KR20170058952A - 필로바이러스 감염에 대한 보호 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

필로바이러스 감염에 대한 보호 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 필로바이러스 감염에 대한 보호 면역, 특히 에볼라 바이러스 및 마르부르크 바이러스 중 하나 이상의 아형의 감염에 대한 보호 면역을 유도하기 위한 조성물, 백신 및 방법을 제공한다.

Description

필로바이러스 감염에 대한 보호 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR INDUCING PROTECTIVE IMMUNITY AGAINST FILOVIRUS INFECTION}
본 발명은 필로바이러스 감염에 대한 보호 면역, 특히 에볼라 바이러스 및 마르부르크 바이러스 중 하나 이상의 아형의 감염에 대한 보호 면역을 유도하기 위한 조성물, 백신 및 방법에 관한 것이다.
에볼라바이러스, 예컨대 자이르 에볼라바이러스(Zaire ebolavirus; EBOV) 및 수단 에볼라바이러스(Sudan ebolavirus; SUDV), 및 밀접하게 관련된 마르부르크 바이러스(Marburg virus; MARV)는 북미, 유럽 및 아프리카에서의 인간 및 영장류에서의 매우 치사인 에볼라 출혈 열(EHF)의 발생과 연관된다. 이들 바이러스는 사망을 포함하는 중증 건강 결과를 가지는 인간 및 비인간 영장류에 영향을 미치는 것으로 공지된 필로바이러스이다. 필로바이러스 감염은 인간에서 90% 이하의 사례 사망률을 발생시킨다. EBOV, SUDV 및 MARV 감염은 EHF를 발생시키고, 감염 후 7일 내지 10일 내에 대개 사망한다. EHF는 갑작스런 열, 오심, 구토, 설사, 반구진 발진, 병감, 탈진, 증가한 혈관 투과성의 일반화 징후, 응고 비정상 및 선천성 면역 반응의 기능이상에 의해 나타나는 급성 열성 증후군으로서 나타난다. 대부분의 질환은 감염에 대한 선천성 면역 반응의 기능이상 및 혈관 내피 세포에서의 바이러스의 복제에 의해 발생하는 것으로 보이고, 이들은 숙주 세포의 사망 및 내피 장벽의 파괴를 유도한다. 필로바이러스는 작은 입자 에어로졸에 의해 또는 인간 또는 NHP 기원의 감염된 혈액, 장기 및 체액과의 직접 접촉에 의해 퍼질 수 있다. 단일 비리온에 의한 감염은 인간에서 에볼라 출혈 열(EHF)을 발생시키기에 충분한 것으로 보고되었다. 현재, EHF의 치료 또는 예방에 대해 승인된 치료학적 또는 백신이 없다. 보조적 처치는 필로바이러스에 의해 감염된 개체에서 여전히 유일한 승인된 의료적 개입이다.
중증 인간 질환의 원인으로서, 필로바이러스는 자연 감염의 공급원, 및 또한 생물테러의 가능한 물질 둘 다로서 계속해서 관심 있다. 야생에서의 필로바이러스에 대한 저장소는 아직 결정적으로 확인되지 않았다. 에볼라바이러스의 4개의 아형은 EHF, 즉 자이르, 수단, 분디부교(Bundibugyo) 및 아이보리 코스트(Ivory Coast) 에피소드에서의 것을 발생시키는 것으로 기재되어 있다(Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). 에볼라바이러스의 이 아형은 유사한 유전적 체계, 예를 들어 7개의 선형 배열된 유전자를 함유하는 네가티브 가닥의 RNA 바이러스를 가진다. 구조적 유전자 생성물은 예를 들어 바이러스 진입을 매개하는 RNA 편집에 의해 생성된 막관통 당단백질(GP) 및 분비된 가용성 당단백질(ssGP)인 2개의 대안적인 형태로 존재하는 외피 당단백질을 포함한다(Sanchez, et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607).
다른 RNA 바이러스 중에서보다 에볼라 아형 내에 덜 뉴클레오타이드 다형성인 것으로 나타나므로, 면역이 에볼라 감염에 대해 보호하는 데 유용할 수 있는 것으로 제안되었다(Sanchez et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). 최근까지, 부분적으로 필로바이러스 감염에 대한 보호 면역 반응에 대한 요건이 잘 이해되지 않으므로, 필로바이러스에 대한 예방 백신이 개발은 다양한 결과를 가진다. 추가적으로, 천연 저장소 내에 순환하는 다수의 필로바이러스는 모든 필로바이러스 종에 대해 보호하는 백신을 설계하기 위한 노력을 복잡하게 한다.
현재, 필로바이러스의 높은 감염성 용량에 의해 노출된 비인간 영장류(non-human primate; NHP)에서 다양한 수준의 보호를 입증한 여러 백신 항원 전달 플랫폼이 존재한다. 백신 후보물질은 복제 유능 벡터(예를 들어, 수포성 구내염 바이러스; 광견병 바이러스; 파라인플루엔자 바이러스); 복제 불능 벡터(아데노바이러스, 변형 백시니아 안카라 바이러스); 박테리아 세포, 곤충 세포, 포유류 세포, 식물 세포에서 발현된 바이러스 유사 입자를 포함하는 단백질 하위단위; DNA 백신; 및/또는 살아 있는 및 죽은 약독화 필로바이러스(Friedrich et al., 2012)를 포함하는 다양한 플랫폼 기술에 기초한 발전에 있다. EBOV 당단백질 GP는 EBOV의 동일한 종에 의한 노출에 대해 보호하는 백신의 필수 성분이다. 더구나, 에볼라바이러스의 2개의 가장 독성 종인 EBOV 및 SUDV로부터의 GP의 포함은 EBOV 및 SUDV 근육내 노출, 및 명확히 관련된 분디부교(BDBV), 타이 포레스트 에볼라바이러스(TAFV; 아이보리 코스트 또는 코트디부아르로 이전에 공지됨) 종에 의한 노출에 대해 원숭이를 보호할 수 있다. 마찬가지로, MARV로부터의 GP의 포함은 MARV 근육내 및 에어로졸 노출에 대해 원숭이를 보호할 수 있다. 이 바이러스에 대한 의학 대책의 발전, 특히 PAN-필로바이러스 백신 - 즉 모든 병원성 필로바이러스에 대해 보호하는 백신의 개발은 높은 우선사항이다.
복제 결함 아데노바이러스 벡터(rAd)는 세포 면역 반응의 강력한 유도자이고, 따라서 특히 렌티바이러스 및 필로바이러스, 및 다른 비바이러스 병원균에 대한 유전자 기반 백신에 대한 유용한 벡터로서 작용하게 되었다(Shiver, et al., (2002) Nature 415(6869): 331-5; (Hill, et al., Hum Vaccin 6(1): 78-83. ; Sullivan, et al., (2000) Nature 408(6812): 605-9; Sullivan et al., (2003) Nature 424(6949): 681-4; Sullivan, et al., (2006) PLoS Med 3(6): e177; Radosevic, et al., (2007); Santra, et al., (2009) Vaccine 27(42): 5837-45).
아데노바이러스 기반 백신은 GMP 조건에서 높은 역가로 생성될 수 있고 인간에서 안전하고 면역원성인 것으로 입증되었으므로 인간 백신으로서 여러 이점을 가진다(Asmuth, et al., J Infect Dis 201(1): 132-41; Kibuuka, et al., J Infect Dis 201(4): 600-7; Koup, et al., PLoS One 5(2): e9015. ; Catanzaro, et al., (2006) J Infect Dis 194(12): 1638-49; Harro, et al., (2009) Clin Vaccine Immunol 16(9): 1285-92). 대부분의 초기 백신 작업이 광범위한 항체 및 CD8+ T 세포 반응을 발생시키는 데 있어서 이의 상당한 효력으로 인해 rAd5를 사용하여 수행되지만, 인간에서 rAd5에 대한 기존의 면역력은 효율을 제한할 수 있다(Catanzaro, (2006); Cheng, et al., (2007) PLoS Pathog 3(2): e25.; McCoy, et al., (2007) J Virol 81(12): 6594-604.; Buchbinder, et al., (2008) Lancet 372(9653): 1881-93). 이 특성은 에볼라바이러스(EBOV) 및 마르부르크 바이러스(MARV)를 포함하는 현재 개발 중인 많은 백신에 대한 임상 분야에서 rAd5의 용도를 제한할 수 있다.
각각 아데노바이러스 혈청형 26 및 혈청형 35로부터 유래한 rAd26 및 rAd35인 복제 결함 아데노바이러스 벡터는 Ad5 기존의 면역력을 피하는 능력을 가진다. rAd26은 대규모로 임상 등급에서 이 벡터를 제조하기 위한 적합한 Ad5 E1 보완 세포주에서 높은 역가로 성장할 수 있고(Abbink, et al., 2007), 이 벡터는 프라임-부스트 백신 전략에서 체액 및 세포 매개 면역 반응을 유도하는 것으로 나타났다(Abbink, et al., 2007; Liu, et al., (2009) Nature 457(7225): 87-91). rAd35 벡터는 임상 등급 백신을 제조하기 위한 적합한 세포주에서 높은 역가로 성장하고(Havenga, et al., (2006) J Gen Virol 87(Pt 8): 2135-43), 주사 및 안정한 흡입성 분말에 제제화된다(Jin, et al., Vaccine 28(27): 4369-75). 이들 벡터는 인간 수지상 세포의 효율적인 전달을 나타내고(de Gruijl, et al., (2006) J Immunol 177(4): 2208- 15; Lore, et al., (2007) J Immunol 179(3): 1721-9), 따라서 높은 수준 항원 전달 및 제시를 매개하는 능력을 가진다.
변형 백시니아 안카라(Modified Vaccinia Ankara; MVA) 바이러스는 폭스비리다에(Poxviridae)의 패밀리에서 오르토폭스바이러스 속의 구성원인 백시니아 바이러스와 관련된다. 폭스바이러스는 이들의 세포질내 발현으로 인해 CD8 T 세포 반응의 우수한 유도자인 것으로 공지되어 있다. 그러나, 이들은 CD4 MHC 클래스 II 제한 T 세포를 생성하는 데 있어서 불량한 것으로 일반적으로 생각된다(예를 들어, 문헌[Haslett et al. Journal of Infectious Diseases 181: 1264-72 (2000), page 1268] 참조). MVA는 재조합 유전자 발현을 위한 바이러스 벡터로서 또는 재조합 백신으로서 사용에 조작될 수 있다.
더 안전한 생성물, 예컨대 백신 또는 의약품의 개발을 위한 증대된 안전성 프로필을 가지는 MVA의 균주가 바바리안 노르딕(Bavarian Nordic)에 의해 개발되었다. MVA는 바바리안 노르딕에 의해 추가로 계대배양되고, MVA-BN이라 지정되고, 이것의 대표적인 샘플은 2000년 8월 30일에 수탁번호 V00083008 하에 유럽 세포 배양 수집(ECACC)에 기탁되었다. MVA-BN은 WO 02/42480(US 2003/0206926) 및 WO 03/048184(US 2006/0159699)(이들 둘 다 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 추가로 기재되어 있다.
MVA-BN은 바이러스로 코딩된 유전자가 매우 효율적으로 발현될 때 인간 세포에 부착하고 이것에 진입할 수 있다. MVA-BN은 복제 불능이고, 이것은 바이러스가 인간 세포에서 복제하지 않는다는 것을 의미한다. 인간 세포에서, 바이러스 유전자가 발현되고, 감염성 바이러스가 생성되지 않는다. MVA-BN은 미국에서 질환 조절 및 예방 센터(Centers for Disease Control and Prevention)에 따라 바이오안전성 수준 1 유기체로서 분류된다. MVA-BN 및 유도체의 제제는 많은 유형의 동물, 및 면역 결핍 개체를 포함하는 2000명 초과의 인간 대상체에게 투여된다. 모든 백신접종은 일반적으로 안전하고 매우 내약성인 것으로 입증되었다. 이의 높은 약독화 및 감소한 독력으로 인해, 전임상 연구에서 MVA-BN은 MVA 게놈으로 클로닝된 유전자에 의해 코딩된 백시니아 및 비상동성 유전자 생성물에 대한 체액 및 세포 면역 반응 둘 다를 발생시키는 것으로 밝혀졌다[E. Harrer et al. (2005), Antivir. Ther. 10(2):285-300; A. Cosma et al. (2003), Vaccine 22(1):21-9; M. Di Nicola et al. (2003), Hum. Gene Ther. 14(14):1347-1360; M. Di Nicola et al. (2004), Clin. Cancer Res., 10(16):5381-5390].
필로바이러스에 대한 면역 반응, 특히 더 치사인 에볼라바이러스 및 마르부르크 바이러스에 대한 보호 면역을 유발하는 개선된 백신에 대한 충족되지 않은 수요가 존재한다.
복제 불능 벡터의 다양한 프라임-부스트 조합이 필로바이러스 감염에 대해 효과적인 면역 보호를 생성하는 것으로 본 발명에서 발견되었다.
따라서, 본 발명의 일반적인 일 양상은 백신 복합제로서,
(ⅰ) 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제1 조성물; 및
(ii) 적어도 2종의 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제2 조성물을 포함하되,
상기 조성물 중 하나는 프라이밍 조성물이고, 다른 조성물은 부스팅 조성물인, 백신 복합제에 관한 것이다.
본 발명의 일반적인 또 다른 양상은 필로바이러스 아형 중 적어도 하나에 대해 보호 면역 반응을 유도하기 위한, 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제1 조성물; 및 적어도 2개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제2 조성물의 용도에 관한 것이고, 여기서 제1 및 제2 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍 또는 부스팅하기 위해 사용된다.
소정의 실시형태에서, 제1 조성물(ⅰ)은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다. 다른 실시형태에서, 제1 조성물(ⅰ)은 추가로 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다.
본 발명에 따른 필로바이러스 아형은 임의의 필로바이러스 아형일 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 제1, 제2 및 제3 필로바이러스 아형은 자이르(Zaire), 수단(Sudan), 레스톤(Reston), 분디부교(Bundibugyo), 타이 포레스트(
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Forest) 및 마르부르크(Marburg)의 군으로부터 선택된다. 항원 단백질은 항원 결정부위를 포함하는 임의의 필로바이러스로부터의 임의의 단백질일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 항원 단백질은 당단백질 또는 핵단백질이다. 본 발명에 따른 제1 용액 및 제2 용액에 포함된 아데노바이러스 벡터 또는 MVA 벡터에 의해 코딩된 항원 단백질은 임의의 필로바이러스로부터의 임의의 항원 단백질일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 제1, 제2 및 제3 필로바이러스 유형의 항원 단백질은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5의 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 제1, 제2 및 제3 필로바이러스 아형은 동일하지 않다.
또 다른 실시형태에서, 제1 조성물(ⅰ) 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5의 군으로부터 선택된 서열을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5의 군으로부터 선택된 상이한 서열을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 조성물(ⅰ)은 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 4 및 서열 번호 5의 군으로부터 선택된 상이한 서열을 또한 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 제1 조성물(ⅰ) 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 2를 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 조성물(ⅰ)은 서열 번호 3을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함한다.
훨씬 또 다른 바람직한 실시형태에서, 상기 조성물(ⅱ) 내의 MVA 벡터는 적어도 4개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 바람직하게는, 상기 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법, 백신 및 조성물이 키트에서 구현될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 본 발명은
(ⅰ) 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제1 조성물; 및
(ⅱ) 적어도 2종의 필로바이러스 아형의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제2 조성물을 포함하되,
상기 조성물 중 하나는 프라이밍 조성물이고, 다른 조성물은 부스팅 조성물이다.
따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 복합제 백신, 키트 또는 용도에 관한 것이고, 여기서 조성물(ⅰ) 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하고; 조성물 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
훨씬 또 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 복합제 백신, 키트 또는 용도에 관한 것이고, 여기서 제1 조성물은 서열 번호 1을 가지는 제1 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스, 서열 번호 2를 가지는 제2 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 및 서열 번호 3을 가지는 제3 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 포함하고; 조성물(ⅱ) 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명의 복합제 백신, 키트에 포함된 아데노바이러스 벡터, 또는 필로바이러스 아형 중 적어도 하나에 대해 보호 면역 반응을 생성하기 위해 사용된 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터이다. 이 용도의 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 조성물 후 1주 내지 12주에 투여된다.
본 발명의 추가적인 일반적인 일 양상은 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은
a. 제1 필로바이러스 아형의 항원 당단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제1 조성물을 대상체에게 투여하는 단계; 및
b. 필로바이러스의 적어도 2개의 균주의 항원 단백질 또는 실질적으로 유사한 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제2 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
단계 (a) 및 (b)는 어느 한 순서로 수행된다.
소정의 실시형태에서, 제1 조성물은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다. 다른 실시형태에서, 제1 조성물은 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 제1 조성물 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상기 조성물은 서열 번호 2를 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 상기 조성물은 서열 번호 3을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다.
더욱 더 바람직한 실시형태에서, 제2 조성물 내의 MVA 벡터는 적어도 4개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
바람직하게는, 상기 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
따라서 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이고, 여기서 제1 조성물 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하고; 제2 조성물 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
훨씬 또 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명은 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이고, 여기서 제1 조성물은 서열 번호 1을 가지는 제1 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스, 서열 번호 2를 가지는 제2 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 및 서열 번호 3을 가지는 제3 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 포함하고; 제2 조성물 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법에서 사용된 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터이다. 본 발명의 또 다른 바람직한 실시형태에서, 상기 방법의 단계 (b)는 단계 (a) 후에 1주 내지 12주에 수행된다.
또 다른 바람직한 실시형태에서, 프라이밍 백신접종, 즉 단계 (a)는 0주에 수행되고, 이후 1주 내지 10주에, 더 바람직하게는 6주 내지 10주에, 더욱 더 바람직하게는 8주에 부스팅 백신접종, 즉 단계 (b)가 있다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 프라이밍 백신접종, 즉 단계 (a)는 0주에 수행되고, 1주 내지 4주, 바람직하게는 1주, 2주 또는 4주에 부스팅 백신접종, 즉 단계 (b)가 있다.
또 다른 바람직한 실시형태에서, 프라이밍 백신접종, 즉 단계 (b)는 0주에 수행되고, 이후 1주 내지 10주에, 더 바람직하게는 6주 내지 10주에, 더욱 더 바람직하게는 8주에 부스팅 백신접종, 즉 단계 (a)가 있다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 프라이밍 백신접종, 즉 단계 (b)는 0주에 수행되고, 1주 내지 4주, 바람직하게는 1주, 2주 또는 4주에 부스팅 백신접종, 즉 단계 (a)가 있다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 상기 방법은 하나 이상의 필로바이러스 항원 단백질을 발현하는 하나 이상의 rAd26 벡터의 면역학적 유효량에 의한 프라이밍 백신접종, 이어서 하나 이상의 필로바이러스 당단백질 또는 실질적으로 유사한 당단백질을 발현하는 rAd26과 상이한 하나 이상의 벡터, 바람직하게는 MVA 벡터의 면역학적 유효량에 의한 부스팅 백신접종을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 필로바이러스는 에볼라바이러스 또는 마르부르크바이러스이다. 에볼라바이러스는 자이르 에볼라바이러스(EBOV) 및 수단 에볼라바이러스(SUDV), 레스톤, 분디부교, 타이 포레스트와 같은 임의의 종일 수 있다. 마르부르크 바이러스(MARV)는 임의의 종일 수 있다. 적합한 필로바이러스 항원 단백질의 예시적인 아미노산 서열은 서열 번호 1 내지 서열 번호 5에 기재되어 있다.
하기 요약 및 하기 본 발명의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 본 발명은 도면에 도시된 정확한 실시형태로 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
특허 또는 출원 파일은 칼라로 실행된 적어도 하나의 도면을 함유한다. 칼라 도면(들)과 함께 이 특허 또는 특허 출원 공보의 사본은 필요한 비용의 요청 및 납부 시 관청에 의해 제공될 것이다.
