UA121193C2 - Спосіб одержання імуногенної композиції проти мікоплазми - Google Patents
Спосіб одержання імуногенної композиції проти мікоплазми Download PDFInfo
- Publication number
- UA121193C2 UA121193C2 UAA201507463A UAA201507463A UA121193C2 UA 121193 C2 UA121193 C2 UA 121193C2 UA A201507463 A UAA201507463 A UA A201507463A UA A201507463 A UAA201507463 A UA A201507463A UA 121193 C2 UA121193 C2 UA 121193C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- mycoplasma
- antigen
- serum
- immunogenic composition
- bacteria
- Prior art date
Links
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 title claims description 189
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 37
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 187
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 187
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 187
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 133
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 109
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 92
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 62
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 claims abstract description 55
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 53
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 46
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 43
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 34
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 87
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 53
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 28
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 14
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 5
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 4
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 claims description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 claims description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 3
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 23
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 6
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 abstract 1
- 241000202938 Mycoplasma hyorhinis Species 0.000 abstract 1
- 241001148549 Mycoplasma hyosynoviae Species 0.000 abstract 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 37
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 8
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 7
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- -1 dispersing media Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 4
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 4
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 244000144980 herd Species 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- FHDAHQFLZOYWQM-QDYAWOJKSA-N (1R,3R)-5-[(2E)-2-[(1R,3aS,7aR)-1-[(2S)-1-imidazol-1-ylpropan-2-yl]-7a-methyl-2,3,3a,5,6,7-hexahydro-1H-inden-4-ylidene]ethylidene]-2-methylidenecyclohexane-1,3-diol Chemical compound C[C@H](Cn1ccnc1)[C@H]2CC[C@H]3\C(=C\C=C4C[C@@H](O)C(=C)[C@H](O)C4)\CCC[C@]23C FHDAHQFLZOYWQM-QDYAWOJKSA-N 0.000 description 2
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical compound CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010023232 Joint swelling Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010036141 Polyserositis Diseases 0.000 description 2
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 208000024756 faint Diseases 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 2
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 208000033937 musculocontractural type Ehlers-Danlos syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 12-hydroxyoctadecanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)CCCCCCCCCCC(O)=O ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxyoctadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003757 Atypical pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000016063 arterial thoracic outlet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000476 body water Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000013216 cat model Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 208000013116 chronic cough Diseases 0.000 description 1
- 239000007376 cm-medium Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002086 displacement chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- KUQWZSZYIQGTHT-UHFFFAOYSA-N hexa-1,5-diene-3,4-diol Chemical compound C=CC(O)C(O)C=C KUQWZSZYIQGTHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 208000030208 low-grade fever Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N n-decene Natural products CCCCCCCCC=C AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 238000013310 pig model Methods 0.000 description 1
- 230000004260 plant-type cell wall biogenesis Effects 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 229940010310 propylene glycol dioleate Drugs 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 150000007660 quinolones Chemical class 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N ricinelaidic acid Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C\CCCCCCCC(O)=O WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N 0.000 description 1
- FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N ricinoleic acid Natural products CCCCCCC(O[Si](C)(C)C)CC=CCCCCCCCC(=O)OC FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
- C12N5/0686—Kidney cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/70—Non-animal cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, у суб'єкта, що включає культивування мікоплазматичних бактерій, які вибирають з групи M. hyopneumoniae, M. hyorhinis і M. hyosynoviae, у системі на основі еукаріотичних клітин MDCK або McСoy із зниженим вмістом сироватки та одержання антигену мікоплазматичних бактерій, де антиген являє собою повний інактивований бактерин, і додавання фармацевтично прийнятного носія.
Description
(54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ІМУНОГЕННОЇ КОМПОЗИЦІЇ ПРОТИ МІКОПЛАЗМИ (57) Реферат:
Винахід стосується способу одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, у суб'єкта, що включає культивування мікоплазматичних бактерій, які вибирають з групи М. Ппуорпештопіає, М. пуогтіпіз і М. пуозупоміае, у системі на основі еукаріотичних клітин МОСК або МесСоу із зниженим вмістом сироватки та одержання антигену мікоплазматичних бактерій, де антиген являє собою повний інактивований бактерин, і додавання фармацевтично прийнятного носія.
Передумови створення винаходу
Бактерії роду Мусоріазта належать до класу Моїїсшез і являють собою групу організмів, що має походження з типу Ріппісцієв (фірмікути). МоїЇйсшев являють собою найдрібніші організми, що автономно реплікуються, які структурно відрізняються від інших еубактерій відсутністю в них клітинної стінки. Поверхня їх одношарової мембрани розглядається як поверхня розділу, що має вирішальне значення для адаптації й виживання, які мають місце в імунокомпетентному хазяїні, що має складний механізм. Крім того, Моїййсцієз має невеликий геном і обмежену кількість метаболічних шляхів. Із цієї причини представники роду Мусоріаєта описані також як "мінімальні саморепліковані організми". Однак, незважаючи на цю уявну простоту, велика кількість мікоплазматичних бактерій є патогенами людини й широкого спектру тварин. На відміну від інших патогенних бактерій, вірулентність яких головним чином визначається токсинами, інвазинами й цитолізинами, патогенні мікоплазматичні бактерії, ймовірно, не мають вказаних типових первинних факторів вірулентності (Спатбаца І. і ін., МисіІеіс Асій5 Кев. 29, 2001, стор. 2145-2153, Егазег і ін., Зсіепсе 270, 1995, стор. 397-403). Зараз доступна лише невелика кількість даних про молекулярні механізми й фактори, які забезпечують патогенним мікоплазмам можливість ушкоджувати клітини-хазяї, викликати запалення й захворювання.
Патогенні мікоплазматичні бактерії є, насамперед, збудниками атипової пневмонії, сечостатевих інфекцій і артритів у людини й тварин (Мусоріазта5з: Моїесшаг бБіоіоду, рашодепісйу апа вігагедіє5 ог сопігої, під ред. Віапснага А. і сх. Р. Вгомлпіпа, вид-во Ногі2оп
Віозсіеєпсе, Мутопанат Ц.К., 2005; Кобівсй М. і ЕРтїїв М.Р. 5м/пе тусоріазтозев, ВНеу. зЗсі. Тесн.
ОН. Іпії. Ері. 15, 1996, стор. 1569-1605). Відомо, що реактивація або загострення симптомів повторюються й поступово переходять у хронічну стадію захворювання, і із цієї причини поряд з раннім діагностуванням і раннім лікуванням важливими є попередження або лікування загострення або реактивації. М. пуорпеитопіає є етіологічним агентом ензоотичної пневмонії. У свиней це є однією з найпоширеніших і економічно важливих хвороб, з якою зв'язані знижений приріст маси й погана ефективність використання корму. Хвороба викликає ушкодження в легенях, хронічний кашель, тьмяний волосяний покрив, затримку росту й зовнішні ознаки поганого розвитку, що проявляються протягом декількох тижнів. Ушкодження легень, насамперед у вентральній верхівковій й серцевій долях, характеризуються гіперплазією
Зо епітеліальних клітин і підвищеним накопиченням мононуклеарних клітин у периваскулярному і перибронхіолярному просторі. М. пуогпіпізх, інший вид мікоплазм, що часто зустрічається в дихальних шляхах свиней, може викликати полісерозит і артрит у поросят. М. пуозупоміає, як правило, локалізовані в мигдалинах і можуть викликати артрит, що приводить до економічних втрат. М. пуозупоміає виділяють зі зразків, отриманих із суглобів і з гортані/мигдалин, і цей вид може індукувати утворення антитіл у крові й синовіальній рідині. М. Бомі5 розглядається як один або найбільш патогенний вид мікоплазматичних бактерій, і він наносить серйозний економічний збиток в усьому світі. Мікоплазматичні бактерії викликають серйозні клінічні ознаки у великої рогатої худоби будь-якого віку. М. Боміз являє собою патоген Мусоріаєта, що найчастіше зустрічається, який, як встановлено, викликає пневмонію, мастит і артрит у великої рогатої худоби, і його етіологічна роль також пов'язана з отитом, кератокон'юнктивітом, синовітом і репродуктивними порушеннями в корів і биків.
Оскільки в мікоплазм відсутня клітинна стінка, на них не впливають багато загальноприйнятих антибіотиків, такі як пеніцилін або інші бета-лактамні антибіотики, мішенню яких є синтез клітинної стінки. Терапевтичні засоби, застосовувані при зараженні мікоплазмами, які знайшли застосування на практиці, являють собою деякі антибіотики, наприклад, на основі макролідів, або нові антибіотики на основі хінолонів або антибіотики на основі тетрациклінів, але для таких антибіотиків характерні шкідливі впливи, такі як виникнення стійких до лікарських засобів штамів, що приводить до того, що зв'язана з мікоплазмами інфекція стає більш серйозною, оскільки при цьому не досягаються необхідні терапевтичні впливи, і це є передумовою для перетворення в хронічну стадію захворювання. Крім того, ефективним методом контролю інфекції, яка викликається мікоплазмами, є вакцинація. Однак необхідні високі виходи мікоплазм, необхідні для приготування вакцин, одержують шляхом культивування, як правило, тільки в комплексних середовищах |Корізсп М. і Егії5 М.Е., Зм/пе тусоріазтовев, Нем. осі. Тесс. ОМ. Іпі Ері7. 15, 1996, стор. 1569-1605; Сабгідде М.. і ін.,
Сийімайоп ої тусоріазта іп а тоайєей їїввце сийигте тедішт, АрріФй апа Епмігоптепіаї тістобіоіоду. 31,1976, стор. 986-989; БоіооденНпіа А. і ін., Ргерагайоп ої адаїасійа массіпе іп
Тептепіог, Агспієме5 ої гагі іпвійше, 62, 207, стор. 45-48; Рапйійа і ін., ІвоЇайоп ої Мусоріазта
Нуозупоміає їтот репитопіс Ішпо ої 5м/іпе, Тгоріса! Віотеадісіпе 26, 2009, стор. 341-345). Залежно від мікоплазматичних бактерій, які підлягають культивуванню, комплексні середовища 60 доповнюють 10-30 95 сироватки й іноді дріжджовим екстрактом. Таким чином, через високу вартість сироватки культивування мікоплазматичних бактерій є дорогим. Крім того, зниження сироватки в комплексних середовищах повинне бути також сприятливим з позицій загального стану здоров'я тварин. Таким чином, існує необхідність у культивуванні з одержанням необхідних високих виходів мікоплазм у системі культивування із зниженим вмістом сироватки для одержання імуногенних композицій, ефективних відносно попередження інфекції, яка викликається мікоплазмами. Крім того, специфічні для свиней мікоплазматичні бактерії, як правило, культивують у комплексних середовищах, що містять специфічну для свиней сироватку ІКобрізсп М. і Егії5 М.Р., Зм/іпе тусоріазтозев, Кем. Зсі. Тесп. ОЙ. Іпї. Ері. 15, 1996, стор. 1569-1605). Однак специфічна для свиней сироватка може містити інші специфічні для свиней патогени або може містити антитіла проти специфічних для свиней патогенів, що може приводити до зниженої імуногенності отриманої імуногенної композиції. Таким чином, існує необхідність у культивуванні з одержанням необхідних високих рівнів мікоплазм у системі культивування, що не містить свинячу сироватку для одержання імуногенних композицій, ефективних відносно попередження інфекції, яка викликається мікоплазмами.
