UA125013C2 - Вакцинна комбінація та спосіб індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта - Google Patents

Abstract

Винахід належить до вакцинної комбінації для застосування у формуванні захисної імунної відповіді проти щонайменше одного підтипу філовірусу, яка містить першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість MVA-вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки чотирьох різних підтипів філовірусу, разом з фармацевтично прийнятним носієм; де перша композиція використовується для ініціювання зазначеної імунної відповіді, а друга композиція використовується для посилення зазначеної імунної відповіді; і де аденовірусні вектори є rAd26- або rAd35-векторами. Винахід також належить до способу індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб’єкта та набору для індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб’єкта.

Description

(54) ВАКЦИННА КОМБІНАЦІЯ ТА СПОСІБ ІНДУКУВАННЯ ІМУННОЇ ВІДПОВІДІ ПРОТИ ФІЛОВІРУСУ У

СУБ'ЄКТА (57) Реферат:

Винахід належить до вакцинної комбінації для застосування у формуванні захисної імунної відповіді проти щонайменше одного підтипу філовірусу, яка містить першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки чотирьох різних підтипів філовірусу, разом з фармацевтично прийнятним носієм; де перша композиція використовується для ініціювання зазначеної імунної відповіді, а друга композиція використовується для посилення зазначеної імунної відповіді; і де аденовірусні вектори є гАа26- або глаз5-векторами.

Винахід також належить до способу індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта та набору для індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта.

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ

Цей винахід відноситься до композицій, вакцин та способів індукування захисного імунітету проти філовірусної інфекції, зокрема, захисного імунітету проти інфекції, викликаної одним або більше підтипами Еболавірусу і вірусом Марбург.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Еболавіруси, такі як еболавірус Заїр (ЕВОМ), еболавірус Судан (50ОЮОМ), а також близькоспоріднений вірус Марбург (МАВМУ), асоціюються зі спалахами високолетальної геморагічної лихоманки Ебола (ГЛЕ) у людини і приматів в Північній Америці, Європі та Африці.

Ці віруси відносяться до родини філовірусів, які відомі своєю здатністю інфікувати людей і нелюдиноподібних приматів з серйозними наслідками для здоров'я, включаючи смерть. Рівень смертності у людей, спричиненої філовірусними інфекціями, становить до 90 95. ЕВОМУ-, БОЮУ- і

МАВУ-інфекції є причиною ГЛЕ, при якій смерть настає, як правило, через 7-10 днів після інфікування. ГЛЕ являє собою гострий гарячковий синдром, що проявляється лихоманкою, нудотою, блюванням, діареєю, макулопапульозним висипом, нездужанням, сильно вираженою слабкістю, генералізованими ознаками підвищеної проникності судин, порушенням згортання крові, а також порушенням регуляції вродженої імунної відповіді. Очевидно, патогенез захворювання здебільшого обумовлений порушенням регуляції вродженої імунної відповіді на інфекцію і реплікацією вірусу в ендотеліальних клітинах судин, що призводить до загибелі клітин-хазяїв, а також до руйнування ендотеліального бар'єру. Філовіруси можуть поширюватися з малими аерозольними частками або при безпосередньому контакті з інфікованою кров'ю, органами і біологічними рідинами організму людини або нелюдиноподібного примата (НЛП). Повідомляється, що для розвитку геморагічної лихоманки

Ебола (ГЛЕ) в організмі людини достатньо інфікування одним віріоном. На даний час не існує схвалених лікарських препаратів або вакцин для лікування або профілактики ГЛЕ. Підтримуюча терапія залишається єдиною схваленою медичною допомогою для індивідуумів, інфікованих філовірусами.

Будучи причиною важкого захворювання людини, філовіруси продовжують викликати занепокоєння як джерело природних інфекцій, а також як можливий агент для біотероризму.

Резервуар філовірусів в дикій природі остаточно не ідентифікований. Описано чотири підтипи

Зо еболавірусів, що викликають ГЛЕ, тобто ті підтипи, які були причиною захворювань в Заїрі,

Судані, Бундібуджіо і Кот-д'ївуар (Запспе?, А. еї аІ. 1996 РМАБ5 БА 93:3602-3607). Ці підтипи еболавірусів мають схожу генетичну архітектуру, наприклад, всі вони є негативно ланцюжковими РЕК-вірусами, що містять сім лінійно вибудованих генів. Структурні генні продукти включають, наприклад, глікопротеїнову оболонку, яка існує в двох альтернативних формах: секретувальний розчинний глікопротеїн (срГП) і трансмембранний глікопротеїн (ДП), згенерованих за допомогою редагування РНК, яка опосередковує проникнення вірусу (Запспез, еї ам. 1996 РМАБ ОА 93:3602-3607).

Висловлене припущення, що імунізація може бути корисною для формування захистої реакції від інфекції Ебола, оскільки, як видається, серед підтипів вірусу Ебола існує менший нуклеотидний поліморфізм, ніж серед інших РНК-вірусів (Запспе еї аі. 1996 РМАБ О5БА 93:3602-3607). До недавнього часу розробки профілактичних вакцин проти філовірусів не давали будь-яких істотних результатів, частково через те, що механізми захисних імунних відповідей проти філовірусних інфекцій є недостатньо вивченими. Крім того, велика кількість філовірусів, що циркулюють в природних резервуарах, ускладнює розробку вакцини, яка захищала б від усіх видів філовірусів.

На даний час існує декілька платформ доставки вакцинного антигену, що продемонстрували різні рівні захисту в нелюдиноподібних приматів (НЛП), інфікованих високими дозами філовірусів. Вакцини-кандидати розробляються на основі різних базових технологій, включаючи реплікацію компетентних векторів (наприклад, вірусу везикулярного стоматиту; вірусу сказу; вірусу парагрипу); реплікацію некомпетентних векторів (аденовірусу, модифікованого вірусу вісповакцини Анкара); субодиниці білка, включаючи вірусоподібні частки, експресовані в бактеріальних клітинах, клітинах комах, клітинах ссавців, клітинах рослин; ДНК-вакцини; і/або живого і убитого атенуйованого філовірусу (Егіеайгіспй еї а!., 2012). Глікопротеїн ГП вірусу ЕВОМ є важливим компонентом вакцини, яка захищає від впливу аналогічних видів ЕВОМ. Крім того, включення ГП від ЕВОМ і БОБУ, двох найбільш вірулентних видів еболавірусів, може захистити мавп від впливу ЕВОМ і ЗИОЮМ, що вводяться внутрішньом'язово, а також впливу далекоспоріднених видів вірусу Бундібуджіо (ВОВМ), еболавірусу лісу Таї (ТАРМ, раніше відомого як вірус Берега Слонової Кістки або Кот-д'ївуар). Крім того, включення ГП від МАКМ може захистити мавп від впливу МАКУ, що вводиться внутрішньом'язово і аерозольно. бо Першочерговим завданням є розробка заходів медичного захисту від цих вірусів, зокрема,

розробка ПАН-філовірусної вакцини, що являє собою вакцину, яка захищає від усіх патогенних філовірусів.

Аденовірусні вектори з дефектною реплікацією (га) є потужними індукторами клітинної імунної відповіді, і тому можуть бути придатними векторами для генноінженерних вакцин, особливо для лентівірусов і філовірусів, а також інших невірусних патогенів (Зпімег, еї а!., (2002)

Маїште 415(6869): 331-5; (НІЇ, єї аі., Нит Массіп 6(1): 78-83.; ЗиййПмап, еї аї. (2000) Машге 408(6812): 605-9; ЗиМййПмап еї аї., (2003) Майте 424(6949): 681-4; Бйпїмап, єї аї!., (2006) РІ о5 Мей

З(6): е177; Вадоземіс, єї аї!., (2007); Запіга, вї а!., (2009) Массіпе 27(42): 5837-45.

Вакцини на основі аденовірусів мають ряд переваг в якості вакцин для людини, оскільки вони можуть бути виготовлені в високих титрах відповідно до принципів належної виробничої практики (НВП) і довели свою безпеку і імуногенність у людини (Азтиїй, еї аї., / Іптесі бів 201(1): 132-41; Кіршика, еї аї!., У Іптесі бів 201(4): 600-7; Коир, евї аї!., Рі о5 Опе 5(2): е9015.; Саїаплаго, єї а!., (2006) У Іптесі бів 194(12): 1638-49; На!то, евї аї., (2009) Сіїп Массіпе Іттипої! 16(9): 1285-92.

Поряд з тим, що більша частина первинної роботи над вакциною проведена з використанням гАа5, враховуючи його виражену активність у виявленні відкритого антитіла і відповідей СОв' Т- клітин, попередньо існуючий імунітет до гАй5 в організмі людини може обмежити ефективність (Саїапгаго, (2006); Спепо, еї аї., (2007) РГо5 Раїпоя З3(2): е25.; МеСоу, еї а!., (2007) У Мігої 81(12): 6594-604.; Виспбіпаег, єї аї., (2008) І апсеї 372(9653): 1881-93).Це властивість може обмежити використання гАа5 в клінічній практиці для багатьох вакцин, які знаходяться в стадії розробки, включаючи вакцини проти Еболавірусу (ЕВОМ) і вірусу Марбург (МАВУ).

Аденовірусні вектори з дефектною реплікацією: гАа26 і гАазь, отримані з серотипу 26 та серотипу 35 аденовірусу, відповідно, можуть ухилятися від попередньо існуючого імунітету до да5. гАда26-вектори можна культивувати до високих титрів в АЯ5 Е1- комплементарних клітинних лініях, придатних для виготовлення таких векторів в великих масштабах і для клінічного застосування (Арбіпк, єї а!., 2007); крім того, було показано, що ці вектори індукують гуморальну і клітинну імунну відповідь в стратегії вакцинації "прайм- буст" (АБбріпкК, єї аї., 2007; І їм, єї аї., (2009) Маштгте 457 (7225): 87-91). глазо5-вектори культивують до високих титрів в клітинних лініях, придатних для вакцин для клінічного застосування (Намепада, єї аї!., (2006) У Сеп Мігої! 87 (РІ 8): 2135-43), і випускають у формі ін'єкцій, а також стабільного інгаляційного порошку (іп, еї аї.,

Зо Массіпе 28 (27): 4369-75).Ці вектори демонструють ефективну трансдукцію дендритних клітин людини (дає Стгиї), еї аї., (2006) У Іттипої! 177 (4): 2208-15; І оге, єї аї., (2007) У Іттипої! 179 (3): 1721-93, ї таким чином можуть опосередковувати високорівневу доставку і презентацію антигену.

Модифікований вірус вісповакцини Анкара (ММА) є спорідненим з вірусом вісповакцини, представником роду ортопоксвірусів в родині Рохмігідає. Відомо, що поксвіруси є хорошими індукторами відповідей СО8-Т-клітин у звязку з їх внутрішньоцитоплазматичною експресією.

Проте, вони, як правило, розглядаються як слабкі елементи для генерації СО4 Т-клітин, рестриктованих класом ІІ головного комплексу гістосумісності (МНС) (див., наприклад, Навзіей еї ам. доцта! ої Іп'есібив5 Оізєазе5 181: 1264-72 (2000), раде 1268). ММА розроблений для використання в якості вірусного вектора для експресії рекомбінантного гена або в якості рекомбінантної вакцини.

Штами ММА, що мають поліпшені профілі безпеки для розробки більш безпечних продуктів, як-от вакцини або фармацевтичні препарати, були розроблені Вамагіап Могаїсє. ММА додатково культивований компанією Вамагіап Могаїс і позначений як ММА-ВМ, репрезентативний зразок якого був зданий на зберігання 30 серпня 2000 року в Європейську колекцію клітинних культур (ЕСАСС) під реєстраційним Мо. М00083008.ММА-ВМ додатково описаний в публікаціях М/О 02/42480 (05 2003/0206926) і УМО 03/048184 (5 2006/0159699), обидві з яких включені в цей документ шляхом посилання у повному обсязі.

ММУА-ВМ можна прикріпити і ввести в людські клітини, в яких гени, закодовані вірусом, експресуються дуже ефективно. ММА-ВМ є реплікативно некомпетентним, а це означає, що вірус не розмножується в клітинах людини. У клітинах людини вірусні гени експресуються, і не утворюється жодного патогенного вірусу. За даними Центрів з контролю і профілактики захворювань в Сполучених Штатах для організму ММА-ВМ класифікується як рівень 1 біологічної безпеки. Препарати ММА-ВМ та його похідні вводили багатьом видам тварин, а також понад 2000 людським суб'єктам, включаючи індивідуумів з імунною недостатністю. Всі вакцинації виявилися в цілому безпечні і добре переносилися. Незважаючи на високу атенуацію і знижену вірулентність, в доклінічних дослідженнях було показано, що ММА-ВМ викликає як гуморальну, так і клітинну імунну відповідь на вірус вісповакцини і гетерологічні генні продукти, які кодуються генами, клонованими в геномі ММА (Е. Нагтег еї аї. (2005), Апіїміг. Тег. 10(2):285- 60 300; А. Совта єї аї. (2003), Массіпе 22(1)х21-9; М. 0і Місоїа еї а). (2003), Нит. Сепе ТНег.

14(14):1347-1360; М. 0і Місоїа єї а!. (2004), Сіп. Сапсег Вевз., 10(16):5381-53901|.

Існує невирішене питання щодо удосконалення вакцин, які викликають імунну відповідь на філовіруси, зокрема, захисний імунітет проти більш смертельних Еболавірусів і вірусів Марбург.

КОРОТКИЙ ОПИС СУТНОСТІ ВИНАХОДУ

В цьому винаході виявлено, що різні комбінації "прайм-буст" реплікативно некомпетентних векторів генерують ефективний імунний захист проти філовірусної інфекції.

Відповідно, один загальний аспект даного винаходу стосується комбінованої вакцини, що містить: () першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу або по суті аналогічний антигенний білок, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і (і) другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білюи щонайменше двох підтипів філовірусу або по суті аналогічні антигенні білки, разом з фармацевтично прийнятним носієм; при цьому одна з композицій являє собою "прайм"-композицію, а інша композиція являє собою "буст"-композицію.

Інший загальний аспект даного винаходу стосується застосування: першої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, якакодує антигенний білок першого підтипу філовірусу або по суті аналогічний антигенний білок; і другої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість

ММА-вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок щонайменше двох підтипів філовірусу або по суті аналогічні антигенні білюи; для формування захисної імунної відповіді на щонайменше один із підтипів філовірусу; при цьому першу і другу композиції використовують для зазначеної "прайм"- або "буст"- імунної відповіді.

В окремих випадках реалізації винаходу перша композиція (і) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу. В інших варіантах реалізації винаходу перша композиція (ї) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу.

Зо Згідно з даним винаходом підтипи філовірусу можуть бути будь-яким підтипом філовірусу.

У бажаному варіанті реалізації винаходу перший, другий і третій підтипи філовірусу вибирають з групи, що складається з підтипів Заїр, Судан, Рестон, Бундібуджіо, лісу Таї і

Марбург. Антигенні білки можуть бути будь-яким білком з будь-якого філовірусу, що містить антигенну детермінанту. У бажаному варіанті реалізації винаходу антигенні білки являють собою глікопротеїни або нуклеопротеїни. Антигенні білки, які кодуються аденовірусними векторами або ММА-векторами, що містяться в першому і другому розчині відповідно до даного винаходу, можуть являти собою будь-який антигенний білок з будь- якого філовірусу. У бажаному варіанті реалізації винаходу антигенні білки першого, другого і третього типу філовірусу вибирають з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:1, ЗЕО І МО:2, 5БЕО ІЮ МО:3, ЗЕО

ІО МО:4 и ЗЕО ІЮО МО:5. У бажаному варіанті реалізації винаходу перший, другий і третій підтип філовірусу не є одним і тим же.

В іншому варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор в першій композиції (ї) містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок, який має послідовність, обрану з групи, що складається з 5ЕО І МО: 1, 5ЕБЕО ІЮ МО:2, 5БО ІЮО МО:3, 5БО ІЮО МО:4 и 5ЕБЕО ІЮО МОС5. У бажаному варіанті реалізації винаходу композиція (ї) додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок, який має відмінну послідовність, обрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:1, БЕО ІЮ МО:2, ЗЕО ІЮО МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4 и БЕО ІО МО:5. Краще, якщо композиція (ії) додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок, який має додаткову відмінну послідовність, обрану з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО:1, БЕО ІЮ МО:2, БЕО ІЮ МО:3, 5ЕО ІЮ МО:4 и 5ЕО ІО МО:5.

У бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор в першій композиції (ії) містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з БЕО ІЮ МО:1. У бажаному варіанті реалізації винаходу композиція (ії) додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з БЕО ІЮ МО:2. У бажаному варіанті реалізації винаходу композиція (і) додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з ЗЕО ІО МО:3.

У ще одному бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор в композиції (її) містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок щонайменше чотирьох підтипів філовірусу.

Краще, якщо зазначений ММА-вектор містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенні білки з 60 чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІЮО МО: 4 і ЗЕО

ІО МО: 5.

Передбачається, що способи, вакцини і композиції, описані в цьому документі, можуть бути втілені в наборі. Наприклад, в одному варіанті реалізації даний винахід може включати набір, що містить: () першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу або по суті аналогічний антигенний білок, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і (і) другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки щонайменше двох підтипів філовірусу або по суті аналогічні антигенні білки, разом з фармацевтично прийнятним носієм; при цьому одна з композицій являє собою "прайм"-композицію, а інша композиція являє собою "буст"-композицію.

Тому в бажаному варіанті реалізації даний винахід відноситься до комбінованої вакцини, набору або застосування, при цьому аденовірусний вектор в першій композиції (ї) містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з ЗЕО ІЮ МО: 1; і при цьому ММА- вектор в композиції містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки з чотирьох різних підтипів філовірусу, що мають 5ЕО ІЮ МО: 1, БЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІЮ МО: 4 і БЕО ІЮ МО: 5.

У ще одному бажаному варіанті реалізації даний винахід відноситься до комбінованої вакцини, набору або застосування, при цьому перша композиція містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує перший антигенний білок з ЗЕО ІЮ МО: 1, аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує другий антигенний білок з БЕО ІЮ МО: 2, аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує третій антигенний білок з зФЕО ІЮ МО: 3; і при цьому ММА- вектор в композиції (ії) містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенні білки з чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІЮ МО: 4 ії БЕО ІЮ МО: 5.

У бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусні вектори, що містяться в комбінованій вакцині, наборі за даним винаходом, або аденовірусні вектори, що використовуються для створення захисної імунної відповіді на щонайменше один з підтипів філовірусу, являють собою гАдаг6- або глаз5-вектори. У бажаному варіанті реалізації цього застосування "буст"-композицію вводять через 1-12 тижнів після "прайм"- композиції.

Один додатковий загальний аспект даного винаходу стосується способу індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта, причому зазначений спосіб включає: а. введення суб'єкту першої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний глікопротеїн першого підтипу філовірусу або по суті аналогічний антигенний білок; і р. введення суб'єкту другої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білои щонайменше двох штамів філовірусу або по суті аналогічні антигенні білки; при цьому етапи (а) і (б) здійснюють у будь-якому порядку.

В окремих випадках реалізації винаходу перша композиція (ії) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу. В інших варіантах реалізації винаходу перша композиція додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу.

У іншому варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор в першій композиції містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з БЕО ІЮ МО:1. У бажаному варіанті реалізації винаходу композиція додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з БЕО ІЮ МО:2. Краще, якщо композиція додатково містить аденовірус, який містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок з зЗЕО ІЮО МО: 3.

У більш бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор у другій композиції містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенний білок щонайменше чотирьох підтипів філовірусу.

Краще, якщо зазначений ММА-вектор містить нуклеїнову кислоту, що кодує антигенні білки з чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІЮО МО: 4 і ЗЕО

ІО МО: 5.

Тому в бажаному варіанті реалізації даний винахід відноситься до способу індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта при цьому аденовірусний вектор в першій композиції містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок з БЕО ІЮ МО:1; і при цьому

ММУА-вектор в другій композиції містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки з чотирьох різних підтипів філовірусу, що мають 5ЕО ІЮО МО: 1, БЕО ІЮО МО: 2, БЕО ІЮ МО: 4 і БЕО ІЮО МО: 5.

У ще одному бажаному варіанті реалізації даний винахід відноситьсядо способу індукування бо імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта, при цьому перша композиція містить аденовірус,

що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує перший антигенний білок з БЕО ІЮ МО: 1, аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує другий антигенний білок з ЗЕО ІЮ МО: 2, аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує третій антигенний білок з БЕО ІЮО МО: 3; і при цьому

ММУА-вектор в другій композиції містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки з чотирьох різних підтипів філовірусу, що мають 5ЕО ІЮО МО: 1, БЕО ІЮО МО: 2, БЕО ІЮ МО: 4 і БЕО ІЮО МО: 5.

У бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусні вектори, що використовуються в способі за даним винаходом, являють собою гАаг2г6- або гааз5-вектори. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу етап (р) зазначеного способу проводиться через 1-12 тижнів після етапу (а).

В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "прайм"-вакцинація, тобто етап (а), проводиться в тиждень 0, з наступною "буст"-вакцинацією, тобто етапом (Б), в тиждень 1-10, бажаніше -- в тиждень 6-10, і ще бажаніше -- в тиждень 8. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "прайм"-вакцинація, тобто етап (а), проводиться в тиждень 0, з наступною "буст"- вакцинацією, тобто етапом (б), в тиждень 1-4, бажаніше - в тиждень 1, 2 або 4.

В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "прайм"-вакцинація, тобто етап (б), проводиться в тиждень 0, з наступною "буст"-вакцинацією, тобто етапом (а), в тиждень 1-10, бажаніше -- в тиждень 6-10, і найбажаніше -- в тиждень 8. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "прайм" -вакцинація, тобто етап (Б), проводиться в тиждень 0, з наступною "буст"- вакцинацією, тобто етапом (а), в тиждень 1-4, бажаніше - в тиждень 1, 2 або 4.

У бажаному варіанті реалізації винаходу зазначений спосіб включає "прайм"- вакцбнацію імунологічно ефективною кількістю одного або більше гАа26-векторів, що експресують один або більше антигенних білків філовірусу, з наступною "буст"- вакцинацією імунологічно ефективною кількістю одного або більше векторів, що відрізняються від гАагб, бажаніше - ММА-векторів, що експресують один або більше глікопротеїнів філовірусу або по суті аналогічних глікопротеїнів.

У бажаних варіантах реалізації цього винаходу один або більше філовірусів являють собою

Еболавіруси або віруси Марбург. Еболавірус може бути будь-якого виду, наприклад, еболавірус

Заїр (ЕВОМ) і еболавірус Судан (ЗОМ), Рестон, Бундібуджіо, лісу Таї. Вірус Марбург (МАКМ) також може бути будь-якого виду. Типові амінокислотні послідовності придатних антигенних білків філовірусу наведені в ЗЕО ІЮ МО: 1 до ЗЕО ІО МО: 5.

Зо КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

Попереднє короткий виклад, а також подальший докладний опис винаходу, будуть більш зрозумілі при прочитанні їх в поєднанні з доданими графічними матеріалами. Слід розуміти, що винахід не обмежується наведеними точними варіантами реалізації, показаними на графічних матеріалах.

Файл патенту або заявки містить щонайменше одне графічне зображення, виконане в кольорі. Копії цього патенту або опублікованої патентної заявки з кольоровим графічним зображенням(ями) будуть надані патентним відомством за запитом і після сплати необхідного мита.

На графічних матеріалах:

На Фіг. 1 охарактеризовані групи досліджуваних тварин;

На Фіг. 2 показаний експериментальний дизайн дослідження;

На Фіг. З показаний отриманий результат після інфікування штамом вірусу Ебола Заїр Кікм/й 1995 для інфікування;

На Фіг. 4 показана специфічна гуморальна імунна відповідь на глікопротеїн вірусу Ебола

Заїр (оцінена за допомогою ЕГІ5ЗА), що спостерігалася в дослідженні на тваринах: дуже високі титри антитіл були отримані незалежно від режимів вакцинації (НД - момент часу не аналізували);

На Фіг. 5 показана специфічна гуморальна імунна відповідь на глікопротеїн вірусу Судан

Сши (оцінена за допомогою ЕГІЗА), що спостерігалася в дослідженні на тваринах: дуже високі титри антитіл були отримані незалежно від режимів вакцинації (НД - момент часу не аналізували);

На Фіг. 6 показана специфічна гуморальна імунна відповідь на глікопротеїн вірусу Марбург

Ангола (оцінена за допомогою ЕГІ5ЗА), що спостерігалася в дослідженні на тваринах: дуже високі титри антитіл були отримані незалежно від режимів вакцинації (НД - момент часу не аналізували); і

На Фіг. 7 показана специфічна клітинна імунна відповідь на глікопротеїн (ГП) вірусів ХЕВОМ,

ЗЕВОМ і МАКМА, проаналізована за допомогою ІФН-у ЕГІБРОТ;

На Фіг. 8 показана специфічна імунна відповідь на ГП 2ЕВОМ, що проаналізована за допомогою анти-ЕВОМ ГП ЕГІЗА, при якій на день 50 спостерігали вищу гуморальну імунну бо відповідь після "буст"-іммунізації у пацієнтів, імунізованих ММА в якості "прайм"- вакцини і Ад26 в якості "буст"-вакцини, в порівнянні зі зворотним порядком вакцинації;

На Фіг. 9 показана специфічна Т-клітинна відповідь на ГП 2ЕВОМ в організмі людини, проаналізована за допомогою аналізу ЕГІЗрої;

На Фіг. 10 показана специфічна СО8-- клітинна імунна відповідь на ГП 2ЕВОМ у людини, проаналізована за допомогою аналізу ІС5;

На Фіг. 11 показана активність специфічної СЮО8- Т-клітинної відповіді на ГП ЕВОМ в організмі людини, проаналізованої за допомогою аналізу ІС5, з 28-денним інтервалом між "прайм"- і "буст"-введенням;

На Фіг. 12 показана активність специфічної СО8- Т-клітинної відповіді на ГП ЕВОМ в організмі людини, проаналізованої за допомогою аналізу ІС5, з 56-денним інтервалом "прайм- буст";

На Фіг. 13 показана специфічна СО4-- клітинна імунна відповідь на ГП 2ЕВОМ у людини, проаналізована за допомогою аналізу ІС5;

На Фіг. 14 показана активність специфічної СО4- Т-клітинної відповіді на ГП ЕВОМ в організмі людини, проаналізованої за допомогою аналізу ІС5, з 28-денним інтервалом "прайм- буст";

На Фіг. 15 показана активність специфічної СО8- Т-клітинної відповіді на ГП ЕВОМ в організмі людини, проаналізованої за допомогою аналізу ІС5, з 56-денним інтервалом "прайм- буст";

На Фіг. 16 показана імунна відповідь, індукована "прайм'-імунізацією з використанням даг6.2ЕВОМ, з наступною "буст"-імунізацією ММА-ВМ-Ніїо через 14 днів, оцінена за допомогою

ЕПІЗА (А), ЕІ Ізрої (В) і ІС (С і 0);

На Фіг. 17 показана специфічна клітинна імунна відповідь на ГП 2ЕВОМ, проаналізована за допомогою анти-ЕВОМ ГП ЕГ ІА;

На Фіг. 18 показана специфічна Т-клітинна відповідь на ГП 2ЕВОМ в організмі людини, проаналізована за допомогою аналізу ЕГІЗроїс

На Фіг. 19 показана сильна і збалансована СО4-- (А) і СО8-- (В) клітинна імунна відповідь, специфічна для ГП 2ЕВОМ, в організмі людини, проаналізована за допомогою аналізу ІС, і активність ЕВОМ ГП-специфічних СО. (С) і СО4- (0) Т-клітинних відповідей в організмі

Зо людини, проаналізованих за допомогою аналізу ІС5, при використанні ММА в якості "прайм"- імунізації і Аа26 в якості "буст"-імунізації через 14 днів.