도면에서,
도 1은 동물 연구에서의 그룹화를 요약함;
도 2는 연구의 실험 설계를 예시함;
도 3은 시험감염 균주 에볼라 자이르 키크위트 1995에 의한 시험감염의 결과를 보여줌;
도 4는 동물 연구로부터 관찰된 에볼라 자이르 당단백질 특이적 체액성 면역 반응(ELISA에 의해 평가됨)을 보여주고: 매우 높은 항체 역가는 백신접종 섭생(ND = 시점은 분석되지 않음)과 독립적으로 얻어짐;
도 5는 동물 연구로부터 관찰된 수단 굴루(Gulu) 당단백질 특이적 체액성 면역 반응(ELISA에 의해 평가됨)을 보여주고: 매우 높은 항체 역가는 백신접종 섭생(ND = 시점은 분석되지 않음)과 독립적으로 얻어짐;
도 6은 동물 연구로부터 관찰된 마르부르크 앙골라(Angola) 당단백질 특이적 체액성 면역 반응(ELISA에 의해 평가됨)을 보여주고: 매우 높은 항체 역가는 백신접종 섭생(ND = 시점은 분석되지 않음)과 독립적으로 얻어짐; 및
도 7은 IFN-γ ELI스팟에 의해 분석된 ZEBOV, SEBOV 및 MARVA GP에 대한 특이적 세포 면역 반응을 보여줌;
도 8은 항-EBOV GP ELISA에 의해 분석된 ZEBOV GP에 대한 특이적 면역 반응을 보여줌, 여기서 50일에, 부스트 면역화 후 더 높은 체액성 면역 반응은 백신의 역순에 의한 것보다 프라임으로서 MVA 및 부스트로서 Ad26에 면역화된 대상체에서 관찰됨;
도 9는 ELI스팟 검정에 의해 분석된 인간에서의 ZEBOV GP에 대한 특이적 T 세포 반응을 보여줌;
도 10은 ICS 검정에 의해 분석된 인간에서의 ZEBOV GP에 대한 특이적 CD8+ 세포 면역 반응을 보여줌;
도 11은 28일 프라임 부스트 간격을 사용할 때 ICS 검정에 의한 인간에서의 EBOV GP 특이적 CD8+ T 세포 반응의 기능을 보여줌;
도 12는 56일 프라임 부스트 간격을 사용할 때 ICS 검정에 의한 인간에서의 EBOV GP 특이적 CD8+ T 세포 반응의 기능을 보여줌;
도 13은 ICS 검정에 의해 분석된 인간에서의 ZEBOV GP에 대한 특이적 CD4+ 세포 면역 반응을 보여줌;
도 14는 28일 프라임 부스트 간격을 사용할 때 ICS 검정에 의한 인간에서의 EBOV GP 특이적 CD4+ T 세포 반응의 기능을 보여줌;
도 15는 56일 프라임 부스트 간격을 사용할 때 ICS 검정에 의한 인간에서의 EBOV GP 특이적 CD4+ T 세포 반응의 기능을 보여줌;
도 16은 Ad26.ZEBOV에 의한 프라임 면역화, 이후 ELISA(A), ELI스팟(B), 및 ICS(C 및 D)에 의해 평가한 후 14일에 MVA-BN-필로 부스트에 의해 유도된 면역 반응을 보여줌;
도 17은 항-EBOV GP ELISA에 의해 분석된 ZEBOV GP에 대한 특이적 면역 반응을 보여줌;
도 18은 ELI스팟 검정에 의해 분석된 인간에서의 ZEBOV GP에 대한 특이적 T 세포 반응을 보여줌;
도 19는, 14일 후에 프라임으로서 MVA 및 부스트로서 Ad26을 사용할 때, ICS 검정에 의해 분석된 인간에서의 ZEBOV GP에 특이적인 강하고 균형을 이룬 CD4+(A) 및 CD8+(B) 세포 면역 반응 및 ICS 검정에 의한 인간에서의 EBOV GP 특이적 CD8+(C) 및 CD4+(D) T 세포 반응의 기능을 보여줌.
도 20은 GP ELISA에 의해 결정된 Ad26.ZEBOV/ MVA-BN-필로 및 MVA-BN-필로/Ad26.ZEBOV 섭생에 의한 백신접종에 의해 발생한 EBOV 마인가(Mayinga) GP 결합 항체를 보여줌. 백신접종 섭생은 x축 아래에 표시된다. 높은 IM 및 표준 IM은 MVA BN 필로의 용량 및 경로를 의미한다. 수평 점선은 LOD를 나타냄.
다양한 공보, 논문 및 특허는 배경 및 명세서에 걸쳐 인용되거나 기재되어 있고; 이들 참조문헌의 각각은 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 조항, 재료, 장치, 물품 등의 토의는 본 발명의 맥락을 제공할 목적을 위한 것이다. 이러한 토의는 이 물질의 임의 또는 모두가 개시되거나 인용된 임의의 발명과 관련하여 선행 기술의 일부를 형성한다는 인정이 아니다.
달리 정의되지 않은 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용된 소정의 용어는 명세서에 기재된 바와 같은 의미를 가진다. 본 명세서에 인용된 모든 특허, 공개 특허 출원 및 공보는 본 명세서에 완전히 기재된 것처럼 참고로 포함된다. 본 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 바대로, 단수 형태 "일", "하나" 및 "이"는, 문맥이 달리 명확히 기재하지 않은 한, 복수 언급은 포함한다는 것에 주목해야 한다.
달리 표시되지 않은 한, 구성요소의 시리즈 앞의 용어 "적어도"는 시리즈의 모든 구성요소를 언급하는 것으로 이해되어야 한다. 당해 분야의 당업자는 단지 일상적 실험을 이용하여 본 명세서에 기재된 본 발명의 구체적인 실시형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
본 명세서 및 하기 청구항에 걸쳐, 문맥이 달리 요구하지 않는 한, 단어 "포함한다", 및 번형어, 예컨대 "포함" 및 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 군의 포함뿐만 아니라, 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 군의 배제를 의미하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에 사용될 때, 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는" 또는 "수반하는" 또는 때때로 본 명세서에서 사용될 때 용어 "갖는"에 의해 대체될 수 있다. 상기 언급된 임의의 용어(포함하는, 함유하는, 수반하는, 갖는)는, 본 발명의 양상 또는 실시형태의 맥락에서 본 명세서에 사용될 때마다, 덜 바람직하더라고 용어 "이루어진"에 의해 대체될 수 있다.
본 명세서에 사용될 때, "이루어진"은 청구항 구성요소에서 언급되지 않은 임의의 구성요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 본 명세서에서 사용될 때, "본질적으로 이루어진"은 청구항의 기본적이고 새로운 특징에 상당히 영향을 미치지 않는 재료 또는 단계를 배제하지 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, 복수의 언급된 구성요소 사이의 접속 용어 "및/또는"는 개별 옵션 및 조합 옵션 둘 다를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 구성요소가 "및/또는"에 의해 결합될 때, 제1 옵션은 제2 구성요소 없이 제1 구성요소의 이용 가능성을 의미한다. 제2 옵션은 제1 구성요소 없이 제2 구성요소의 이용 가능성을 의미한다. 제3 옵션은 함께 제1 구성요소 및 제2 구성요소의 이용 가능성을 의미한다. 이들 옵션 중 임의의 하나는 그 의미 내에 해당하고, 따라서 본 명세서에 사용된 바대로 용어 "및/또는"의 요건을 만족시키는 것으로 이해되어야 한다. 옵션 중 하나 초과의 동시 이용 가능성은 또한 그 의미 내에 해당하고, 따라서 용어 "및/또는"의 요건을 만족시키는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "대상체"는 본 발명의 실시형태에 따른 방법에 의해 치료될 것인 또는 치료된 임의의 동물, 바람직하게는 포유류, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 용어 "포유류"는, 본 명세서에 사용된 바대로, 임의의 포유류를 포함한다. 포유류의 예는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 랫트, 토끼, 기니아 피그, 원숭이, 인간 등, 더 바람직하게는 인간을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "보호 면역" 또는 "보호 면역 반응"은 백신접종된 대상체가 백신접종이 수행된 병원성 물질에 의한 감염을 제어할 수 있다는 것을 의미한다. 보통, "보호 면역 반응"을 발생시킨 대상체는 오직 경증 내지 증등도의 임상 징후를 발생시키거나 전혀 징후를 발생시키지 않는다. 보통, 소정의 물질에 대해 "보호 면역 반응" 또는 "보호 면역"을 가지는 대상체는 상기 물질에 의한 감염의 결과로서 사망하지 않을 것이다.
"아데노바이러스 캡시드 단백질"은 특정한 아데노바이러스의 혈청형 및/또는 굴성을 결정하는 데 포함된 아데노바이러스(예를 들어, Ad 26 또는 Ad 35)의 캡시드 상의 단백질을 의미한다. 아데노바이러스 캡시드 단백질은 통상적으로 섬유, 펜톤 및/또는 헥손 단백질을 포함한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "Ad26 캡시드 단백질" 또는 "Ad35 캡시드 단백질"은 Ad26 또는 Ad35 캡시드 단백질의 적어도 일부를 포함하는 예를 들어 키메라 캡시드 단백질일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 캡시드 단백질은 Ad26 또는 Ad35의 전체 캡시드 단백질이다. 소정의 실시형태에서, 헥손, 펜톤 및 섬유는 Ad26 또는 of Ad35를 가진다.
용어 "아쥬번트" 및 "면역 자극제"는 본 명세서에서 상호교환되어 사용되고, 면역계의 자극을 발생시키는 하나 이상의 물질로서 정의된다. 이 맥락에서, 아쥬번트는 본 발명의 아데노바이러스 및/또는 MVA 벡터에 대한 면역 반응을 증대시키기 위해 사용된다.
용어 "상응하는"은, 서열에서의 아미노산 잔기의 위치에 적용될 때, 서열이 최적으로 정렬될 때 복수의 서열에서의 상응하는 위치를 의미한다.
용어 "동일한" 또는 "동일성" 백분율은, 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열(예를 들어, 필로바이러스의 당단백질 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드)의 맥락에서, 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여 또는 육안 검사에 의해 측정될 때, 최대 연관성에 대해 비교되고 정렬될 때, 동일한 2개 이상의 서열 또는 하위서열 또는 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드의 기재된 백분율을 의미한다.
서열 비교를 위해, 통상적으로 하나의 서열은 시험 서열이 비교되는 기준 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 시험 서열 및 기준 서열은 컴퓨터로 입력되고, 하위서열 좌표가 필요한 경우 지정되고, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수가 지정된다. 이후, 서열 비교 알고리즘은, 지정된 프로그램 매개변수에 기초하여, 기준 서열에 대해 시험 서열(들)에 대해 서열 동일성 백분율을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어 문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘에 의해, 문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)]의 유사성 방법에 대한 조사에 의해, 3개의 알고리즘의 컴퓨터화 실행에 의해(위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지(Wisconsin Genetics Software Package)(위스콘신주 매디슨 575 사이언스 드라이브 제네틱스 그룹 센터)에서의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA), 또는 육안 검사에 의해(일반적으로, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel)] 참조) 수행될 수 있다.
서열 동일성 및 서열 유사성 백분율을 결정하기에 적합한 알고리즘의 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이고, 이것은 각각 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410 및 Altschuel et al. (1977) Nucleic Acids Res. 25: 3389- 3402]에 기재되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 바이오기술 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공중에 이용 가능하다. 이 알고리즘은, 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때, 약간의 양의 값의 한계치 점수 T와 일치하거나 이를 만족시키는, 해당 서열에서의 길이 W의 짧은 단어를 확인함으로써 높은 스코어링 서열 쌍(high scoring sequence pair; HSP)을 확인하는 것을 처음에 포함한다. T는 이웃 단어 점수 한계치라 불린다(상기 Altschul 등의 문헌 참조). 이 초기 이웃 단어 히트는 이들을 함유하는 더 긴 HSP를 발견하기 위한 조사를 개시하기 위한 시드(seed)로서 작용한다. 이후, 단어 히트는 누적 정렬 점수가 증가할 수 있는 한 각각의 서열을 따라 방향 둘 다에서 연장된다.
누적 점수는 뉴클레오타이드 서열에 대해 매개변수 M(한 쌍의 불일치 잔기에 대한 보상 점수; 항상 > 0) 및 N(불일치 잔기에 대한 패널티 점수; 항상 < 0)을 사용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 스코어링 매트릭스는 누적 점수를 계산하기 위해 사용된다. 각각의 방향에서의 단어 히트의 연장은, 누적 정렬 점수가 이의 최대 달성 값으로부터 분량 X만큼 해당할 때; 누적 점수가 하나 이상의 음의 스코어링 잔기 정렬의 축적으로 인해 0 또는 그 이하일 때; 또는 서열 중 어느 하나의 종료가 도달될 때, 중지된다. BLAST 알고리즘 매개변수 W, T 및 X는 정렬의 민감도 및 속도를 결정한다. (뉴클레오타이드 서열에 대한) BLASTN 프로그램은 디폴트로서 11의 워드길이(W), 10의 기대치(E), M=5, N=-4 및 가닥 둘 다의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 3의 워드길이(W), 10의 기대치(E) 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스를 사용한다(문헌[Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)] 참조).
서열 동일성 백분율을 계산하는 것 이외에, BLAST 알고리즘 또한 2개의 서열 사이의 유사성의 통계 분석을 수행한다(예를 들어, 문헌[Karlin & Altschul, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)] 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공된 유사성의 일 측정치는 가장 작은 합 확률(P(N))이고, 이것은 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 일치가 우연히 발생하는 확률의 표시를 제공한다. 예를 들어, 핵산은, 기준 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서의 가장 작은 합 확률이 약 0.1 미만, 더 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만인 경우 기준 서열과 유사한 것으로 생각된다.
2개의 핵산 서열 또는 폴리펩타이드가 실질적으로 동일하다는 추가의 표시는, 제1 핵산에 의해 코딩된 폴리펩타이드가 하기 기재된 바대로 제2 핵산에 의해 코딩된 폴리펩타이드와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 폴리펩타이드는, 예를 들어 2개의 펩타이드가 보존적 치환에 의해서만 다를 경우, 제2 폴리펩타이드와 통상적으로 실질적으로 동일하다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또 다른 표시는 2개의 분자가 하기 기재된 바대로 엄격한 조건 하에 서로에 하이브리드화한다는 것이다.
용어 "실질적으로 유사한"은, 본 발명의 필로바이러스 항원 단백질의 맥락에서, 폴리펩타이드가 10 내지 20개의 아미노산의 비교 창에 걸쳐 기준 서열과 적어도 90%, 바람직하게는 적어도 95% 서열 동일성을 가지는 서열을 포함한다는 것을 표시한다. 서열 동일성의 백분율은 비교 창에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정되고, 여기서 비교 창 내의 폴리뉴클레오타이드 서열의 일부는 2개의 서열의 최적 정렬에 대해 (부가 또는 결실을 포함하지 않는) 기준 서열과 비교하여 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 백분율은 서열 둘 다에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 발생하는 위치의 수를 결정하여 일치한 위치의 수를 생성하고, 비교 창에서 위치의 전체 수로 일치한 위치의 수를 나누고 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 생성함으로써 계산된다.
비상동성 프라임-부스트 조합, 특히, Ad26 프라이밍, 이후 MVA 부스팅 및 이의 반대가 필로바이러스의 하나 이상의 아형에 대해 보호 면역 반응을 생성하는 데 있어서 놀랍게도 효과적이라는 것이 본 발명에서 발견되었다.
필로바이러스 항원 단백질
에볼라 바이러스, 및 유전적으로 관련된 마르부르크 바이러스는 북미, 유럽 및 아프리카에서 인간 및 영장류에서 매우 치사인 출혈 열의 발생과 연관된 필로바이러스이다(Peters, C.J. et al. in: Fields Virology, eds. Fields, B.N. et al. 1161-1176, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996; Peters, C.J. et al. 1994 Semin Virol 5:147-154). 몇몇 아형이 정의되었지만, 이들 바이러스의 유전적 체계는 유사하고, 각각은 7개의 선형으로 배열된 유전자를 함유한다. 바이러스 단백질 중에서, 외피 당단백질은 바이러스 진입을 매개하는 RNA 편집에 의해 생성된 130kDa의 막관통 당단백질(GP) 및 50 내지 70킬로달톤(kDa)의 분비된 단백질(sGP)인 2개의 대안적인 형태로 존재한다(Peters, C.J. et al. in: Fields Virology, eds. Fields, B.N. et al. 1161-1176, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996; Sanchez, A. et al. 1996 PNAS USA 93:3602-3607). 다른 구조적 유전자 생성물은 핵단백질(NP), 매트릭스 단백질 VP24 및 VP40, 추정된 비구조적 단백질 VP30 및 VP35, 및 바이러스 중합효소를 포함한다(문헌[Peters, C.J. et al. in: Fields Virology, eds. Fields, B.N. et al. 1161-1176, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996]에 검토됨).
아데노바이러스 및 MVA 벡터에 포함된 핵산 분자는 임의의 필로바이러스 종, 예컨대 자이르(본 명세서에서 ZEBOV라 또한 칭하는 유형 종), 수단(본 명세서에서 SEBOV라 또한 칭함), 레스톤, 분디부교 및 아이보리 코스트의 아형의 구조적 유전자 생성물을 코딩할 수 있다. 마르부르크 바이러스(본 명세서에서 MARV라 또한 칭함)의 단일 종이 존재한다.
본 발명의 아데노바이러스 벡터 및 MVA 벡터는 매우 다양한 필로바이러스 항원의 항원 결정부위를 포함하는 단백질인 항원 단백질을 발현하기 위해 사용될 수 있다. 통상적이고 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 벡터는 바이러스 당단백질(GP)의 막관통 형태를 코딩하는 핵산을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 벡터는 바이러스 당단백질(ssGP) 또는 바이러스 핵단백질(NP)의 분비된 형태를 코딩할 수 있다.
당업자는 필로바이러스 항원 단백질을 코딩하는 핵산 분자가 변형될 수 있다는 것, 예를 들어 변형된 발현된 단백질이 병원균 또는 질환에 대한 면역 반응을 유발하는 한, 본 명세서에 기재된 핵산 분자가 돌연변이될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "항원 단백질" 또는 "필로바이러스 단백질"은 상기 기재된 필로바이러스 단백질의 적어도 하나의 항원 결정부위를 포함하는 단백질을 의미한다. 상기 용어는 필로바이러스 당단백질(즉, 필로바이러스의 유전자 생성물) 또는 필로바이러스 핵단백질, 및 하나 이상의 필로바이러스 당단백질 결정부위를 포함하는 재조합 단백질을 포함한다. 용어 항원 단백질은 실질적으로 유사한 항원 단백질을 또한 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 단백질은 돌연변이될 수 있어서, 이것은 세포에 덜 독성이거나(예를 들어, WO/2006/037038 참조), 세포에서 증가한 또는 감소한 수준에 의해 발현될 수 있다. 본 발명은 또한 핵산 분자의 조합을 포함하는 백신을 포함한다. 예를 들어, 제한 없이, 자이르, 수단, 마르부르크 및 아이보리 코스트/타이 포레스트 에볼라 균주의 GP, ssGP 및 NP를 코딩하는 핵산 분자는 임의의 조합으로 일 백신 조성물에서 조합될 수 있다.