Опис винаходу
Перед описом об'єктів даного винаходу слід зазначити, що в контексті даного опису й у доданій формулі винаходу вживання поняття в однині має на увазі також його згадування в множині, якщо з контексту точно не є очевидним інше. Так, наприклад, посилання на "антиген" включає також множину антигенів, посилання на "клітину" стосується однієї або декількох клітин і їх еквівалентів, відомих фахівцям у даній галузі, і т.д. Якщо не вказане інше, то всі технічні й наукові поняття, застосовувані в контексті даного опису, мають значення, добре відомі звичайному фахівцеві в галузі, до якої належить винахід. Хоча для втілення на практиці або при тестуванні даного винаходу можна застосовувати будь-які методи й матеріали, подібні або еквівалентні до представлених у даному описі, нижче описані переважні методи, обладнання й матеріали. Усі згадані в контексті даного опису публікації включені в нього як посилання для цілей опису й обговорення клітинних ліній, векторів і методологій, вказаних у публікаціях, які можна застосовувати у зв'язку з винаходом. Ніщо із вказаного в даному описі не слід розглядати як визнання того, що з урахуванням існуючого рівня техніки даний винахід не може претендувати на обсяг, представлений у вказаному описі.
Зо Даний винахід вирішує проблеми, які є в існуючому рівні техніки, і має виражену перевагу в даній галузі техніки. У цілому, у даному винаході запропонований спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики в суб'єкта інфекцій, які викликаються мікоплазмами, який полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і в) додають фармацевтично прийнятний носій.
Цінним є те, згідно із представленими в описі даного винаходу експериментальними даними, мікоплазматичні бактерії можна одержувати в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки.
Поняття "імуногенна композиція" стосується композиції, яка містить принаймні один антиген, який викликає імунологічну відповідь у хазяїна, якому вводять імуногенну композицію. Вказана імунологічна відповідь може являти собою клітинну та/або антитіло-обумовлену (гуморальну) імунну відповідь на імуногенну композицію, запропоновану у винаході. Хазяїна позначають також як "суб'єкт". Переважно будь-який з хазяїв або суб'єктів, описаних або згаданих у контексті даного опису, являє собою тварину.
Як правило, "імунологічна відповідь" включає (але, не обмежуючись тільки ними) одну або декілька з наступних дій: виробництво або активацію антитіл, В-клітин, Т-клітин-хелперів, Т- клітин-супресорів та/або цитотоксичних Т-клітин та/або гама-дельта-Т-клітин, спрямованих конкретно до антигену або антигенів, включеного (их) в імуногенну композицію, запропоновану у винаході. Переважно в хазяїна повинна бути або захисна імунологічна відповідь, або терапевтична відповідь. "Захисна імунологічна відповідь" може проявлятися або в зниженні, або відсутності клінічних ознак, у нормі характерних для інфікованого хазяїна, більш швидкому часі відновлення та/або меншій тривалості інвазійної здатності або більш низькому титрі патогену в тканинах або загальній воді організму або екскрементах інфікованого хазяїна.
У випадку, коли в хазяїна проявляється захисна імунологічна відповідь, така як стійкість до нової інфекції, та/або в нього знижується клінічна серйозність хвороби, то імуногенну композицію називають "вакциною".
У контексті даного опису поняття "антиген" стосується (але, не обмежуючись тільки ними) компонентів, які викликають імунологічну відповідь у хазяїна на імуногенну композицію, що бо представляє інтерес, або вакцину, що містить вказаний антиген або його імунологічно активний компонент. Антиген або його імунологічно активний компонент може являти собою цільний мікроорганізм (в інактивованій або модифікованій живій формі) або будь-який його фрагмент або фракцію, який/яка, якщо його/ її вводять хазяїнові може викликати імунологічну відповідь у хазяїна. Антиген може являти собою або може містити цільні живі організми або в їх вихідній формі, або у вигляді ослаблених організмів у так званій модифікованій живій вакцині (МІ М).
Антиген може додатково містити елементи, властиві вказаним організмам (субодиничні вакцини), при цьому вказані елементи одержують або шляхом розщеплення цільного організму або ростучих культур вказаних організмів і наступних стадій очищення з одержанням необхідних(ої) структур(и), або шляхом процесів синтезу за допомогою відповідної маніпуляції в прийнятній системі, наприклад, (але, не обмежуючись тільки ними) у бактеріях, комахах, ссавцях і інших видах, і необов'язково шляхом наступних процедур виділення й очищення, або шляхом індукції вказаних процесів синтезу у тварині, яка потребує вакцини, шляхом безпосереднього включення генетичного матеріалу з використанням прийнятних фармацевтичних композицій (вакцинація полінуклеотидом). Антиген може містити цільні організми, інактивовані відповідними методами, у так званій убитій вакцині (КМ). Якщо організм являє собою бактерію, то вбиту вакцину називають бактерином.
Поняття "лікування та/або профілактика" стосується зменшення захворюваності інфекцією, яка викликається мікоплазмами, череди або зниження серйозності клінічних ознак, які викликаються або асоційовані з конкретною мікоплазматичною інфекцією. Так, поняття "лікування та/або профілактика" стосується також зменшення кількості тварин у череді, які стають інфікованими конкретними мікоплазматичними бактеріями (тобто зменшення захворюваності конкретною інфекцією, яка викликається мікоплазмою) або зниження серйозності клінічних ознак, які, як правило, викликаються або асоційовані з мікоплазматичною інфекцією в групі тварин, у якій тварин обробляли застосовуваною в ефективній кількості імуногенною композицією, представленою в даному описі, у порівнянні з групою тварин, яких не обробляли вказаною імуногенною композицією. "Лікування та/або профілактика", як правило, передбачає введення в ефективній кількості імуногенної композиції, запропонованої в даному винаході, тварині або череді тварин, які потребують цього, або на яких може виявляти сприятливий вплив вказане лікування/вказана
Зо профілактика. Поняття "лікування" стосується введення в ефективній кількості імуногенної композиції, коли особина або принаймні декілька тварин у череді вже інфіковані вказаною мікоплазмою й коли у вказаних тварин уже виявлені деякі клінічні ознаки, які викликаються або асоційовані з мікоплазматичною інфекцією. Поняття "профілактика" стосується обробки особини до зараження вказаної особини мікоплазмою або принаймні, коли у вказаної тварини або в жодної із тварин у групі тварин не виявлені які-небудь клінічні ознаки, які викликаються або асоційовані із зараженням вказаною мікоплазмою.
У контексті даного опису "ефективна кількість" означає (але, не обмежуючись тільки вказаним) кількість антигену, яка викликає або може викликати імунну відповідь у суб'єкта.
Вказана ефективна кількість може зменшувати захворюваність конкретною мікоплазматичною інфекцією в череді або знижувати серйозність клінічних ознак, пов'язаних з конкретною мікоплазматичною інфекцією.
Переважно частоту зустрічальності або серйозність клінічних ознак знижують принаймні на 10 95, білош переважно принаймні на 20 95, більш переважно принаймні на 30 95, ще більш переважно принаймні на 40 95, ще більш переважно принаймні на 50 95, ще більш переважно принаймні на 60 95, ще більш переважно принаймні на 70 95, ще більш переважно принаймні на 80 95, ще більш переважно принаймні на 90 95 і найбільш переважно принаймні на 95 95 у порівнянні із суб'єктами, яких або не обробляли імуногенною композицією, або обробляли відомою з існуючого рівня техніки імуногенною композицією, але які згодом були інфіковані конкретними мікоплазматичними бактеріями.
Поняття "клінічні ознаки" у контексті даного опису стосується ознак інфекції в суб'єкта, яка викликається мікоплазматичними бактеріями. Клінічні ознаки інфекції залежать від конкретного патогену. Приклади вказаних клінічних ознак включають (але, не обмежуючись тільки ними) респіраторний дистрес-синдром, полісерозит (такий як перитоніт, плеврит, перикардит), артрит (кульгавість і набрякання суглобів), отит, огрубіння волосяного покриву, невелика лихоманка, депресія, знижений апетит і бактеріємія. При цьому клінічні ознаки включають також (але, не обмежуючись тільки ними) клінічні ознаки, які піддаються безпосередньому виявленню в живої тварини. Приклади клінічних ознак, які піддаються безпосередньому виявленню в живої тварини, включають виділення з носа й ока, апатичність, кашель, стерторозне дихання, схильність до падіння, підвищену температуру, приріст або втрату маси, зневоднювання, 60 діарею, набрякання суглобів, кульгавість, кахексію, блідість шкіри, поганий ріст і т.п.
Зниження частоти зустрічальності або серйозності клінічних ознак, які викликаються або асоційованих з інфекцією конкретною мікоплазмою, у суб'єкта можна досягати шляхом введення однієї або декількох доз імуногенної композиції, запропонованої в даному винаході, суб'єктові, який потребує цього. Як продемонстровано в прикладах 2 і 3, імуногенна композиція, представлена в даному описі, мала ефективність після введення однократної дози суб'єктові, який цього потребує.
Поняття "Інфекція" або "інфікований" стосується зараження суб'єкта патогеном, тобто М. пуогпііпіз або М. пуогпіпів і М. пуозупоміає або М. пуогпіпі5, М. пуорпештопіає і М. нуозупоміає.
Поняття "мікоплазми" відоме фахівцеві в даній галузі. "Мусоріазєта" стосується роду бактерій, наприклад, описаному в: Мусоріахєтав: Моїесшіаг Біоіоду, раштодепісйу апа в5ігагедіе5
Ттог сопігої, під ред. Віапснага А. і сх. РЕ. Вгомпіпа, вид-во Ногігоп Віозсіепсе, Мутопанат Ц.К., 2005; Кобрівсі М. і в ЕРпїв М.Р., Зуліпе тусоріазтозев, Нем. зЗсі.Тесй. ОЙ. Іпі. Еріг. 15, 1996, стор. 1569-1605. Бактерії можна класифікувати вна основі їх біохімічних і мікробіологічних властивостей, а також їх морфології. Такі критерії класифікації добре відомі в даній галузі. Як правило, зараження мікоплазмами асоціюється із клінічними ознаками, вказаними в даному описі.
У контексті даного опису поняття "мікоплазми" стосується М. Ппуогпіпіз або М. пуотіпів і М.
Ппуозупоміае або М. Ппуогпіпіх5, М. пуорпештопіає і М. пуозупоміає. Приклад повної геномної послідовності М. пуогпіпі5 представлений в І іш МУ. і ін., У. Васіегіої. Т. 192 (21), 2010, стор. 5844- 5845 дої: 10.1128/)8.00946-10, Ериб від 27 серпня 2010 р або в СаїЇсий М... і ін., У. Васіегіої. т. 194 (7), 2012, с. 1848 аої: 10.1128/)8.00033-12. Наприклад, ізоляти М. пуозупоміає депоновані в
Американській колекції тканинних культур під реєстраційними номерами АТСС 25591 або АТС 27095. Наприклад, ізоляти Мусоріазєта Ппуорпенитопіае депоновані в Американській колекції тканинних культур під реєстраційними номерами АТСС 25095, АТС 25617 і АТСС 25934.
Геномна ДНК .)-штаму Мусоріазта Ппуорпештопіаеє депонована в Американській колекції тканинних культур під реєстраційними номерами АТСС 259340. Ізоляти Мусоріазєта бБомі5 добре відомі фахівцеві в даній галузі й деякі ізоляти депоновані, наприклад, в Американській колекції тканинних культур під реєстраційними номерами АТСС 25025, АТСС 25523 і АТОС 27368.
