UA120274C2 - Антиретровірусний лікарський засіб, націлений на ендогенний ретровірус людини - Google Patents

Антиретровірусний лікарський засіб, націлений на ендогенний ретровірус людини Download PDF

Info

Publication number
UA120274C2
UA120274C2 UAA201613240A UAA201613240A UA120274C2 UA 120274 C2 UA120274 C2 UA 120274C2 UA A201613240 A UAA201613240 A UA A201613240A UA A201613240 A UAA201613240 A UA A201613240A UA 120274 C2 UA120274 C2 UA 120274C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
nekm
zeo
expression
fragment
Prior art date
Application number
UAA201613240A
Other languages
English (en)
Inventor
Ерве Перрон
Эрве Перрон
Франсуа КЮРТЕН
Алоіс Ланґ
Алоис ЛАНГ
Рафаель Фокар
Жюлі Медіна
Жюли МЕДИНА
Александра Мадейра
Александра Мадэйра
Надєж Жеен
Надэж Жеен
Original Assignee
Женьоро Са
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Женьоро Са filed Critical Женьоро Са
Publication of UA120274C2 publication Critical patent/UA120274C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)

Abstract

Винахід стосується комбінованої композиції для застосування як антиретровірусного лікарського засобу, націленого на вірус, що належить до сімейства ендогенних ретровірусів людини типу W-типу (HERV-W), при запобіганні або лікуванні захворювання, що асоціюється з HERV-W, яка включає антитіло або його фрагмент, націлене проти білка оболонки HERV-W (HERV-W Env), та лікарський засіб, що інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу. Також винахід стосується застосування антитіла або його фрагменту, спрямованого проти білка оболонки HERV-W (Н ERV-W Env), у комбінації з лікарським засобом, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, при запобіганні або лікуванні захворювання, що асоціюється з HERV-W, та способу запобігання або лікування HERV-W-асоційованого захворювання.

Description

НЕВМУ-МУ, яка включає антитіло або його фрагмент, націлене проти білка оболонки НЕКМ-М/ (НЕВУ-МУ Епу), та лікарський засіб, що інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу. Також винахід стосується застосування антитіла або його фрагменту, спрямованого проти білка оболонки НЕВМ-М/ (Н ЕВУ-МУ Епу), у комбінації з лікарським засобом, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, при запобіганні або лікуванні захворювання, що асоціюється з НЕНУ-
МУ, та способу запобігання або лікування НЕВНМ-М/-асоційованого захворювання.
Галузь техніки, до якої відноситься винахід
Даний винахід відноситься до нового антиретровірусного лікарського засобу, націленого на ендогенний ретровірус людини.
Попередній рівень техніки
Ендогенні ретровіруси людини (НЕКМУ) є складними й гетерогенними багатокопійними родинами генетичних елементів, які є залишками предкових ретровірусних інфекцій, які увійшли до геному деяких видів як вставки у зародкових клітинах. У цілому НЕКМ елементи становлять близько 895 людського генома й, якщо НЕКМ-елементи зберегли транскрипційну активність, то рідко викликають повну експресію ретровірусного генома, і майже не очікується, що вона походить із повністю функціональних провірусних копій.
Ретровірусний елемент, асоційований з розсіяним склерозом (М5КУ), який є представником родини ендогенних ретровірусів М/-типу (НЕКМ-М), уперше був виділений із клітин пацієнтів, які страждають на розсіяний склероз. М5КМ звичайно схований у геномі індивідуумів, але при спрацьовуванні таких кофакторів, як деякі поширені віруси, він може бути реактивований, після чого може експресувати білок оболонки родини НЕКМ-МУ. Автори винаходу раніше досліджували цей механізм і продемонстрували, що він є одним з основних факторів запуску й посилення розвитку й прогресування різних захворювань, таких як розсіяний склероз (М5), шизофренія (52), біполярний розлад (ВР), однополярна або психотична депресія, клінічно ізольований синдром (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічна запальна демієлінізуюча полінейропатія (СІОР), епілепсія, псоріаз, рак, запальний панкреатит і цукровий діабет, наприклад діабет 1-го або 2-го типу.
Незважаючи на можливу експресію всіх структурних ретровірусних генів НЕКМ, тобто матриці, яка кодується геном дад, поліпротеїну-прекурсору капсида й нуклеокапсида, разом з ретровірусними ферментами, які кодуються геном рої, включаючи поліпротеїн-прекурсор протеази, зворотної транскриптази й інтегрази, і разом з геном епу, який кодує білок-прекурсор оболонки того ж НЕКМ, до сьогоднішнього дня інфекційна ретровірусна копія НЕКМ не була виявлена.
Крім того, на відміну від екзогенних інфекційних ретровірусів, НЕКМ присутні в ДНК усіх клітин кожного людського індивідуума й, отже, терапевтичні молекули, які класично
Зо використовуються для лікування ретровірусів людини, не можуть усунути відповідний провірус у субпопуляції резервуарних клітин. Багато клітинних і генетичних обмежень цих ендогенних елементів також роблять їх контрольованими неретровірусними молекулярними механізмами, що, таким чином, дозволяє уникнути класичних ретровірусних шляхів. Серед цих різних механізмів, відомими є залучення генного сайленсинга, генного контролю клітинним промотором/енхансером або генетичною рекомбінацією між НЕКМ-послідовностями й клітинними генами. Такі особливості не очікуються у випадку класичних екзогенних ретровірусів і, отже, не доступні для існуючої в цей час антиретровірусної терапії.
За таких умов не можна очікувати, що способи лікування класичних екзогенних ретровірусів приведуть до повного контролю патогенної експресії НЕКМ і, отже, що вони мають оптимальну терапевтичну ефективність, за наявності такої, у відношенні НЕКМ-асоційованих захворювань.
Існує, таким чином, незадоволена протягом тривалого періоду часу потреба нової антиретровірусної терапевтичної стратегії, орієнтованої на віруси НЕКМ.
Сутність винаходу
Автори винаходу на свій подив виявили, що несподіваний анти-НЕКМ ефект, націлений на ендогенні елементи із родини НЕКМ-М/ може зменшити й інгібувати експресію НЕКУ-МУ. Таким чином, у першому аспекті, даний винахід відноситься до антитіла, його фрагмента або похідного, яке можна застосовувати як антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який належить до ендогенних ретровірусів людини (НЕКУМ), де зазначене антитіло спрямоване проти білка оболонки НЕКМ-МУ (Епм НЕВМУ-МУ). Бажано, щоб зазначене антитіло, фрагмент або похідне були призначені для профілактики й/"або лікування НЕКМ-М/-асоційованого захворювання. Краще, якщо зазначене антитіло призначене для профілактики й/або лікування розсіяного склерозу (М5) або хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР). Ще краще, якщо зазначене антитіло є моноклональним гуманізованим антитілом, у якому важкий ланцюг (НС) має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 9, а легкий ланцюг (І.С) має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 10.
У другому аспекті даний винахід відноситься до композиції, яка містить, чи краще, складається з, антитіла, його фрагмента або похідного, спрямованого проти білка оболонки
НЕВУ-МУ (Епм НЕВУ-М), і лікарського засобу, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, для застосування як антиретровірусного лікарського засобу, націленого на вірус, який належить бо до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ).
У третьому аспекті даний винахід відноситься до антитіла, його фрагментів або похідних, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-МУ (Еплм НЕВУ-МУ), а також лікарського засобу, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, як комбінованої композиції для одночасного, роздільного або послідовного застосування в способі лікування НЕКМ-М/-асоційованого захворювання, переважно захворювання, обраного із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (57), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го або 2-го типу.
У четвертому аспекті даний винахід відноситься до набору, який містить, щонайменше, один олігонуклеотид, обраний із групи, яка складається з 5ЕО І МО: 11 - 28.
У п'ятому аспекті даний винахід відноситься до антитіла, його фрагмента або похідного, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-М/ (Епи НЕНВМ-М/), яке можна застосовувати як антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який належить до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ), переважно до родини НЕКМ-МУ, краще до М5КУ, у пацієнта, який страждає від НЕКМ-М/-асоційованого захворювання, де зазначений пацієнт ідентифікується способом, який включає стадію ї) детекції й/або кількісної оцінки НЕНМ-МУ у біологічному зразку.
Докладний опис винаходу
Визначення
Терміни «людський ендогенний ретровірус» і «НЕКМ», який використовується в даному описі, відноситься до ендогенних ретровірусів людини, які містять вірус, який відноситься до родини ендогенних ретровірусів М/-типу, як правило, під назвою «НЕКМ-УУ». «НЕКМ-МУ» є родиною ендогенних ретровірусів людини, яка ідентифікована в геномі людини після початкового відкриття «ретровіруса, асоційованого із множинним склерозом», МЕМ, ретровірусом людини, уперше виділеним у пацієнтів з розсіяним склерозом. Тому, коли в дослідженні згадуються «І М7» (перший ізолят, описаний для М5) «М5-ретровірус», «М5КУМ», «Синцитін», «НЕКМ-ММ 70», «ЕКММУУ-Е1», «ЕКММУМ-Е2», «копії НЕКМ-М з Х-хромосоми» або «НЕКМ-
У», то вони всі позначають елементи НЕКМ-МУ.
Термін «М5КУ», який використовується у даному описі відноситься до певного ендогенного
Зо ретровірусу, який є представником родини НЕКМ-МУ. У контексті даного винаходу, обидва терміна «НЕКМ-МУ» і «МОКУ» позначають елементи НЕКМ-МУ. Зокрема, обидва вирази «НЕКМ-
М Епу» і «М5КМ-ЕМУ» відноситься до тих самих оболонкових білків. Як правило, можливі деякі варіації в амінокислотній послідовності, які не запобігають зв'язуванню специфічних анти-ЕММ антитіл для терапевтичного застосування, зокрема, антитіла, які містить важкий ланцюг (НС) з амінокислотною послідовністю, зазначеною в 5БО ІЮО МО: 9 і легкий ланцюг (ІС) з амінокислотною послідовністю, зазначеною в ЗЕО ІО Мо: 10.
Вираз «НЕКМ-М/-асоційоване захворювання», яке використовується в даному описі відноситься до патологічного стану, пов'язаного з експресією НЕКМ-М/, переважно білка оболонки НЕКМ-МУ. Як правило, зазначене НЕКМ-М/-асоційоване захворювання є хронічним запальним захворюванням. Термін «хронічне запальне захворювання», який використовується у даному описі, відноситься до будь-якого захворювання, у якому, залишкове або рецидивуюче запалення контролюється вродженим імунітетом і/або адаптивним імунітетом, який бере участь в ушкодженні тканин і/або може бути виявлене локально або системно через надлишкову експресію прозапальних молекул.
Бажано, зазначене НЕРМ-М/-асоційоване захворювання обирається із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (572), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го або 2-го типу. Ще краще, якщо НЕКМ-МУ-асоційоване захворювання обирається із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5) і хронічної запальної демієлінізуючої поліневропатії (СІОР), які обидва є демієлінізуючими захворюваннями.
Терміни «здійснювати лікування» або «лікування», які використовуються у даному документі, означає регресію, полегшення, пригнічення розвитку або запобігання розладу або стану, до якого цей термін застосовується, або регресію, полегшення, пригнічення розвитку, або запобігання одного або декількох симптомів захворювання або стану, до якого цей термін застосовується.
Термін «запобігання», який використовується у даному описі, означає запобігання захворювання або стану в об'єкта, який ще не мав клінічних симптомів, типових уражень або 60 фізіологічних дисфункцій, які дозволили б поставити її клінічний діагноз.
Терміни «антитіло» або «імуноглобулін», які використовуються в даному документі, мають однакове значення, і будуть використовуватися даному винаході як взаємозамінні. Термін «антитіло», який використовується у даному описі, відноситься до молекул імуноглобулінів та імунологічно активних частин молекул імуноглобулінів, тобто до молекул, які містять сайт зв'язування антигену, який специфічно зв'язується з антигеном. Таким чином, термін «антитіло» включає не тільки цілі молекули антитіл, але й фрагменти антитіл, а також похідні антитіл.
Термін «фрагмент антитіла», який використовується у даному описі, відноситься до тої частини антитіла, яка імітує гіперваріабельну область, таку як СОК (СОК-11, СОВ-І2, СОВ-І З,
СОов-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ). Фрагменти антитіла відповідно до даного винаходу зберігають афінність зв'язування й специфічність зазначеного антитіла. Такі фрагменти є функціональними еквівалентами зазначеного антитіла, і вони зв'язуються, власне кажучи, з тим же епітопом, що й зазначене антитіло. Приклади фрагментів антитіла включають, не обмежуючись перерахованим, важкий ланцюг, легкий ланцюг, МІ, МН, Ем, Раб, Раб", Е(ар)2 і Е(ав)2.
Термін «похідне антитіла», який використовується у даному описі, відноситься до фрагмента антитіла запропонованого винаходом, який бажано включає, щонайменше, один
СОК із зазначеного антитіла, краще, щонайменше, один СОКЗ, зазначеного антитіла, злитий, щонайменше, з однією послідовністю, відмінною від природної послідовності (наприклад, послідовності лінкера з іншого виду, ...), причому похідне має афінність зв'язування й специфічність стосовно Епм НЕНМУ-М/, співрозмірні з антитілом запропонованим даним винаходом. Похідні відповідно до даного винаходу, зберігають афінність зв'язування й специфічність зазначеного антитіла. Такі похідні є функціональними еквівалентами зазначеного антитіла, і вони зв'язуються власне кажучи, з тим же епітопом, що й зазначене антитіло.
Приклади похідних антитіл включають, не обмежуючись перерахованим, 5сЕм (5СЕМ)2 і діатіла.
У природних антитілах, два важкі ланцюги (НС) зв'язані один з одним дисульфідними зв'язками й кожний важкий ланцюг зв'язаний з легким ланцюгом (І С) дисульфідним зв'язком. Є два типи легкого ланцюга: лямбда (І) і каппа (к). Є п'ять основних класів важких ланцюгів (або ізотипів), які визначають функціональну активність молекули антитіла: І9М, дО, Іде, ІДА і ІДЕ.