아데노바이러스
본 발명에 따른 아데노바이러스는 아데노비리다에(Adenoviridae)의 과에 속하고, 바람직하게는 마스트아데노바이러스(Mastadenovirus) 속에 속하는 것이다. 이것은 인간 아데노바이러스, 또한 소 아데노바이러스(예를 들어, 소 아데노바이러스 3, BAdV3), 개 아데노바이러스(예를 들어, CAdV2), 돼지 아데노바이러스(예를 들어, PAdV3 또는 5) 또는 시미안 아데노바이러스(원숭이 아데노바이러스 및 유인원 아데노바이러스, 예컨대 침팬지 아데노바이러스 또는 고릴라 아데노바이러스 포함)(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 다른 종을 감염시키는 아데노바이러스일 수 있다. 바람직하게는, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스(HAdV, 또는 AdHu; 본 발명에서 인간 아데노바이러스는 종의 표시 없이 Ad라 언급되는 경우 의도되고, 예를 들어 간략한 표시 "Ad5"는 인간 아데노바이러스 혈청형 5인 HAdV5과 동일을 의미한다), 또는 유인원 아데노바이러스, 예컨대 침팬지 또는 고릴라 아데노바이러스(ChAd, AdCh 또는 SAdV)이다.
가장 진행된 연구는 인간 아데노바이러스를 사용하여 수행되었고, 인간 아데노바이러스는 본 발명의 소정의 양상에 따라 바람직하다. 소정의 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 재조합 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스에 기초한다. 바람직한 실시형태에서, 재조합 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 혈청형 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49 또는 50에 기초한다. 본 발명의 특히 바람직한 실시형태에 따르면, 아데노바이러스는 혈청형 26 또는 35 중 하나의 인간 아데노바이러스이다.
이들 혈청형의 이점은 인간 집단에서의 낮은 혈청학적 유병률 및/또는 낮은 기존의 중화 항체 역가이다. rAd26 벡터의 제조는 예를 들어 WO 2007/104792 및 문헌[Abbink et al., (2007) Virol 81(9): 4654-63](이들 둘 다 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. Ad26의 예시적인 게놈 서열은 유전자은행 수탁번호 EF 153474 및 WO 2007/104792의 서열 번호 1에서 발견된다. rAd35 벡터의 제조는 예를 들어 US 특허 제7,270,811호, WO 00/70071, 및 문헌[Vogels et al., (2003) J Virol 77(15): 8263-71](이들 모두 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재되어 있다. Ad35의 예시적인 게놈 서열은 유전자은행 수탁번호 AC_000019 및 WO 00/70071의 도 6에서 발견된다.
유인원 아데노바이러스는 일반적으로 또한 인간 집단에서 낮은 혈청학적 유병률 및/또는 낮은 기존의 중화 항체 역가를 가지고, 상당한 양의 업적이 침팬지 아데노바이러스 벡터를 사용하여 보고되었다(예를 들어, US6083716; WO 2005/071093; WO 2010/086189; WO 2010085984; Farina et al, 2001, J Virol 75: 11603-13; Cohen et al, 2002, J Gen Virol 83: 151-55; Kobinger et al, 2006, Virology 346: 394-401; Tatsis et al., 2007, Molecular Therapy 15: 608-17; 문헌[Bangari and Mittal, 2006, Vaccine 24: 849- 62]에 의한 검토를 또한 참조; 및 문헌[Lasaro and Ertl, 2009, Mol Ther 17: 1333-39]에 의해 검토됨). 그러므로, 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명에 따른 재조합 아데노바이러스는 유인원 아데노바이러스, 예를 들어 침팬지 아데노바이러스에 기초한다. 소정의 실시형태에서, 재조합 아데노바이러스는 유인원 아데노바이러스 유형 1, 7, 8, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27.1, 28.1, 29, 30, 31.1, 32, 33, 34, 35.1, 36, 37.2, 39, 40.1, 41.1, 42.1, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 또는 SA7P에 기초한다.
아데노바이러스 벡터 rAd26 및 rAd35
본 발명에 따른 바람직한 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad26 및 Ad35인 2개의 희귀 혈청형으로부터의 캡시드 단백질을 포함한다. 통상적인 실시형태에서, 벡터는 rAd26 또는 rAd35 바이러스이다.
따라서, 본 발명에서 사용될 수 있는 벡터는 Ad26 또는 Ad35 캡시드 단백질(예를 들어, 섬유, 펜톤 또는 헥손 단백질)을 포함한다. 당업자는 전체 Ad26 또는 Ad35 캡시드 단백질이 본 발명의 벡터에서 사용될 필요가 없다는 것을 인식할 것이다. 따라서, Ad26 또는 Ad35 캡시드 단백질의 적어도 일부를 포함하는 키메라 캡시드 단백질은 본 발명의 벡터에서 사용될 수 있다. 본 발명의 벡터는, 적어도 하나의 캡시드 단백질이 Ad26 또는 Ad35로부터 유래하는 한, 섬유, 펜톤, 및 헥손 단백질이 상이한 혈청형으로부터 각각 유래한 캡시드 단백질을 또한 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 섬유, 펜톤 및 헥손 단백질은 Ad26으로부터 유래한 각각 또는 Ad35로부터 유래한 각각이다.
당업자는 복수의 혈청형으로부터 유래한 구성요소가 단일 재조합 아데노바이러스 벡터에서 조합될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 상이한 혈청형으로부터 원하는 특성을 조합한 키메라 아데노바이러스를 제조할 수 있다. 따라서, 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 키메라 아데노바이러스는 Ad26 및 Ad35 혈청형의 기존의 면역의 부재를 온도 안정성, 어셈블리, 고정, 생성 수율, 재지향된 또는 개선된 감염, 표적 세포에서의 DNA의 안정성 등과 같은 특징과 조합한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명에서 유용한 재조합 아데노바이러스 벡터는 주로 또는 전적으로 Ad35 또는 Ad26으로부터 유래한다(즉, 벡터는 rAd35 또는 rAd26임). 몇몇 실시형태에서, 아데노바이러스는 예를 들어 게놈의 E1 구역에서의 결실을 함유하므로 복제 결핍이다. Ad26 또는 Ad35로부터 유래한, 본 발명의 아데노바이러스의 경우, Ad5와 같은 인간 하위그룹 C의 아데노바이러스의 E4-orf6에 의해 아데노바이러스의 E4-orf6 코딩 서열을 교환하는 것이 통상적이다. 이것은 Ad5의 E1 유전자를 발현하는 널리 공지된 보완 세포주, 예를 들어 293 세포, PER.C6 세포 등에서 이러한 아데노바이러스의 전파를 허용한다(예를 들어, 문헌[Havenga et al, 2006, J Gen Virol 87: 2135-43; WO 03/104467]; WO 03/104467 참조). 소정의 실시형태에서, 아데노바이러스는, 항원을 코딩하는 핵산이 클로닝된 E1 구역에서의 결실을 가지고, Ad5의 E4 orf6 구역을 가지는, 혈청형 35의 인간 아데노바이러스이다. 소정의 실시형태에서, 아데노바이러스는, 항원을 코딩하는 핵산이 클로닝된 E1 구역에서의 결실을 가지고, Ad5의 E4 orf6 구역을 가지는, 혈청형 26의 인간 아데노바이러스이다. Ad35 아데노바이러스의 경우, Bsu36I 제한 부위에 의해 5' 말단에서 표시된, 아데노바이러스에서 E1B 55K 오픈 리딩 프레임의 3' 말단, 예를 들어 pIX 오픈 리딩 프레임 또는 이를 포함하는 단편의 바로 상류의 166bp, 예컨대 pIX 시작 코돈의 바로 상류의 243bp 단편을 보유하는 것이 통상적인데, 왜냐하면 pIX 유전자의 프로모터가 부분적으로 이 구역에 있으므로 이것은 아데노바이러스의 안정성을 증가시키기 때문이다(예를 들어, 상기 Havenga 등의 문헌(2006); WO 2004/001032 참조).
재조합 아데노바이러스 벡터의 제조는 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
rAd26 벡터의 제조는 예를 들어 WO 2007/104792 및 문헌[Abbink et al., (2007) Virol 81(9): 4654-63]에 기재되어 있다. Ad26의 예시적인 게놈 서열은 유전자은행 수탁번호 EF 153474 및 WO 2007/104792의 서열 번호 1에서 발견된다. rAd35 벡터의 제조는 예를 들어 US 특허 제7,270,811호 및 문헌[Vogels et al., (2003) J Virol 77(15): 8263-71]에 기재되어 있다. Ad35의 예시적인 게놈 서열은 유전자은행 수탁번호 AC_000019에서 발견된다.
본 발명의 일 실시형태에서, 본 발명에 유용한 벡터는 WO2012/082918(이의 개시내용은 본 명세서에 그 전문이 참고로 포하됨)에 기재된 것을 포함한다.
통상적으로, 본 발명에 유용한 벡터는 전체 재조합 아데노바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 사용하여 제조된다(예를 들어, 플라스미드, 코스미드 또는 바큘로바이러스 벡터). 따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 아데노바이러스 벡터를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 핵산 분자는 클로닝에 의해 얻어지거나 합성으로 제조된 DNA의 형태 또는 RNA의 형태일 수 있다. DNA는 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있다.
본 발명에 유용한 아데노바이러스 벡터는 통상적으로 복제 결함이다. 이 실시형태에서, 바이러스는 바이러스의 복제에 중요한 구역, 예컨대 E1 구역의 결실 또는 불활화에 의해 복제 결함이 된다. 그 구역은 예를 들어 (보통 프로모터에 연결된) 관심 있는 유전자를 삽입함으로써 실질적으로 결실되거나 불활화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 벡터는 다른 구역, 예컨대 E2, E3 또는 E4 구역에서의 결실 또는 프로모터에 연결된 비상동성 유전자의 삽입을 함유할 수 있다. E2 및/또는 E4 돌연변이된 아데노바이러스의 경우, 일반적으로 E2 및/또는 E4 보완 세포주는 재조합 아데노바이러스를 생성하기 위해 사용된다. E3이 복제에 필요하지 않으므로, 아데노바이러스의 E3 구역에서의 돌연변이는 세포주에 의해 보완될 필요가 없다.
패키징 세포주는 본 발명의 아데노바이러스 벡터의 충분한 양을 생성하기 위해 통상적으로 사용된다. 패키징 세포는 복제 결함 벡터에서 결실되거나 불활화되어서, 바이러스가 세포에서 복제하게 하는, 유전자를 포함하는 세포이다. 적합한 세포주는 예를 들어 PER.C6, 911, 293 및 E1 A549를 포함한다.
상기 기재된 바대로, 매우 다양한 필로바이러스 당단백질은 벡터에서 발현될 수 있다. 필요한 경우, 필로바이러스 당단백질을 코딩하는 비상동성 유전자는 처리된 숙주(예를 들어, 인간)에서 적절한 발현을 보장하도록 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화는 당해 분야에 널리 사용된 기술이다. 통상적으로, 비상동성 유전자는 아데노바이러스 게놈의 E1 및/또는 E3 구역으로 클로닝된다.
비상동성 필로바이러스 유전자는 아데노바이러스 유래 프로모터(예를 들어, 주요 후기 프로모터)의 제어 하에(즉, 이것에 조작 가능하게 연결됨) 있을 수 있거나, 비상동성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 적합한 비상동성 프로모터의 예는 CMV 프로모터 및 RSV 프로모터를 포함한다. 바람직하게는, 프로모터는 발현 카세트 내에 관심 있는 비상동성 유전자의 상류에 위치한다.
상기 기재된 바대로, 본 발명에 유용한 아데노바이러스 벡터는 당해 분야의 당업자에게 공지된 매우 다양한 필로바이러스 당단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, rAd 벡터(들)는 자이르 에볼라바이러스(EBOV)의 GP, 수단 에볼라바이러스(SUDV)의 GP, 마르부르크 바이러스(MARV)의 GP 및 이들에 실질적으로 유사한 GP로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 GP를 포함한다.
MVA 벡터
본 발명에 유용한 MVA 벡터는 인간 세포주에서 재생하여 복제하는 이들의 능력의 소실을 특징으로 하는 변형된 백시니아 안카라 바이러스로부터 유래한 약독화된 바이러스를 사용한다. MVA 벡터는 매우 다양한 필로바이러스 당단백질, 및 다른 구조적 필로바이러스 단백질, 예컨대 VP40 및 핵단백질(NP)을 발현한다.
일 양상에서, 본 발명은 필로바이러스 당단백질(GP), 특히 외피 당단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 재조합 변형된 백시니아 바이러스 안카라(MVA)를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 필로바이러스 당단백질, 특히 외피 당단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 비상동성 뉴클레오타이드 서열, 및 추가의 필로바이러스 단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 비상동성 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 재조합 MVA 벡터를 제공한다.
MVA는 수년 동안 백신접종 인스티튜트(Vaccination Institute)(터키 안카라)에서 유지되고, 인간의 백신접종에 대한 기준으로서 사용된 피부 백시니아 균주 안카라[코리오알란토이스 백시니아 바이러스 안카라 바이러스(Chorioallantois vaccinia virus Ankara virus), CVA; 검토를 위해 문헌[Mayr et al. (1975), Infection 3, 6-14] 참조]의 닭 배아 섬유아세포에서 570 초과의 연속 계대배양에 의해 생성되었다. 그러나, 백시니아 바이러스와 연관된 대개 심각한 백신접종 후 합병증으로 인해, 더 약독화된, 더 안전한 두창 백신을 생성하기 위한 여러 시도가 있었다.
1960년 내지 1974년의 기간 동안, 안톤 마이어(Anton Mayr) 교수는 CEF 세포에서의 570 초과의 연속 계대배양에 의해 CVA를 약독화하는 데 성공하였다[Mayr et al. (1975)]. 다양한 동물 모델에서 생성된 MVA가 무독력이라는 것이 밝혀졌다[Mayr, A. & Danner, K. (1978), Dev. Biol. Stand. 41: 225-234]. 예비 두창 백신으로서 MVA의 초기 개발의 일부로서, 백시니아로부터의 불리한 반응에 대한 위험이 있는 대상체에서 리스터 엘스트리(Lister Elstree)와 조합된 MVA-517을 사용한 임상 실험이 존재하였다[Stickl (1974), Prev. Med. 3: 97-101; Stickl 및 Hochstein-Mintzel (1971), Munch. Med. Wochenschr. 113: 1149-1153]. 1976년에, (571번째 계대배양에 상응하는) MVA-571 시드 스톡으로부터 유래한 MVA는 2단계 비경구 두창 백신접종 프로그램에서 프라이머 백신으로서 독일에 등록되었다. 후속하여, 많은 대상체가 백시니아와 연관된 합병증의 높은 위험을 가지는 집단 중에 있더라도, MVA-572는 불리한 부작용의 보고 없이 대략 120,000명의 코카시안 개체에서 사용되었고, 대부분의 어린이는 1세 내지 3세였다(Mayr et al. (1978), Zentralbl. Bacteriol. (B) 167:375-390). MVA-572는 ECACC V94012707로서 유럽 동물 세포 배양 수집(European Collection of Animal Cell Cultures)에 기탁되었다.
MVA를 약독화하는 데 사용된 계대배양의 결과로서, CEF 세포에서 수행된 계대배양의 수에 따라 다수의 상이한 균주 또는 단리물이 존재한다. 예를 들어, MVA-572는 두창 박멸 프로그램 동안 독일에서 예비 백신으로서 작은 용량으로 사용되었고, MVA-575는 수의학적 백신으로서 광범위하게 사용되었다. MVA, 및 MVA-BN은 선조 CVA 바이러스와 비교하여 게놈의 대략 15%(6개의 구역으로부터 31kb)가 결여된다. 결실은 다수의 병독성 및 숙주 범위 유전자, 및 타입 A 봉입체에 대한 유전자에 영향을 미친다. MVA-575는 2000년 12월 7일에 수탁번호 V00120707 하에 유럽 동물 세포 배양 수집(ECACC)에 기탁되었다. 약독화된 CVA-바이러스 MVA(변형된 백시니아 바이러스 안카라)는 1차 닭 배아 섬유아세포에서 CVA의 연속 전파(570 초과의 계대배양)에 의해 얻어졌다.
메이어(Mayr) 등이 1970년대 동안 MVA가 인간 및 포유류에서 매우 약독화되고 무독력이라는 것을 입증하였더라도, 일부 조사자들은 이들 세포에서 잔존 복제가 발생할 수 있으므로 MVA가 포유류 및 인간 세포주에서 완전히 약독화되지 않았다는 것을 보고하였다[Blanchard et al. (1998), J. Gen. Virol. 79:1159-1167; Carroll & Moss (1997), Virology 238:198-211; 미국 특허 제5,185,146호; Ambrosini et al. (1999), J. Neurosci. Res. 55: 569]. 사용된 바이러스가 다양한 세포주에서 본질적으로 이의 특성, 특히 이의 성장 거동이 다르므로, 이들 공보에 보고된 결과는 MVA의 다양한 공지된 균주에 의해 얻어졌다고 추정된다. 이러한 잔존 복제는 인간에서의 사용과 연관된 안전성 문제를 포함하는 다양한 이유로 바람직하지 않다.
더 안전한 생성물, 예컨대 백신 또는 의약품의 개발을 위한 증대된 안전성 프로필을 가지는 MVA의 균주가 바바리안 노르딕에 의해 개발되었다. MVA는 바바리안 노르딕에 의해 추가로 계대배양되고, MVA-BN으로 지정되고, 이것의 대표적인 샘플은 2000년 8월 30일에 수탁번호 V00083008 하에 유럽 동물 세포 배양 수집(ECACC)에 기탁되었다. MVA-BN은 WO 02/42480(US 2003/0206926) 및 WO 03/048184(US 2006/0159699)(이들 둘 다 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 추가로 기재되어 있다.
MVA-BN은 바이러스로 코딩된 유전자가 매우 효과적으로 발현될 때 인간 세포에 부착하고 진입할 수 있다. MVA-BN은 1차 닭 배아 섬유아세포(CEF) 세포에 강하게 적용되고, 인간 세포에서 복제하지 않는다. 인간 세포에서, 바이러스 유전자가 발현되고, 감염성 바이러스가 제조되지 않는다. MVA-BN은 미국에서 질환 조절 및 예방 센터에 따라 생물학적 안전성 수준 1 유기체로서 분류되었다. MVA-BN 및 유도체의 제제는 많은 유형의 동물, 및 면역 결핍 개체를 포함하는 2000명 초과의 인간 대상체에게 투여된다. 모든 백신접종은 일반적으로 안전하고 매우 내약성인 것으로 입증되었다. 이의 높은 약독화 및 감소한 병독성에도 불구하고, 전임상 연구에서 MVA-BN은 백시니아 및 MVA 게놈으로 클로닝된 유전자에 의해 코딩된 비상동성 유전자 생성물에 체액 면역 반응 및 세포 면역 반응 둘 다를 발생시키는 것으로 나타났다[E. Harrer et al. (2005), Antivir. Ther. 10(2):285-300; A. Cosma et al. (2003), Vaccine 22(1):21-9; M. Di Nicola et al. (2003), Hum. Gene Ther. 14(14):1347-1360; M. Di Nicola et al. (2004), Clin. Cancer Res., 10(16):5381-5390].
MVA의 "유도체" 또는 "변이체"는 본 명세서에 기재된 바와 같은 MVA와 본질적으로 동일한 복제 특징을 나타내지만, 이들의 게놈의 하나 이상의 쌍에서 차이를 나타내는 바이러스를 의미한다. MVA-BN, 및 MVA-BN의 유도체 또는 변이체는 인간 및 마우스에서, 중증의 면역 억제 마우스에서도 생체내 재생하여 복제할 수 없다. 더 구체적으로, MVA-BN 또는 MVA-BN의 유도체 또는 변이체는 바람직하게는 또한 닭 배아 섬유아세포(CEF)에서 재생하여 복제하는 능력을 갖지만, 인간 각질세포 세포주 HaCat[Boukamp et al (1988), J. Cell Biol. 106: 761-771], 인간 골 골육종 세포주 143B(ECACC 수탁번호 91112502), 인간 배아 신장 세포주 293(ECACC 수탁번호 85120602) 및 인간 자궁경부 선암 세포주 HeLa(ATCC 수탁번호 CCL-2)에서 재생하여 복제하는 능력을 가지지 않는다. 추가적으로, MVA-BN의 유도체 또는 변이체는 Hela 세포주 및 HaCaT 세포주에서 MVA-575의 적어도 2배 미만, 더 바람직하게는 3배 미만인 바이러스 증폭 비율을 가진다. MVA 변이체의 이들 특성에 대한 시험 및 검정은 WO 02/42480(US 2003/0206926) 및 WO 03/048184(US 2006/0159699)에 기재되어 있다.