Зо Поняття "культивування" відоме фахівцеві в даній галузі. Поняття стосується розмноження клітин у культурі за межами організму. Зокрема, поняття "культивування" стосується розмноження клітин за межами організму у клітинній системі.
Поняття "клітинна система" відоме фахівцеві в даній галузі. Зокрема, "клітинна система" являє собою клітинну систему іп міго для культивування мікроорганізму, такого, наприклад, як мікоплазматична бактерія. Вказана клітинна система містить клітини-хазяї й середовище для культури клітин, придатне для розмноження вказаних клітин за межами організму. Зокрема, клітини-хазяї можуть бути чутливими або нечутливими до зараження мікоплазматичними бактеріями. Вказані клітини-хазяї можуть бути присутні у вигляді живих клітин, в інактивованій формі або у вигляді клітинних фрагментів. Переважні вказані клітини-хазяї являють собою еукаріотичні клітини або систему на основі еукаріотичних клітин.
Під поняття "система на основі еукаріотичних клітин" підпадає система, що містить первинні еукаріотичні клітини й еукаріотичні клітини, виведені з багатоклітинних організмів, таких як рослини або тварини. Крім того, система на основі еукаріотичних клітин включає еукаріотичні одноклітинні організми (які називають також мікроорганізмами), наприклад, бактерії або гриби, включаючи дріжджі. Однак, як повинно бути очевидно, еукаріотичні клітини відрізняються від мікоплазматичних бактерій. Еукаріотичні клітини-хазяї, які можна застосовувати для втілення на практиці способу, представленого в даному описі, включають (але, не обмежуючись тільки ними) клітини Мадин-Дарбі епітелію нирки собаки (МОСК) (наприклад, клітини Мадин-Дарбі епітелію нирки собаки, депоновані в Американській колекції тканинних культур під реєстраційним номером АТСС ССІ-34 або АТСС СТІ -2285) або клітини МеоСоу (наприклад, депоновані в Американській колекції тканинних культур під реєстраційним номером АТСС СКІ- 1696).
Поняття "безклітинна система культивування" у контексті даного опису стосується системи культивування, яка не містить ніяких клітин, крім мікоплазматичних бактерій.
Поняття "низький вміст сироватки" стосується зниженої кількості сироватки, що додається для культивування мікоплазматичних бактерій у систему на основі еукаріотичних клітин, у порівнянні з кількістю сироватки, яку використовують для культивування мікоплазматичних бактерій цих же видів у безклітинній системі культивування. Кількість сироватки для культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин у порівнянні бо з кількістю сироватки для культивування мікоплазматичних бактерій у безклітинній системі культивування знижують принаймні на 10 95, переважно принаймні на 20 95, більш переважно принаймні на 30 95, ще більш переважно принаймні на 40 95, ще більш переважно принаймні на 50 95, ще більш переважно принаймні на 60 95, ще більш переважно принаймні на 70 95, ще більш переважно принаймні на 8095, ще більш переважно принаймні на 90 95, ще більш переважно принаймні на 95 95, ще більш переважно принаймні на 96 95, ще більш переважно принаймні на 97 95, ще більш переважно принаймні на 98 95, ще більш переважно принаймні на 99 95, найбільш переважно на 100 95. Таким чином, повинно бути очевидно, що згідно із даним винаходом мікоплазматичні бактерії найбільш переважно культивувати в системі на основі еукаріотичних клітин, що зовсім не містить яку-небудь сироватку.
Переважні кількості сироватки для культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин включають концентрації сироватки, що становлять приблизно від 0 до 10 об. 95, більш переважно приблизно від 1 до 9 об. 95, ще більш переважно приблизно від 1 до 8 об. 95, ще більш переважно приблизно від 1 до 7 об. 95, ще більш переважно приблизно від 1 до 6 об. 95 і найбільш переважно приблизно від 2 до 5 об. 9».
Переважні кількості сироватки для культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин, що містить МОСК-клітини, включають концентрації сироватки, що становлять приблизно від 0 до 6 об. 95, більш переважно приблизно від 1 до 5 об. 95, ще більш переважно приблизно від 2 до 4 об. 95, ще більш переважно приблизно від 2 до З об. 95 і найбільш переважно приблизно 2 об. 95.
Переважні кількості сироватки для культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин, що містить МеоеСоу-клітини, включають концентрації сироватки, що становлять приблизно від 0 до 10 об. 95, більш переважно приблизно від 1 до 9 об. 95, ще більш переважно приблизно від 1 до 8 об. 95, ще більш переважно приблизно від 1 до 7 об. 95, ще більш переважно приблизно від 4 до 6 об. 95 і найбільш переважно приблизно 5 об. 95.
Згідно із даним винаходом слід розуміти, що еукаріотичні клітини або система на основі еукаріотичних клітин повинні інфікуватися мікоплазматичними бактеріями. Зараження еукаріотичних клітин мікоплазматичними бактеріями й умови постінкубаційного періоду добре відомі фахівцеві в даній галузі. Однак переважно після трансфекції клітини інкубують протягом періоду часу, що становить аж до 21 дня, більш переважно від приблизно 2 днів до приблизно
Ко) 14 днів, більш переважно від приблизно 2 днів до приблизно 8 днів, ще більш переважно від приблизно З до 5 днів. Переважні умови інкубації включають температуру приблизно від 32 до 422С, більш переважно приблизно від 34 до 402С, ще більш переважно приблизно від 35 до 399, ще більш переважно приблизно від 36 до 382С і найбільш переважно приблизно 372С.
Переважні умови інкубації включають також концентрацію СО», що становить приблизно від 2 до 8 95, більш переважно приблизно від З до 7 95, ще більш переважно приблизно від 4 до 6 95 і найбільш переважно приблизно 595. Переважно еукаріотичні клітини обстежують після трансфекції відносно характеристичних змін, таких як тенденції відносно клітинної щільності, зниження життєздатності, включаючи цитопатичні дії під час постінкубаційного періоду, і зміна кольору середовища через зміну рН.
Поняття "одержання" включає збір, виділення, очищення та/або складання композиції (наприклад, інактивацію та/або приготування суміші) антигену.
Поняття "збір" стосується збору або витягу антигену мікоплазматичних бактерій із трансфікованої системи на основі еукаріотичних клітин. Для витягу вказаного мікоплазматичного антигену можна застосовувати будь-який загальноприйнятий метод, відомий у даній галузі, наприклад, будь-який метод розділення. Методи, добре відомі в даній галузі, включають центрифугування або фільтрацію, наприклад, з використанням напівпроникної мембрани, що має певний розмір пор.
Поняття "виділення" включає стадію виділення мікоплазматичного антигену. Методи виділення антигенів мікоплазматичних бактерій з інфікованої системи на основі еукаріотичних клітин відомі фахівцеві в даній галузі. Вказані методи являють собою фізичні та/або хімічні методи, включаючи (але, не обмежуючись тільки ними) цикли заморожування-відтавання, обробку ультразвуком і т.п.
Методи "очищення" антигенів з ізоляту добре відомі фахівцям у даній галузі, наприклад, являють собою методи, описані в: Ргоїеїп ригійсайоп теїпод5-а ргасіїса! арргоасі, під ред. Е.М.
Нагттіз і 5. Апдаї, вид-во ІВІ. Ргев55 аї Охгога Опімегейу Ргез5. Вказані методи включають (але, не обмежуючись тільки ними) розділення шляхом центрифугування та/або фільтрації, осадження, витісну хроматографію (гель-фільтрацію), афінну хроматографію, метал-хелатну хроматографію, іонообмінну хроматографію, ковалентну хроматографію, хроматографію гідрофобних взаємодій і т.п. Антиген можна одержувати в очищеній (чистій) формі або у формі, бо вільній або практично вільній від інших клітинних матеріалів або культурального середовища і т.д. Після вказаного виділення та/або очищення антиген має чистоту, що становить принаймні 80 95, переважно 80 95-90 95, більш переважно 90 95-97 95, найбільш переважно більше 97 95 аж до абсолютно чистотою форми без будь-якого забруднення.
Згідно з іншим об'єктом винаходу поняття "одержання" у контексті даного опису може включати також додаткові стадії остаточної обробки типу стадій додавання буфера, інактивації, нейтралізації й т.п.
Для цілей даного винаходу можна використовувати будь-який загальноприйнятий метод "інактивації". Так, інактивацію можна здійснювати шляхом хімічних та/або фізичних обробок, відомих фахівцеві в даній галузі. Переважні методи інактивації включають додавання циклізованого бінарного етиленіміну (ВЕЇ), включаючи додавання розчину гідроброміду 2- брометиленаміну (ВЕА), циклізованого з утворенням бінарного етиленіміну (ВЕЇ). Інші переважні хімічні інактивуючі агенти включають (але, не обмежуючись тільки ними) Тритон Х-100, дезоксихолат натрію, бромід цетилтриметиламонію, В-пропіолактон, тимеросал, фенол і формальдегід (формалін). Однак інактивація може включати також стадію нейтралізації.
Переважні нейтралізуючі агенти включають (але, не обмежуючись тільки ними) тіосульфат натрію, бісульфіт натрію й т.п.
Переважні умови інактивації формаліном включають застосування формаліну в концентрації приблизно від 0,02 до 2,0 об. 95, більш переважно приблизно від 0,1 до 1,0 об. 95, ще більш переважно приблизно від 0,15 до 0,8 об. 96, ще більш переважно приблизно від 0,16 до 0,6 об. 95 і найбільш переважно приблизно від 0,2 до 0,4 об. 95. Тривалість інкубації залежить від стійкості видів мікоплазм. Як правило, процес інактивації здійснюють доти, поки ріст мікоплазм не перестає піддаватися виявленню в прийнятній системі культивування.
Згідно з наступним об'єктом винаходу запропонований у винаході компонент, що представляє собою інактивований бактерин, можна включати в ліпосоми, використовуючи відому технологію, наприклад, описану в Маїиге, 252, 1974, стор. 252-254 або в дошгпа! ої
Іпптипо!поду, 120, 1978, стор. 1109-1113. В іншому варіанті здійснення винаходу компонент, який являє собою інактивований бактерин, запропонований у винаході, можна кон'югувати із прийнятними біологічними сполуками, такими як полісахариди, пептиди, білки або т.п. або з їх комбінацією.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому імуногенна композиція являє собою мікоплазматичну імуногенну композицію.
Відповідно до одного з об'єктів даного винаходу сироватка, яку застосовують для культивування мікоплазматичних бактерій, вільна від свинячої сироватки. Поняття "вільна від свинячої сироватки" означає, що свинячу сироватку не додають під час процесу культивування мікоплазматичних бактерій у систему на основі еукаріотичних клітин.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому сироватка вільна від свинячої сироватки. Згідно із ще одним об'єктом винаходу всі мікоплазматичні антигени одержують у системі на основі еукаріотичних клітин, вільної від свинячої сироватки.
Згідно з наступним об'єктом винаходу культивування мікоплазматичних бактерій здійснюють без сироватки. Це означає, що ніяку сироватку не додають у процесі культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин без сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Згідно із ще одним об'єктом винаходу всі мікоплазматичні антигени одержують без сироватки.