Кожний ланцюг містить різні послідовності доменів.
Як правило, легкий ланцюг включає два домена, варіабельний домен (МІ) їі константний
Зо домен (СІ). Важкий ланцюг включає чотири домена, варіабельний домен (МН) і три константні області (СНІ, СНЕ2 і СНЗ, які мають загальну назву СН). Варіабельні області як легкого (МІ), такі важкого (МН) ланцюгів визначають сайт зв'язування, специфічний для антигенного епітопа.
Константна область доменів легкого (СІ) і важкого (СН) ланцюгів забезпечує важливі біологічні властивості, такі як асоціація ланцюгів антитіла, секреція, трансплацентарна мобільність, комплементарне зв'язування, і зв'язування з рецепторами Ес (ГСК). Фрагмент Ем є М-кінцевою частиною фрагмента Раб імуноглобуліну й складається з варіабельних частин одного легкого ланцюга й одного важкого ланцюга. Специфічність антитіл полягає в структурній комплементарності між сайтом зв'язування антитіла й антигенним епітопом. Сайти зв'язування антитіл складаються із залишків, які в основному походять із гіперваріабельної або області, яка визначає комплементарність (СОК). Несистематично залишки з негіперваріабельної або каркасної областей (ЕК) впливають на загальну структуру домена й, отже, сайт зв'язування.
Гіперваріабельні області або СОК, відноситься до амінокислотних послідовностей, які разом визначають спорідненість зв'язування й специфічність природної Еу-області сайту зв'язування нативного імуноглобуліну. Легкі й важкі ланцюги імуноглобуліну кожен має по три СОК, які позначаються як І-СОВІ, І-СОН2, І-СОВЗ і нН-СОВІ, Н-СОВ2, Н-СОКЗ, відповідно.
Антигензв'язувальна ділянка, отже, включає шість СОК, які складаються з набору СОК від кожного із важких й легких ланцюгів М-області. Каркасні області (БЕК) відноситься до амінокислотних послідовностей, розташованих між СОК.
Термін «гібридне антитіло», який використовується у даному описі, означає антитіло, яке містить МН-домен і МіІ-домен антитіла будь-якого виду, переважно миші, і СН-домен і СІ -домен людського антитіла.
Відповідно до винаходу термін «гуманізоване антитіло» означає антитіло, яке має каркасну область варіабельної ділянки й константні області з людського антитіла, при збереженні СОК антитіла із будь-якого виду, бажано миші.
Термін «Бар» означає фрагмент антитіла, який має молекулярну масу близько 50000 і активність зв'язування антигену, у якому близько половини М-кінцевої частини Н-ланцюга й увесь І -ланцюг, серед фрагментів, отриманих обробкою до протеазою, папаїном, зв'язані один з одним через дисульфідний зв'язок.
Термін «Е(ар)2», який використовується у даному описі, відноситься до фрагмента антитіла, бо що має молекулярну масу близько 100000 і активність зв'язування антигену, який трохи більший, ніж Рабр, зв'язаний через дисульфідний зв'язок шарнірної області, серед фрагментів, отриманих обробкою до за допомогою протеази, пепсину.
Термін «Рабр"», який використовується у даному описі, відноситься до фрагмента антитіла, що має молекулярну масу близько 50000 і активність зв'язування антигену, який отриманий шляхом розрізання дисульфідного зв'язку в шарнірній області Е(аб)2.
Вираз «одноланцюговий Ем» або «5сЕм» «відноситься до поліпептиду, який є ковалентно зв'язаним МН:МГ. гетеродимером, і звичайно експресується зі злиття генів, включаючи гени, що кодують МН і Мі, зв'язані пептид-кодованим лінкером. «а5Ем» є МН:МІ гетеродимером, стабілізованим дисульфідним зв'язком. Двовалентні й полівалентний фрагменти антитіл можуть утворюватися або спонтанно, шляхом об'єднання одновалентних 5сЕм, або можуть бути отримані шляхом з'єднання одновалентних 5сЕм пептидним лінкером, таких як двовалентні 5е(ЕМ)2.
Термін «діатіла» відноситься до невеликих фрагментів антитіл із двома антигензв'язувальними ділянками, де фрагменти містять варіабельний домен важкого ланцюга (МН), зв'язаний з варіабельним доменом легкого ланцюга (МІ) у тому ж поліпептидному ланцюзі (МН-МІ). При використанні лінкера, який є занадто коротким для того, щоб дозволити спарювання між двома доменами на одному і тому ж ланцюзі, домени змушені спаровуватися з комплементарними доменами іншого ланцюга й створювати два антиген-з'єднувальні сайти.
Термін «антитіло запропоноване винаходом», який використовується у даному описі, відноситься до антитіла, спрямованого проти, тобто, яке специфічно зв'язується з, білком оболонки НЕКМ-МУ (Епл НЕНВМ-ММ), бажано проти білка оболонки НЕКМ-М/ М/-типу родини ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ-М), а ще краще проти білка оболонки М5КУМ, ще краще проти позаклітинного домена білка оболонки М5КМ. Бажано, щоб антитіло запропоноване даним винаходом включало всі 6 СОЕ, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 1-6.
Термін «біологічний зразок», який використовується у даному описі, відноситься до будь- якого біологічного зразка, отриманого з метою оцінки іп міго. У даному винаході, зразок або зразок від пацієнта може містити будь-яку біологічну рідину або хворобо-специфічну тканину або ураження. Приклади біологічної рідини включають кров, сироватку, плазму, аспірат сосків, сечу, слину, синовіальну рідину й спинномозкову рідину (СЗЕ). Приклади хворобо-специфічної тканини й ураження включають бляшки мозку при М5, нервові біопсії при СІОР або біопсії підшлункової залози при діабеті.
Антитіло, яке застосовується як антиретровірусний лікарський засіб
Патогенна експресія НЕКМ-УУ відбувається у деяких людей з патологічними станами, зокрема, при експресії елементів вірусу, асоційованого з розсіяним склерозом (М5КУМ) родини
НЕВУ-МУ. Було показане залучення білка оболонки як єдиного патогенного гравця серед НЕКУ-
Му-кодованих білків при експонуванні імунній системі або нейрогліальним клітинам, незважаючи на наявність у пацієнтів дад-кодованих антигенів НЕКМ-МУ.
На сьогоднішній день, терапевтична стратегія полягає в спрямованому впливі на білок оболонки НЕКМ-М/ з нейтралізуючим гуманізованим антитілом, для того, щоб запобігти й інгібувати його імунозапальні й нейропатогенні ефекти при НЕКМ-М/-асоційованих захворюваннях людини. Отже, цей терапевтичний підхід спрямований вверх по запальному каскаду й цільовим цитотоксичним ефектам, зокрема, вверх по запальному демієлінізуючому каскаду із блокадою ремієлінізації при виникненні уражень з ослабленим лікувальним потенціалом у центральній нервовій системі (ЦНС) при М5.
Автори оцінювали гуманізоване антитіло Ідо4, яке селективно зв'язуватися з позаклітинним доменом білка оболонки МОКУ, яке називається в даному документі «ЗМБАСІ1», на предмет його безпеки й фармакокінетики в здорових добровольців у фазі І клінічних випробувань. Це антитіло також оцінювали в пацієнтів з Ме протягом одного року, при повторних інфузіях антитіла ЗМБАСІ1 через кожні 4 тижні при 6 мг/кг або 2 мг/кг у двох паралельних когортах. У пізній фазі Па клінічних випробувань у пацієнтів з М5 автори даного винаходу одержували зразки крові від пацієнтів до й під час дослідження, у якому біомаркери НЕКМУ-М/ тестували в перший раз після 6 місяців лікування за допомогою кількісної ЗВ-ПЛР (ДЕТ-РСК) для того, щоб вивчити специфічну експресію мРНК епм і рої з НЕКМУ-МУ при обробці СМБАСІ1.
Результати, отримані таким чином, показали зовсім несподіваний і невідомий вплив антитіла СМЬАСІ на нейтралізацію білка Епм НЕКМ-МУ іп мімо.
Дійсно, автори даного винаходу виявили, що люди-пацієнти, що одержували лікування цим антитілом, продемонстрували інгібуючий ефект на саму експресію ретровірусного генома
НЕНМ-ММ, який не обмежується геном епм, який експресує білок оболонки і який використовується як специфічна мішень для СМБАСІ1. Дійсно, результати авторів незаперечно бо показують, що рівні як мРНК епм (кодуючий білок оболонки НЕКМ-МІ/), так і мРНК рої (який кодує ферменти НЕНМУ-МУ, у тому числі зворотну транскриптазу) показали паралельне й поступове зменшення через три й шість місяців лікування, у порівнянні з рівнями, зафіксованими до початку лікування в тих же пацієнтів.
Таким чином, значний антиретровірусний ефект на експресію НЕКМУ-МУ спостерігається через 6 місяців лікування за допомогою СМБАСТ, і впливає паралельно як на експресію як гена епм, так і гена рої. Оскільки не очікувалося, що експресія ретровірусної РНК НЕКМ-М/ буде регулювати експресію білка оболонки НЕКМ-МУ, а тим більше мРНК гена рої, який кодує повністю незв'язані антигенні білки, автори дійшли висновку, що невідомий ефект на Епм НЕКМ-
ММ (або МБ5КМ-ЕММ) впливає на генетичну регуляцію НЕБМ-МУ, пов'язану з його хворобо- асоційованою експресією, як показано у хворих з розсіяним склерозом, а також антагонізується за допомогою СОМБАСІ у пацієнтів фази Па клінічних випробувань, проведених авторами винаходу (див. приклад 1). Цей ефект взагалі не пов'язаний з відомими патофізіологічними ефектами Епм НЕКМ-М/ на імунну й нейрогліальну системи.
Отже, у першому аспекті, даний винахід відноситься до антитіла, його фрагмента або його похідного, яке можна застосовувати як антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який відноситься до ендогенних ретровірусів людини (НЕКУ), де зазначене антитіло, фрагмент або похідне, спрямовані проти білка оболонки НЕКМУ- М (Епм НЕВМ-М/).
Термін «антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який відноситься до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ)», який використовується у даному описі, відноситься до антитіла, його фрагмента або його похідного, здатного інгібувати експресію й/або реплікацію вірусу, який відноситься до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ). Більш конкретно, зазначена експресія відноситься до антитіла, здатного: - супресувати або інгібувати повністю або частково реплікацію вірусу, який належить до
НЕКМ та який бажано належить до родини НЕКМ-М/. Як правило, зазначена супресія або інгібування реплікації є глобальною й повною; або - супресувати або інгібувати повністю або частково експресію вірусу, який належить до ендогенних ретровірусів людини (НЕРМ,) та який бажано є вірусом, що належить до ендогенних ретровірусів людини М/-типу (НЕКМ-М/), або експресію білка оболонки зазначеного вірусу.
Бажано, щоб зазначений вірус відносився до родини ендогенних ретровірусів людини МУ-
Зо типу (НЕКМ-ММ). Ще краще, якщо зазначений вірус є М5КМ. У цьому конкретному втіленні винаходу антитіло запропоноване винаходом спрямоване проти білка оболонки МОКУ.
У кращому втіленні антиретровірусний лікарський засіб відповідно запропонований винаходом супресує або інгібує повністю або частково експресію епу- і/або рої! -кодованих білків вірусу, який належить до НЕКУ, бажано вірусу, який належить до НЕКМ-МУ.
Автори даного винаходу показали, що націлювання на конкретний білок оболонки з МБЕКМ призводить до дивного ефекту інгібування або супресування експресії вірусу. Як згадувалося раніше, М5КМ бере участь у виникненні й у розвитку деяких захворювань. Отже, антитіло запропоноване винаходом є досить перспективним для застосування при лікуванні НЕКМ-МУ/- асоційованого захворювання, бажано патології, пов'язаної з експресією білка оболонки НЕКМ-М/ (Епм НЕВУ-М/).
Бажано, щоб зазначене НЕКМ-М/-асоційоване захворювання було обране із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (572), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го типу або 2-го типу.
Ще краще, НЕКМ-М/-асоційоване захворювання обирається із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5) і хронічної запальної демієлінізуючої поліневропатії (СІОР).
В одному втіленні даний винахід також розглядається, як агент для застосування його при профілактиці й/або лікуванні захворювання, обраного із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (57), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й діабету, такого як цукровий діабет 1-го типу або 2-го типу, де зазначений засіб складається з антитіла, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-МУ (Епм НЕВУ-МУ) або його фрагмента, або його похідного. У цьому конкретному втіленні антитіло перешкоджає експресії НЕКМ-МУ/.
В одному із втілень винаходу антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом включає кожний із 6 СОК, представлених в 5ЕО ІЮ МО: 1, БЕО ІЮ МО: 2, БЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮО МО: 4, БЕО ІЮО МО: 51 5БЕО ІЮ МО: 6.
В одному із втілень винаходу антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним 60 винаходом включають:
- легкий ланцюг, у якому варіабельний домен містить кожний із З СОК, представлених в
ЗЕО ІЮ МО: 1 для СОК-11, ЗЕО ІЮ МО: 2 для СОК-12 і БЕО І МО: 3, для СОК-Ї З; і - важкий ланцюг, у якому варіабельний домен містить кожний із З СОР, представлених в
ЗЕО ІЮ МО: 4 для СОК-НІ, ЗЕО ІЮ МО: 5 для СОК-Н2 і ЗЕО ІЮ МО: 6 для СОК-НЗ.
Вищевказані гіперваріабельні ділянки (СОК), представлені в таблиці 1.
Таблиця 1
СОВ-домени антитіла запропонованого винаходом
Домени | ЗЕОІЮ МО:| Послідовність. /-/://с1111111111ссСсС осов-нЗ | 6 | ТигМа!МаРоРпедатуїДГ/-/-://:-: З З-Гг-/СсСЄЯЇ
В одному із втілень винаходу антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом включають: - варіабельну область легкого ланцюга (МІ), представлену в ЗЕО ІЮ МО: 7; і - варіабельну область важкого ланцюга (МН), представлену в 5ЕО ІЮО МО: 8.