용어 "재생하여 복제할 수 없는" 또는 "재생하여 복제하는 능력이 없는"은 예를 들어 WO 02/42480에 기재되어 있고, 이것은 또한 상기 언급된 바와 같은 원하는 특성을 가지는 MVA를 어떻게 얻는지를 교시한다. 상기 용어는 WO 02/42480 또는 미국 특허 제6,761,893호(이들 둘 다 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 기재된 검정을 이용하여 1 미만의 감염 후 4일에 바이러스 증폭 비율을 가지는 바이러스에 적용된다.
용어 "재생하여 복제하지 못한다"는 1 미만의 감염 후 4일에 바이러스 증폭 비율을 가지는 바이러스를 의미한다. WO 02/42480 또는 미국 특허 제6,761,893호에 기재된 검정은 바이러스 증폭 비율의 결정에 적용 가능하다.
바이러스의 증폭 또는 복제는 "증폭 비율"이라 칭해지는 제1 장소에서 세포를 감염시키기 위해 원래 사용된 양(입력)에 대한 감염된 세포로부터 생성된 바이러스(출력)의 비율로서 보통 표현된다. "1"의 증폭 비율은 감염된 세포로부터 생성된 바이러스의 양이 세포를 감염시키기 위해 초기에 사용된 양과 동일한 증폭 상태를 정의하여서, 감염된 세포가 바이러스 감염 및 재생에 허용된다는 것을 의미한다. 반대로, 1 미만의 증폭 비율, 즉 입력 수준과 비교하여 출력의 감소는 바이러스의 재생 복제의 결여 및 이에 따른 약독화를 나타낸다.
MVA 기반 백신의 이점은 이의 안전성 프로필, 및 대규모 백신 제조에 대한 이용가능성을 포함한다. 전임상 시험은 MVA-BN이 다른 MVA 균주와 비교하여 더 우수한 약독화 및 효율을 나타낸다는 것을 밝혀냈다(WO 02/42480). MVA-BN 균주의 추가적인 특성은 DNA-프라임/백시니아 바이러스 부스트 섭생과 비교할 때 백시니아 바이러스 프라임/백시니아 바이러스 부스트 섭생에서 면역의 동일한 수준을 실질적으로 유도하는 능력이다.
본 명세서에서 가장 바람직한 실시형태인 재조합 MVA-BN 바이러스는 포유류 세포에서의 이의 명확한 복제 결핍 및 이의 잘 확립된 무독력 때문에 안전한 것으로 생각된다. 더구나, 이의 효율 이외에, 산업 규모 제조의 실행가능성이 유리할 수 있다. 추가적으로, MVA 기반 백신은 복수의 비상동성 항원을 전달하고 체액 면역 및 세포 면역의 동시 유도를 허용할 수 있다.
본 발명에 유용한 MVA 벡터는 당해 분야에 공지된 방법, 예컨대 WO/2002/042480 및 WO/2002/24224(이의 관련 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에 기재된 것을 이용하여 제조될 수 있다.
또 다른 양상에서, 복제 결핍 MVA 바이러스 균주, 예컨대 균주 MVA-572, MVA-575 또는 임의의 유사하게 약독화된 MVA 균주가 또한 적합할 수 있다. 돌연변이체 MVA, 예컨대 결실된 코리오알란토이스 백시니아 바이러스 안카라(dCVA)가 또한 적합할 수 있다. dCVA는 MVA 게놈의 del I, del II, del III, del IV, del V, 및 del VI 결실 부위를 포함한다. 그 부위는 복수의 비상동성 서열의 삽입에 특히 유용하다. dCVA는 (10 초과의 증폭 비율로) 인간 세포주(예컨대, 인간 293, 143B 및 MRC-5 세포주)에서 재생하여 복제할 수 있고, 이것은 이후 바이러스 기반 백신접종 전략에 유용한 추가의 돌연변이에 의한 최적화가 가능하게 한다(WO 2011/092029 참조).
본 발명의 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터(들)는 자이르 에볼라바이러스(EBOV)의 GP, 수단 에볼라바이러스(SUDV)의 GP, 마르부르크 바이러스(MARV)의 GP, 타이 포레스트 바이러스의 NP 및 GP 또는 이들에 실질적으로 유사한 NP로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함한다.
필로바이러스 단백질은 MVA의 하나 이상의 유전자간 구역(IGR)으로 삽입될 수 있다. 소정의 실시형태에서, IGR은 IGR07/08, IGR 44/45, IGR 64/65, IGR 88/89, IGR 136/137 및 IGR 148/149로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 재조합 MVA의 5 미만, 4, 3, 또는 2의 IGR은 필로바이러스 외피 당단백질 및/또는 추가의 필로바이러스 단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 비상동성 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 비상동성 뉴클레오타이드 서열은 추가적으로 또는 대안적으로 천연 발생 결실 부위 중 하나 이상, 특히 MVA 게놈의 주요 결실 부위 I, II, III, IV, V 또는 VI로 삽입될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 재조합 MVA의 5 미만, 4, 3, 또는 2의 천연 발생 결실 부위는 필로바이러스 외피 당단백질 및/또는 추가의 필로바이러스 단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 비상동성 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
필로바이러스 단백질의 항원 결정부위를 코딩하는 비상동성 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 MVA의 삽입 부위의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 이것 초과일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 비상동성 뉴클레오타이드 서열은 4, 3, 2 또는 이것 미만의 삽입 부위로 삽입된다. 바람직하게는, 2개의 삽입 부위가 사용된다. 소정의 실시형태에서, 3개의 삽입 부위가 사용된다. 바람직하게는, 재조합 MVA는 2개 또는 3개의 삽입 부위로 삽입된 적어도 2, 3, 4, 5, 6 또는 7 유전자를 포함한다.
본 명세서에 제공된 재조합 MVA 바이러스는 당해 분야에 공지된 일상적 방법에 의해 생성될 수 있다. 재조합 폭스바이러스를 얻거나 폭스바이러스 게놈으로 외인성 코딩 서열을 삽입하기 위한 방법은 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 표준 분자 생물학 기법, 예컨대 DNA, DNA 및 RNA 단리의 클로닝, 웨스턴 브롯 분석, RT-PCR 및 PCR 증폭 기법에 대한 방법은 문헌[Molecular Cloning, A laboratory Manual (2nd Ed.) [J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]]에 기재되어 있고, 바이러스의 취급 및 조작을 위한 기법은 문헌[Virology Methods Manual [B.W.J. Mahy et al. (eds.), Academic Press (1996)]에 기재되어 있다. 유사하게, MVA의 취급, 조작 및 유전자 조작을 위한 기법 및 노하우는 문헌[Molecular Virology: A Practical Approach [A.J. Davison & R.M. Elliott (Eds.), The Practical Approach Series, IRL Press at Oxford University Press, Oxford, UK (1993)](예를 들어, Chapter 9: Expression of genes by Vaccinia virus vectors 참조] 및 문헌[Current Protocols in Molecular Biology [John Wiley & Son, Inc. (1998)](예를 들어, Chapter 16, Section IV: Expression of proteins in mammalian cells using vaccinia viral vector 참조]에 기재되어 있다.
본 명세서에 개시된 다양한 재조합 MVA의 생성을 위해, 상이한 방법이 적용 가능할 수 있다. 바이러스로 삽입되는 DNA 서열은 MVA의 DNA의 섹션에 상동성인 DNA가 삽입된 이. 콜라이 플라스미드 작제물에 있을 수 있다. 별개로, 삽입되는 DNA 서열은 프로모터에 결찰될 수 있다. 프로모터-유전자 연결이 비필수 유전좌위를 함유하는 MVA DNA의 구역을 플랭킹하는 DNA 서열에 상동성인 DNA에 의해 말단 둘 다에 플랭킹되도록, 프로모터-유전자 연결은 플라스미드 작제물에 위치할 수 있다. 생성된 플라스미드 작제물은 이. 콜라이 박테리아 내의 전파에 의해 증폭되고 단리될 수 있다. 삽입되는 DNA 유전자 서열을 함유하는 단리된 플라스미드는, 배양물이 MVA에 의해 감염되는 것과 동시에, 예를 들어 닭 배아 섬유아세포(chicken embryo fibroblast; CEF)의 세포 배양물로 형질감염될 수 있다. 각각 플라스미드 및 바이러스 게놈 내의 상동성 MVA DNA 사이의 재조합은 외래 DNA 서열의 존재에 의해 변형된 MVA를 생성할 수 있다.
바람직한 실시형태에 따르면, 예를 들어 CEF 세포로서 적합한 세포 배양물의 세포는 폭스바이러스에 의해 감염될 수 있다. 감염된 세포는 후속하여, 바람직하게는 폭스바이러스 발현 제어 구성요소의 전사 제어 하에 외래 또는 비상동성 유전자 또는 유전자들을 포함하는 제1 플라스미드 벡터에 의해 감염될 수 있다. 상기 설명된 바대로, 플라스미드 벡터는 또한 폭스바이러스 게놈의 선택된 구역으로의 외인성 서열의 삽입을 지시할 수 있는 서열을 포함한다. 임의로, 플라스미드 벡터는 또한 폭스바이러스 프로모터에 조작 가능하게 연결된 마커 및/또는 선택 유전자를 포함하는 카세트를 함유한다.
적합한 마커 또는 선택 유전자는 예를 들어 녹색 형광 단백질, β-갈락토시다제, 네오마이신-포스포리보실트랜스퍼라제 또는 다른 마커를 코딩하는 유전자이다. 선택 또는 마커 카세트의 사용은 생성된 재조합 폭스바이러스의 확인 및 단리를 단순화한다. 그러나, 재조합 폭스바이러스는 또한 PCR 기술에 의해 또한 확인될 수 있다. 후속하여, 추가의 세포는 상기 기재된 바대로 얻어지고 제2 외래 또는 비상동성 유전자 또는 유전자들을 포함하는 제2 벡터에 의해 형질감염된 재조합 폭스바이러스에 의해 감염될 수 있다. 그 경우, 이 유전자는 폭스바이러스 게놈의 상이한 삽입 부위로 삽입되어야 하고, 제2 벡터는 또한 폭스바이러스의 게놈으로 제2 외래 유전자 또는 유전자들의 통합을 지시하는 폭스바이러스 상동성 서열이 다르다. 상동성 재조합이 발생한 후, 2개 이상의 외래 또는 비상동성 유전자를 포함하는 재조합 바이러스느 단리될 수 있다. 재조합 바이러스로 추가적인 외래 유전자를 도입하기 위해, 감염 및 형질감염의 단계는 감염에 대해 이전 단계에서 단리된 재조합 바이러스를 사용함으로써 및 형질감염에 대해 추가의 외래 유전자 또는 유전자들을 포함하는 추가의 벡터를 사용함으로써 반복될 수 있다.
대안적으로, 상기 기재된 바와 같은 감염 및 형질감염의 단계는 상호 교환될 수 있고, 즉 적합한 세포는 외래 유전자를 포함하는 플라스미드 벡터에 의해 처음에 형질감염되고, 이후 폭스바이러스에 의해 감염될 수 있다. 추가의 대안으로서, 또한, 상이한 바이러스로 각각의 외래 유전자를 도입하고, 모든 얻어진 재조합 바이러스에 의해 세포를 동시 감염시키고, 모든 외래 유전자를 포함하는 재조합에 대해 스크리닝할 수 있다. 제3 대안은 시험관내 DNA 게놈 및 외래 서열의 결찰 및 헬퍼 바이러스를 사용하여 재조합된 백시니아 바이러스 DNA 게놈의 재구성이다. 제4 대안은 이. 콜라이에서의 상동성 재조합 또는, 백시니아 바이러스 게놈에서 통합의 원하는 부위를 플랭킹하는 서열에 상동성인 DNA 서열에 의해 플랭킹된 박테리아 인공 염색체(bacterial artificial chromosome; BAC) 및 선형 외래 서열로서 클로닝된, MVA와 같은 백시니아 바이러스 게놈 사이의 또 다른 박테리아 종이다.
비상동성 필로바이러스 유전자는 하나 이상의 폭스바이러스 프로모터의 제어 하에(즉, 이것에 조작 가능하게 연결됨) 있을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 폭스바이러스 프로모터는 Pr7.5 프로모터, 하이브리드 초기/후기 프로모터, 또는 PrS 프로모터, PrS5E 프로모터, 합성 또는 천연 초기 또는 후기 프로모터, 또는 우두 바이러스 ATI 프로모터이다.
면역원성 조성물
면역원성 조성물은 본 발명에서 사용하기 위한 정제된 또는 부분적으로 정제된 아데노바이러스 또는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 조성물이다. 상기 조성물은 당해 분야에 널리 공지된 방법에 따라 백신(또한 "면역원성 조성물"이라 칭함)으로서 제제화될 수 있다. 이러한 조성물은 면역 반응을 증대시키기 위해 아쥬번트를 포함할 수 있다. 제제 내의 각각의 성분의 최적 비율은 본 개시내용의 검토 시 당해 분야의 당업자에게 널리 공지된 기법에 의해 결정될 수 있다.
면역원성 조성물의 제조 및 용도는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 액체 담체 예컨대 물, 석유, 동물 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성 오일을 포함한다. 생리학적 식염수 용액, 덱스트로스 또는 다른 사카라이드 용액 또는 글라이콜, 예컨대 에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜 또는 폴리에틸렌 글라이콜이 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 필로바이러스 항원을 포함할 수 있거나, 프라이밍 또는 부스팅 접종은 다른 항원을 포함할 수 있다. 본 발명의 아데노바이러스 벡터와 조합되어 사용된 다른 항원은 본 발명에 중요하지 않고, 예를 들어 필로바이러스 항원 및 이들을 발현하는 핵산일 수 있다.
본 발명에 유용한 면역원성 조성물은 아쥬번트를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 동시투여에 적합한 아쥬번트는, QS-21, 데톡스-PC(Detox-PC), MPL-SE, MoGM-CSF, 타이터맥스-G(TiterMax-G), CRL-1005, GERBU, TER아마이드(TERamide), PSC97B, 아쥬머(Adjumer), PG-026, GSK-I, GcMAF, B-알레틴, MPC-026, 아쥬박스(Adjuvax), CpG ODN, 베타펙틴, Alum 및 MF59를 포함하는, 사람에서 잠재적으로 안전하고, 매우 내약성이고, 효과적인 것이어야 한다.
투여될 수 있는 다른 아쥬번트는 따라서 렉틴, 성장 인자, 사이토카인 및 림포킨, 예컨대 알파-인터페론, 감마 인터페론, 혈소판 유래 성장 인자(platelet derived growth factor; PDGF), 과립구 집락 자극 인자(granulocyte-colony stimulating factor; gCSF), 과립구 대식세포 집락 자극 인자(granulocyte macrophage colony stimulating factor; gMCSF), 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor; TNF), 표피 성장 인자(EGF), IL-I, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-IO, 및 IL-12 또는 코딩 핵산을 포함한다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 충전제, 안정화제 또는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지된 다른 재료를 포함할 수 있다. 이러한 재료는 비독성이어야 하고, 활성 성분의 효율을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 재료의 정확한 성질은 투여 경로, 예를 들어 근육내, 피하, 경구, 정맥내, 피부, 점막내(예를 들어, 소화관), 비강내 또는 복강내 경로에 따라 달라질 수 있다.
필로바이러스 감염에 대해 보호 면역을 유도하는 방법
본 발명은 또 다른 아데노바이러스 벡터 및/또는 MVA 벡터와 조합된 아데노바이러스 벡터를 사용하여 개체에서 하나 이상의 필로바이러스에 대한 면역 반응을 프라이밍 및 부스팅하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일반적인 일 양상에 따르면, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법은
a. 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제1 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계; 및
b. 필로바이러스의 적어도 2개의 균주의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제2 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
단계 (a) 및 (b)는 어느 한 순서로 수행된다. 바람직한 실시형태에서, 후기 단계는 제1 단계 후 1주 내지 12주에 수행된다.
본 발명의 소정의 추가적인 양상에서, 제1 조성물은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 추가적인 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다. 다른 실시형태에서, 제1 조성물은 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 추가적인 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함한다.
개시된 방법의 일 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터는 면역 반응을 프라이밍하기 위해 사용되고, 또 다른 아데노바이러스 및/또는 MVA 벡터는 프라이밍 백신접종 후 약 1주 내지 12주에 면역 반응을 부스팅하기 위해 사용된다. 부스팅 조성물은 프라이밍 조성물의 투여 후 몇 주에 또는 몇 달에, 예를 들어 약 1 또는 2주 또는 3주, 또는 4주, 또는 6주, 또는 8주, 또는 12주, 또는 16주, 또는 20주, 또는 24주, 또는 28주, 또는 32주 또는 프라이밍 조성물의 투여 후 1년 내지 2년에 일반적으로 투여된다.
본 발명의 바람직한 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터를 포함한다. 예시적인 일 실시형태에서, rAd26 또는 rAd35 벡터는 면역 반응을 프라이밍하기 위해 사용되고, MVA 벡터는 면역 반응을 부스팅하기 위해 사용되거나, 그 반대이다.
이 방법에 따른 더 바람직한 실시형태에서, rAd26 벡터는 프라이밍, 이어서 MVA 벡터에 의한 부스팅에 사용된다. 바람직하게는, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 1주 내지 12주에, 더 바람직하게는 프라이밍 후 1주, 2주, 4주 또는 8주에 투여된다. 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 8주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 1주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 2주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 4주에 투여된다.
이 방법에 따른 더 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 프라이밍, 이어서 rAd26 벡터에 의한 부스팅에 사용된다. 바람직하게는, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 1주 내지 12주에, 더 바람직하게는 프라이밍 후 1주, 2주, 4주 또는 8주에 투여된다. 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 8주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 1주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 2주에 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 부스팅 조성물은 프라이밍 후 4주에 투여된다.
본 발명은 또한 바람직하게는 비상동성 벡터의 조합에 의해 면역 반응을 프라이밍 및 부스팅함으로써 필로바이러스의 하나 초과의 아형에 대해 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양상에 따르면, 대상체에서 필로바이러스의 복수의 아형에 대해 면역 반응을 유도하는 방법은
a. 필로바이러스의 복수의 아형의 당단백질 또는 실질적으로 유사한 당단백질을 코딩하는 복수의 핵산을 포함하는 복수의 rAd26 또는 rAd35 벡터의 면역학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계; 및
b. 당단백질 또는 실질적으로 유사한 당단백질을 코딩하는 복수의 핵산을 포함하는 복수의 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
단계 (a) 및 (b)는 어느 한 순서로 수행된다.
기재된 방법의 하나 이상의 실시형태에서, 복수의 rAd26 또는 rAd35 벡터는 면역 반응을 프라이밍하기 위해 사용되고, 복수의 MVA 벡터는 면역 반응을 부스팅하기 위해 사용되거나, 그 반대이다.
본 명세서에서 방법에 따른 바람직한 실시형태에서, 복수의 rAd26 벡터는 프라이밍, 이어서 복수의 MVA 벡터에 의한 부스팅에 사용된다. 바람직하게는, 부스팅 접종은 프라이밍 후 1주 내지 12주에, 더 바람직하게는 프라이밍 후 1주, 2주, 4주 또는 8주에 투여된다.
각각의 프라이밍 및 부스팅 조성물(그러나, 많은 부스팅 조성물이 사용됨)에서의 항원은 동일할 필요는 없지만, 항원 결정부위를 공유하거나, 서로에 실질적으로 유사해야 한다.