В одному з об'єктів даного винаходу антиген(и) мікоплазм представляє (ють) собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени мікоплазм може (уть) являти собою повністю інактивований мікоплазматичний бактерин. 60 Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції,
призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому антиген мікоплазм являє собою цільний інактивований бактерин. Згідно з наступним об'єктом винаходу всі мікоплазматичні антигени в імуногенній композиції являють собою цільні інактивовані бактерини. Інактивовані мікоплазматичні антигени можна одержувати таким чином, щоб стадія б) описаного вище способу включала стадію інактивації. Таким чином, наступним об'єктом даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і інактивують мікоплазматичний антиген; і в) додають фармацевтично прийнятний носій.
Цільний інактивований бактерин можна одержувати шляхом інактивації повних мікоплазматичних бактерій за допомогою описаних вище методів. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і інактивують мікоплазматичні антигени; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому мікоплазматичні антигени являють собою цільні мікоплазматичні бактерії.
Переважно мікоплазматичні бактерії інактивують формаліном відповідно до описаного вище методу. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і інактивують мікоплазматичні антигени формаліном; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому мікоплазматичні
Зо антигени являють собою цільні мікоплазматичні бактерії. Переважно формалін застосовують у вказаних вище концентраціях.
В одному з об'єктів даного винаходу система на основі еукаріотичних клітин містить клітинну лінію МОСК. Клітинну лінію МОСК (наприклад, клітини Мадин-Дарбі епітелію нирки собаки) одержували з ниркової тканини дорослої самки кокер-спанієля. У цілому, клітини лінії МОСК відомі фахівцеві в даній галузі. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і інактивують мікоплазматичні антигени формаліном; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому система на основі еукаріотичних клітин містить клітинну лінію МОСК. | в цьому варіанті мікоплазматичний антиген може являти собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном.
У наступному об'єкті даного винаходу система на основі еукаріотичних клітин містить клітинну лінію МеСоу. Клітинна лінія МеСоу відома фахівцеві в даній галузі. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій і інактивують мікоплазматичні антигени формаліном; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому система на основі еукаріотичних клітин містить клітинну лінію МесСоу. І в цьому варіанті мікоплазматичний антиген може являти собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном.
В одному з об'єктів даного винаходу мікоплазматичні бактерії вибирають із групи, яка складається з: М. пуорпешйтопіає, М. пуотіпів, М. пуозупоміає і М. ромі5. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген бо мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому мікоплазматичні бактерії вибирають із групи, яка складається з: М. Нуорпешйтопіає, М. Нуогпіпів,
М. Нуозупоміає і М. Боміз. Переважно мікоплазматичний антиген може являти собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
У наступному об'єкті даного винаходу мікоплазматичні бактерії вибирають із групи, яка складається з: М. пуорпештопіає, М. пуоптіпіб5, М. пуозупоміає і будь-яких їх комбінацій. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому мікоплазматичні бактерії вибирають із групи, яка складається з: М. Нуорпешйтопіає, М. Нуогпіпів,
М. пуозупоміає і будь-яких їх комбінацій. Переважно мікоплазматичний антиген може являти собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують бактерії М. нуорпештопіає у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген бактерій М. нуорпешйтопіає; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно антиген М. ПНуорпепитопіае може являти собою цільний інактивований бактерин М. пуорпеитопіає, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени М. нуорпештопіає може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин М. пуорпеитопіав.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують бактерії М. Нуопіпіз у системі на основі
Зо еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген бактерій М. Нуоптіпів; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно антиген М. Пуогпіпіз може являти собою цільний інактивований бактерин М. Пуогіпів, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени
М. нуотіпів може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин М. Нуогпіпів.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують бактерії М. нуозупоміае у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген бактерій М. Нуозупоміає; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно антиген М. пуозупоміає може являти собою цільний інактивований бактерин М. пуозупоміає, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени
М. пнуозупоміає може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин М. Нуозупоміає.
Згідно з наступного об'єкту винаходу імуногенна композиція містить антиген мікоплазм, вибраних із групи, яка складається з: М. пПуорпештопіає, М. Ппуогпіпіб5, М. пуозупоміає і будь-яких їх комбінацій. Принаймні бактерії одного з видів мікоплазм, вказаних вище (наприклад, М. пуорпештопіає або М. Пуоптіпіх5, або М. Пуозупоміає), які застосовують для одержання імуногенної композиції на основі мікоплазм, культивують згідно із даним винаходом в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки.
Переважно всі мікоплазматичні бактерії, які застосовують для одержання імуногенної композиції на основі мікоплазм, культивують згідно із даним винаходом в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, яка містить антиген мікоплазм М. пуорпештопіає, М. Ппуогпіпі5, М. пуозупоміає та/або будь-які комбінації вказаних антигенів, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують принаймні одну бактерію, вибрану із групи, яка складається з М. Нуорпештопіає, М. Нуопіпів, М. Нуозупоміає, у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно всі мікоплазматичні бактерії культивують у запропонованій у бо винаході системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки. Переважно принаймні один антиген(и) мікоплазм представляє (ють) собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени мікоплазм може (уть) являти собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, яка містить антиген мікоплазм М. пуорпештопіає, М. Ппуогпіпі5, М. пуозупоміає та/або будь-які комбінації вказаних антигенів, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують принаймні бактерії М. нуорпеитопіає у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно все бактерії М. Нуорпеитопіає культивують у запропонованій у винаході системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки. Переважно принаймні один з антигенів М. пуорпеитопіає являє собою цільний інактивований бактерин М. пуорпеитопіає, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени М. пНуорпеитопіає може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, яка містить антиген мікоплазм М. пуорпештопіає, М. Ппуогпіпі5, М. пуозупоміає та/або будь-які комбінації вказаних антигенів, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують принаймні бактерії М. Нуотіпів у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно все бактерії М. Нуогпіпіз культивують у запропонованій у винаході системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки. Переважно принаймні один з антигенів М. Нуотіпів являє собою цільний інактивований бактерин М. ПНуотіпіз, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени М. пуотіпіб5 може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції,
Зо яка містить антиген мікоплазм М. пуорпештопіає, М. пуогпіпі5, М. пуозупоміає та/або будь-які комбінації вказаних антигенів, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують принаймні бактерії М. нуозупоміає у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно все бактерії М. Нпуозупоміає культивують у запропонованій у винаході системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки. Переважно принаймні один з антигенів М. пуозупоміає являє собою цільний інактивований бактерин М. Нуозупоміає, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі антигени М. Ннуозупоміає може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу імуногенну композицію готують у вигляді форми для однодозового застосування. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому імуногенну композицію готують у вигляді форми для однодозового застосування. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Важливо відзначити, що експериментальні дані, представлені в описі даного винаходу, продемонстрували, що введення однієї дози імуногенної композиції, запропонованої в даному винаході, вірогідно й ефективно стимулювало захисну імунну відповідь. Зокрема, гуморальна імунна відповідь, що піддається вимірюванню, продемонстрована для М. Ппуопіпі5 їі М. пуорпеитопіав.
Поняття "суб'єкт" у контексті даного опису стосується тварин, переважно ссавців, таких як миші, щури, морські свинки, кролики, хом'яки, свині, вівці, собаки, кішки, коні, мавпи або велика рогата худоба (корова), а також переважно людини. 60 В одному з об'єктів даного винаходу суб'єкт являє собою свиню. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому суб'єкт являє собою свиню. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу суб'єкт являє собою корову. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому суб'єкт являє собою корову. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу суб'єкт являє собою кішку. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому суб'єкт являє собою кішку. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Ко) В одному з об'єктів даного винаходу суб'єкт являє собою собаку. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому суб'єкт являє собою собаку. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Поняття "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-який і всі розчинники, дисперсійні середовища, агенти для нанесення покриттів, стабілізатори, розріджувачі, консерванти, антибактеріальні й протигрибкові засоби, агенти, що надають ізотонічність, агенти, що сповільнюють адсорбцію, ад'юванти, засоби, що стимулюють імунну систему, і їх комбінації.
В одному з об'єктів даного винаходу фармацевтично прийнятний носій являє собою ад'ювант.
У контексті даного опису "ад'юванти" можуть включати гідроксид алюмінію й фосфат алюмінію, сапоніни, наприклад, Оці А, 05-21 (фірма Сатрбгідде Віоїесп Іпс., Кембридж, шт.
Масачусетс), ОРІ-0100 (фірма Саїйепіса Рпагтасеціїса!5, Іпс., Бірмінгем, шт. Алабама), емульсію вода-в-маслі, масло-в-воді, емульсію вода-в-маслі-в-воді. Основою емульсії можуть бути, зокрема, легке рідке парафінове масло (типу, що відповідає Європейській фармакопеї); ізопреноїдне масло, таке як сквалан або сквален; масло, що утворюється при олігомеризації алкенів, зокрема, ізобутену або децену; ефіри кислот або спиртів, що містять лінійну алкільну групу, більш конкретно рослинні олії, етилолеат, пропіленгліколю ди(каприлат/капрат), гліцерину три(каприлат/капрат) або пропіленгліколю диолеат; ефіри розгалужених жирних кислот або спиртів, зокрема ефіри ізостеаринової кислоти. Масла застосовують у комбінації з емульгаторами з одержанням емульсії. Переважними емульгаторами є неіоногенні поверхово- активні речовини, зокрема, ефіри сорбітану, маніду (наприклад, ангідроманітолеат), гліцерину, полігліцерину, пропіленгліколю й олеїнової, ізостеринової, рицинолевої або гідроксистеаринової кислоти, які необов'язково є етоксилованими, і блокспівполімери поліоксипропілену- бо поліоксиетилену, зокрема продукти типу Ріпгопіс, насамперед 1121 див. Нипіег і ін., Те Тнеогу апа Ргасіїса! Арріїсайоп ої Адіимапів, під ред.біємап-Тиї! 0. Е. 5., вид-во доппулІеу апа бопв, МУ, 1995, стор. 51-94 і Тода і ін., Массіпе 15, 1997, стор. 564-570). Наприклад, можна застосовувати емульсію 5РТ, описану на с. 147 в "Массіпе Оевзідп, Те Зирипії апа Адіимапі Арргоасн", під ред.
М. Ромеї! і М. Меж/тап, вид-во Ріепит Ргез5, 1995 і емульсію МЕ59, описану на с. 183 у цій же книзі. Інші придатні ад'юванти включають (але, не обмежуючись тільки ними) ад'ювантну систему ВІВІ (фірма Вірі Інс.), блокспівполімер (фірма Суїгх, Атланта, шт. Джорджія), БАБЕ-М (фірма Спігоп, Емеривіл, шт. Каліфорнія), монофосфорил-ліпід А, ад'ювант авридин ліпід-амін, термолабільний ентеротоксин з Е. соїї (рекомбінантний або інший), холерний токсин, ІМ5 1314 або мурамілдипептид (але винахід не обмежений вказаними ад'ювантами). Із співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільного похідного застосовують співполімери ЕМА (фірма
Мопзапіо) співполімери, що представляють собою, малеїнового ангідриду й етилену.
Розчинення вказаних полімерів у воді приводить до одержання кислого розчину, який повинен бути нейтралізований, переважно до фізіологічного значення рН, для одержання розчину ад'юванта, у який може бути включена імуногенна, імунологічна композиція або композиція вакцини.