На Фіг. 20 продемонстровані ГП-зв'язуючі антитіла ЕВОМ Махуїпда, індуковані вакцинацією із застосуванням схем Ааг26.2ЕВОМ/ММА-ВМ-БйЙоО і ММА-ВМ-БПо/Ада26.2ЕВОМ, виявлені за допомогою ГП ЕГІЗА. Схеми вакцинації вказані під віссю х. Високий рівень ІМ і стандартний рівень ІМ співвідносяться з дозою і способом введення ММА ВМ Ріо. Горизонтальна пунктирна лінія показує нижню межу чутливості (НМУ).

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Різні публікації, статті та патенти цитуються або описуються в розділі "Рівень техніки" і по всьому опису; при цьому кожна з цих робіт включена в даний опис шляхом посилання у повному обсязі. Обговорення документів, актів, матеріалів, пристроїв, виробів тощо, які були включені в даний опис, наведено для цілей забезпечення контексту для цього винаходу. Таке обговорення не є визнанням того, що будь-яке або всі ці питання є частиною попереднього рівня техніки щодо будь-яких описаних або заявлених винаходів.

Якщо не вказано інше, всі технічні та наукові терміни, використані в цьому документі, мають значення, що збігаються із загальноприйнятими серед фахівців в галузі техніки, до якої відноситься цей винахід. В іншому випадку, деякі терміни, що використовуються в цьому документі, мають значення, зазначені в описі. Всі патенти, опубліковані патентні заявки і публікації, цитовані в цьому документі, включені шляхом посилання, так, ніби у повному обсязі викладені в цьому документі. Слід зазначити, що при використанні в цьому документі і доданій формулі винаходу форми однини включають посилання на множину, якщо з контексту явно не випливає інше.

Якщо не вказано інше, термін "щонайменше", який передує ряду елементів, слід розглядати як такий, що стосується кожного елементу в ряду. Фахівці в цій галузі техніки зрозуміють або зможуть визначити безліч еквівалентів конкретних варіантів реалізації винаходу, описаних в цьому документі, із застосуванням не більше ніж стандартних експериментів. Такі еквіваленти охоплюються цим винаходом.

В цьому описі і формулі винаходу, якщо контекст не вимагає іншого, слово "містить" і його варіації, як-от "включає" і "що містить", слід розуміти як таке, що включає вказане ціле значення або етап або групу цілих значень або етапів, але не виключає будь-яке інше ціле значення або бо етап або групу цілих значень або етапів. В цьому описі термін "що містить" може бути замінений терміном "який містить" або "що включає" або терміном "який має", що іноді використовується в цьому описі. Кожен із зазначених вище термінів (що містить, який містить, що включає, який має) у всіх випадках при використанні в контексті аспекту або варіанту реалізації цього винаходу може бути замінений терміном "складається з", хоча це є менш бажаним.

В контексті цього документа термін "складається з" виключає будь-який елемент, етап або інгредієнт, який не вказаний в елементі формули винаходу. В контексті цього документа термін "складається по суті з" не виключає матеріали або етапи, які не справляють істотного впливу на основні та нові характеристики заявленого винаходу.

В контексті цього документа сполучний термін "їі бо" між декількома перерахованими елементами розцінюється як такий, що охоплює індивідуальні та комбіновані варіанти.

Наприклад, коли два елементи сполучаються за допомогою "і/або", перший варіант відноситься до застосування першого елемента без другого. Другий варіант відноситься до застосування другого елементу без першого. Третій варіант відноситься до застосування першого і другого елементів разом. Припускається, що будь-який з цих варіантів підходить за змістом, і, отже, відповідає вимозі терміна "і/або", що використовується в цьому описі. Також припускається, що паралельна застосовність більш ніж одного з варіантів підходить за змістом, і, отже, відповідає вимозі терміна "і/або".

В контексті цього документа термін "суб'єкт" означає будь-яку тварину, бажано - ссавця, найбажаніше - людину, яка буде пролікованою або вже пролікована за допомогою способу відповідно до варіанту реалізації винаходу. Термін "ссавець" включає будь-якого ссавця.

Приклади ссавців включають, але не обмежуються ними, корів, коней, овець, свиней, кішок, собак, мишей, щурів, кроликів, морських свинок, мавп, людину і т.д., бажано - людину.

В контексті цього документа термін "захисний імунітет" або "захисна імунна відповідь" означає, що вакцинований суб'єкт здатний контролювати інфекцію, викликану патогенним агентом, проти якого була проведена вакцинація. Як правило, у суб'єкта з виробленою "захисною імунною відповіддю" розвиваються клінічні симптоми тільки від легкого до помірного ступеня тяжкості або взагалі не розвиваються. Як правило, суб'єкт, що має "захисну імунну відповідь" або "захисний імунітет" проти певного агента, не вмирає в результаті інфекції, викликаної зазначеним агентом.

Термін "аденовірусний капсидний білок" відноситься до білка на капсиді аденовірусу (наприклад, АЯ 26 або да 35), який бере участь у визначенні серотипу та/або тропізму конкретного аденовірусу. Аденовірусні капсидних білки, як правило, включають волокнисті, пентонові і/або гексонові білки. В контексті цього документа "капсидний білок Ай26" або "капсидний білок АаЗ5" може бути, наприклад, химерним капсидним білком, який включає щонайменше частину капсидного білка Аа26 або АаЗ5.У деяких варіантах реалізації винаходу капсидний білок являє собою повний капсидний білок з АЧ26 або АазЗ5. У деяких варіантах реалізації винаходу гексоновими, пентоновими і волокнистими білками є білки з Ааг26б або дазь.

В контексті цього документа терміни "ад'ювант" і "Іімуностимулятор" використовуються як взаємозамінні, і визначаються як одна або більше речовин, які викликають стимуляцію імунної системи. В контексті цього документа ад'ювант використовують для посилення імунної відповіді на аденовірусні і/або ММА-вектори за даним винаходом.

Термін "відповідний" при застосованні щодо позиції амінокислотних залишків в послідовності, означає відповідні позиції в безлічі послідовностей, за умови, що ці послідовності оптимально вирівняні.

Терміни "ідентичний" або відсоток "ідентичності" в контексті двох або більше нуклеїнових кислот або поліпептидних послідовностей (наприклад, глікопротеїнів філовірусу і полінуклеотидів, які кодують їх) відносяться до двох або більше послідовностей або підпослідовностей, які є однаковими або мають зазначений відсоток амінокислотних залишків або нуклеотидів, які є однаковими, при порівнянні і вирівнюванні для максимальної відповідності що вимірюється за допомогою одного з наступних алгоритмів порівняння послідовностей або шляхом візуального огляду.

При порівнянні послідовностей зазвичай одну послідовність розглядають як еталонну, з якою порівнюють послідовності, які підлягають тестуванню. При використанні алгоритму для порівняння послідовностей, послідовність для тестування та еталонну послідовність вводять в комп'ютер, при необхідності позначають координати підпослідовностей і встановлюють параметри алгоритму для порівняння послідовностей. Алгоритм для порівняння послідовностей потім розраховує відсоток ідентичності для тестованих послідовностей відносно еталонної послідовності на підставі встановлених параметрів програми.

Оптимальне вирівнювання послідовностей для порівняння може бути проведено, бо наприклад, за допомогою алгоритму локальної гомології Сміта-Ватермана (Зтіїп 8. Умаїептап),

Аду. Аррі. май. 2: 482 (1981), за допомогою алгоритму вирівнювання гомології Нідлмана-Вунша (МееаІєтап 8 МуУип5сі), У. Мої. Віої. 48: 443 (1970), за допомогою методу пошуку подібності

Пірсона-Ліпмана (Реагзоп 45 Гіртап), Ргос. Маг. Асайд. Зсі.О5БА85: 2444 (1988), за допомогою комп'ютерного забезпечення цих алгоритмів (САР, ВЕЗТРЇІТ, РА5ТА Її ТЕА5ЗТА в пакеті програм

УмМізсопзіп Сепеїййс5 Боймжаге РасКаде, Сепеїйс5 Соптриїег Сгоир, 575 Зсіепсе Ог., Медісон,

Вісконсін), або шляхом візуального огляду (див., загалом, Ситепі Ргоїосої5 іп МоїЇесшціаг Віоіоду,

ЕМАизирбеїеї а!., ед5., Сигепі Ргоїосої5, спільне підприємство Сгеепе Рибіїзпіпуд Аззосіацев, Іпс. і

Уопп УмМіеу 5 5оп5, Іпс., (1995 Доповнення) (А!йзибеї)).

Приклади алгоритмів, придатних для визначення відсотка ідентичності послідовностей і подібності послідовностей, являють собою алгоритми ВІ АБ5Т і ВІ А5Т 2.0, описані в АїїбспиЇ! єї а!., (1990) У. Мої. ВіоїЇ. 215: 403-410 і Айбспивєї! еї аї. (1977) Мисівїс Асіа5 Нев. 25: 3389-3402, відповідно. Програмне забезпечення для проведення аналізів за алгоритмом ВІіІА5Т загальнодоступне в Національному центрі біотехнологічної інформації. Цей алгоритм включає первинну ідентифікацію пар послідовностей з високим балом (НОР) шляхом ідентифікації коротких слів з довжиною МУ в запитуваній послідовності, які або збігаються або відповідають деякому пороговому балу Т з позитивним значенням при вирівнюванні зі словом тієї ж довжини з бази даних послідовностей. Значення Т називається бальним порогом найближчого слова (Айзспиц! еї аіЇ, вище). Ці первинні попадання найближчих слів відіграють роль "затравки" для початку пошуку більш довгих НОР, що містять їх. Влучення слів потім поширюються в обох напрямках уздовж кожної послідовності доти, поки може збільшуватися сукупний бал вирівнювання.

Для нуклеотидних послідовностей сукупні бали обчислюються з використанням параметрів

М (бал винагороди для пари залишків, що співпадають; завжди » 0) ії М (штрафний бал за залишки, що не співпадають; завжди «0).При обчисленні сукупного балу для амінокислотних послідовностей використовують матрицю підрахунку балів. Розширення влучень слів у кожному напрямку припиняється, якщо: сукупний бал вирівнювання зменшується на величину Х від його максимального досягнутого значення; сукупний бал направляється до нуля або нижче, в результаті накопичення одного або більше вирівнювань залишків з негативним балом; або досягається кінець будь-якій послідовності. Параметри алгоритму ВГА5Т МУ, Т і Х визначають

Зо чутливість і швидкість вирівнювання. У програмі ВГА5ЗТМ (для нуклеотидних послідовностей) використовуються в якості параметрів за замовченням: довжина слова (М/), що дорівнює 11, очікуване значення (Е), що дорівнює 10, М-5, М--4 і порівняння обох ланцюгів. Для амінокислотних послідовностей в програмі ВІ АЗТР використовуються в якості параметрів за замовченням: довжина слова (МУ), що дорівнює З, очікуване значення (Е), що дорівнює 10, і матриця підрахунку балів ВОЗИОМб2 (див. Непікой апа Непікої, Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА 89:10915 (1989)).

У доповненні до розрахунку відсотка ідентичності послідовностей алгоритм ВІ А5Т також виконує статистичний аналіз подібності між двома послідовностями (див., Наприклад, Каїїп 5

АїївсНи!, Ргос. Магі. Асад. сі. ОБАЗО: 5873-5787 (1993)). Один показник подібності, наданий алгоритмом ВІ АБТ, являє собою найменшу суму ймовірностей (Р(М)), яка є позначенням ймовірності, з якою випадково виникатиме збіг між двома нуклеотидними або амінокислотними послідовностями.Наприклад, нуклеїнову кислоту вважають подібною з еталонною послідовністю, якщо найменша сума ймовірності при порівнянні тестованої нуклеїнової кислоти з еталонною нуклеїновою кислотою буде менш ніж близько 0,1, бажаніше - менше ніж близько 0,01 і найбажаніше - менше ніж близько 0,001.

Додатковою ознакою того, що дві послідовності нуклеїнової кислоти або два поліпептиди є по суті ідентичними, є той факт, що поліпептид, який кодується першою нуклеїновою кислотою може імунологічно перехресно реагувати з поліпептидом, які кодуються другою нуклеїновою кислотою, як описано нижче. Таким чином, поліпептид, як правило, є по суті ідентичним з другим полипептидом, наприклад, коли два пептиди відрізняються тільки консервативними замінами. Іншою ознакою того, що дві послідовності нуклеїнової кислоти є по суті ідентичними, є той факт, що дві молекули гибрідизуються одна з одною в жорстких умовах, як описано нижче.

Термін "по суті подібний" в контексті антигенних білків філовірусу відповідно до даного винаходу вказує на те, що поліпептид містить послідовність щонайменше з 90 95, переважно щонайменше з 95 95 ідентичністю послідовності з еталонною послідовністю у вікні порівняння з 10-20 амінокислот. Відсоток ідентичності послідовності визначається шляхом порівняння двох оптимально вирівняних послідовностей у вікні порівняння, при цьому частина полінуклеотидної послідовності у вікні порівняння може містити вставки або делеції (тобто, пропуски) в порівнянні з еталонною послідовністю (яка не містить вставок або делецій) для оптимального бо вирівнювання двох послідовностей. Відсоток розраховується шляхом визначення числа положень, в яких ідентичні основи нуклеїнових кислот або амінокислотні залишки визначаються в обох послідовностях, з отриманням числа положень, що співпадають, ділення числа положень, що співпадають, на загальне число положень у вікні порівняння і множення результату на 100 для отримання відсотка ідентичності послідовностей.

В даному винаході показано, що гетерогенні "прайм-буст" комбінації, зокрема, "прайм" - введення А(26 з подальшим "буст"--введенням ММА, і навпаки, виявилися несподівано ефективними для вироблення захисної імунної відповіді проти одного або більше підтипів філовірусів.

Антигенні білки філовірусу

Віруси Ебола, а також генетично споріднений вірус Марбург, являють собою філовіруси, з якими асоціюються спалахами високолетальної геморагічної лихоманки у людини і приматів в

Північній Америці, Європі та Африці (Реїегв5, С) еї а. в: Рівїа5 Мігоіоду, еаз. РієЇїа5, В.М. еї аї. 1161-1176, РНіаадеїрнНіа, Іірріпсон-Намеп, 1996; Реїєгв, С.У. єї аіІ. 1994 бетіп Міо! 5:147-154).

Незважаючи на те, що визначені кілька підтипів вірусів, їх генетична організація є подібною, при цьому кожен з вірусів містить сім лінійно вибудованих генів. В числі вірусних білків глікопротетнова оболонка існує в двох альтернативних формах: секретований розчинний глікопротеїн (срГП) з масою 50-70 кілодальтон (кДа) і трансмембранний глікопротеїн (ГП) з масою 130 кДа, згенерованих за допомогою редагування РНК, яка опосередковує проникнення вірусу (Реїегв5, СУ еї аї. в: Рієїд5 Мігоіоду, еавз. Ріє!а5, В.М. еї а. 1161-1176, РіпйПаде!рнНіа, Іірріпсой-

Вамеп, 1996; Запспе?, А. єї аі. 1996 РМАБ ОБА 93:3602-3607). Інші структурні генні продукти включають нуклеопротеїн (НП), матричні білки УР24 і МР40, передбачувані неструктурні білки

МРЗО ї МРЗ5 їі вірусну полимеразу (огляд наведено в Реїєг5, СУ єї аї. В: Рієїд5 Мігоіоду, ев.

Ніеід», В.М. еї аї. 1161-1176, РпПадеї!рпіа, І ірріпсоїй-Намеп, 1996).

Молекули нуклеїнової кислоти, що містяться в аденовірусному та ММА-векторах, можуть кодувати структурні генні продукти будь-якого виду філовірусу, як-от підтипи Заїр (типовий вид, який також згадується в цьому документі як 7ЕВОМУ), Судан (також згадується в цьому документі як БЕВОМ), Рестон, Бундібуджіо і Берег Слонової Кістки. Існує окремий вид вірусу - вірус

Марбург (також згадується в цьому документі як МАВМ).

Аденовірусні вектори і ММА-вектори за даним винаходом можуть бути використані для

Зо експресії антигенних білків, які являють собою білки, що містять антигенну детермінанту широкого спектру антигенів філовірусів. У типовому і бажаному варіанті реалізації цього винаходу вектори включають нуклеїнову кислоту, що кодує трансмембранну форму вірусного глікопротеїну (ГП). В інших варіантах реалізації цього винаходу вектори відповідно до винаходу можуть кодувати секретовану форму вірусного глікопротеїну (срГП) або вірусний нуклеопротеїн (НП).

Фахівцю в цій галузі техніки буде зрозуміло, що молекули нуклеїнових кислот, що кодують антигенний білок філовірусу, можуть бути модифіковані, наприклад, молекули нуклеїнових кислот, зазначені в цьому документі, можуть піддаватися мутації до тих пір, поки модифікований експресований білок викликає імунну відповідь проти патогену або захворювання. Таким чином, в контексті цього документа термін "антигенний білок" або "білок філовірусу" відноситься до білка, який містить щонайменше одну антигенну детермінанту білка філовірусу, описаного вище. Термін охоплює глікопротеїни філовірусу (тобто генні продукти філовірусу) або нуклеопротеїн філовірусу, а також рекомбінантні білки, які містять один або більше глікопротеїнових детермінант філовірусу. Термін антигенні білки також охоплює антигенні білки, які по суті є однаковими.

У деяких варіантах реалізації винаходу білок може бути мутований настільки, щоб стати менш токсичним по відношенню до клітин (див., наприклад, УМО/2006/037038), або може експресуватися з підвищенням або зниженням рівня в клітинах. Даний винахід також включає вакцини, що містять комбінацію молекул нуклеїнових кислот. Наприклад, і без обмеження, молекули нуклеїнових кислот, що кодують ГП, срГП і НП в таких штамах Еболавіруса, як Заїр,

Судан, Марбург і Берег Слонової Кістки/лісу Таї, можуть бути об'єднані в будь-якій комбінації в одній композиції вакцини.

Аденовіруси

Аденовірус відповідно до даного винаходу відноситься до родини Адепомігідає і в бажаному варіанті реалізації є вірусом, який належить до роду Мазхіадепоміги5. Це може бути не тільки аденовірус людини, але і аденовірус, який інфікує інші види, включаючи, але не обмежуючись ними, аденовірус великої рогатої худоби (наприклад, аденовірус З великої рогатої худоби,

ВАамЗ), аденовірус собаки (наприклад, САаМ2), аденовірус свині (наприклад, РАЯМЗ або 5) або аденовірус приматів (який включає аденовірус мавпи і аденовірус інших приматів, як-от бо аденовірус шимпанзе або аденовірус горили). Краще, якщо аденовірус є аденовірусом людини

(НАЙМ або АдйНи; в цьому винаході описується аденовірус людини, якщо згадується Ай без вказівки виду, наприклад, коротке позначення "Ад5" означає те ж саме, що і НАЯМ»5, який є серотипом 5 аденовірусу людини), або мавпячим аденовірусом, як-от аденовірус шимпанзе чи горили (СпАЯ, даснт або ЗАМ).

Більшість сучасних досліджень були виконані з використанням аденовірусів людини, при цьому аденовіруси людини є бажаними відповідно до деяких аспектів цього винаходу. У деяких бажаних варіантах реалізації рекомбінантний аденовірус відповідно до даного винаходу в своїй основі має аденовірус людини. У бажаних варіантах реалізації цього винаходу рекомбінантний аденовірус в своїй основі має серотип 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49 або 50 аденовірусу людини.

Відповідно до особливо бажаного варіанту реалізації цього винаходу, аденовірус є аденовірусом людини одного з серотипів 26 або 35.

Перевагою цих серотипів є низька серорозповсюдженість і/або низькі титри попередніх нейтралізуючих антитіл в людській популяції. Отримання гАа26-векторів описане, наприклад, в публікації УМО 2007/104792 і в АББіпкК еї аї., (2007) Міго! 81(9): 4654-63, зміст яких у повному обсязі включений в цю заявку шляхом посилання. Типові послідовності генома АЧ26 можна знайти в базі СепВапК під номером доступу ЕЕ 153474 і в 5ЕБЕО І МОЯ у У 2007/104792.Отримання гааз5-векторів описане, наприклад, в патенті США Мо 7270811, у МО 00/70071 їі в Модеї!5 еї аї., (2003) У Мігої! 77 (15): 8263-71, всі з яких повністю включені в цю заявку шляхом посилання. Типові послідовності генома АЯаЗ5 можна знайти в базі СепВапк під номером доступу АС 000019 і на Фіг. б у МО 00/70071.

Аденовіруси приматів зазвичай також мають низьку серорозповсюдженість і/або низькі титри попередніх нейтралізуючих антитіл в людській популяції, при цьому відомо про значну кількість наукових робіт з використанням аденовірусних векторів шимпанзе (наприклад, 56083716; УМО 2005/071093; МО 2010/086189; МО 2010085984; Рагіпа єї аї, 2001., У Міго! 75: 11603-13; Сонеп єї аі, 2002 0 Сеп Міго! 83: 151-55; Кобіпдег єї аІ, 2006, Мігоїсду 346: 394-401; Таївів евї аї., 2007,

Моїесшіаг Тнегару 15: 6008-17; див. також огляд Ваподагі і МіНа!, 2006, Массіпе 24: 849-62; і огляд

Їазагто і Епі 2009, Мо! Тег 17: 1333-39). Отже, в інших бажаних варіантах реалізації рекомбінантний аденовірус відповідно до даного винаходу в своїй основі має аденовірус приматів, наприклад, аденовірус шимпанзе. У деяких варіантах реалізації винаходу рекомбінантний аденовірус в своїй основі має аденовірус приматів типу 1, 7, 8, 21, 22, 23, 24, 25,26, 27.1, 28.1, 29, 30, 31.1, 32, 33, 34, 35.1, 36, 37.2, 39, 40.1, 41.1, 42.1, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 або 5А7Р.

Аденовірусні гАа26- і глаз5-вектори

У бажаному варіанті реалізації даного винаходу аденовірусні вектори містять капсидні білки з двох рідкісних серотипів: Аа26 і Аазь. У типовому варіанті реалізації винаходу вектор являє собою вірус гла26 або гдазь.

Таким чином, вектори, які можуть бути використані в даному винаході, містять капсидний білок Ааг26 або дазз5 (наприклад, волокнистий, пентоновий або гексоновий білок). Фахівцю буде зрозуміло, що немає необхідності використовувати весь капсидний білок Ад26 або даз» у векторах за цим винаходом. Таким чином, химерні капсидні білки, які включають щонайменше частину капсидного білка Аа2б6 або даз5, можуть бути використані у векторах за цим винаходом. Вектори за цим винаходом можуть також включати капсидні білки, в яких волокнистий, пентоновий або гексоновий білки отримують кожен з різних серотипів, за тієї умови, що щонайменше один капсидний білок отримують з Аа26 або Ааз5. У бажаних варіантах реалізації винаходу волокнистий, пентоновий або гексоновий білки отримують кожен з Ад26 або кожен з дазь.

Фахівцю буде зрозуміло, що елементи, отримані з безлічі серотипів, можуть бути об'єднані в один рекомбінантний аденовірусний вектор. Таким чином може бути продукований химерний аденовірус, який поєднує в собі бажані властивості з різних серотипів. Таким чином, в деяких варіантах реалізації химерний аденовірус за даним винаходом може поєднувати відсутність раніше виробленого імунітету на серотипи Аа26 і Адаз5 з характеристиками, як-от температурна стабільність, можливість комплектації, прикріплення, вихід продукції, перенаправлення або оптимізація інфекції, стабільність ДНК в клітині-мішені і таке інше.

У деяких варіантах реалізації рекомбінантний аденовірусний вектор, придатний для винаходу, є похідним в основному або повністю від Ааз5 або Аа26 (тобто вектор являє собою гдаз5 або гааг6).У деяких варіантах реалізації винаходу аденовірус є дефектним по реплікації, наприклад, через те, що він містить делеціцю в Е1-області генома. Для аденовірусів за винаходом, похідних від Аа26 або даз»ь, характерним є обмін Е4-опб- кодувальної послідовності аденовірусу на Е4-огіб аденовірусу людської підгрупи С, як-от вірус Ай5. Це забезпечує бо розмноження таких аденовірусів в відомих доповнюючих клітинних лініях, які експресують гени

Е1 Аа», як-от, наприклад, клітини 293, клітини РЕК.Сб тощо (див., наприклад Намепада еї аї, 2006, У Сеп Міг! 87: 2135-43; МО 03/104467). У деяких варіантах реалізації цього винаходу аденовірус являє собою серотип 35 аденовірусу людини з делецією в Е1-області, в яку була клонована нуклеїнова кислота, що кодує антиген, і з Е4 огіб-областю Ай5. У деяких варіантах реалізації цього винаходу аденовірус являє собою серотип 26 аденовірусу людини з делецією в

Е1-області, в яку була клонована нуклеїнова кислота, що кодує антиген, і з Е4 огіб-областю Аа5.