Вищезгадані легкі й важкі варіабельні області описані в таблиці 2.
Таблиця 2
Легкі й важкі варіабельні області антитіла запропонованого винаходом
ПССССоШЬс-сІ ПНО ЗП
Сип Пе Стій Гей ТАг Сп бег Рго бег 5ег І еи 5ег Аа бег Ма! Спу Азр
Ага маї ТАг Пе Тигк Сув 5ег Аа 5ег Зег 5ег Ма! Зег Туг Меї Туг Тр
Туг Сп Сп Гув Рго Стпу Гуз Аїа Рго Гуз Ага Тр Іе Туг Агу ТНг Зег
М 7 Авп Гей Аа Зег Су Маї Рго Зег Агу Ре Зег Спу Зег Сіу Зег СІу ТНг
Ар Туг Тиг І єи ТАг Пе Зег Зег І ви Сп Рго Спи Авр Ре Аа Тнг Туг
Туг Суз Сп Сп Туг Сип Бег І еи Рго Гей ТНг Рпе Спу Спу Спу ТАг Гув ма! Сім Пе Гув
Сп Маї Сіп І єи Маї Сіп бег Спу АІа Ст Маї І уз І ув Рго Стпу бег Зег маї Гуз Ма! Зег Сув Гуз Аа бег Спу Туг Тит Рне Тнг Азвр Туг Спи Меї
Ні Ттр Маї Аго Сп Аа Рго Спу Сіп Спу Геи Сім Тр Пе Спу Аїа Маї Аіа
УН Рго Спи Тиг Спу Спу ТНАг Ага Туг Авп Сп Гуз РНе Гуз Спу Ага Аа Тнг
Пе ТНиг Аа Авр Гуз 5ег Тиг Зег ТНг Аа Туг Меї Сім І еи бег Зег І еи
Ага Зег Сім Авр ТНг Аа Маї Туг Туг Сув ТНг Зег ТНг Маї Маї Рго Рпе
Аа Туг Ттр Су Сіп Су ТАг Гей Маї Тнг Ма! Зег Зег
В одному із втілень винаходу антитіло, фрагмент або похідне запропоноване винаходом обрані із групи, яка складається з Ем, Бар, Е(аб)2, Раб, авзхЕРм, 5сЕм, ЗС(ЕМ)2, діатіла, і мультиспецифічного антитіла, утворених із фрагментів антитіл.
У кращому втіленні винаходу антитіло запропоноване винаходом є моноклональним антитілом. Моноклональні антитіла запропоновані винаходом є одновалентними, двовалентними, мультивалентними, моноспецифічними, біспецифічними або мультиспецифічними. В іншому втіленні винаходу антитіло, спрямоване проти Епл. НЕКМ-М/ є з'єднувальним фрагментом або кон'югатом. Як приклад, антитіла запропоновані винаходом можуть бути кон'юговані з ростінгібуючим агентом, цитотоксичним агентом або ферментом, який активує проліки.
Також може бути бажаним модифікувати антитіло запропоноване винаходом у відношенні ефекторної функції, наприклад, для того, щоб підсилити антиген-залежну клітиново- опосередковану цитотоксичність (А0ОСС) і/або комплемент-залежну цитотоксичність (СОС) антитіла. Це може бути досягнуто шляхом уведення однієї або декількох амінокислотних замін в
Ес-область антитіла. Альтернативно або додатково, залишок(ки) цистеїну можуть бути введені в Ес-область, у такий спосіб роблячи можливим утворення міжланцюгових дисульфідних зв'язків у цій області. У такий спосіб гомодимерне антитіло може мати поліпшену здатність до інтерналізації й/(або підвищений комплемент-опосередкований лізис клітин і/або антитіло- залежну клітинну цитотоксичність (АОСС) (Сагоп РС. еї а. 1992; апа 5порез В. 1992).
Інший тип модифікації амінокислот антитіла запропонованого винаходом може бути корисний для зміни вихідного патерна глікозилювання антитіла. Під терміном «зміна» мають на увазі видалення одного або декількох вуглеводних залишків в антитілі і/або додавання одного або декількох сайтів глікозилювання, які відсутні в антитілі. Глікозилювання антитіл, як правило, є М-зв'язаним. «М-зв'язаний» відноситься до приєднання вуглеводного залишку до бічного ланцюга залишку аспарагіну. Трипептидні послідовності аспарагін-х-серин і аспарагін-х-треонін, де Х позначає будь-яку амінокислоту, за винятком проліну, є послідовностями розпізнавання для ферментативного приєднання вуглеводного фрагмента до бічного ланцюга аспарагіну.
Таким чином, присутність кожної із цих трипептидних послідовностей у поліпептиді створює потенційний сайт глікозилювання. Додавання сайтів глікозилювання до антитіла зручно здійснювати шляхом зміни амінокислотної послідовності таким чином, щоб вона містила один або декілька з поміж описаних вище трипептидних послідовностей (для М-зв'язаних сайтів глікозилювання).
В іншому втіленні антитіло запропоноване винаходом є моноклональним гуманізованим антитілом, бажано, є І(дс4-гуманізованим моноклональним антитілом.
Зазначене гуманізоване антитіло може бути створене шляхом одержання послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують домен СОК шляхом вставки їх в експресуючий вектор для тваринної клітини, яка має гени, що кодують константну область важкого ланцюга, ідентичного важкому ланцюгу людського антитіла; і константну область легкого ланцюга, ідентичного легкому ланцюгу людського антитіла, і експресії експресуючого вектора шляхом уведення його в клітину тварини. Експресуючий вектор гуманізованого антитіла може бути або такого типу, у якому ген, який кодує важкий ланцюг антитіла, і ген, який кодує легкий ланцюг антитіла перебувають на окремих векторах, або типу, у якому обидва гени перебувають на тому самому векторі (тандемного типу). Відносно легкості конструювання експресованого вектора з гуманізованим антитілом, легкості введення у тваринні клітини, і балансу між рівнями експресії
Зо Н- ї ІГ-ланцюгів антитіла в клітинах тварин, тандемний тип експресуючого вектора з гуманізованим антитілом є більш бажаним. Приклади експресуючего вектора тандемного типу з гуманізованим антитілом включають рКАМТЕХОЗ, рЕЕї78 тощо. Способи одержання гуманізованих антитіл, засновані на використанні традиційних методів рекомбінантної ДНК і трансфекції генів, добре відомі в даній галузі. Антитіла можуть бути гуманізовані з використанням різних методів, відомих в даній галузі, включаючи, наприклад, щеплення СОК, венірування або зміна поверхні й перетасування ланцюга. Загальна технологія рекомбінантної
ДНК для одержання таких антитіл також відома.
Таким чином, втілення даного винаходу відноситься до моноклонального гуманізованого антитіла, яке містить: - легкий ланцюг, у якому варіабельний домен містить кожний з З СОК, які відображені в ЗЕО
ІО МО: 1 для СОК-11, ЗЕО ІЮ МО: 2 для СОК-1І2 і БЕО ІО МО: 3, для СОК-І З; і - важкий ланцюг, у якому варіабельний домен містить кожний з З СОК, які відображені в
ЗЕО ІЮ МО: 4 для СОК-НІ, 5ЕО ІЮ МО: 5 для СОК-Н2 і 5БЕО ІЮО МО: 6 для СОК-НЗ.
У конкретному втіленні, важкий ланцюг (НС) зазначеного гуманізованого антитіла має амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 9, а легкий ланцюг (І С) зазначеного антитіла має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ Мо: 10. Це специфічне антитіло, називається в даному документі «ЗМБАС 1».
Вищезгадані важкі й легкі ланцюги описані в таблиці 3.
Таблиця З
НС ії С гуманізованого антитіла лен паю
Ссіп Маї Сіп І єи Маї Сіп бег Спу АІа Сі Маї І уз І ув Рго Стпу бег Зег Ма!
Гуз Маї Зег Суз І уз Аа 5ег СПу Туг Тиг Ре Тнг Авр Туг Спи Меї Ні Ттр маї Ага Сп Аїа Рго Су Сіп Счу Геи Спи Тер Пе Сіу Аа Маї Аїа Рго Спи
Тиг аіу Су ТАг Аа Туг Авп ап Гуз РНе Гуз Слпу Агу Аа Тнг Пе ТАг Аіа
Авр Гуз 5ег Тиг 5ег Тиг Аа Туг Меї Сім І еи Зег 5ег Геи Агу Зег Си
Ар Тнг Айїа Маї Туг Туг Суз ТНг Зег ТНг Маї Маї Рго РНе Аїа Туг Ттр СПУ
Сп Спу ТНг І єи Маї Тнг Маї бег 5ег Аа 5ег ТНг Гуз Спу Рго Зег Ма! Рпе
Рго Геи Аїа Рго Суз Зег Агу Зег Тиг Зег Спи Зег ТАг Аа Аа І ви Спу Су
Ї еи Маї Гуз Азр Туг РНе Рго Спи Рго Маї Тнг Маї Зег Тгр Авп 5ег Сіу Аа
Ї еи Тнг Зег Стпу Маї Ні Тнг Рне Рго Аїа Маї І єи Сип 5ег Зег СПУ І еи Туг зегі єи 5ег Зег Маї Ма! Тнг Маї Рго 5ег Зег 5ег Гей Спу ТАг Гуз Тк Туг
ФЕОІЮ Тниг Суз Авп Маї Авр Ні Гуз Рго 5ег Авп ТНАг Гуз Маї Ар Гуз Ага Маї не Мо: 9 Сім Бег Гуз Туг Су Ріо Рго Суз Рго Рго Суз Рго Аа Рго Сіи Рнеє І єи
І Сту Спу Рго Зег Маї Ре Геи Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Авр ТНг Геи Меї Пе зЗег Агу ТНг Рго Спи Ма! Тнг Суз Маї Маї Маї Авр Маї 5ег Сп Спи Авр Рго
Спи Маї Сип Рне Авп Тр Туг Маї Авр Сту Маї Спи Маї Ні Авп Аїа Гуз ТНг
Гуз Рго Ага Спи СПми Сіп Рне Авзп 5ег ТНг Туг Агу Маї Ма! 5ег Ма! І еи ТНг ма! Гей Ні Сіп Авр Тр І єи Авп сту Гуз Спи Туг Гуз Суз І уз Ма! 5ег
Авп І уз Сіу Гей Рго бег Зег Пе Спи Гуз ТНг Пе Зег Гуз Аа І уз Спу Сп
Рго Агд Си Рго Сіп Маї Туг ТАг ГГ еи Рго Рго 5ег Сп СПИ Сіи Меї ТНг Гув
Авп Сп Маї 5ег І єи Тнг Суз І еи Ма! Гуз Спу РНе Туг Рго бег Авр Пе Аа маї Си Ттр Сім бег Авп Сіу Сп Рго Сі Авп Авп Туг Гуз Тиг ТНг Ріо Ріо ма! І еи Азр Зег Ар Са1у Зег РНе Ре Г єи Туг Зег Аго Геи ТНг Маї А5р
Гуз Зег Агу Тр Сп СіПш Спіу Азп Маї Рне 5ег Сув 5ег Ма! Меї Ніз СІм Аїа
І ешпів Авп Ні Туг Тиг СіІп Гуз 5ег ГГ еи Зег ГГ єи Зег Геи Спіу Гув
Сп Пе Сп ГГ еи Тиг Сп бег Рго 5ег Зег ГГ еи Зег Аіа 5ег Ма! Спу Авр Аг9 маї Ти Пе Тнг Сув 5ег Аа 5ег 5ег 5ег Ма! Зег Туг Меї Туг Тгр Туг Сп
Сп Гуз Рго Су Гуз Аїа Рго Гуз Аа Тгр Іе Туг Ага ТНг 5ег Авп І єи Аа зЗег Спу Маї Рго 5ег Агу Рпе Бег Спу 5ег Спу 5ег Спу ТНиг Авр Туг Тиг Гей
Ти Пе Зег 5ег Геи Сп Рго Спи Авр Ре Аа Тнг Туг Туг Сув Сп Сп Туг
ІС ЗЕО І Сп Зег І єи Рго ГГ еи ТАг Рпе Сіу Сіу Спу Тиг Гуз Ма! Спи Пе Гуз Агу Тиг
Мо: 10 маї Аїда Аа Рго 5ег Маї РНе Іе Рне Рго Рго 5ег Азр Сіи Сіп І ей Гуз Бег сту Тнг Аа 5ег Маї Маї Суз І еи І єи Авп Авп Рне Туг Рго Аго Сім Аа
Гуз Маї Сп Тгр Гуз Маї Авр Авп Аа ГГ еи Сп бег СПу Авп Зег Сп Спи Зег маї Тиг Сім Сп Авр 5ег І уз Авр 5ег ТНг Туг 5ег І єи бег Зег ТНг І ви ТНг
Ї ви Зег Гуз Аа Авр Туг Сім Гуз Нів Гуз Маї Туг АІа Суз Спи Маї Тнг Ні
Сп Спу Сеи Зег Зег Рго Ма! Тиг Гу Зег Рпе Авп Аг Сіу Спи Сув
Композиція, яка застосовується як антиретровірусний лікарський засіб
Автори винаходу додатково досліджували нещодавно виявлений антиретровірусний ефект антитіла запропонованого винаходом. Із цією метою вони оцінювали його вплив іп міо на клітинні культури, які експресують дад, рої і епу-кодовані білки, які детектувались специфічними антитілами в аналізі вестер-блотинг.