Іншим прикладом ад'юванта є сполука, вибрана з полімерів акрилової або метакрилової кислоти й співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільного похідного. Переважними ад'ювантами є полімери акрилової або метакрилової кислоти, зшиті насамперед із простими поліалкеніловими ефірами цукрів або поліспиртів. Такі сполуки позначають як карбомер (Рпатеигора, т. 8, Мо 2, червень 1996 р.). Фахівець у даній галузі може також почерпнути з О5
Мо 2909462 опис вказаних акрилових полімерів, зшитих з полігідроксилованою сполукою, що має принаймні З гідроксильні групи, переважно не більше 8, при цьому атоми водню принаймні в трьох гідроксилах заміщені ненасиченими аліфатичними радикалами, що мають принаймні 2 атоми вуглецю. Переважними радикалами є радикали, які містять від 2 до 4 атомів вуглецю, наприклад, вініли, аліли й інші ненасичені групи етиленового ряду. Ненасичені радикали можуть самі містити інші замісники, такі як метил. Найбільш придатними є продукти, які продаються за назвою САКВОРОЇ Ф; (фірма ВЕ Сооагіспй, шт. Огайо, США). Вони являють собою полімери акрилової кислоти, зшиті із простими поліалкеніловими ефірами або дивінілгліколем, або зшиті з алілсахарозою або з алілпентаеритритом. З них можна відзначити САЕВОРОЇ Ф 974Р, 934Р і
Зо 971Р. Найбільш переважним є застосування САКВОРОЇ Ф 971Р.
Переважно ад'ювант додають у кількості, що становить від приблизно 100 мкг до приблизно 10 мг на дозу. Ще більш переважно ад'ювант додають у кількості від приблизно 100 мкг до приблизно 10 мг на дозу. Ще більш переважно ад'ювант додають у кількості від приблизно 500 мкг до приблизно 5 мг на дозу. Ще більш переважно ад'ювант додають у кількості від приблизно 750 мкг до приблизно 2,5 мг на дозу. Найбільш переважно ад'ювант додають у кількості приблизно 1 мг на дозу.
У переважному варіанті здійснення винаходу ад'ювант вибирають із групи, яка складається з гідроксиду алюмінію, фосфату алюмінію, сапонінів, емульсії вода-в-маслі, емульсії масло-в- воді, емульсії вода-в-маслі-в- воді, полімерів акрилової або метакрилової кислоти, співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільного похідного, ад'ювантної системи РІВІ, блокспівполімеру,
ЗАЕ-М, монофосфорил-ліпіду А, авридин ліпід-аміну, термолабільного ентеротоксину з Е. соїї (рекомбінантного або іншого), холерного токсину, ІМ5 1314, мурамілдипептиду і їх комбінацій.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому фармацевтично прийнятний носій являє собою ад'ювант. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу фармацевтично прийнятний носій являє собою емульсію вода-в-маслі-у воді або карбомер. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому фармацевтично прийнятний носій являє собою емульсію вода-в-маслі-у воді або карбомер. Переважно принаймні один з антигенів бо мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу емульсія вода-в-маслі-в-воді являє собою Монтанід
ІЗА207 У. Монтанід ІЗА207 МО є ад'ювантом, який складається зі складних олеїнових ефірів безводного маніту в розчині немінерального масла, і його створюють для одержання вакцин у вигляді емульсій типу вода-в-маслі-в-воді. Ад'ювант Монтанід ІЗА207 МО добре відомий фахівцеві в даній галузі і його можна застосовувати без додаткових досліджень.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, в суб'єкта, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому фармацевтично прийнятний носій являє собою Монтанід ІЗА207 МО або САБВОРОЇФ.
Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Даний винахід стосується також описаного вище способу, призначеного для підвищення імуногенності мікоплазматичного антигену. Цінним є те, згідно із представленими в описі даного винаходу експериментальними даними антигени мікоплазматичних бактерій, отримані описаним вище способом, мають підвищену імуногенність в порівнянні з антигенами, отриманими з мікоплазматичних бактерій, які культивували в безклітинній системі культивування. Зокрема, отримані на основі МОСК, що включають М. Нуотіпіз вакцини характеризуються більш раннім початком сероконверсії, більшою кількістю серопозитивних свиней і більш високими серологічними титрами
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб підвищення імуногенності антигену, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно
Зо принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
В одному з об'єктів даного винаходу антиген має підвищену імуногенність в порівнянні з антигеном, отриманим з мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі культивування. Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є спосіб підвищення імуногенності антигену, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якому імуногенна композиція має підвищену імуногенність в порівнянні з імуногенної композицій, яка містить такий же антиген, отриманий з мікоплазматичних бактерій, культивованих в безклітинній системі культивування. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
У контексті даного опису поняття "підвищена імуногенність" означає, що імунологічна відповідь, яка викликається імуногенною композицією, що містить антиген, що представляє інтерес, підвищується в порівнянні із застосовуваною як контроль імуногенною композицією, що містить такий же антиген, де антиген застосовуваної як контроль імуногенної композиції одержують із мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі культивування.
Поняття "підвищений" означає, що клітинну та/або гуморальну імунну відповідь підвищують принаймні на 10 95, переважно принаймні на 20 95, більш переважно принаймні на 30 95, ще більш переважно принаймні на 4095, ще більш переважно принаймні на 50 95, ще більш переважно принаймні на 7595, найбільш переважно принаймні на 10095 у порівнянні з клітинною та/або гуморальною імунною відповіддю, яка викликається застосовуваною як контроль імуногенною композицією, що містить такий же антиген, де антиген застосовуваної як контроль імуногенної композиції одержують із мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі культивування. Фахівцеві в даній галузі повинно бути очевидно, як оцінювати клітинну та/або гуморальну імунну відповідь. Зокрема, такому фахівцеві в даній галузі повинно бути очевидно, що необхідно або порівнювати клітинну імунну відповідь 60 імуногенної композиції, що представляє інтерес, із клітинною відповіддю контрольної композиції,
або сгуморальну імунну відповідь імуногенної композиції що представляє інтерес, з гуморальною імунною відповіддю контрольної композиції, але не клітинну імунну відповідь імуногенної композиції, що представляє інтерес, з гуморальною імунною відповіддю контрольної композиції й навпаки. Крім того, клітинну імунну відповідь можна вимірювати, наприклад, шляхом оцінки активації цитотоксичних Т-клітин, що представляє/, що представляють інтерес імуногенною композицією /антигеном. Гуморальну імунну відповідь можна вимірювати, наприклад, шляхом оцінки кількості антигсенспецифичних антитіл, що виробилися в процесі введення імуногенної композиції, що містить вказаний антиген, тварині. Клітинну та/або гуморальну імунну відповідь можна вимірювати, наприклад, шляхом застосування мишиної моделі, котячої моделі, створеної на корові моделі або створеної на свинях моделі. При цьому аналізи, описані в прикладі 4 і 5, можна застосовувати як референс-аналізи для виявлення імунної відповіді проти М. пуогпіпі5 і М. пуорпештопіає.
Поняття "такий же (той же самий) антиген" означає що природа антигенів є ідентичною. Так, якщо антиген мікоплазм, що входить в імуногенну композицію, отриману в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки, являє собою повний інактивований бактерин М. пуогпіпі5, то поняття "такий же антиген" означає, що антиген мікоплазм, отриманий у безклітинній системі, являє собою також повний інактивований бактерин М. Пуогпіпів. Крім того, якщо антиген мікоплазм, що входить в імуногенну композицію, отриману в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки, одержують або очищають за допомогою конкретного методу, то поняття "такий же антиген" означає, що антиген мікоплазм із безклітинної системи одержують або очищають за допомогою такого ж методу.
Поняття "контрольна (референс)» імуногенна композиція стосується імуногенної композиції, не отриманої шляхом культивування мікоплазматичних бактерій у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки, запропонованої в даному винаході.
Більш строго, поняття "контрольна (референс)» імуногенна композиція стосується імуногенної композиції, отриманої шляхом культивована мікоплазматичних бактерій у безклітинній системі культивування, доповненою сироваткою, з використанням такого ж антигену. Культивування мікоплазматичних бактерій у безклітинній системі культивування,
Зо доповненою сироваткою, добре відоме фахівцеві в даній галузі Джерело сироватки й концентрація сироватки залежить від мікоплазматичних бактерій, які підлягають культивуванню, і необхідних виходів мікоплазматичних бактерій. М. Пуогпіпіх, М. Ппуорпештопіає і М. пуозупоміає, як правило, культивують у безклітинній системі культивування, доповненій 10-20 об. 95 свинячої сироватки й 5-10 об. 95 дріжджового екстракту з одержанням високих виходів.
Однак, як повинно бути очевидно, концентрації сироватки можна варіювати, дріжджовий екстракт можна не застосовувати й сироватку можна одержувати з іншого джерела, наприклад, застосовувати сироватку плода корови або т.п.
У даному винаході запропоновані не тільки вказані вище способи одержання імуногенних композицій або способи підвищення імуногенності антигену, то також і імуногенна композиція, яку можна одержувати описаними вище способами. Таким чином, наступним об'єктом даного винаходу є імуногенна композиція, яку можна одержувати способом, запропонованим у винаході й представленим у даному описі. У цілому, вказаний спосіб полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Одним з об'єктів даного винаходу є імуногенна композиція, що відрізняється підвищеною імуногенністю в порівнянні з контрольною імуногенною композицією, що містить антиген, де антиген контрольної імуногенної композиції одержують із мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі.
Таким чином, наступним об'єктом даного винаходу є імуногенна композиція, яку можна одержувати способом, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій.
Згідно з іншим об'єктом винаходу вказана імуногенна композиція відрізняється підвищеною імуногенністю в порівнянні з контрольною імуногенною композицією, що містить такий же антиген, отриманий з мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі. бо Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
У наступному об'єкті винаходу імуногенна композиція містить компоненти еукаріотичних клітин із вказаної системи на основі еукаріотичних клітин.
Поняття "компонента еукаріотичних клітин" включає як цільні клітини, так ії фрагменти вказаних еукаріотичних клітин. Поняття "фрагмент" стосується будь-яких частин еукаріотичної клітини, таких як частини клітинної мембрани або внутрішньоклітинні органели, у тому числі цільні органели або їх компоненти. Однак поняття "фрагмент" стосується також будь-якого компонента вказаної еукаріотичної клітини, такому як ліпіди, білки, цукри, ДНК, РНК і т.лп., а також їх комбінації. Крім того, компоненти еукаріотичних клітин і антигену мікоплазм в імуногенній композиції можуть або знаходитися окремо один від одного, або бути приєднані один до одного, або знаходитися у вигляді комбінації вказаних положень.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є імуногенна композиція, яку можна одержувати способом, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, де імуногенна композиція містить компоненти еукаріотичних клітин із вказаної системи на основі еукаріотичних клітин. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
У наступному об'єкті винаходу вказані компоненти еукаріотичних клітин приєднані до антигену мікоплазм.
Поняття "приєднаний" стосується будь-якої взаємодії, асоціації, зв'язування, прикріплення або зшивання вказаних компонентів еукаріотичних клітин з антигеном мікоплазм. Таким чином, поняття "приєднаний" включає будь-які взаємодії, включаючи непрямі й прямі, необоротні або оборотні, фізичні й хімічні, електростатичні та/"або ковалентні зв'язки. Так, повинно бути очевидно, що компоненти еукаріотичних клітин, наприклад, можуть бути зв'язані з антигеном
Зо мікоплазм. Однак слід розуміти, що компоненти еукаріотичних клітин можуть також бути зшиті з антигеном(ами) мікоплазм. Вказане зшивання можна одержувати декількома методами, добре відомими фахівцеві в даній галузі, наприклад, шляхом обробки формальдегідом і т.п.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу є імуногенна композиція, яку можна одержувати способом, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, у якій вказані компоненти еукаріотичних клітин приєднані до антигену мікоплазм.