Для аденовірусу Ааз5 характерне збереження 3'-кінця відкритої рамки зчитування Е1В 55К в аденовірусі, наприклад, 166 п.н. безпосередньо перед відкритою рамкою зчитування ріхХ або фрагментом, що містить такий елемент, як-от фрагмент 243 п.н. безпосередньо перед старт- кодоном ріХ, відміченим на 5'-кінці сайтом рестрикції В5иЗбіІ, оскільки це збільшує стабільність аденовірусу через те, що промотор гена ріХ частково локалізується в цій області (див., наприклад, Намепда еї аїЇ, 2006, вище; УМО 2004/001032).

Способи отримання рекомбінантних аденовірусних векторів добре відомі в цій газузі техніки.

Отримання гАа26-векторів описане, наприклад, в публікації УМО 2007/104792 і в АБбіпк еї аї., (2007) Мігої! 81 (9): 4654-63. Типові послідовності генома Аа26 можна знайти в базі СепВапк під номером доступу ЕЕ 153474 і в 5БЕО І МО: 1 у МО 2007/104792. Отримання глаз5-векторів описане, наприклад, в патенті США Мо 7270811 і в Моде!5 еї а!., (2003) 9 Мігої! 77 (15): 8263-71.

Типову послідовність генома АйЗ5 можна знайти в базі СепВапк під номером доступу

АС 000019.

В одному варіанті реалізації винаходу, вектори, придатні для цього винаходу, включають вектори, які описані в публікації М/О2012/082918, опис якої включений в цей документ шляхом посилання у повному обсязі.

Як правило, вектор, придатний для винаходу, отримують з використанням нуклеїнової кислоти, що містить повний рекомбінантний аденовірусний геном (наприклад, плазміду, косміду або бакуловірусний вектор). Таким чином, в цьому винаході також пропонуються виділені молекули нуклеїнової кислоти, які кодують аденовірусні вектори за винаходом. Молекули нуклеїнових кислот за цим винаходом можуть існувати у формі РНК або у формі ДНК, отриманих за допомогою клонування або синтетичним способом. ДНК може бути дволанцюговою або одноланцюговою.

Зо Аденовірусні вектори, придатні для винаходу, як правило, є дефектними по реплікації. У цих варіантах реалізації даного винаходу вірус приводиться в стан дефектного по реплікації шляхом видалення або інактивації областей, критичних для реплікації вірусу, як-от Е1-область. Області можуть бути по суті видалені або інактивовані, наприклад, шляхом вбудовування гена, що становить інтерес (зазвичай пов'язаного з промотором). У деяких варіантах реалізації, вектори за цим винаходом можуть містити делеції в інших областях, як-от Е2-, ЕЗ3- або Е4-області, або вбудовування гетерологичних генів, пов'язаних з промотором. Для Е2- і/або Е4-мутованих аденовірусів, як правило, Е2- і чи Е4- доповнюючі клітинні лінії використовуються для створення рекомбінантних аденовірусів. Мутації в ЕЗ-області аденовірусу не обов'язково повинні доповнюватися клітинною лінією, оскільки для реплікації ЕЗ не потрібна.

Пакувальна клітинна лінія, як правило, використовується для отримання достатньої кількості аденовірусних векторів за даним винаходом. Пакувальна клітина являє собою клітину, яка включає ті гени, які були видалені або інактивовані в дефектному по реплікації векторі, тим самим дозволяючи вірусу реплікуватися в клітині. Придатні клітинні лінії включають, наприклад,

РЕК.Сб, 911, 293 і Е1 А549.

Як було зазначено вище, у векторах може експресуватися безліч глікопротеїнів філовірусу.

При необхідності, гетерологічний ген, що кодує глікопротеїни філовірусу, може бути кодон- оптимізованим для забезпечення належної експресії в організмі хазяїна, який отримує лікування (наприклад, в організмі людини). Кодон-оптимізація являє собою технологію, яка широко застосовується в цій галузі техніки. Як правило, гетерологічний ген клонують в Е1- і/або ЕЗ3- область геному аденовірусу.

Гетерологічний ген філовірусу може контролюватися (тобто, бути функціонально пов'язаний 3) промотором, похідним від аденовірусу (наприклад, основним пізнім промотором), або може контролюватися гетерологічним промотором. Приклади придатних гетерологічних промоторів включають ЦМВ-промотор і РСОВ-промотор. У бажаному варіанті промотор розташований в касеті експресії вище від гетерологічного гена, що становить інтерес.

Як було зазначено вище, аденовірусні вектори, придатні для цього винаходу можуть включати широкий спектр глікопротеїнів філовірусу, відомих фахівцям в цій галузі техніки.

У бажаному варіанті реалізації винаходу, гАа-вектор(и) включає один або більше ГП, вибраних з групи, що складається з ГП еболавіруса Заїр (ЕВОМ), ГП еболавіруса Судан (ЗОМ), бо ГП вірусу Марбург (МАКУ,), і ГП, по суті аналогічних їм.

МУА-вектори

У ММА-векторах, придатних для цього винаходу, використовується атенуйований вірус, отриманий з модифікованого вірусу вісповакцини Анкара, який характеризується втратою здатності до репродуктивної реплікації в клітинних лініях людини. ММА-вектори експресують широкий спектр глікопротеїнов філовірусу, а також інші структурні білки філовірусу, як-от МР40 і нуклеопротеїн (НП).

В одному аспекті винаходу пропонується рекомбінантний модифікований вірус вісповакцини

Анкара (ММА), що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує антигенну детермінанту глікопротеїну (ГП) філовірусу, зокрема глікопротеїну оболонки. В іншому аспекті винаходу пропонується рекомбінантний ММА-вектор, що містить гетерологічну нуклеотидну послідовність, що кодує антигенну детермінанту глікопротеїну філовірусу, зокрема глікопротеїну оболонки, і гетерологічну нуклеотидну послідовність, що кодує антигенну детермінанту додаткового білка філовірусу.

ММА був отриманий в результаті більш ніж 570 послідовних пасажів дермального штаму вірусу вісповакцини Анкара на фібробластах курячих ембріонів |Хоріоалантоїсний вірус вісповакцини Анкара, СМА; для огляду див. Мауг еї аІ.(1975), Іптесійп 3, 6-14), який зберігається в Інституті вакцинації, Анкара, Туреччина, протягом багатьох років і використовується як основа для людської вакцини. Проте, у зв'язку з частими важкими ускладненнями після вакцинації, пов'язаними з вірусами вісповакцини, було зроблено кілька спроб створити більш атенуйовану і безпечнішу вакцину проти віспи.

У період з 1960 по 1974 рік професор Апіоп Мауг успішно атенуював СМА за допомогою більш ніж 570 безперервних пасажів в клітинах СЕЕ |Мауг еї а. (1975)). У різних моделях на тваринах показано, що отриманий ММА був авірулентним (|Мауг, А. 5 Баппег, К. (1978), ЮОем.

ВіоІ. єїапа. 41: 225-234). Як частина первинної розробки ММА в якості попередньої вакцини проти віспи, були проведені клінічні випробування з використанням ММА-517 в комбінації з І ієтег

ЕІвітєе ІЗІСКІ (1974), Ргем. Мей. 3: 97-101; їсКІ апа Носпвівіп-Міпіге! (1971), Мипси. Мед.

Муоспепзсйг. 113: 1149-1153 у суб'єктів з високим ризиком небажаних реакцій на вакцини. У 1976 році ММА, отриманий з посівного матеріалу ММА-571 (що відповідає 571-ому пасажу), був зареєстрований в Німеччині в якості "прайм" -вакцини в програмі парентеральної двоетапої

Зо вакцинації проти віспи. Згодом, ММА-572 застосували в близько 120 000 суб'єктів, вихідців з

Кавказу, переважно дітей у віці від 1 до З років, без повідомлень про серйозні побічні ефекти, хоча багато хто з суб'єктів перебували в групі високого ризику розвитку ускладнень, пов'язаних з вакцинальною хворобою (Мауг еї аї. (1978), 7епіга!|Бі. Васіегіо!. (В) 167:375-390). ММА-572 здали на зберігання в Європейську колекцію культур тваринних клітин під реєстраційним ЕСАСС

М94012707.

В результаті проведення пасажів з метою атенуації ММА виник цілий ряд різних штамів або ізолятів в залежності від числа пасажів, здійснених в клітинах СЕР. Наприклад, ММА-572 використовували в меншій дозі при попередній вакцинації в Німеччині під час програми ліквідації віспи, а ММА-575 широко використовували в якості вакцини в ветеринарії. В ММА, а також в ММА-ВМ, відмічається нестача близько 15 95 (31 т.п.н. від шести областей) генома в порівнянні з предковим вірусом СМА. Делеції впливають на кількість генів вірулентності і кола хазяїв, а також на ген тілець включення типу А. ММА-575 зданий на зберігання в Європейську колекцію культур тваринних клітин (ЕСАСС) 7 грудня 2000 року за реєстраційним Ме М00120707.

Атенуйований ММА СМА-вірус (модифікованого вірусу вісповакцини Анкара) отримували шляхом послідовного розмноження (понад 570 пасажів) СМА на первинних фибробластах курячих ембріонів.

Навіть при тому, що Мауг еї а ще в 1970-х роках продемонстрував, що ММА є сильно атенуйованим і авірулентним в організмі людини і ссавців, деякі дослідники повідомили, що

ММА в повному обсязі атенуюється в клітинних лініях ссавців і людини, оскільки в цих клітинах може відбуватися залишкова реплікація |Віапспага еї аїЇ. (1998), У. (еп. Мігої. 79: 1159-1167;

Сатоїї 5 Мо55 (1997), Мігоїосду 238: 198-211; патент США Мо 5185146; Атрбгозіпі еї а!. (1999), .).

Мецгозсі. Ве5. 55: 569). Передбачається, що результати, представлені в цих публікаціях, були отримані з використанням різних відомих штамів ММА, оскільки використані віруси по суті відрізняються за своїми властивостями, зокрема, за характером росту в різних клітинних лініях.

Така залишкова реплікація є небажаною з різних причин, включаючи проблеми, пов'язані з безпекою, при використанні в організмі людини.

Штами ММА, що мають поліпшені профілі безпеки для розробки більш безпечних продуктів, як-от вакцини або фармацевтичні препарати, були розроблені Вамагіап Могаїс.

ММА додатково культивований компанією Вамагіап Могдіс і позначений як ММА-ВМ, бо репрезентативний зразок якого був зданий на зберігання 30 серпня 2000 року в Європейську колекцію клітинних культур (ЕСАСС) під реєстраційним Мо. М00083008.ММА-ВМ додатково описаний в публікаціях УМО 02/42480 (05 2003/0206926) і УМО 03/048184 (005 2006/0159699), обидві з яких включені в цей документ шляхом посилання у повному обсязі.

ММУА-ВМ можна прикріпити і ввести в людські клітини, в яких гени, закодовані вірусом, експресуються дуже ефективно. ММА-ВМ сильно адаптований до первинних клітин фібробластів курячого ембріона (СЕР) і не реплікується в клітинах людини. У клітинах людини вірусні гени експресуються, і не утворюється жодного патогенного вірусу. За даними Центрів з контролю і профілактики захворювань в Сполучених Штатах для організму ММА-ВМ класифікується як рівень 1 біологічної безпеки. Препарати ММА-ВМ та його похідні вводили багатьом видам тварин, а також понад 2000 людським суб'єктам, включаючи індивідуумів з імунною недостатністю. Всі вакцинації виявилися в цілому безпечні і добре переносилися.

Незважаючи на високу атенуацію і знижену вірулентність, в доклінічних дослідженнях було показано, що ММА-ВМ викликає як гуморальну, так і клітинну імунну відповідь на вірус вісповакцини і гетерологічні генні продукти, які кодуються генами, клонованими в геномі ММА ГЕ.

Нагтег вї а!. (2005), Апіїміг. Тег. 10(2):285-300; А. Сов5та еї аї. (2003), Массіпе 22(1):21-9; М. ОЇ

Місоїа евї а. (2003), Нит. Сепе Тег. 14(14):1347-1360; М. бі Місоїа єї а)!. (2004), Сііп. Сапсег Вев., 19(16):5381-53901.

Терміни "похідні" або "варіанти" ММА відносяться до вірусів, що виявляють по суті аналогічні з ММА характеристики реплікації, як описано в цьому документі, але демонструють відмінності в одній або більше частин їх геномів. ММА-ВМ, а також похідне або варіант ММА-ВМ не здатні репродуктивно реплікуватися іп мімо в організмі людини і мишей, навіть в мишей з сильно вираженою імуносупресією. Більш конкретно, ММА-ВМ або його похідне або варіант ММА-ВМ у бажаних варіантах реалізації характеризуються також здатністю до репродуктивної реплікації в фібробластах курячих ембріонів (СЕРЕ), але не здатні до репродуктивної реплікації в людській лінії кератиноцитів НаСаї (ВошКатр еї а! (1988), 9. Сеї! Віої. 106: 761-771), людської клітинної лінії остеосаркоми кістки 14388 (Ме доступу в ЕСАСС 91112502), людської ембріональної лінії клітин нирки 293 (Мо доступу в ЕСАСС 85120602), і людської клітинної лінії аденокарциноми шийки матки Неї а (Мо доступу в АТОС СО -2). Крім того, похідне або варіант ММА-ВМ має коефіцієнт вірусної ампліфікації щонайменше в два рази менший, бажаніше - в три рази менший, ніж ММА-575 в клітинах Неїа і клітинних лініях НаСат. Дослідження і аналіз цих властивостей варіантів ММА описані в МО 02/42480 (05 2003/0206926) і УМО 03/048184 (005 2006/0159699).

Термін "не здатний до репродуктивної реплікації"! або "не має можливості для репродуктивної реплікації" являє собою, наприклад, визначення, описане в публікації У/О 02/42480, яка також дає уявлення, як отримати ММА з бажаними властивостями, згаданими вище. Цей термін відноситься до вірусу, який характеризується коефіцієнтом ампліфікації на 4 день після інфікування менш ніж 1, з використанням аналізів, описаних в МО 02/42480 або в патенті США Моб761893, зміст якого у повному обсязі включено в цю заявку шляхом посилання.

Термін "не може репродуктивно реплікуватися" відноситься до вірусу, який характеризується коефіцієнтом ампліфікації на 4 день після інфікування менш ніж 1. Аналізи, описані в М/О 02/42480 або в патенті США Мо 6761893, застосовні для визначення коефіцієнта ампліфікації вірусу.

Ампліфікація або реплікація вірусу, як правило, виражається як відношення кількості вірусу, отриманого з інфікованої клітини (вихід), до кількості вірусу, використаного на початку для інфікування клітини в першому місці (введення), і згадується в цьому документі як "коефіцієнт ампліфікації". Коефіцієнт ампліфікації "1" визначає стан ампліфікації, при якому кількість вірусу, отриманого з інфікованих клітин, є аналогічною кількості, використаній на початку для інфікування клітин, а це означає, що інфіковані клітини є пермісивними для потрапляння і репродукції вірусу. На відміну від цього, коефіцієнт ампліфікації менше 1, тобто, зниження кількості вірусу "на виході" у порівнянні з кількістю вірусу при введенні, вказує на відсутність репродуктивної реплікації і, відповідно, на атенуацію вірусу.

Переваги вакцин на основі ММА включають їх належний профіль безпеки, а також доступність для великомасштабного виробництва. Доклінічні дослідження показали, що ММА-

ВМ демонструє більш досконалу атенуацію і ефективність у порівнянні з іншими штамами ММА (МО 02/42480). Додатковою властивістю штамів ММА-ВМ є здатність викликати по суті аналогічний рівень імунітету при застосуванні схеми "прайм'"-вакцинації на основі вірусу вісповакцини/"буст"-вакцинації на основі вірусу вісповакцини, в порівнянні зі схемою ДНК- "прайм"-вакцинації/"буст"-вакцинації на основі вірусу вісповакцини.

У найбажанішому варіанті реалізації винаходу рекомбінантні віруси ММА-ВМ вважаються бо безпечними через їх виразну реплікативну дефектність в клітинах ссавців і надійно усталеної авірулентності. Крім того, на додаток до вказаної ефективності, може бути вигідною можливість виробництва їх в промислових масштабах. Крім того, вакцини на основі ММА можуть доставляти безліч гетерологічних антигенів і одночасно індукувати гуморальний і клітинний імунітет.

ММА-вектори, придатні для цього винаходу, можуть бути отримані з використанням способів, відомих в цій галузі техніки, як-от способи, описані в публікаціях МУМО/2002/042480 та

УМО/2002/24224, повний опис яких включено в цей документ шляхом посилань.

В іншому аспекті дефіцитні по реплікації вірусні штами ММА, як-от ММА-572, ММА-575 або будь-який подібним чином атенуйований штам ММА, також можуть бути придатними для винаходу. Придатним також може бути мутантний ММА, як-от хоріоалантоїсний вірус вісповакцини Анкара з делеціями (аСМА). Вірус аСМА містить сайти делеції аеї! І, ає! 1, аєї ПІ, аеї

ІМ, авеї М ї ає!ї МІ на ММА-геномі. Зазначені сайти особливо придатні для вбудовування безлічі гетерологічних послідовностей. Вірус аСМА може репродуктивно реплікуватися (з коефіцієнтом ампліфікації більше 10) в клітинній лінії людини (наприклад, клітинних лініях людини 293, 143В і

МАС-5) з можливістю подальшої оптимізації шляхом додаткової мутації, доцільній для стратегії вакцинації на основі вірусу (див. УМО 2011/092029).

У бажаному варіанті реалізації винаходу, ММА-вектор(и) містить нуклеїнову кислоту, яка кодує один або більше антигенних білків, вибраних з групи, що складається з ГП еболавірусу

Заїр (ЕВОМ), ГП еболавірусу Судан (БОМ), ГП вірусу Марбург (МАКУМ), НП вірусу лісу Таї і ГП або НП по суті аналогічних їм.

Білок філовірусу може бути вбудований в одну або більше міжгенних областей (МГО) вірусу

ММА. У деяких варіантах реалізації винаходу МГО вибирають з групи, що складається з

МГОО07/08, МГО 44/45, МГОб4/65, МГО88/89, МГО 136/137 або МГО148/149. У деяких варіантах реалізації винаходу менше 5, 4, З або 2 МГО рекомбінантного ММА містять гетерологічні нуклеотидні послідовності, що кодують антигенні детермінанти глікопротеїнової оболонки філовірусу і/або додаткового білка філовірусу. Гетерологічні нуклеотидні послідовності можуть бути, додатково або альтернативно, вбудовані в один або більше природних сайтів делеції, зокрема, в основні сайти делеції І, ІЇ, ПШ, ІМ, М або МІ генома ММА. У деяких варіантах реалізації винаходу менше 5, 4, З або 2 природних сайтів делеції рекомбінантного ММА містять гетерологічні нуклеотидні послідовності, що кодують антигенні детермінанти глікопротеїнової

Зо оболонки філовірусу і/або додаткового білка філовірусу.

Кількість сайтів вбудовування в ММА, що містять гетерологічні нуклеотидні послідовності, які кодують антигенні детермінанти білка філовірусу, може становити 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 або більше. У деяких варіантах реалізації винаходу гетерологічні нуклеотидні послідовності вбудовують в 4, 3, 2 або менше сайтів вбудовування. Бажано використовувати два сайти вбудовування. У деяких варіантах реалізації винаходу використовують три сайти вбудовування. Бажано, якщо рекомбінантний ММА містить щонайменше 2, 3, 4, 5, 6 або 7 генів, які вбудовуються в 2 або З сайти вбудовування.

Рекомбінантні віруси ММА, представлені в цьому документі, можуть бути отримані звичайними способами, відомими в цій галузі техніки. Способи отримання рекомбінантних поксвірусів або вбудовування екзогенних кодуюючих послідовностей в геном поксвірусів добре відомі фахівцям в цій газузі техніки. Наприклад, способи виконання стандартних методик молекулярної біології, як-от клонування ДНК, виділення ДНК і РНК, аналіз Вестерн-блот, технологія ампліфікації ЗТ-ПЛР і ПЛР описані в МоїІесшаг Сіопіпу, А Іабогаїгу Мапиаї (2па Еа.)

І). Затюогоок еї аї., Со бргіпд Нагрог І арогафгу Ргез55 (1989)), а методи обробки та способи поводження з вірусами описані в Мігоюду Меїйоаз Мапиа! |ВУУУ Мапу еї аї. (Еадз.), Асадетіс

Ргезз (1996)). Подібним чином, методи і ноу-хау щодо обробки, поводження та генної інженерії

ММА описані в Моїесшіаг Мікіоду: А Ргасіїсаї! Арргоасп (АУ Оамізоп 5 ВМ Біо (Еадв5.), Те

Ргасіїсаї Арргоасп! Зегпев, ІВ! Ргез5 аї Охота Опімегейу Рге55, Охіога, ОК (1993) (див., наприклад, Глава 9: Ехргезвіоп ої депез Бу Массіпіа міги5 месіог5)| і Ситепі Ргоїюсої!5 в Моїесшаг

Віоюсду ШШойп УУ/йеу 4 оп, Іпс. (1998) (див., Наприклад, Глава 16, Розділ ІМ: Ехргезвіоп ої ргооївїн5 іп таттаїанп сеїІ5 ивіпу массіпіа міка! месіог)|.

Для генерації різних рекомбінантних ММА, описаних в цьому документі, можуть застосовуватися різні способи. Послідовність ДНК, призначена для вбудовування в вірус, може бути поміщена в плазмідну конструкцію Е. соїї, в яку вмонтована ДНК, що є гомологічною ділянці

ДНК вірусу ММА. Окремо, послідовність ДНК, призначена для вбудовування, може бути зв'язана з промотором. Зв'язок "промотор-ген" може бути налагоджений в плазмідній конструкції, таким чином, що зазначений зв'язок "промотор-ген" буде примикати до обох кінців з допомогою ДНК, що є гомологічною до послідовності ДНК, яка примикає до області ДНК ММА, що містить неосновний локус. Отримана плазмідна конструкція може бути ампліфікована шляхом 60 розмноження в бактерії Е.соїї і виділена. Виділена плазмида, що містить генну послідовність

ДНК, призначену для вбудовування, може бути трансфікована в клітинну культуру, наприклад, фібробласти курячих ембріонів (СЕР), одночасно з інфікуванням культури вірусом ММА. За допомогою рекомбінації між гомологичною ДНК ММА в плазміді і вірусним геномом, відповідно, може генеруватися модифікований ММА при наявності чужорідних ДНК-послідовностей.

Відповідно до бажаного варіанту реалізації винаходу клітини придатної клітинної культури, як, наприклад, клітини СЕРЕ, можуть бути інфіковані поксвірусом. Надалі інфікована клітина може бути трансфікована першим плазмідним вектором, що містить чужорідний або гетерологічний ген або гени, бажано - під транскрипційним контролем елемента, який контролює експресію поксвірусу. Як пояснювалося вище, плазмідний вектор також містить послідовності, здатні направляти вбудовування екзогенної послідовності в обрану частину генома поксвірусу. У деяких випадках плазмідний вектор також містить касету, що містить маркерний і/або селекційний ген, функціонально пов'язаний з поксвірусним промотором.

Придатні маркерні або селекційні гени являють собою, наприклад, гени, що кодують зелений флуоресцентний білок, ВД-галактозидазу, неоміцин-фосфорибозилтрансферазу або інші маркери. Використання селекційних або маркерних касет спрощує ідентифікацію і виділення генерованого рекомбінантного поксвірусу. Проте, рекомбінантний поксвірус також може бути ідентифікований за допомогою ПЛР-технології. Згодом, додаткова клітина може бути інфікована рекомбінантним поксвірусом, отриманим відповідно до опису вище, і трансфікована другим вектором, що містить другий чужорідний або гетерологічний ген або гени. В випадку, якщо цей ген будуть вбудовувати в інший сайт вбудовування поксвірусного генома, другий вектор також буде відрізнятися в поксвірусних гомологічних послідовностях, що направляють інтеграцію другого чужорідного гена або генів в геном поксвірусу. Після здійснення гомологічної рекомбінації може бути виділений рекомбінантний вірус, який містить два або більше чужорідних або гетерологічних гена. З метою вбудовування додаткових чужорідних генів в рекомбінантний вірус, етапи інфікування і трансфікування можна повторити з використанням рекомбінантного вірусу, виділеного в попередніх етапах інфікування, і за допомогою додаткового вектора, що містить додатковий чужорідний ген або гени для трансфікування.

В альтернативному варіанті етапи інфікування і трансфікування, як описано вище, є взаємозамінними, тобто придатна клітина може бути спочатку трансфікована плазмідним

Зо вектором, що містить чужорідний ген, а згодом інфікована поксвірусом. У додатковому альтернативному варіанті також можливо вбудовування кожного чужорідного гена в різні віруси, коінфікування клітини усіма отриманими рекомбінантними вірусами і скринування на наявність рекомбінанта, включаючи всі чужорідні гени. Третім альтернативним варіантом є лігування ДНК генома і чужорідних послідовностей іп міо і відтворення рекомбінантного генома ДНК вірусу вісповакцини за допомогою вірусу-помічника. Четвертим альтернативним варіантом є гомологічна рекомбінація в Е.соїї або інших видах бактерій між геномом вірусу вісповакцини, як- от ММА, клонованого у вигляді бактеріальної штучної хромосоми (ВАС), і лінійною чужорідною послідовністю, що примикає до послідовності ДНК, гомологічній послідовності, що примикає до бажаного сайту інтеграції в геномі вірусу вісповакцини.

Гетерологічний ген філовірусу може контролюватися (тобто, бути функціонально пов'язаним 3) одним або більше поксвірусними промоторами. У деяких варіантах реалізації винаходу поксвірусний промотор являє собою промотор Рг7.5, гібридний ранній/пізній промотор або промотор Ргб5, промотор Рг55Е, синтетичний або природний ранній чи пізній промотор, або промотор АТІ вірусу коров'ячої віспи.