벡터를 포함하는 면역원성 조성물의 투여는 통상적으로 근육내 또는 피하이다. 그러나, 다른 투여 방식, 예컨대 정맥내, 피부, 피내 또는 비강이 또한 고안될 수 있다. 면역원성 조성물의 근육내 투여는 아데노바이러스 벡터의 현탁액을 주사하기 위해 바늘침을 사용함으로써 달성될 수 있다. 대안은 조성물을 투여하기 위한 무침 주사 장치(예를 들어, 바이오젝터(Biojector)(등록상표) 사용) 또는 백신을 포함하는 동결 건조 분말의 사용이다.
고통의 부위에서의 정맥내, 피부 또는 피하 주사 또는 주사의 경우, 벡터는 발열원 비함유이고 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 가지는 비경구로 허용되는 수성 용액의 형태일 것이다. 당해 분야의 당업자는 예를 들어 등장성 비히클, 예컨대 염화나트륨 주사, 링거 주사, 락테이트화 링거 주사를 사용하여 적합한 용액을 제대로 제조할 수 있다. 보존제, 안정화제, 충전제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제는 필요한 바대로 포함될 수 있다. 서방 방출 제제가 또한 사용될 수 있다.
통상적으로, 투여는 감염 또는 징후의 진행 전에 필로바이러스 항원에 대해 면역 반응을 생성하기 위한 예방 목적을 가질 것이다. 본 발명에 따라 치료 또는 예방될 수 있는 질환 및 장애는 면역 반응이 보호 또는 치료 역할을 할 수 있는 것을 포함한다. 다른 실시형태에서, 아데노바이러스 및 MVA 벡터는 노출 후 예방에 투여될 수 있다.
아데노바이러스 벡터를 함유하는 면역원성 조성물은 대상체에게 투여되어서, 대상체에서 항-필로바이러스 면역 반응을 생성시킨다. 검출 가능한 면역 반응을 유도하기에 충분한 조성물의 양은 "면역학적으로 효과적인 용량"으로 정의된다. 하기 기재된 바대로, 본 발명의 면역원성 조성물은 체액 및 세포 매개 면역 반응을 유도한다. 통상적인 실시형태에서, 면역 반응은 보호 면역 반응이다.
투여될 실제 양, 및 투여의 속도 및 시간 과정은 치료되는 것의 성질 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 투약량 등의 결정과 같은 치료의 처방은 일반 실행자 및 다른 의학 의사 또는 수의학적 맥락에서 수의사의 책임 내에 있고, 통상적으로 치료되는 장애, 개별 환자의 상태, 전달의 부위, 투여의 방법 및 실행자에게 공지된 다른 인자를 고려한다. 상기 언급된 기법 및 프로토콜의 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed., 1980]에서 발견될 수 있다.
조성물로의 아데노바이러스 및 MVA 벡터 및 이러한 입자의 임의의 제제의 제조 후, 벡터는 개인, 특히 인간 또는 다른 영장류에게 투여될 수 있다. 투여는 인간, 또는 또 다른 포유류, 예를 들어 마우스, 랫트, 햄스터, 기니아 피그, 토끼, 양, 염소, 돼지, 말, 소, 당나귀, 원숭이, 개 또는 고양이에 대한 것일 수 있다. 비인간 포유류에 대한 전달은 치료학적 목적을 위할 필요는 없지만, 실험 맥락에서, 예를 들어 아데노바이러스 또는 MVA 벡터에 대한 면역 반응의 기전의 조사에서 사용을 위한 것일 수 있다.
예시적인 일 섭생에서, 아데노바이러스 벡터는 약 104 내지 1012개의 바이러스 입자/㎖의 농도를 함유하는 약 100㎕ 내지 약 10㎖의 범위의 용적으로 (예를 들어, 근육내) 투여된다. 바람직하게는, 아데노바이러스 벡터는 0.25 내지 1.0㎖의 범위의 용적으로 투여된다. 더 바람직하게는, 아데노바이러스 벡터는 0.5㎖의 용적으로 투여된다.
통상적으로, 아데노바이러스는 1회 투여 동안 인간 대상체에게 약 109 내지 약 1012 바이러스 입자(vp)의 양으로, 더 통상적으로 약 1010 내지 약 1012 vp의 양으로 투여된다. 바람직한 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터는 약 5x1010 vp의 양으로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 아데노바이러스는 벡터는 약 0.8x1010 vp의 양으로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터는 약 2x1010 vp의 양으로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 아데노바이러스 벡터는 약 4x1010 vp의 양으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 아데노바이러스는 3가 조성물로서 제제화되고, 각각 상이한 삽입체를 가지는 3개의 아데노바이러스는 함께 혼합된다. 3가 조성물에서, 각각의 명확한 아데노바이러스는 바람직하게는 약 4x1010 vp의 양으로 존재한다. 상기 3가 조성물에서, 용량당 아데노바이러스 입자의 전체 수는 약 1.2x1011 vp에 달한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 3가 조성물 내의 각각의 명확한 아데노바이러스는 약 1x1011 vp의 양으로 존재한다. 상기 3가 조성물에서, 용량당 아데노바이러스 입자의 전체 전체 수는 약 3x1011 vp에 달한다. 초기 백신접종에 이어서 상기한 바대로 부스트가 있다.
또 다른 예시적인 섭생에서, MVA 벡터는 약 1x107 TCID50 내지 1x109 TCID50(50% 조직 배양 감염 용량) 또는 Inf.U.(감염 단위)의 용량을 함유하는 식염수 용액의 약 100㎕ 내지 약 10㎖의 범위의 용적으로 (예를 들어, 근육내) 투여된다. 바람직하게는, MVA 벡터는 0.25 내지 1.0㎖의 범위의 용적으로 투여된다. 더 바람직하게는, MVA 벡터는 0.5㎖의 용적으로 투여된다.
통상적으로, MVA 벡터는 1회 투여 동안 인간 대상체에게 약 1x107 TCID50 내지 1x109 TCID50(또는 Inf.U.)의 용량으로 투여된다. 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 5x107 TCID50 내지 5x108 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다. 더 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 5x107 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다. 더 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 1x108 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 1.9x108 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다. 훨씬 또 다른 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 4.4x108 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다. 더 바람직한 실시형태에서, MVA 벡터는 약 5x108 TCID50(또는 Inf.U.)의 양으로 투여된다.
조성물은, 원하는 경우, 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 제형을 함유할 수 있는 키트, 팩 또는 분배기로 제시될 수 있다. 키트는 예를 들어 금속 또는 플라스틱 호일, 예컨대 블리스터 팩을 포함할 수 있다. 키트, 팩 또는 분배기는 투여 설명서가 동반될 수 있다.
본 발명의 조성물은 치료하고자 하는 병태에 따라 동시에 또는 순차적으로 단독으로 또는 다른 치료와 조합되어 투여될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 청구된 발명을 예시하지만, 제한하지 않는 것으로 제공된다.
실시예 1
동물 연구는 연속 진전 개발을 위해 복수의[예를 들어, 마르부르크, 에볼라(자이르로 알려짐) 및 수단] 필로바이러스에 대해 80% 이상의 실제 효율을 가지는 다가 필로바이러스 백신을 확인하는 것의 목표로 수행되었다. 연구는 2개 또는 3개의 백신접종을 이용한 연장된 백신접종 스케줄 및 표적 필로바이러스에 대한 후속하는 NHP 면역 반응에 대한 (상동성과 반대인) 비상동성 백신 복합제의 사용의 영향을 시험하였다. 백신접종된 NHP를 에볼라 바이러스 키크위트에 의해 시험감염하여 적용된 백신접종의 효율을 시험하였다.
동물 조작
이 연구는 동물 복지 조항 규정의 최종 규칙(Final Rules of the Animal Welfare Act regulations)(9 CFR 파트 1, 2, 및 3) 및 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) - 국립 아카데미 프레스(National Academy Press)(워싱턴 디.씨. 8판(가이드)의 모든 허용 가능한 섹션을 준수한다.
각각 모리셔스 기원, 사이노몰거스 마커크, 4-5연령, 대략 4-8㎏인 전체 16마리의 사이노몰거스 마커크(Macaca fascicularis)(NHP)(12마라의 수컷 및 4마라의 암컷)를 프라임젠(PrimGen)(일리노이주 하인스)으로부터 구입하였다. 동물은 백신접종 전에 ELISA에 의해 레스톤 바이러스(RESTV)에 실험적으로 미경험이었다. 유인원 면역결핍 바이러스(Simian Immunodeficiency Virus; SIV), 유인원 T 림프친화성 바이러스-1(Simian T-Lymphotropic Virus-1; STLV-1), 마카신 헤르페스바이러스 1(헤르페스 B 바이러스) 및 유인원 레트로바이러스(SRV1 및 SRV2)인 마이코박테륨 튜베르쿨로시스에 의한 이전의 노출을 갖는 동물이 배제되었고, 살모넬라(Salmonella) 및 쉬겔라(Shigella)에 의한 활성 감염을 시험하고, 마이코박테륨 튜베르쿨로시스에 대한 음성을 확인하였다.
필로바이러스는 위험 그룹 4(높은 컨테인먼트) 병원균이고; 따라서 자이르 에볼라바이러스, 수단 에볼라바이러 또는 마르부르크바이러스를 포함하는 모든 조작을 CDC 승인 생체안전성 수준(BSL)-4/동물 생체안전성 수준(ABSL-4) 컨테인먼트 설비에서 수행하였다.
백신 재료
rAd 벡터는 Crucell Holland B.V.(크루셀 홀랜드 비.브이.)에 의해 제조되었다. 이들은 E1 위치에서 삽입된 필로바이러스 당단백질(GP) 유전자를 함유하는 정제된 E1/E3 결실 복제 결핍 재조합 아데노바이러스 타입 26 또는 타입 35 백신 벡터(각각 Ad26 및 Ad35)이었다. 이들 벡터는 PER.C6(등록상표) 세포에서 구제되고, 플라크 정제되고, 규모확대되고, 이후 2단계 CsCl 밴딩 절차에 의해 정제되고, 후속하여 TRIS 기반 제제 충전제 중에 제제화되고, -65℃ 미만에서 저장되었다. 이 벡터의 생체내 사용을 위한 방출은 생물부담 시험, 낮은 내독소 수준(<5EU/㎖) 및 전이유전자의 발현 및 통합의 확인을 포함한다.
특히, rAd 벡터는 EBOV 마인가 GP(서열 번호 1), SUDV 굴루 GP(서열 번호2) 및 MARV 앙골라 GP(서열 번호3)를 발현하였다. 각각의 rAd 벡터는 하나의 단일 항원 단백질(GP)을 발현하였다.
MVA 벡터는 바바리안 노르딕에 의해 제조되었다. 특히, MVA-멀티 벡터(MVA-BN-필로)는 4개의 상이한 항원 단백질: EBOV 마인가 GP(서열 번호 1); SUDV 굴루 GP(서열 번호2); MARV Musoke GP(서열 번호4); 및 타이 포레스트 바이러스(TAFV) NP(서열 번호5)를 발현하였다.
백신 재료를 제어 온도 동결기에서 -80℃에서 저장하였다.
백신접종 및 실험 설계
연구 그룹화 및 실험 설계를 위해 도 1 및 도 2를 참조한다.
사이노몰거스 마커크(Macaca fascicularis)(NHP)를 2개의 나이브(빈 벡터) 시험감염 대조군으로 이루어진 대조군 이외에 그룹마다 2마리의 동물인 2개의 상이한 백신 플랫폼을 사용하여 백신접종하였다. 동물을 도 1에 도시된 그룹에서 재조합 벡터(들)에 의해 처음에 백신접종하였다. 각각의 마커크는 마취되고, 왼쪽 뒤 넓적다리로 백신의 근육내(IM) 주사를 받았다. 프라이밍 및 부스팅 용량은 4주 또는 8주 간격으로 받았다(도 1). 아데노바이러스의 각각의 용량은 왼쪽 뒤 넓적다리로의 단일 IM 주사로 이루어진다. MVA 벡터를 피하로 투여하였다.
EDTA 또는 헤파린 전혈을 D28, D56 및 D63에서 텍사스 바이오메드사(Texas Biomed)로 실온에서 밤새 선적하였다. 추가적으로, 헤파린 또는 EDTA 전혈은 D77에 수집된 반면, 동물을 텍사스 바이오메드사에서 감금하였다. 모든 이 시점에서, EDTA 전혈은 텍사스 바이오메드사에서 PBMC 및 혈장에 대해 처리될 것이다.
PBMC를 오직 DMSO의 음성 대조군 및 항-CD3 자극 양성 대조군과 함께 에볼라 자이르 펩타이드 풀 1 및 2, 수단 굴루 펩타이드 풀 1 및 2, 에볼라바이러스 공통 펩타이드 풀, 마르부르크 앙골라 펩타이드 풀 1 및 2 및 마르부르크바이러스 공통 펩타이드 풀을 사용하여 IFN-g ELI스팟 검정에서 사용하였다. 모든 자극을 NHP마다 전체 20개의 웰에 대해 2회 수행하였다.
추가적으로, 항응고제 없는 전혈을 D0, D28, D56 및 D68에 바이오컬사(Bioqual)에서, 및 D77에 텍사스 바이오메드사에서 혈청에 대해 처리하였다. 바이오컬에서 수집된 혈청의 분취량을 D68에서 텍사스 바이오메드사로 냉동 전송하였다. 각각의 혈청을 ZEBOV GP 특이적 ELISA에서 평가하였다. 추가적으로, D0, D56 및 D77로부터의 혈청을 SEBOV GP 및 MARVA GP 특이적 ELISA(2개의 상이한 검정)에서 평가하였다.
Figure pct00002
동물 시험감염을 위한 필로바이러스 접종원
도 2에 도시된 바대로, 부스팅 백신접종 후 약 4주에, 동물을 EBOV에 의해 시험감염하였다. 특히, EBOV 키크위트-9510621은 동물 시험감염에 사용되고, 텍사스 바이오메드사에 의해 공급되었다. EBOV 키크위트- 9510621의 제2 세포 배양 계대배양(P2)은 2012년에 톰 크시아젝(Tom Ksiazek) 박사(UTMB 건강 갤버스턴 국립 실험실(Health Galveston National Laboratory)에서 NIAID WRCEVA에서)로부터 얻어지고, Vero E6 세포에서 제3 시간 동안 텍사스 바이오메드사에서 증식되고, 2.1x105 PFU/㎖의 역가를 가졌다. EBOV 키크위트-9510621. 롯트 2012099171호.
수확 시 역가: 2.1x105 PFU/㎖를 연구에 사용하였다.
시험감염 스톡은 유전자은행 P2 공통 서열로부터 오직 1개의 SNP 차이를 가지는 딥 시퀀싱에 의해 야생형 EBOV 키크위트 9510621인 것으로 확인되었다. 시험감염 스톡을 10% FBS를 함유하는 배지(MEM)를 함유하는 500±50㎕의 액적으로서 액체 질소 기상에서 저장하였다. 100 PFU 시험감염을 위해, 필로바이러스 시험감염 물질을 인산염 완충 식염수 중에 200PFU/㎖의 목표 용량으로 희석하였다. 간단히 말하면, 스톡 바이러스를 PBS 중에 3개의 연속 1:10 희석을 통해 희석하여 200 PFU/㎖ 시험감염 재료 농도를 달성하였다. 전체 0.5㎖의 시험감염 재료를 각각의 동물에게 주었다.
바이러스 주사 전에, 원숭이를 텔라졸(Telazol)(2 내지 6㎎/㎏; 보충 마취를 위해 5 내지 8㎎/㎏ 케타민 IM)에 의해 근육내 주사를 통해 진정시켰다. 연구 0일에, 혈액을 수집하고, 각각의 원숭이를 팔의 오른쪽 삼각근에서 근육내 주사를 통해 0.5㎖ 용적으로 EBOV의 100 PFU의 표적 용량에 의해 후속하여 시험감염하였다. 시험감염 부위를 기록하였다.
바이러스 투여 후, 각각의 원숭이를 이들의 우리로 돌려보내고, 마취로부터 회복될 때까지(가슴뼈 횡와위/서있는 자세를 유지시키는 능력) 관찰하였다. 이 연구에서의 종점은 생존/비생존이었다. 비생존은 최종 질병을 가지거나 빈사인 동물로 정의된다. 매일 임상 관찰 점수 시트에서 동물의 건강은 평가하였다.
항-EBOV GP IgG ELISA
문헌[Sulivan et al.(2006)(Immune protection of nonhuman primates against Ebola virus with single low-dose adenovirus vectors encoding modified GPs. PLoS Medicine 3, e177)(본 명세서에 그 전문이 참조로 포함됨)]에 이전에 기재된 바대로 변형된 효소 연결 면역수착 검정(ELISA)에 의해 표 1에 기재된 시점에서 필로바이러스 특이적 체액 반응을 결정하였다. 간단히 말하면, ELISA 플레이트를 10㎍/㎖에서 갈란투스 니발리스렉틴에 의해 밤새 코팅하였다. 이후, 차단 후, 플레이트를 에볼라 또는 마르부르크 균주 특이적 GP 상청액에 의해 코팅하였다. 막관통 도메인 및 세포질 꼬리가 결여된 필로바이러스 당단백질을 코딩하는 발현 플라스미드를 가지는 Hek293T의 일시적 형질감염에 의해 이 상청액을 제조하였다. 원숭이 혈청 샘플을 1:50에서 시작하여 4배 희석 시리즈에서 시험하였다. 492㎚에서 비색법에 의해 결합 IgG를 검출하였다. 필로바이러스 당단백질 균주 특이적 기준 혈청에 대해 상대 혈청 역가를 계산하였다. Elisa 검정의 결과가 도 4 내지 도 6에 도시되어 있다.
IFN-g ELI스팟 검정
문헌[Ophorst et al. 2007(Increased immunogenicity of recombinant Ad35-based malaria vaccine through formulation with aluminium phosphate adjuvant. Vaccine 25, 6501-6510)(본 명세서에 그 전문이 참조로 포함됨)]에 이전에 기재된 바대로 인터페론 감마 효소 연결 면역스팟 검정(ELI스팟)에 의해 표 1에 기재된 시점에서 필로바이러스 특이적 세포 면역 반응을 결정하였다. 각각의 에볼라 및 마르부르크 균주 당단백질에 대한 자극에 사용된 펩타이드 풀은 11개의 아미노산만큼의 15합체 중첩으로 이루어진다. 풀에서 너무 많은 수의 펩타이드의 원치않는 효과를 최소화하기 위해, 각각의 당단백질 펩타이드 풀을 1개의 N 말단 및 1개의 C 말단인 2개로 분할하였다.
3개의 에볼라바이러스(자이르, 수단 및 타이 포레스트) 또는 2개의 마르부르크 바이러스(마르부르크 및 라븐 바이러스) 내의 9개 초과의 연속 아미노산과 중첩하는 펩타이드를 공통 풀에서 합했다. 펩타이드 풀 및 단일 펩타이드를 각각의 단일 펩타이드에 대해 1㎍/㎖의 최종 농도로 사용하였다. ELI스팟 검정의 결과가 도 7에 도시되어 있다.
도 3 내지 도 7에 요약된 결과로 도시된 바대로, 본 명세서에 동물 연구는 영장류에서 필로바이러스 감염을 예방하기 위한 프라임-부스트 조합에서의 rAd 및 MVA 벡터의 유용성을 입증하였다. 특히, 하나 이상의 유형의 필로바이러스의 GP(들)를 발현하는 하나 이상의 rAd26 벡터 또는 다수의 필로바이러스 항원을 발현하는 MVA 벡터의 투여는 하나 이상의 유형의 필로바이러스에 대한 체액 반응의 효과적인 프라이밍을 발생시켰다. 비상동성 벡터에 의한 8주에 부스트 면역화 후, 모든 백신 섭생은 하나 이상의 유형의 필로바이러스에 대해 유사한 체액 및 세포 면역 반응을 유도하고, 매우 병원성인 에볼라 자이르 시험감염에 대해 100% 보호를 제공하였다.