Як правило, коли застосовують бактеріальний антиген, такий як мікоплазматичний бактерин, імуногенна композиція містить від приблизно 103 до приблизно 1072 колонієутворюючих одиниць (КУО) бактеріального антигену на дозу, переважно від приблизно 107 до приблизно 107 КУО бактеріального антигену на дозу, більш переважно від приблизно 1075 до приблизно 106 КУО бактеріального антигену на дозу. Якщо в імуногенній композиції застосовують інактивований бактерин, то величина КУО стосується кількості мікоплазматичних бактерій до інактивації.
Наприклад, імуногенну композицію, запропоновану в даному винаході, яка містить антигени
М. пуорпештопіає, переважно застосовують у кількостях, що становлять від приблизно 102 до приблизно 1019 КУО на дозу, переважно від приблизно 103 до приблизно 109 КУО на дозу, ще більш переважно в кількості від приблизно 107 до приблизно 108 КУО на дозу, найбільш переважно в кількості від приблизно 105 до приблизно 107 КУО на дозу. Імуногенну композицію, запропоновану в даному винаході, яка містить антигени М. пуопіпі5, переважно застосовують у
БО кількостях, що становлять від приблизно 107 до приблизно 109 КУО на дозу, переважно від приблизно 103 до приблизно 107 КУО на дозу, ще більш переважно в кількості від приблизно 107 до приблизно 109 КУО на дозу, найбільш переважно в кількості від приблизно 1097 до приблизно 107 КУО на дозу. Імуногенну композицію, запропоновану в даному винаході, яка містить антигени М. пуозупоміає, переважно застосовують у кількостях, що становлять від приблизно 102 до приблизно 107192 КУО на дозу, переважно від приблизно 103 до приблизно 109 КУО на дозу, ще більш переважно в кількості від приблизно 107 до приблизно 108 КУО на дозу, найбільш переважно в кількості від приблизно 105 до приблизно 10" КУОС на дозу.
Таким чином, одним з об'єктів даного винаходу спосіб одержання імуногенної композиції, що полягає в тому, що а) культивують мікоплазматичні бактерії в системі на основі еукаріотичних бо клітин із зниженим вмістом сироватки або без свинячої сироватки; б) одержують антиген мікоплазматичних бактерій; і в) додають фармацевтично прийнятний носій, де імуногенна композиція містить від приблизно 103 до приблизно 102 колонієутворюючих одиниць (КУО) бактеріального антигену на дозу. Переважно принаймні один з антигенів мікоплазм являє собою цільний інактивований мікоплазматичний бактерин, переважно інактивований формаліном. Слід розуміти, що тільки один, декілька або всі мікоплазматичні антигени може (уть) являти собою цільний інактивований бактерин.
Фахівцеві в даній галузі повинно бути очевидно, що різні стадії процесів, що входять у способи одержання імуногенної композиції, представленої в даному описі, можна поєднувати при втіленні на практиці винаходу, представленого в даному описі.
Приклади
Наведені нижче приклади представлені тільки з метою ілюстрації даного винаходу. Вони не повинні розглядатися, як такі, що обмежують яким-небудь способом обсяг формули винаходу.
Приклад 1
Культивування мікоплазматичних бактерій в МОСК-клітинах або МеосСоу-клітині відповідно
А. Культивування М. пуогпіпі5, М. пуозупоміає і М. пуорпештопіає в МОСК-клітинах
М. нуотіпів:
Клітини МОСК, вирощені в Т75-колбі(ах) до досягнення конфлюентності, обробляли трипсином і пересівали в 5 Т150-колб (розщеплення 1:10), використовуючи середовище
МЕМ 5 95 ЕВ5. Колби інкубували при 379С--5 95 СО» до досягнення моношаром конфлюентності приблизно 95-100 95. Середовище відкидали, колби промивали двічі 1-кратним ЗФР. Потім у кожну колбу додавали 4-5 мл М. пуоптіпів (МОІ-10-100). Давали пройти зараженню в колбах в однакових умовах інкубації протягом періоду часу, що становить не менше 2 год. Після періоду зараження в кожну колбу додавали середовище для інфікування (МЕМ--2 95 ЕВ5), попередньо нагріте приблизно до 372С, у кількості, достатній до досягнення об'єму в кожній колбі 60 мл.
Потім колбам давали пройти інкубацію до досягнення » 90 95 ЦПД (приблизно 3-7 днів). Потім збирали клітинну суспензію з кожної колби й об'єднували (пасаж п). Потім цей продукт використовували для зараження нових колб МОСкК-клітинами, що досягли 95-100 95 конфлюентності, використовуючи таку ж процедуру, що й для попереднього зараження (пасаж пя1), збільшуючи кількість колб, застосовуваних для досягнення необхідного відповідного
Зо кінцевого об'єму (пасаж п2, пасаж пЗ і т.д.).
М. пуозупоміає
М. пуозупоміає культивували також як М. Ппуогпіпі5 з декількома модифікаціями: середовище для інфікування містила ОМЕМ»2 95 ЕВ5--1 95 розчину аргініну; М. пуозупоміає, як правило, не характеризувалася ЦПД, тому зміна кольору й каламутності середовища були індикатором, що має вирішальне значення, для пересівання з одержанням наступного пасажу.
М. пуорпеитопіає
М. пуорпештопіає культивували також як М. Ппуогпіпіз. Залежно від застосовуваного для зараження штаму ЦПД могло проявлятися або відсутнє. Тому зміну кольору й каламутності середовища можна використовувати як індикатор для пересівання з одержанням наступного пасажу.
Б. Умови культивування М. пуогппіпі5, М. пуозупоміає і М. пуорпештопіає в МеСоу-клітинах
М. нуотіпів:
МеСоу-клітини вирощували в суспензійних культурах у перемішуваних колбах у модифікованому середовищі ЕМЕМ, доповненому 10 95 ЕВ5. Клітини пересівали в нові колби так, щоб кінцева концентрація становила 105-106 клітин/мл. Для М. Ппуогпіпіз 500 мл клітин з концентрацією 105-106 клітин/мл висівали в З-літрову колбу з розрахунку 107-108 КУО в 1 мл.
Потім колби інкубували при 37 "С у присутності 5 95 СО» на магнітній мішалці протягом 3-7 днів.
Моніторинг росту мікоплазм здійснювали шляхом візуального визначення зміни кислотності (рН) і підвищення каламутності. Ріст мікоплазм оцінювали також шляхом аналізу БОЕ для визначення їх кількості.
М. пуозупоміає
М. Нуозупоміає культивували в такий же спосіб, як і М. Пуогпіпіз. 500 мл клітин з концентрацією 105-105 клітин/мл висівали в З-літрову колбу з розрахунку 105-107 КУО в 1 мл.
Потім колби інкубували при 379С у присутності 595 СО» на магнітній мішалці протягом приблизно 2 тижнів. Для оцінки росту визначали як зміну рН, так і підвищення каламутності, додатково до аналізів БОЕ для оцінки кількостей.
М. пуорпеитопіає
М. пуорпештопіає культивували в такий же спосіб, як і М. пуогпіпі5 і М. пуозупоміає. 500 мл клітин з концентрацією 105-106 клітин/мл висівали в З-літрову колбу з розрахунку 105-107 КУО в 60 1 мл. Потім колби інкубували при 372С у присутності 5 95 СО» на магнітній мішалці протягом приблизно 2 тижнів. Для оцінки росту можна застосовувати як визначення зміни рн, так і оцінку підвищення каламутності, додатково до аналізів БОЕ для оцінки кількості.
В. Культивування різних видів мікоплазм із різними типами сироватки
Для вирішення питання про те, чи можна культивувати види мікоплазм із використанням сироватки від різних видів, МОСК-клітини заражали М. Ппуогпіпіз і культивували з використанням сироватки плода корови, свинячої сироватки, кролячої сироватки, курячої сироватки або кінської сироватки відповідно. Для кожного типу сироватки культивували М. пуоптпіпіз в МОСК-клітинах відповідно до описаного вище методу (тобто застосовували 5 95 сироватки для вирощування клітин і 2 95 сироватки для зараження). М. пуогппіпі5 збирали через 4 дня після зараження згідно зі стандартним методом. Аналіз ССО (одиниця зміни кольору) здійснювали для визначення титру живих М. пуопіпі5. Крім того, здійснювали ЧПЛР (кількісна полімеразна ланцюгова реакція в реальному часі) для визначення загального вмісту геному (9дс) М. Впуопіпіб5. Результати наведеного як приклад експерименту представлено в таблиці 1.
Таблиця 1
Культивування М. пуогпіпі5 з використанням різних типів сироватки (Свинячасироватла.д 77777 Ї1111717111111л6061111111111 11111111 850С1С (Кінськасироваткаїд 7777711 Ї11777717171117л649177777771 11117111 9001
У таблиці 1 продемонстровано, що титри, виміряні або за допомогою аналізу СС, або за допомогою ДПЛР, виявилися подібними при використанні різних типів сироватки. Крім того, дані, отримані методом вестерн-блотингу (не представлені), підтвердили вказаний результат. Таким чином, М. пуогпіпіз можна культивувати в МОСК-клітинах незалежно від типу застосовуваної для культивування сироватки.
Приклад 2
Приготування вакцин
Коли останній пасаж був готовий для збору (наявність »90 95 ЦПД), здійснювали один цикл заморожування-відтавання у всіх колбах шляхом витримування їх у морозильній камері при температурі « -602С протягом 22 год., швидкого відтавання при 372С, збору й об'єднання лізатів, і піпетування наверх й вниз до гомогенізації. Як правило, потім до цієї суспензії додавали 10- 20 95 гліцерину й гомогенізували. Вказану суспензію розділяли на аліквотів робочого об'єму.
Маточні розчини зберігали при температурі « -602С до застосування.
Необхідні обсяги вказаних вище маточних розчинів інактивували за допомогою 0,2 95
Зо формаліну. Надлишок формаліну нейтралізували бісульфітом натрію в момент змішання вакцини. Вакцини змішували з ад'ювантом Мопіапіде "м ІЗА 207 МО або з ад'ювантом СагророїФ).
Вакцини зберігали при 2-76.
Приклад З
Оцінка ефективності вакцин
Ефективність вакцин оцінювали за їх здатністю викликати гуморальну імунну відповідь (а також за титром, визначеним за допомогою ЕГІЗА) після введення свиням.
Догляд за тваринами
Перед початком експерименту тварини мали хороший стан здоров'я й фон харчування.
Перед процедурою рандомізації й оцінки здійснювали визначення стану здоров'я. Під час експерименту використовували немедичний корм. Кормовий раціон відповідав віку, стану й виду тестованої тварини згідно зі стандартною процедурою вирощування у виробничих умовах. Під час експерименту тварини мали вільний доступ до води.
Оцінка ефективності вакцин на основі М. Ппуогіпіпіз і М. Нуорпеитопіає після введення свиням
М. нуотіпів:
Нормальним поросятам віком 6 тижнів ж 5 днів вводили внутрішньом'язово дозу об'ємом 2 мл (7,1-7,3 їс910 ССИМ/дозу) у день 0 (БО) і знову в день 21 (021) вакцини на основі М. пуотіпів.