Автори даного винаходу підтвердили, що експресія білка рої що відповідає зворотній транскриптазі (КТ) з НЕКМ-М/, виявилася менш важливою в клітинах, культивованих у присутності ОМБАСІ, на додачу до зниження рівнів роі-РНК у пацієнтів, що одержували
СМрБАСІ1. Крім того, як відомо, КТ ампліфікує ретровірусну експресію шляхом створення додаткових копій ДНК ретровірусів з експресованих РНК. Ці новоотримані ретровірусні ДНК-копії можуть потім експресувати відповідну РНК, тим самим підсилюючи глобальну експресію ретровірусного елемента шляхом множення експресуючих копій через продукт самої цієї експресії, такий як КТ з рої РНК.
Внаслідок цього в них з'явилася ідея про те, що комбінація ОМБАС1 та інгібітору ретровірусної зворотної транскриптази, такого як азидотимідин (А2Т), може проявляти більш сильний інгібуючий вплив на експресію НЕКМ-МУ, зокрема, на експресію КТ, представлену як приклад у даному випадку.
Були проведені додаткові дослідження, і, що дивно, ця комбінація антитіла, спрямованого проти Епм НЕКМ-МУ, і лікарського засобу, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, припинила експресію білка КТ НЕКМ-М/ у цих продукуючих клітинах.
У паралельних і одночасних культурах, позитивна детекція КТ НЕКМ-М/ за допомогою вестерн-блотинга в необроблених клітинах і незначне або часткове зниження в клітинах, оброблених тільки СМрБАСІ1 або АТ, підтвердила специфічність і значимість цього спостереження: за тих же умов, комбінація антитіла ЗМБАСТІ, яке нейтралізує білок Епм НЕКМ-
М і АТ припинили детекцію даного білка КТ НЕКЕМ-МУ/.
Таким чином, у другому аспекті, даний винахід відноситься до композиції, яка включає - антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом; і - лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, для застосування її як антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який відноситься до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ).
Бажано, щоб зазначений лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, був обраний із групи, яка складається з азидотимідину, ентекавіру, ламівудину, адефовіру, софосбувіру, диданозину, тенофовіру, абакавіру, ламівудину, ставудину, емтрицитабіну, зальцитабіну, тельбівудину й диданозину. Ще краще, якщо зазначений лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, є азидотимідином (АТ). Усе раніше описані технічні дані можуть бути застосовані в даному документі.
Композиція запропонована винаходом забезпечує несподівану й нову перспективу для терапевтичного втручання при патогенній експресії НЕКМ-М/. Обробка за допомогою комбінації: - антитіло, спрямоване проти Епм НЕКУ-М/, таке як ОМБАСТІ; і - молекула, націлена на саму зворотну транскриптазу й/або на її активність, така як АЛТ, виявилася досить корисною при інгібуванні експресії КТ з НЕКМ-МУ при захворюваннях, пов'язаних з НЕКМ-МУ/.
Таким чином, даний винахід також відноситься до композиції, яка включає: - антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом; і
Зо - лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, для застосування при профілактиці й/або лікуванні НЕКУ-М/-асоційованого захворювання.
Винахід також відноситься до композиції, яка включає: - антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом; і - лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, для застосування при профілактиці й/або лікуванні захворювання, обраного із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (572), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го типу або 2-го типу.
Ще краще, якщо зазначене захворювання буде обране із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5) і хронічної запальної демієлінізуючої поліневропатії (СІОР).
Усі раніше описані технічні дані можуть бути застосовані в даному документі.
У третьому аспекті даний винахід відноситься до антитіла, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-МУ/ (Епх НЕНМУ-МІ), або його фрагменту, або його похідного і лікарського засобу, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, бажано азидотимідину, як комбінованої композиції для одночасного, роздільного або послідовного застосування в способі лікування
НЕНМ-М/-асоційованого захворювання, бажано, захворювання, обраного із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (52), біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го або 2-го типу.
Усі раніше описані технічні дані можуть бути застосовані в даному документі.
Набір запропонований винаходом
Експресія елементів НЕКМ-М/ у пацієнтів із захворюванням і/або їх детекція у хворобо- специфічній тканині й ураженнях виявляє й визначає загальну категорію НЕКМ-М/-асоційованих захворювань або синдромів. Це також відображає біологічну активність НЕКМ-М/ у ході еволюціонування захворювання й під час його лікування.
Таким чином, детекція НЕКМ-М/ з поліпшеною чутливістю, з винятковою специфічністю захворювання або з конкретною асоціаційованістю із клінічними ознаками у хворих з НЕКМ-МУ/- 60 асоційованими захворюваннями або синдромами, має важливе значення для діагностичної ідентифікації й стратифікації, а також для наступних заходів і терапевтичного моніторингу пацієнтів. З панелі праймерів, зондів і ПЛР-протоколів, автори даного винаходу, таким чином, вибрали й розробили набір праймерів і зондів, який показав себе корисним для детекції присутності й/або визначення рівня експресії НЕКМ у пацієнтів.
Отже, у четвертому аспекті, даний винахід відноситься до набору, який містить, щонайменше, один, бажано, щонайменше, два, бажано, щонайменше, три, бажано, щонайменше, чотири, бажано, щонайменше, п'ять, бажано, щонайменше, шість, бажано, щонайменше, сім, бажано, щонайменше, вісім, бажано, щонайменше, дев'ять, бажано, щонайменше, десять олігонуклеотидів, обраних із групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 11 -28.
У кращому варіанті зазначений набір містить, щонайменше, послідовність ЗЕО ІЮ МО: 17 і або 18 або ЗЕО ІЮ МО: 19 і 20.
В іншому випадку зазначений набір включає: - ЗЕО ІО Мо: 19, 20, 23, 24 і 25; або - ЗЕО ІО Мо: 17, 18, 23, 24 і 25; або - ЗЕО ІО Мо: 19, 20, 14, 15, 16, 23, 24 і 25; або - БЕО ІО Мо: 17, 18, 14, 15, 16, 23, 24 і 25.
Ще краще, набір запропонований винаходом включає всі олігонуклеотиди, представлені в
ЗЕО ІЮ Мо: 11-28. Як правило, зазначений набір призначений для застосування в ПЛР або, більш конкретно, в аналізі кількісної ПЛР (КПЛР). Таким чином, набір бажано містить також праймери й/або зонди з еталонних клітинних генів, які найбільш придатні для відносної кількісної оцінки РНК або ДНК і для різних станів.
Зазначений набір бажано додатково включає: - ЗЕО ІЮ МО: 26, 27 і 28; або - Послідовності, специфічні для гена ЗСОЗВ; або - Послідовності, специфічні для гена Рнази Р; або - Послідовності, специфічні для еталонного клітинного гена для відносної кількісної оцінки
КПЛР.
Зазначений набір корисний для відстеження при детекції й/або кількісній оцінці вірусу, що відноситься до родини людських ендогенних ретровірусів М/-типу (НЕКУ-МУ), включаючи МКУ,
Зо але також і інші підтипи НЕКМ-МУ. Більш конкретно, набір запропонований винаходом корисний для виявлення й/або кількісної оцінки послідовностей, що кодують Епм НЕКМ-М/, а також послідовностей, що кодують поліпротеїн рої! НЕКУ-МУ, у тому числі КТ. Як правило, детекція й/або кількісна оцінка НЕКМУ-МУ у пацієнта включає: () детекцію й/або кількісну оцінку специфічних для НЕКМ-М/ РНК, ДНК або антигенів, які бажано детектуються у біологічних рідинах або у хворобо-специфічних тканинах і ураженнях, (і) виявлення й/або кількісну оцінку підвищеного рівня числа копій ДНК або РНК, у клітинах або тканинах із крові або з органів з ураженням або дисфункцією.
Отже, у п'ятому аспекті, даний винахід відноситься до антитіла, його фрагмента або похідного, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-М/ (Епл НЕНМУ-М/) яке можна застосовувати як антиретровірусний лікарський засіб, націлений на вірус, який відноситься до
НЕКМ, бажано до НЕКМ-МУ, ще краще, до М5КУМ, у пацієнта, який страждає на НЕКМ-МУ- асоційоване захворювання, де зазначений пацієнт ідентифікується способом, який передбачає стадію ії) детекції й/або кількісної оцінки НЕКМ-М/ у біологічному зразку.
У цьому конкретному втіленні, лікар буде, таким чином, у змозі адаптувати й оптимізувати відповідну медичну допомогу пацієнтові, який страждає на НЕКМ-М/-асоційоване захворювання.
Моніторинг наявності й/або рівня експресії НЕКУ-МУ є надзвичайно придатним для наступного спостереження й прийняття клінічних рішень. Насправді, лікар для кожного пацієнта може визначити відповідну терапію за допомогою оптимальної стратегії.
Як правило, стадія ї) детекції й/або кількісної оцінки може бути виконана відповідно до звичайних методів, добре відомих фахівцеві в даній галузі. Як правило, зазначена стадія і) включає контакт біологічного зразка пацієнта із селективними реагентами, такими як зонди, праймери, ліганди або антитіла, і, таким чином, детекцію присутності нуклеїнових кислот або білків у зразку, які початково представляють інтерес. Бажано, зазначена стадія ії) детекції присутності й/або кількісної оцінки НЕКМ-МУ здійснюється за допомогою набору запропонованого винаходом.
Усі згадані вище технічні дані можуть бути застосовані в даному документі.
Фармацевтична композиція
Ще одне завдання даного винаходу відноситься до фармацевтичної композиції, яка містить ефективну дозу антитіла, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-МУ (Епл НЕВУ-МІ) і 60 необов'язково містить лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу.
Будь-який лікарський засіб запропонований винаходом, як описано вище, може бути об'єднаний з фармацевтично прийнятними наповнювачами, і необов'язково матрицею з уповільненим вивільненням, такими як полімери, здатні до біологічного розкладу для формування терапевтичних композицій. «Фармацевтичний» або «фармацевтично прийнятний» відноситься до молекулярних сутностей і композицій, які не викликають негативних, алергійних або інших небажаних реакцій при введенні ссавцеві, зокрема людині, залежно від обставин. Фармацевтично прийнятний носій або наповнювач відноситься до нетоксичного твердого, напівтвердого або рідкого наповнювача, розріджувача, інкапсульованого матеріалу або композиції допоміжного засобу будь-якого типу.
Форма фармацевтичних композицій, спосіб уведення, дозування й режим, природно, залежать від стану, який підлягає лікуванню, тяжкості захворювання, віку, маси й статі пацієнта тощо.
Фармацевтичні композиції запропоновані даним винаходом можуть бути приготовлені для місцевого, перорального, інтраназального, внутрішньочного, внутрішньовенного, внутрішнм'язового або підшкірного введення тощо.
Бажано фармацевтичні композиції містять транспортні засоби, які є фармацевтично прийнятними для композицій пристосованих для ін'єкції. Вони можуть бути, зокрема, ізотонічними, стерильними, сольовими розчинами (мононатрієвим або динатрієвим фосфатом, натрію, калію, кальцію або магнію хлоридом тощо, або сумішшю таких солей) або сухою, особливо ліофілізованою композицією, яка при додаванні, в різних випадках, стерилізованої води або фізіологічного сольового розчину, дозволяє утворювати розчини для ін'єкцій.
Дози, які використовуються для введення, можуть бути адаптовані залежно від різних параметрів, і зокрема, залежно від використаного способу введення, відповідно до патології, або, в іншому випадку, від потрібної тривалості лікування.
Для приготування фармацевтичних композицій, ефективна кількість антитіла, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-М/ (Епм НЕНВМ-МУ) може бути розчинена або диспергована у фармацевтично прийнятному носії або водному середовищі.
Фармацевтичні форми, придатні для застосування у вигляді ін'єкцій, включають стерильні водні розчини або дисперсії; композиції, які включають кунжутну олію, арахісову олію або
Зо водний пропіленгліколь; і стерильні порошки для приготування стерильних ін'єкційних розчинів або дисперсій. У всіх випадках форма повинна бути стерильною й повинна бути рідкою настільки, щоб легко набиратися шприцом. Вона повинна бути стабільною за умов виробництва й зберігання й повинна бути захищена від забруднюючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії й гриби.
Розчини активних сполук у вигляді вільної основи або її фармацевтично прийнятної солі можуть бути отримані у воді, відповідним чином змішаній з поверхнево-активною речовиною, такою як гідроксипропілцелюлоза. Дисперсії можуть бути також отримані в гліцерині, рідких поліетиленгліколях, їхніх сумішах і в оліях. За звичайних умов зберігання й застосування ці препарати можуть містити консервант для запобігання росту мікроорганізмів.
Після приготування розчини будуть уводитися способом, сумісним з лікарською формою, і в такій кількості, яка є терапевтично ефективною. Композиції легко вводяться в різних лікарських формах, таких, як ін'єкційні розчини, описані вище, але також можуть бути використані капсули для вивільнення лікарського засобу тощо.
Бажано, антитіло або його фрагмент і похідне, спрямоване проти білка оболонки НЕКМ-М/ (Епл НЕВУ-МУ) запропоноване даним винаходом може бути приготовлене в буфері, у якому воно солюбілізується, зберігається й вводиться ін'єкцією пацієнтам. Бажано, щоб зазначений буфер містив 20 мм гістидіну, 595 сахарози й 0,0195 полісорбата 20 і мав рН 6,0. Один приклад композиції, яка використовується для внутрішньовенного введення ЗМБАС1, представлений в прикладі 3.
Для парентерального введення, наприклад, у водному розчині, розчин може бути відповідним чином поміщений у буфер, а рідкий розріджувач спочатку роблять ізотонічним за допомогою достатньої кількості фізіологічного розчину або глюкози. Ці конкретні водні розчини є особливо придатними для внутрішньовенного, внутрішнм'язового, підшкірного й внутрішньоочеревинного введення. У зв'язку із цим, стерильні водні середовища, які можуть бути використані, будуть відомі фахівцям в даній галузі у світлі даного опису. Наприклад, одна доза може бути розчинена в 1 мл ізотонічного розчину Масі і або додана до 1000 мл рідини підшкірної клітковини, або ін'єктована в обране місце інфузії (див., наприклад, «Кетіпдоп'є
РПпаптасешіса! Зсіепсе5» 15-е видання, сторінки 1035-1038 і 1570-1580). Деякі варіації в дозуванні обов'язково будуть мати місце залежно від стану пацієнта, який підлягає лікуванню.
