислота), М- або ізопропілцистеїн, 3З-(метил-сульфаніл)валін, 4-(метилсульфаніл)валін, З-метил-
З-сульфаніл-ізовалін, 4-(метилсульфаніл)ізовалін, 2-аміно-3-метил-4-метилсульфаніл-масляна бо кислота, 5-(метилсульфаніл)норвалін, 2-аміно-3-метил-3-сульфанілпентанова кислота, метил-3-
сульфаніл-валінат, метилсульфонію метіонін, М-метил-О-метіонін; 5-аміно-6- сульфанілгексанова кислота або подібні; зі складних ефірів амінокислот, таких як метил-2- аміно-4-метилсульфаніл)бутаноат (також відомий як метилметіонінат) або його структурні ізомери, такі як етилметил-цистеїнат, ізопропіл-цистеїнат, М-пропілцистеїнат, або споріднених сполук, таких як 2-((2-гідроксиетил)сульфаніл|-М-метилпропанамід; етилгомоцистеїнат, 2- ізопропіл-1,2-тіазолідин-1,1-діоксид, 1-аміно-2,2-діетоксіетан-1-тіон, 3-МК2- гідроксіетил)усульфаніл|-М-метилпропанамід, пропіл-2-аміно-3-сульфанілпропаноат, 2- (метиламіно)-4-(метилсульфаніл)бутанова кислота, 2-К(2-аміноетил)сульфаніл|-2- метилпропанова кислота, 3-(2-аміноетил)сульфаніл|-ае-метилпропанова кислота, /3-М2- аміноетил)сульфаніл|бутанова кислота, 4-(2-аміноетил)сульфанілі|бутанова кислота, 2-аміно-3- (пропілсульфаніл)пропанова кислота, 2-аміно-3-(пропан-2-ілсульфаніл)пропанова кислота та 3- (2-аміноетил)сульфаніл|бутанова кислота. Сполуки або ізомери можуть бути рацемічними або можуть містити енантіомери або стереоізомери у відповідних відношеннях та кількостях.
Переважно, сполука характеризується молекулярною формулою СеНізМО25 та моноїзотопною масою Му 163,0690. На даний час її, певно, ідентифіковано як (3-((2- аміноетил)сульфаніл|бутанова кислота), що характеризується структурою згідно з загальною формулою І: і - ТУ и в ().
Заявники даного винаходу з'ясували, що концентрація сполуки (І) або структурних ізомерів, які можуть вважатися непротеїногенною амінокислотою, в алантоїсній рідині протягом періоду інкубації може бути успішно застосована для визначення статі ембріона в яйці, з дуже високою вірогідністю. У якості додаткової переваги, цей біомаркер порівняно легко екстрагується та/або випаровується, та, тому, його можна аналізувати відносно легко у порівнянні, наприклад, зі стероїдними сполуками.
Стадія (а) передбачає отримання зразка матеріалу, асоційованого з яйцем, що містить ембріон.
Способи та пристрій згідно з варіантами здійснення даного винаходу можуть бути застосовані для ідентифікації однієї або декількох характеристик яйця у будь-який момент часу протягом періоду ембріонального розвитку, що також називається періодом його інкубації.
Зо Варіанти здійснення даного винаходу не обмежуються конкретним днем протягом періоду ембріонального розвитку.
Спосіб за даним винаходом переважно передбачає (аї) забезпечення зразка, що містить рідину яйця; та (а2) отримання спектра зразка. Необов'язкова стадія (а3) усуває переважно мутність зразків придатним способом, таким як ультрафільтрація або центрифугування. Як викладено вище, тоді як інвазивні способи дозволяють безпосередньо відбирати зразки та піддавати відібрану рідину аналізу, переважно, щоб аналіз проводився неінвазивно, по причині ефективності такого способу аналізу та того факту, що шкаралупа яйця та його оболонки залишаються неперфорованими. Будь-який відповідний спосіб може бути застосований для проведення такого неінвазивного аналізу.
Якщо застосовується неінвазивний спосіб, то термін "рідина" у даному документі може відноситися до летких сполук, які можуть бути видалені з яйця без проколу яєчної шкаралупи.
Це можна успішно виконати шляхом поміщення яйця до камери виявлення, необов'язково під невеликим тиском, та шляхом подавання летких сполук, що вивільняються, для відповідного способу ідентифікації та кількісного визначення. У даному випадку можуть застосовуватися зазначені вище способи мас-спектроскопії (МС), у тому числі із застосуванням спектрометра іонної рухливості (ІМ5).
Якщо аналіз виконують інвазивно, то він зазвичай передбачає виділення зразка яєчного матеріалу. Зразок переважно відбирають з ембріональної рідини, переважно з алантоїсної рідини у випадку видів птахів, оскільки це найменш ймовірно зашкодить ембріону. Алантоїсна рідина зазвичай є екскреторним середовищем для азотовмісних метаболітів пташиного ембріона.
Придатні способи та пристрій для проколу яєць та інвазивного відбору зразків матеріалу яйця розкриті, наприклад, в Ше-А-20070137577, МО-А-00/22921 або М/О-А-99/34667. Взятий таким чином зразок потім переважно піддають придатному протоколу для забезпечення виявлення маркерів розвитку та аналізу відносних та/або абсолютних кількостей присутніх маркерів розвитку.
Алантоїсна рідина починає формуватися приблизно в день З інкубації, як описано в
Натрбригдег, М апа Натійоп, НІ. (1951). "А 5еїгівв5 ої погтаї 5іадез іп Те демеІортепі ої Ше спіск етбргуо". Уоштаї ої Могрпоіоду 88 (1): 49-92. Там зазначається, що алантоїс був помітний через 65 годин після інкубації у вигляді короткої товстостінної кишені, ще не везикулярним. Через 72 години алантоїс став везикулярним, змінного розміру; в середньому за розміром середнього мозку, що вказує на те, що алантоїс та алантоїсна рідина присутні на день 3. В результаті, спосіб за даним винаходом може бути застосований на день 3, якщо необхідно дослідити алантоїсну рідину.
Алантоїс досягає максимального об'єму приблизно на день 13 інкубації, а потім зменшується в об'ємі у міру продовження інкубації через втрату вологи та всмоктування рідини, але все ще наявний в значних об'ємах надень 18 інкубації.
Алантоїсна рідина відокремлюється від яєчної шкаралупи внутрішньою та зовнішньою підшкаралупними оболонками та хоріоналантоїсними оболонками. Хоча алантоїсна рідина охоплює усю периферію заплідненого яйця, алантоїсна рідина, як правило, накопичується у верхній частині яйця безпосередньо під оболонками, розташованими над повітряною камерою.
Накопичення алантоїсної рідини у верхній частині яйця відбувається під дією сили тяжіння та зміщення щільним ембріоном і жовтковим мішком. Спроба акуратно відібрати алантоїсну рідину через верхню частину яйця, коли яйце знаходиться у вертикальному положенні, може бути утруднена через мінливість повітряного простору у яєць. Гравітація може бути застосована для об'єднання алантоїсної рідини в обмеженому місці. Коли яйце повертається навколо своєї поздовжньої осі, алантоїсна рідина буде накопичуватися на верхній стороні яйця, безпосередньо під шкаралупою. Розташування яйця по його поздовжній осі забезпечує застосовність алантоїсної рідини для вилучення зразка.
Екстракція матеріалу, такого як алантоїсна рідина, з яєць може бути здійснена різними шляхами, у тому числі проколом яєчної шкаралупи та введенням канюлі для відбору зразків крізь оболонки. Потім зразок відібраної рідини може бути вилучений, при цьому оболонку та/або шкаралупу функціонально закупорюють придатним герметиком або забезпечують самостійне закупорювання.
Як зазначено вище, будь-який придатний спосіб може бути застосований для здійснення неінвазивного аналізу. Згідно з іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу неінвазивний спосіб може передбачати твердофазну мікроекстракцію (5РМЕ) в сукупності з придатним аналітичним пристроєм. 5МРЕ відноситься до методики твердофазної екстракції відбору зразків, яка передбачає застосування волокна, вкритого екстрагувальною фазою, що може бути рідкою (полімер) або твердою (сорбент) та яка екстрагує різні види аналітів (у тому числі як леткі, так і нелеткі) з різних видів середовищ, які можуть бути у рідкій або газовій фазі.
Кількість аналітів, що екстрагуються волокном, пропорційна їх концентрації у зразку у випадку досягнення рівноваги або у випадку короткотривалої передрівноваги за допомогою конвекції або перемішування. Він може бути переважно суміщений з ІМ5, так що можуть бути безпосередньо виміряні леткі речовини.
Хоча в декількох публікаціях, як правило, розкриваються застосування неінвазивних способів, наприклад, в 05-А-2011/144473 та 05-А-7950349, ці публікації лише невизначено описують загальні спектри випромінювання, що на практиці не дозволяє вибрати стать ембріона. Спосіб за даним винаходом відрізняється, зокрема, від розкритих способів тим, що визначається наявність специфічних компонентів в яйці, що може бути переважно здійснено із застосуванням вторинних похідних спектрів, які дозволяють вибірково шукати абсолютні та відносні кількості однієї або декількох сполук-маркерів розвитку.
Яйця, що містять ембріони чоловічої статі та жіночої статі, демонструють відмінності у хімічному складі на молекулярному рівні. На мікроскопічному рівні ембріони також демонструють відмінності у розмірі, формі та клітинній морфології.
Спосіб за даним винаходом успішно забезпечує визначення статі ембріона. Переважно, визначення виконують у період від 1 до 15 днів, більш переважно від 2 до 14, ще більш переважно від З до 13 та ще більш переважно від 4 до 12 днів після початку інкубації, наприклад, виконують стадію а) переважно у період часу від 6 до 12 днів після початку інкубації яйця.
Це дозволяє запобігти витрат на інкубацію яєць, які або є нежиттєздатними, та/або мають небажану стать. Крім того, може бути визначена фактична стадія розвитку яйця. Для видів з більш коротким або більш тривалим часом інкубації, ніж у домашньої курки, можуть бути застосовані інші придатні періоди.
Зразок може являти собою будь-яку біологічну речовину, що становить інтерес, але бо переважно біологічну тканину та переважно біологічну рідину, таку як кров або плазма.
Стадія (Б) передбачає вимірювання значення оцінки на наявність та концентрацію щонайменше першого біомаркера у зразку, що вказує на характеристику ембріона.
Спосіб за даним винаходом заснований на кореляції спостережуваних масових сигналів з еталонними масами і спектрами відомих біомаркерів. Еталонні дані переважно зберігаються на комп'ютерному сервері, що дозволяє виконувати усю процедуру під керуванням комп'ютера.
Сигналі корелюють з еталонними стандартами шляхом порівняння, наприклад, (із застосуванням обчислювальних функцій, як описується в даному винаході.
Переважно, сигнали характеризують як "позитивні" або "негативні" в залежності від того, чи досягнуто пороговий рівень подібності; сигнали, які є негативними та не досягають порогового рівня подібності, у способі відкидаються, тоді як ті сигнали, що є позитивними, зіставляються з біомаркерами та забезпечують діагностику наявності зазначених біомаркерів у біологічному зразку.
У випадку застосування стандартів оцінка сигналів біомаркера може бути розрахована по відношенню між сигналом біомаркера, що присутній у зразку, та внутрішнім стандартом, доданим до зразка. Декілька біомаркерів можуть бути проаналізовані однаково, що приводить до отримання остаточного оціночного коефіцієнта.
Переважно, один або декілька внутрішніх стандартів еталонних біомаркерів, мічених атомної міткою, додають до зразка перед аналізом за допомогою мас-спектрометрії. Це дозволяє визначати і оцінювати абсолютну інтенсивність сигналу шляхом вимірювання інтенсивності сигналу біомаркера і порівняння її з інтенсивністю сигналу одного або декількох відомих внутрішніх стандартів. Такі стандарти, наприклад, можуть бути помічені ізотопом, що робить показання аналізу дуже точними, а також вигідними з точки зору визначення абсолютної кількості. Вбудовані послідовності калібрування у скринінгу дозволять виміряти абсолютні рівні біомаркерів у зразку.
Спосіб за даним винаходом переважно може бути виконаний двома шляхами: з використанням внутрішніх стандартів для забезпечення еталона для кількісного визначення інтенсивності сигналу і без таких стандартів. Таким чином, згідно з одним варіантом здійснення один або декілька внутрішніх стандартів додають до зразка перед аналізом за допомогою Мас- спектрометрії. Переважно, внутрішні стандарти мітять. Переважно, абсолютна інтенсивність
Зо сигналу для кожного сигналу біомаркера потім може бути оцінена шляхом вимірювання інтенсивності сигналу біомаркера і порівняння з інтенсивністю сигналу одного або декількох відомих внутрішніх стандартів. При альтернативному здійсненні зразок обробляють без додавання внутрішніх стандартів. Згідно з таким варіантом здійснення відносну інтенсивність сигналу оцінюють шляхом вимірювання відносини між інтенсивностями сигналу окремого біомаркера в зразку і інтенсивністю сигналу стандарту для групи зразків.
Переважно, вибраною характеристикою може бути ймовірна життєздатність або нежиттєздатність ембріона для досягнення повного росту для вилуплення. Додатковою переважною вибраною характеристикою є прогноз вірогідної стадії розвитку та часу, необхідного для розвитку ембріона для вилуплення в умовах інкубації. Переважно, спосіб передбачає застосування одного або декількох з методу магнітно-резонансної візуалізації, методу спектрального резонансу; аналітичного хроматографічного методу в сукупності 3 одним або декількома придатними детекторами, флуоресцентної спектроскопії та/або аналітичних способів, що передбачають біомаркерні селективні реагенти.