М. пуоппіпіз культивували в МОСК-клітинах відповідно до описаного вище методу. У вакцину додавали ад'ювант Монтанід ІЗА207Ус або САЕВОРОЇ Ф. Як плацебо використовували ЗФР.
Загальний стан здоров'я поросят оцінювали щодня. Зразки крові збирали перед вакцинацією в
ОО, ї в дні 7, 14, 21, 28, 35 і 42. Сироватку тестували у відношенні специфічних у відношенні М.
Нуогпіпіз антитіл за допомогою непрямого ЕГІЗА фірми ВІМІ КО. При застосуванні ЕГІЗА фірми ВІМІ КО співвідношення 5/Р » 0,200 розглядали як позитивне.
Як продемонстровано в таблиці 2, за даними ЕЇІ5А М. Пуогпіпіє викликала сильну гуморальну імунну відповідь. 6/6 (100 95) тварин, вакцинованих М. Нуогпіпіз-МОСК - Монтанід
ІЗА207УЄ виявилися позитивними через 2 тижні після обробки першою дозою (014). Усі тварини залишалися позитивними аж до 042, при цьому підвищення титрів виявлене після застосування другої дози (028). У тварин, вакцинованих М. пуоптіпі--МОСК--СагророїФ, також виявлена гуморальна імунна відповідь.
Таблиця 2
Отримані за допомогою ЕГІ5ЗА результати для М. пуогпіпі5 77111111... | Довакцинацї | 00 | 07 | 014 | 021 | 028 | 035 | 042
МЕВОе| ев оов вот пив тою пояег ло
Монтанід ІЗА2О7УО й й й й й й й
М.Ннуотіпів МОСК --
Аналогічні результати, що стосуються гуморальної імунної відповіді після вакцинації, одержували при культивуванні М.пуогпіпіх в МоСоу-клітинах (дані не представлені). Аналогічні результати одержували після однодозової обробки (дані не представлені).
М. пуорпеитопіає
Усім нормальним поросятам віком б тижнів ж 5 днів вводили внутрішньом'язово дозу об'ємом 2 мл (8,0-8,5 (910 ССИМ/дозу) в БО і знову в 021 вакцину на основі М. пуорпештопіає. У вакцину додавали ад'ювант Монтанід ІЗА207Ус. Як плацебо використовували ЗФР. Загальний стан здоров'я поросят оцінювали щодня. Зразки крові збирали перед вакцинацією в ОО, і в дні 7, 14, 21, 28, 35 і 42 для тестування відносно присутності антитіл до М. пуорпештопіає. В одному із прикладів застосовували набір, що продається, для ЕГІЗА фірми ІЮЕХХ. При застосуванні
ЕПІЗА фірми ІСЕХХ співвідношення 5/Р » 0,400 розглядали як позитивне.
Як продемонстровано в таблиці 3, за даними ЕГІ5А М. пуорпештопіає викликала сильну гуморальну імунну відповідь. З вакцинованих М. пуорпептопіае МОСКУІЗА207 тварин 3/6 (50 Фо) виявилися позитивними в 014 і 5/6 (83,3 90) в 021, а 6/6 (100 95) виявилися позитивними в 028, 35 і 42.
Таблиця З
Отримані за допомогою ЕГІЗА фірми ІШЕХХ результати для М. пуорпештопіає 71111111... |Довакцинаці| 00 | 07 | 014 | О21 | 028 | 035 | аг
М. пуорпешитопіає МОСКІ
Аналогічні результати одержували після однодозової обробки (дані не представлені).
Приклад 4
Ефективність вакцин, отриманих з мікоплазматичних бактерій, які культивували в лінії еукаріотичних клітин, у порівнянні з вакцинами, отриманими з мікоплазматичних бактерій, які культивували в безклітинній системі 54 тваринних лінії СЮ/СО віком 8 тижнів ж 5 днів розділяли на 6 груп. Кожну із груп М1 і М2 обробляли інактивованим ізолятом М. Пуогпіпіх, який культивували в МОСК-клітинах і середовищі СМ (комплексне середовище; наприклад, середовище на основі протеозного пептону, що містить свинячу сироватку й дріжджовий екстракт, або середовище Фриза) відповідно; групу МУЗ ії М4 обробляли інактивованим ізолятом М. пуоптіпіх, який культивували в
МОСК-середовищу й СМ відповідно. В усі вакцини як ад'ювант додавали Монтанід ІЗА207МО; доза й шлях відповідали схемі 2х2 мл, дози вводили шляхом внутрішньом'язової ін'єкції однієї дози в ОО, а другої дози в 021. Групу СС (контрольна група) обробляли плацебо без антигену (ЗФР) відповідно такій же схемі. Групу 5С (строгий контроль) не обробляли протягом експерименту, ці тварини служили як строгий контроль. В 042, 43 і 44 свиней у групах М1-М4А і
СС піддавали контрольному зараженню вірулентним ізолятом М. Пуогпіпіз. Доза й шлях відповідали схемі: 40 мл внутрішньоочеревинно, 15 мл внутрішньовенно й 15 мл інтраназально відповідно. Зразки крові збирали щотижня, починаючи з 00, і до закінчення експерименту (058) для тестування за допомогою специфічного для М. Ппуопіпіз ЕГІЗА. При застосуванні ЕГІ5А фірми КУО співвідношення 5/Р » 0,200 розглядали як позитивне. У наведеному як приклад експерименті, результати якого представлено в таблиці 4, усі свині в 5С-групі залишалися негативними протягом експерименту, що свідчило про відсутність експозиції М. пуогппіпі5. Групи
М І-М4 і СС були негативними в 00 і 7. Однак серологічні результати варіювалися в значній мірі між вакцинами на основі СМ і на основі МОСК. У порівнянні з вакцинами на основі СМ для вакцин на основі МОСК виявлений більш ранній початок сероконверсії, більша кількість серопозитивних свиней і більш високі серологічні титри.
Таблиця 4
Отримані за допомогою ЕГІ5ЗА результати для М. пуогпіпів
М. пуогпіпі5, ЕГІЗА, середні співвідношення З/Р у групі .. Грула. | 00 | 07 | 014 | 21 | о28 | 035 | раг | 049 | о58
Крім того, здійснювали експерименти з титрування для порівняння вакцин, отриманих за допомогою клітинних культур, з вакцинами на основі мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі.
М. пуогпіпіз культивували в МеоСоу-клітинах відповідно до описаного вище методу або культивували в СМ (комплексне середовище) відповідно.
Готували вакцини з антигеном, отриманим з використанням МесСоу, застосовуючи нерозведений антиген (повний), антиген, розведений у співвідношенні 1:10, ї антиген, розведений у співвідношенні 1:100, усі змішані в співвідношенні 1:11 із застосовуваним як ад'ювант Монтанідом ІЗА207Ус. Аналогічним способом готували вакцини з використанням отриманого в СМ антигену.
Свиней (вік у момент вакцинації становив З тижні) вакцинували, використовуючи одну дозу об'ємом 2 мл, яку вводили ІМ у день 0.
Як продемонстровано в таблиці 5, перед контрольним зараженням (000-021) усі групи в середньому розглядалися як "негативні" хоча в групі "МеСоуіІ5А "повний" (антиген)» і "МеСоутхіІЗА 1:10") виявлені відповіді, що мають тенденцію до позитивності. Через 1 тиждень
Зо після контрольного зараження (028) виявлена відповідь у всіх вакцинованих групах, крім групи "СМАІ5А 1:100".
З таблиці 5 очевидно, що для кожного типу антигену (МеСоу, СМ) виявлений стандартний титраційний ефект ("повний»»1:1021:100). Крім того, у таблиці 5 продемонстровано, що тварини із групи "МеСоухІ5А "повний»» і "МеСоутіЗА 1:10" мали більш високі середні бали, у порівнянні із групою, обробленою "СМУІ5А "повний", і ця особливість зберігалася до закінчення досліду в 042. Групи з позитивними (5/Р 2 0,200) середніми значеннями після контрольного зараження являли собою групи "МеСоуї "повний" і "МеСоуж1:10". При застосуванні вакцин "МеСоух "повний" і "МеСоуїн1:10" отримана більш висока серологічна відповідь у порівнянні з вакциною "СМ. "повний" як до контрольного зараження, так і після контрольного зараження. Крім того, у тварин, вакцинованих "МеСоуч1:100", також виявлена відповідь, що відрізняється від відповіді в обробленій плацебо (невакцинованій) групі й групі "СМа-1:100" (відповідь у групі, обробленій "СМя-1:100", або її відсутність виявилися еквівалентними з відповіддю в невакцинованих тварин). Експерименти з титрування продемонстрували, що вакцини на основі клітинних культур забезпечували переважні серологічні результати в порівнянні з вакцинами з мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі.
Таблиця 5
Отримані за допомогою ЕГІ5ЗА результати для М. пуогпіпі5
М. пуотіпів, ЕГІ5А, середні співвідношення 5/Р у групі 7111. Грула./ | 00 | 07 | 014 | 021 | 028 | 035 | 042
Claims (17)
1. Спосіб одержання імуногенної композиції, призначеної для лікування та/або профілактики інфекцій, які викликаються мікоплазмами, у суб'єкта, що включає а) культивування мікоплазматичних бактерій, які вибирають з групи, що складається з: М. Ппуорпештопіає, М. пуогпіпіх і М. пуозупоміає, у системі на основі еукаріотичних клітин із зниженим вмістом сироватки, де вказана система містить клітинну лінію МОСК або МесСоу; б) одержання антигену мікоплазматичних бактерій, де антиген являє собою повний інактивований бактерин, і в) додавання фармацевтично прийнятного носія.
2. Спосіб за п. 1, у якому сироватка вільна від свинячої сироватки.
3. Спосіб за п. 1, у якому мікоплазматичні бактерії культивують у відсутності сироватки.
4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, у якому імуногенна композиція являє собою імуногенну композицію на основі мікоплазм.
5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, у якому антиген має підвищену імуногенність в порівнянні з антигеном, отриманим з мікоплазматичних бактерій, культивованих у безклітинній системі культивування.
б. Спосіб за будь-яким з пп. 1-5, у якому повний інактивований бактерин являє собою інактивований формаліном бактерин.
7. Спосіб за будь-яким з пп. 1-6, у якому вказану імуногенну композицію готують у вигляді форми для однодозового введення.
8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, у якому вказаний суб'єкт являє собою свиню.
9. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, у якому суб'єкт являє собою корову.
10. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, у якому суб'єкт являє собою кішку.
11. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, у якому суб'єкт являє собою собаку.
12. Спосіб за будь-яким з пп. 1-11, у якому вказаний фармацевтично прийнятний носій вибирають із групи, яка складається з розчинників, дисперсійних середовищ, агентів для нанесення покриттів, стабілізаторів, розріджувачів, консервантів, антибактеріальних і протигрибкових засобів, агентів, що надають ізотонічність, агентів, що сповільнюють адсорбцію, ад'ювантів, засобів, що стимулюють імунну систему, і їх комбінацій.
13. Спосіб за будь-яким з пп. 1-12, у якому вказаний фармацевтично прийнятний носій являє собою ад'ювант, вибраний із групи, яка складається з гідроксиду алюмінію, фосфату алюмінію, сапонінів, емульсії вода-у-маслі, емульсії масло-у-воді, емульсії вода-у-маслі-у-воді, полімерів акрилової або метакрилової кислоти, співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільного похідного, ад'ювантної системи КІВІ, блок-співполімеру, 5АБЕ-М, монофосфорил-ліпіду А, авридин ліпід-аміну, термолабільного ентеротоксину з Е. соїї (рекомбінантного або іншого), холерного токсину, ІМ5 1314, мурамілдипептиду і їх комбінацій.