Особа, відповідальна за введення, у кожному разі, буде визначати відповідну дозу для конкретного пацієнта.
На додачу до сполук для парентерального введення, наприклад, внутрішньовенної або внутрішньом'язової ін'єкції, інші фармацевтично прийнятні форми включають, наприклад, таблетки або інші тверді речовини для перорального введення; капсули, з відтермінованим вивільненням; і будь-які інші форми, які використовуються насьогодні.
Терапевтичний спосіб і моніторинг запропонований винаходом
Винахід також відноситься до способу інгібування експресії й/або реплікації вірусу, який відноситься до ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ) у пацієнта шляхом уведення зазначеному пацієнтові антитіла, спрямованого проти білка оболонки НЕЕМ-МУ (Епм НЕВУ-М).
У ще одному втіленні даний винахід відноситься до способу профілактики й/або лікування пацієнта, який страждає на захворювання, обране із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (5727), біполярного розладу (ВР), однополярного або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої поліневропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, раку, запального панкреатиту й цукрового діабету, такого як цукровий діабет 1-го або 2-го типу, шляхом уведення зазначеному пацієнтові антитіла, його фрагмента або похідного, націленого проти білка оболонки НЕКМ-М/ (Епм НЕВУ-МІ/), де зазначене антитіло діє як антиретровірусний лікарський засіб, націлене на
НЕКМУ, бажано націлене на НЕКМУ-МУ, ще краще націлене на МБ5КМ.
Винахід також відноситься до способу лікування пацієнта, який страждає на НЕКМ-МУ- асоційоване захворювання, що включає стадії: 1) прогнозування в пацієнта шляхом детекції й/або кількісної оцінки вірусу, який відноситься до родини ендогенних ретровірусів людини (НЕКМ), бажано, НЕЕМ-М/, ще краще до М5ЕМУ, у біологічному зразку за допомогою набору запропонованого даним винаходом; і потім 2) якщо зазначена стадія 1) показує експресію людського ендогенного ретровіруса (НЕКМ), то спосіб запропонований даним винаходом включає стадію 3) забезпечення пацієнта антитілом, фрагментом або похідним запропонованим винаходом.
Винахід також відноситься до способу моніторингу відповіді на лікування пацієнта, який страждає на НЕКУМ-М/-асоційоване захворювання, причому зазначений спосіб включає наступні стадії: а. лікування зазначеного пацієнта антитілом, фрагментом або похідним запропонованими винаходом; потім р. детекцію й/або кількісну оцінку НЕВМ-М/ у біологічному зразку із зазначеного пацієнта.
В іншому втіленні даний винахід відноситься до способу моніторингу відповіді на лікування пацієнта, який страждає на НЕКМ-М/-асоційоване захворювання, причому зазначений спосіб включає стадію детекції й/або кількісної оцінки НЕКМ-МУ/ у біологічному зразку із зазначеного пацієнта. Бажано, щоб зазначений пацієнт мав антитіло, фрагмент або похідне запропоноване даним винаходом. Вираз «пацієнт, який має антитіло» відноситься до пацієнта, який був оброблений антитілом, і демонструє детектовану кількість зазначеного антитіла в крові, тканинах або органах. Як правило, указане антитіло, фрагмент або похідне надають або вводять пацієнтові перед стадією детекції й/або кількісної оцінки НЕКМ-МУ.
Відповідно до винаходу, у випадку моніторингу відповіді на лікування пацієнта, який страждає на НЕКМ-М/-асоційоване захворювання, біологічний зразок може бути зразком біологічної рідини, такої як кров, спинномозкова рідина, сеча або хворобо-специфічна тканина й ураження, такі як бляшки мозку при М5, нервові біопсії при СІОР або біопсії підшлункової залози при діабеті.
Як правило, стадія Б. детекції й/або кількісної оцінки може бути проведена відповідно до звичайних технологічних методів, добре відомих фахівцеві в даній галузі. Як правило, зазначена стадія б. включає приведення в контакт біологічного зразка пацієнта із селективними реагентами, такими як зонди, праймери, ліганди або антитіла, і, таким чином, виявлення початкової присутності у зразку нуклеїнових кислот або білків, які представляють інтерес.
Бажано, зазначена стадія Б. детекції присутності й/або вимірювання рівня експресії НЕКМ-М/ здійснюється за допомогою набору запропонованого винаходом.
Усі раніше розкриті технічні ознаки можуть бути застосованими в даному документі.
Позначення креслень
Фігура 1 (А) Рівні транскриптів епм ї рої НЕКМ-М/ при включенні в дослідження, детектовані різними парами праймерів і зондів для КкПЛР. (В) транскрипт Епм НЕКМ-МУ із праймерами й зондами «епу» і «0ОМО» паралельно для бо пацієнтів, включених в 2 мг/мл когорту (однотонні кола) і 6 мг/мл когорту (однотонні квадрати).
(С) транскрипт Епм НЕКМ-МУ із праймерами й зондами «ОМО2», «зуп» і «рої» паралельно для пацієнтів, включених в 2 мг/мл когорту (однотонні кола) і б мг/мл когорту (однотонні квадрати).
Ординати представляють відносну експресію (відносно 5И5 В) цільової РНК для кожного пацієнта, а абсциси представляють різні протоколи кПЛР, які можуть бути застосовані на тих самих зразках.
Фігура 2. Різниця рівнів транскриптів епм і рої НЕКМ-МУ між різними клінічними формами М5 при включенні в дослідження, визначені за допомогою різних пар праймерів і зондів для КПЛР (А) протокол «епу» (В) протокол «МО» (С) протокол «ОМО2», (0) протокол «зуп», (Е) протокол «рої».
Ординати представляють відносну експресію (відносно 5И5 В) цільової РНК для кожного пацієнта, а абсциси представляють різні клінічні форми М5: первинно-прогресуючий (РРМ5), ремітуючий (ККМ5) і вторинний прогресуючий (5РМ5).
Фігура 3. Співвідношення між рівнями транскриптів епм і рої НЕКМ-МУ/ ї клінічними параметрами хворих на розсіяний склероз при включенні в дослідження, визначеними за допомогою конкретних пар праймерів і зондів для кКПЛР (А) Протокол «уп» свідчить про негативну кореляцію між експресією НЕКМ-МУ синцитин-типу й тривалістю захворювання: коефіцієнт кореляції Пірсона г - -0,96; р - 0,009 (В) Протокол «уп» свідчить про позитивну кореляцію між експресією НЕКМ-МУ синцитин-типу й індексом прогресії захворювання: коефіцієнт кореляції Пірсона - г - 0,955 р - 0,014 (С) протокол «рої» також свідчить про позитивну кореляцію між експресією гена рої Негу-М/-типу (який кодує протеазу, зворотну транскриптазу й інтегразу) і індексом прогресії захворювання: коефіцієнт кореляції Пірсона г - 0,95; р - 0,048.
Ординати представляють тривалість захворювання в роках (А) або індекс прогресії (В 5 С); абсциси представляють відносну експресію (відносно (05 В) цільової РНК для кожного пацієнта.
Фігура 4. Зміна рівнів Негу-М/-зв'язаних транскриптів протягом перших 6 місяців ЗМС002.
Дані є середнім значенням експресії цільової РНК відносно 505 В для кожного НЕКМ-МУ/- асоційованого транскрипта в 2 мг/кг когорті (А), в 6 мг/кг когорті (В), а також у всіх пацієнтів,
Зо включених в ЗМСО002 (С). Пунктирні лінії позначають рівень відповідних транскриптів при включенні. Ординати представляють середню відносну експресію (відносно (305 В) цільової
РНК для кожного протоколу КкКПЛР у групі пацієнтів. Абсциси представляють кількість ін'єкцій
СМБАСТІ пацієнтам.
Фігура 5. Зміна рівнів НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів протягом перших б місяців
СМСО02. Дані є середнім значенням експресії цільової РНК відносно 505 В для кожного Негм-
М/-транскрипта у всіх пацієнтах, включених в 3МСО002. Показана зміна рівнів транскриптів епм і рої! НЕНМ-МУ/ У ході лікування М5 від дати включення в дослідження до дати шостої ін'єкції, у вигляді графіків УУ/піхКег5 (10-90 процентилі) даних від кожного пацієнта, визначених з різними парами праймерів і зондів для кПЛР (А) протокол «епм» (В) протокол «МО» (С) протокол «ОМО2» (О) протокол «зуп» (Е) протокол «рої».
Ординати означають середню відносну експресію (відносно 55 В) цільової РНК для кожного протоколу КПЛР у групі пацієнтів. Абсциси представляють число ін'єкцій ЗМБАС1 пацієнтам, перед якими відбирали зразки крові (тому «1» відповідає стану перед будь-якою ін'єкцією, «3», стан 4 тижня після другої ін'єкції й «б», статус через 4 тижні після п'ятої ін'єкції.
Фігура 6. СНО клітини спонтанно експресують рої і епу-кодовані НЕКМУ-М/ білки, як це було визначено за допомогою специфічного антитіла за допомогою вестерн-блотинга.
Здогадна молекулярна маса для смуг, детектованих кожним конкретним антитілом проти дад, рої ії епу-кодованих антигенів НЕКМ-МУ, вказана в правій частині доріжки, яка відповідає клітинному екстракту кожного антигену. Ліва доріжка в А, В ії С представляє маркери молекулярної маси, які використовуються для оцінки кДа. (А) НЕКУ-М/ Сад поліпротеїн і продукти розщеплення, у тому числі типовий капсидний білок близько 30 кДа. (В) НЕКМ-ММ рої поліпротеїн і продукти розщеплення, у тому числі типовий білок зворотної транскриптази близько 55 кДа. (С) білок оболонки НЕКМ-МУ, продукти розщеплення й мультимери, у тому числі 5 (поверхнева) і ТМ (трансмембранна) одиниці, що розщеплюються, близько 45 і 35 кДа.
Глікозильовані продукти епм виявлені зі зміною потенційної варіації в глікозилюванні між мономерними смугами, детектованими близько 75 і 80 кДа. 55 кДа відповідає неглікозильованому мономеру, з димером близько 100 кДа. Смуга близько 160 кДа може бути 60 або глікозильованим димером, або неглікозильованим тримером.
Фігура 7. НЕНУ-М/ роІ-кодований білок зворотної транскриптази в культурах СН2 з або без обробки СМБАСІ і/або А-Т.
Здогадна молекулярна маса для виявлених смуг зі специфічним антитілом проти НЕКМУ-М/ роІ-кодованих антигенів зазначена в правій частині вестерн-блотинга. Номера доріжок вестерн- блотинга (від 1 до б) показані нижче зображення. 1) Комбінована обробка за допомогою СМБАСІ і А2Т 2) Обробка тільки АТ 3) Обробка тільки ОМБАС1 4) Мок-оброблені клітини (без обробки) 5) Порожня комірка 6) Маркер молекулярної маси
ПРИКЛАДИ
Приклад 1. Пригнічення експресії мРНК людського ендогенного ретровіруса М/-типу в пацієнтів з розсіяним склерозом, які одержували СОМБАС1
СМрБАСІ є моноклональним антитілом Ід54 людини спрямованим на білок оболонки ретровіруса, асоційованого з розсіяним склерозом (М5КМ-ЕММ), представника родини ендогенних ретровірусних елементів НЕКМ-МУ/, який також називається Епм НЕКМ-МУ. СІМБАСІ продемонструвало гарний профіль безпеки й лінійну фармакокінетику у фазі клінічних випробувань, проведених на здорових добровольцях.
Поточна 5МСО002 фаза Іа клінічних випробувань була проведена з метою оцінки профілю безпеки й фармакокінетики СОМБАСІ при 2 і 6 мг/кг на 10 хворих з розсіяним склерозом. з3МС002 полягала в 12 місячному лонгітюдному дослідженні, у якому ОМБАСІ1 уводили щомісяця.
Даний аналіз був проведений на зразках, відібраних протягом перших 6 місяців зЗМС002, при цьому рівні НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів оцінювали в реальному часі кількісної полімеразної ланцюгової реакції (КПЛР у реальному часі) у мононуклеарних клітинах периферійної крові (РВМСОС) із включених у дослідження пацієнтів. НЕКМ-МУ транскрипти оцінювали різними наборами наступних праймерів/зондів: МОЕКЕМ-ЕММ, НЕВМ-КЖМ-ОМО, НЕВУ-МУ/-
МО.
Матеріали й методи
Зо Зразки збирали в 4 мл вакутейнери СРТ, обробляли, зберігали й транспортували відповідно до протоколу, наданого Сепешиго у Лабораторній інструкції ЗМСО002.
Заморожені РВМС від 10 хворих з М5 були надані 2 рекрутинговими центрами, які беруть участь у дослідженні ЗМСО02.
Хімічні речовини й біологічний матеріал
Програмне забезпечення - Віогай СЕХ Мападег 2.0: виконання й аналіз ПЛР - бепех 5: чистова обробка необроблених даних ПЛР - Сгарії Рай Ргізт: графіки - Зідтавіаї: статистичний аналіз
Як критерій нормальності використовували критерій Колмогорова. Кореляцію визначали аналізом змішаного моменту за Пірсоном, якщо дані були параметричними, або аналізом рангового порядку за Спірменом, якщо дані були непараметричними.
Протоколи
Коротко перший крок полягав в екстракції сумарної РНК зі зразків РВМС. Зразки були РВМС виділяли із крові, зібраної в СРТ-пробірки й заморожували в 0,5 мл ДМСО з 1095 фетальною телячою сироваткою. Після розморожування зразки РВМС промивали крижаним РВ5 і екстрагували загальну РНК набором Оіаатр Кпеазу Міпі Кі. Потім одержували кКДНК ретро- транскрипцією всіх мРНК, які містяться в раніше екстрагованій загальній РНК. Кількісну ПЛР проводили на цих кКДНК, з додаванням внутрішнього стандарту, який використовується як калібратор між планшетами (що дозволяє стандартизувати значення протягом усього експерименту з декількома планшетами). Результати виражали у вигляді відносної експресії мішені РНК (М5КМ/НЕКМ-УМ) до експресії РНК 005 В, еталонного гена домашнього господарства, зі стабільним рівнем експресії в популяції М5.