Ідентифікація та кількісне визначення одного або декількох біомаркерів можуть бути здійснені будь-яким придатним способом. Переважно, це може бути здійснено методом магнітно-резонансної візуалізації у тому числі методами ядерного резонансу; методами спектрального резонансу, у тому числі ШМ/МІ5, інфрачервоною або спектроскопією комбінаційного розсіювання; аналітичними способами, такими як СС або НРІ С, в сукупності з придатними детекторами; флуоресцентною спектроскопією; ферментними імуносорбентними аналізами, у тому числі вологими та сухими способами, наприклад, із застосуванням способу з імпрегнованим субстратом, та із застосуванням отриманих придатним чином селективних аптамерів або подібних селективних реагентів.
Як правило, також можуть бути застосовані кількісні методи спектрального резонансу, у тому числі інфрачервоної або спектроскопії комбінаційного розсіювання, переважно із застосуванням вторинних спектрів для визначення наявності та абсолютних, та/або відносних кількостей маркерів розвитку, що присутні в яйці. Хоча в деяких публікаціях, як правило, розкриваються застосування неінвазивних способів, наприклад, в Ш5-А-2011/144473 та О5-А- 7950349, ці публікації лише невизначено описують загальні спектри випромінювання, що на практиці не дозволяє вибрати стать ембріона. Спосіб за даним винаходом відрізняється, бо зокрема, від розкритих способів тим, що визначається наявність специфічних компонентів в яйці, що може бути переважно здійснено із застосуванням вторинних похідних спектрів, які дозволяють вибірково шукати абсолютні та відносні кількості однієї або декількох сполук- маркерів розвитку. Зокрема, диференційна інфрачервона спектроскопія на підставі перетворення Фур'є (ЕТІВ) та Фур'є-спектроскопія комбінаційного розсіювання або їх комбінація можуть бути переважно застосовані для досягнення необхідної точності та відтворюваності, тоді як методи ядерного магнітного резонансу можуть бути прийнятним чином використані для визначення природи маркерів розвитку та для встановлення базової лінії системи калібрування.
Спосіб за даним винаходом переважно забезпечує визначення життєздатності, та/або статі ембріона, та/або переважно стадій розвитку від початку інкубації яйця до вилуплення. Згідно з переважним варіантом здійснення зразок може бути аналізовано будь-яким мас- спектрометричним способом, придатним для виявлення та отримання спектра, який ідентифікує та визначає абсолютну та відносну кількість біомаркерів, що присутні у зразку. Переважно, зразок може бути аналізований за допомогою способу, який забезпечує аналіз у режимі реального часу протягом менш ніж 20 секунд, більш переважно менш ніж 15 секунд на зразок.
Приклади включають в себе пряму інфузію із застосуванням статичних принципів наноелектророзпилення, аналіз введення у потік або введення у потік зі збагаченням зразка.
Переважно, мас-спектрометричний аналіз включає в себе мас-спектрометрію з електророзпилювальною іонізацією (Е5І), часопролітну мас-спектрометрію з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МАІГОІ-ТОЕ), часопролітну мас-спектрометрію або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕЇ 0БІ-ТОЕ). Мас-спектрометр переважно працює в тандемному та/або оглядовому режимі.
Переважно, зразок може бути оброблений перед мас-спектроскопічним аналізом так, що обробка зразка включає в себе відокремлення зразка за допомогою твердофазної екстракції (РЕ), газової хроматографії, одно- або багатофазної рідинної хроматографії високого тиску (НРІ С).
У якості альтернативи, якщо біомаркерні сполуки можуть бути виміряні зовні, може бути здійснений прямий неінвазивний аналіз за допомогою прямих неінвазивних вимірювання на цілих яйцях із застосуванням, наприклад, технології ІМ5, викладеної вище.
Переважні способи мас-спектрометричної характеристики біомаркерів передбачають
Зо іонізацію лазерною десорбцією із застосуванням матриці (МАЇОЇ) та іонізацію електророзпилюванням (ЕбІ), будь-яка з яких переважно може бути об'єднана з часопролітним (ТОЕ) або іншими типами мас-спектрометричних датчиків для визначення маси та/або паттерна фрагментації біомаркера. Переважно, мас-спектрометрія може бути застосована у тандемі з хроматографічною та іншими методиками розділення у даному документі. МАГ ОЇ функціонує шляхом впливу імпульсів лазера на зразок. Дана обробка випаровує та іонізує зразок. Потім визначають молекулярні маси (маси) заряджених іонів на аналізаторі ТОРГ. У цьому пристрої електричне поле прискорює заряджені молекули у напрямку детектора, та за відмінностями в тривалості часу, який потрібний іонізованим фрагментам для досягнення детектора, тобто їх часу прольоту, виявляють молекулярні маси біомаркерів, при цьому менші сполуки досягають детектора раніше. Даний спосіб генерує профілі маси зразка, тобто профілі молекулярних мас та кількостей сполук у суміші. Ці профілі можуть потім використовуватися для ідентифікації відомих біомаркерів з баз даних біомаркерів.
Завдяки інтерфейсу Е5БІ-М5 з рідинною хроматографією (І1С/М5/М5) сполуки, що елююються, з колонки І С вводять у джерело іонів мас-спектрометра. Напругу подають на тонку голку. Потім голка розпилює краплини у мас-спектрометричний аналізатор, де краплини випаровуються, та іони біомаркера вивільняються відповідно до різних зарядових станів, які фрагментовані та за якими можна визначити склад. У якості альтернативи, 5РЕ (твердофазна екстракція) або газова хроматографія можуть бути зв'язані з мас-спектрометром.
Зокрема, 5БРЕ/М5/М5 знайшла застосування для автоматизованого та високопродуктивного промислового застосування способу за даним винаходом, такого як із застосуванням пристрою
Адііепі Варіайте М5 (Наріаїйге є зареєстрованим товарним знаком компанії Адіїепі Іпс.); джерела іонів ОТО (абсорбційної спектроскопії на основі діодного лазера, що настроюється) (ОТО є зареєстрованим товарним знаком компанії РНпуїкопісзв Іпс.) Рпуїгопісв.
Наступний пристрій, який знайшов застосування, являє собою калібрований спектрометр іонної рухливості (ІМ5), заснований на рухливості іонів в газовій фазі в електричному полі. У даному випадку іони речовини, що генеруються в результаті часткового розряду, УФ-лампи або джерела Мі, всередині так званої іонізаційної камери відокремлюються один від одного на шляху через дрейфову трубку відповідно до їх молекулярної маси та/або геометричної структури. Потім пристрій вимірює характерні часи дрейфу іонів через цю трубку, що дозволяє швидко виявляти, ідентифікувати, а також кількісно визначати речовину з надзвичайно високою чутливістю та протягом декількох секунд на зразок.
Переважно, мас-спектрометричний аналіз передбачає мас-спектрометрію З електророзпилювальною іонізацією (Е5І), часопролітну мас-спектрометрію з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МАІГОІ-ТОЕ), часопролітну мас-спектрометрію або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕ 0БІ-ТОР), 5РЕ/М5/М5, джерело іонів ОТО (абсорбційну спектроскопію на основі діодного лазера, що настроюється) та/або застосування датчика рухливості іонів (ІМ5).
Мас-спектрометрична система переважно являє собою М5 з електророзпилювальною іонізацією (ЕБІ), часопролітну М5 з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МАЇ ОІ-
ТОР) або часопролітну М5 або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕ! 0БІ-ТОЕ) або абсорбційну МО на основі діодного лазера, що настроюється (І0І0). Зокрема, 5РЕ/МБ/М5 знайшла застосування для автоматизованого та високопродуктивного промислового застосування способу за даним винаходом, такого як із застосуванням пристрою Ааіепі
Варіатге М5 (Раріайте є зареєстрованим товарним знаком компанії Адіїіепі Іпс.); джерела іонів
ГОТО (абсорбційної спектроскопії на основі діодного лазера, що настроюється) (1010 є зареєстрованим товарним знаком компанії Рпуїкопісзв Іпс.) Рпуїгопісв.
Наступний пристрій, який знайшов застосування, являє собою калібрований спектрометр іонної рухливості (ІМ5), заснований на рухливості іонів в газовій фазі в електричному полі. У даному випадку іони речовини, що генеруються в результаті часткового розряду, УФ-лампи або джерела Мі, всередині так званої іонізаційної камери відокремлюються один від одного на шляху через дрейфову трубку відповідно до їх молекулярної маси та/або геометричної структури. Потім пристрій вимірює характерні часи дрейфу іонів через цю трубку, що дозволяє швидко виявляти, ідентифікувати, а також кількісно визначати речовину з надзвичайно високою чутливістю та протягом декількох секунд на зразок.
Переважно, зразок може бути оброблений перед аналізом. Переважно, обробка зразка включає в себе відокремлення зразка за допомогою твердофазної екстракції (РЕ), газової хроматографії, одно- або багатофазної рідинної хроматографії високого тиску (НРІ С).
Переважно, один або декілька внутрішніх стандартів еталонних біомаркерів додають до зразка
Зо перед аналізом. Переважно, абсолютну інтенсивність сигналу оцінюють шляхом вимірювання інтенсивності сигналу біомаркера та порівняння її з інтенсивністю сигналу одного або декількох відомих внутрішніх стандартів. Переважно, спосіб є повністю автоматизованим.
Переважно, оглядають множину яєць на предмет однієї або декількох ембріональних характеристик.
Переважно, спосіб додатково передбачає визначення того, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі, або життєздатним та жіночої статі, або нежиттєздатним, та відокремлення множини життєздатних яєць чоловічої статі від множини життєздатних яєць жіночої статі, та одного або декількох нежиттєздатних яєць.
Переважно, спосіб додатково передбачає ідентифікацію щонайменше одного біомаркера з ряду біомаркерів зі зразка та порівняння концентрації щонайменше одного біомаркера із значеннями того самого біомаркера в окремих курячих ембріонах з відомими характеристиками, при цьому більш висока або більш низька концентрація у відношенні порога одного або декількох біомаркерів є показником того, чи є ембріон чоловічої статі або жіночої статі, життєздатним або нежиттєздатні, та/або показником стадії розвитку ембріона.
Стадія (с) передбачає застосування порога до значення оцінки та кількості, отриманого на стадії (Б), для ідентифікації характеристики для ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією біомаркера. Переважно, стадія (с) додатково передбачає (ї) кореляцію кожного відповідного сигналу або сигнатури біомаркера з еталонним біомаркером шляхом зіставлення спектра кожного кореляційного сигналу з очікуваним спектром кореляційного еталонного біомаркера із застосуванням міри подібності для визначення щонайменше одного позитивно кореляційного сигналу; (ії) вимірювання інтенсивности кожного позитивно кореляційного сигналу та оцінки його абсолютної та/або відносної інтенсивності сигналу; та (ії) застосування порога до значення оцінки, отриманої з функції подібності, для визначення характеристики ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією коригованого біомаркера.
Заявники даного винаходу з'ясували, що наявність 3-(2-аміноетил)сульфаніл|бутанової кислоти у кількості 50 нг/мл або більше в алантоїсній рідині в день 7, 8 або 9 корелює з ембріоном жіночої статі, тоді як наявність біомаркера, що присутній при менш ніж 50 нг/мл корелює з ембріоном чоловічої статі. Переважно, 3-(2-аміноетил)сульфаніл|бутанова кислота присутня у кількості від 0,1 до 45 нг/мл, більш переважно у кількості від 1 до 40 нг/мл в яйцях бо чоловічої статі в день 7, 8 або 9. Переважно, 3-(2-аміноетил)сульфаніл|бутанова кислота присутня у кількості від 50,1 до 150 нг/мл, більш переважно у кількості від 55 до 140 нг/мл в яйцях жіночої статі в день 7, 8 або 9.
Тоді як цей єдиний біомаркер вже може давати майже повну визначеність бажаної характеристики, щонайменше перший та другий біомаркер або навіть більше біомаркерів переважно можуть бути виявлені та аналізовані одночасно. Абсолютні та/або відносні кількості щонайменше першого та другого маркерів потім можуть бути застосовані для визначення однієї або декількох характеристик навіть з підвищеною вірогідністю.
Даний винахід також переважно відноситься до способу селективної інкубації пташенят видів яйцекладних зі специфічною характеристикою, що передбачає забезпечення множини яєць від видів та піддавання яєць способу, що розкривається у даному документі, для визначення характеристики ембріона та відбору яєць з бажаною характеристикою з формуванням відібраної множини яєць, та інкубацію відібраних яєць до вилуплення одного або декількох з пташенят.
Даний винахід також переважно відноситься до системи виявлення та аналізу статі ембріона видів яйцекладних, що містить: (ї) систему забору зразків для взяття зразків з окремих яєць; (ії) аналітичну систему для збору спектрів; (ії) засіб ідентифікації статі тал"або життєздатності, що програмним чином ідентифікує сигнали, асоційовані з одним або декількома біомаркерами з одного або декількох зразків, які аналізують аналітичною системою, при цьому засіб додатково виконує аналіз, порівнюючи сигнали зі збереженою бібліотекою даних зареєстрованих контрольних спектрів зразка та/або з внутрішнім стандартом, для ідентифікації ембріональної характеристики; та (м) засіб виведення, що зв'язує інформацію однієї або декількох ембріональних характеристик зі зразком та/або яйцем, що аналізують. Переважно, засіб ідентифікації реалізують в програмному забезпеченні на електронному пристрої, сполученому з аналітичною системою.
Даний винахід також переважно відноситься до застосування множини яєць, що отримують способом за даним винаходом, для отримання продуктів харчування для тварини та/або людини, для отримання та/або виділення косметичних, лікарських та/або поживних сполук, для
Зо отримання метану за допомогою ферментації та/або для отримання високоякісних добрив.
Застосовний у даному документі термін "алантоїсна рідина" охоплює алантоїсну рідину з наявністю або без наявності інших яєчних матеріалів, отриманих з пташиних яєць. Наприклад, термін "алантоїсна рідина" може включати в себе суміш крові та алантоїсної рідини. Варіанти здійснення даного винаходу не обмежуються вилученням матеріалу з алантоїсної рідини або з областей поблизу верхньої поверхні яйця. Видалення матеріалу з алантоїсної рідини, як описується в даному винаході, представлено виключно у якості одного з прикладів можливих варіантів здійснення даного винаходу. Різні матеріали, у тому числі без обмеження амніон, жовток, шкаралупа, альбумін, тканина, оболонка та/або кров, можуть бути вилучені з яйця та проаналізовані з проведенням спектрофотометричного аналізу для ідентифікації статі ембріона, як описується нижче.