Імуногенні композиції

Імуногенні композиції являють собою композиції, що містять імунологічно ефективну кількість очищених або частково очищених аденовірусних або ММА-векторів для використання в цьому винаході. Зазначені композиції можуть бути приготовані у вигляді вакцини (яка також називається "імуногенна композиція") відповідно до способів, добре відомим в цій галузі техніки.

Такі композиції можуть включати ад'юванти для посилення імунної відповіді. Оптимальні співвідношення кожного компонента в складі можуть бути визначені за допомогою методик, добре відомих фахівцям в цій галузі техніки, з урахуванням цього опису.

Способи отримання і застосування імуногенних композицій добре відомі фахівцям в цій галузі техніки. Рідкі фармацевтичні композиції, як правило, включають рідкий носій, як-от вода, продукти нафтопереробки, тваринні або рослинні жири, мінеральну олію або синтетичну олію.

Також до складу можуть бути включені фізіологічний сольовий розчин, глюкоза або інший розчин сахаридів, або гліколі, як-от етиленгліколь, пропіленгліколь або поліетиленгліколь.

Композиції даного винаходу можуть містити інші антигени філовірусу, або "прайм"- або "буст"-вакцини можуть містити інші антигени. Інші антигени, що використовуються в комбінації з 60 аденовірусними векторами за даним винаходом, не мають вирішального значення для винаходу і можуть бути, наприклад, антигенами філовірусу і нуклеїновими кислотами, що експресуюють їх.

Імуногенні композиції, придатні для використання в даному винаході, можуть включати ад'юванти.

Ад'юванти, придатні для поєднаного введення відповідно до даного винаходу, включаючи 05-21, Детоко-РС, МРІ-5Е, МосМ-С5Е, Тіе(Мах-й, СВІ-1005, СЕКВІО, ТЕРамід, РЗСО97В,

Ад'юмер, РО-026, 5К-Ї, ССМАБЕ, В-алетін, МРО-026, Ад'ювакс, Сро ОМ, Бетафектін, Алюм і

МЕ59, повинні бути потенційно безпечними, добре переноситися і бути ефективними в людей.

Інші ад'юванти, які можуть вводитися, включають лектини, фактори росту, цитокіни і лімфокіни, як-от альфа-інтерферон, гамма-інтерферон, фактор росту тромбоцитів (РОСРБЕ), гранулоцитарний колонієстимулюючий фактор (Г-КСФ), гранулоцитарно-макрофагальний колонієстимулюючий фактор (ГМ-КСФ), фактор некрозу пухлин (ФНП), епідермальний фактор росту (ЕФР), ІЛ-1, ІЛ-2, ІЛ-4, ІЛ-б, ІЛ-8, ІЛ-10 та ІЛ-12, або нуклеїнові кислоти, що їх кодують.

Композиції за даним винаходом можуть містити фармацевтично прийнятну допоміжну речовину, носій, буфер, стабілізатор або інші матеріали, добре відомі фахівцям в цій галузі техніки. Такі речовини мають бути нетоксичними і не повинні знижувати ефективність активного інгредієнта. Фактичні властивості носія або іншого матеріалу можуть залежати від способу введення, наприклад, внутрішньом'язового, підшкірного, перорального, внутрішньовенного, шкірного, внутрішньослизового (наприклад, через слизову оболонку кишечника), інтраназального або внутрішньоочеревинного шляху.

Спосіб індукування захисного імунітету проти інфекції, викликаної філовірусом

В цьому винаході пропонується спосіб формування у індивідуума імунної відповіді проти одного або більше філовірусів в результаті "прайм"- і "буст"--введення композиції, що містить аденовірусний вектор в комбінації з іншим аденовірусним вектором і/або ММА- вектором.

Відповідно до одного спільного аспекту даного винаходу спосіб індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта включає: а. введення суб'єкту першої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний протеїн першого підтипу філовірусу; і

Зо р. введення суб'єкту другий композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білои щонайменше двох штамів філовірусу; при цьому етапи (а) і (б) здійснюють у будь-якому порядку. У бажаному варіанті реалізації винаходу наступний етап проводять через 1-12 тижнів після першого етапу.

У певних аспектах цього винаходу перша композиція додатково містить один або більше аденовірусних векторів, що містять нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу. В інших варіантах реалізації винаходу перша композиція додатково містить один або більше аденовірусних векторів, що містять нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу.

В одному варіанті реалізації описаних способів аденовірусний вектор використовується для формування первинної ("прайм") імунної відповіді, а інший аденовірусний і/або ММА-вектор використовується для посилення ("буст") імунної відповіді, приблизно через 1-12 тижнів після "прайм"-вакцинації. "Буст"-композиції зазвичай вводять через декілька тижнів або місяців після введення "прайм'"-композиції, наприклад, приблизно через 1 або 2 тижні, З тижні, 4 тижні, або 6 тижнів, або 8 тижнів, або 12 тижнів, або 16 тижнів, або 20 тижнів, або 24 тижні, або 28 тижні, або 32 тижні або через один - два роки після введення "прайм"-композиції.

У бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусні вектори, описані в цьому документі, включають гАа26- або глаз5-вектор. В одному типовому варіанті реалізації винаходу гаа26- або гдазо5-вектор використовується для формування первинної імунної відповіді ("прайм"), а ММА- вектор використовується для посилення імунної відповіді ("буст") або навпаки.

У більш бажаному варіанті реалізації винаходу, відповідно до цього способу, гАд26- вектор використовується для "прайм"-імунізації з наступною "буст"-імунізацією ММА- вектором. Краще, якщо "буст"-композицію вводять через 1-12 тижнів після введення "прайм"-композиції, ще краще - через 1, 2, 4 або 8 тижнів після введення "прайм'"- композиції. У бажаному варіанті реалізації винаходу "буст" -кюомпозицію вводять через 8 тижнів після введення "прайм"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"-композицію вводять через 1 тиждень після введення "прайм"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"- композицію вводять через 2 тижні після введення "прайм"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"-композицію вводять через 4 тижні після введення "прайм"- бо композиції.

У більш бажаному варіанті реалізації винаходу, відповідно до цього способу, ММА- вектор використовується для "прайм'"-імунізації з наступною "буст"-імунізацією гАда26- вектором. Краще, якщо "буст"-композицію вводять через 1-12 тижнів після введення "прайм"-композиції, ще краще - через 1, 2, 4 або 8 тижнів після введення "прайм'"- композиції. У бажаному варіанті реалізації винаходу "буст" -кюомпозицію вводять через 8 тижнів після введення "прайм'"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"-композицію вводять через 1 тиждень після введення "прайм"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"- композицію вводять через 2 тижні після введення "прайм"-композиції. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу "буст"-композицію вводять через 4 тижні після введення "прайм"- композиції.

В цьому винаході також пропонуються способи індукування імунної відповіді проти більш ніж одного підтипу філовірусу шляхом "прайм"- і "буст"-імунізації, переважно із застосуванням комбінації гетерологічних векторів.

Відповідно до іншого аспекту даного винаходу спосіб індукування у суб'єкта імунної відповіді проти безлічі субтипів філовірусів включає: а. введення суб'єкту імунологічно ефективної кількості безлічі глаг26- або гдаз5-векторів, що містять безліч нуклеїнових кислот, які кодують глікопротеїни або по суті аналогічні глікопротеїни безлічі підтипів філовірусів; а також р. введення суб'єкту імунологічно ефективної кількості безлічі ММА- векторів, що містять безліч нуклеїнових кислот, які кодують глікопротеїни або по суті аналогічні глікопротеїни, при цьому етапи (а) і (б) здійснюють у будь-якому порядку.

В одному або більше варіантах реалізації описаного способу безліч гАаг26- або гдаз5- векторів використовується для формування первинної ("прайм") імунної відповіді, а безліч ММА- векторів використовується для посилення ("буст") імунної відповіді або навпаки.

У більш бажаному варіанті реалізації винаходу, відповідно до описаного способу, безліч гдаг26-векторів використовується для "прайм" -імунізації з наступною "буст"- імунізацією безліччю ММА-векторів. Краще, якщо "буст"-імунізацію проводять через 1-12 тижнів після проведення "прайм"-імунізації, ще краще -- через 1, 2, 4 або 8 тижнів після проведення "прайм"- імунізації.

Зо Антигени в відповідних "прайм"- і "буст"-композиціях (проте, використовуються багато "буст"- композицій) не обов'язково повинні бути ідентичними, але повинні мати загальні антигенні детермінанти або бути по суті подібними між собою.

Введення імуногенних композицій, що містять вектори, як правило, проводиться внутрішньом'язово або підшкірно. Однак, можуть бути передбачені також і інші способи введення, як-от внутрішньовенне, шкірне, внутрішньошкірне або назальне введення.

Внутрішньом'язове введення імуногенних композицій може бути здійснено за допомогою голки для введення суспензії аденовірусного вектора. Альтернативним способом є використання безголкового ін'єктора для введення композиції (наприклад, Віоіесіог (ТМ)) або ліофілізованого порошку, що містить вакцину.

Для внутрішньовенної, шкірної або підшкірної ін'єкції або ін'єкції в осередок ураження вектор повинен мати форму парентерально прийнятного водного розчину з апірогенними властивостями, придатними рн, ізотонічністю і стабільністю. Фахівці в цій галузі техніки у повній мірі здатні приготувати придатні розчини з використанням, наприклад, ізотонічних розчинників, як-от розчин натрію хлориду для ін'єкцій, розчин Рінгера для ін'єкцій, розчин Рінгера з лактатом для ін'єкцій. Також при необхідності до складу можуть бути включені консерванти, стабілізатори, буфери, антиоксиданти і/або інші добавки. Також може використовуватися композиція з уповільненим вивільненням.

Як правило, введення буде здійснюватися з профілактичною метою для формування імунної відповіді проти антигену філовірусу до інфікування або розвитку симптомів.

Захворювання і порушення, які можна лікувати або попереджати відповідно до даного винаходу, включають в себе такі патології, в яких імунна відповідь може відігравати захисну або терапевтичну роль. В інших варіантах реалізації цього винаходу аденовірусні і ММА-вектори можуть вводити з метою постконтактної профілактики.

Імуногенні композиції, що містять аденовірусні вектори, вводять суб'єкту, тим самим формуючи у суб'єкта імунну відповідь проти філовірусів. Кількість композиції, достатня для індукції вираженої імунної відповіді, визначається як "імунологічно ефективна доза".Як показано нижче, імуногенні композиції за даним винаходом індукують гуморальну, а також клітинно- опосередковану імунну відповідь. У типовому варіанті реалізації винаходу імунна відповідь являє собою захисну імунну відповідь. 60 Фактична кількість для введення, а також швидкість і динаміка введення будуть залежати від етіології та тяжкості захворювання, з приводу якого проводиться лікування. Питання призначення лікування, наприклад, визначення кількості дози і т. п., перебуває в межах компетенції лікарів загальної практики і лікарів іншого профілю, або в контексті ветеринарії - ветеринарних лікарів; при цьому зазвичай враховується характер захворювання, що підлягає лікуванню, стан здоров'я конкретного пацієнта, місце і спосіб введення, а також інші чинники, відомі практикуючим лікарям. Приклади методик і протоколів, згаданих вище, можна знайти в

Ветіпдіюоп'5 Рпагтасеціїса! бсіепсевз, 161п еййіоп, Озвої, А. єд., 1980.

Після отримання аденовірусних і ММА-векторів і необов'язкового включення таких частинок в композиції, вектори можуть бути введені індивідууму, зокрема людині або іншому примату.

Введення можна здійснити людині або іншому ссавцю, наприклад, миші, щуру, хом'яку, морській свинці, кролику, вівці, козі, свині, коню, корові, віслюку, мавпі, собаці або кішці. Введення ссавцю, який не є людиною, не обов'язково повинно здійснюватися в терапевтичних цілях, а може бути використано в експериментальному контексті, наприклад, в дослідженні механізмів імунної відповіді проти аденовірусних або ММА-векторів.

Відповідно до однією типової схеми аденовірусний вектор вводять (наприклад, внутрішньом'язово) в об'ємі від близько 100 мкл до 10 мл, що містить концентрації від близько 107 до 1072 вірусних частинок/мл. Краще, якщо аденовірусний вектор вводять в об'ємі від 0,25 до 1,0 мл. Ще краще, якщо аденовірусний вектор вводять в об'ємі 0,5 мл.

Як правило, аденовірус вводять в кількості від близько 109 до близько 1072 вірусних частинок (вч) суб'єкту-/людині за одне введення, у більш типовому варіанті - в кількості від близько 1079 до близько 1072 вч. В бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор вводять в кількості близько 5х1019 вч. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор вводять в кількості близько 0,8х10!9 вч. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор вводять в кількості близько 2х10'овч. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу аденовірусний вектор вводять в кількості близько 4х1019 вч. У деяких варіантах реалізації винаходу аденовіруси скомпоновані у вигляді тривалентної композиції, в якій три аденовіруси, кожен з різною вставкою, змішують один з одним. Краще, якщо у тривалентній композиції кожен окремий аденовірус присутній в кількості близько 4х1079 вч. У зазначеній тривалентній композиції загальне число частинок аденовірусу на дозу

Зо становить близько 1,2х10"! вч. В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу кожен окремий аденовірус у тривалентній композиції присутній в кількості близько 1х10" вч. У зазначеній тривалентній композиції загальне число частинок аденовірусу на дозу пізніше становить близько 3х10" вч. Після первинної вакцинації проводиться "буст"-тривалентнція, як описано вище.

Відповідно до іншої типової схеми ММА-вектор вводять (наприклад, внутрішньом'язово) в об'ємі від близько 100 мкл до близько 10 мл сольового розчину, що містить дозу від близько 1х107 ТСІЮОвБо до 1х109 ТСІЮво (5095 інфекційної дози в тканинній культурі) або Інф.Од. (інфекційна одиниця). Краще, якщо ММА-вектор вводять в об'ємі від 0,25 до 1,0 мл. Ще краще, якщо ММА-вектор вводять в об'ємі 0,5 мл.

Як правило, ММА-вектор вводять в дозі від близько 1х107 ТСІЮО5о до 1х109 ТСІЮОзо (або

Інф.Од) суб'єкту-людині за одне введення. У бажаному варіанті реалізації винаходу ММА -вектор вводят в кількості від близько 5х107 ТСІОво до 5х108 ТСІОво (або Інф.Од). У більш переважному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор вводять в кількості близько 5х107 ТСІЮОзо (або Інф.Од).

У більш бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор вводять в кількості близько 1х108

ТОСЇІО»о (або Інф.Од). В іншому бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор вводять в кількості близько 1,9х108 ТСІЮОво (або Інф.Од). У ще одному бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор вводять в кількості близько 4, 4х108 ТСІЮво (або Інф.Од). У більш бажаному варіанті реалізації винаходу ММА-вектор вводять в кількості близько 5х108 ТСІЮО5о (або Інф.Од).

Якщо бажано, композиція може бути представлена у вигляді набору, упаковки або дозатора, який може містити одну або більше одиничних лікарських форм, що містять активний інгредієнт.

Наприклад, набір може містити металеву або пластикову фольгу, як- от блістерна упаковка.

Набір, упаковка, або дозатор може супроводжуватися інструкціями для введення.

Композиції за даним винаходом можуть бути введені окремо або в комбінації з іншими способами лікування, або одночасно, або послідовно, залежно від патологічного стану, що підлягає лікуванню.

ПРИКЛАДИ

Наступні Приклади наведені в ілюстративних цілях, а не для обмеження цього винаходу, викладеного в заявці. 60 Приклад 1

В рамках продовження розпочатих розробок з метою ідентифікації полівалентної філовірусної вакцини з фактичною ефективністю 280 95 по відношенню до багатьох філовірусів

Інаприклад, Марбург, Ебола (також відомий як Заїр) і Судані було проведено дослідження на тваринах. У дослідженні аналізували розширену схему вакцинації з двома або трьома введеннями і ефект використання гетерологічних (на відміну від гомологічних) комбінацій вакцин на отримані імунні відповіді проти цільових філовірусів у НЛП. Вакцинованих НЛП інфікували вірусом Ебола Кікмі/ї з метою аналізу ефективності проведених вакцинацій.

Поводження з тваринами

Ці дослідження не суперечили всім застосовним розділам Остаточних правил положень

Закону про захист тварин (9 СЕК Частини 1, 2 ї 3) ії Настановам по догляду та використанню лабораторних тварин - Майопаї Асадету Ргез5, УМазпіпдіоп О.С. Восьме видання (Настанови).

В цілому 16 яванських макаків (Масаса Тазсісшагів) (НЛП) (12 самців і 4 самки), яванських макаків маврикійського походження у віці 4-5 років, близько 4-8 кг кожен, були придбані у

Ргітсеп (Хайнс, Іллінойс). Тварини були експериментально наївними щодо вірусу Рестон (КЕЗТМ), що доведено за допомогою ЕГІЗА до вакцинації. Тварини, раніше інфіковані

Мусобасіегішт їшбрегсціов5зі5, мавпячим вірусом імунодефіциту (5ІМ), мавпячим Т-лімфотропним вірусом-1 (ТІ М-1), герпесвірусом Масасіпе 1 (вірус герпесу В) і мавпячим ретровірусом (ЗЕМІ і

ЗКМ2), виключалися з дослідження; крім того, проводили аналіз на активні інфекції, викликані заІтопеїа і Зпідеїа, і підтверджували негативний результат на Мусобасієгішт Кшрегсицов5ів5.

Філовіруси є патогенами 4 групи ризику (що вимагають високого рівня захисту); тому всі маніпуляції з еболавірусом Заїр, еболавірусом Судан або вірусами Марбург проводили в СОС- акредитованій лабораторії з високим рівнем захисту (рівень біологічної безпеки (В51І)-4/рівень біологічної безпеки тварин (АВЗІ -4).

Вакцинні матеріали гАд-вектори виготовлені компанією Стисеї! Ноїїапа В.М. Ці вектори являють собою очищені реплікаційно дефіцитні рекомбінантні аденовірусні вакцинні вектори типу 26 або типу 35 (Ааг26 і даз»5, відповідно), з видаленим Е1/ЕЗ, що містять гени глікопротеїну (ГП) філовірусу, вбудовані в положення Е1. Ці вектори деблокували в клітинах РЕН.Сб6Ф, бляшки очищали, укрупнювали, потім очищали за допомогою двоетапної процедури С5СіІ- бендінга, після цього вводили в

Зо композиційний буфер на основі ТРІС і зберігали при температурі нижче -65 70. Випуск цих векторів для використання іп мімо дозволяється при проходженні тесту біонавантаження, низькому рівні ферментативних одиниць («5 ФО/мл) і підтвердження експресії і цілісності трансгена.

Зокрема, вектори гАа експресували ГП ЕВОМ Мауїпода (5ЕО ІЮО МО: 1), ГП БОМ Си (5ЕО

ІО МО: 2) і ГП МАВМ Ангола (5ЕО ІО МО: 3). Кожен гАд-вектор експресував один окремий антигенний білок (ГП).

МУА-вектори виготовлені компанією Вамагіап Могаїс. Зокрема, ММА- мультивектор (ММА-ВІМ-

Еіїо) експресував 4 різних антигенних білюи: ГП ЕВОМ Мауїіпда (ЗЕО ІЮ МО: 1), ГП БОМ Сши (ЗЕО ІО МО: 2) і ГП МАКМ МизокКе (ЗЕО ІО МО: 4), а також НП вірусу лісу Таї (ТАЕМ) (ЗЕО ІЮ

МО: 5).

Вакцинні матеріали зберігали при температурі -80 "С в морозильній камері з регульованою температурою.

Вакцинація і дизайн експерименту

Див. Фіг. 1 і 2 для отримання характеристик груп в дослідженні і ознайомлення з дизайном експерименту.

Яванських макаків (Масаса Тазсісшагіє) (НЛП) вакцинували з використанням двох різних вакцинних платформ, по 2 тварини на групу, на додаток до контрольної групи, що складалася з двох "наївних" контролів (яким вводили порожній вектор). Тварини були вперше вакциновані рекомбінантним вектором(ами) в групах, як показано на Фіг. 1. Кожен макак отримував анестезію і внутрішньом'язову (в/м) ін'єкцію вакцини в ліве заднє стегно. "Прайм"- і "буст"-дози вводили з інтервалом 4 або 8 тижнів (Фіг. 1). Кожна доза аденовірусів являла собою одну внутрішньом'язову ін'єкцію в ліве заднє стегно. ММА- вектори вводили підшкірно.

Цільну кров з ЕДТК або гепарином відправляли протягом ночі при кімнатній температурі в

Теха5 Віотей на Д2г8, Д5б і Дб63. Додатково, цільну кров з ЕДТА або гепарином збирали на Д77, тоді як тварин поміщали в Техаз Віотеад. У всі ці моменти часу цільну кров з ЕДТК обробляли для отримання МКПК і плазми в Техаз5 Віотеа.

МКПК застосовували в аналізі ІФН-д ЕГІБРОТ з використанням пептидних пулів 1 і2 еболавірусу Заїр, пептидних пулів 1 і 2 вірусу Судан ши, консенсусного пептидного пулу

Еболавірусу, пептидних пулів 1 і 2 вірусу Марбург Ангола і консенсусного пептидного пулу бо вірусу Марбург, разом з ДМСО - тільки для негативного контролю і стимуляцією анти-СОЗ - для позитивного контролю. Все стимуляції проводили в двох повтореннях, в цілому 20 лунок на

НЛП.

Додатково цільну кров без антикоагулянту обробляли для отримання сироватки в Віодчаї на

ДО, Д28, Д5б і Дб8, а також на Д77 у Теха5 Віотей. Аліквоти сироватки, зібраної в ВіодпаїЇ, відправляли в замороженому стані в Теха5 Віотей на Дб8. Всі зразки сироватки аналізували методом ЕГІЗА на специфічні ГП вірусу ЕВОМ. Крім того, сироватку, зібрану на ДО, Д5б і Д77, аналізували методом ЕГІЗА на специфічні ГП вірусу ЗЕВОМ і ДП вірусу МАКМА (два різних аналізи).

Таблиця 1

Аналізовані параметри до інфікування вірусом Ебола 11111110 41819 | топ

ОМКПКіобробкаплазми.//-:/ 77771 ЇЇ ЇХ їх хх | хо

П2ЕВОМЕЙЗА -всітварини.д///-/-:/ 7777 ЇХ ЇХ ЇХ 7 Їх х

ПЛЗЕВОМЕНЗА -всітварини.ї///://7777777 ЇХ ЇЇ ЇХ 07 / Їх

ПЛ МАКМАЕСІЗА -всітварини.їд///:/77777777/ ЇХ! ЇХ 7 Їх (Філовірус ЕМІЗРОТ -всітварини.д//-/:/ | ЇХ ЇХ їх | їх

Інокулят філовірусу для інфікування тварин

Як показано на Фіг. 2, приблизно через 4 тижні після "буст"-вакцинації тварин інфікували вірусом ЕВОМ. Зокрема, для інфікування тварин використовували вірус ЕВОМ Кікм/ї-9510621, що поставляється компанією Теха5 Віотеай. Другий пасаж клітинної культури (Рг) вірусу ЕВОМ

Кікм/ї-9510621 отримували від д-ра Тот Квіа7ек (при МІАІС"5 М/КСЕМА в ОТМВ'5 Національної лабораторії охорони здоров'я м. Галвестон) в 2012 році і втретє розмножували в клітинах Мего

Еб в Теха5 Віотей з отриманням титру 2,1х105 БУО/мл. ЕВОМ КікКм/й-9510621. Партія

Мо2012099171.

Титр при отриманні: 2.1х105 БУО/мл використовували для цього дослідження.

За допомогою глибокого секвенування підтверджено, що вихідним матеріалом для інфікування є вірус ЕВОМ Кікм/ї 9510621 дикого типу, який має тільки 1 5МР-відмінність від консенсусної послідовності сСепВапкК Р2.Вихідний матеріал для інфікування зберігали в рідкій фазі парів азоту в аліквотах по 500250 мкл, що містять носій (МЕМ), який містить 10 95 ЕВ5. Для отримання 100 БУС, агент філовірусного інфікування розбавляли до цільової дози 200 БУО/мл в фосфатно-сольовому буфері. Якщо коротко, вихідний вірусний матеріал розбавляли за допомогою трьох послідовних разбавлень 1:10 в РВ5 до отримання концентрації матеріалу для інфікування 200 БУО/мл. В цілому кожній тварині вводили 0,5 мл матеріалу для інфікування.

Перед введенням вірусу мавпам з метою седації внутрішньом'язово вводили телазол (від 2 до 6 мг/кг; від 5 до 8 мг/кг кетаміну в/м, в разі потреби, для додаткової анестезії). На День 0

Зо дослідження збирали кров і кожній мавпі потім вводили цільову дозу 100 БУО вірусу ЕВОМ в об'ємі 0,5 мл шляхом внутрішньом'язової ін'єкції в дельтоподібний м'яз правого передпліччя.

Місце введення інфікуючого агента записували.

Після введення вірусу всіх мавп повертали в рідні клітки і спостерігали до завершення дії анестетика (стернальне лежаче положення/ здатність підтримувати вертикальне положення).Кінцевими критеріями оцінки в цьому дослідженні були виживання/невиживання.

Невиживання визначали як наявність у тварини невиліковного захворювання або смерть тварини. Стан здоров'я тварин фіксували в оціночному листі щоденного клінічного спостереження.

Аналіз ЕГІЗА для виявлення антитіл анти-ЕВОМ ГП до

Філовірус-специфічну гуморальну відповідь визначали в моменти часу, описані в Таблиці 1, за допомогою модифікованого твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГІ5А), як описано раніше в публікації Зйіїмап еї аї. (2006) (Іттипе ргоїєсійоп ої поппитап ргітаїйез адаїпві Еброїа мігив м/йй віпдіє Іом/-дозе адепомігив месіої5 епсодіпуд тодіїйейа сів5.РІ о5 Меадісіпе 3, е177), яка в повній мірі включена в цей документ шляхом посилання. Якщо коротко, планшети ЕГІЗА покривали на ніч лектином СаїЇапіпив Мімаїї5 в концентрації 10 мкг/мл. Потім, після блокування планшети покривали або супернатантом специфічного ГП штаму Ебола, або штаму Марбург. Ці супернатанти отримували шляхом транзиторного трансфікування Нек293Т з експресійними плазмідами, що кодують філовірусний глікопротеїн трансмембранного домену, що видаляється, та цитоплазматичного кінцевого сегмента. Зразки сироватки мавп тестували в 4-кратній серії разбавлень, починаючи з 1:50. Зв'язаний (до виявляли за допомогою колориметрії при довжині хвилі 492 нм. Відносні титри антитіл в сироватці крові розраховували по відношенню до еталонної специфічної сироватки з глікопротеїном штаму філовірусу. Результати аналізу Еїїза наведені на Фіг. 4-6.