14. Спосіб за будь-яким з пп. 1-13, у якому вказаний фармацевтично прийнятний носій являє собою емульсію вода-у-маслі-у воді або карбомер.
15. Спосіб за будь-яким з пп. 1-14, призначений для підвищення імуногенності антигену.
16. Спосіб за п. 15, у якому антиген має підвищену імуногенність в порівнянні з антигеном, отриманим з мікоплазматичних бактерій, які культивували в безклітинній системі культивування.
17. Імуногенна композиція, яку можна одержувати способом за будь-яким з пп. 1-16.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261746997P | 2012-12-28 | 2012-12-28 | |
| PCT/US2013/076807 WO2014105672A1 (en) | 2012-12-28 | 2013-12-20 | Method of making a mycoplasma vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA121193C2 true UA121193C2 (uk) | 2020-04-27 |
Family
ID=49917778
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201507463A UA121193C2 (uk) | 2012-12-28 | 2013-12-20 | Спосіб одержання імуногенної композиції проти мікоплазми |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9273281B2 (uk) |
| EP (1) | EP2938747B1 (uk) |
| JP (2) | JP6122146B2 (uk) |
| KR (1) | KR102153275B1 (uk) |
| CN (2) | CN104968365B (uk) |
| AR (1) | AR094648A1 (uk) |
| AU (1) | AU2013370983B2 (uk) |
| BR (1) | BR112015012711B1 (uk) |
| CA (1) | CA2896298C (uk) |
| CL (1) | CL2015001562A1 (uk) |
| DK (1) | DK2938747T3 (uk) |
| EA (1) | EA032772B1 (uk) |
| ES (1) | ES2738100T3 (uk) |
| HU (1) | HUE045015T2 (uk) |
| MX (1) | MX361273B (uk) |
| MY (1) | MY173223A (uk) |
| PH (1) | PH12015501333A1 (uk) |
| PL (1) | PL2938747T3 (uk) |
| PT (1) | PT2938747T (uk) |
| SG (2) | SG11201505089YA (uk) |
| TW (2) | TWI660736B (uk) |
| UA (1) | UA121193C2 (uk) |
| WO (1) | WO2014105672A1 (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8546149B2 (en) | 2010-08-27 | 2013-10-01 | Intervet Inc. | Potency test for vaccine formulations |
| CN104968365B (zh) * | 2012-12-28 | 2018-04-03 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | 支原体疫苗的制备方法 |
| KR102355614B1 (ko) * | 2012-12-28 | 2022-01-27 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 마이코플라스마 항원을 포함하는 면역원성 조성물 |
| CN105441368B (zh) * | 2016-01-19 | 2019-01-01 | 福清市默克兽医院 | 一株牛支原体及其应用 |
| WO2017132578A1 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Advanced Animal Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for detecting mycoplasma exposure |
| WO2018027526A1 (zh) * | 2016-08-09 | 2018-02-15 | 财团法人农业科技研究院 | 防治猪鼻霉浆菌感染的组合物及生产该组合物的方法 |
| EP3576799A4 (en) * | 2017-02-03 | 2020-12-30 | The Administrators of The Tulane Educational Fund | OPHTHALMIC COMPOSITIONS FOR THERAPY AND PROPHYLAXIS |
| CN110650989B (zh) | 2017-05-24 | 2023-03-31 | 三菱化学株式会社 | 成型材料、及纤维增强复合材料 |
| AU2020290984A1 (en) | 2019-06-10 | 2022-01-20 | Elanco Us Inc. | Mycoplasma media formulations |
| CN113201050B (zh) * | 2020-08-06 | 2022-07-22 | 青岛诺安百特生物技术有限公司 | 一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2909462A (en) | 1955-12-08 | 1959-10-20 | Bristol Myers Co | Acrylic acid polymer laxative compositions |
| GB1074920A (en) * | 1965-04-21 | 1967-07-05 | Pfizer & Co C | Growth medium for mycoplasma pneumoniae and vaccine production |
| GB1137306A (en) * | 1966-07-11 | 1968-12-18 | Research Corp | Inoculum for poultry |
| JPS5540568B2 (uk) | 1972-10-05 | 1980-10-18 | ||
| US5338543A (en) | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5885823A (en) * | 1995-06-05 | 1999-03-23 | Nobl Laboratories, Inc. | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents |
| ATE473272T1 (de) * | 2000-03-03 | 2010-07-15 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | In serumfreier kultur verwendbare zelle, kultursuspension und verfahren zur virusproduktion als impfstoff unter verwendung der zelle |
| JP3402304B2 (ja) * | 2000-03-30 | 2003-05-06 | 株式会社微生物化学研究所 | 猫クラミジアワクチンの製造方法 |
| MY129765A (en) | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US7018638B2 (en) | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| IL159349A0 (en) | 2001-07-02 | 2004-06-01 | Pfizer Prod Inc | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae |
| JP2004537543A (ja) | 2001-07-02 | 2004-12-16 | ファイザー・プロダクツ・インク | マイコプラズマ・ハイオニューモニエ・ワクチンおよび牛におけるマイコプラズマ・ボビス低減方法 |
| US20030147914A1 (en) | 2001-07-02 | 2003-08-07 | Pfizer Inc. | Mycoplasma bovis vaccine and methods of reducing pneumonia in animals |
| JP2005500845A (ja) | 2001-08-28 | 2005-01-13 | ファイザー・プロダクツ・インク | マイコプラズマ・ボビスチャレンジモデル並びにマイコプラズマ・ボビスの投与方法及び肺炎性肺病変の誘発方法 |
| TWI238721B (en) * | 2003-06-20 | 2005-09-01 | Animal Technology Inst Taiwan | Swine enzootic vaccine, its producing method and usage |
| CA2595556A1 (en) | 2005-02-09 | 2006-08-17 | Magna International Inc. | Method of manufacturing a semi-structural panel |
| JP4693839B2 (ja) * | 2005-03-10 | 2011-06-01 | 共立製薬株式会社 | 動物由来の成分なしで培養可能である細胞株及びその作出方法、これを用いたウイルスの生産方法、及びワクチンの生産方法 |
| WO2007042827A2 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Ivan Petyaev | Treatment and diagnosis of obligate intracellular pathogens |
| MX2009002741A (es) | 2006-09-15 | 2009-05-11 | Medimmune Llc | Lineas de celulas mdck que soportan el crecimiento viral para altos titulos y proceso de biorreactor que utiliza las mismas. |
| US20090068231A1 (en) | 2007-09-11 | 2009-03-12 | Wyeth | Live attenuated mycoplasma strains |
| UY31437A1 (es) | 2007-10-29 | 2009-05-29 | Vacuna de mycoplasma bovis y métodos de uso de la misma | |
| RU2489164C9 (ru) | 2007-11-06 | 2014-01-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | АВИРУЛЕНТНАЯ АДЪЮВАНТНАЯ ЖИВАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ Mycoplasma hyopneumoniae |
| EP2242511A4 (en) | 2008-01-23 | 2012-10-24 | Boehringer Ingelheim Vetmed | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE PCV2, AND METHODS FOR PRODUCING SUCH COMPOSITIONS |
| US8444989B1 (en) | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
| JPWO2009142086A1 (ja) | 2008-05-23 | 2011-09-29 | 学校法人 久留米大学 | マイコプラズマ感染症用ワクチン組成物 |
| ES2728949T3 (es) | 2008-06-27 | 2019-10-29 | Zoetis Services Llc | Composiciones adyuvantes novedosas |
| EP2362780B1 (en) | 2008-10-31 | 2019-12-25 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Use of various antigens including antigens from mycoplasma bovis in multivalent vaccine composition |
| EP2453913B1 (en) | 2009-05-19 | 2016-06-22 | Bioproperties Pty Ltd | A temperature sensitive vaccine strain of mycoplasma hyopneumoniae and uses thereof |
| US20110150770A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multivalent vaccine against porcine teschovirus and other disease causing organisms in swine |
| US8112663B2 (en) | 2010-03-26 | 2012-02-07 | Lsi Corporation | Method to establish redundancy and fault tolerance better than RAID level 6 without using parity |
| CN102258776B (zh) | 2011-07-07 | 2013-07-10 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 猪肺炎支原体、猪鼻支原体二联灭活疫苗及其制备方法 |
| UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
| UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| KR102355614B1 (ko) * | 2012-12-28 | 2022-01-27 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 마이코플라스마 항원을 포함하는 면역원성 조성물 |
| CN104968365B (zh) | 2012-12-28 | 2018-04-03 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | 支原体疫苗的制备方法 |
-
2013
- 2013-12-20 CN CN201380066001.XA patent/CN104968365B/zh active Active
- 2013-12-20 SG SG11201505089YA patent/SG11201505089YA/en unknown
- 2013-12-20 EA EA201500701A patent/EA032772B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-12-20 WO PCT/US2013/076807 patent/WO2014105672A1/en active Application Filing
- 2013-12-20 PL PL13817835T patent/PL2938747T3/pl unknown
- 2013-12-20 ES ES13817835T patent/ES2738100T3/es active Active
- 2013-12-20 DK DK13817835.5T patent/DK2938747T3/da active
- 2013-12-20 CN CN201810161003.1A patent/CN108379571A/zh active Pending
- 2013-12-20 CA CA2896298A patent/CA2896298C/en active Active
- 2013-12-20 SG SG10201708028VA patent/SG10201708028VA/en unknown
- 2013-12-20 EP EP13817835.5A patent/EP2938747B1/en active Active
- 2013-12-20 MX MX2015007730A patent/MX361273B/es active IP Right Grant
- 2013-12-20 US US14/135,796 patent/US9273281B2/en active Active
- 2013-12-20 MY MYPI2015001621A patent/MY173223A/en unknown
- 2013-12-20 BR BR112015012711-8A patent/BR112015012711B1/pt active IP Right Grant
- 2013-12-20 JP JP2015549759A patent/JP6122146B2/ja active Active
- 2013-12-20 HU HUE13817835 patent/HUE045015T2/hu unknown
- 2013-12-20 KR KR1020157020447A patent/KR102153275B1/ko active IP Right Grant
- 2013-12-20 PT PT13817835T patent/PT2938747T/pt unknown
- 2013-12-20 UA UAA201507463A patent/UA121193C2/uk unknown
- 2013-12-20 AU AU2013370983A patent/AU2013370983B2/en not_active Ceased
- 2013-12-27 TW TW107103700A patent/TWI660736B/zh active
- 2013-12-27 TW TW102148875A patent/TWI618542B/zh active
- 2013-12-27 AR ARP130105050A patent/AR094648A1/es unknown
-
2015
- 2015-06-05 CL CL2015001562A patent/CL2015001562A1/es unknown
- 2015-06-15 PH PH12015501333A patent/PH12015501333A1/en unknown
-
2016
- 2016-01-19 US US15/000,342 patent/US10512680B2/en active Active
-
2017
- 2017-03-30 JP JP2017067820A patent/JP6449364B2/ja active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA121193C2 (uk) | Спосіб одержання імуногенної композиції проти мікоплазми | |
| US10758602B2 (en) | Immunogenic composition comprising mycoplasma antigens |