При необхідності матеріал може бути вилучений з яєць, що мають практично будь-яку орієнтацію. Застосовний у даному документі термін "задане місце розташування" означає фіксоване положення або глибину всередині яйця. Наприклад, пристрій може бути введено в яйце на фіксовану глибину та/або в фіксоване положення в яйці. Згідно з альтернативними варіантами здійснення ін'єкція може бути здійснена на підставі інформації, отриманої з яйця, наприклад, відносно положення ембріона або субгермінальної порожнини всередині яйця.
В способі за даним винаходом маркери розвитку можуть переважно аналізуватися інвазивно або неінвазивно.
Переважно, визначення виконують у період від 1 до 15 днів, більш переважно від 2 до 14, ще більш переважно від З до 13 та ще більш переважно від 4 до 12 днів після початку інкубації, наприклад, виконують стадію а) переважно у період часу від 6 до 12 днів після початку інкубації яйця. Крім того, може бути визначена фактична стадія розвитку яйця.
Переважно визначення характеристики ембріона за даним винаходом виконують як неруйнівний спосіб, тобто такий, що дозволяє тестованим таким чином ембріонам рости, якщо це потрібно, або піддавати їх подальшим стадіям, таким як іп омо отримання вакцин, при умові, що ембріон є життєздатним, або для вирощування яєць чоловічої статі для виключно чоловічої популяції курей, наприклад, для виробництва м'яса, або для застосування курчат, яких виростили таким чином, в інших цілях.
Термін "порівняння спектрів" переважно може включати в себе одноваріантний або бо переважно багатоваріантний аналіз виміряних спектрів та визначення асоціації пташиного ембріона з певною популяцією. Стадія може передбачати визначення наявності певних піків сигналу у спектрі за допомогою багатоваріантного статистичного аналізу спектральних даних.
Програма багатоваріантного статистичного аналізу переважно включає в себе програму аналізу головних компонентів та/або програму регресійного аналізу часткових найменших квадратів.
Таким чином, даний винахід також відноситься до способу, пристрою та системи для визначення статі та/або життєздатності ембріона птахів іп омо, що включає в себе багатоваріантну програму статистичного аналізу, а також до здійснюваного мікропроцесором способу для визначення цього. Переважно, стадія (Б) додатково включає в себе стадію нормалізації ефектів інтенсивності через різниці концентрацій між будь-якими двома зразками.
Переважно, це виконують із застосуванням дискримінаційного аналізу часткових найменших квадратів (РІ 5-БА). Спосіб переважно передбачає математичну обробку даних міченої сполуки та передбачає багатоваріантний аналіз, такий як РСА (аналіз головних компонент), переважно з наступним контрольованим аналізом, більш переважно Рі 5-БА (дискримінаційним аналізом часткових найменших квадратів) або навіть більш переважно з ортогональним РІ 5БОА або з аналогічними придатними статистичними підходами. Стадія зіставлення із зразком у способі, що заявляється, буде ідентифікувати певну міру подібності. Із застосуванням міри подібності підтверджують коректну структуру біомаркера. Це підтвердження виконують за допомогою спектральної відповідності. Спектральну відповідність виконують шляхом порівняння спектрів зразка та еталонних спектрів у базі даних. Для позитивної ідентичності на цій стадії потрібна відповідна кореляція, щоб підтвердити точність визначення. Придатні порогові значення та міри подібності будуть очевидні для фахівців в даній галузі. Даний спосіб намагається зменшити великі об'єми даних до керованого розміру та застосувати статистично керовану модель для визначення прихованих змінних, що вказують на приховані відносини між даними, що спостерігаються.
Засіб ідентифікації характеристики потім фільтрує дані зразка, які будуть ідентифікувати кластери, що становлять інтерес, серед зразків. Кластери представляють подібності серед зразків та застосовуються для ідентифікації профілів статі. Переважно, аналіз включає в себе аналіз головних компонент (РСА) та РІ 5-ЮА. РСА використовує математичні алгоритми для визначення різниць та подібності у наборі даних. РСА трансформує число можливих споріднених змінних на менше число неспоріднених змінних, які називаються головними компонентами. Перша головна компонента враховує як можна більшу мінливість даних. Кожна додана компонента намагається врахувати як можна більшу частину мінливості, що залишилася, в даних. Зібрані дані можуть бути впорядковані в матрицю, і РСА виконується для "власних значень" та "власних векторів" квадратно-симетричної матриці з сумами квадратів та перехресних добутків. Власний вектор, асоційований з найбільшим власним значенням, має той самий напрямок, що і перша головна компонента. Власний вектор, асоційований з другим найбільшим власним значенням, визначає напрямок другої головної компоненти. Сума власних значень дорівнює трасуванню квадратної матриці, а максимальне число власних векторів дорівнює кількості рядків (або стовпчиків) цієї матриці. Після визначення можна будувати екранні графіки розрахованих власних значень. Фахівцям в даній галузі буде зрозуміло, що ряд різних алгоритмів можна використовувати для розрахунку власних значень та власних векторів.
Дані відображають із застосуванням двох графіків: ї) графіка оцінок, який показує кластеризацію групи, та ії) графіка навантажень, на якому спектральні дані, що відповідають за кластеризацію групи, ідентифікуються як такі, що знаходяться на найбільшій відстані від джерела.
Спосіб за даним винаходом переважно може визначати, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі або життєздатним та жіночої статі, та відділяти множину життєздатних яєць чоловічої статі від множини життєздатних яєць жіночої статі та множини нежиттєздатних яєць, проводити відбір переважно яєць чоловічої статі, або переважно яєць жіночої статі, або переважно нежиттєздатних яєць. При необхідності відібрані життєздатні яйця жіночої статі або чоловічої статі можуть бути піддані способу інкубації та вилуплення для формування популяції тварин переважно жіночої статі або чоловічої статі.
Яйця можуть бути використані для різних застосування, наприклад, для отримання вакцин, шляхом переважно ін'єктгування вірусу або подібного вірусу матеріалу у кожне яйце, ідентифіковане як таке, що містить живий ембріон та має чоловічу стать або жіночу стать. Потім після відповідної інкубації ін'єктованих таким чином яєць вакцину або матеріал на основі вакцин можна виділяти з інкубованих яєць. Додатковий переважний варіант здійснення даного винаходу відноситься до способу виявлення наявності речовини у зразку рідини яйця, при цьому може бути достатньо зразка, як правило, у діапазоні від 0,1 до 35 мкл.
Міра подібності переважно передбачає кореляційний індекс утримування та паттерн бо фрагментації, асоційований з позитивно кореляційним сигналом.
Далі статистично значуща подібність може бути виявлена і зареєстрована як релевантні біомаркерні ідентичності або множинні біомаркерні ідентичності. Визначення статистично значущих послідовностей передбачає використання баз даних, а також алгоритмів, розроблених для задоволення вимог способу.
Це може передбачати, зокрема, при визначенні застосовності біомаркера для нового застосування, контрольований багатоваріантний аналіз, переважно дискримінаційний аналіз часткових найменших квадратів РІ 5-БА або ортогональний дискримінаційний аналіз часткових найменших квадратів для даних.
Переважно, характеристика, яка належить визначенню, включає в себе стать, вік, стадію розвитку та/або життєздатність ембріона в яйці. Для промислового застосування множину яєць перевіряють на предмет однієї або декількох ембріональних характеристик.
Спосіб за даним винаходом переважно повністю автоматизований, що забезпечує аналіз біомаркерів у зразку, асоційованому з яйцем, який є автоматичним та точним. Таким чином, аналіз заснований на мас-спектрометрії для ідентифікації біомаркерів. Переважно, спосіб фільтрує і скринує масу та ідентичність наборів даних, які застосовані на кожному з унікальних властивостей заряду, маси та паттерна фрагментації асоційованих з певними ідентифікованими біомаркерами у зразку.
Шляхом зіставлення даних аналізу міченої сполуки з бібліотекою зразків відомої статі може бути додатково поліпшена вибірковість визначення статі. Спосіб за даним винаходом, крім того, переважно передбачає визначення того, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі або життєздатним та жіночої статі, а також здійснення відокремлення множини життєздатних яєць чоловічої статі від множини життєздатних яєць жіночої статі, проведення відбору переважно яєць чоловічої статі або переважно яєць жіночої статі. Відібрані таким чином життєздатні яйця жіночої статі або чоловічої статі переважно можуть бути піддані способу інкубації та вилуплення для формування популяції тварин переважно жіночої статі або чоловічої статі.
Спосіб за даним винаходом дозволяє одночасно аналізувати сотні або тисячі яєць та сотні або тисячі біомаркерів у зразку, взятому з кожного яйця. Спосіб заснований на базі даних біомаркерів, що, як було показано, асоційована з характеристикою, яка включає в себе мас-дані
Зо та спектральні дані для кожного з біомаркерів, та дозволяє точно ідентифікувати біомаркери за допомогою відповідного програмного забезпечення в даному зразку.
Крім того, база даних може бути створена для певних видів шляхом скринінгу біомаркерів, присутніх у зразку, та усунення небажаних сигналів на підставі індексу часу утримування, який корелює з часом потрапляння сполуки у детектор маси. Отже, багато послідовностей можна проаналізувати за лічені хвилини, та дані біомаркери можуть бути ідентифіковані з високою вірогідністю. Таким чином, спосіб є автоматизованим, високопродуктивним, може використовуватися відносно некваліфікованими фахівцями і, тому, підходить для застосування у віддалених місцях розташування, наприклад, на інкубаторно-птахівничих станціях та курячих або рибних фермах.
Зразок може бути піддано аналізу мас без процедур попереднього розділення. Згідно з таким варіантом здійснення зразок переважно аналізують шляхом безпосередньої інфузії із застосуванням, наприклад, статичних принципів наноелектророзпилення, аналізу введення в потік або введення в потік із збагаченням зразка.
Переважно, зразок обробляють перед аналізом мас, переважно для відділення компонентів зразка перед завантаженням їх у мас-спектрометр. Наприклад, обробка зразка включає в себе відокремлення зразка за допомогою одно- або багатофазної рідинної хроматографії високого тиску (НРІ С), газової хроматографії (СС) або твердофазної екстракції (РЕ).
Мас-спектрометрична система переважно являє собою М5 З іонізацію електророзпилюванням (ЕбІі), часопролітну М5 з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МА 0БІ-ТОЕ) або часопролітну М5 або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕ 0І-ТОЕ) або абсорбційну М5 на основі діодного лазера, що настроюється (І ОІВ).
Спосіб за даним винаходом переважно є автоматизованим та виконується під контролем комп'ютера. Ідентифікацію біомаркерів у зразку виконують шляхом порівняння з еталонними даними для біомаркерів, переважно, еталонна маса та спектральні дані для множини біомаркерів зберігаються у комп'ютері. Еталонні мас-спектри для певного біомаркера переважно являють собою усереднені спектри, отримані з фактичних та виміряних даних, отриманих розрахунком кластеризації, як викладено нижче. Біомаркер може бути релевантним сам по собі, в поєднанні з іншими маркерами, для характеристики, яка об'єктивно вимірюється та оцінюється як індикатор стану, такого як стать, вік та життєздатність або статус живлення. бо Придатним біомаркером може бути будь-який індикатор, що ідентифікується та вимірюється,
асоційований з конкретним станом або захворюванням, при цьому існує кореляція між наявністю або вмістом біомаркера та деяким аспектом стану, у тому числі наявність стадії розвитку. Кореляція може бути якісною, кількісною або як якісною, так і кількісною. Зазвичай біомаркером є сполука, фрагмент сполуки або група сполук. Такими сполуками можуть бути будь-які сполуки, знайдені в організмі або продуковані організмом, у тому числі білки та пептиди, нуклеїнові кислоти, амінокислоти, цукри та інші сполуки. Біомаркер може бути описаний як "характеристика, що об'єктивно вимірюється та оцінюється як індикатор стану, такого як стать, вік та життєздатність або статус живлення". Біомаркером є будь-який індикатор, що ідентифікується та вимірюється, асоційований з конкретним станом або захворюванням, при цьому існує кореляція між наявністю або вмістом біомаркера та деяким аспектом стану, у тому числі наявністю стадії розвитку. Кореляція може бути якісною, кількісною або як якісною, так і кількісною. Біомаркери також можуть включати в себе сполуки, які є метаболітами мічених молекул-попередників, що були введені в батьківський організм, що овулює, а потім метаболізовані ембріоном протягом його розвитку з виділенням мічених метаболітів у якості біомаркерів.
Базу даних контрольних спектрів, зібраних з контрольних зразків, переважно спочатку складають шляхом вибору зразків визначеної статі даної курячої раси. Повною бібліотекою або базою даних вважають таку, що містить зразки обох статей.
Зокрема, типізація заснована на спектральних відмінностях, які проявляються в усіх частинах як ультрафіолетового, так і видимого діапазону. На даний час походження цих відмінностей невідомо, але це може бути пов'язано з внутрішніми відмінностями поглинання на молекулярному рівні.
Крім того, обчислювальні засоби містять програмні засоби, що знаходяться у комп'ютері.
Фахівцю в даній галузі має бути зрозуміло, що можуть бути розглянуті додаткові варіанти здійснення, у тому числі системи та способи для характеристики інших компонентів яйця та їх складових, таких як без обмеження алантоїсна рідина, яєчний жовток, яєчний білок та яєчна шкаралупа.
Даний винахід також відноситься до відбору яєць, а після вилуплення - до пташеняти або популяції пташенят, які отримують даним способом.
Даний винахід також відноситься до способу, системи та харчового продукту для іп омо визначення статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріонів видів яйцекладних у більш загальних термінах, тобто без обмеження куркою або навіть більш конкретно Сзаійи5 даПив5 дотевіїсив.