Аналіз ІФН-9 ЕПІЗРОТ

Філовірус-специфічну клітинну відповідь визначали в моменти часу, описані в Таблиці 1, за допомогою імуноферментного спот-аналізу з інтерфероном-гамма (ЕГІ5РОТ), як описано раніше в публікації Орпогеї еї аІ. 2007 (Іпсгеазей іттиподепісйу ої гесотбріпапі Ааз5-разей таїагла массіпе ІШгоцдп Топтиїайноп мій аіштіпіит рпозрНаїе адіимапі. Массіпе 25, 6501-6510), яка в повній мірі включена в цей документ шляхом посилання. Пептидні пули, які використовуються для стимуляції глікопротеїну як штаму Ебола, так і штаму Марбург, складаються з 15-мерів, що перекриваються 11 амінокислотами. Для того, щоб звести до мінімуму небажані ефекти занадто великої кількості пептидів в пулі, кожен глікопротетновий пептидний пул розділяли на дві частини: одна М-кінцева, а інша С- кінцева.

Пептиди, які перекриваються з більш ніж дев'ятьма послідовними амінокислотами в межах трьох Еболавірусов (Заїр, Судан і лісу Таї) або двох вірусів Марбург (віруси Марбург і Камп), об'єднували в консенсусний пул. Пептидні пули і окремі пептиди застосовували в кінцевій концентрації 1 мкг/мл для кожного окремого пептиду. Результати аналізу ЕГІ5БРОТ наведені на

Фіг. 7.

Результати проведеного дослідження на тваринах, представлені на Фіг. 3-7, демонструють придатність гАд- і ММА-векторів в комбінаціях "прайм-буст" для профілактики філовірусних інфекцій у приматів. Зокрема, введення одного або більше гАаг6б-векторів, що експресують ГП одного або більше типів філовірусів, або ММА- векторів, що експресують безліч антигенів філовірусу, призводило до ефективного первинної ("прайм") гуморальної відповіді проти одного або більше типів філовірусів. Післе "буст"-імунізації на 8 тижні із застосуванням гетерологічного вектора, всі вакцинальні схеми індукували подібну гуморальну і клітинну імунну відповідь на один або більше типів філовірусів, і гарантували 10095 захист проти інфікування високопатогенним вірусом Ебола Заїр.

Приклад 2

Зо Друге дослідження з НЛП проводили для підтвердження імуногенності і захисної ефективності 2 схем "прайм-буст" з інтервалами 0-4 тижні і 0-8 тижнів. Одна схема включала моновалентну вакцину Аа26.2ЕВОМ для "прайм'"-введення і ММА-ВМ-НРіо для "буст"-введення; інша схема включала ММА-ВМ-Ріо для "прайм"-введення і Аа26.2ЕВОМ для "буст"-введення.

Все вакцинації проводили внутрішньом'язово. Аа26.2ЕВОМ (5х10179 вч) використовували в якості "прайм"-вакцини в схемі 0-8 тижнів і комбінували з "буст"- вакциной ММА-ВМ-Ріїо (4 НЛП) в кількості 1х108 ТСІОво ії ММА-ВМ-БРйо (4 НЛП) в кількості 5х108 ТСІЮОво з метою оцінки впливу стандартної і високої дози ММА в цій схемі. Двом додатковим групам з 4 НЛП вводили в якості "прайм"-вакцини 1х109 ТСІО5о ММА-ВМ-ЕйЙо і 5х108 ТСІО5о ММА-ВМ-Рійо, відповідно, що в обох випадках через 4 тижні супроводжувалося подальшою "буст"-імунізацією Ааг26.2ЕВОМ (5х1079 вч) з метою аналізу впливу дози ММА-ВМ-НІіЇо в якості "прайм"-вакцини в 4-тижневій схемі. Крім того, двом НЛП вводили Аа26.2ЕВОМ (5х10!9 вч) в якості "прайм"-вакцини з подальшим введенням ММА-ВМ-Рі в кількості 1х108 ТСІЮОво. І, нарешті, 2 НЛП імунізували порожнім вектором АЯ26 (таким, що не експресує будь-яких антигенів філовірусу, в кількості 5х1010 вч в/м) і ТВ5 в якості негативного контролю імунізації в дослідженні. Усіх тварин інфікували вірусом

ЕВОМ КіКм/ї 1995 дикого типу РЗ для інфікування в кількості 100 БУО через 4 тижні після останньої імунізації. Характеристика груп в цьому дослідженні узагальнена в Таблиці 2.

Таблиця 2

Експериментальні групи в дослідженні захисного імунітету нелюдиноподібних приматів, інфікованих вірусом ЕВОМ с. с. г. до . Коефіцієнт (Доза 1) (Доза 2) (тижні) після 4 тижнів о/; - Негативний здо |Ла2блустий | контроль ММА ЕВОМ (Кікмії) 0/2 (0 95) (5х1079 вч) тв5 дагб.7ЕВОМ ММУА-ВМ-РІо пл, о св а (В. 10009000 вомккихфетооото,

Таблиця 2

Експериментальні групи в дослідженні захисного імунітету нелюдиноподібних приматів, інфікованих вірусом ЕВОМ с. с. г. до . Коефіцієнт (Доза 1) (Доза 2) (тижні) після 4 тижнів о/; дагб.7ЕВОМ ММУА-ВМ-РІо пд, о оо бюдтьу бмбтоюш 00090000 ЕВоУккну аеооозо

ММУА-ВМ-Рійо дагб.7ЕВОМ пли о дагб.7ЕВОМ ММУА-ВМ-РІо пл, о

Скорочення: ТВО: ТРІС-буферизований сольовий розчин; ТСІЮво: 50 95 інфекційної дози в тканинній культурі; вч: вірусні частинки. 100 95 виживання виділене жирним шрифтом.

Імуногенність

ІЇІмунну відповідь у НЛП оцінювали з урахуванням вироблення антитіл, що зв'язують і нейтралізують філовірусний ГП (ЕГІ5А), а також цитокінів, які продукують Т- клітини (ЕП ІБрої).

ЕПЗА:

Реакційноздатні антитіла до ГП ЕВОМ Мауїпда аналізували за допомогою ГП-специфічного аналізу ЕГІЗА для всіх моментів часу (див. Фіг. 20).

Аналіз ЕГІБА для виявлення антитіл анти-ЕВОМ ГП Ідс проводили, як описано в експерименті 1. Титри антитіл в аналізі ЕГІБА не визначались у контрольних вакцинованих тварин. Вакцинальні схеми характеризувалися імуногенністю у всіх тварин. Найвищі титри спостерігалися в групі В, що отримувала Аа26.2ЕВОМ і високу дозу ММА-ВМ-РІіЇО з 8- тижневим інтервалом.

Профілактична ефективність

Обидві в8-тижневі "прайм/буст" схеми Ааг26.27ЕВОМ/ММА-ВМ-РіО призводили до повного виживання після інфікування вірусом ЕВОМУ, незалежно від дози ММА-ВМ-Ріо (1х108 ТСІЮО5о або 5х108 ТСІО5о). Крім того, 4-тижнева схема Ааг26.27ЕВОМ/ММА-ВМ-Ріїо забезпечила захист 2 з 2

НЛП. Обидві 4-тижневі схеми ММА-ВМ-Ріо/Ааг26.2ЕВОМ забезпечили захист 2 з 4 НЛП.

Приклад З

Проведено клінічне дослідження за участю людей для оцінки безпеки, переносимості та імуногенності схем з використанням ММА-ВМ-Ніо в дозі 1х108 ТСІЮОво і Аа26.2ЕВОМ в дозі 5х1019 вч. Дослідження складалося з двох частин.

Основне дослідження являло собою рандомізоване, плацебо-контрольоване дослідження з маскуванням даних для спостерігача і проводилося за участю 72 здорових дорослих суб'єктів, які ніколи до цього не отримували експериментальну кандидатну вакцину проти вірусу Ебола і не мали будь-якого відомого контакту з вірусом Ебола або діагностованого захворювання, викликаного вірусом Ебола. У цьому дослідженні аналізували 4 схеми: 2 схеми включали ММА-

Зо ВМ-НРіо в якості "прайм"-вакцини і Аа26.7ЕВОМ в якості "буст"-вакцини з 28- або 56-денним інтервалом, і 2 схеми включали Аа26.2ЕВОМ в якості "прайм"-вакцини і ММА-ВМ-РІіЇО в якості "буст"-вакцини з 28- або 56-денним інтервалом.

Група з 15 здорових дорослих суб'єктів брала участь у відкритій, неконтрольованій нерандомізованій частини піддослідження, що проводилося для оцінки безпеки, переносимості та імуногенності схеми із застосуванням Ааг26.7ЕВОМ в дозі 5х1019 вч в якості "прайм"-вакцини і

МУА-ВМ-НРІійо в дозі 1х108 ТОС1О»5о в якості "буст"-вакцини через 14 днів.

Дослідження складалося з періоду вакцинації, в якому суб'єктів вакцинували на вихідному рівні (День 1), а потім проводили "буст"-імунізацію на День 15, 29 або 57, а також спостерігали в періоді після "буст"-імунізації до настання для всіх суб'єктів візиту на 21 день після "буст"- імунізації (день 36, 50 або 78) або до припинення участі суб'єктів в дослідженні раніше.

Суб'єктів в основному дослідженні розподіляли на 4 різних групи по 18 здорових суб'єктів у кожній. В цілому, суб'єкти були рандомізовані в межах групи в співвідношенні 5:1 для отримання активної вакцини або плацебо (0,9 95 сольовий розчин) шляхом в/м ін'єкцій (0,5 мл) у такий спосіб:

- ММА-ВМ-Ніо (1х108 ТСІОво) На День 1, з подальшим "буст"-введенням АЧ26.2ЕВОМ (5х1070 вч) на День 29 (Група 1) або День 57 (Група 2), або - Аа26.72ЕВОМ (5х10'0 вч) на День 1, з подальшим "буст"--введення ММА-ВМ-Р Йо (1х108

ТОЇО5о) на День 29 (Група 3) або День 57 (Група 4). 15 суб'єктів в піддослідженні отримували активну вакцину шляхом в/м ін'єкцій (0,5 мл) у такий спосіб: - Аа26.72ЕВОМ (5х10'0 вч) на День 1, з подальшим "буст"-введення ММА-ВМ-Р Йо (1х108

ТОЇО»5о) на День 15 (Група 5).

Типові графіки вакцинації в дослідженні наведені в Таблиці 3.

Таблиця З

Графіки вакцинації в дослідженні

ЕЛЕ НИ НИШЕНННННИ с: Б НИНІ 4 18 1х108 ТСІО5о Бх1019 вч зілрешнині 300 лен су сольовий розчин) сольовий розчин)

ЕЛЕ ШИ НН НЕННЯ са 2 18 1х108 ТСІО5о 5х1010 вч

ПО есх іст ННЯ НИВА сольовий розчин) сольовий розчин)

ЕЛ: сам ННЯ з ННЯ

З 18 Бх1010 вч 1х108 ТСІО5о реє! юс сольовий розчин) сольовий розчин) зи 2331 ЛЕК

А 18 5х1010 вч 1х108 ТСІЮОво ем тт | 3 (шен сольовий розчин) сольовий розчин) о МЕ 10001 5х1010 вч 1х108 ТСІО5о

М: кількість суб'єктів, рандомізованих для отримання досліджуваної вакцини; ТСІЮво: 50 95 інфекційної дози в тканинній культурі; вч: вірусні частинки.

Безпеку оцінювали шляхом збору повідомлень за запитом про місцеві та системні небажані явища, повідомлень без запиту про небажані реакції і серйозні небажані явища, а також при фізикальному обстеженні. Крім того, в різні моменти часу оцінювали стандартні біохімічні, гематологічні (включаючи коагуляційні) параметри і аналіз сечі.

Імуногенність оцінювали за допомогою імунологічних аналізів, зведених в Таблицях 4 та 5.

Блок пошукових аналізів міг включати, але не обмежувався ними, перераховані аналізи.

Таблиця 4

Короткий опис імунологічних аналізів (серологія) антитіл ГП і/або ТАЕМ НП, включаючи субтипування Ід

Таблиця 4

Короткий опис імунологічних аналізів (серологія)

ЕВОУ: Вірус Ебола; ЕГІ5ЗА: твердофазний іммуносорбентний аналіз; ГП: глікопротеїн; да: імуноглобулін С; МАВУ: Вірус Марбург;

ММА: модифікований вірус вісповакцини Анкара; НП: нуклеопротеїн; ЗОБУ: вірус Судан;

ТАРУ. вірус лісу Таї

Таблиця 5

Короткий опис імунологічних аналізів (клітинні аналізи)

ІС5-аналіз заморожених Аналіз відповідей Т-клітин на ГП ЕВОМ, ГП БОМ, т МАРМ і/або

МКПК НП ТАРМ (включаючи СО4/8, ІЛ-2, ІФН-у, ФНП-а і/або маркери активації)

ІС8 або ЕПЗрої свіжих Аналіз Т-клітинних відповідей на ГП ЕВОМ, включаючи СО4-

МКК позитивно, низькі по силі Т-клітинні відповіді

ЕВОМ: Вірус Ебола; ЕП ІбБрої: метод імуноферментних плям; ГП: глікопротеїн; ІС5: внутрішньоклітинне цитокінове фарбування; ІФН: інтерферон; ІЛ: інтерлейкін; МАКУ: Вірус Марбург; НП: нуклеопротеїн; МКПК: мононуклеарні клітини периферичної крові; ЗОБУ: вірус Судан; ТАРУ: вірус лісу Таї; ФНП: фактор некрозу пухлини

Клінічне дослідження триває. Деякі з первинних результатів описані нижче.

Оцінка безпеки

Безпеку оцінювали шляхом збору повідомлень за запитом про місцеві та системні небажані явища, повідомлень без запиту про небажані реакції і серйозні небажані явища, а також при фізикальному обстеженні. Крім того, в різні моменти часу оцінювали стандартні біохімічні, гематологічні (включаючи коагуляційні) параметри і аналіз сечі.

Дані щодо безпеки цього першого дослідження за участю людей показали, що на цьому етапі обидві вакцини, очевидно, добре переносяться з наявністю оборотних реакцій, які зазвичай очікуються від вакцинації. Із застосуванням вакцини не асоціювалося жодних суттєвих небажаних явищ. Більшість явищ мали легкий ступінь тяжкості, виникали через один - два дні після вакцинації і тривали в середньому від одного до двох днів. Випадки лихоманки спостерігалися дуже рідко.

Оцінка імунної відповіді

Імуногенність оцінювали до 21 дня після "буст"-імунізації за допомогою методу ЕГІЗА - для аналізу антитіл, що зв'язуються з ГП ЕВОМ, за допомогою методу ЕГІЗрої - для аналізу ЕВОМ

ГП-специфічної Т-клітинної відповіді, і за допомогою ІС5-аналізів - для виявлення СО4- і СО4

Т-клітинних відповідей на ГП ЕВОМ. Зразки для аналізів гуморальної і клітинної імунної відповіді, індукованої досліджуваною вакциною, збирали в Дні 1, 8, 29, 36 і 50 в Групах 1 таЗів

Дні 1, 8, 29, 57,64 і 78 в Групах2 і 4.

Оцінка гуморальної імунної відповіді

Відповіді зв'язуюючих антитіл, індуковані досліджуваними вакцинами, оцінювали за допомогою аналізу анти-ЕВОМ ГП ЕГІЗА (Фіг. 8). Важливо відзначити, що у всіх суб'єктів, які отримали вакцину згідно зі схемою, відмічалася сероконверсія на 21 день після "буст"-імунізації.

Сильну імуногенну відповідь спостерігали у всіх імунізованих суб'єктів.

У той час як ЕВОМ ГП-специфічну імунну відповідь після "прайм-буст"-введення вакцини

ММУА-ВМ-Рйо спостерігали тільки при низьких рівнях в 7-40 95 суб'єктів, сильну антиген- специфічну відповідь спостерігали після "буст"-введення вакцини Аа26.2ЕВОМ на 28 день або 56 день після "прайм"-введення. Несподівано було виявлено, що ця відповідь є сильнішою, ніж індукована зворотного схемою вакцинації з тим же "прайм-буст" часовим інтервалом (Група З

Група 4, "прайм"-введення Аа26.27ЕВОМ з подальшим "буст"-введення ММА-ВМ-Ріїо через 28 або 56 днів, відповідно) на 21 день після "буст"-імунізації (Геометричні середні титри з 95 95 довірчим інтервалом для ФО/мл 10573 (6452; 17327) і 4274 (2350; 7775) для Груп 1 і 3, відповідно, і 18729 (12200; 28751) і 7553 (511; 1115) для Груп 2 і 4, відповідно).

Слід зазначити, що в нелюдиноподібного примата (НЛП) підсилення Аа26- вектором "прайм"-введення ММА призводило до формування ЕВОМ ГП-специфічної імунної відповіді, який був порівнянний по силі з відповіддю, індукованою зворотною схемою вакцинації (АалммА), з тим ж "прайм-буст" часовим інтервалом (див. Фіг. 4) або була співвідносна з відповіддю, яка поступалася за силою (Фіг. 20). Таким чином, імунні відповіді, які спостерігалися при застосуванні однієї конкретної схеми "прайм-буст" в НЛП не були предиктивними для імунних відповідей, які спостерігалися в результаті застосування аналогічної схеми "прайм-буст" у людей.

Оцінка імунної відповіді

ЕВОМ ГП-специфічну клітинну відповідь визначали за допомогою аналізу ЕГІБРрої з інтерфероном-гамма (ІФН-у) і аналізу ІС5. Для оцінки клітинної імунної відповіді збережені

МКПК (мононуклеарні клітини периферичної крові) розморожували і стимулювали пептидами, організованими в 2 пули (Пули 1 ї 2). Сума Т-клітинних відповідей, стимульованих в пулі, наведена на Фіг. 9.

За допомогою аналізу ЕГІзрої (Фіг. 9), відповідь ІФН-у може бути легко виявлена в 50-60 95 суб'єктів на день 29 після "прайм"'-імунізації із застосуванням Адй26.2ЕВОМ (середня ІФН- уПвідповідь 103 ії 58 плямоформуючих одиниць на мільйон МКПК для Групи З і 4 відповідно) і у 86 95 суб'ектів в день 57 після "прайм'-імунізації вакциною Ад26.2ЕВОМ (Група 4, середня ІФН-у відповідь 283 плямоформуючих одиниці на мільйон (ПФО/106) МКПК). Ці відповіді додатково посилювали за допомогою "буст"-імунізації на День 29 або День 57 із застосуванням ММА-ВМ-

Кіо (87 905 "відповідачів", середня ІФН-у відповідь 463 ПФО/106 МКПК в Групі З, 8695

Зо "відповідачів", 648 ПФО/106 МКПК в Групі 4) і підтримували на цьому рівні аж до Дня 21 після "буст"-введення (79 95 "відповідачів", середня ІФН-у відповідь 390 ПФО/106 МКПК в Групі З і 100 95 "відповідачів", 464 ПФО/106 МКПК в Групі 4).

Результати клітинних аналізів, які вимірюють специфічні СО4- ії Ов Т-клітинні відповіді за допомогою ІС5, наведені на Фіг. 10-15.

Як і слід було очікувати, жодної ЕВОМ ГП-специфічної СО8-- або СО4-- Т- клітинної відповіді не спостерігали в індивідуумів, імунізованих плацебо (Фіг. 10 і 13). Також не спостерігали СОв'ж цитокінових відповідей на День 29 або День 57 після "прайм" -імунізації вакциною ММА-ВМ-Р Йо (Групи 1 і 2). Проте, вакциноіндуковану СО8-- Т- клітинну відповідь спостерігали у 53 95 суб'єктів через 7 днів після "буст"-введення Ааг26.2ЕВОМ (середня загальна цитокінова відповідь: 0,08 95 і 0,07 95, в разі якщо "буст"- імунізацію Аа2б-вектором проводили в день 29 або день 57 відповідно; Фіг. 10). Ця відповідь зберігалася на День 21 після "буст"-імунізації (середня загальна цитокінова відповідь: 0,195 і 0,06 95, в разі якщо "буст"-імунізацію Аа26-вектором проводили в день 29 або день 57 відповідно; Фіг. 10). Для порівняння, у 57 905 суб'єктів, які отримували "прайм"- імунізацію вакциною Аа26.2ЕВОМ (Група З Група 4), на День 29 відзначалася СО8.Т- клітинна відповідь (середня загальна цитокінова відповідь: 0,12 і 0,05 95, відповідно); у 86 95 суб'єктів, які отримували "прайм'-імунізацію вакциною Аа26.2ЕВОМ (Група 4), на День 57 відзначалася СО8««Т-клітинна відповідь (середня загальна цитокінова відповідь: 0,19 95). Ця відповідь додатково посилювалася після "буст"-імунізації вакциною ММА-ВМ-ЕйЙо на день 29, при цьому у 67 95 і 73 95 суб'єктів відзначалася відповідь на 7 і 21 день після "буст"- імунізації, відповідно (середня відповідь: 0,27 95 в обидва дні).

Несподівано був виявлено, що в той час як в Групі 1 спостерігали менший відсоток "відповідачів" (ММА-АдД26, схема "прайм-буст" 0-28 днів) у порівнянні з Групою З (Аа26-ММА схема "прайм-буст" 0-28 днів), частка поліфункціональних СОвж Т-клітин (СО8-- Т- клітини, які експресують більше одного цитокіну), індукованих введенням "прайм-буст" ММА-АЯ26 в цих "відповідачів", була вища після "буст"-імунізації, ніж клітин, індукованих введенням "прайм-буст"

Аа26-ММА (Фіг. 11). Ця відмінність не спостерігалася, якщо "прайм"- і "буст"-імунізацію проводили в день 57. При дотриманні цього графіку вакцинації, як схема "ММА - прайм, Аа26 - буст" (Група 2), так і схема "Аа26 - прайм, ММА - буст" (Група 4), індукувала продукцію точно такої ж високої частки поліфункціональних СО8 я Т-клітин (Фіг. 12). бо Несподівано було виявлено, що "прайм" -імунізація вакциною ММА-ВМ-Рйо з наступним

"буст"--введенням АЯа26.2ЕВОМ після 28-денної перерви (Група 1), індукували дуже стійку СО4--

Т-клітинну відповідь, яка досягав свого піку через 7 днів після "буст"- імунізації (93 95 "відповідачів", середня загальна цитокінова відповідь 0,37 90; Фіг. 13). На своєму піку вказана бра4- Т-клітинна відповідь була вищою, ніж відповідь, що спостерігалася в Групі З після "прайм"-імунізації вакциною Ааг6.2ЕВОМ з наступною "буст"-імунізацією вакциною ММА-ВМ-РЙО після 28-денної перерви (67 9о "відповідачів", середня загальна цитокінова відповідь 0,11 Ов). 21 день після "буст"-імунізації СО4-- Т- клітинні відповіді, індуковані обома схемами, залишалися подібними. Збільшення інтервалу в схемі ММА-ВМ-Ріо/Ааг26.2ЕВОМ до 56 днів призводило до зниження СО4-- Т-клітинних відповідей. Схема Аа26.27ЕВОМ/ММА-ВМ-НРІ індукувала дещо нижчі ср Т- клітинні відповіді при інтервалі 28 днів і подібіні відповіді при інтервалі 56 днів. СО4-- Т- клітини, індуковані обома вакциннимими комбінаціями, були переважно поліфункціональними (Фіг. 14 і 15).

Результати піддослідження, в якому оцінювали імуногенність "прайм'-імунізації вакциною даг6.7ЕВОМ в кількості 5х1019 вч з наступною "буст"-імунізацією через 14 днів вакциною ММА-

ВМ-Ріо в кількості 1х108 ТСІЮОзхо, наведені нижче.

В цілому, було показано, що ця відносно коротка схема з 14-денним інтервалом між "прайм"- і "буст"--введенням являється імуногенною. Гуморальну імунну відповідь на вакцинацію оцінювали за допомогою ЕГІЗА. Згідно зі спостереженнями при більш тривалих інтервалах, у всіх суб'єктів відзначали сероконверсію на 21 день після "буст"- імунізації (Фіг. 16А). Крім того, у 92 95 суб'єктів на 21 день після "буст" -імунізації за допомогою аналізу ЕГІЗрої реєстрували клітинну імунну відповідь (Фіг. 168). Зазначена клітинна імунна відповідь обумовлювалася як бра (67 95 "відповідачів", середня відповідь 0,08 95 на день 21 після "буст"-імунізації), так і

СО8а (6495 "відповідачів", середня відповідь 0,1595 на день 7 після "буст"-імунізації) специфічними Т-клітинами. Імунна відповідь, індукована схемою з 2-тижневим інтервалом, визначалася дещо нижчою, ніж відповідь, індукована при застосуванні схем з довшими інтервалами між "прайм'"- і "буст"-введенням (див. попередній розділ).

Приклад 4

Рандомізоване, плацебо-контрольоване, дослідження 3 маскуванням даних для спостерігача (з попередньою первинною відкритою вакцинацією в цілому б контрольних

Зо суб'єктів дослідження) проводили з метою оцінки безпеки, переносимості та імуногенності гетерологічного введення (а) разової дози ММА-ВМ-Ріо (1х108 ТСІО5о) або плацебо (0,995 сольовий розчин) в якості "прайм'-імунізації з наступною однієї дозою Ааг6.2ЕВОМ (5х1079 вч) або плацебо як "буст"-імунізації в різні моменти часу (14, 28 або 56 днів після "прайм"-введення;

Групи від 1 до 3) ї (Б) разової дози Аа2б6.2ЕВОМ (5х1019 вч) або плацебо в якості "прайм"- імунізації з наступною однією дозою ММА-ВМ-БРйо (1х108 ТСІО5о) або плацебо в якості "буст"- імунізації через 28 днів після "прайм"-введення (Група 4).