Послідовності праймерів і зондів
Комерційним набором праймерів/зондів для детекції контрольного гена домашнього господарства, И5 В, є Тадтап Сепе Ехргеззіоп Аззау си5В (Арріїеа ріозубіет 4448485). МІС є флуоресцентною міткою-барвником, яка детектується на 5'-кінці зонда би5В.
Праймери й зонди МО5КУМ-епм призначені для специфічної детекції послідовності, яка кодує білок М5КМ-епм, а не синцитина. | навпаки, праймери на синцитин дозволяють провести специфічну ампліфікацію послідовності, яка кодує синцитин, але не М5КМ-епу. Флуоресценція мітки-барвника РАМ "М визначається на зонді для МОКУ-епм і синцитина.
Праймери на ОМО2 розроблені Сепеиго для розпізнавання послідовності МОКУ-епу, яка, як передбачається, має потенційну імуносупресуючу функцією за аналогією з відповідною областю в інших послідовностях ендогенних ретровірусів; проте, ця термінологія («імуносупресивний пептид/послідовність») використовується в даному документі для того, щоб локалізувати певний домен у білках ретровірусної оболонки, які можуть бути не імуносупресивними взагалі в багатьох ретровірусах. Ці праймери можуть гібридизуватися з послідовністю, яка кодує також синцитин.
МО, розроблені Сепешиго, зв'язують послідовності, які кодують МОКМ-епм і синцитин. Для послідовностей, ампліфікованих праймерами МО і ОМО2, не створено зондів, і таким чином, ампліфікацію цих послідовностей дозволяє кількісно оцінити флуоресценція ЗУВЕК дгееп.
Праймери й зонд МЗ5КМ-рої були розроблені Сепеиго і вони розпізнають послідовність, яка
Зо кодує зворотну транскриптазу М5КУ. Детекцію гібридизації зонда МЗЕМ-рої зонда кількісно визначали за допомогою флуоресцентного репортера ЕАМ "М,
Таблиця 4
Послідовність усіх праймерів і зондів, які використовуються у даному дослідженні біомаркерів
ЗЕО
ПОЗНАЧЕННЯ Я
Епм ретровіруса
ТАМВА с инцитин-1 вУпсліт М імуносупресуюча й й
Обидві послідовності: синцитин і МЕВМ-епу
Послідовність МЕВМ. рої (зворотна ргобре 2 ТАМАВА
ЗЕО праймерів МО:
САРОН МІС-
САРОН ргоре АаССТСААпАТСАТСАИ,СААТасстос- 28
ТАМВА
Флуорофор, детектований за допомогою ампліфікатора СЕХ, перебуває в 5' частині зонда.
Для набору праймерів без зонда детекцію здійснювали за допомогою інтеркалюючого барвника
ЗУВЕ дгевп.
Аналіз результатів
Критерії виключення зразків які запобігають систематичним помилкам оцінки в аналізі були наступними: - концентрація РНК у зразку нижче 10 нг/мкл, після екстракції й обробки ДНКазою; - стандартне відхилення трьох повторів ПЛР вище 0,2 Сад, для одного зразка; - Сад (цикл кількісного аналізу) 505 В вище порога деградації, що вказує на те, що РНК не досягає очікуваного рівня якості в дослідженні. Поріг деградації розраховується в такий спосіб: середнє значення :х 2 х стандартне відхилення всіх індивідуальних значень 5305 В Са.
Усі індивідуальні С для М5КМ/НЕКМ-МУ епм генів і 505 В стандартизували відповідно до їхніх власних внутрішніх стандартів, доданих у кожний експериментальний планшет, за допомогою програмного забезпечення СепехФ (Ми апаїузез5 АВ, Швеція).
Відносну експресію кожної цільової РНК у кожному зразку розраховували в такий спосіб.
Відносна експресія цільової РНК до аО5в- 2(Са 605 В - Са цільової РНК)
Вихід екстракції й виключення зразків
Після екстракції, загальну концентрацію РНК для кожного зразка визначали за допомогою апарата МапоадгорФф). Усі зразки із загальною концентрацією РНК нижче 10 нг/мкл виключали.
Перед кількісною оцінкою загальної РНК, загальну РНК обробляли ДНКазою для того, щоб в остаточному підсумку усунути забруднення геномною ДНК, яка залишається в зразку загальної
РНК. Після цієї стадії із ДНКазою, відсутність контамінації геномної ДНК для кожного зразка контролювали за допомогою ПЛР без ретротранскрипції (МОКТ Сігі Мо 1). Якщо геномна ДНК виявлялася під час цієї стадії, відповідні зразки піддавали другій стадії обробки ДНКазою, і другій кількісній оцінці РНК, а також другій контрольній МОКТ (МОоКТ С Мо 2). Зразки остаточно виключали, якщо геномна ДНК залишалася в зразку, або якщо загальна РНК була нижче 10 нг/мкл після цієї додаткової обробки ДНКазою.
Стандартизація вихідних даних за допомогою Сепехф і виключення зразків
Для того щоб привести сирі дані, зібрані на декількох мікропланшетах для ПЛР, усі вихідні дані стандартизували відповідно до внутрішнього стандарту, присутнім на кожному мікропланшеті із програмним забезпеченням Сепех. Зразки, для яких стандартне відхилення
ПЛР у трьох повторностях становило більше 0,2 Сд, виключали з дослідження. Якість зразка відбиває рівень експресії 505-В. Усі зразки вище порога деградації виключали з дослідження.
Результати
Рівні НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів при включенні в дослідження
У першій точці часу дослідження, РВМС виділяли із крові всіх об'єктів перед першим уведенням СМЬБАСІ або плацебо. Таким чином, результати представлені в таблиці 5 і на
Фігурі 1, відповідають базовому рівню НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів, які представляють інтерес, для кожного пацієнта на момент включення в дослідження. Таблиця 5. Рівні НЕКМ-М/- асоційованих транскриптів при включенні
Відносна . й й Відносна й Відносна Відносна Відносна й
Зразок Момент доза Мем. експресія експресія експресія Мем. часу | (мг/к з. | ОМО/СивВ | ОМО2/СивВ ІСинцитин/би5В й епм/Сси5В ро/сиво 01-000312,. 1 | 2 | 0058 | лі | 0044 | | 00 / о2г-000212| 1 | 2 | 0042 | 0099 | 0029 | | 0004
Відносна Відносна Відносна Відносна Відносна
Зразок Момент) Доза експресія експресія експресія експресія експресія часу | (мг/к МЗНМ- | Омо/сивв | ОМОг/сивВ Синцитин/Зи5В МЗНУ- епм/Сси5В ро/сиво 02-0005121.1.1.2 | 015 0,418 002 0,021 0,013 01-000612, 1 1 6 | 0104 0237 | (| юмк | 0009 01-000812і 1 1 6 | 0,063 0,278 0,043 0,024 0,011 02-0007121..1 1.6 | 0,061 0,178 0,044 0,009 0,004 02-00093121 116 | 0,042 0124 0,035 0,007 0,004 02-0010121 1 1 6 | 0,095 0,404 0,088 0,020 0,014
Розподіл результатів від усіх пацієнтів був однорідним у випадку протоколів КПЛР для «епм» і «вуп», але відмінності в розподілі можна побачити у випадку протоколів ОМО і ШМО2, незважаючи на більш низьку відносну експресію, детектовану для РНК, на яку специфічно націлений «ШМО2».
Не спостерігалося відмінностей у розподілі рівнів транскриптів НЕКМ-М/ при включенні в дослідження між пацієнтами, яких включали в когорти 2 мг/кг і б мг/кг ії між обома рекрутинговими центрами, які брали участь у дослідженні.
Порівняння рівнів транскриптів ЕММ ї рої НЕНМУ-МУ із клінічними даними при включенні в дослідження
Кореляція клінічних параметрів з рівнями НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів при включенні оцінювали відповідно до інформації, підсумованої в таблиці 6.
Таблиця 6
Рівні НЕКУ-М/-асоційованих транскриптів і клінічна інформація при включенні 7 117 | ВідноснаекспресіяцільовоїРНКдоСОЗВ | Клінічнаіїнформаця ("
М Відносна | Відносна | Відносна | Відносна | Відносна - о- - - - - - Тривалість
Зразок мент До- |експресія| експресія | експресія | експресія |експресія Діагноз! Захворю- ЕОЗ5 при Індекс за(мг/кг/ МеАХУ- (ОМО/зизвІОМОг/сбивБ|Синцитин/|. М5АМ- включенні! прогресії часу вання епм/си5о сив роі/сивзо
ВЕРН СИ НОМ КОНЯ НОЯ ПОН КОНЯ ОХ ПАНИ НАННЯ ПОН КАН
12
БОКИ НСС НИ НОЯ ПЕСНИ ЕЕ НОСИ НОСИ НІС
01-0004 пе МИ ОМ КОНЯ ОНИ ПОН КОНЯ ОХ ПАНИ НАННЯ ПОН КАН ит 2 оси | сою сою | | оон вреж| м 1 25 | о пря 21 си | оте | схе | оби | б рт 851.51. ях вою са 0011000 нт 525 ов бр | оо оаж/ оою | оси | ост рює! 255 питво | бот оон | вою | ом реж| 2155. 5 рт 51 оое | соти | оо | оби | бах реє 2 | 85.1 95 | сив | ож | осв | сою | сх фею! 71.5. о. 15
По-перше, ці результати свідчать про те, що які б не були праймери й зонди, які використовувались для різних протоколів КПЛР, і незалежно від генів НЕКМ-М/ (епм або рої), найвищі рівні РНК НЕКМ-М/ були виявлені в пацієнтів з РРМ5, а найнижчі в пацієнтів ЗРМ5 (Фігура 2). У явному вигляді отримана нова інформація, що представляє інтерес, за диференціальними рівнями транскрипційної експресії НЕКМ-УМ у пацієнтів із двома різними формами прогресуючої М5 (РРМ5 і 5БРМ5). Це також може становити інтерес для ККМБ, але в даному документі представлений тільки один такий випадок із проміжною відносною експресією.
Це показує, що кількісне визначення транскрипційного рівня НЕКМ-М/ у пацієнтів 3 М5 може мати діагностичне значення, і може, наприклад, використовуватися для цілей підтримки диференціальної діагностики між випадками 5РМ5 і РРМ5. Це також може бути корисним для стратифікації порогів КПЛР для визначення прогнозу або терапевтичного моніторингу при
РРМ5, 5РМЗ5 і, в остаточному підсумку, також, у випадку ККМ5.
По-друге, незважаючи на низьку чисельність у цей час, при використанні протоколів «5уп» і «рої» були виявлені статистично значимі кореляції між транскрипційними рівнями РНК епм і рої
НЕВУ-МУ і тривалістю захворювання й/або індексом прогресії. Інші протоколи з використанням різних праймерів і зондів не дали значимі кореляції із клінічними параметрами, що підкреслює значення обраного протоколу, як показано на Фігурі 3.
Це показує, що вибір протоколів для кількісної оцінки рівнів транскрипції гена епм НЕКМ-М/ синцитин-підтипу (протокол «зуп», з ЗЕО ІЮ М": 14, 15 і 16) або гена рої у цілому (протокол «рої» з 5ЕО ІЮО М": 23, 24 і 25) також може мати особливе діагностичне значення в М5. У даному документі, протоколи «5уп» і «рої»х КПЛР можуть бути використані як біомаркер активності
НЕВУ-М/-асоційованого захворювання (еволюціонування прогресу захворювання) для клінічної стратифікації, наступного спостереження й терапевтичного моніторингу. Це також може бути корисним для стратифікації захворювання «тривалість відносно активності» при прогресуючому
М5 за допомогою «Зуп» КПЛР, що може бути перспективним для відмінностей у терапевтичних стратегіях, які повинні застосовуватися відповідно до транскрипційного рівня НЕКМ-М/ епм «синцитин» у пацієнтів із прогресуючою еволюцією протягом кілька років (зокрема 5РМ5).
Рівні НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів протягом 6 місяців
У випадку кожного пацієнта, включеного в дослідження, РВМС виділяли зі зразка крові в 1-й день (включення), 2-й день, 8-й день, 15-й день і 29-й день. Після цього, пацієнти одержали 5 додаткових щомісячних уведень ЗМБАСІ і РВМС виділяли зі зразка крові перед кожною інфузією антитіла. Таким чином, отримані результати представляють зміну кожного НЕКМ-МУ- асоційованого транскрипта протягом перших 6 місяців дослідження ЗМСО02.
Друге введення ОМБАСІ1 відбувалося в різні моменти часу після 1-го дня, залежно від пацієнтів. Таким чином, середню зміну НЕКМ-М/-асоційованих транскриптів оцінювали за допомогою зразків крові, зібраних тільки перед кожним уведенням СМБАСТ1.
У когорті 2 мг/кг, спостерігалося зниження рівнів усіх НЕКМ-М/-асоційованих транскриптів при б-му уведенні СМБАСІ, у порівнянні з базовими значеннями при включенні в дослідження (Фігура 4). Це підтвердилося в 6 мг/кг когорті (Фігура 4). Коли всіх пацієнтів (2 мг/кг і б мг/кг
Зо когорт) групували, зменшення краще підтверджувалося за допомогою протоколів НЕЕМ-М ОМО,
Опог2 ї рої! кПЛР протягом усього дослідження ЗМСО002 (Фігура 4). Це також проілюстровано статистичним розподілом значень, визначених перед першою, третьою й шостою ін'єкцією
СМБАСТ у всіх пацієнтів (Фігура 5).