Отже, даний винахід також відноситься до способу визначення іп омо статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона видів яйцекладних. Спосіб за даним винаходом, крім того, відноситься до відбору яєць чоловічої статі та яєць жіночої статі, а також до отримання груп живих тварин із застосуванням таких відібраних яєць. Яйцекладні тварини відкладають яйця з нетривалим ембріональним розвитком в організмі матері або взагалі без такого. Це репродуктивний спосіб більшості риб, амфібій, рептилій, усіх птахів та більшості комах, молюсків та павукоподібних. Вирощування яйцекладних тварин та їх яєць забезпечує постійно зростаючу частину світового виробництва білку, а також різні інші великі промислові процеси, такі як виробництво вакцин. На даний час найбільш важливі способи вирощування яйцекладних тварин включають в себе розведення видів птахів, таких як домашні птахи, та культивування водних організмів, тобто вирощування водних організмів, таких як риба, ракоподібні та молюски.
Даний винахід також відноситься до способу ідентифікації статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона яйцекладних іп омо, що передбачає а) забезпечення харчового продукту, що містить мічений матеріал- попередник, який містить щонайменше одну мічену сполуку- попередник, що є прийнятним для застосування у якості добавки в їжу батьківському організму, що овулює, та Б) інкубацію яйця протягом відповідного періоду для забезпечення метаболізму міченої сполуки-попередника з утворенням щонайменше однієї міченої сполуки в прийнятній кількості; та с) піддавання яйця або зразка з яйця аналізу для визначення наявності та кількості однієї або декількох мічених сполук, та 4) визначення статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона яйцекладних за даними, отриманими на стадії (с).
Запліднені яйця більшості видів яйцекладних мають тенденцію забезпечувати приблизно рівне розподілення самців та самиць тварин. Однак за різними причинами при керуванні інкубаторно-птахівничою станцією може бути бажаним розподілення тварин за різними характеристикам, зокрема, за статтю. Наприклад, при комерційному виробництві домашньої курки та яєць інкубація та вирощування курчат чоловічої статі вкрай небажані, що призводить до вибракування мільярдів курчат чоловічої статі кожен рік При виробництві дрібних ракоподібних та креветок бажано вирощувати виключно жіночу популяцію через способи, необхідні для стимулювання дозрівання яєць.
На даний час в обох випадках змішані популяції тварин, що вилупилися, піддаються розподілу за статевою ознакою шляхом візуальної оцінки молоді тварин, а іноді навіть дорослої популяції, у тих випадках, коли молодь не має відповідних ознак. У будь-якому випадку це дуже трудомісткий процес, що потребує висококваліфікованих операторів та, як правило, дуже стресовий для тварин. Крім того, якщо дорослих тварин розподіляють за статтю, то усі популяції необхідно вирощувати до мінімального віку, у той час як тільки половина вирощених таким чином тварин використовується для розмноження після розподілу. Додаткові проблеми можуть виникати, коли наявність, наприклад, чоловічої популяції може призводити до зниження продуктивності, наприклад, через канібалізм та зниження щільності фермерського господарства, про що доповідалося, наприклад, у випадку прісноводної креветки М. гозепрегцаії.
Також в рибництві визначення статевої приналежності або статі риби дозволило б вирощувати переважно чоловічі або жіночі одностатеві популяції що дозволило б більш конкретно орієнтуватися на ріст та здоров'я популяції, як це практикується на даний час для нільської тилапії, яку культивують переважно у вигляді виключно чоловічої популяції. Знову ж, у більшості риб тільки у молоді на пізній стадії або у дорослій стадії стать може бути визначена візуальним оглядом, так що складні паттерни схрещування та специфічні популяції мають бути встановлені з "суперчоловічими" гібридами, які можуть бути схильні до посилення наявності генетичних порушень та які також можуть бути схильні до певних захворювань, пов'язаних з розмноженням дуже невеликої генетичної популяції.
Крім того, є відсоток яєць, які не запліднені або не містять життєздатного ембріона на початок інкубаційного періоду, що значно знижує продуктивність інкубаторів, застосовних на інкубаторно-птахівничих станціях, зокрема, для яєць домашніх птахів.
В результаті потрібна виробнича потужність інкубатора, яка щонайменше вдвічі перевищує необхідну, якщо неможливий ранній відбір за статтю, що дозволяє відбирати в основному тільки чоловічі або жіночі ембріони.
Відповідно, це буде мати велике значення для довкілля завдяки зменшенню кількості енергії та інших необхідних ресурсів, а у рівному ступені і задля усунення непотрібних тварин шляхом
Зо вибракування, а також для зниження стресу тварин, що недавно вилупилися, якщо спосіб був доступним на ранній стадії, що дозволило визначити стать ембріонів птахів до стадії інкубації, що також дозволило значно збільшити виробничу потужність інкубаторно-птахівничої станції.
Додатковою перевагою могло стати те, що цей спосіб також дозволяв би відбирати життєздатних ембріонів у порівнянні з незаплідненими та/або іншим чином нежиттєздатними яйцями, що ще більше підвищило б ефективність процесу вилуплення.
У відношенні риб або дрібних ракоподібних були опубліковані різні способи, в основному засновані на РСЕ або антитілах. Однак вони досить дорогі та складні.
Отже, зберігається потреба у білош швидкому та більш чутливому способі неруйнівного визначення статі, а також стадії розвитку та/або життєздатності ембріона яйцекладних тварин іп омо.
Тому наступна мета даного винаходу полягає у забезпеченні способу ідентифікації характеристики ембріона видів яйцекладних іп омо, при цьому спосіб передбачає: (а) піддавання зразка матеріалу, асоційованого з яйцем, що містить ембріон, мас- спектрометричному аналізу та реєстрацію індексу часу утримування та відповідної маси та маси для кожного сигналу, що виявляються; (б) кореляцію маси, відповідної кожному сигналу, з еталонною базою даних біомаркерних мас, специфічних для видів, з отриманням кореляції між одним або декількома сигналами та одним або декількома еталонними біомаркерами; (с) підтвердження кореляції між кожним корелювальним сигналом та еталонним біомаркером шляхом зіставляння мас-спектра кожного кореляційного сигналу з мас-спектром кореляційного еталонного біомаркера із застосуванням міри подібності для визначення щонайменше одного позитивно кореляційного сигналу; та (4) вимірювання інтенсивності кожного позитивно кореляційного сигналу та оцінювання його абсолютної або відносної інтенсивності сигналу; та (є) застосування порога до значення оцінки, отриманого з функції розпізнавання, з визначенням характеристики для ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією коригованого біомаркера.
Наступна мета полягає у забезпеченні такого інструментарію для застосування на інкубаторно-птахівничих станціях. Ще однією метою є забезпечення системи, здатної виконувати аналіз яєць в режимі реального часу у віддалених місцях розташування, таких як інкубаторно-птахівничі станції або об'єкти культивування водних організмів. Ці та інші цілі 60 здійснюються за допомогою пристрою та способу за даним винаходом. Отже, даний винахід відноситься до способу ідентифікації одного або декількох біомаркерів, асоційованих з характеристикою ембріона видів яйцекладних іп омо, при цьому спосіб передбачає аналіз множини зразків від множини яєць видів з відомою статтю на мас-спектрометрі з отриманням множини мас-спектрів для встановлення біомаркерного паттерна, здійснення розпізнавання паттернів за мас-спектрами з отриманням біомаркерного паттерна та визначення біомаркерів та вмісту біомаркерів, асоційованих щонайменше з однією характеристикою ембріона, на підставі біомаркерного паттерна.
Відповідно до наступного аспекту спосіб, що заявляється, також відноситься до множини життєздатних яєць жіночої статі, забезпечуючи відбір яєць переважно чоловічої статі або яєць переважно жіночої статі. Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до популяції молоді тварин, яку отримують способом за даним винаходом.
Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до застосування множини яєць, які отримують способом, для отримання продуктів харчування для тварини та/або людини, для отримання та/або виділення косметичних, лікарських та/л"або поживних сполук, для отримання метану за допомогою ферментації, для отримання вакцин та/або для отримання високоякісних добрив.
Відповідно до наступних аспектів спосіб, що заявляється, також відноситься до системи виявлення та аналізу статі ембріонів яйцекладних тварин, що містить переважно повністю автоматизований пристрій для здійснення способів, що заявляються.
Відповідно до наступних аспектів даний винахід відноситься до способу ідентифікації статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона яйцекладних іп омо, що передбачає а) забезпечення харчового продукту, що містить мічений матеріал-попередник, який містить щонайменше одну мічену сполуку-(попередник, що є прийнятною для застосування у якості добавки в їжу батьківському організму, що овулює, та Б) інкубацію яйця протягом відповідного періоду для забезпечення метаболізму міченої сполуки-попередника з утворенням щонайменше однієї міченої сполуки в прийнятній кількості; та с) піддавання яйця або зразка з яйця аналізу для визначення наявності та кількості однієї або декількох мічених сполук, та а) визначення статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона яйцекладних за даними, отриманими на стадії (с).
Даний винахід також відноситься до системи, в якій засіб ідентифікації статі реалізують в програмному забезпеченні на електронному пристрої, сполученому з спектроскопічною системою, та переважно в якій засіб ідентифікації містить засоби програмного забезпечення, що знаходяться у комп'ютері.
На фіг. 1 зображено А) модель класифікації логістичної регресії за однією ознакою.
Прогностичні моделі однієї ознаки оцінювали за усіма вимірюваними ознаками та найбільшу точність спостерігали із застосуванням ознаки 1599, яка забезпечує »90 95 точність з дня 9. В)
Логістична регресія за 2 ознаками. Моделі логістичної регресії оцінювали за усіма можливими парами вимірюваних ознак. Після перевірки робастності вимірювань найкращу характеристику досягали за допомогою комбінації ознак 1599 та 507, що забезпечувала »95 95 точність з дня 10.
Спосіб за даним винаходом, таким чином, відноситься до відносного визначення властивості, такої як стать. Це може бути значно поліпшено шляхом додавання додаткових ознак та шляхом, наприклад, вилучення значень, що відхиляються, або яєць з сумнівними ознаками з суттєвим підвищенням тим самим точності.
На фіг. З показано хроматограми сполук з різними піковими значеннями мас, що варіюють від 220 до 145, виділеними за 850 секунд із зразків чоловічої статі (темно-сірий колір) та жіночої статі (світло-сірий колір).
Якщо не зазначено інше, усі технічні та наукові терміни, що застосовуються у даному документі, мають те саме значення, що зазвичай відоме пересічному фахівцю в галузі, до якої належить даний винахід. Термінологія, що застосовується в описі даного винаходу, наводиться у даному документі виключно з метою опису конкретних варіантів здійснення та не призначена для обмеження даного винаходу. Багато видів яйцекладних вирощують комерційним шляхом.
Фраза "культивування водних організмів" передбачає культивування прісноводних та морських популяцій в контрольованих умовах та може відрізнятися від промислового рибальства, при якому виловлюють диких риб та інших морських тварин.
Застосовний у даному документі термін "риби" включає в себе усіх зябрових водних тварин, що мають череп, у яких відсутні кінцівки з пальцями. Це визначення охоплює міксин, що живуть на даний час, міног, а також види хрящових та кісткових риб, будь то морських чи прісноводних риб. Важливі види або родини риб, які культивують з комерційною метою, включають в себе представників родини прісноводних риб Сургіпідає, таких як коропи, справжні гольяни та їх 60 родичи, наприклад, барбуси, вусачи, соми, та Рапдавійа, білий амур, короп звичайний,
строкатий товстолоб, звичайний товстолоб, катля, звичайний карась та подібні; ЗаІтопідає, у тому числі лосось, форель, гольці, прісноводні сиги та харіуси, наприклад, атлантичний лосось, морська форель та райдужна форель; 5е!гтапідає, такі як баррамунди або азіатський морський окунь, японський морський окунь, європейський морський окунь; Іаїдає; брагдає, такі як морський лящ та порги; Сіспіідає, такі як тилапія Нілу або Мозамбіку, та Асірепзегідає, такі як атлантичний або білуговий осетер.
Застосовний у даному документі термін "ракоподібні" відноситься до групи видів членистоногих, що є роздільностатеві та розмножуються статевим шляхом, які включають в себе таких добре відомих тварин, як краби, лобстери, раки, дрібні ракоподібні.
Застосовний у даному документі термін "краби" означає десятиногих ракоподібних ряду
Вгаспуига.
Застосовний у даному документі термін "дрібне ракоподібне" та/або "креветка" відноситься до будь-якого виду культивованого ракоподібного, такого як культивовані у солоній або солонуватій воді Репаєідає, переважно креветки роду Репавєив, у тому числі гігантська тигрова креветка Р. топодоп, тихоокеанська біла креветка І Порепаєи5 маппатеї; західна блакитна креветка (Р. віуїїговігів); китайська біла креветка (Р. спіпепвів); креветка курума (Р. іаропісив); індійська біла креветка (Р. іпаісив5); бананова креветка (Р. тегдціепвів) та інші представники родин Саїгідєеа або ЮОепагоргапсніаїа; та культивовані у прісній воді ракоподібні, такі як, наприклад, Мастобгаспійт гозепбегадії. М. пірропепзе та М. таїсоІтзопії; рак роду Авіасоіїдеа та
Рагазіасоїдеа, такий як Ргіосатрбагиз сіатії; та культивовані види лобстера з родин Мерпгорідає та Нотаїгдає, а також лангусти з родини Раїїпигідає.
Застосовний у даному документі термін "молюски" відноситься до великого філуму безхребетних тварин, відомому як ряд Моїиеса, у тому числі головоногі молюски, такі як кальмар, каракатиця та восьминіг; двостулкові молюски, такі як панцирні, скафоподи та лопатоногі, які є роздільностатевими та характеризуються зовнішнім заплідненням.