Для оцінки безпеки 2 вакцин ізольовано, в дослідження були включені Групи 5 і 6, при цьому гомологічні схеми 2 разових доз ММА-ВМ-Рйо (1х108 ТСІО5о) або плацебо, або 2 разових доз даг6.2ЕВОМ (5х1079 вч) або плацебо, вводили з коротким графіком вакцинації "прайм-буст", що становить від 1 до 15 днів. Вказане дослідження проводили за участю близько 92 здорових суб'єктів у віці від 18 до 50 років (включно), які ніколи до цього не отримували експериментальну кандидатну вакцину проти вірусу Ебола і не мали будь- якого відомого контакту з вірусом Ебола або діагностованого захворювання, викликаного вірусом Ебола.

Дослідження складалося з періоду вакцинації, в якому суб'єктів вакцинували на вихідному візиті (День 1), а потім проводили "буст"-імунізацію на День 15, 29 або 57, а також спостерігали в періоді після "буст"-імунізації до настання для всіх суб'єктів візиту на 21 день після "буст"- імунізації або до припинення участі суб'єктів в дослідженні раніше. В той момент дослідження "демаскували".

Суб'єктів розподіляли в 6 різних груп, що включали по 18 (Групи від 1 до 4) або 10 (Групи 5 і 6) здорових суб'єктів кожна. В Групах від 1 до 4 суб'єкти були рандомізовані в співвідношенні 5:1 для отримання активної вакцини або плацебо протягом всього дослідження. У кожній з Груп 5 і б була сигнальна когорта, що складалася з З суб'єктів, які отримували активну вакцину в демаскуваному вигляді, і когорта, що складалася з 7 суб'єктів, рандомізованих в співвідношенні 6:11 для отримання активної вакцини або плацебо в маскованому вигляді. Графіки вакцинації в дослідженні в різних групах представлені в Таблиці 6.

Безпеку оцінювали шляхом збору повідомлень за запитом про місцеві та системні небажані явища, повідомлень без запиту про небажані реакції і серйозні небажані явища, а також при фізикальному обстеженні. Крім того, в різні моменти часу оцінювали стандартні біохімічні, гематологічні (включаючи коагуляційні) параметри і аналіз сечі. бо Імуногенність оцінювали за допомогою імунологічних аналізів, зведених в Таблицях 7 і 8.

Блок пошукових аналізів міг включати, але не обмежувався ними, перераховані аналізи.

Таблиця 6

Графіки вакцинації в дослідженні і 18 МУА-ВМ-Ріо Ай2б.ЯЕВОМ | 7/7 ЇЇ

З фПлацебо |Плацебо./// | | С777с7сИсИсИс7с7с7с2ю9. о 18 МУА-ВМ-РО | (Ай2622ЕВОМ | /:(/

З |Плацебо/// | | Плацебо./// | (Бо

З 18 МУА-ВМ-ЕО 77777771 ТАй26.2ЕВОМ 8 |Плацебо///// | 77/77 |Плацебо/// 4 18 дагб6.2ЕВОМ | 0 |ММА-ВМЯНю | КГ

З |Плацебо//// | 0 |Плацебо./// | ':СС

З ММУА-ВМ-РіО ММУА-ВМ-Рійо

Сигнальний) Сигнальний) 6 |ММА-ВМ-Ро ІММА-ВМ-АНО | /Ї7777777111111111с1 у 1 ф|Плацебо |Плацебо./ | /|/ зЗ 10 Сигнальний Сигнальний 6 Ц|Аа26.2ЕВОМ |Ай2бЛЕВОМ |: (ЇЇ 472

І О1 |Плацебо |Плацебо.// | /|/

М: кількість суб'єктів, рандомізованих для отримання досліджуваної вакцини рівень дози

МУА-ВМ-Ніюо становить 1х1089 ТС1ІЮО»во (5095 інфекційної дози в тканинній культурі) у всіх групах; рівень дози Аа26.2ЕВОМ становить 5х10'9 вч (вірусних частинок) в усіх групах; Плацебо являє собою 0,995 сольовий розчин

Таблиця 7

Короткий опис імунологічних аналізів (серологія)

Вторинні критерії оцінки

Аналіз нейтралізації вірусу Аналіз нейтралізуючих антитіл до ГП ЕВОМ

ЕИЗА Аналіз антитіл, що зв'язуються з ГП ЕВОМ

Пошукові критерії оцінки дналіз Нейтралізуючі антитіла до аденовірусу/мМмМА нейтралізаціїаденовірусу/ммМА й У до ад русу

Молекулярна характеристика Аналіз характеристик антитіл анти-ЕВОМ ГП, БОЮМ ГП, МАК антитіл ГП і/або ТАЕМ НП, включаючи субтипування Ід

Пошуковий аналіз ЕГІЗА Аналіз зв'язуючих антитіл до іншого джерела ГП ЕВОМ

ЕВОУ: Вірус Ебола; ЕГІ5ЗА: твердофазний іммуносорбентний аналіз; ГП: глікопротеїн; да: імуноглобулін сх; МАВУ: Вірус Марбург; ММА: модифікований вірус вісповакцини Анкара; НП: нуклеопротеїн; БОРУ: вірус Судан; ТАРУ: вірус лісу Таї 5

Таблиця 8

Короткий опис імунологічних аналізів (клітин ні аналізи)

ІС5-аналіз заморожених Аналіз відповідей Т-клітин на ГП ЕВОМ, ГП БОМ, ГП МАРЕМ і/або

МКПК НП ТАРМ (включаючи СО4/8, ІЛ-2, ІФН-у, ФНП-а і/або маркери активації)

ІС8 або ЕПЗрої свіжих Аналіз Т-клітинних відповідей на ГП ЕВОМ, включаючи СО4-

МКК позитивні низькі по силі Т-клітинні відповіді

ЕВОМ: Вірус Ебола; ЕП ІбБрої: метод імуноферментних плям; ГП: глікопротеїн; ІС5: внутрішньоклітинне цитокінове фарбування; ІФН:інтерферон; ІЛ: інтерлейкін; МАВУ: Вірус

Марбург; НП: нуклеопротеїн; МКПК: мононуклеарні клітини периферичної крові; БООМ:вірус

Судан; ТАРУ: вірус лісу Таї; ФНП: фактор некрозу пухлини

Клінічне дослідження триває. Деякі з первинних результатів описані нижче.

Оцінка гуморальної імунної відповіді

Попередні результати підтверджують імуногенність комбінації Ад26.2ЕВОМ в кількості 5х1019 вч і ММА-ВМ-РіЇо в кількості 1х108 ТСІО5о, в разі якщо одна вакцина використовується для "прайм"-введення, а інша - для "буст"-введення.

Як показано на фіг. 17, у всіх суб'єктів реєстрували сероконверсію на 21 день після "буст"- імунізації, підтверджену аналізом ЕГІЗА. Як і в попередніх експериментах, вищу імунну відповідь спостерігали на 21 день після "буст"-імунізації, в разі якщо ММА використовували в якості "прайм"-вакцини, а Аа26 - в якості "Суст"-вакцини, що вводили через 28 днів (Група 2, геометрична середня концентрація ФО/мл становила 6987), в порівнянні зі зворотним порядком імунізації (Група 4, геометрична середня концентрація ФО/мл становила 2976).

Сила гуморальної імунної відповіді корелювала з інтервалом між "прайм"- і "буст"- введеннями, при цьому вищі концентрації антитіл спостерігали при 56-денному інтервалі між "прайм"-введенням ММА і "буст"-введенням Аа26 (Група 3, геометрична середня концентрація

ФО/мл становила 14048), в порівнянні з коротшим графіком (Група 1, 14-денний інтервал, геометрична середня концентрація ФО/мл становила 4418; і Група 2, 28-денний інтервал, геометрична середня концентрація ФО/мл становила 6987).

Несподівано було виявлено, що сильну гуморальну імунну відповідь, що оцінювалася за допомогою ЕГІЗА, спостерігали в разі введення ММА-ВМ-БРію в якості "прайм'"-вакцини з наступною "буст"-імунізацією вакциною Аа26.2ЕВОМ через 14 днів. У всіх суб'єктів відмічали сероконверсію на 21 день після "буст"-імунізації, а концентрація антитіл в цей момент часу сягала аналогічних або вищих рівнів, у порівнянні з введенням комбінації "Аа26 в якості "прайм"- вакцини з ММА в якості "буст"-вакцини" з 28-денними інтервалами (середнє геометричне значення титру ФО/мл становило 4418 і 2976, відповідно). Несподівано було виявлено, що концентрації антитіл, індукованих цією комбінацією "прайм-буст" ММУА/Аа26 з 14-денним інтервалом, були істотно вище, ніж при імунній відповіді, індукованій зворотною схемою вакцинації з тим же "прайм-буст" часовим інтервалом (див. Приклад 2, Фіг. 16А, геометрична

Зо середня концентрація ФО/мл становила 915). Це підтверджує індукування сильної імунної відповіді за допомогою комбінації ММА в якості "прайм"-вакцини і АЯ26 в якості "буст"-вакцини" і перевагу такої комбінації при дотриманні короткого інтервалу "прайм-буст" (14 днів).

Оцінка імунної відповіді ЕВОМ ГП-специфічну клітинну відповідь визначали за допомогою аналізу ЕГІЗрої з інтерфероном-гамма (ІЕМ-у) і аналізу ІС5. Для оцінки клітинної імунної відповіді збережені МКПК (мононуклеарні клітини периферичної крові) розморожували і стимулювали пептидами, організованими в 2 пули (Пули 1 і 2). Сума Т-клітинних відповідей, стимульованих в пулі, наведена на Фіг. 18-19.

За допомогою аналізу ЕГІЗрої (Фіг. 18) підтверджували індукування ІФН-у відповіді з використанням як Ааг26.2ЕВОМ в якості "прайм" -вакцини з наступним "буст"--введенням ММА-

ВІМ-РІіо, так і при застосуванні зворотної схеми вакцинації. У дослідженнях з усіма інтервалами "прайм-буст" клітинна відповідь посилювалася після "буст" -імунізації. ІФН-у відповідь була найвищою при використанні АЯа26 в якості "прайм"-вакцини з наступним "буст"--введенням ММА через 28 днів (87 95 "відповідачів", середня ІФН-у відповідь 687 і 600 ПФО/106 МКПК в Групі 4 на день 7 і день 21 після "буст"-введення, відповідно).Несподівано було виявлено, що при використанні ММА-ВМ-РІіЇо в якості "прайм"-вакцини з наступним "буст"-введенням Аа26.2ЕВОМ, сильніша ІФН-у відповідь спостерігалася при дотриманні коротшого 14-денного інтервалуи між "прайм"- і "буст"- введеннями (87 і 93 95 "відповідачів", 395 і 577 ПФО/Л1О6 МКПК в Групі 1 на день 7 і день 21 після "буст"-введення, відповідно) в порівнянні з відповіддю, індукованою за 28 днів (Група 2, 73 і 67 95 "відповідачів", середня ІФН-у відповідь 427 і 375 ПФО/106 МКПК на день 7 і день 21 після "буст"-введення) або протягом 56-денного інтервалу (Група 3, 4795 "відповідачів", середня ІФН-у відповідь 118 і 153 ПФО/106 МКПК на день 7 і день 21 після "буст"- введення).

Примітно, що клітинна імунна відповідь, індукована "прайм"-введенням ММА-ВМ-РіїЇо і "буст"- введенням Аа26.2ЕВОМ з інтервалом в 14 днів, була пропорційною як з ЕВОМ ГП-специфічною

СО8--Т-клітинною, так СО4--Т-клітинною відповіддю (73 95 "відповідачів" як для СО4-, так і СОвя

Т-клітин, СО4-- середня загальна цитокінова відповідь 0,15 і 0,19 95 на день 7 їі день 21 після "буст"-введення, відповідно; СО8-- середня загальна цитокінова відповідь 0,19 їі 0,34 95 на день 7 і день 21 після "буст"-введення, відповідно; Фіг. 19 А і В). Як СОв, так і СО4-- Т-клітини, індуковані цими вакцинними комбінаціями, були переважно поліфункціональними (Фіг. 19 С і 0).

У наведених нижче таблицях 9-12 представлені узагальнені результати клінічних досліджень, представлених в цьому документі. Дослідження, представлені в Прикладах З і 4, пронумеровані як дослідження 1001 і 1002 відповідно.

Таблиця 9 являє собою узагальнені результати гуморальних імунних відповідей, отримані за допомогою аналізів ЕГІЗА в ході дослідження і описані в Прикладах З і 4.

Таблиця 9

Огляд титрів ЕГІЗА в клінічних дослідженнях

День (дагб/ммА 7926/ ) Аайб/ | Аагв/ | Муд/ддгв ІМУд/даг6 МУ А/АЯг6 МУ А/Аагв дослідження! 0,14 ММУа ) ММА | ММА | 0,44 0,28. 0,28 | 0,56 " 0, 28 0, 28 0, 56 " " " " де | 22013) | 1800) | 20(7) | 2гг(0) | 19(7) | 1800) | 22(0) | 21 (0) ді5 (164079 - | - | - | 22137! - | - | - д22 | 298(83)3|Ї - | - | - | 293(873| - | - | - д29 | - Щ|533(93и77(п100158211000|. ...- |з6(40и|55(47| 22(7) д3б Щ|915(10001946(10001965(100)| - |4418(100)|269(80)|1025(93)| -- ше 1 ші с в 100 100 100 100 дб? | - | - | - вп - | - | - | гло 1554 де | 1 с фс двевооу 7553 18729 я | 1 | 101: | | 1 оо

Дані представлені у вигляді середньої геометричної концентрації (СГК) в ЕГІЗА на мл.

Відсоток "відповідачів" в кожен момент часу вказано в дужках;. Аа2г6: імунізація вакциною даг26.7ЕВОМ; ММА: імунізація вакциною ММА-ВМ-БйЙо; схема "прайм-буст" вказана в заголовках.0О, 14: 14-денний інтервал між "прайм'"- і "буст"-імунізацією; 0, 28: 28-денний інтервал

Зо між "прайм"- і "буст"-імунізацією; 0, 56: 56-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; ": день "буст" -імунізації; СГК: Середня геометрична концентрація Дослідження 1001 описано в

Прикладі 3, а дослідження 1002 описано в Прикладі 4.

Таблиця 10 являє собою узагальнені результати клітинних імунних відповідей, отримані за допомогою аналізів ЕГІЗрої в ході дослідження і описані в Прикладах З і 4.

Таблиця 10

І Огляд клітинних імунних відповідей в клінічних дослідженнях, оцінених за допомогою ЕГІЗрої дослідження 0,14 0,28 0, 56 0,14 0,28 0, 56 дб | 25013) | 2507) | 2507) | 25013) | 2500) | 250) ді5 | 95079 7-7 - | 52-17 - до2 | 354075 | -- | - | 295387) | - | - до9 | - | лоз(вО | 5В(БОО | 7-1 2507 | 250) д3б | 203092) | 463087) | - | 5520100) | 882093) | - до | 7 - | 3900799 | щ-- | - | 455073 | - дб | 77-77 - | 23867 -17171117- 1111250 дб4 | /- | - | 6480866) | - | - | 4400100) д7в | 7 - ЇЇ - | 464009| - | - | г2гз8(87)

Дані представлені у вигляді середніх значень ПФО/109 МКПК. Відсоток "відповідачів" в кожний момент часу вказано в дужках; Аа26: імунізація вакциною Аа26.2ЕВОМ; ММА: імунізація вакциною ММА-ВМ-Ріїо; схема "прайм-буст" вказана в заголовках.б, 14: 14-денний інтервал між "прайм"- і "буст" -імунізацією; 0, 28: 28-денний інтервал між "прайм"- і "буст"- імунізацією; 0, 56:

Б5б-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; ": день "буст"-імунізації; ПФо: плямоформуючі одиниці; МКПК: мононуклеарні клітини периферичної крові. Дослідження 1001 описано в Прикладі 3, а дослідження 1002 описано в Прикладі 4. Дослідження 1001 описано в

Прикладі 3, а дослідження 1002 описано в Прикладі 4.

Таблиця 11 представляє собою узагальнені результати СО4-Т-клітинних відповідей, отримані за допомогою аналізів внутрішньоклітинного фарбування цитокінів (ІС5) в ході дослідження і описані в Прикладах З і 4

Таблиця 11

Огляд СО4-- Т-клітинної імунної відповіді в клінічних дослідженнях, оціненої за допомогою аналізу ІС5 дослідження 0,14 0,28 0, 56 0,14 0,28 0, 56 де | 00200) / бог) | 0020) | 00200) | 00200) | 002(0) ді5 | 00636777 | 0021-1111 до2 | 00604551 - | 7 - | 0503 | щ- | - до9 | - 0070433 | 006031) | - | 0023 | 0020) д3б | 008067) 0л1(64) | -- | 0л9(73) | 097093) Й.:: ЙЬС:Х до | 77-71 056) 7-77 - | 06671 - дб | 7777-1171 - 1 | 005036 2 - | - | пого дб4 | 777-171 - 106037 - 17 17717- 111171 017(67) д7в | 7-71 - | 0257 | щ- | - 1 00853)

Дані представлені у вигляді середньої загальної СЮО4-- цитокінової відповіді в 95. Відсоток "відповідачів" в кожний момент часу вказано в дужках; Аа26: імунізація вакциною Ааг26.2ЕВОМ;

ММА: імунізація вакциною ММА-ВМ-Рйо; схема "прайм- буст" вказана в заголовках.0, 14: 14- денний інтервал між "прайм"- і "буст" -імунізацією; 0, 28: 28-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; 0, 56: 56-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; 7: день "буст"- імунізації. Дослідження 1001 описано в Прикладі 3, а дослідження 1002 описано в Прикладі 4.

Таблиця 12 являє собою узагальнені результати СО8--Т-клітинних відповідей, отримані за допомогою аналізів внутрішньоклітинного фарбування цитокінів (ІС5) в ході дослідження і описані в Прикладах З і 4.

Зо

Таблиця 12

Огляд СОВ8-- Т-клітинної імунної відповіді в клінічних дослідженнях, оціненої за допомогою аналізу ІС5 дослідження 0,14 0,28 0, 56 0,14 0,28 0, 56 де | 00200) / 00200) / 00200) | 0020) | 00200) | 002(0) ді5 10022917 - 71777117 - | 0020-11 - до2 | 05064) 1771-1111 109033 7-1 до9 | 771 -102(057 | 005557) | -- | 0020 | 0020) д3б | 0007050) | 027(67) | - | 0,34(73) | 008053). |Й:.:КХ - до | - 1 027073) 17-17 - | 053 11 - дб | -11777111- 1 109867 - 171117 - 11002 дб4 7777-1171 - 11102486 | .- | щ- | 0.070853) ід? | 7-17 - 1024079 | щ - | - 1 006(47)

Дані представлені у вигляді середньої загальної СЮО8-- цитокінової відповіді в 95. Відсоток "відповідачів" в кожний момент часу вказано в дужках; Аа26: імунізація вакциною Ааг26.2ЕВОМ;

ММА: імунізація вакциною ММА-ВМ-ЕйЙо; схема "прайм- буст" вказана в заголовках.О, 14: 14- денний інтервал між "прайм"- і "буст" -імунізацією; 0, 28: 28-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; 0, 56: 56-денний інтервал між "прайм"- і "буст"-імунізацією; ": день "буст"- імунізації. Дослідження 1001 описано в Прикладі 3, а дослідження 1002 описано в Прикладі 4.

Передбачається, що приклади і варіанти реалізації, описані в цьому документі, наведені тільки з ілюстративними цілями і, що різні модифікації або зміни у відповідному аспекті будуть запропоновані фахівцям в цій галузі і повинні бути включені в межах суті і сфери застосування цієї заявки і об'єму приведеної формули винаходу.

ПЕЕЕЛІМ ПОСЛІДОДНОСТЕИ кім» Басатіай Мохбїс дл сис Батаківп Месії Іпс. скисеїї БОЗіяпа ВОМ,

Чплподучені Штати дмевики, як представлено секратарем, Лепартамен охорони здоров'я тв соптальних служб «вед СсПОсСОВИ Її КОМПОЗИЦІЇ ДНЯ ЇНДУКУВАнНЯ захисного ІМУНІТЕТУ ПЕОТИ скок ве - ких щ- сх -

ФІЛСВІКУСЄВОХ ТНВЕКНІТЇ

«8» ОБМОПВВСТХ «свой» ЕВ бийОод4о5пих «іі оф «МЕ0з ш5 о ег/1186055

Івін 5-2-13 кій пдюр нлиїБаБИиЗ «Ва От п- 08-11 све ме БІБ сізіз 8015-07-06 «їх З «таз раєепїЇвЗ версій 4: «їй» З «11» Те жеЕи ПЕТ «г1а» Штусна послідовність ве чеН хай» Улікоопровеїн відуєю КЖбела Зав, Шхам Мауїпок кацоз З яру То нщодо уд ти саму З яко, уж Мои - Е ідо ою з я

Мей заіуУу Уві тв Ку дів Мен слой їжа Ба АКЯ АБО Оля вде йузв леЕд ї 5 НВ; я

Твх Бек Рі Бне еп Тер Ууаї Її Їїє цей бле сів о дту ТВЕ БД БЕ ск а З

Іїа рже ПевосСіу баеаї ЇІїз чів Азпощах ТИХ їн бій Майї беє АвроМаї 35 СЯ. я ззвозмУвВ Пе Чаї Сус двжоо Авролпухд луні Бсековет тах дві Літ пед сао и Б по

Пак уві сіу без вапобез пів Зіу дза сСІуУ Уаї діа Твк дар уві Бко та т вп шек Ада лвх БУ вва Тсроб1уУу ББе деп бах о біж УаІї Бо рес Тв Маї я зо 55

Маї Ав ТУує ій йіа сі Біб с ТхвВ'Афа сіб Али Суз ТУх вл Бей ос ї9о їб5 118 те Ти ув о РЕ Дяровіу Бес бум бук Тим РЕ Аза Аза бро дЕросху о 159 ї25 їїе Ах бі РИ ро дЖЯ бух до тую уві нія їее Фаї шек «цу ТЕ 1350 185 135 віу Еко був Ат сіу дазбБоБбе дія вне НІВ о Буз СІ У дів тва пе 155 ТВ 155 159

Беч о туж ви Ака се втїа бек тв УВА їі Тух Ва су Тв тиж РНе 153 ит Мт дід біл біУ Мі чаї йїа РБе дев Ті беи ЖКе 510 Аїз Муз Буй Ав т х со ес КІЗ Лют, Я лют ОН пед ої те бук Ля

Ба о гле Бас Бех Ніз РКО а Ака спів ке Уві вай азів ТВ бій двр 155 я) ЗБЕ

Ехо щеї ВБЕ 5ІУ Тук ТУЄ Зеє Тс Тнж 118 ду Тук бій дів ТтТву о бІУ мви) 215 ит па о біу тих Ап біз тп ЗІ ТУЄ Бей пе січ УущІї Вер о дай си ТЕ аї5 ВО З ай

Тут Заї пів іївмошщіо Бах вже БА ТАНЕ Бу агро оБіва о бещо бе іль Ша

Во Ух сшее, СВД р т що жду кю те це скид Тр ТИХ жк ото дви зі тре о т1іє тТук Твх сек Бу був оАту ес АвА смпж ТВ Осху пув леж ит ств жо кох ОО їж Я1е рЕв ев Уаї два Еко сій с16 дво Те тк лі сру Бі тер

Міа рве Тер обів Тк обув ПЦуз Аяп о Гво ТК о дДеб пу Сів бле бек бій ва 255 запо піч пез бек Рне тс Узі Уаї бех Азов осі Аїва буз' дв ої1іе Бек осі 0 316 35 зда пу Бек РЕй о АТа аку ТНЕ век Зак Авровто бу Тах Авпотвю Ле отТвЕ зум о зхва зав 325 Зих 335

Ух пе 81 хів ті зе сел й дае 2 ТЕ ю та ку кт Гай сів дя Ні муз 118 Меї дід бек бій Авпобвк беб Аіа Має чаї Сів 340 345 350 ал нів Явкобів піуУ дтч бі: Аза дів Маї дек Ні во тя Тйх Тїво пе ще ке з55 360 За іа Та Іа ес ТА шек ВЕо Зіп Зес ем Св ТЕ Був еко бл БКо

БЖ 15 зво щк п нн чн ни дво Ай пех Тих Нла да тв вті У тує цу ем ав гі беж сіб зна зо А 20

Віз тнж о бЕБ аї смолі Мі НЕ Ака вта Тек дар Ав Авроцек Тв ня ча 215

Аза Вес вЗюЮ ТП бко ет дів ТБ Тих АТ дів о сіу БЕ ро бут ВІЙ

Мем, Мечі доб ко зх ЯЗ пі дв ТНК ода о тТас бак обу ББЖ ТІК АввовБе ем Ар Рго дія Так

ЕЕ их :. Я 135 «40 445 презнід, гегр. знач - шо т Кт со я; и яти шосе. г ши. Се Тетяні тиж хпжЕх дак ро бій дяй Пів Бех осій тис мів ОКУ Ал АвАа Аві Же

За 455 яжо нів вія піп ЛЕ Тбх сбту бба бід Щек дія Беж дет 51У буй бай бу ца ях 475 ВО тай її тп дна ТнХ сг1і6 вів щі Удь Аза 5РуУ іа лі тп сту БІ 485 1-0 а ко Ля Ів аку АКа Є16 Ав тів сві дав вів с сбіп гБсСо був бух Ав

За ЗИ НО про двя тм нія рух Ттр отих ТЕ обі дз обід шіу АТа Аа тГе І

У йо аа т з 000 Мровхуч коду лиху сяк Маю ик х фс зк де пу ит - пя вх з пев Дія Тер отїів Бо Тух Ре БЗІіУ Бк о Ата віз іч су ГЇїе тує ТІВ 533 З 54 о ФО я сх СД шо й шу ТЕ вух тотон жи пт шщрач рАжеЯ кис са Бей Меї Бі Ав пів дЕВ сту бем о зі був бір Бец вхо М за 5 550 558 БЕ пе Аіа вяп паца Твж о Трх біп дія ей сій без орй» Бей оба іа тих

З БО 55

Тпв БІЛ ей веу тпж бе Ве ої1і: за АВ ОдтЯ бух АївВ БТ Дар ра зо 85 0 ем оіежв сов АБЯ Тгросіу «Му Трх пу чів ті ей обі го Аввобув 35 00 «05 су тіж січ вто НжЗ АвротТкроТвВк пув о Ат Зі жнЕ АВО Ппуз ТТБ Авр ве ІВ ого сіп осів Бізе Кіз Ар овве Узі Авропув ТЕ оївци рко дав осі сіУ Азр 25 3 535 340 ї т, з я х тр пев т г я зт ву рат и т що бутік ті

Авзподйвровап ТтрогЕв отТах Сіу тев о ароа спів Те Ті РКО АБа су Ще ва 55 зп за КУ пок ої ху, г пу М Чо хе ОВУ е т тла хну луг зіу чаі Так обіу баї Тів ті Аїав Уві 115 АУа їв ке був 18 Сув

ОО 555 та пу ів Уві ре.