Досить несподіване зниження також було відзначене для мРНК рої. Цей ефект не очікувався для антитіла, яке специфічно зв'язується з білюоом Епм НЕКМ-МУ, після ін'єкції один раз на місяць протягом шести місяців у пацієнтів з експресією хворобо-асоційованого НЕКМ-МУ. Цей вплив на
МРНК, яка кодує ферменти зворотну транскриптазу, протеазу й інтегразу, таким чином, представляється унікальним і новим для такого антитіла проти Епм, як ЗМБАСТ1. Це свідчить про вплив на глобальну експресію самого НЕКМ-МУ/ ії через його роІ-кодовані продукти, на його реплекативну ретровірусну активність. Таким чином, показаний антиретровірусний ефект, зокрема антиретровірусний ефект, націлений на родину НЕКМ-МУ.
На Фігурі 5 вибір найбільш точних праймерів і зондів для протоколів кКПЛР для терапевтичного моніторингу груп пацієнтів, що одержували СМБАСІ або будь-який інший лікарський засіб, що заважає експресії НЕЕМ-МУ, представлений «ОМО2» для НЕКМ-М/ епм і «рої» для ферментів НЕКМ-МУ, кодованих геном рої. Проте, розрахунки співвідношень за допомогою фігур, отриманих в інших протоколах кПЛР, також може представляти діагностичний або прогностичний інтерес.
У цьому експерименті, рівні НЕКУ-М/-асоційованих транскриптів у пацієнтів з М5, включених у дослідження ЗМСО002, оцінювали кількісною ПЛР у реальному часі, з використанням різних наборів праймерів, репрезентативних для гена НЕКМ-УМ епм і одного набору праймерів, ампліфікуючого послідовності НЕКМ-МУ рої (у межах області, яка кодує зворотну транскриптазу).
НЕНМУ-Му/-транскрипти, досліджені в даному документі, позначені як МОКМ-єпм, НЕВМ-М/-ОМО,
НЕВУ-Ж-ОМО2, НЕВУ-М/-5уп і МЗЕМ-рої.
Результати ясно показують, що ці біомаркери можуть дати важливі біоклінічні дані, які представляють інтерес для діагностики розсіяного склерозу й для терапевтичного моніторингу
НЕВУ-М/-асоційованих захворювань.
Крім того, рівні НЕКМ-М/-асоційованих транскриптів, як представляється, у пацієнтів при
РРМ5 є вищими, ніж при ЗРМ5, що підтверджує значення даних кількісних тестів ПЛР із різними наборами праймерів для біоклінічної оцінки пацієнтів і, далі, для цілей диференціальної бо діагностики серед М5 прогресуючих форм (5РМ5 і РРМ5).
Оскільки рівні всіх НЕКМУ-М/-асоційованих транскриптів зменшувалися протягом перших 6 місяців ЗМСОО02 як в 2 мг/кг, так і в 6 мг/кг когорті, то це підтверджує біоклінічне значення даних наборів праймерів і протоколів КПЛР для терапевтичного моніторингу пацієнтів і для оцінки біоклінічної терапевтичної ефективності.
Ї нарешті, це також забезпечує біологічні докази того, що обробка анти-Епл НЕВМ-М/ антитілом (наприклад, СОМБАСТ) пацієнтів з М5 пригнічує експресію НЕКМ-МУ, що не очікувалося для рівня епм мРНК, але ще меншою мірою - для рої мРНК. Це чітко вказує на ефективність даної обробки анти-ЕММ оантитілом проти ендогенного ретровіруса, асоційованого із захворюванням людини, оскільки не описувалася з людськими екзогенними ретровірусами.
Приклад 2. Інгібування білка, кодованого роІ-геном ендогенного ретровіруса людини М/-типу (зворотної транскриптази), синергійно підсилюється при комбінованій обробці антитілом
СМБАСІ і АТ
А. антигенна характеристика клітинної культури, яка спонтанно експресує білки дад, рої і еп
НЕВУ-МУ
Матеріали й методи
Клітинна культура, яка спонтанно експресує білки дад, рої і епм НЕКМ-М/
Людські клітини СН2 підтримували в середовищі ІМОМ (12440053; І Пеїесі), доповненому 1095 фетальної сироватки теляти (10270106; Іпмігодеп), 195 пеніциліну/стрептоміцину (Р4333;
Зідта) при 37 "С с 595 32. Екстракція білків
Екстракція білків
Клітини СН2 повторно суспендували в 500 мкл буфера КІРА (КО278, 5ІСМА), який містить антифосфатазний інгібіторний коктейль сОтрієїефт (04 693 132001; Коспе) і 0,05965 І РО (326495- 22-1; Амапії роїаг) при 4 "С, витримували протягом 2 годин при 26"С на обертовій платформі й центрифугували при 100009 протягом 20 хвилин при 26 "С. Надосадову рідину збирали й зберігали при -20 "С.
Вестерн-блотинг
Білкові екстракти розбавляли в 2 рази буфером Лемлі (ВіоКкай) і нагрівали протягом 5 хвилин при 100 "С перед завантаженням. Білки розділяли за допомогою електрофореза в 7,590 поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію (ТОХ, ВіоКад). Гелі проганяли протягом 15 хв. при 120 мА в робочому буфері (Іїе Тесппоіодіе5). Після переносу білків на 0,2 мкм нітроцелюлозну мембрану (Віокай), мембрану двічі промивали їх РВ5З (БіоМегіеих), який містить 0,0595 Тмееп20 буфера (Зідта) і блокували протягом 1 години за допомогою Зіагпіпду
ВіоскК (Тпегпто) на обертовій платформі за кімнатної температури. Первинні антитіла використовували відповідно до таблиці Її, в їх РВ5 протягом 1 години. Потім мембрану промивали три рази й інкубували протягом 30 хв. з кон'югованими з пероксидазою хріну козячими антитілами проти кролячих (521234; ПРЕТЕСН, 1/1000 в 1х РВ5) або мишачих (115- 035-146; джексон, 1/1000 в їх РВ5) ІдО-антитіл. Білок, який представляє інтерес детектували за допомогою колориметричної реакції (Орії 4-СМ, ВіоКад), відповідно до наданого протоколу.
Антитіла проти цільового антигену й розведення антитіл: 1) кролячі поліклональні рАб1 (5БО09АКОО1, бдпагіх), МОВМ-ЕММУ, 0,5 мкг/мл; 2) кроляча поліклональна сироватка 330110 477 (330110 477, Іпсейат), М5АМ-рої! поліпротеїн, 1/500; мишачі моноклональні З8Е12 (250510, здмчагіх); поліпротеїн М5КМУ-сад, 1 мкг/мл.
Результати
Як видно з Фігура 6, ці клітини експресують усі структурні біли НЕКМ-МУ, які детектуються специфічними антитілами, спрямованими проти дао, рої і епу-кодованих білків.
Слід зазначити, що анти-дад антитіло виявляє дад-кодований поліпротеїн НЕКМ-МУ і різні розщеплені білки, у тому числі більш сильно детектує смугу капсидного РЗО-подібного білка.
Патерн, детектований анти-епм антитілом, очевидно, є більш комплексним через детекції
НЕВУ-М/ Епу-кодованих глікозильованих і неглікозильованих мономерів, димерів і тримерів, а також розщепленої одиниці ЗО або ТМ близько 45 і 35 кДа. Анти-рої антитіло головним чином детектує розщеплену зворотну транскриптазу, хоча у верхній частині гелю може бути виявлена високомолекулярна смуга (без оцінки кДа), яка відповідає нерозщепленому роі-кодованому поліпротеїну з НЕКМ-МУ.
В. Білок, кодований роІі--еном ендогенного ретровіруса людини Му/-типу (зворотна транскриптаза) не детектується в клітинах, підданих комбінованій терапії антитілом ЗМБАСІ і
А/Т.
МАТЕРІАЛИ Й МЕТОДИ
Клітинна культура хордоми
Клітини людини СНІ ї СНаІ2 (1:1) культивували спільно для оптимізації росту клітин СНЕІ2 і бо підтримували в б-коміркових планшетах (СС7672-7506; СуюОпе) за щільності 1х105 клітин/комірку в середовищі ІМОМ (12440053; І егесі) з додаванням 1095 фетальної сироватки телят (10270106; Іпмігодеп), 195 пеніциліну/стрептоміцину (Р4333; Бідта) при 37"С с 595 СО».
Клітини обробляли ї) АТ (1 мкг/мл, А21-69; бБідта), ії) ЗМБАС1І (300 мкг/мл, Т 950111-А; роїутип), іїї) зидовудін - ЗМБАСІ1 або відповідні контролі з буфером СМБАСІ1 (20 мМ Нів, 5965 сахароза (маса/об'єм), 0,0195 твін 20 (маса/об'єм)|.
Екстракція білків
Клітини СНІ і СН2 ресуспендували в 200 мкл буфера КІРА (КО278, 5ІСМА), який містить антифосфатазний інгібіторний коктейль сОтрієїефт (04 693 132001; Коспе) і 0,0595 І РО (326495- 22-1; Амапії роїаг) при 4"С, інкубували протягом 2 годин за температури 26"С на обертовій платформі й центрифугували при 10000 д протягом 20 хвилин за температури 26"7с.
Надосадову рідину збирали й зберігали при -207С.
Вестерн-блотинг
Білкові екстракти розбавляли (2:1) в 2Х буфері Лемлі (ВіоКад) і нагрівали протягом 5 хвилин при 100"С перед завантаженням. Білки розділяли за допомогою електрофореза в 7,595 поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію (ТОХ, ВіоКадй). Гелі проганяли протягом 15 хв. при 120 мА в робочому буфері (Іїе Тесппоїодіеб5). Після переносу білків на 0,2 мкм нітроцелюлозну мембрану (ВіоКаєдй), мембрану двічі промивали їх РВ5 (ріоМмегівих), що містить 0,0595 ТГуееп20 буфера (Зідта) і блокували протягом 1 години за допомогою Зіапіпд ВіоскК (Тпепто) на обертовій платформі за кімнатної температури. Первинні антитіла були використані відповідно до таблиці 1, в їх РВ5 протягом 1 години. Потім мембрану промивали три рази й інкубували протягом 30 хв. із кон'югованими з пероксидазою хріну козячими антитілами проти кролячих (521234; ПРЕТЕСН, 1/400 в їх РВ5) або мишачих (115-035-146; іаскхоп, 1/1000 в 1х
РВ5) ІдС-антитіл. Білок, який представляє інтерес, детектували за допомогою колориметричної реакції (Орії 4-СМ, ВіоКад), відповідно до наданого протоколу. Антитіло: кролячу поліклональну сироватку 330110 977 (330110 277, ІпсеПап), індукована проти М5ЕМ-рої, розбавляли 1/500.
Як видно з результатів цього експерименту, які проілюстровані на Фігура 7, клітини, культивовані в присутності комбінації як ЗМБАСІ, так і АТ (доріжка Мо 1) більше не експресували детектованих рівнів зворотної транскриптази (КТ) НЕКМ-МУ. При впливі тільки АТ (доріжка Мо 2) чітке зменшення експресії КТ НЕКМУ-У/ показане відповідним зменшеним сигналом, пофарбованого анти-ВТ НЕНКМУ-УМ антитіла; проте, дане зменшення є частковим ефектом. На доріжці М"З3, вплив ЗМБАСІ окремо, очевидно, впливає на білок зворотної транскриптази, кодований НЕКМ-УМ рої який детектувався за поточних умов іп мійго. Як паралельний позитивний контроль, на доріжці Мо 4 показана експресія білла КТ НЕКМ-МУ із клітин, які зазнавали тільки впливу розріджувача ЗМБАС1І (буфера для розведення) як мок- обробку, яка демонструє нормальну присутність експресованої у цих клітинах КТ у цій смузі.
Таким чином, у даному документі показано, що тільки комбінація анти-Епм НЕВУ-М/ антитіла
СМБАСІ і азидотимідина (А2Т) має достатній вплив для повного інгібування вироблення КТ
НЕВУ-МУ у культурі людських клітин, які експресують гени дад, рої і епм НЕКМУ-МУ/ у цілому, у той час як кожна терапевтична молекула окремо проявляла лише частковий або дуже незначний вплив на цю експресію НЕКМ-МУ. Незважаючи на те, що це відноситься до умов культивування клітин іп міго, цей ефект проте, свідчить про безумовне збільшення й головного синергійного впливу, який справляє на ефективність інгібування експресії КТ НЕКМ-МУ дана унікальна комбінація антитіла, яке нейтралізує білок Епм НЕКМ-М/У, і антиретровірусного лікарського засобу проти зворотної транскриптази. Ці терапевтичні молекули, очевидно, не проявляють синергійного впливу на експресію КТ ендогенного ретровіруса, такого як НЕКМ-МУ, тим більше, що (ї) вони спеціально спрямовані на зовсім різні молекули й білкові структури, (її) вони мають зовсім різні способи дії (нейтралізація епм шляхом націлювання на специфічний епітоп і інгібування ферментативної активності КТ) і (ії), одна є антитілом, у той час як інша є низькомолекулярною молекулою.
Приклад 3. Приготування буферного розчину для композиції антитіла ОМБАСІ1, який підходить для внутрішньовенної ін'єкції людським індивідуумам
Як уже згадувалося в прикладі 1, ЗМБАСІ є Ідс4 - моноклональним антитілом, спрямованим на білок оболонки ретровіруса, асоційованого з розсіяним склерозом (М5ЕМ-ЕММУ), представника родини ендогенних ретровірусних елементів НЕКМ-М/, який також називається
Епм НЕВМ-МУ. СМБАСІ продемонстрував сприятливий профіль безпеки й лінійну фармакокінетику у фазі І клінічних випробувань, проведених на здорових добровольцях. Фазу
Ма клінічних випробувань 5МС002 проводили для оцінки профілю безпеки й фармакокінетики
СМБАСІ при 2 і б мг/кг на 10 хворих на розсіяний склероз. ЗМСО002 було 12 місячним дослідженням, у якому ЗОМБАСІ1 уводили щомісяця.