Застосовні у даному документі терміни "пташині" та "птах" включають в себе особин чоловічої статі або особин жіночої статі будь-яких видів птахів, але головним чином охоплюють домашніх птахів, яких комерційно вирощують для яєць або м'яса. Отже, терміни "пташині" та "птах", зокрема, охоплюють червону та сіру джунглеву курку, курча, індичок, качок, гусаків,
Зо перепела, голубів, страуса, ему та фазанів.
Застосовний у даному документі термін "інкубація" відноситься до способу, яким яйцекладні тварини, такі як птахи, висиджують свої яйця, та до розвитку ембріона в яйці після виходу з тракту дорослої особини. Період інкубації у даному документі відноситься до безперервного проміжку часу, протягом якого конкретне яйце піддається умовам, що імітують висиджування до вилуплення, тобто появи птахів, у тому числі будь-якій обробці або переміщенню, наприклад, з інкубатора на інкубаторно-птахівничу станцію, при умові, що розвиток тварини не припинено.
Застосовний у даному документі термін "іп омо" відноситься до ембріонів, що міститься в яйці до вилуплення. Даний винахід може застосовуватися на практиці з яйцем будь-якого типу птиці, риби, молюска, рептилії або ракоподібного, у тому числі без обмеження з яйцями (одомашненої) курки, індички, качки, гусака, перепела та фазана, яйцями риби, такої як короп, лосось або тилапія; яйцями дрібних ракоподібних або креветок та яйцями молюсків.
Застосовні у даному документі терміни "ін'єкція" та "ін'єктгування" охоплюють способи введення пристрою (як правило, подовженого пристрою) в яйце або ембріон, у тому числі способи доставляння або впорскування речовини в яйце або ембріон, способи вилучення речовини (тобто зразка) з яйця або ембріона та/або способи введення детекторного пристрою в яйце або ембріон.
Застосовний у даному документі термін "мас-спектрометрія" відноситься до аналітичної методики, яка сортує іони на підставі їх мас. Мас-спектрометрію, як правило, застосовують для хімічного аналізу у багатьох ситуаціях, та вона може бути застосована для будь-якого зразка від комплексної суміші нафтових продуктів до продуктів генної інженерії. Простіше кажучи, мас- спектр дасть картину точного хімічного складу зразка.
Мас-спектр являє собою графік залежності іонного сигналу від відношення маси до заряду.
Ці спектри використовують для визначення елементної або ізотопної сигнатури зразка, мас частинок та молекул, а також для з'ясування хімічної структури молекул. Мас-спектрометрія іонізує хімічні сполуки з утворенням заряджених молекул або фрагментів молекул та вимірює їх відношення маси до заряду.
В типовій процедурі М5 зразок, який може бути твердим, рідким або газоподібним, іонізують, наприклад, бомбардуючи його електронами. Це може спричиняти розпад деяких молекул на заряджені фрагменти. Ці іони потім розподіляються згідно з їх відношенням маси до заряду,
зазвичай шляхом їх прискорення та впливу на них електричним або магнітним полем. Іони з однаковим відношенням маси до заряду будуть піддаватися однаковому відхиленню.
Іони виявляють за допомогою придатного механізму, знатного виявляти заряджені частинки, такого як електронний помножувач. Результати відображаються у вигляді спектрів відносного вмісту виявлених іонів в залежності від відношення маси до заряду. Атоми або молекули в зразку можуть бути ідентифіковані шляхом кореляції відомих мас з ідентифікованими масами або за допомогою характерного паттерна фрагментації. У даному контексті мас-спектрометрію застосовують для ідентифікації та виявлення придатних біомаркерів. Мас-спектрометрія (М5) є цінною аналітичною методикою, оскільки вона вимірює суттєві властивості молекули, її масу, з дуже високою чутливістю. Таким чином, МО можна застосовувати для вимірювання широкого спектра біомаркерних молекул та широкого спектра зразків матеріалів. Як відомо, правильна підготовка зразків має вирішальне значення для генерації сигналу М5, розрішення та чутливості спектрів. Тому, підготовка зразка є важливою складовою загальної здійсненності та чутливості аналізу.
Переважні способи мас-спектрометричної характеристики біомаркерів передбачають іонізацію лазерною десорбцією із застосуванням матриці (МАЇОЇ) та іонізацію електророзпилюванням (ЕбІ), будь-яка з яких переважно може бути об'єднана з часопролітним (ТОЕ) або іншими типами мас-спектрометричних датчиків для визначення маси та/або паттерна фрагментації біомаркера. Переважно, мас-спектрометрія може бути застосована у тандемі з хроматографічною та іншими методиками розділення у даному документі.
МА! 0 функціонує шляхом впливу імпульсів лазера на зразок. Дана обробка випаровує та іонізує зразок. Потім визначають молекулярні маси (маси) заряджених іонів на аналізаторі ТОБ.
У цьому пристрої електричне поле прискорює заряджені молекули у напрямку детектора, та за відмінностями в тривалості часу, який потрібний іонізованим фрагментам для досягнення детектора, тобто їх часу прольоту, виявляють молекулярні маси біомаркерів, при цьому менші сполуки досягають детектора раніше.
Даний спосіб генерує профілі маси зразка, тобто профілі молекулярних мас та кількостей сполук у суміші. Ці профілі можуть потім використовуватися для ідентифікації відомих біомаркерів з баз даних біомаркерів.
Зо Завдяки інтерфейсу Е5БІ-М5 з рідинною хроматографією (І1С/М5/М5) сполуки, що елююються, з колонки І С вводять у джерело іонів мас-спектрометра. Напругу подають на тонку голку. Потім голка розпилює краплини у мас-спектрометричний аналізатор, де краплини випаровуються, та іони біомаркера вивільняються відповідно до різних зарядових станів, які фрагментовані та за якими можна визначити склад. У якості альтернативи, 5РЕ (твердофазна екстракція) або газова хроматографія можуть бути зв'язані з мас-спектрометром. Зокрема,
ЗРЕ/М5Б/М5 знайшла застосування для автоматизованого та високопродуктивного промислового застосування способу за даним винаходом, такого як із застосуванням пристрою
Адііепі Наріайте М5 (Раріаїтте є зареєстрованим товарним знаком компанії Адіїепі Іпс.); або пристрою лазернодіодної або термоіонної десорбції І СІЮ.
Тандемна мас-спектрометрія (М5/М5) передбачає активацію іона-попередника за допомогою зіткнень з цільовим газом та може давати заряджені та нейтральні фрагменти.
Природа іонів-фрагментів, а також їх інтенсивності часто вказують на структуру іона- попередника і, таким чином, можуть давати корисну інформацію для ідентифікації невідомих аналітів, а також забезпечувати корисну методику скринінгу для різних класів аналітів. Активація за допомогою множинних зіткнень продовжує час активації та дозволяє надавати іонам- попередникам більш високу енергію. Більш високий тиск газу для зіткнень також передбачає більш високі швидкості релаксації зіткнень.
Переважно визначення характеристики ембріона за даним винаходом виконують як неруйнівний спосіб, тобто такий, що дозволяє тестованим таким чином ембріонам рости, якщо це потрібно, або піддають його подальшим стадіям, таким як іп омо отримання вакцин, при умові, що ембріон є життєздатним.
Застосовний у даному документі термін "алантоїсна рідина" охоплює алантоїсну рідину з наявністю або без наявності інших яєчних матеріалів, отриманих з пташиних яєць. Наприклад, термін "алантоїсна рідина" може включати в себе суміш крові та алантоїсної рідини. Варіанти здійснення даного винаходу не обмежуються вилученням матеріалу з алантоїсної рідини або з областей поблизу верхньої поверхні яйця. Видалення матеріалу з алантоїсної рідини, як описується в даному винаході, представлено виключно у якості одного з прикладів можливих варіантів здійснення даного винаходу. Різні матеріали, у тому числі без обмеження амніон, жовток, шкаралупа, альбумін, тканина, оболонка та/або кров, можуть бути вилучені з яйця та проаналізовані з проведенням спектрофотометричного аналізу для ідентифікації статі ембріона, як описується нижче.
При необхідності матеріал може бути вилучений з яєць, що мають практично будь-яку орієнтацію. Застосовний у даному документі термін "задане місце розташування" означає фіксоване положення або глибину всередині яйця. Наприклад, пристрій може бути введено в яйце на фіксовану глибину та/або в фіксоване положення в яйці. Згідно з альтернативними варіантами здійснення ін'єкція може бути здійснена на підставі інформації, отриманої з яйця, наприклад, відносно положення ембріона або субгермінальної порожнини всередині яйця.
У якості альтернативи, особливо у випадку яєць молюска, риби або дрібного ракоподібного, висока просвічуваність таких яєць, а також їх порівняно невеликий розмір відносно пташиних яєць може дозволити безпосередній, неінвазивний аналіз за допомогою безпосередніх, неінвазивних вимірювань на цілих яйцях.
Термін "порівняння спектрів" переважно може включати в себе одноваріантний або переважно багатоваріантний аналіз виміряних спектрів та визначення асоціації пташиного ембріона з певною популяцією. Стадія може передбачати визначення наявності певних піків сигналу у спектрі за допомогою багатоваріантного статистичного аналізу спектральних даних.
Програма багатоваріантного статистичного аналізу переважно включає в себе програму аналізу головних компонентів та/або програму регресійного аналізу часткових найменших квадратів.
Таким чином, даний винахід також відноситься до способу, пристрою та системи для визначення статі та/або життєздатності ембріона птахів іп омо, що включає в себе багатоваріантну програму статистичного аналізу, а також до здійснюваного мікропроцесором способу для визначення цього.
Отже, порівняння переважно передбачає оцінку ймовірності статі для зразка із застосуванням багатоваріантного аналізу виміряних спектрів та визначення асоціації пгашиного ембріона з певною популяцією. Переважно, його виконують із застосуванням дискримінаційного аналізу часткових найменших квадратів (РІ 5-0А).
Спосіб переважно передбачає математичну обробку даних міченої сполуки та передбачає багатоваріантний аналіз, такий як РСА (аналіз головних компонент), переважно з наступним контрольованим аналізом, більш переважно РІ 5-Б0А (дискримінаційним аналізом часткових
Зо найменших квадратів) або навіть більш переважно з ортогональним РІ 5БА або з аналогічними придатними статистичними підходами.
Стадія зіставлення із зразком у способі, що заявляється, буде ідентифікувати певну міру подібності. Із застосуванням міри подібності підтверджують коректну структуру біомаркера. Це підтвердження виконують за допомогою спектральної відповідності. Спектральну відповідність виконують шляхом порівняння спектрів зразка та еталонних спектрів у базі даних. Для позитивної ідентичності на цій стадії потрібна відповідна кореляція, щоб підтвердити точність визначення. Придатні порогові значення та міри подібності будуть очевидні для фахівців в даній галузі.
Даний спосіб намагається зменшити великі об'єми даних до керованого розміру та застосувати статистично керовану модель для визначення прихованих змінних, що вказують на приховані відносини між даними, що спостерігаються.
Засіб ідентифікації характеристики потім фільтрує дані зразка, які будуть ідентифікувати кластери, що становлять інтерес, серед зразків. Кластери представляють подібності серед зразків та застосовуються для ідентифікації профілів статі. Переважно, аналіз включає в себе аналіз головних компонент (РСА) та РІ 5-0А.
РСА використовує математичні алгоритми для визначення різниць та подібності у наборі даних. РСА трансформує число можливих споріднених змінних на менше число неспоріднених змінних, які називаються головними компонентами. Перша головна компонента враховує як можна більшу мінливість даних. Кожна додана компонента намагається врахувати як можна більшу частину мінливості, що залишилася, в даних. Зібрані дані можуть бути впорядковані в матрицю, і РСА виконується для "власних значень" та "власних векторів" квадратно- симетричної матриці з сумами квадратів та перехресних добутків.
Власний вектор, асоційований з найбільшим власним значенням, має той самий напрямок, що і перша головна компонента. Власний вектор, асоційований з другим найбільшим власним значенням, визначає напрямок другої головної компоненти. Сума власних значень дорівнює трасуванню квадратної матриці, а максимальне число власних векторів дорівнює кількості рядків (або стовпчиків) цієї матриці. Після визначення можна будувати екранні графіки розрахованих власних значень. Фахівцям в даній галузі буде зрозуміло, що ряд різних алгоритмів можна використовувати для розрахунку власних значень та власних векторів. Дані бо відображають із застосуванням двох графіків: ї) графіка оцінок, який показує кластеризацию групи, та ії) графіка навантажень, на якому спектральні дані, що відповідають за кластеризацію групи, ідентифікуються як такі, що знаходяться на найбільшій відстані від джерела.
Спосіб за даним винаходом переважно передбачає (аї) забезпечення зразка, що містить рідину яйця; та (аг) отримання спектра зразка. Переважно, стадія (Б) додатково передбачає стадію нормалізації ефектів інтенсивності через відмінності в концентрації між будь-якими двома зразками. Необов'язкова стадія (а3) усуває переважно мутність зразків придатним способом, таким як ультрафільтрація або центрифугування.
Переважно, ембріон є ембріоном птаха, ембріоном рептилії, ракоподібного, риби або молюска. Найбільш переважно, тестуванню піддають пташині ембріони через важливе значення вирощування домашніх птахів та через порівняно великій розмір яєць, що дозволяє відбір зразків.
Спосіб за даним винаходом переважно може визначати, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі, або життєздатним та жіночої статі, та розподіляти тестовані яйця на множину життєздатних яєць чоловічої статі та множину життєздатних яєць жіночої статі, а також множину нежиттєздатних яєць, забезпечуючи відбір яєць переважно чоловічої статі, або яєць переважно жіночої статі, або переважно нежиттєздатних яєць. При необхідності відібрані життєздатні яйця жіночої статі або чоловічої статі можуть бути піддані способу інкубації та вилуплення для формування популяції тварин переважно жіночої статі або чоловічої статі.