БУ сті щу «10 8 «ке об ши НЕТ дкшіЗ» НтУчНа ПОСсСИЛіпОовнНісивія «Де «ака» Глікопротвів вірусу ТОсЛа Судан, шкам сі «ас я

Меї б1Уу Єгу ев Бах їед Пец пів Пед бро Ага дез о Сув Рез та Бут ї З 15 ТЗ

Зеу бек Рів о рБіпе Уві ТеЄв Уві ї1їа ІтТе Бей Бе бій оїбув Аз ре сах т лат ср

Не Ко з ї тА Б " с ку у п ре тні с сом рин пд т. ан У 1

Меаї Бо Бей птіу уаМ зе ТвЕ дво ойек ТВЖ Пец біш За Тах віз ще 5 5

Ав сі пе ущі Сує зу джр піз Ге) дій пав Тл о йар зіІй Еш ув во по хе т : т і сечо й ою даю яр тт, Єкиюсюо Є т Ме нки стали

Веж ші ші дез депобец ЗІ у ден Гу Мал бек Так о Аво о ївосио в 7 з ВО еко Аїв тп Був Вко ТЕр лів ре дкч Бек сту Маї бро ско Буг Удуі 85 зо 5 тт Ки ем лож виру НЕ ух пе: В Гілото Ї ее 1345 уві век Тук піч ів біу Бі) Ткр Аза бій Азпобув Тук Авп оце біз хору, я тув, КІ

Я ВХ Є шен чн нн Не мех чих о р я с сок -х кв

ЛХіе Бу Гуз Ре Аво біУу паж бій Су ей РКО Бо Ба рув Ав обі 115 129 125 ук Уш ть, яру ізн Ки З яву Кт. я ск ну й Вже стожу з - жк А жю сактукуи чаї вка сіУ вив ро вка Су ду тУК Улі ніш Ппув вів сій пі тТНЕ а ща 130 ; єр ші вежу аж пази жах оо лю т кдикєічковкох зв сіу гго сСув РЕ ліУу дО тує ВУ пе нів цуз Варобіч Віяж рре вве

ВЕ ї5О 155 1659 ев отухю вв дра Се) Аїа бек спе уві ті тТУЕ доз Оу баз ва БНе

Її ї170 ІТ їх роси ня тк ве ни а Се тло Тая Мох х прута тоюики Я со.

Аїа січ у чел зе дів бБе без ті Їж лта взув КО Б Би ТВх

Та 185 1955 перу ния СИ у дл у тржмл се яр, я Не : гачн скоднсвко Мі щої що пе це бій Бек Еко бро їде Акц сій Атба Маї би ТУуЄ ТВх сла Вт

МзЗЕ жо о уп а тт ка 2 КЕ Ура р Чо ЖЕ бю АТ ша уж я о Древт тпсоваех Зв тує ТукоАта Тит Бек Ту бе сій тую зів їі Ба дев грот Й --х п тр ий 215 Ка. ке оч с я т пауз ті со Курку п Саня ще т; "пос й др як їх вве ау Ала сім нів ошатне ТБЕ бед вна Був 1і8 АБО вай о Аап Ту ши 230 35 Я - ллян " сжоднх 4 г М Твосучия кУце якшо соц г рол с чи 4 Я шд сх

Рів Уа! АхЯ гео дви деч рих нІБОТБЕ РКО Ів Не дей о вне са уец кій За БО пос яко Тед ШКФ Тоавтя Її до її стоку Тез се Дах то й ге НК ще дж АЗЮ Тих тіе Нія їй Нв біз бвч Пео беб Аа ТЕ Те обу ДЕЯ 250 255 ато ем о їБе Тхросвр о йшц взровів вл Ті дво вів Аве тів біуУу біб тр ай ен вів ЕКе фсросСів вва Був Пух деп огец Зак бе сіп опе; вте ку м ке 8 заз ше Фк я, Сил Ук У т - т ї за ян. пу Лк А тлу мех й т ОА ск зів бе; шет Ра ОГО Азії ем бет бей Двп сів СИ о біМ Вир вв Авр 395 10 Зі 320 о, пот та п х ке ж пух З при тран ся прак - т ді. лів Бах Бек де Тте Так цу бі до 11 Зак дер Ах Ві ТцЕ 8 530 за

Ах муз тТук дет Вр ема Уйі Рі був о Авнощек Бгто 0ТУу Меб Уа овко

0 345 Ве, фак кох її Квт дк и на ть «хх - Є аких, К ов ше чия оди ж

МейпоМія ЇМе бро сію Лу бі те ТВ БемоБко цех 51й йвл бек ТВОЄ

ЗУ зе 55 іч шьу сф одху Уві б1іу Уві Ап о Твж о сбіп СТ ТтвЖж її їле о біч тах 37 За 350 до р Ж маше т ГУ ЗЕ ІгУ В Тугх ТІєх - г їж окт пе кїа Аіа Тс їіе тів ві ТТН Ай 5хуУу АБИ Вів Мек СІВ Гі ев ТС

ВУ зо 355 450 тів щі тів вжд гро Євр Беж ЕС ІВ Тіа вхо бак беж Явкорже пе й х їх Я 305 4 415 тв азїя Рко дак Рхо Сі Аїв За їТВУ РгОо ТБх тах Бів Зх зад о піж 429 498 ій ха Шет Уві Меп Дів Тия бів Січ оБхОо тн о ТНЕ Ко Ро Сіу ах зак 435 «ай 445 вк Бі Вко Тахо тТнк осі» вів Бк; остК рем Те ТвкоБкб зі дз 1ї1в 450 455 а

Я лтжх і р речи Уузк де ші тах сват Кох ї пре Фасух: Бідвсит дош От

Тв те Аза уаї Був тв Уві ей обЕо 035 бів веж отак Бе о АвпосіУ 465 470 75 4805 хорі ик їі фах сив пар переко ху у к кї лем Її вах і про лок їз щі стцю йех ток Уа тнЕ ЗУ Се Тих пі Бек Пец бБлу НЕ Ату 35 45 ах їув да Ба о дке вхо віп о ТЕ Авп отак Зув Віа вс піУу Гуз Сфя Ав.

ЗО я 240 вх дувт бизи Нв тує Тк Таж АТа о бія Сі) сій Віз дя) АТа дів СТУ

ЗУ й кіш вів тТЕвБ Ті ско Тух Бе Бі РкЕосбуу вів біб (У їїє ТУЮ ТОЖ о 535 ай

Ан ан НН Ми ня сту лек т у ке й тк Жодутя буре Кт т, лам жу Ав мес Ні вза шій щи а Сі, Ма СУ гу Бен ока біл пах сту 555 60 толк ДО й -х т ще план т шоп щі те зх зач а нн нн ЯК р ех діа Ай іч тн ТВ іє ліз Єна Зіпо без БИ це Ак діа тн

Вих Б 78 тн ЗіБ цем Акб Тлю ТУук Тих їі їлеи лев дея Пуз с Ала бів АБО Блю пає ва зво

Тем бан Ака дей Тео сіу ЗИ СТЕ Суз АБУ її Те оЗіу РО АкроСув о БО во

Су тіе зі рвго нів о Авротеро Тк Гуз Ази о ТІе о таж АБО був Тіз дви від 55 БО спі жі 1 ні Ар о вле Ії дщшо Вей Рг їж Бво Зв бій аво АВ

Би 3 сах ВА вав Ар овзи Те отТгв ТЕ бу ТкЕроАку ба тк її ро дія су іє

Бей ай пзЗа зу їйе тиж ОїуУ їїе те їїе діл» оті тів Ву см ей був вії Сув 5вО вах п

Був кМей сцем сСуз 85 «1 «в1ї2 ВВ «віше ПРЕ нини ве трах стихії шоері сени «Е 3 шкучна песпіщОовникшие. кути как спеки ит кий шли сіку а Ду стопою вв знав» піжікзпротехн вуІрУТУ Марбуве лятголя «ох

Майї був ТВ тВЕ Су Гею Св ТтіЄ веж їж ТТЄ 50 ІЗе 51 БІ УВУ х ; її. і 1 З 16 КВ пУув Тв о бей вкз зе пЕц біб ЗІБ Акта сбеє Ав зіТвосув жу БМ ода п 5 За

Уві дв йде уві Су дев сі тк рей іп був те спас дв ожа М ня а 45 зей мат сі Бра ТЕ опсем Звшж о ЗуУу ів Був Мі Ата адврошщаюв Бе Тез ск й оч с щи 5 бо тежіж ЛК і е хіх Й тру йо лож Ко й дк нею В 5 Ди піп віта вк Був йкч Тхо Абе Пе Ак оАЛів б5іУ Уві Бр хо пу Ал

БУ 7 ту во чаїолуай тує Ж блю Бі біо бло вів ПУБ тах су Тух йшп їв о дех ча з З чаї тТвж о вАвВо Бо Беж сіб Був о 5ає пен одебс бец дво БЕ ско Ту дей

105 115 о сур Міху ся В ме 1 ту жу товка р о Ач ІТ ж дх м сх -- г її ка дво їж Ко Гуз Сув о цув ТвЕ ТБ Нія МНЕаЗ Біе опо сгуУу бів

КУ али 4»

КЗ 125 123 у - ніш ді ре іх т дл я 4 тот: бич ах ЛОБ ам ОВ дви Роз ні дія шій С5іУ 016 Аа Фей нує їсбь ТгтвоОсьЬу Аза рве ке

ТО щ35 145 т. ц юю ке рих МК с 124 ода нн не а АН ВМ з. Ж з т їх їх й; 7 Кк баня о ля рез оту Авродта ліє вів Бех лає Так оМеє тує АКО сТу пуб ув вве ща ї59 155 т65 ті Кк. є; под пд вк, кун ОХ ш- їкщл тфш жк гожудю ТЕ холи т тдкха тп ср с щшьУу Ав Бе вид іа Ме Тіє гав дяк щу Тв Уаї Ні Бех 155 та Ве пд із Ізшу Твір Ж я НН ст мі ди. Ля шо Айр лю соду Яр

Мей ї1Ще ВНе бЗес АК бій о сіу сіп Ту жук Дж Чл МК АВ цец тих

Іо ії85 1за вк ТБ дя пув тує Тр ТВ шШетє БВ Авт 5І1У Тр обТа Тс Аза о АвБр 185 я до тв шіу був Ба Бі» ТК рент сія біб Ту Ай бек ТВ був Аа іє

І ій КО

ТЕ був діа рко Бех Був Гуд РО їй РЕос оГпей орео Тйх АТа НІВ ве гу Кен 235 дав і Вк був о їйей ТЕ жяХ Твж Беж ТВ Азр о АіВ о ТВе пбув Бей Ай ТАК меч нн дру хх

Ах о ов

ТТ оввроБко Ави баг одяр АвЮ сій яв Бем ТИйк тих ве опльу Бек сгу во а РК

Хек соми піл шій бушоквко ТУ ТаК Тік Же Аве о Ала Алла спЕ Суво сій

КА ви | ВУ

Зі Бан дер бат Тв Меб бко бро стпх квко йЖес Бо сіб Вхо Зекотви зо зх) ЗО

Без ся осіп бу БбіУ Ваподеп Таж о Ави Ніз Вес Бі Оіу Маіф Ух те 395 316 зв Зо паж орико лу Був ТЕХ двлпоТБЕ Тк вів Бі Ро лах Ме виб Ро Нів

ЗУ 330 325

Ази! оОТвЖ Тк Тих їМЗфМе бек ТУ Ав АзпоївНЕ Бех пу нла Атшь еп оБек зай 45 35 ет Те кож шо ля пути тож о чи ШИ СВ жк бут Тут ОР р ую

ІВхобто беву Ма) ко ТіФп Бай Ази Азїв Твх деп тує зп тп сій зех 355 360 355 твЕ ді Его бів» вав 513 зІВа ле цех Діаз же пек оїУу8 Тлю ТВї це 370 Зх ЗО

ІТсві во ТНК ошщів Або Вс ЇВ їн Атїа був бек Твх ДапоБеїх Тк о ЗУуЗ зд 330 385 «по

Захорно таж тв ТЕ Уві Ркб дя гук твЕ дви ев тує шви ТК вас 2 Яр КІ щ ал 413 вхо о бет руб Такт орто ап обЗак Трх лід бій БІВ їва Уаї Ту Раш АКо 429 4925 430 аха Був АтЯ Авпотіє ви ТЕб о дри біз у во Ме ра РЕ Ре Тви 480 ро пк й тору іш ке кох т я ск Їх я сх. г Ех А пи дню осбїУу пей тіє ав дів вгш Гіє Джр обо дво во Уві Без Ав о ТКЕ

НЯ 1650 пуд лах ї11іє РІ дар біз Бас о беб Бех дев бі АтТа Бах Аїша пів ба 185 4 375 ко

Авросіп Вів діа Бек вк АБ ОгіФж Ббет тецй тиж пез Бек тує пе рКо ву ЕВ) 495 - но студ нт те ІЗ АВ нене и ач У и НН ННЯ, полк т - 5 тк тв уві дей Січ два тиж лій нів ву біб бі дев сім Авп АБО СУБ пи щ05 вна) лав Авіа сзій бі дже ле Ту беботуаї бір баз Зо бвроїжи Ага діа

ВІ БУ ЗАЗ юс т Фр ул кЗИШЯ ТЕ ех, Пвкиз с сон хг оон У нки Я й р тв пуску піч сем обех ТХр Ме Во БбБе о Рпе пі Рео опіу Ті спа зу бе Тух рун дО мих

З30 За в

ТЕЖ вів схо їжа ЇїХе ув ВАЗ біп Аз дві Пец остаї був Ахя во Бе 543 5 5 еВ

АК їжа Віз деп пай ТИЖ Вів ув шк тей ба тем зей їі дха Уч шо ЗТ З зах не ос пах таз Іа стою кх сич ж ї поурв ду тичит це ка ше гуси тв отвх Бій бів дхи тиж РН: озЗеє їев; ї116 Ачводха нія вій 18 мар за в: 90 рве пе їв Аза Аг Ттропіу пфу Тпж Сув був Маі Іво сіу РрФб двр.

Б БО еп5

Сов обу Т1е бі Ії Піч Дар ви Вес ко Аа тів бек біо біб ТМ1е

Ло 615 п двр БІВ Кі пуб без дО сій бій Був сів се Тк одтіУ ТЕШ сСіу ем

БЕ 63О БЕ КВ піу щу ув ТЕБОЖКЮ ТВ о беє Ав оТтТЕропіу Уві їз ТІ Аяп о мех сіє шою а ЗУ

Тіз пем їхні цем ї-зи БЕК Г1іе дів УЗі їецд їі Аїя Пес; веж буч ХІ1в

ОО ва т пує« джч їїе ЕКе о Тв Був Ку Тіє сту 75 Як

СЕ й «21ї1з 81 хаїй» ПЕТ «сеї» Штучна послішовийїсть «ЕВ, хи-ах блікОощинейв вірусу Маршоувг Міи;воке сао

Мек це о тТнЕ ТЕ Суз не ем ті бек ем ттію м) ї1їе Сом МУ ДЕ 1 З 15 5 пуб Ав їж Бжо БТ БЕ сій Ті дія ет дви Аве а ВО «Кл зві жо но КК)

Ус Аве бек УВІ сбую виш оса У тво тей сзій Пе ТБ ЗІ АБО Нв 35 50 Я цем Ме сіє Бає Тих їй ах бІУу бів їв Мді Віа йвр Бек Его Геб хо ЗО 5

Стів аїа лах Буз Ак Тв Віз вне Ака Тьх біу увісрко БЕО Бу ЕВ то не 80

Уе1ї ПІ Тух Твх бі віу сх Бі Аів був Тс був ТукоАзпоїїв Бех 5 Зо З таї Тв Ар Во бех бку був беж йац рей Пец ав КБКо БЕОо їБЕ АВ кім То 1ї1о їі дЕс АВ Ту вжОо був Сув Пух Три о тта Ні Кіз Її сСМїв С15У СА 180 125

Даповко піз Дік бі с1у їТе йіва цец Ніж Мед о тТЕВ обу йів Ве ве

МКов) Іо їх їви бук йзр вка їв Аза бетх Тс о ТЇТБЕ Має Тк ху 5Б1у був о Маї Ре 135 155 155 160 тп оБіч щішж Аво 11е АГ Ада Мех Тїі6 Уві дат Пцув ТВх Уді ів був чІвЕ 17 115

Меї Їїе Бе ет Аге бЗіп бі сівбу Тук вка Ніз Меє йшп о Пев тет 150 1855 150

Зак Твкх о Ахап Був Тут ТЕр ОТАК жах дек АвпоСіу Твросіп ТпЕ Ав Авр їа5 що ДЗ тиж БІ1Уу Суя Бе бі Аза Пец бів біц Тут шоп БЕ ТАК Туз два о сІг 210 215 Ех

ТвтоСув Аїв ржео бек опуз тії бко о Бто Рука Гей оБка Ту йів Яка ко ай НІ жав кА

Зім Тїв Гуз сб Тк оберт Тк о Рто Татовар вій Тк о Пух дев йшп Тих лав 5 2585

ТОх дар о Бгто бер обеїх Ажро Вер Сів аероЇїюи вія Теж обето сію Бек су

Б 265 РО цекостіу вів ке сій Его Пів о Тпж ЇВЕ обпежЖ АвроАта гаї Тих був бій дя ЛЯ тв піу їжбва Шах ЗежЖ ТО Ме КЕШ БЕ Вис ро ей Бо бів рЕб се ТЕХ 298 му 00 вто із зів Бі бі даподяав тн Ана Мі беж ЗІ дар дій Мах ТЕ дах 310 5 32 піч на ва пух БИ о йчв» Тих СВК ді біо Бе ех Ме ККО бо Був

З Зо 335

Авпотие ТИХ СВЕ ів бер ТК Ай Два ТВ обдех уз нів бЕй где ех зхй 45 з

ТВх бен Зеє віз ро Беп ціп йяв ТВх тн Азов двр дя» ТБ бів бех а іБ5а ЗБЕ

ТЬх те Тве пу ав осі бій ТБ Бак мів ско Бежб Се ТЕ тТвж цей 370 то Іво

Ре Ехо ТБх о сіу дзпобкОо Таж ТНК дій їв обБет Так о бЗехк Бех Був Був зве за зах 100 тету вуж. п ле ту 1-х подо Я яй кошт щі фЗвю дл сім то діа так тк піз Рко дви ТЕ ОТВЕ Аявосці нів рве їв Бек 305 0 815 рух рев орма Тит ркосвБак бат ТБЖ Аза Зі Нлв Бей хаї тує бе Ат зей з 850

Ах Бу Акчу Зех 115 Газ То Ака піц 51 Азр Ме вве РЕШ ле Бер 4135 450 445 дво су цей Ї185 деп діа бро їїв о АБЮ Ре двб ЕКО чаї рЕо деЕлОоТпЕ ща ВІ БО був тв тів РИБ яр І Баг бЗех ес яЗвЕ Бі Аїв ет АТа пів; бїи що риона пух ща їБ5 479 ат 485 двробів нів Аїа бек ге Аши тіє бек оПпей ТБ цей бек Тук ри орЕо 185 450 435

АЛдп тів аАБоп обі дай їпЕовва Тук дек щу біз Авіа бій Ачпап де був зид ШТ С

Маяк; Я ША

Ав Ата січ Се ле бів ТЕБ оЗек уві зів Зій дар двроїєі А1в дій

Зі а 525 зі ем Бек ттр чі вхо Рлає Рпе о біу бко Фі ТІ о іт іх тує

Уа У 520 тн Аза чаї Тез їфВе Дуб ав Ол Аві дви іі Уві Су йк3 ем Аеу дка бец Аівз АБИ бій тТве одія був пек пек бі Мей пен о реп Ака Уяї з Зі УТ

ТЕ Те бів 033 Ахо ТЦ Бра себе) Її дей Ак нів Віа Т165 дер чи пак ня

ЗПпО 58 55 пе бем бе) То оджго тТкр Зі біт Тве осСув Гув таї Ппво З1У Весь вв 585 Са бо

СуУув Сузх Ге біу тів біз Аве Пец Беє Був оди Ті« Бех пів Ой Те ві ві 62 пісеко й - зт хх до с ля «ко . сх й я ми еще З

Адвробій 1128 був уз Ав обтв біт ув 16 сфе тат ойіУу Тео бу Бе

БИ вій 035 Бай

Бі ТУ БУВ ЖхроТЕвВв Твг пек АвроїктрошіуУу Ма1 без тТпЕ дви Пец сту 545 УЮ з ів же бец бен Беб Бех 218 Аза о баі без отіе АТ Тем дек був та во чи п ення ло поз АТ суд да ії» Ре Твх Був тТук 16 1У 57 сп ев ся «вії 733 «жів ДРТ «1» шеучна пасм іловнаисть свеце тина Нуклесопротеїн Жболазвірчсу пісхє таї;Барата Слонової Кістки «ап0м 5

Мей: осів бек да АтТа Бів був лів ТтроМав Те Нія ТАЖ Діас бат бу х ГУ 10 В сєпе бі те дав Тек Нів ру 1 Пем Тр оАіаз осі Пей Чек Уді суп 25 В ло бБІіп білу 112 Маї Ах бів Ака Уві ї11е іп Уві Ні сів Жак тТВг о Аать 35 -Д ї5 ї-еї бід біш тов сСув о сільсецй Її 1ф8е зів піаз Бпе сій Віва су Уві щО що ве вБе піп сама йек віз двровехк ре їхніх сені Мей тей бу рез ніз 8. то та Зо піз Алв ТуУуК ЗІ пу АвО- тую був 1 ре сешп Зій дек АяБ дів Уа ях за з

Су Тук ев біб оду пів о сму РВе дкт пе сів Уа Агро Був Був с ад 05 110

Зі маї був ку Бей ств зм дез ее во вАЗ1а Аа Бех бек бі Був 115 їй 155 ех (16 Аг Ав ТВх Їх АТЗ Лів Мет жо бі спі сва ТнЕ ТВЖжЖ Бі тк Й зт я я ту їз 5 145 щіз дви вів БіУ сій Бе пев Беж рве Абе о ВеБ цем ВНе Тен РК ув 135 1505 їЗО 150 їжі Ма1 ФВ щу ід Був діа Сов Бен цій обууа уві же вежу с ії. Уа ах жу жи СУ ха ств: ьеи бепоБув май сл чи ЕТ же о Іо Тх спьа хЖві НішфБ бек йо бій ші Пе їїе зі; Тук Бо ТНЕ Аїав тво) во Т55 ії чак мах піу Нішв Меї Меб Уаї її бпе Ак ей Мей Лва Має Валю гг

ІЗ 200 205 їмо їжа був лес ем їж їМе нів бій Зі о Меє Ків Мек Уаї Аїв 51У жо ей пе нів Авр віз Авп о др лів Уа1 їі Аїл днп Веї Узі АТ бів Дів Аха пла За 25 240 вна Яви бду їейі їжт тле Уді був ТЕ Маїс їв Аз нів Та о Тат ЩІ щ же "ж тм Й леткі ж ВК ат у ТЕ Зк: нів спіу Уді дкЯ Сео Нв ого Шео Аа вка ТК АБа пу ней паш й чаз пу ваз оса Узі дзпобек на Гуз йта дія во Заг обек Гей дала

В зва во біл нія піу віза туго вів Бо бМе дів вка бей ле Азп о Гед бек о ску

ЗО а З05

Уві дев вп їз сії Чі бу бед Ре Рко бів реч бек дія ї1е Ата

Ж ко 315 йо зем сіу Майї АТ типу Аза нів бі Бех ТНЕопеє Аївосїу Уві Авй Уві

Я 3130 ЗЕ пртуи тк седун нюк Коста шу СМ шо АСК ях зла т мшанея шу зм зів тую сіл ліп їз Акз ід АЇЗСоАЇВ Тк ост дія біб пуз

БЕХ за5 ЗО бій бен Б1іч Пуз Тує Аза бі бек Аху 010 бе дзр о Нія Гей; сту бе

ЖЕ. ее. ся б, кв, 30 з дер дар бів Бі Був пу ІТ без Був Аво Ре чів біб Був Пуз деп

З 38 Зп із їз Зех Ореосізів дій Тож ТИ» Аля Меб Уа Шпе і-ї ру Був шує

З зз0 ЗО 8353 дру Кео йівж пув СПейй Тв біз Віа 316 Же Бек Їбє бак обем Сер дув 05 190 415

ТпЖ о ЗіУ був бій Тут лЛвр Авр ода АБ: вар о з18 вхо Епа рко біу Бео - ї ра Е 5 не у о 2 435

Ме Ап дво Аа іо Авпобек бій сів біповвроАзр о Аво Ре ТБ даю за тако 45

Закобій Авю Так Ти зі Бко Авю ї1є їїе Уві Ар око АзроАБИ Обі мя 455 450

Джо ТУс яп два ТУЮ сзіс ве оТукє РЕ дек піл бак Аіз АЗИ Аів рко 85 о 475 ЗО січ аво без уаї Пец Ре Дер пен СІ ввр о З1у Авроб1ій) Авр о Анро МІВ ях Й Й іх слух а73 455 ї95

Аг ко бе бБеб бек Бек бів дяп АБО Дяп бу Вів о Зев Абе ТЕ оЯку 50 За щі

Твк Ар обек дя пуз ТТН дек дво Тк Ав о дто лап вка ТАЖ Авп о Меє

У ке Ех

Ро був був вар сег Тах біб вв Аща АВОо дев ОггО Аідй сіп Акоа дів азу 35 са 530 За па зів ін їж дія Вб Ав Ан ї1в пі АБИ о тТьЕ ко Ту хо Нів дк зи тей Зп Бо вів бен Тйх Во їі дет бів 024 Же обіу Бек йяп Сіу Бів Ап

Б ВАТ

Аяродво зіе дво Беж (іє БЕо рко Пеб бім нак еко біз 14 Ав дей

ВО 55 5590

Тв січ Те жи Тов тТве тах Твж Був Аям о ТВЕ Тв Аза бсо Бго Ат о ро тто Уді тує дку дак АДеп бек Січ ру Біч ро бец Рго бів біз Буш 510 ві БІО

Зек' Ото пув'їів го Аво Сіп Уаї бек обі» Бек біз Ап Тпг Аеродет 625 63О 535 40 пув ко Ніз Зак сій бій Бек Уяі біс біз Мес тТух Аку нія Тїе Без 65 65 055

Зій їйх бій біу Ре вБе дво АТїа 118 без Туг Тує Тур Меб Мер тре веб «83 то сій сія Рже її Маї вве бег ТВеобег о Авр сіу Буз Сів Тук Уві тує 575 БО Ба5 кос Ар Зех їз сій бі спіш Мі: ВЖа рес Тр Ше беж сін був с во вав таб

Аа їєц Дввп обі Аве о Авводка Бпе Ті Твт Мет Ар о дяю о піп іп Ре тов па 75 720

Тут Ткр реє Чаї Ме айви Віз дко АБО Туз Бе мес Ат ТІіє бе со те 73 735 ніж Ні ПУуВ

Claims (15)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Вакцинна комбінація для застосування у формуванні захисної імунної відповіді проти щонайменше одного підтипу філовірусу, яка містить: () першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і (ї) другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА-вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають амінокислотні послідовності «ЕО ІЮО МО:1, 5ЕО ІЮО МО:2, 5ЕО ІЮО МО:4 і 5ЕО ІО МО:5, разом з фармацевтично прийнятним носієм; де перша композиція використовується для ініціювання зазначеної імунної відповіді, а друга композиція використовується для посилення зазначеної імунної відповіді; і де аденовірусні вектори є гАааг6- або глаз5-векторами.