실시예 2
제2 NHP 연구를 수행하여 0-4주 및 0-8주 간격에서 2의 프라임-부스트 섭생의 면역원성 및 보호 효율을 확인하였다. 하나는 프라임으로서 1가 Ad26.ZEBOV 백신 및 부스트로서 MVA-BN-필로를 포함하고; 다른 하나는 프라임으로서 MVA-BN-필로 및 부스트로서 Ad26.ZEBOV를 포함하였다. 모든 면역화는 근육내이었다. Ad26.ZEBOV(5x1010 vp)를 0-8주 섭생 동안 프라임으로서 사용하고, 이 섭생에서 MVA의 표준 및 높은 용량의 영향을 평가하기 위해 1x108 TCID50의 MVA-BN-필로(4개의 NHP) 및 5x108 TCID50의 MVA-BN-필로(4개의 NHP)의 부스트와 조합하였다. 4개의 NHP의 2개의 추가적인 그룹을 각각 1x108 TCID50의 MVA-BN-필로 및 5x108 TCID50의 MVA-BN-필로에 의해 프라이밍하고; 경우 둘 다에서 4주 후 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp)에 의한 부스트가 후행하여서, 4주 섭생에서 프라임으로서 MVA-BN-필로 용량의 영향을 시험하였다. 또한, 2개의 NHP를 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp), 이어서 1x108 TCID50의 MVA-BN-필로에 의해 프라이밍하였다. 마지막으로, 2개의 NHP를 연구를 위한 음성 면역화 대조군으로서 TBS 및 빈 Ad26 벡터(임의의 필로바이러스 항원을 발현하지 않는 것, 5x1010 vp IM)에 의해 면역화하였다. 모든 동물을 100 pfu의 EBOV 키크위트 1995 야생형 P3 시험감염 바이러스에 의한 마지막 면역화 후 4주에 시험감염하였다. 이 연구의 그룹화가 표 2에 요약되어 있다.
Figure pct00003
면역원성
NHP에서의 면역 반응은 필로바이러스 GP 결합 및 중화 항체(ELISA), 및 사이토카인 생성 T 세포(ELI스팟)와 관련하여 규명된다.
ELISA:
EBOV 마인가 GP 반응성 항체를 모든 시점을 위해 GP 특이적 ELISA에 의해 분석하였다(도 20 참조).
항-EBOV GP IgG ELISA를 실험 1에 기재된 바대로 수행하였다. ELISA 역가는 대조군 백신접종된 동물에서 관찰되지 않았다. 백신 섭생은 모든 동물에서 면역원성이었다. 가장 높은 역가는 8주 간격으로 Ad26.ZEBOV 및 높은 용량의 MVA-BN-필로를 받는 그룹 B에서 관찰되었다.
보호 효율
8주 Ad26.ZEBOV/MVA-BN-필로 프라임/부스트 섭생 둘 다는 MVA-BN-필로의 용량(1x108 TCID50 또는 5x108 TCID50)과 무관하게 EBOV 시험감염 후 완전한 생존을 발생시켰다. 추가적으로, Ad26.ZEBOV/MVA-BN-필로의 4주 섭생은 2개의 NHP 중 2개에서 보호를 주었다. 4주 MVA-BN-필로/Ad26.ZEBOV 섭생 둘 다는 4개의 NHP 중 2개에서 보호를 주었다.
실시예 3
1x108 TCID50의 용량의 MVA-BN-필로 및 5x1010 vp의 용량의 Ad26.ZEBOV를 사용하여 섭생의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하기 위해 인간에서 임상 연구를 수행하였다. 연구는 2개의 파트로 이루어졌다.
주요 연구는 전에 실험적 에볼라 후보 백신을 받지 않았고 에볼라 바이러스에 대한 공지된 노출 또는 에볼라 질환의 진단을 받지 않는 72명의 건강한 성인 대상체에서 수행된 무작위, 위약 제어, 관찰자 맹검 연구였다. 이 연구에서 4개의 섭생을 시험하였다: 2개의 섭생은 28일 또는 56일 간격으로 프라임으로서 MVA-BN-필로 및 부스트로서 Ad26.ZEBOV를 가지고, 2개의 섭생은 28일 또는 56일 간격으로 프라임으로서 Ad26.ZEBOV 및 부스트로서 MVA-BN-필로를 가졌다.
하위연구는 프라임으로서 5x1010 vp의 용량의 Ad26.ZEBOV, 및 14일 후 부스트로서 1x108 TCID50의 용량의 MVA-BN-필로를 가지는 섭생의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하는 오픈 라벨, 비제어 비무작위화 치료 암으로 이루어지고, 15명의 건강한 성인 대상체에서 수행되었다.
연구는 모든 대상체가 이들의 21일 부스트 후 방문(36일, 50일 또는 78일)을 가지거나 조기에 중단할 때까지 대상체가 기준(1일)에서 백신접종, 이어서 15일, 29일 또는 57일에 부스트 및 부스트 후 추적관찰에 있는 백신접종 기간으로 이루어진다.
주요 연구에서의 대상체는 각각 18명의 건강한 대상체의 4개의 상이한 그룹에 등록하였다. 전체적으로, 대상체를 하기와 같이 IM 주사(0.5㎖)를 통해 활성 백신 또는 위약(0.9% 식염수)을 받도록 5:1 비율로 그룹 내에 무작위화하였다:
Figure pct00004
1일에 MVA-BN-필로(1x108 TCID50), 이어서 29일(그룹 1) 또는 57일(그룹 2)에 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp)의 부스터, 또는
Figure pct00005
1일에 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp), 이어서 29일(그룹 3) 또는 57일(그룹 4)에 MVA-BN-필로(1x108 TCID50)의 부스터.
하위연구에서의 15명의 대상체는 하기와 같이 IM 주사(0.5㎖)를 통해 활성 백신을 받았다:
Figure pct00006
1일에 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp), 이어서 15일에 MVA-BN-필로(1x108 TCID50)의 부스터(그룹 5).
예시적인 연구 백신접종 스케줄은 표 3에 요약되어 있다.
Figure pct00007
요청된 국소 및 전신 부작용, 비요청된 부작용 및 심각한 부작용의 수집, 및 신체 검사에 의해 안전성을 평가하였다. 또한, 다수의 시점에서 표준 화학, 혈액학적(응고 매개변수 포함) 및 요검사 매개변수를 평가하였다.
표 4 및 표 5에 요약된 면역학적 검정을 이용하여 면역원성을 평가하였다. 탐구 검정 패키지는 기재된 검정을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다.
Figure pct00008
Figure pct00009
임상 연구가 진행중이다. 초기 결과의 일부가 하기 기재되어 있다.
안전성 평가
요청된 국소 및 전신 부작용, 비요청된 부작용 및 심각한 부작용의 수집, 및 신체 검사에 의해 안전성을 평가하였다. 또한, 다수의 시점에서 표준 화학, 혈액학적(응고 매개변수 포함) 및 요검사 매개변수를 평가하였다.
인간에서 처음인 이것으로부터의 안전성 데이터는 백신 둘 다가 백신접종으로부터 보통 예상된 일시적 반응에 의해 이 단계에서 매우 내약성인 것으로 보인다는 것을 나타냈다. 상당한 부작용이 백신 섭생과 연관되지 않았다. 대부분의 부작용이 경증이고, 백신접종 후 1일 내지 2일에 발생하고, 평균 1일 내지 2일 지속하였다. 열의 매우 적은 사례가 관찰되었다.
면역 반응의 평가
EBOV GP에 결합하는 항체를 분석하기 위한 ELISA 검정, EBOV GP 특이적 T 세포 반응을 분석하기 위한 ELI스팟 검정, 및 EBOV GP에 대한 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 검출하기 위한 ICS 검정을 사용하여 21일 부스트 후 면역화까지 면역원성을 평가하였다. 연구 백신에 의해 유도된 체액 및 세포 면역 반응의 분석을 위한 샘플을 그룹 1 및 3에서 1일, 8일, 29일, 36일 및 50일 수집하고, 그룹 2 및 4에서 1일, 8일, 29일, 57일, 64일 및 78일에 수집하였다.
체액 면역 반응의 평가
연구 백신에 의해 유도된 결합 항체 반응을 항-EBOV GP ELISA 검정에 의해 평가하였다(도 8). 중요하게는, 백신 섭생을 받은 모든 대상체는 21일 부스트 후 면역화에서 혈청변환을 나타냈다. 튼튼한 면역원성 반응이 모든 면역화된 대상체에서 관찰되었다.
MVA-BN-필로에 의한 프라임 후 EBOV GP 특이적 면역 반응이 대상체의 7% 내지 40%에서 오직 낮은 수준으로 관찰되지만, 강한 항원 특이적 반응은 프라임 후 28일 또는 56일에 투여된 Ad26.ZEBOV에 의해 부스트 후 관찰되었다. 놀랍게도, 이 반응은 부스트 후 면역화 21일에 동일한 프라임-부스트 시간 간격의 리버스 백신 섭생에 의해 유도된 반응보다 높은 규모를 가졌다(그룹 3 및 그룹 4, Ad26.ZEBOV 프라임, 이어서 각각 28일 또는 56일 후에 MVA-BN-필로 부스트)[각각 그룹 1 및 3에 대해 EU/㎖ 10573(6452; 17327) 및 4274(2350; 7775), 및 각각 그룹 2 및 4에 대해 18729(12200; 28751) 및 7553(511; 1115)의 95% 신뢰 간격으로 기하 평균 역가].
비인간 영장류(NHP)에서, Ad26에 의한 MVA 프라임을 부스팅하는 것은 동일한 프라임-부스트 시간 간격의 리버스 백신 섭생(Ad/MVA)에 의해 유도된 것과 필적하는 규모이거나(도 4 참조), 더 열악한 규모인(도 20), EBOV GP 특이적 면역 반응을 발생시킨다는 것에 주목해야 한다. 따라서, NHP에서 하나의 특이적 프라임-부스트 섭생에 대해 관찰된 면역 반응은 인간에서 동일한 프라임-부스트 섭생 후 관찰된 면역 반응에 예측적이 아니었다.
세포 면역 반응의 평가
EBOV GP 특이적 세포 면역 반응을 인터페론 감마(IFN-γ) ELI스팟 및 ICS에 의해 측정하였다. 세포 면역 반응을 평가하기 위해, 저장된 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)를 해동하고 2 풀(풀 1 및 2)에서 조직화된 펩타이드에 의해 자극하였다. 풀당 자극된 T 세포 반응의 합이 도 9에 도시되어 있다.
ELI스팟 분석(도 9)에 의해, IFN-γ 반응은 Ad26.ZEBOV에 의한 프라임 면역화 후 29일에 대상체의 50 내지 60%(각각 그룹 3 및 4에 대해 100만개의 PBMC당 평균 IFN-γ 반응 103 및 58 스팟 형성 단위)에서 및 Ad26.ZEBOV 프라임 면역화 후 57일에 대상체의 86%(그룹 4, 100만개(SFU/106)의 PBMC당 평균 IFN-γ 반응 283 스팟 형성 단위)에서 용이하게 관찰될 수 있었다. 이 반응은 MVA-BN-필로(87% 반응자, 그룹 3에 대한 평균 IFN-γ 반응 463 SFU/106 PBMC, 86% 반응자, 그룹 4에 대한 648 SFU/106 PBMC)에 의해 29일 또는 57일에 면역화에 의해 추가로 부스팅하고 부스트 후 21일까지 그 수준에서 유지시켰다(79% 반응자, 그룹 3에 대해 평균 IFN-γ 반응 390 SFU/106 PBMC 및 100% 반응자, 그룹 4에 대해 464 SFU/106 PBMC).
ICS에 의한 특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응을 측정하는 세포 검정의 결과가 도 10 내지 도 15에 도시되어 있다.
예상된 바대로, EBOV GP 특이적 CD8+ 또는 CD4+ T 세포 반응이 위약 면역화된 개체에서 관찰되지 않았다(도 10 및 도 13). CD8+ 사이토카인 반응이 MVA-BN-필로에 의한 프라임 면역화 후 29일 또는 57일에 관찰되지 않았다(그룹 1 및 2). 그러나, 백신 유도된 CD8+ T 세포 반응은 Ad26.ZEBOV에 의한 부스트 후 7일에 대상체 중 53%에서 관찰되었다(평균 전체 사이토카인 반응: 0.08% 및 0.07%, Ad26 부스트 면역화가 각각 29일 또는 57일에 투여될 때; 도 10). 이 반응은 부스트 후 21일에 면역화를 유지시켰다(평균 전체 사이토카인 반응: 0.1% 및 0.06%, Ad26 부스트 면역화가 각각 29일 또는 57일에 투여될 때; 도 10). 비교하면, Ad26.ZEBOV에 의한 프라임 면역화를 받은 대상체(그룹 3 및 그룹 4) 중 57%는 29일에 CD8+ T 세포 반응(평균 전체 사이토카인 반응: 각각 0.12 및 0.05%)을 나타냈고, Ad26.ZEBOV 프라임 면역화 후 57일에 대상체(그룹 4)의 86%는 CD8+ T 세포 반응(평균 전체 사이토카인 반응: 0.19%)을 나타냈다. 이 반응은 29일 MVA-BN-필로에 의한 부스트 면역화 후 추가로 증대되었고, 대상체 중 67% 및 73%는 각각 부스트 후 7일 및 21일에 반응하였다(평균 반응: 양일에 0.27%).
놀랍게도, 그룹 3(Ad26-MVA 프라임-부스트 0-28일 스케줄)과 비교하여 더 적은 백분율의 반응자가 그룹 1(MVA-Ad26 프라임-부스트 0-28일 스케줄)에서 관찰되지만, 이들 반응자자들에서 MVA-Ad26 프라임-부스트 섭생에 의해 유도된 다작용성 CD8+ T 세포(하나 초과의 사이토카인을 발현하는 CD8+ T 세포)의 비율은 Ad26-MVA 프라임-부스트 섭생에 의해 유도된 것보다 부스트 후 더 높았다(도 11). 이 차이는 프라임 및 부스트가 57일에 투여될 때 관찰되지 않았다. 이 스케줄을 이용하여, MVA 프라임 Ad26 부스트(그룹 2) 및 Ad26 프라임 MVA 부스트(그룹 4) 섭생 둘 다는 유사하게 높은 비율의 다작용성 CD8+ T 세포를 유도하였다(도 12).
놀랍게도, 28일 간격으로 제공된 MVA-BN-필로에 의한 프라임 면역화, 이어서 Ad26.ZEBOV에 의한 부스트(그룹 1)는 부스트 후 면역화 7일에 피크인 매우 튼튼한 CD4+ T 세포 반응(93% 반응자, 평균 전체 사이토카인 반응 0.37%; 도 13)을 유도하였다. 피크에서, 이 CD4+ T 세포 반응은 28일 간격의 Ad26.ZEBOV에 의한 프라임 면역화, 이어서 MVA-BN-필로 부스트 후 그룹 3에서 관찰된 것보다 더 높은 규모이었다(67% 반응자, 평균 전체 사이토카인 반응 0.11%). 부스트 후 21일에, 섭생 둘 다에 의해 유도된 CD4+ T 세포 반응은 필적하였다. MVA-BN-필로/Ad26.ZEBOV 섭생의 간격의 56일로의 연장은 더 낮은 CD4+ T 세포 반응을 발생시켰다. Ad26.ZEBOV/MVA-BN-필로 섭생은 28일 간격으로 약간 더 낮은 CD4+ T 세포 반응 및 56일 간격으로 필적하는 반응을 유도하였다. 백신 복합제 둘 다에 의해 유도된 CD4+ T 세포는 주로 다작용성이었다(도 14 및 도 15).
5x1010 vp의 Ad26.ZEBOV에 의한 프라임, 이어서 1x108 TCID50의 MVA-BN-필로를 사용한 14일 후에 부스트의 면역원성을 평가하는 하위연구의 결과가 하기 요약되어 있다.
전체적으로, 프라임과 부스트 사이의 14일 간격을 사용한 이 상대적으로 짧은 섭생은 면역원성인 것으로 밝혀졌다. 백신접종에 대한 체액 면역 반응은 ELISA에 의해 평가되었다. 더 긴 간격 동안 관찰되면서, 모든 대상체는 21일 부스트 후 면역화에 의해 혈청변환되었다(도 16A). 더욱이, 세포 면역 반응은 부스트 후 면역화 21일에 대상체의 92%에서 ELI스팟에 의해 관찰되었다(도 16B). 이 세포 면역 반응은 CD4+(67% 반응자, 부스트 후 21일에 평균 반응 0.08%) 및 CD8+(64% 반응자, 부스트 후 7일에 평균 반응 0.15%) 특이적 T 세포 둘 다로 이루어졌다. 2주 간격을 사용하여 유도된 면역 반응은 프라임와 부스트 사이의 더 긴 간격을 사용할 때 유도된 반응보다 다소 더 낮게 보였다(이전의 섹션 참조).
실시예 4
무작위화, 위약 제어, 관찰자 맹검 연구(전체 6명의 센티넬 연구 대상체의 초기 오픈 라벨 백신접종이 선행)는 (a) 상이한 시점(프라임 후 14일, 28일 또는 56일; 그룹 1 내지 3) 프라임으로서 MVA-BN-필로(1x108 TCID50) 또는 위약(0.9% 식염수)의 단일 용량, 이어서 부스트로서 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp) 또는 위약의 단일 용량의 및 (b) 프라임 후 28일에 프라임으로서 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp) 또는 위약의 단일 용량, 이어서 부스트로서 MVA-BN-필로(1x108 TCID50) 또는 위약의 단일 용량(그룹 4)의 비상동성 섭생의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하도록 수행되었다.
독립적으로 2개 백신의 안전성을 평가하기 위해, 그룹 5 및 6이 포함되었고, 여기서 MVA-BN-필로(1x108 TCID50)의 2개의 단일 용량 또는 위약, 또는 Ad26.ZEBOV(5x1010 vp)의 2개의 단일 용량 또는 위약의 상동성 섭생이 1일 내지 15일의 더 짧은 프라임-부스트 스케줄에 의해 투여된다. 이 연구는 전에 실험적 에볼라 후보 백신을 받지 않았고 에볼라 질환에 대한 공지된 노출 또는 이의 진단을 받지 않는 18세 내지 50세(포함)의 대략 92명의 건강한 대상체의 목표로 수행되었다.
연구는 모든 대상체가 이들의 21일 부스트 후 방문을 가지거나 조기에 중단할 때까지 대상체가 기준 방문(1일)에서 백신접종, 이어서 15일, 29일 또는 57일에 부스트 및 부스트 후 추적관찰에 있는 백신접종 기간으로 이루어진다. 이때, 연구는 맹검일 것이다.
대상체는 각각 18명(그룹 1 내지 4) 또는 10명(그룹 5 및 6)의 건강한 대상체를 포함하는 6개의 상이한 그룹에 등록하였다. 그룹 1 내지 4 내에, 대상체를 연구에 걸쳐 활성 백신 또는 위약을 받는 5:1 비율로 무작위화하였다. 그룹 5 및 6은 각각 오픈 라벨 방식으로 활성 백신을 받는 3명의 대상체의 센티넬 코호트(Sentinel Cohort), 이어서 백신 또는 위약을 받는 6:1 비율로 무작위화된 7명의 대상체의 맹검 코호트로 시작하였다. 상이한 그룹에서의 연구 백신접종 스케줄이 표 6에 요약되어 있다.
요청된 국소 및 전신 부작용, 비요청된 부작용 및 심각한 부작용의 수집, 및 신체 검사에 의해 안전성을 평가하였다. 또한, 다수의 시점에서 표준 화학, 혈액학적(응고 매개변수 포함) 및 요검사 매개변수를 평가하였다.
표 7 및 표 8에 요약된 면역학적 검정을 이용하여 면역원성을 평가하였다. 탐구 검정 패키지는 기재된 검정을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
임상 연구가 진행중이다. 초기 결과의 일부가 하기 기재되어 있다.