Ознаки, які характеризують даний винахід, як у відношенні організації та способу здійснення, так і у відношенні інших його цілей та переваг, стануть більш зрозумілими з наступного опису, що приводиться разом з доданими графічними матеріалами. Слід чітко розуміти, що графічні матеріали призначені для ілюстрації та опису, а не для обмеження даного винаходу. Ці та інші досягнуті цілі, а також запропоновані переваги даного винаходу стануть більш зрозумілими, оскільки наступний опис супроводжується графічними матеріалами.
Способи та пристрій згідно з варіантами здійснення даного винаходу можуть бути застосовані для ідентифікації однієї або декількох характеристик яйця у будь-який момент часу протягом періоду ембріонального розвитку, що також називається періодом його інкубації.
Варіанти здійснення даного винаходу не обмежуються конкретним днем протягом періоду ембріонального розвитку.
Спосіб за даним винаходом переважно може бути виконаний двома шляхами: з використанням внутрішніх стандартів для забезпечення еталона для кількісного визначення інтенсивності сигналу і без таких стандартів. Таким чином, згідно з одним варіантом здійснення один або декілька внутрішніх стандартів додають до зразка перед аналізом за допомогою мас- спектрометрії. Переважно, внутрішні стандарти мітять. Переважно, абсолютна інтенсивність сигналу для кожного сигналу біомаркера потім може бути оцінена шляхом вимірювання інтенсивності сигналу біомаркера і порівняння з інтенсивністю сигналу одного або декількох відомих внутрішніх стандартів. При альтернативному здійсненні зразок обробляють без додавання внутрішніх стандартів. Згідно з таким варіантом здійснення відносну інтенсивність сигналу оцінюють шляхом вимірювання відносини між інтенсивностями сигналу окремого біомаркера в зразку і інтенсивністю сигналу стандарту для групи зразків.
Міра подібності переважно передбачає кореляційний індекс утримування та паттерн фрагментації, асоційований з позитивно кореляційним сигналом.
Далі статистично значуща подібність може бути виявлена і зареєстрована як релевантні біомаркерні ідентичності або множинні біомаркерні ідентичності. Визначення статистично значущих послідовностей передбачає використання баз даних, а також алгоритмів, розроблених для задоволення вимог способу.
Це може передбачати, зокрема, при визначенні застосовності біомаркера для нового застосування, контрольований багатоваріантний аналіз, переважно дискримінаційний аналіз часткових найменших квадратів РІ 5-БА або ортогональний дискримінаційний аналіз часткових найменших квадратів для даних.
Переважно, характеристика, яка належить визначенню, включає в себе стать, вік, стадію розвитку та/або життєздатність ембріона в яйці. Для промислового застосування множину яєць перевіряють на предмет однієї або декількох ембріональних характеристик.
В способі за даним винаходом база даних може бути створена для певних видів шляхом скринінгу біомаркерів, присутніх у зразку, та усунення небажаних сигналів на підставі індексу часу утримування, який корелює з часом потрапляння сполуки у детектор маси. Отже, багато послідовностей можна проаналізувати за лічені хвилини, та дані біомаркери можуть бути ідентифіковані з високою вірогідністю. Таким чином, спосіб є автоматизованим, високопродуктивним, може використовуватися відносно некваліфікованими фахівцями і, тому,
підходить для застосування у віддалених місцях розташування, наприклад, на інкубаторно- птахівничих станціях та курячих або рибних фермах.
Зразок може бути піддано аналізу мас без процедур попереднього розділення. Згідно з таким варіантом здійснення зразок переважно аналізують шляхом безпосередньої інфузії із застосуванням, наприклад, статичних принципів наноелектророзпилення, аналізу введення в потік або введення в потік із збагаченням зразка.
Мас-спектрометрична система переважно являє собою М5 З іонізацію електророзпилюванням (ЕбІі), часопролітну М5 з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МАГ 0БІ-ТОЕ) або часопролітну М5 або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕ 0І-ТОЕ) або абсорбційну М5 на основі діодного лазера, що настроюється (І ОІВ).
Зокрема, 5БРЕ/М5/М5 знайшла застосування для автоматизованого та високопродуктивного промислового застосування способу за даним винаходом, такого як із застосуванням пристрою
Адііепі Варіайте М5 (Наріаїйге є зареєстрованим товарним знаком компанії Адіїепі Іпс.); джерела іонів ОТО (абсорбційної спектроскопії на основі діодного лазера, що настроюється) (ОТО є зареєстрованим товарним знаком компанії РНпуїкопісзв Іпс.) Рпуїгопісв.
Як викладено вище, даний винахід також відноситься до харчового продукту для визначення статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона, а також до застосування міченої сполуки- попередника в їжі для тварини. Заявники несподівано з'ясували, що додавання придатних сполук-попередників в їжу батьківському організму, що овулює, приводить до іншої експресії метаболітів сполук-попередників в яйці протягом ембріонального розвитку.
В результаті яйця демонструють вимірювану варіацію деяких метаболітів в залежності від характеристики ембріона, такої як стать ембріона. Переважно, щонайменше одну мічену сполуку-попередник вибрано із сполуки, яка наводиться як харчова добавка, дозволена
Управлінням США з санітарного нагляду за якістю харчових продуктів та медикаментів (ЕОА) та/лабо Європейською комісією. Зокрема, придатна мічена сполука-попередник може бути вибрана з бутильованого гідроксіанізолу (ВНА) та/або спорідненої сполуки бутильованого гідрокситолуолу (ВНТ), яка являє собою фенольну сполуку, що відповідно додають у харчові продукти для збереження жирів. ВНА у даному документі відноситься до суміші ізомерів З-трет- бутил-4-гідроксіанізолу та 2-трет-бутил-4-гідроксіанізолу; тоді як ВНТ відноситься до 3,5-ди-
Зо трет-бутил-4-гідрокситолуолу; також відомому як метил-ди-трет-бутилфенол; 2,6-ди-трет-бутил- пара-крезол. ВНА та ВНТ є відомими антиоксидантами; вважають, що кисень реагує переважно з ВНА або з ВНТ, а не окислює жири або масла, захищаючи тим самим їх від зіпсування. На додаток до здатності окислюватися ВНА і ВНТ є жиророзчинними. Мічений матеріал- попередник переважно додають до харчового продукту у кількості, розрахованої для забезпечення заданої концентрації або кожної міченої сполуки у продукті. Переважно, мічений матеріал-попередник додають до продукту у кількості, розрахованій для забезпечення заданої концентрації або кожної міченої сполуки в яйці або зразку яйця при концентрації у діапазоні від 5 частин на мільярд до 5 частин на мільйон, більш переважно у діапазоні від приблизно 10 до 1000 частин на мільярд та ще більш переважно від 50 до 500 частин на мільярд.
Мічений матеріал переважно може містити більш ніж одну мічену сполуку, при цьому відносні кількості міченої сполуки вибирають для забезпечення ідентифікованої характеристики для статі, життєздатності та/або стадії розвитку ембріона яйцекладних, при цьому аналіз яйця або зразка яйця виконують для ідентифікації характеристики відносних кількостей мічених сполук. Аналіз переважно виконують із застосуванням мас-спектрометра, такого як, наприклад, датчик рухливості іонів. Зразок може бути спочатку підданий рідинній хроматографії, газовій хроматографії або комбінації газової хроматографії, яку переважно об'єднують з придатним датчиком. Альтернативою М5 датчику може бути полум'яно-фотометричний детектор.
Переважно, щонайменше одна з мічених сполук, що присутні у зразку, взятому з яйця, може бути відділена, дериватизована або концентрована перед аналізом, після стадії аналізу рідини яйця інвазивно або неінвазивно. Переважно, ембріон, характеристика якого належить дослідженню, є ембріоном птаха, ембріоном рептилії, ембріоном ракоподібного, ембріоном риби або ембріоном молюска. Більш переважно, ембріон є ембріоном птаха, переважно виду
Саїїи5 даПйи5 дотевіїси5, або при цьому ембріон є ембріоном виду ракоподібних, вибраного з групи, що містить Репеїдає, Авіасоїдеа та Рагазіасоїдеа, Масгобгаспіає; Авіасоїдеа;
Рагазіасоіїдеа; Мерпгорідає та Нотаїгідає, або при цьому ембріон є ембріоном видів риб, переважно вибраного з коропа, тилапії, сома, морського ляща, морського окуня, тунця, скуморії, бонітоса або жовтохвоста.
Даний винахід також відноситься до харчового продукту, застосовного для батьківських тварин, що овулюють, що містить придатну кількість міченої сполуки-попередника.
Оцінка ймовірності статі для зразка переважно передбачає застосування контрольованого багатоваріантного аналізу, переважно дискримінаційного аналізу часткових найменших квадратів РІ5-0А або ортогонального дискримінаційного аналізу часткових найменших квадратів для даних.
Переважно, значення, що відхиляються, можуть бути вилучені з популяції, що тим самим ще більше посилює вірогідність визначення, а також сприяє отриманню яєць, що належать застосуванню для інших цілей.
Спосіб за даним винаходом, крім того, переважно передбачає розподілення яєць на множини яєць чоловічої статі або жіночої статі; крім того, він також може переважно передбачати визначення життєздатності ембріона та розподілення яєць на одне або декілька, переважно множину, життєздатних яєць та нежиттєздатних яєць.
Спосіб за даним винаходом, в якому значення, що відхиляються, вилучають з популяції, переважно додатково передбачає визначення того, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі, або життєздатним та жіночої статі, та відокремлення множини життєздатних яєць чоловічої статі від множини життєздатних яєць жіночої статі та значень, що відхиляються, для забезпечення відбору переважно яєць чоловічої статі або переважно яєць жіночої статі.
Крім того, спосіб за даним винаходом переважно передбачає піддавання відібраних життєздатних яєць жіночої статі або чоловічої статі способу інкубації та вилуплення для формування популяції тварин переважно жіночої статі або чоловічої статі.
Життєздатність ембріона переважно може бути визначена із застосуванням вимірюваних біомаркерів. Для незапліднених яєць, а також ембріонів, що вмерли, через певний проміжок часу (тобто через кілька хвилин після завершення метаболізму) вимірювані результати явно повністю виходять за межі вікна вимірювання, що призводить до значень, що відхиляються, які вилучають з життєздатних яєць. В рівній мірі щонайменше у випадку ембріонів птахів, при застосуванні зразків, наприклад, алантоїсу, вони дуже швидко після закінчення метаболічної активності стануть порушеними та в кінцевому підсумку жовтими через розчинення оболонок, які утримують яєчний жовток окремо. Крім того, можуть бути виміряні серцебиття або кровотік для визначення ембріональних метаболічних активностей.
Даний винахід також відноситься до застосування множини яєць, які отримують способом,
Зо що розкривається у даному документі, для отримання продуктів харчування для тварини та/або людини, для отримання та/або виділення косметичних, лікарських та/або поживних сполук, для отримання метану за допомогою ферментації, для отримання вакцин та/або для отримання високоякісних добрив.
Далі представлені необмежувальні приклади для ілюстрації даного винаходу.
Приклад 1. Транспортування та зберігання зразків
Для дослідження біомаркерів використовували платформи визначення профілю декількох аналітичних метаболітів, вони представляли собою біогенні аміни, негативні полярні ліпіди, визначення нецільового глобального профілю та С-М5.
Для стадії дослідження аналізували 100 зразків. Інший набір з 350 зразків яєць з різними вихідними значеннями у відношенні живлення та раси аналізували для стадії підтвердження, при цьому дослідні біомаркери для статі та віку визначали щонайменше на двох платформах.
Перші 150 зразків алантоїсної рідині (від бурої курки) збирали у дні 7-11 інкубації та зберігали при -80 "С.
Дані визначення генетичної статі для даних зразків отримували із застосуванням методу
РОСА. Відбирали зразки для статі на день, тоді як надлишкові зразки даного набору використовували для аналізу ЯМР. Потім метаболічний профіль цих зразків аналізували із застосуванням аміну, полярних негативних ліпідів, СО-М5 (для сполук цукру) та платформ визначення глобального профілю.
Інші 300 зразків алантоїсної рідині збирали на інкубаторно-птахівничій станції протягом днів 7-11 інкубації бурої курки.
Аналіз генетичної статі забезпечували, але не застосовували до побудови статистичної моделі. Дані зразки використовували для підтвердження ознак, виявлених попереднім аналізом визначення глобального профілю. Крім того, 59 зразків збирали з білих яєць (лінії Неу СУ 24) та також використовували для даного дослідження, що підтверджує.
Аліквоти
Зразки відтавали протягом ночі при 4 "С перед їх аліквотуванням. Зразки відкручували на вортексі та вручну аліквотували наступним чином: 5 мкл для амінного визначення профілю, 50 мкл для визначення профілю полярного негативного ліпіду та 100 мкл для (0-М5 (аналізу сполук цукру). Створювали пул контроля якості (ОС) шляхом відбору рівних кількостей з 60 кожного зразка з наступним ретельним змішуванням.
Схема партій
Для стадії дослідження зразки рандомізували та розподіляли на дві партії для вимірювань амінів. Для негативних ліпідів та визначення глобального профілю зразки досліджували однією партією. У якості повторностей обирали кожні сім зразків, а також включали калібрувальні лінії,
ОС та порожні контролі. У якості ОС аналізували кожні 10 зразків, їх використовували для оцінювання якості даних та для корекції за аналітичним сигналом. Порожні контролі використовували для вирахування фонових рівнів з досліджуваних зразків.
Необроблені дані попередньо обробляли із застосуванням програмного забезпечення
Адііепі МаззНипівєг Оцапійаїйме Апаїузів (Адііепі, версія В.О5.01).