2. Вакцинна комбінація за п. 1, де перша композиція (ї) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу.

3. Вакцинна комбінація за п. 2, де перша композиція (ї) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу.

4. Вакцинна комбінація за п. 1, де композиція (ї) додатково містить аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок ЗЕО ІЮ МО:2.

5. Вакцинна комбінація за п. 4, де композиція (ї) додатково містить аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок БЕО ІЮ МО:3.

6. Спосіб індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта, який включає етапи: а) введення суб'єкту першої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО:1; і р) введення суб'єкту другої композиції, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА- вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають амінокислотні послідовності ХЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮО МО:2, 5ЕО ІЮО МО:4 і ЗЕО І МО:5, де першу композицію вводять для ініціювання зазначеної імунної відповіді, а другу композицію вводять для посилення зазначеної імунної відповіді; і де аденовірусні вектори є гАа26- або гдазо-векторами.

7. Спосіб за п. б, де перша композиція додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу.

8. Спосіб за п. 7, де перша композиція додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу.

9. Спосіб за п. б, де перша композиція додатково містить аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок 5ЕО ІЮ МО:2.

10. Спосіб за п. 9, де перша додатково містить аденовірус, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок ЗЕО І МО:3.

11. Спосіб за будь-яким з пп. 6-10, де етап (Б) здійснюють через 1-12 тижнів після етапу (а).

12. Набір для індукування імунної відповіді проти філовірусу у суб'єкта, який містить: () першу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість аденовірусного вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок першого підтипу філовірусу, що має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:1, разом з фармацевтично прийнятним носієм; і (ї) другу композицію, яка містить імунологічно ефективну кількість ММА-вектора, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенні білки чотирьох різних підтипів філовірусу, які мають амінокислотні послідовності «ЕО ІЮО МО:1, 5ЕО ІЮО МО:2, 5ЕО ІЮО МО:4 і 5ЕО ІО МО:5, разом з Зо фармацевтично прийнятним носієм; де першу композицію вводять для ініціювання зазначеної імунної відповіді, а другу композицію вводять для посилення зазначеної імунної відповіді; і де аденовірусні вектори є гАаг26- або гдазо-векторами.

13. Набір за п. 12, де перша композиція (ї) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок другого підтипу філовірусу.

14. Набір за п. 13, де перша композиція (ї) додатково містить аденовірусний вектор, що містить нуклеїнову кислоту, яка кодує антигенний білок третього підтипу філовірусу. о увесь ев НН Груза г. ще Й | в Гри ОО пірчоом КВола ск «Прайм «Щетх : ще ан М єдениї

5. САОДЮНУЄТИВ) (ММА пусте ях Ве СБ о нн и ОХ АаЖІВКУ ал НЮ ВО 5 Шан поле ЯНОМ о обов

Фіг.

о о п почи іо ЗнвВіжжвання НЯ. Пон ПА зе І «Прайм» «Бус» «Бус» 4 ЩІ ЩІ ни 1 ' йо Й 27 й Кя З ся і з лижні 0 4 із жк шк х МИ У 15 : Ек еуропатка? накопичення МКК тс Ин зв прес ення кн ! налення СВ, АВМ т хімія, ЗА козгуляців ння Н гісломогій : пе он нн 5 КАН ен шал

Фо. А в 305, Похазане: 400, пакету тил елея са вайвніщий бай кі 254,33 чень Н і со ДАЗВІМУА В 2в | ЕТ 7 - МУДАЙОВ ж Е й : -- АВОВІАЯЗБІМУА Е 15 вин сн : 5 - -а-Адмоно Е «в ; ж і си-Ковтроїі в ; З 25 : : «» Історичні контроді 0 сон А дуннтентня 0 ; не : Сй о /й 14 21 28 НІ ї 4 21 8 дні після інфікування дні після інфікування

Фіг. З ЖЕВОУ ГІ КЕІДВА 50 | І І | І ! бої ! : : ! ші Шу чі тя ж й

- . Бе : Я І : і З 3546 | пи е - і ! : А Я - : Н І : і 2 Я і і Е - Я 2 304 : : : ' : Ф чі, ї : : : ж Н ч-ї ї Й : : ї я и м І : : і

2.5 ї- Е Я ! ї

2.0 : : й а і : ї жі х В 15 СПИ дан и а Ле тиждень дослідження: 04 8101305 8101104 Мо я 8101104 810 Вакц. тиждень 0; дагбтри ММАмульти даббпустий дазагри іон Ваки: тиждень я: в ій г дазвтри Аазбмено Вакцотижденьй: 0 МУАмульти АБ рі МУАпусни 0 МУАмульти АоЗЯмона

Фіг. З

ЗЕВОМ ГП ЕБІВА

5.0 | | й І | | , 42 т як : - т ее: т ї : ОЗ

Б. | | ша

- 3.0 « : ; : : а і і : й 4. 42 ши | | . о» 15 т тт пн ин, а ОН дощ 46 нд о нд: НДО ндої нд о нНДд ої нд НДО: ндо нд , Ії З 4 8103304 810113 4 8301410 4 810410 4 810 тиждень дослідження: м дет м яма дих Контент "Вакн. тижлень 0: Аагбтри МУАтмульти Дод блуєтий Айгбтри КЗ Вакц. тиждень 4: мух. А й му ке й дазютви дазвмано Вакцотиждень 8: мульти три пусий 0 МУдмульти моно

Фик. 5 МАМА ГИ ЕТБА:

4.5 | | І 40 Я є У т - х 30 ї | РИ о ще ше ші ШИ г. і : : : жі и НН 15 пи !

4.0 ? нам и п и п р вв НД с нд яд о! ндондДої нд ндої До нд 7 04810104 830310 4 8 0310 4 В 0110 4 8 011 ТИЖДЕНЬ ДОСЛІДЖЕННЯ: пегполнвтавовосетввоттск теликолваоввіеттвавововт зотьлеогюое тео ово аєтас човеотете ого оавьлььосов плаття данотня Ваки. тижлень с: дагбтри МУАмульти Айоблусєтий дазатри і Ваки, тижнень 4: й ій р АЯари Айгбмвно Вакнотижленьй: 00 МУАмульти дагбтри МУАпулий МУАмульти 0 АбЗбмоно

Фіг. 6

А Аа МА ОК таж в МУ АЙ - ТЕ токці зрос. труивзлентний зго піннкаензний ш воза се ш яю м 5 з ДЯ - чову Б КУ По «то 5 5 У З що ех вка Б КУ ВОЗ Б - КК МО Ве тва ВВ МВ Я зате 3533 зах дзяа с ка АВТ. сага тні В ста ек ; зевоаукх: Е МА В тижні АЛАНА - ОЯАВ зані АВМ АЙ - й тиж ВОМ АЙМЕМ МА. - ЦЯ тижні важке тривалениний вно. монпопадерчни. вого. пустий їв їй Я - ж : Мово ПОожодо Є вом Е і зе з» о чих. - юд. -о Фі З З Е 5 ге 2 С Фо в щокою че о по В роса 3 Ж ся ЩО Ге У о. ос вро Й До ке домі а, А З док ННІ в тижні й Ох З Є з тижні З б» яра в 5 чижні З я м г в г ль заз з337в ЗзЗаБя КО Зх зжне сві. 7 Антитільна відповідь СЕ 15Ау: Фактичні значення в дипаміці 1500. 00000 2 с зовою: а і з З ібвов Є - -7-- яв й і ш В 2 - - ооо І НИ кте кт - : й г Її й що - 109 і . щ а е оо й Ж : Ко є зорю ве г зо ємо сннй ни ков е ї Б Е то ! 5 я Зк виз 5 в го се ж 15 38 ж 253 У тя В сБЖЗ За М І 15 23 18 їв 25. п Е Го о 4 з ке Й Що Й Ге Й що яз зо 2 175 2 о чроповя | м | | | ібобоо « | е : : р ш і Кз кі лоб | і тоовю. 5 1000 -3 і ; ох Ії - о є 8 Ж а І-3 ЕЙ 1060-59 Фе 58 е 100 Б їй р М с - З. Й збе чі Як йо в дв щі ще дво ле вк ж о «є х в мо ІЗ опо їх гів То ти о8х и й Ж ОА Оожа жд ола сл мм б т оло в 5 ма кю то ш б ша р в о не НН МУА-ВМ-ЕНАЧВІЕВОМ 0 АадбЛЕВОМЛФТМА- ВМР Плацебо День

Фіг. 8

Клітинна відповідь (КТ вро): Фактичні значення в динаміні ЕВОМ ТПоснецифічна Т-клітинна відповідь сфОН-Ауз Пл ої 2 (значення ЕМвроу: обо І 7 р тооо в «а то0ою- | шою З ї 8 а й |: сей а во Б Н а | Ге то | ! ово во : і - 2 й | 5 8 « ї т 2 З і 4у "оо а й е о веще | в тро В ве ць 4 бак зай о я б яю в зе ще й ях Тр ох ж вір Паб де зозавв хо об. 2 25 с гу п ж м о кої за Ту о 7 бо ота дов аа т - Сенаті еклери лт тили к Ов0о0: з вії | 100000 ав Б 2 ло00о і ! чо пт І а в я паз м КЕ 1000 І. и 00 й я ву що в є | шо З о в ве; і з же жк а то р косе З а в в є ще Фа се З І | Й 19 см лю Шк ЗЕ т Я Но 25 С Ь8 с ха 434 ля ше й 25 т» сь р її ГУ е Що ках асо яко юю Но 7 5 10 15 шини т ст м жк мак ние мом маєм перу ЖК Фосфор аву й ово о бу те МУА-ВІМ-ЕЙОТАЧОВЕВОМ 0 ДагО ТЕВОМАМУАСВК КВ. Ллацебо Девь

Фіг. 9 Клітинна відповідь ПС) Фактичні значення в динаміщш (СО8) 4 І Щ - 0 Е! а І В ля У Б Ш в м-н Й аг - ЗШ : ВЕ ИН їв Г-у а ? г : - І ; і г й Е Е ІЗ КИ - і Кх їн В о Віз ся т 0.4 - Я Е У

Ех . 8 ' З я зе чаю ж і зле з сю Мф Ос за; вк ах жк З : а вело ВИНА й бої де гі ооо оогоОо азрасхолг027 927. сонаоловго09 002 Е а з її вЗ по го вх жу а або : но я зо " о 1 1 й : | 2. в щ А ! » Е кд, З в 1 в | щі іч ш ш а 2 ; Е М щ Во в : о у: б 5 в З а а ЗОЗ ж. з в ще 5 за зак ож ав хо ово охоро ев я ук Кз а01- ше 001 5, посаг дозастпке | олег бізопгоам Зп? б2оп2оох |. щш по о 05 4 | до а Й а ода тв Ге шк м бо в т т т Т ї Т т ! Н х 1 8 20 38:50 5; 84.78 1 8 5336 505И ва Уя 1 8 29 38 50 85У 64 75 МУА-ВМ-Ейоівйоб ТЕВОМ АОІБЛЕВОМАММУА-ВН-КІЮ Пладебо День

Фіг. 10 Б2

БЄлітицна повкенидь СК Функіювальність СТВ -відхнувідей ЛЕ ВОУ МУ АВТО рафік лень 0-й М 0 ОВ ДН ОХ КК ПОКИ КО Я Мн СХ ОО «КО МУ ОО ДО ЗОЗ ОКУ ХО ЖК о ШИ ЕЕ «а оо о. ДО є. он ВО ОХ ОО ОО НЕ 0 ЕЕ. о. Б с оо У о А КВ о КВ :

с о. 0. Комітнкція питокінн ОО Ко ОК КК АХ ОО КК нн НВ В З Й що сш

0. т. поп А и не НТ» в ооо я КО с ятркія Ше ча Ух Ох хе зах іщ я ІА На ре зе Ки хехн Фата Лан НИ - 7 пиижжнжччжНжнжчжалачлнлишнии ин помммаанннннни но ри Нв У А-ВМ-ЕННАЧЛЬЖЕВОМУ Графік: день 0-2К я, В я, вва ТОНЕ АЛ т На М 7 ня те зва ее НИХ 6 шо Кох ех ня КК , К В КК п зви (НЯ АВ НИ де КОКОН «5 5 ке «5 7 їз ОА МО хе

У о. с М Я Я АВ - ч . по 336 зі Фе 1 Клітнина відповідь ПОСХУ Функцієнаньність СО відновіней АБЗ КВОУЛИ АВМ. ЕН райні день 0-56 5 у о ос: ВИ со и с шо да ОН ЗУ АВ КУ дов ОХ По ОВ ди ПО ОО у Б. Ел в ОЙ шо В МО Енн ДОЬ НЕД за поні АВ Нове хат ха в'я вам Фа ЛІВ На» кнкоижюттюжнадиааааачнончтТтТНчТчТчтжчтч'чччнтТ'нТнтнТтнлнтнтнтТнтнтнтнтнтнтнтнтнннчннллн я яшяаяшяшяяии тю ни МЖУА-ВМАВУАЧЛНЕКВОМ Граднк: дунк 36 - ша шк ен. вив ІФНаН іа Ин Р же и: вида 1ФНЕЛЯД На» ШИК 00 шуу 00еюнглюсовть ОХ СО пк В я нн пен яд що Б. ; и ПК Я ОК КК ЕКО С МОЯ у ОН ОО шо. чо о 5 МО ОКО Бе 64 ЗЕ г. 12

Клітинна відповідь ПС5): Фактичні значення в динаміні (СОЯ) ЕВОМ ГП-специфічна СІМ. Т-клітинна відповідь то ю в щ е 5 Е 1 2 1 і ев, гу а В Середнє 75 ГЯ СІЯ Ї - відповіді ба : і і Е шо бе 18 Ж | ій Я з А ! В о мак жк « ак м що | і ж ж шо Кй обо Що | пої т, г нн З Зоо у ма ла в руси ща я 5 їж вх ах б ОВУ 65 г о й ге Ї тт ІІІ ЛЕДІ ІІТ ІІТ ІІТ ою ї | Що Ф З іже Е с | С - т КІ 5 ж Ех в й ія Н ро СІ і 1 ; св, щ 5 а «є Щі | і Середнє в ш йо в - відповіді З С з Е пл В В | | ої 5 р хе ке ож ск як ЮЇ жо зо св зо ою чо В. пл ШИ . . й й Бар Ко АКЧ УМ спгазо ов ОХ ОВЕ о рис вияння вого загеогвог с заз «о я пово жом войот поко й БОМ Сеня 1 8 293550 57854 78 1 8 РУ ЗБ 5057 ба 78. 1 8 295 35 5057-64 у5 МУ ВІЧ Ева ТЕВОМ дЯрЕ ЛЕВОММУА-ВМ-Е Плацебо День рі З Катинма відповідь ПОС У функціональність СЯ відповідей аа ЕВОУЛ КА НМ-КИВІ рафік ледь 1-Х А і б х в з х па тм В Я т ВО І о Ва, ОО С. і шу 5 Б 7 у що ооо Й ОХ КБ ВО ВВ І о и Комбінаців питокіців ще ПК таня, У чу З ЗПП У КЯ щі ой ой уБако Оуена З оса бен замах в Ми МТУ, ВУ НО не як ах ще ОБ Кь ИК: МУХА МАН ЯУКНОМ р КІ ня зажих ОУН НИ МУА-ВМ-КНВІ ЖЕ. Граб: денце ДАХ я : КРІЙ У рифи: лев; зем ФНЕ Ла Нв ше " ше ". ниє о: х ен, х я хо вевівне Леон МОЯ х Де Х і: КВУ і: о я Я х ВО я У ОО неесви ковдр ОО ; МОВНУ і МО КИ ОВО ум ; КО КВ, Н а я пе з Я о, ; КО ВИ ОО Ох ; ЗК КОН й о оо ІЙ Ока Я КВ ЕП ОКУ З Ов в НКох ОХДМВ - М и с в в 0 - й с й ооо ай я чх5В и. 15

Клітинна відповідь СК функціональність СОЯ віллповідей ЗІ ЕВОХИМУА- ВМ ЙО риби день 0-36 КИ вх В рен

Пл . ВО ц ну УВК - кот ЛЮХ и ЛФ о пот й дв : МВ » ЖЕК - дме ой х ДЕК ІУМХ ї ЖОВ Ух Перо ; Й ; вия 5 КО о вм Н КОКО вон : рос Кок тот АД М о воєн ОО ОБ ВУ о Кок С я дя . . ОО ОО ча п о ВК я Камаїнаціх пилюки о КК КО й КО са ОО я ООН ЗБК о дю с Пен лях а КАПІ и НИ дк 0 0 ШМШШККААШШЦШ0В жи мене ВН ЛЯ -КВ На М УА-ВМ-КИОгАЯЛЬИКВОЄ Графік: дес 0-56 жна Не Дар Бий» п ва вна На М ВН я: ТБ Е НФНЕ ДУ НН в» по г ХО й мав ФАЗ ФВ. ТУ В МТУ х. »х БМ в дю о Й а Я м Ох ої и ШОК КО ей У чі 57 554 як «Фиг.

15 АЛОЕ ЬВОМ І МУА-ВМ-Кю Графік: день 0, 14- Огляд імунної відповіді А: Значення РА в динамі В: Зназення БЕІ5рої я динаміці УК ДТЕК духу. ЧУ яке ПУ КАК ТА т кювету Е ї 5-9 т ї - Воосемї Бл ї ї й ЖЕ ї я : З. спекяі і ше нн я СЕ г ЕН , с на и Бе ш : ее х : - шк що Е в з У реє ж 5 і я МН ; От » ; ін хх їі) а Б -е- я Ї ха в я ї 5 сфе й ї В в'ї я Во» кеш ние ЗІ - Ї сно СВ - і де щооївї х Но стеооіжко В гУя їх ря КЗ м. й ря ' г» Н д - 1 Ї т как Е НО Н КУ - Н І т- - 1 кни ак г - -е Н г що ОВ ож ге НІ | БУ й . й : ну 00 ч ЗШ НЕ Не 2. ш шві палінні вк. День ЕЖЛІМЖСТЮМОЇ Аг. День СІСІХЕ.- Т-клітмнна відповідь з динаміці т: СТВ Т-клігнина відповідь з динаміці в | Ше: : в ! НЕ гу : й В Ше ої НИШЕ--а о Н т. ЕВ 1 а же в вве: ОВ вв ; т Ах : мини ак і . ях Кв ВЕ - « А БВ І «ЇЙ СЕ Фо ше І - сах ет, В ОБ в Пс 3 1. т ВЕ ва ру ен В кВ Я но в я ше: нє: НИМ НН: вв ше Не с Ві рр їв во нн МН НН

5. 1 ганінщ жов я ле зв Н в ге В їх і ро Фогше, ка Теж іниній і й т сей лю М Гм ше ен В й і ша х 7 ОБ Ше оф ООшОоО В шо 7 ши и ни НН НН день День.

Фіг. 16

Антнтільна підновідь (ЯКА; Фактичні значення в динаміці МУЛ МУЛІДНІВ АШеЄМУА МУААДІВ Грайн: Графік: Транс ех деня я деньінох дик л-иЕ лдепь-5а ак ТЕТ Й Щ Еш т бок ; ! а з! і р ї РОШе ЯЩ «су «і - 4 я в е -61 і Н Ж ! 5 з т ! . шк і в, а Е МН її ЩІ НЕ З Ш- ша вою» : Н --о Я з до : ії КУ ро ї Я я ї Ї 2 Н х і М У ї 8 Н Ся є ї їй а х й що 1 Мо ще ЕН 7 Я Е й ! і Фо Е Її. Я . от -- | Е -« з " Н т - Щ й ! х | -о не тру : ш сей ов із ок ой Ї ся тебе: зво «й ! ою | ї ї ко : що З ! Я з : і Я Е І Середяїй «4 і : Я І тесметруччий і ! : М зх я ІТуцля Зо і от АВГ жо спекокк В їх в що ОЗ а 58 я БА зма НИ киш ЕЕ Вр Р Ж 30030013 00083006 февіюовідачіще ен в ке заоню пики сни полови пон повен звана ов вот остан поавн звивини кемнони сина нини и ково яв оож ох ово жом 4 3 те ву в 78 ма дКкиУютЕТЕВОМ 0 мА ВМЕКУИМЕ ТЕКУ лев ЯКМту ко МУАВН ВІКНА ТЕВОУ

«ві. 17 Клітина відповідь (Б іхрог: вактнані зваченна в лимаміві МУАТАЯЛЕ МУХА да МУХ ММА Графік: Трав Трафік: Графік: день (ні4 мая» 0-28 дель 0-35 день (-їЕ 0 ртінтеннтнпнттнтттнти в нн В зі ї ї !

і В. Е і ! Н ИН їх: і | б хаті | » -и жкі - М І ог « що Щ ей з ті 2 а Б ї Ж з. НІ ме ро з 5 ШЕ ОК ІННЕ ше й 1 Ка Б шН Еш й Її Ку їх з т Й х і ів НН НО ті - Е Я 5 ! щи І 2 Я є що я Й - г п й «ж ї : че «е М а Е МОР Й І. М ВО яхті в в 7 ПЕН РА р ! ЩЕ з ННЯ ЯН ши ! | ї і мим. Її жін « ї - ні є Я зано йо яких зе сок тії | р сершнив Її | Я х - Ереометричний тару кання ки п и ХМ с В шим г т ші В о Кі о й й о у ово остов песо пане пил іййй інн лінк собой іні поповстйовної тин Я хї ік; «кової м ж ок ово їх з в хх 5 4 я яхт ва за кВвідпевілЯчІКи Фі і Клітзнва візноавіль Си Мала Графік: дезьікій І се І стю «Вункціовальністя СТУВ- д, ф(фектновізначенняй од, (Фактичнізначення я Є. відповідей?! день після динаміці линаміці) абустиввеленяя) г В БО : вк 5 4 Н ш Н Ох Ще Е ї Ге Н Ист т Н їх я Й ух А о ї Кк ш їй М Я ж: Її НИК. ПЕТ і с на В Ве Бо і У їх Ті Я ПЕК КОХ у Бо и жо х ра І ша Комоїнзція цитеКицх а 3 ї - НЕЖНЕ КК ц ? е І гі ОММОУ ніх й пі я 1 пав. це у скл фНнЕН Дня Ця: щ Н ГРІ Е НН й . ПУЧКИ ще З: ЕН, З НІ І в.о Зункцієвазимість СОЯ. яна КОНеЛЯеАо НТ 5 Н ос ад НЕК ЯН : . оз . КОТИ гін що Що Жов ЦЕ | ї відпиовідей сі девв топ вав ІФ ЛВ ВІВ І: ше і С М и «бусто-ваєденняї я ПАНДА Н в» г 4 щ Е т до о, , о ск х Я 7, В і жі Я. ва ІФА Р НІ Е І х ' М НЕ МН я й Й 7 Шо ЕЕ Й 1 НЕ дес . ПЕК РН ЕНН Та лі Н жк 00 ЇХ мож оме с і ОК Н . опер леж, в 177 пре | : о ; иа МФНЕ ЛОФТ». оо во : ОК Н 5 | ої ! о ЩЕ о щ Н : сс й І цого хором ий івана ш й Сотня Монро и б в т КО ошо цем ТЕХ МОМ УКХ «Вік19

ЕВОУ Мауївва ГИ ШВА

5.0 Високий рівень ІМ : Стандартний рівень М Ф 5: :

4.0 шо й и м » «й , з - я: шо 2 х ой Го оцайя

- 3.5 - їй 6 " - у - 6 ще 3.0 я- . « -

Е . и : іл д 2.5 борт г ва. 2

2.0 шк х " « : т

4.5 щі ті де фену хх тити нти с фу стані жуть хи жати нд : нд нд

1.0 ; й «й Аа 510110 4 810110 4 8093105 8190110 4 801410 4 80 тиждень ДОСЛІДЖЕННЯ. печити, "пт. Чинна." По они СНОНемч- . ТЕО НО." па днина отітотитичачачиччт, тиждень: дагвЕ дагвлЕВОУ Го дазлЕВОУ Іс а тажцень 4 й в МУХА мульти Ф МУАульти Да262ЕВОУ тиждень В: МУА.Е МУАлаєльти дагбеєвоОМ МУА мульти ДИ26БКВОУ 0 ММА злульти «ріг. 20