체액 면역 반응의 평가
초기 결과는 백신 중 어느 하나가 프라임로서 사용되고, 다른 백신이 부스트로서 사용될 때 5x1010 vp의 Ad26.ZEBOV와 1x108 TCID50의 MVA-BN-필로의 조합의 면역원성을 확인시켜준다.
도 17에 도시된 바대로, 모든 대상체는 ELISA에 의해 평가될 때 부스트 면역화 후 21일에 혈청변환되었다. 이전의 실험과 유사하게, MVA가 프라임으로서 사용되고 Ad26이 28일 후 부스트로서 투여될 때 백신 면역화의 역순(그룹 4, EU/㎖ 2976의 기하 평균 농도)과 비교하여 부스트 면역화 후 21일에 더 높은 면역 반응(그룹 2, EU/㎖ 6987의 기하 평균 농도)이 관찰되었다.
체액 면역 반응의 강도는 프라임과 부스트 사이의 간격과 상관되고, 더 짧은 스케줄(그룹 1, 14일 간격, EU/㎖ 4418의 기하 평균 농도 및 그룹 2, 28일 간격, EU/㎖ 6987의 기하 평균 농도)과 비교하여 MVA 프라임과 Ad26 부스트 사이에 56일 간격을 사용할 때(그룹 3, EU/㎖ 14048의 기하 평균 농도) 더 높은 항체 농도가 관찰되었다.
놀랍게도, MVA-BN-필로를 프라임으로서 사용하고 14일 후 Ad26.ZEBOV에 의한 부스트 면역화가 후행할 때 ELISA에 의해 평가된 탄탄한 체액 면역 반응이 관찰되었다. 백신 섭생을 받은 모든 대상체는 부스트 면역화 후 21일에 혈청변환되었고, 이 시점에서의 항체 농도는 28일 간격으로 Ad26 프라임 MVA 부스트 조합을 사용할 때보다 유사하거나 더 높은 수준에 도달하였다(각각 EU/㎖ 4418 및 2976의 기하 평균 역가). 놀랍게도, 14일 간격의 이 MVA/Ad26 프라임 부스트 조합에 의해 유도된 항체 농도는 동일한 프라임-부스트 시간 간격의 리버스 백신 섭생에 의해 유도된 반응보다 두드러지게 더 높았다(실시예 2, 도 16A 참조, EU/㎖ 915의 기하 평균 농도). 이것은 MVA 프라임 Ad26 부스트 조합에 의한 튼튼한 면역 반응의 유도 및 짧은 프라임 부스트 간격(14일)을 사용할 때의 이러한 조합의 이익을 확인시켜준다.
세포 면역 반응의 평가
EBOV GP 특이적 세포 면역 반응은 인터페론 감마(IFN-γ) ELI스팟 및 ICS에 의해 측정되었다. 세포 면역 반응을 평가하기 위해, 저장된 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)를 해동하고 2 풀(풀 1 및 2)에서 조직화된 펩타이드에 의해 자극하였다. 풀당 자극된 T 세포 반응의 합이 도 18 및 도 19에 도시되어 있다.
ELI스팟 분석(도 18)은 Ad26.ZEBOV 프라임 둘 다, 이어서 MVA-BN-필로 부스트 또는 리버스 백신 섭생을 사용한 IFN-γ 반응의 유도를 확인시켜주었다. 모든 프라임 부스트 간격 연구의 경우, 세포 반응은 부스트 면역화 후 증대되었다. IFN-γ 반응은 프라임으로서 Ad26, 이어서 28일 후 부스트로서 MVA를 사용할 때 가장 높았다(87% 반응자, 각각 부스트 후 7일 및 21일에 그룹 4에 대해 평균 IFN-γ 반응 687 및 600 SFU/106 PBMC). 놀랍게도, 프라임으로서 MVA-BN-필로, 이어서 부스트로서 Ad26.ZEBOV를 사용할 때, 28일(그룹 2, 73 및 67% 반응자, 부스트 후 7일 및 21일 동안 평균 IFN-γ 반응 427 및 375 SFU/106 PBMC) 또는 56일 간격(그룹 3, 47% 반응자, 부스트 후 7일 및 21일 동안 평균 IFN-γ 반응 118 및 153 SFU/106 PBMC)에 유도된 반응과 비교하여 프라임과 부스트 사이의 더 짧은 14일 간격(87 및 93% 반응자, 각각 부스트 후 7일 및 21일에 그룹 1에 대해 395 및 577 SFU/106 PBMC)을 사용할 때 가장 강한 IFN-γ 반응이 관찰되었다.
현저하게, 14일 간격의 MVA-BN-필로 프라임 Ad26.ZEBOV 부스트에 의해 유도된 세포 면역 반응은 EBOV GP 특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포 반응 둘 다에 의해 훌륭히 균형을 이루었다(CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘 다에 대한 73% 반응자, 각각 부스트 후 7일 및 21일에 CD4+ 평균 전체 사이토카인 반응 0.15 및 0.19%; 각각 부스트 후 7일 및 21일에 CD8+ 평균 전체 사이토카인 반응 0.19 및 0.34%; 도 19A 및 도 19B). 이 백신 복합제에 의해 유도된 CD8+ 및 CD4+ T 세포 둘 다는 주로 다작용성이었다(도 19C 및 도 19D).
하기 표 9 내지 표 12는 본 명세서에 제시된 임상 연구의 요약으로 제시된다. 실시예 3 및 4에 제시된 연구는 각각 번호표시된 연구 1001 및 1002이다.
표 9는 실시예 3 및 4에 기재된 바와 같은 연구 동안 ELISA 검정에 의해 결정된 바와 같은 체액 면역 반응의 요약이다.
Figure pct00013
표 10은 실시예 3 및 4에 기재된 바와 같은 연구 동안 ELI스팟 검정에 의해 결정된 바와 같은 세포 면역 반응의 요약이다.
Figure pct00014
표 11은 실시예 3 및 4에 기재된 바와 같은 연구 동안 세포내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 결정된 바와 같은 CD4+ T 세포 반응의 요약이다.
Figure pct00015
표 12는 실시예 3 및 4에 기재된 바와 같은 연구 동안 세포내 사이토카인 염색(ICS)에 의해 결정된 바와 같은 CD8+ T 세포 반응의 요약이다.
Figure pct00016
본 명세서에 기재된 실시예 및 실시형태가 오직 예시적인 목적을 위한 것이고, 이의 견지에서 다양한 변형 또는 변화가 당해 분야의 당업자에게 제시되고, 본원의 정신 및 이해범위 및 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다.
서열 목록
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Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
<110> Bavarian Nordic A/S c/o Bavarian Nordic Inc. Crucell Holland B.V. THE UNITED STATES OF AMERICA, AS REPRESENTED BY THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR INDUCING PROTECTIVE IMMUNITY AGAINST FILOVIRUS INFECTION <130> BN0088PCT-I <150> US 62/045,522 <151> 2014-09-03 <150> US 62/116,021 <151> 2015-02-13 <150> US 62/159,823 <151> 2015-05-11 <150> US 62/189,109 <151> 2015-07-06 <160> 5 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glycoprotein Ebola virus Zaire, strain Mayinga <400> 1 Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15 Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser 20 25 30 Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val 35 40 45 Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg 50 55 60 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 65 70 75 80 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95 Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 115 120 125 Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 130 135 140 Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 145 150 155 160 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 165 170 175 Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp 180 185 190 Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 195 200 205 Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 225 230 235 240 Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu 245 250 255 Asn Glu Thr Ile Tyr Thr Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys 260 265 270 Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 275 280 285 Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Asn Leu Thr Arg Lys Ile Arg Ser Glu 290 295 300 Glu Leu Ser Phe Thr Val Val Ser Asn Gly Ala Lys Asn Ile Ser Gly 305 310 315 320 Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Gly Thr Asn Thr Thr Thr 325 330 335 Glu Asp His Lys Ile Met Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala Met Val Gln 340 345 350 Val His Ser Gln Gly Arg Glu Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu 355 360 365 Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gln Ser Leu Thr Thr Lys Pro Gly Pro 370 375 380 Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu 385 390 395 400 Ala Thr Gln Val Glu Gln His His Arg Arg Thr Asp Asn Asp Ser Thr 405 410 415 Ala Ser Asp Thr Pro Ser Ala Thr Thr Ala Ala Gly Pro Pro Lys Ala 420 425 430 Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Thr Asp Phe Leu Asp Pro Ala Thr 435 440 445 Thr Thr Ser Pro Gln Asn His Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr 450 455 460 His His Gln Asp Thr Gly Glu Glu Ser Ala Ser Ser Gly Lys Leu Gly 465 470 475 480 Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly 485 490 495 Arg Arg Thr Arg Arg Glu Ala Ile Val Asn Ala Gln Pro Lys Cys Asn 500 505 510 Pro Asn Leu His Tyr Trp Thr Thr Gln Asp Glu Gly Ala Ala Ile Gly 515 520 525 Leu Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ile Tyr Ile 530 535 540 Glu Gly Leu Met His Asn Gln Asp Gly Leu Ile Cys Gly Leu Arg Gln 545 550 555 560 Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr 565 570 575 Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe 580 585 590 Leu Leu Gln Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys 595 600 605 Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp 610 615 620 Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp 625 630 635 640 Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln Trp Ile Pro Ala Gly Ile 645 650 655 Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys 660 665 670 Lys Phe Val Phe 675 <210> 2 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glycoprotein Ebola virus Sudan, strain Gulu <400> 2 Met Gly Gly Leu Ser Leu Leu Gln Leu Pro Arg Asp Lys Phe Arg Lys 1 5 10 15 Ser Ser Phe Phe Val Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Lys Ala Phe Ser 20 25 30 Met Pro Leu Gly Val Val Thr Asn Ser Thr Leu Glu Val Thr Glu Ile 35 40 45 Asp Gln Leu Val Cys Lys Asp His Leu Ala Ser Thr Asp Gln Leu Lys 50 55 60 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Ser Gly Val Ser Thr Asp Ile Pro 65 70 75 80 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95 Val Ser Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Pro Pro Pro Asp Gly 115 120 125 Val Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Ala Gln Gly Thr 130 135 140 Gly Pro Cys Pro Gly Asp Tyr Ala Phe His Lys Asp Gly Ala Phe Phe 145 150 155 160 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Val Asn Phe 165 170 175 Ala Glu Gly Val Ile Ala Phe Leu Ile Leu Ala Lys Pro Lys Glu Thr 180 185 190 Phe Leu Gln Ser Pro Pro Ile Arg Glu Ala Val Asn Tyr Thr Glu Asn 195 200 205 Thr Ser Ser Tyr Tyr Ala Thr Ser Tyr Leu Glu Tyr Glu Ile Glu Asn 210 215 220 Phe Gly Ala Gln His Ser Thr Thr Leu Phe Lys Ile Asp Asn Asn Thr 225 230 235 240 Phe Val Arg Leu Asp Arg Pro His Thr Pro Gln Phe Leu Phe Gln Leu 245 250 255 Asn Asp Thr Ile His Leu His Gln Gln Leu Ser Asn Thr Thr Gly Arg 260 265 270 Leu Ile Trp Thr Leu Asp Ala Asn Ile Asn Ala Asp Ile Gly Glu Trp 275 280 285 Ala Phe Trp Glu Asn Lys Lys Asn Leu Ser Glu Gln Leu Arg Gly Glu 290 295 300 Glu Leu Ser Phe Glu Ala Leu Ser Leu Asn Glu Thr Glu Asp Asp Asp 305 310 315 320 Ala Ala Ser Ser Arg Ile Thr Lys Gly Arg Ile Ser Asp Arg Ala Thr 325 330 335 Arg Lys Tyr Ser Asp Leu Val Pro Lys Asn Ser Pro Gly Met Val Pro 340 345 350 Leu His Ile Pro Glu Gly Glu Thr Thr Leu Pro Ser Gln Asn Ser Thr 355 360 365 Glu Gly Arg Arg Val Gly Val Asn Thr Gln Glu Thr Ile Thr Glu Thr 370 375 380 Ala Ala Thr Ile Ile Gly Thr Asn Gly Asn His Met Gln Ile Ser Thr 385 390 395 400 Ile Gly Ile Arg Pro Ser Ser Ser Gln Ile Pro Ser Ser Ser Pro Thr 405 410 415 Thr Ala Pro Ser Pro Glu Ala Gln Thr Pro Thr Thr His Thr Ser Gly 420 425 430 Pro Ser Val Met Ala Thr Glu Glu Pro Thr Thr Pro Pro Gly Ser Ser 435 440 445 Pro Gly Pro Thr Thr Glu Ala Pro Thr Leu Thr Thr Pro Glu Asn Ile 450 455 460 Thr Thr Ala Val Lys Thr Val Leu Pro Gln Glu Ser Thr Ser Asn Gly 465 470 475 480 Leu Ile Thr Ser Thr Val Thr Gly Ile Leu Gly Ser Leu Gly Leu Arg 485 490 495 Lys Arg Ser Arg Arg Gln Thr Asn Thr Lys Ala Thr Gly Lys Cys Asn 500 505 510 Pro Asn Leu His Tyr Trp Thr Ala Gln Glu Gln His Asn Ala Ala Gly 515 520 525 Ile Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Gly Ala Glu Gly Ile Tyr Thr 530 535 540 Glu Gly Leu Met His Asn Gln Asn Ala Leu Val Cys Gly Leu Arg Gln 545 550 555 560 Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr 565 570 575 Thr Glu Leu Arg Thr Tyr Thr Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe 580 585 590 Leu Leu Arg Arg Trp Gly Gly Thr Cys Arg Ile Leu Gly Pro Asp Cys 595 600 605 Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asn 610 615 620 Gln Ile Ile His Asp Phe Ile Asp Asn Pro Leu Pro Asn Gln Asp Asn 625 630 635 640 Asp Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln Trp Ile Pro Ala Gly Ile 645 650 655 Gly Ile Thr Gly Ile Ile Ile Ala Ile Ile Ala Leu Leu Cys Val Cys 660 665 670 Lys Leu Leu Cys 675 <210> 3 <211> 681 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glycoprotein Marburg virus Angola <400> 3 Met Lys Thr Thr Cys Leu Leu Ile Ser Leu Ile Leu Ile Gln Gly Val 1 5 10 15 Lys Thr Leu Pro Ile Leu Glu Ile Ala Ser Asn Ile Gln Pro Gln Asn 20 25 30 Val Asp Ser Val Cys Ser Gly Thr Leu Gln Lys Thr Glu Asp Val His 35 40 45 Leu Met Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Lys Val Ala Asp Ser Pro Leu 50 55 60 Glu Ala Ser Lys Arg Trp Ala Phe Arg Ala Gly Val Pro Pro Lys Asn 65 70 75 80 Val Glu Tyr Thr Glu Gly Glu Glu Ala Lys Thr Cys Tyr Asn Ile Ser 85 90 95 Val Thr Asp Pro Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Asp Pro Pro Thr Asn 100 105 110 Ile Arg Asp Tyr Pro Lys Cys Lys Thr Ile His His Ile Gln Gly Gln 115 120 125 Asn Pro His Ala Gln Gly Ile Ala Leu His Leu Trp Gly Ala Phe Phe 130 135 140 Leu Tyr Asp Arg Ile Ala Ser Thr Thr Met Tyr Arg Gly Lys Val Phe 145 150 155 160 Thr Glu Gly Asn Ile Ala Ala Met Ile Val Asn Lys Thr Val His Lys 165 170 175 Met Ile Phe Ser Arg Gln Gly Gln Gly Tyr Arg His Met Asn Leu Thr 180 185 190 Ser Thr Asn Lys Tyr Trp Thr Ser Ser Asn Gly Thr Gln Thr Asn Asp 195 200 205 Thr Gly Cys Phe Gly Thr Leu Gln Glu Tyr Asn Ser Thr Lys Asn Gln 210 215 220 Thr Cys Ala Pro Ser Lys Lys Pro Leu Pro Leu Pro Thr Ala His Pro 225 230 235 240 Glu Val Lys Leu Thr Ser Thr Ser Thr Asp Ala Thr Lys Leu Asn Thr 245 250 255 Thr Asp Pro Asn Ser Asp Asp Glu Asp Leu Thr Thr Ser Gly Ser Gly 260 265 270 Ser Gly Glu Gln Glu Pro Tyr Thr Thr Ser Asp Ala Ala Thr Lys Gln 275 280 285 Gly Leu Ser Ser Thr Met Pro Pro Thr Pro Ser Pro Gln Pro Ser Thr 290 295 300 Pro Gln Gln Gly Gly Asn Asn Thr Asn His Ser Gln Gly Val Val Thr 305 310 315 320 Glu Pro Gly Lys Thr Asn Thr Thr Ala Gln Pro Ser Met Pro Pro His 325 330 335 Asn Thr Thr Thr Ile Ser Thr Asn Asn Thr Ser Lys His Asn Leu Ser 340 345 350 Thr Pro Ser Val Pro Ile Gln Asn Ala Thr Asn Tyr Asn Thr Gln Ser 355 360 365 Thr Ala Pro Glu Asn Glu Gln Thr Ser Ala Pro Ser Lys Thr Thr Leu 370 375 380 Leu Pro Thr Glu Asn Pro Thr Thr Ala Lys Ser Thr Asn Ser Thr Lys 385 390 395 400 Ser Pro Thr Thr Thr Val Pro Asn Thr Thr Asn Lys Tyr Ser Thr Ser 405 410 415 Pro Ser Pro Thr Pro Asn Ser Thr Ala Gln His Leu Val Tyr Phe Arg 420 425 430 Arg Lys Arg Asn Ile Leu Trp Arg Glu Gly Asp Met Phe Pro Phe Leu 435 440 445 Asp Gly Leu Ile Asn Ala Pro Ile Asp Phe Asp Pro Val Pro Asn Thr 450 455 460 Lys Thr Ile Phe Asp Glu Ser Ser Ser Ser Gly Ala Ser Ala Glu Glu 465 470 475 480 Asp Gln His Ala Ser Pro Asn Ile Ser Leu Thr Leu Ser Tyr Phe Pro 485 490 495 Lys Val Asn Glu Asn Thr Ala His Ser Gly Glu Asn Glu Asn Asp Cys 500 505 510 Asp Ala Glu Leu Arg Ile Trp Ser Val Gln Glu Asp Asp Leu Ala Ala 515 520 525 Gly Leu Ser Trp Ile Pro Phe Phe Gly Pro Gly Ile Glu Gly Leu Tyr 530 535 540 Thr Ala Gly Leu Ile Lys Asn Gln Asn Asn Leu Val Cys Arg Leu Arg 545 550 555 560 Arg Leu Ala Asn Gln Thr Ala Lys Ser Leu Glu Leu Leu Leu Arg Val 565 570 575 Thr Thr Glu Glu Arg Thr Phe Ser Leu Ile Asn Arg His Ala Ile Asp 580 585 590 Phe Leu Leu Ala Arg Trp Gly Gly Thr Cys Lys Val Leu Gly Pro Asp 595 600 605 Cys Cys Ile Gly Ile Glu Asp Leu Ser Arg Asn Ile Ser Glu Gln Ile 610 615 620 Asp Gln Ile Lys Lys Asp Glu Gln Lys Glu Gly Thr Gly Trp Gly Leu 625 630 635 640 Gly Gly Lys Trp Trp Thr Ser Asp Trp Gly Val Leu Thr Asn Leu Gly 645 650 655 Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ile Ala Val Leu Ile Ala Leu Ser Cys Ile 660 665 670 Cys Arg Ile Phe Thr Lys Tyr Ile Gly 675 680 <210> 4 <211> 681 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glycoprotein Marburg virus Musoke <400> 4 Met Lys Thr Thr Cys Phe Leu Ile Ser Leu Ile Leu Ile Gln Gly Thr 1 5 10 15 Lys Asn Leu Pro Ile Leu Glu Ile Ala Ser Asn Asn Gln Pro Gln Asn 20 25 30 Val Asp Ser Val Cys Ser Gly Thr Leu Gln Lys Thr Glu Asp Val His 35 40 45 Leu Met Gly Phe Thr Leu Ser Gly Gln Lys Val Ala Asp Ser Pro Leu 50 55 60 Glu Ala Ser Lys Arg Trp Ala Phe Arg Thr Gly Val Pro Pro Lys Asn 65 70 75 80 Val Glu Tyr Thr Glu Gly Glu Glu Ala Lys Thr Cys Tyr Asn Ile Ser 85 90 95 Val Thr Asp Pro Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Asp Pro Pro Thr Asn 100 105 110 Ile Arg Asp Tyr Pro Lys Cys Lys Thr Ile His His Ile Gln Gly Gln 115 120 125 Asn Pro His Ala Gln Gly Ile Ala Leu His Leu Trp Gly Ala Phe Phe 130 135 140 Leu Tyr Asp Arg Ile Ala Ser Thr Thr Met Tyr Arg Gly Lys Val Phe 145 150 155 160 Thr Glu Gly Asn Ile Ala Ala Met Ile Val Asn Lys Thr Val His Lys 165 170 175 Met Ile Phe Ser Arg Gln Gly Gln Gly Tyr Arg His Met Asn Leu Thr 180 185 190 Ser Thr Asn Lys Tyr Trp Thr Ser Ser Asn Gly Thr Gln Thr Asn Asp 195 200 205 Thr Gly Cys Phe Gly Ala Leu Gln Glu Tyr Asn Ser Thr Lys Asn Gln 210 215 220 Thr Cys Ala Pro Ser Lys Ile Pro Pro Pro Leu Pro Thr Ala Arg Pro 225 230 235 240 Glu Ile Lys Leu Thr Ser Thr Pro Thr Asp Ala Thr Lys Leu Asn Thr 245 250 255 Thr Asp Pro Ser Ser Asp Asp Glu Asp Leu Ala Thr Ser Gly Ser Gly 260 265 270 Ser Gly Glu Arg Glu Pro His Thr Thr Ser Asp Ala Val Thr Lys Gln 275 280 285 Gly Leu Ser Ser Thr Met Pro Pro