Амінне визначення профілю
Все згадане обладнання, витратні матеріали та програмне забезпечення забезпечувала компанія У/аїег5 (ЕНеп-Іециг, Те МеїПепапавз), якщо не зазначено інше. Амінна платформа охоплює амінокислоти та біогенні аміни із застосуванням стратегії дериватизації АссО-міткою, адаптованої компанією УУаїєт5. Коротко, зразки алантоїсної рідини (по 5 мкл кожний) доповнювали розчином внутрішнього стандарту (таблиця 1), а потім депротеїнізували за допомогою МеОнН (Асіш-АЇЇ Спетіса!5). Надосадову рідину (10000 обертів за хвилину, 10 "С, 10 хвилин) сушили в умовах вакууму. Залишок відновлювали у боратному буфері (рН 8,5) з 6- амінохіноліл-М-гідроксисукцинімідилкарбаматним (АОС) реагентом. Реакцію дериватизації нейтралізували за допомогою 10 мкл 20 95 мурашиної кислоти (Асго5 Огдапісв). Надосадову рідину (10000 обертів за хвилину, 10 "С, 10 хвилин) переносили до флаконів та поміщали в охолоджений (10 "С) піддон автодозатора до ін'єкції (1 мкл) в систему ОРІ С-М5/М5.
Аналіз даних
Отримані дані оцінювали та певні МАМ піки інтегрували із застосуванням програмного забезпечення Тагдей упх. МАМ піки нормалізували із застосуванням відповідних внутрішніх стандартів, для аналізу амінокислот використовували їх "3С75М-мічені аналоги, а для інших амінів використовували найбільш близький елюювальний внутрішній стандарт. Зразки порожнього контролю застосовували для корекції за фоном. Застосовували власні розроблені алгоритми із застосуванням об'єднаних зразків ОС для корекції за зрушеннями в чутливості мас-спектрометра в партії.
Аналіз даних дослідження виконували для з'ясування того, чи може бути виявлена статева ознака. Для цього застосовували одноваріантні та багатоваріантні стандартні способи аналізу даних в ВМЕЇ, які зазвичай застосовуються авторами даного винаходу для виявлення біомаркерів.
Потім зразки піддавали тестуванню на автоматизованому пристрої суміщеної 5РЕ/М5/М5
Варіатте з високою пропускною здатністю, а також на пристрої ГОРО РНумопіх. Результати показують, що стать життєздатних яєць визначали з точністю більш ніж 95 95, менш ніж за 10 секунд на зразок. На фіг. 1 показана підсумкова вірогідність визначення статі, яка становила більш ніж 95 95 в день 9 або день 10, коли два біомаркери розглядали разом.
Вилуплення
Серії з 25 яєць, що вважалися яйцями чоловічої статі або жіночої статі, які були піддані відбору зразків, як зазначено вище, та тестуванню, забезпечували вилуплення із застосуванням комерційного інкубаційного пристрою та типових умов інкубації. Усі пташенята успішно вилупилися з яєць, демонструючи переносимість відбору зразків. Курчата, що вилупилися, повністю відповідали популяції або чоловічої статі, або жіночої статі.
Приклад 2. Неінвазивне визначення із застосуванням летких сполук та твердофазної мікроекстракції (ЗРМЕ)
Збір зразків летких сполук виконували шляхом перенесення окремо яйця в скляну посудину, що закривається алюмінієвою фольгою та металевою кришкою. Потім посудину поміщали на нагрівальну пластину, підтримуючи температуру всередині посудини на рівні 37 "С. Яйце в посудині залишали на 15 хвилин для досягнення рівноваги з вільним простором в посудині.
Збірний волокнистий матеріал кондиціонували перед застосуванням відповідно до інструкцій виробника. Потім вводили волокно та проводили екстракцію протягом 50 хвилин. Після екстракції волокно вводили в інжектор газового хроматографа на 5 хвилин для десорбції аналітів при 250 "С в режиме без розділення. Яйце повертали до інкубатора відразу після збору летких сполук. Порожні контролі готували шляхом проведення 5РМЕ у порожній посудині та перед аналізом проводили рекондиціонування волокна, щоб гарантувати відсутність піків та гарну якість процедури 5РМЕ.
Леткі сполуки, що вивільнялися з яйця, потім вимірювали газовою хроматографією на Адіїепі
Тесппоіодіеєв (М/тіпдіоп, ОЕ, ОСОБА) 7890А, обладнаному мас-селективним детектором Ааіепі 60 Тесппоіодіез (М5О 597502). Хроматографічне розподілення проводили на колонці НР-5БМ5 ЦІ
(5 о фенілметилсилокс), 30 м х 0,25 м ІЮ з товщиною плівки 25 м (Адііепі) із застосуванням гелію у якості газу-носія зі швидкістю потоку 1 мл/хвилина. Використовували одноквадрупольний мас-спектрометр з електронною іонізацією (ЕІ, 70 еВ). Мас-спектрометр працював в режимі 5САМ. Для екстракції летких сполук застосовували волокно для твердофазної мікроекстракції (5РМЕ) з розміром пор 60 мкм РОМ5/ОУВ етарієтех 24 калібру.
Необроблені дані перетворювали на формат СОБЕ із застосуванням М50 СПНетвіайоп
Е.01.00.1903. Сценарій ХОМ5 розробляли та застосовували до програмного забезпечення В (В, версія 3.2.0) для виконання вибору пікового значення. Для цього застосовували метод "таїснед інет" з лмпт-4 (РеаКм/аїт), крок - 0,5 (вікно Мав5) та зпіпге5п-5 (5/М). Застосовували
Меїароапаїувзі 3.0 для статистичного аналізу. Нарешті, застосовували МаззНипіег ОпаїНаїйме
Апаїузіє В.005.00 для ручної перевірки найбільш важливих характеристик відповідно до отриманих результатів. МІЗ5Т Мав5 5ресігаї! І ібгагу версії 2.0 застосовували для ідентифікації.
У даному способі з ТІС кожного зразка отримували 1486 ознак різних мас при різних часах утримування у секундах. Після вилучення ці ознаки обробляли із застосуванням одноваріантного способу з Тевзі із застосуванням Меїароапаїуві 3.0 для ідентифікації статевих відмінних ознак з упевненістю 99 95.
Заявники даного винаходу з'ясували, що особливо важливим біомаркером, що демонструє значну різницю між яйцями чоловічої статі та жіночої статі, є бутильований гідрокситолуол, який являє собою похідну ВНТ, у якості попередника.
Яйця жіночої статі показували значно вищу концентрацію бутильованого гідрокситолуолу у порівнянні з яйцями чоловічої статі. Отже, застосування міченого попередника привело до створення біомаркера, який дозволяє розрізняти курячі ембріони чоловічої та жіночої статі в яйцеклітині іп омо з високим ступенем достовірності абсолютно неінвазивним способом.
Claims (12)
1. Спосіб неруйнівної ідентифікації характеристики ембріона Сайи5 дав дотевіїсив5 іп омо, де характеристикою є стать, який включає стадії, на яких: (а) отримують зразок матеріалу, що асоційований з яйцем, що містить ембріон, де зразок відбирають з алантоїсної рідини в період часу від 6 до 12 днів, та (Б) вимірюють значення оцінки на наявність та концентрацію біомаркера у зразку, що вказує на характеристику ембріона, та (с) застосовують поріг до значення оцінки та концентрації, що отримані на стадії (Б), для ідентифікації характеристики для ембріона, асоційованої з наявністю та концентрацією біомаркера, при цьому перший біомаркер містить аміносполуку, що має молекулярну масу у діапазоні від 150 до 170 г/моль; при цьому стадія (с) додатково передбачає: () кореляцію кожного відповідного сигналу біомаркера з еталонним біомаркером шляхом зіставлення спектра кожного кореляційного сигналу з очікуваним спектром кореляційного еталонного біомаркера із застосуванням міри подібності для визначення щонайменше одного позитивно кореляційного сигналу; (ї) вимірювання інтенсивності кожного позитивно кореляційного сигналу та оцінку його абсолютної та/або відносної інтенсивності сигналу; та (ії) застосування порога до значення оцінки, отриманої з функції подібності, для визначення корельованої характеристики ембріона, де наявність та концентрація біомаркера корелюють з ймовірністю розвитку ембріона у дорослу особину чоловічої статі або у дорослу особину жіночої статі, та де біомаркер являє собою 3-(2- аміноетил)сульфаніл|бутанову кислоту.
2. Спосіб за п. 1, в якому концентрація 3-(2-аміноетил)сульфаніл|бутанової кислоти, що становить 50 нг/мл або більше, в алантоїсній рідині у 7, 8 або 9 дні корелює з ембріоном жіночої статі, тоді як наявність біомаркера, присутнього при менш ніж 50 нг/мл, корелює з ембріоном чоловічої статі.
3. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де виявляють та аналізують щонайменше перший та другий біомаркери, та при якому абсолютні та відносні кількості щонайменше першого та другого маркерів застосовують для визначення однієї або декількох характеристик.
4. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, що передбачає застосування одного або декількох із: способу магнітно-резонансної візуалізації; методу спектрального резонансу; аналітичного хроматографічного методу в сукупності з одним або декількома придатними детекторами; флуоресцентної спектроскопії та/або способів аналізу, що передбачають селективні відносно біомаркера реагенти, для вимірювання наявності та концентрації одного або декількох бо біомаркерів, краще, де мас-спектрометричний аналіз передбачає мас-спектрометрію з електророзпилювальною іонізацією (Е5І), часопролітну мас-спектрометрію з лазерною іонізацією та десорбцією з рідкої матриці (МАСОІ-ТОЕ) або часопролітну мас-спектрометрію, або поверхневу лазерну десорбційну іонізацію (ЗЕ 0І-ТОЕ), 5РЕ/М5/М5, джерела іонів ОТО (абсорбційної спектроскопії на основі діодного лазера, що настроюється) та/або застосування датчика іонної рухливості (ІМ5).
5. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де тестований зразок обробляють перед аналізом, при цьому краща обробка зразка передбачає відокремлення зразка за допомогою твердофазної екстракції (ЗРЕ), газової хроматографії, одно- або багатофазної рідинної хроматографії високого тиску (НРІ С).
6. Спосіб за будь-яким з пп. 4 або 5, в якому додають один або декілька внутрішніх стандартів еталонних біомаркерів до зразка перед аналізом за допомогою мас-спектрометрії.
7. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому абсолютну інтенсивність сигналу оцінюють шляхом вимірювання інтенсивності сигналу біомаркера та порівняння її з інтенсивністю сигналу одного або декількох відомих внутрішніх стандартів.
8. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де спосіб здійснюють багаторазово таким чином, що множину яєць перевіряють щодо статі ембріона і, необов'язково, щодо однієї або декількох додаткових ембріональних характеристик.
9. Спосіб за п. 8, що додатково передбачає визначення того, чи є ембріон в яйці життєздатним та чоловічої статі або життєздатним та жіночої статі, або нежиттєздатним, та відокремлення множини життєздатних яєць чоловічої статі від множини життєздатних яєць жіночої статі та одного або декількох нежиттєздатних яєць.
10. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, де спосіб є повністю автоматизованим.
11. Спосіб за п. 10, що додатково передбачає сортування життєздатних яєць відповідно до передбачуваного часу до ймовірного вилуплення ембріона.
12. Спосіб селективної інкубації пгашенят видів яйцекладних зі специфічною характеристикою, що включає стадії, на яких: а) забезпечують множину яєць від видів, та р) піддають яйця способу за будь-яким з пп. 1-11 для визначення характеристики ембріона, та с) відбирають яйця з бажаною характеристикою з формуванням відібраної множини яєць, та Зо а) інкубують відібрані яйця до вилуплення одного або декількох пташенят; де характеристикою є стать. а Енемоученом суєт» з мах ГО В Препкдуєтинх З озищи ПУХ ук СОКИ є ї 7 тими МЕККА й ї З її й 7 я З во, 1 Доиьіниейвнцї Деме аку
Фіг. 1
УКаснолуки ря : пі і : їщ: ї : : ї н ї . ї Бо : : : і і до І : ї ї і їм. і ; ; ; і що МІ х ї ї у : : : ї шу ї : : ії : : : Її дощі х : Ї ; : : ї ї ї бі ї : ї і і : : : ї ЖИ Ї : т ї З ї : : ї Хі : : ї І ї ї : ї ї ще р: : ї : | ї ї : ї ММ їх: 1: ї ї ї ї І ї ї Щоімкі її 1: «її ї 3 ї ї ї Е ОМ ЕЕ хг Ої й їх Е. х ї ї сих її її її НЯ ТЕ й ї ї Я ж ХЕ МЕ С її 1 ри її: її їх хх їх п: її їх ах ЕЕ 3: 1: її Я 1 ПЕ БЖ 1 їх її 1: ЗЕ її сі Я п В Щх їй її І: ЩЕ їх
1. Ії Ії 13 її Ії 1 її її ЧІ11158К2: 2: ЕК: ЖІ. 0.111481: Ду, Ва: миті пллуівк ссилки в ЕЕ пам М и І ММ КІ КІ КО КЕ КЕ ВЕ ки КАК ОО МОЖУ МОУ ще 1Ф 123 ї5 схотї Зо сб5 БОШ Од ЩО УЖ Ж ШО ОО МОХ ОО хом оОМ обом мох Цоас, хвуланих
Фіг. 2
ІС. Доном оо нн ЗІКА ких ЯК М, доме З с : В ру Е З щі п З за ІЙ 3 : до В
КЕ. ре 1 пе ПЕ 1 з її З «і НЕ з: Ко З з ВА : м МЕ 3 2 ПО 3 зх ЖОВ З : ОЇ 3 ЗЕ ШОСЕ 3 «5 Кк 3 БЕ ЖАХ 3 1 п 4 Її Б : хх ІА, 3 ве В Е пууєхуєсютхю тую кукси скккксккткк уки к оку юю КМ ркууутк ко Кому ск укюктк КкккКу Кук скк ткококккккккскюкуккксююн щі 3 ЗУУУУУУУУ МУКУ УМ ММ УМ КУМ УМ УМ У УМ УК МУ УМ Ух УКХ ВІЗІ ВА ВУХ КМ ХА или МК ЕІ Ж ХА ВНИХ ЕК КИ ВАК КО М о и Я УНІ УА КК ЧО ЕХ НКИ ЖОВ КНЕЖІ ЖМ Же ікло пеекрм чок он ання ксекуВаН
Фіг. З
ІГ. Комп! С. Чулій омп ютерна верстка С. чулій О "Украї Й і й офіс і ї і таїі ій" Г 1 Київ - 42, 01601 Д країнський національний офіс інтелектуальної власності та інновацій", вул. Дмитра Годзенка, 1, м. Київ - ;
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL2016818A NL2016818B1 (en) | 2016-05-24 | 2016-05-24 | Method, system and food product for the in ovo gender, viability and/or developmental stage determination of embryos of oviparian species. |
| NL2016819A NL2016819B1 (en) | 2016-05-24 | 2016-05-24 | Method and system for the non-destructive in ovo determination of fowl gender. |
| NL2017382 | 2016-08-29 | ||
| PCT/NL2017/050330 WO2017204636A2 (en) | 2016-05-24 | 2017-05-24 | Method and system for the non-destructive in ovo determination of fowl gender |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA127784C2 true UA127784C2 (uk) | 2024-01-03 |
Family
ID=59366469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201811754A UA127784C2 (uk) | 2016-05-24 | 2017-05-24 | Спосіб неруйнівного in ovo визначення статі птахів |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11686732B2 (uk) |
| EP (2) | EP3859341A3 (uk) |
| JP (1) | JP7320353B2 (uk) |
| KR (1) | KR102530639B1 (uk) |
| CN (1) | CN109477840B (uk) |
| AU (1) | AU2017269050B2 (uk) |
| BR (1) | BR112018074071A8 (uk) |
| CA (1) | CA3025127A1 (uk) |
| DK (1) | DK3465222T3 (uk) |
| ES (1) | ES2877368T3 (uk) |
| HR (1) | HRP20210991T8 (uk) |
| HU (1) | HUE055153T2 (uk) |
| IL (1) | IL263138B2 (uk) |
| MX (2) | MX2018014484A (uk) |
| PL (1) | PL3465222T3 (uk) |
| PT (1) | PT3465222T (uk) |
| RU (1) | RU2756447C2 (uk) |
| UA (1) | UA127784C2 (uk) |
| WO (1) | WO2017204636A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA201807967B (uk) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10798921B2 (en) | 2017-02-07 | 2020-10-13 | Zoetis Services Llc | Method for reducing pathogens in poultry hatchery operations |
| WO2019154493A1 (en) * | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Seleggt Gmbh | Method for sampling an egg |
| EP3599465A1 (en) * | 2018-07-24 | 2020-01-29 | Tronico | Method for determining a specific characteristic of an embryo in an unhatched egg |
| US20210318272A1 (en) * | 2018-09-05 | 2021-10-14 | Bae Systems Information And Electronic Systems Integration Inc. | Carbide-derived carbon for solid-phase micro extraction media |
| KR102150837B1 (ko) * | 2019-02-22 | 2020-09-03 | 고려대학교 산학협력단 | 소변의 대사체 분석을 위한 소변 샘플 처리 방법 |
| NL2023176B1 (en) | 2019-05-22 | 2020-12-01 | In Ovo B V | Composition comprising eggs and use of such composition |
| WO2021119588A1 (en) * | 2019-12-13 | 2021-06-17 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | A system and method for determining the sex and viability of poultry eggs prior to hatching |
| DE102020000214A1 (de) * | 2020-01-15 | 2021-07-15 | Technische Hochschule Ostwestfalen-Lippe | Vorrichtung und Verfahren zur in-ovo Geschlechtsbestimmung bei einem befruchteten Vogelei |
| NL2024699B1 (en) | 2020-01-17 | 2021-10-13 | In Ovo Holding B V | Egg Characteristic Determining Device |
| NL2026004B1 (en) | 2020-07-05 | 2022-03-11 | In Ovo Holding B V | Egg Determining Method and Device |
| CN112986451B (zh) * | 2021-05-06 | 2022-05-17 | 湖南师范大学 | 一种基于风味特征的杂交鱼类肉品质评价方法 |
| DE102021127696B3 (de) | 2021-10-25 | 2023-03-09 | Technische Universität Dresden, Körperschaft des öffentlichen Rechts | Verfahren und Anordnung zur in-ovo Geschlechtsbestimmung von Vogeleiern |
| KR102632163B1 (ko) | 2022-04-13 | 2024-02-01 | 오보젠 주식회사 | 가금류 알(卵)의 암수 검사 및 선별장치 그리고 이를 이용한 선별방법 |
| CN115015461A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-09-06 | 聊城大学 | 一种肉类挥发性风味物质的鉴别方法及其应用 |
| CN115047129B (zh) * | 2022-06-16 | 2023-07-04 | 贵州茅台酒股份有限公司 | 一种基于挥发性物质组成特征的高粱品种鉴别方法 |
| CN115808414A (zh) * | 2023-01-18 | 2023-03-17 | 苏州贝康医疗器械有限公司 | 一种无创评估胚胎发育质量的拉曼光谱分析方法及其应用 |
Family Cites Families (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5158038A (en) | 1990-06-06 | 1992-10-27 | Sheeks Oliver B | Egg injection method, apparatus and carrier solution for improving hatchability and disease control |
| JPH07504320A (ja) | 1992-01-27 | 1995-05-18 | ノース・カロライナ・ステート・ユニバーシティ | インオボ（ｉｎ ｏｖｏ）で筋肉内にＤＮＡを導入することによる鳥類への遺伝子伝達 |
| GB9226179D0 (en) | 1992-12-16 | 1993-02-10 | British Tech Group | Method of hatching avian eggs |
| WO1998014781A1 (en) | 1996-10-04 | 1998-04-09 | Embrex, Inc. | Method of sorting birds in ovo |
| US6240877B1 (en) | 1997-01-27 | 2001-06-05 | Edward G. Bounds | Egg injection apparatus and method |
| US6029080A (en) * | 1997-07-09 | 2000-02-22 | Reynnells; Richard D. | Method and apparatus for avian pre-hatch sex determination |
| US6286455B1 (en) | 1998-01-12 | 2001-09-11 | Embrex, Inc. | Automated in ovo injection apparatus |
| UY25347A1 (es) | 1998-01-12 | 1999-05-14 | Embrex Inc | Procedimiento de inyeccion multiple para el tratamiento de embriones aviarios in ovo, y aparato automatizado para la inyeccion in ovo. |
| US6365339B1 (en) | 1998-09-04 | 2002-04-02 | Bechtel Bwxt Idaho, Llc | Gender determination of avian embryo |
| US6176199B1 (en) | 1998-10-20 | 2001-01-23 | Embrex, Inc. | Method for localizing allantoic fluid of avian eggs |
| US7041439B2 (en) | 2001-04-17 | 2006-05-09 | Embrex, Inc. | Methods and apparatus for selectively processing eggs having identified characteristics |
| GB0220553D0 (en) * | 2002-09-04 | 2002-10-09 | Reeves Sidney J | Method andapparatus for determining the viability of eggs |
| US6850316B2 (en) | 2002-06-10 | 2005-02-01 | Embrex, Inc. | Methods and apparatus for harvesting vaccine from eggs |
| GB0218955D0 (en) * | 2002-08-14 | 2002-09-25 | Roslin Inst Edinburgh | Avian sex determination method |
| WO2006124456A2 (en) | 2005-05-11 | 2006-11-23 | Embrex, Inc. | Competitive particle immunoassay methods utilizing fluorescence microscopy |
| US7418922B2 (en) | 2005-10-05 | 2008-09-02 | Embrex, Inc. | Methods for injecting and sampling material through avian egg membranes |
| GB0611669D0 (en) * | 2006-06-13 | 2006-07-19 | Astrazeneca Uk Ltd | Mass spectrometry biomarker assay |
| US7950349B1 (en) | 2008-01-18 | 2011-05-31 | Jack Dean Rollins | Avian egg fertility and gender detection |
| CN101285773B (zh) * | 2008-05-23 | 2010-04-14 | 浙江大学 | 混纺织物组分的拉曼光谱定性检测方法 |
| KR101090505B1 (ko) | 2008-12-30 | 2011-12-06 | 최은아 | 난담반을 포함하는 암 예방 및 치료용 조성물 |
| RU2406371C1 (ru) | 2009-07-21 | 2010-12-20 | Государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности (ГУ ВНИИПП) | Способ получения яичного белкового продукта |
| DK2336751T3 (en) | 2009-12-16 | 2014-11-17 | Fraunhofer Ges Forschung | Method for determining the sex of the bird eggs |
| DE102010006161B3 (de) * | 2010-01-21 | 2011-01-13 | Technische Universität Dresden | Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung des Geschlechtes von befruchteten und nicht bebrüteten Vogeleiern |
| CN102210708A (zh) | 2010-04-01 | 2011-10-12 | 王莉娜 | 中药鸡蛋外敷疗法 |
| US8665433B2 (en) | 2010-08-17 | 2014-03-04 | Exelis Inc. | Standoff explosives detector using deep-UV Raman spectroscopy |
| JP5718033B2 (ja) | 2010-11-29 | 2015-05-13 | 株式会社Ｂｂｂジャパン | 有機肥料製造方法 |
| JP5291770B2 (ja) * | 2011-08-10 | 2013-09-18 | 東洋ゴム工業株式会社 | 防振ユニットの製造方法 |
| MX362096B (es) * | 2012-07-30 | 2019-01-07 | In Ovo B V | Determinacion de género, viabilidad y/o etapa de desarrollo de embriones aviares in ovo. |
| EP2948775B1 (en) * | 2013-01-23 | 2018-10-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions and methods for detecting neoplasia |
| DE102013205426A1 (de) * | 2013-03-27 | 2014-10-16 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren zum Bestimmen des Geschlechts eines Embryos in einem Ei |
| DE102014010150A1 (de) * | 2014-07-04 | 2016-01-07 | Technische Universität Dresden | Verfahren und Vorrichtung zur Raman-spektroskopischen in-ovo Geschlechtsbestimmung von befruchteten und bebrüteten Vogeleiern |
| AU2017301892B2 (en) * | 2016-07-29 | 2023-05-11 | Novatrans Group S.A. | System and method for in ovo sexing of avian embryos |
-
2017
- 2017-05-24 KR KR1020187037171A patent/KR102530639B1/ko active IP Right Grant
- 2017-05-24 ES ES17740802T patent/ES2877368T3/es active Active
- 2017-05-24 WO PCT/NL2017/050330 patent/WO2017204636A2/en unknown
- 2017-05-24 PT PT177408028T patent/PT3465222T/pt unknown
- 2017-05-24 UA UAA201811754A patent/UA127784C2/uk unknown
- 2017-05-24 RU RU2018142577A patent/RU2756447C2/ru active
- 2017-05-24 US US16/302,812 patent/US11686732B2/en active Active
- 2017-05-24 CA CA3025127A patent/CA3025127A1/en active Pending
- 2017-05-24 HU HUE17740802A patent/HUE055153T2/hu unknown
- 2017-05-24 MX MX2018014484A patent/MX2018014484A/es unknown
- 2017-05-24 EP EP21163951.3A patent/EP3859341A3/en active Pending
- 2017-05-24 BR BR112018074071A patent/BR112018074071A8/pt unknown
- 2017-05-24 PL PL17740802T patent/PL3465222T3/pl unknown
- 2017-05-24 JP JP2018561609A patent/JP7320353B2/ja active Active
- 2017-05-24 AU AU2017269050A patent/AU2017269050B2/en active Active
- 2017-05-24 DK DK17740802.8T patent/DK3465222T3/da active
- 2017-05-24 CN CN201780046108.6A patent/CN109477840B/zh active Active
- 2017-05-24 EP EP17740802.8A patent/EP3465222B1/en active Active
-
2018
- 2018-11-20 IL IL263138A patent/IL263138B2/en unknown
- 2018-11-23 MX MX2022001463A patent/MX2022001463A/es unknown
- 2018-11-26 ZA ZA2018/07967A patent/ZA201807967B/en unknown
-
2021
- 2021-06-23 HR HRP20210991TT patent/HRP20210991T8/hr unknown
-
2023
- 2023-05-12 US US18/196,537 patent/US20240003895A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240003895A1 (en) | Method and system for the non-destructive in ovo determination of fowl gender | |
| US20210215663A1 (en) | Apparatus for analysis of eggs | |
| Kouwenberg et al. | Corticosterone and stable isotopes in feathers predict egg size in A tlantic P uffins F ratercula arctica | |
| Young et al. | Metabolic profiling of mussel larvae: effect of handling and culture conditions | |
| Torre et al. | Chromatographic detection of nitrofurans in foods of animal origin | |
| Aru et al. | The plasma metabolome of Atlantic salmon as studied by 1H NMR spectroscopy using standard operating procedures: effect of aquaculture location and growth stage | |
| NL2016818B1 (en) | Method, system and food product for the in ovo gender, viability and/or developmental stage determination of embryos of oviparian species. | |
| NL2016819B1 (en) | Method and system for the non-destructive in ovo determination of fowl gender. | |
| Brown et al. | Feather pulp: a novel substrate useful for proton nuclear magnetic resonance spectroscopy metabolomics and biomarker discovery | |
| Fu et al. | LC–MS/MS-based metabolome analysis of biochemical pathways altered by food limitation in larvae of ivory shell, Babylonia areolata | |
| CN111610269A (zh) | 一种快速鉴定真蛸风味及所投喂饵料种类的方法 | |
| Pinto et al. | A Proteomic Approach to Studying the Effects of Xenobiotics on Aquatic Living Organisms | |
| Ding et al. | Variaiton in the composition of small molecule compounds in the egg yolks of Asian Short-toed Larks between early and late broods | |
| NL2009255C2 (en) | Gender determination of avian embryos in ovo. | |
| Wang et al. | Potential sexual pheromones of sea cucumber Apostichopus japonicus and their functions on aggregative and spawning behavior | |
| Parmar | 1H Nuclear Magnetic Resonance-linked Metabolomics Investigations of Broiler Poultry and Human Saliva | |
| NL2009256C2 (en) | Age determination of avian embryos in ovo. | |
| Ali et al. | Veterinary Drugs |