Thr Pro Ser Pro Gln Pro Ser Thr 290 295 300 Pro Gln Gln Gly Gly Asn Asn Thr Asn His Ser Gln Asp Ala Val Thr 305 310 315 320 Glu Leu Asp Lys Asn Asn Thr Thr Ala Gln Pro Ser Met Pro Pro His 325 330 335 Asn Thr Thr Thr Ile Ser Thr Asn Asn Thr Ser Lys His Asn Phe Ser 340 345 350 Thr Leu Ser Ala Pro Leu Gln Asn Thr Thr Asn Asp Asn Thr Gln Ser 355 360 365 Thr Ile Thr Glu Asn Glu Gln Thr Ser Ala Pro Ser Ile Thr Thr Leu 370 375 380 Pro Pro Thr Gly Asn Pro Thr Thr Ala Lys Ser Thr Ser Ser Lys Lys 385 390 395 400 Gly Pro Ala Thr Thr Ala Pro Asn Thr Thr Asn Glu His Phe Thr Ser 405 410 415 Pro Pro Pro Thr Pro Ser Ser Thr Ala Gln His Leu Val Tyr Phe Arg 420 425 430 Arg Lys Arg Ser Ile Leu Trp Arg Glu Gly Asp Met Phe Pro Phe Leu 435 440 445 Asp Gly Leu Ile Asn Ala Pro Ile Asp Phe Asp Pro Val Pro Asn Thr 450 455 460 Lys Thr Ile Phe Asp Glu Ser Ser Ser Ser Gly Ala Ser Ala Glu Glu 465 470 475 480 Asp Gln His Ala Ser Pro Asn Ile Ser Leu Thr Leu Ser Tyr Phe Pro 485 490 495 Asn Ile Asn Glu Asn Thr Ala Tyr Ser Gly Glu Asn Glu Asn Asp Cys 500 505 510 Asp Ala Glu Leu Arg Ile Trp Ser Val Gln Glu Asp Asp Leu Ala Ala 515 520 525 Gly Leu Ser Trp Ile Pro Phe Phe Gly Pro Gly Ile Glu Gly Leu Tyr 530 535 540 Thr Ala Val Leu Ile Lys Asn Gln Asn Asn Leu Val Cys Arg Leu Arg 545 550 555 560 Arg Leu Ala Asn Gln Thr Ala Lys Ser Leu Glu Leu Leu Leu Arg Val 565 570 575 Thr Thr Glu Glu Arg Thr Phe Ser Leu Ile Asn Arg His Ala Ile Asp 580 585 590 Phe Leu Leu Thr Arg Trp Gly Gly Thr Cys Lys Val Leu Gly Pro Asp 595 600 605 Cys Cys Ile Gly Ile Glu Asp Leu Ser Lys Asn Ile Ser Glu Gln Ile 610 615 620 Asp Gln Ile Lys Lys Asp Glu Gln Lys Glu Gly Thr Gly Trp Gly Leu 625 630 635 640 Gly Gly Lys Trp Trp Thr Ser Asp Trp Gly Val Leu Thr Asn Leu Gly 645 650 655 Ile Leu Leu Leu Leu Ser Ile Ala Val Leu Ile Ala Leu Ser Cys Ile 660 665 670 Cys Arg Ile Phe Thr Lys Tyr Ile Gly 675 680 <210> 5 <211> 739 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleoprotein Ebola virus Tai Forest / Ivory coast <400> 5 Met Glu Ser Arg Ala His Lys Ala Trp Met Thr His Thr Ala Ser Gly 1 5 10 15 Phe Glu Thr Asp Tyr His Lys Ile Leu Thr Ala Gly Leu Ser Val Gln 20 25 30 Gln Gly Ile Val Arg Gln Arg Val Ile Gln Val His Gln Val Thr Asn 35 40 45 Leu Glu Glu Ile Cys Gln Leu Ile Ile Gln Ala Phe Glu Ala Gly Val 50 55 60 Asp Phe Gln Glu Ser Ala Asp Ser Phe Leu Leu Met Leu Cys Leu His 65 70 75 80 His Ala Tyr Gln Gly Asp Tyr Lys Gln Phe Leu Glu Ser Asn Ala Val 85 90 95 Lys Tyr Leu Glu Gly His Gly Phe Arg Phe Glu Val Arg Lys Lys Glu 100 105 110 Gly Val Lys Arg Leu Glu Glu Leu Leu Pro Ala Ala Ser Ser Gly Lys 115 120 125 Ser Ile Arg Arg Thr Leu Ala Ala Met Pro Glu Glu Glu Thr Thr Glu 130 135 140 Ala Asn Ala Gly Gln Phe Leu Ser Phe Ala Ser Leu Phe Leu Pro Lys 145 150 155 160 Leu Val Val Gly Glu Lys Ala Cys Leu Glu Lys Val Gln Arg Gln Ile 165 170 175 Gln Val His Ser Glu Gln Gly Leu Ile Gln Tyr Pro Thr Ala Trp Gln 180 185 190 Ser Val Gly His Met Met Val Ile Phe Arg Leu Met Arg Thr Asn Phe 195 200 205 Leu Ile Lys Phe Leu Leu Ile His Gln Gly Met His Met Val Ala Gly 210 215 220 His Asp Ala Asn Asp Ala Val Ile Ala Asn Ser Val Ala Gln Ala Arg 225 230 235 240 Phe Ser Gly Leu Leu Ile Val Lys Thr Val Leu Asp His Ile Leu Gln 245 250 255 Lys Thr Glu His Gly Val Arg Leu His Pro Leu Ala Arg Thr Ala Lys 260 265 270 Val Lys Asn Glu Val Asn Ser Phe Lys Ala Ala Leu Ser Ser Leu Ala 275 280 285 Gln His Gly Glu Tyr Ala Pro Phe Ala Arg Leu Leu Asn Leu Ser Gly 290 295 300 Val Asn Asn Leu Glu His Gly Leu Phe Pro Gln Leu Ser Ala Ile Ala 305 310 315 320 Leu Gly Val Ala Thr Ala His Gly Ser Thr Leu Ala Gly Val Asn Val 325 330 335 Gly Glu Gln Tyr Gln Gln Leu Arg Glu Ala Ala Thr Glu Ala Glu Lys 340 345 350 Gln Leu Gln Lys Tyr Ala Glu Ser Arg Glu Leu Asp His Leu Gly Leu 355 360 365 Asp Asp Gln Glu Lys Lys Ile Leu Lys Asp Phe His Gln Lys Lys Asn 370 375 380 Glu Ile Ser Phe Gln Gln Thr Thr Ala Met Val Thr Leu Arg Lys Glu 385 390 395 400 Arg Leu Ala Lys Leu Thr Glu Ala Ile Thr Ser Thr Ser Leu Leu Lys 405 410 415 Thr Gly Lys Gln Tyr Asp Asp Asp Asn Asp Ile Pro Phe Pro Gly Pro 420 425 430 Ile Asn Asp Asn Glu Asn Ser Glu Gln Gln Asp Asp Asp Pro Thr Asp 435 440 445 Ser Gln Asp Thr Thr Ile Pro Asp Ile Ile Val Asp Pro Asp Asp Gly 450 455 460 Arg Tyr Asn Asn Tyr Gly Asp Tyr Pro Ser Glu Thr Ala Asn Ala Pro 465 470 475 480 Glu Asp Leu Val Leu Phe Asp Leu Glu Asp Gly Asp Glu Asp Asp His 485 490 495 Arg Pro Ser Ser Ser Ser Glu Asn Asn Asn Lys His Ser Leu Thr Gly 500 505 510 Thr Asp Ser Asn Lys Thr Ser Asn Trp Asn Arg Asn Pro Thr Asn Met 515 520 525 Pro Lys Lys Asp Ser Thr Gln Asn Asn Asp Asn Pro Ala Gln Arg Ala 530 535 540 Gln Glu Tyr Ala Arg Asp Asn Ile Gln Asp Thr Pro Thr Pro His Arg 545 550 555 560 Ala Leu Thr Pro Ile Ser Glu Glu Thr Gly Ser Asn Gly His Asn Glu 565 570 575 Asp Asp Ile Asp Ser Ile Pro Pro Leu Glu Ser Asp Glu Glu Asn Asn 580 585 590 Thr Glu Thr Thr Ile Thr Thr Thr Lys Asn Thr Thr Ala Pro Pro Ala 595 600 605 Pro Val Tyr Arg Ser Asn Ser Glu Lys Glu Pro Leu Pro Gln Glu Lys 610 615 620 Ser Gln Lys Gln Pro Asn Gln Val Ser Gly Ser Glu Asn Thr Asp Asn 625 630 635 640 Lys Pro His Ser Glu Gln Ser Val Glu Glu Met Tyr Arg His Ile Leu 645 650 655 Gln Thr Gln Gly Pro Phe Asp Ala Ile Leu Tyr Tyr Tyr Met Met Thr 660 665 670 Glu Glu Pro Ile Val Phe Ser Thr Ser Asp Gly Lys Glu Tyr Val Tyr 675 680 685 Pro Asp Ser Leu Glu Gly Glu His Pro Pro Trp Leu Ser Glu Lys Glu 690 695 700 Ala Leu Asn Glu Asp Asn Arg Phe Ile Thr Met Asp Asp Gln Gln Phe 705 710 715 720 Tyr Trp Pro Val Met Asn His Arg Asn Lys Phe Met Ala Ile Leu Gln 725 730 735 His His Lys

Claims (34)

  1. 백신 복합제로서,
    (ⅰ) 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제1 조성물; 및
    (ⅱ) 적어도 2종의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제2 조성물을 포함하되,
    상기 조성물 중 하나는 프라이밍 조성물이고, 다른 조성물은 부스팅 조성물인, 백신 복합제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ)은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 백신 복합제.
  3. 제2항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ)은 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 백신 복합제.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ) 내의 상기 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 백신 복합제.
  5. 제4항에 있어서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 2를 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 백신 복합제.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 3을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 백신 복합제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물(ⅱ) 내의 상기 MVA 벡터는 적어도 4개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 백신 복합제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물(ⅱ) 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 백신 복합제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터인, 백신 복합제.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 필로바이러스 아형에 대한 보호 면역 반응을 생성하는 데 사용하기 위한 백신 복합제이되, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 백신 복합제.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 필로바이러스 아형에 대한 보호 면역 반응을 생성하는 데 사용하기 위한 백신 복합제이되, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 백신 복합제.
  12. 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법으로서,
    a. 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제1 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계; 및
    b. 필로바이러스의 적어도 2개의 균주의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 포함하는 제2 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    단계 (a) 및 (b)는 어느 한 순서로 수행되는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 제1 조성물은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 제1 조성물은 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  15. 제12항에 있어서, 상기 제1 조성물 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 제1 조성물은 서열 번호 2를 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 제1 조성물은 서열 번호 3을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물 내의 상기 MVA 벡터는 적어도 4개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물 내의 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  20. 제12항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터인, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  21. 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)는 단계 (a) 후 1주 내지 12주에 수행되는, 대상체에서 필로바이러스에 대해 면역 반응을 유도하는 방법.
  22. 키트로서,
    (ⅰ) 제1 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제1 조성물; 및
    (ⅱ) 적어도 2종의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 MVA 벡터의 면역학적 유효량을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 제2 조성물을 포함하되,
    상기 조성물 중 하나는 프라이밍 조성물이고, 다른 조성물은 부스팅 조성물인, 키트.
  23. 제22항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ)은 제2 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 키트.
  24. 제23항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ)은 제3 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 추가로 포함하는, 키트.
  25. 제22항에 있어서, 상기 제1 조성물(ⅰ) 내의 아데노바이러스 벡터는 서열 번호 1을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 키트.
  26. 제25항에 있어서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 2를 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 키트.
  27. 제26항에 있어서, 상기 조성물(ⅰ)은 서열 번호 3을 가지는 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 아데노바이러스를 추가로 포함하는, 키트.
  28. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물(ⅱ) 내의 상기 MVA 벡터는 적어도 4개의 필로바이러스 아형의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 키트.
  29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물(ⅱ) 내의 상기 MVA 벡터는 서열 번호 1, 서열 번호 2, 서열 번호 4 및 서열 번호 5를 가지는 4개의 상이한 필로바이러스 아형으로부터의 항원 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는, 키트.
  30. 제22항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터는 rAd26 또는 rAd35 벡터인, 키트.
  31. 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 필로바이러스 아형에 대한 보호 면역 반응을 생성하는 데 사용하기 위한 키트로서, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 키트.
  32. 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 필로바이러스 아형에 대한 보호 면역 반응을 생성하는 데 사용하기 위한 키트로서, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 키트.
  33. 약제학적 조성물 또는 약제의 제조에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 백신 복합제 또는 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항의 키트로서, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 백신 복합제 또는 키트.
  34. 약제학적 조성물 또는 약제의 제조에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 백신 복합제 또는 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항의 키트로서, 상기 제2 조성물은 상기 면역 반응을 프라이밍하는 데 사용되고, 상기 제1 조성물은 상기 면역 반응을 부스팅하는 데 사용되는, 백신 복합제 또는 키트.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3023098A1 (en) * 2016-05-05 2017-11-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Filovirus consensus antigens, nucleic acid constructs and vaccines made therefrom, and methods of using same
US10925955B2 (en) 2016-07-15 2021-02-23 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods and compositions for inducing protective immunity against a Marburg virus infection
WO2018011768A1 (en) * 2016-07-15 2018-01-18 Janssen Vaccines And Prevention B.V. Methods and compositions for inducing protective immunity against a marburg virus infection
US11173204B2 (en) 2017-04-06 2021-11-16 Janssen Vaccines & Prevention B.V. MVA-BN and Ad26.ZEBOV or Ad26.filo prime-boost regimen
CA3083576A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Hawaii Biotech, Inc. Filovirus vaccine and methods of use
WO2020049151A1 (en) 2018-09-06 2020-03-12 Bavarian Nordic A/S Storage improved poxvirus compositions
JP2023516201A (ja) 2020-03-12 2023-04-18 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ ポックスウイルスの安定性を改善する組成物
WO2023198815A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Sequential administration of adenoviruses

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140017278A1 (en) * 2010-12-14 2014-01-16 Crucell Holland B.V. Adenovirus serotype 26 and serotype 35 filovirus vaccines

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341245C (en) 1988-01-12 2001-06-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant vaccinia virus mva
AU4255397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Chimpanzee adenovirus vectors
GB0023203D0 (en) 2000-09-21 2000-11-01 Isis Innovation Vaccination method
WO2000000616A2 (en) * 1998-06-29 2000-01-06 U.S. Medical Research Institute Of Infectious Diseases Marburg virus vaccines
WO2000008131A2 (en) * 1998-08-04 2000-02-17 Purdue Research Foundation Pseudotyped retroviruses and stable cell lines for their production
KR100741247B1 (ko) 1999-05-17 2007-07-19 크루셀 홀란드 비.브이. 아데노바이러스 타입 35의 적어도 하나의 구성성분을포함하는 아데노바이러스 유래 유전자 전달체
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
DK1335987T4 (en) 2000-11-23 2016-09-19 Bavarian Nordic As Modified variant of vaccinia virus Ankara
JP2005517639A (ja) * 2001-11-30 2005-06-16 イシス イノベーション リミテッド ワクチン
CN101397574A (zh) 2001-12-04 2009-04-01 巴法里安诺迪克有限公司 黄病毒ns1亚单位疫苗
DK1497438T3 (da) 2002-04-25 2010-01-04 Crucell Holland Bv Midler og fremgangsmåder til fremstilling af adenovirusvektorer
PL208588B1 (pl) 2002-04-25 2011-05-31 Crucell Holland Bv Rekombinowane adenowirusy, wyizolowane kwasy nukleinowe, komórki pakujące oraz sposoby zwiększania stabilności i/lub pojemności upakowania rekombinowanego adenowirusa
PL2163260T3 (pl) 2004-01-23 2017-12-29 Msd Italia S.R.L. Szympansie adenowirusowe nośniki szczepionek
JP5046941B2 (ja) 2004-09-27 2012-10-10 アメリカ合衆国 エボラ及び他のウイルスに対する防御に最適化されたワクチン
US20100143302A1 (en) 2006-03-16 2010-06-10 Crucell Holland B.V. Recombinant Adenoviruses Based on Serotype 26 and 48, and Use Thereof
US8603468B2 (en) 2007-11-06 2013-12-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Neutralization of HCV
WO2010057650A1 (en) * 2008-11-21 2010-05-27 Bavarian Nordic A/S Vector comprising multiple homologous nucleotide sequences
KR101763093B1 (ko) 2009-02-02 2017-07-28 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 시미안 아데노바이러스 핵산- 및 아미노산-서열, 이를 포함하는 벡터 및 이의 용도
WO2010085984A1 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Okairos Ag Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof
EP2529010B1 (en) 2010-01-28 2017-04-19 Bavarian Nordic A/S Vaccinia virus mutants containing the major genomic deletions of mva
WO2011130627A2 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Chimpanzee adenoviral vector-based filovirus vaccines
WO2012106490A1 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 The Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Multivalent vaccines for rabies virus and filoviruses
KR20220012403A (ko) * 2012-04-12 2022-02-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 필로바이러스 공통 항원, 이로부터 제조된 핵산 구조체 및 백신, 및 이를 사용하는 방법
WO2014005643A1 (en) * 2012-07-05 2014-01-09 Okairos Ag Novel prime-boosting regimens involving immunogenic polypeptides encoded by polynucleotides
WO2014037124A1 (en) * 2012-09-04 2014-03-13 Bavarian Nordic A/S Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses
GB201303406D0 (en) 2013-02-26 2013-04-10 Health Prot Agency Crimean-Congo Haemorrhagic Fever Virus Antigenic Composition

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140017278A1 (en) * 2010-12-14 2014-01-16 Crucell Holland B.V. Adenovirus serotype 26 and serotype 35 filovirus vaccines

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