Для внутрішньовенного (в.в.;) уведення антитіла СМБАС1, використовували спеціальний склад буфера, придатного для розведення, зберігання й ін'єктування антитіла пацієнтам: 20 мМ гістидін, 595 сахароза, 0,0195 полісорбат 20, рН 6,0.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«1105 ЖЕНЬОРО ГА «120хАНТИРЕТРОВІРУСНИЙ ЛІКАРСЬКИЙ ЗАСІБ, НАЦІЛЕНИЙ МА ЕНДОГЕННИЙ
РЕТРОВТРУС ЛЮДИНИ
«130х «160з 28 «170» вт155АР 1,3 «210х 1 «й115 10 «йі2х РТ (протеаза зворотвої транскриптази) «213» Миз тизснін5 (миша хатна) «4005 1 5ег діа дес обег бек уві бег Тук Мвї Тут 1 5 10 «2105 2 «21їхМ 7 «2125 РЕТ Спротеаза зворотної транскриптази) «РІЗ» Мох тизсв1ш5 «4300 2
Ага Тагобег о Аб5п бен АВ бег 1 5 «210х З «112 З «212х Рввт Спротеаза зворотної транскриптази) «2135 Ми5 то5сцій5 «300» 53 біп сій туго біп бег цей рго Гей тТвВг 1 5 хЕ10» 4 «211» 5 «12» РВТ (протеаза зворотної транскриптази) «213» Миз тизсніч5 -3005 4
Азротуг пі Мет Ні і 5 «210» 5 «811» 17 «212» РТ (протеаза зворотної транскхриптази) «2135 Ми» тичзси105 «300» 5
Аїа ма! Аа рго сій тТвВкобіу сФіу Тйг Ада Туг Аб5побів фу5 вве гу 1 5 10 15 с1у «2310» 6 «23115 7 «2125 РТ Спротеаза зворотної транскриптази) «213» Ми тивсий5 «300» 5
ТВг уві маі вго ве Аа тук 1 5 «210» 7 «211» 106 «2125 РВТ (протеаза зворотної транскриптази) «213» Штучна послідовність «220» «ваЗ» М «400» 7 зіп їв бій фе ТВгосій 5егорго бег обек фе) бег АТа бек ма) сіу 1 5 10 15
А5р о Аго уаї тпг оїїе твгоСу5 5ег діа 5ег бек 5ег узі бек Туг Мех
Туг тгр туго біп бій цує Бго б1у ув АЇа Бго їу5 Аїа Тгр о ІЇТе туг
Ага тТйгобег А5п о іен АЇа бек обіу ма! Рго 5ег Агу Ре бег сту бег 60
Ту его біу ТйгоАБроТуг Тнгоїей твВг о ї112е бек о5егоіец бій го (їй
БЕ 70 75 50
АБр о Рпе Аїа таготує туго Суб сів о1п туго бій 5ег грец рго бецй ТВг 85 зо 95 рРайе біу сіу біу тпк обу5 маї сіш Їїів суб 190 105 «230» 5 «ДІЇ 116 -212» РвтТ (протеаза зворотної транскриптази) «213» штучна послідовність «го» «вгУх МН «А0О0» 8 сій уУуаї бій ге Уаї біп б5ег 21іу АТа сін уаї суб уз РгО б1у Заг 1 5 18 15
Зег Ууаї їу5 Уа! бек Су гу АТа бек осіу туг Тйг о РНе тВг Ар о Туг сім Мет нів Ткромаї Аго бій АТа вго бі1у бій біу се січ тТгр те
Ф1У АТа маї Аїа врго біс тйгосіу біу Тьг Аїда тТук А5п о Зіп губ Рпе 5о0 55 бо
Ку Сіу Ага Аїд тиг хів тйг о АТа А5рогуб его твг обег о тпг АЇТа Туг 65 70 75 80 мет сів сен 5ег 5ег іец дго Зег іч Ар Тиг о Аїа маї Тук Туг суб 85 За 35
ТвВгоЗеає Твг Уа? уві Рго ле діа Туг Тгр о б1у бл о біу тигоієец Уві 1 105 мо
ТиИг Уаї бег 5ег 115 «210» З «211» 443 «12» РЯтТ (протеаза зворотної транскриптази) «2135 Штучма послідовність «920» «в23х НО «400» 9 сій маї сій ее маї сій бек б1у АВ сі мВ! вуз фу5 Рго с1у бак 1 З 10 15
Зег Уаї іу5 ві бек Суз уз АфЇа 5ег З1у Туг ТВг Ріпа тТНг о А5р туг 20 25 30 сій Меї ні5 тгроуаї Аг сій Аа Ргсо біу бій біу ви біц Тер пе 35 40 45 сТу Аїд Уві Аїд РКО бій тйгобіу б1у тс о АТа Туг АБп бів цу вве 50 55 бо
Куб біу Ага Аїа тйгої)іе твБгоАїа д5рогу5 бег тпгобег о тийг Аїа тус 65 70 75 80
Меї бій зер б5ег его це) Аг бек об3із Азр о тВг о Аїа Уа! Туг Туг Суб 85 90 95
ТВгодег о твгоуа! Уаї го Ре Аїа тук Тгр 01у бів сіу Тнгоїєм МВ! 1980 105 130
ТВг Уаї 5ег бег Аїа 5ег ТВг о цує біу го 5ег ма! Рпе РгОо Гей Аа зх 120 125
Бго Суб б5ег Аго Зег о Тпгобес бій бек ТБг дів Аза ау б1у Суз кей 135 140
Уаї їубз дяр туго Рйе Рго сій Рго маї Те Уа) 5ег о Тгр о АБп бегосіу 145 1590 155 162
Аїа їец тийгобег біу ма! Нія тб овВлйе Рго Аїз Уаї цей біп бег 5ег 165 170 175 саіу ен туго бег сцен бек его уа! мМаії тТБгомаї Рго баг бег бег о гву 180 185 190 с1у тийгогу5 тТвготук тВг оСух А5а маї АБронНія ру5 Рго его АяВ ТВг 195 200 205 цуя уаі дер суч Аго ма! сій бек огуз тує сіу го РгГо Су ро РгО 210 215 220
Су вго Аза рго біб Ра гец о біу біу ко зег уві Ре їву РМ РГО 225 230 235 249
Рго Був Рго рук Ар тйг іем Мет тів баг Ага тТИгоРКО біб маї тв 245 250 255
Су5 узі ма! уаї Ар ма! чего біп бір Ар орго бів ма)! сій РНе деп 250 265 270 ткротукг маї Азробіу ма! сій ма! Ні5 Ап АЇЯ Гу ТЕг обу РгО Аго 275 280 285 сід бів бій РВЄ А5п о Зег Тве тує Аго ма! ма! Зегома!ї Бец твг Уа! 220 295 300 ем нів біп Аб5р о Тгроцєу Аб5п о біу уз бі Туг уз Суз ув Уаї 5ег 305 310 315 329
АБп суб б1іу Сей Рго бег бег Їіе біц їуз тТпг о їЇ6є б5егоіу5 Аїа губ 325 330 335 с21у біб бго АгУ біб рго сій омаії Тук о тпг рем Вго Рго 5ег бів 61 34) 345 356 сід Меї тйг офу5 А5побіп ма! Зег бе) тпгоСу5 беб Ма? Гуз О1у РИ 355 3650 365
Туг Рго Хаг Авр їіє АЗїа Уа! бі Тер бі» 5ег А5В біу с1п Рго бів 379 375 з5о
А5п Ап о Тує Суб Тиг о ТВе о Рго Рго маії се Абр бег А5р с1у бег Ре 385 390 395 400 ре їец Туг бег Ага йец тВг Уа! Ар цу Зег Агу Тгтробів бій с1у 405 415 415
А5п о маї Ре бег Сух чек уаї Меї Ніз сій АТа цей Ні А5п Ні Туг 420 425 430
Тиг остй Суб бег огец бек бе 5ег без бу Гу 435 440 км о «2311» 213 «212» РЕТ (протеаза зворотної транскриптази) «213» штучна послідовність «ВО» «223» с «400» 10 зій тт бів їм твВгобіб бег о рго 5вгоЗек рен б5ег АТа Зег очаї сту 1 5 16 15
А5роАго Уа! Тс о ї1є6 тТйгкосСу5 5ег Аїд бек обег баг ув) беготТуг Меї
Тугє Тер оТук біл бій Куб го сту губ Аїд РГО Куб АЇа Тгр ї1е Туг
Аг твго5ег ай сец АЇа 5ег біу ма! рРго бег Агу РНе бек б1у 5ег 50 сіу бек біу тйг одер тує тик гей ТВ тів бегобЗає рей біп Рго 1 65 7 75 80
Ар Ре АЇа тис отТуг туго суб си сій Тук бій Бек гей рго без твг 85 що 95
Ре сіу сі сТу ТВгогує Уа! сім ї1е ух дго Тйгома! АТа Аа рго 100 105 іо
Зег Уа! РМне Іі Ре Рго Рго 5ег дер піч бій без бух его біу тТНг 115 120 125
Аїа бег ма! уаї Суб це еп дяп дал Ре Туг РГО дгу іч АКМа цу 130 135 110 ма1ї бій тер уз ма) Азр АБ Аа ієци бій Зеб біу Аяй Зег біп 61 145 150 155 160 зегоуаї тТигозіц біл Азр бек оруз дер бег тТиг о тТук 5ег іец бер 5ег 165 їі 175
ТВгобео Тпгобем баг обу А1їа АБротує ОТ їуб Ні Гу Уа! туг АЇїа 180 185 16а сСуз бів маї тТВгоніє бів с1у рей Зег обегорго ма) ТВгогСу5 баг ре 135 200 205
А5п Ага біу зіц сСуз 210
«2105 31 «231» 24 «212» ДНК «213» штучна послідовність «2» «223 праймер «4005 31 сЕкссадзаї тозазсстота аадс 24 «210» 12 «8115 29 «Ріг» ДНК «213» Штучна поспідовність «920» «г23» праймер «00» 12
Чодісоєоса зттавоаст сс 22 «2105 13 «211їх 26 «212» ДНК «213х штучна послідовність «д2йх «2235 РКОВЕ / БАМ в 5" положенні ії ТАМВА в 3' плоложевні «3002: 13 їгстісСаваї озадссссво аїтосзд 26 «210» і14 «2315 20 «212» ДНК «233» Штучна послідовність ка20» «д23» праймер «А0О» 14 асежкцістс тіІссадавтс 20
«210» 15 «21ї» 20 «212» ДНК «213» Щщтучна послідовність «220» «223» праймер «400» 15 дсодсадатс ттацістсад 20 «2102 16 «231» 17 «212» ДНЕ «213» Штучна послідовність «220» «223» РВОВЕ БАМ в 5" положенні 1 ТАМКА в 3" положенні «400» 15 зтодадссса адатоса 17 «2305 17 «211» 20 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» праймер «400х 17 зосдоссаос вазкставад 20 «2105 18 «11 91 «2122 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» праймер «А00Оз 15 акосзасдод ссастдасте с 21
«2105 19 «211 21 «212» ДНиК «213» штучна послідовність «20» «233» праймер «4005 13 остаєасстда сододасода 5 21 «210» 20 «21ї» 73 «аї2х ДНК «233» Штучна послідовність «22й» «223» праймер «АЙО» 20 ствасссттх отазоадаста 39 23 «2305 21 «2115 21 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «20» «223» праймер «400» 21 тоссссвсса татачоазуєс 21 «Кі0» 82 «211» 20 «2125 ДНК «213» штучна послідовність «220» «223» праймер «400» 22 сакотаєссо затазоссад
«ЗО» 23 -2115 19 «212» ДНК «213» штузна послідовність «220» «223» праймер «3005» 23 сстатасатс стодастстс 19 «210х 24 «211» 19 «212» ДНК «213» штучна послідовність «220» 223» праймер «400» 24 сттдодстаа ТосСстодСс 39 «210» 25 «2115 21 «212» ДНК «2132 Штучна послідовність «8205 «8223» РЕОВЕ / КАМ в 5' положенні і ТАМКА в 3" положенні «400» 25 ссаасоїсіс аасісассто 9 21 «2105 25 «2115 24 ка122 ДНК «213» Штучна послідовність «220» «23» праймер «400» 26 зчсусдвасс апуадавоєв зас 24
«КЗ» 27 «211» 20 «212» ДНК «213» штучна послідовність «В20х «223» праймер «А0ОО» 27 тадсатозас хотдаксата 20 к?10» 28 «її» 27 «212» ДНК -213» штучна послідовність «20» «Р23»РВОВЕ л БАМ в 5' положенні 3 ТАМБА в 3" повоженні «400» 28 зоссІсвача їсвісадсав тосстсЄ 27

Claims (10)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Комбінована композиція для застосування як антиретровірусного лікарського засобу, націленого на вірус, що належить до сімейства ендогенних ретровірусів людини типу М/ (НЕКМ- ММ), при запобіганні або лікуванні захворювання, що асоціюється з НЕКМ-М/, яка включає: - антитіло, або його фрагмент, націлене проти білка оболонки НЕКМ-МУ (НЕНВМУ-МУ Епу), де вказане антитіло, або його фрагмент, включає кожний з 6 СОК, представлених в ЗЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 3, ЗЕО ІЮ МО: 4, ЗЕОІЮО МО: 5і ЗЕОІЮ МО: 6; і - лікарський засіб, що інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу.
2. Комбінована композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що зазначений лікарський засіб, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, є азидотимідином (А2Т).
3. Комбінована композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказане антитіло, або його фрагмент, вибирають із групи, яка складається з Ем, Раб, К(ар)2, Раб", авхем, зсЕм, зе(Е)2, діатіла, і мультиспецифічного антитіла, утвореного із фрагментів антитіл.
4. Комбінована композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що зазначене антитіло є моноклональним гуманізованим антитілом.
5. Комбінована композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказане антитіло, або його фрагмент, включає: - важкий ланцюг (НС) має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 9 і - легкий ланцюг (І С) має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 10.
6. Комбінована композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що зазначене антитіло, або фрагмент, здатне: - супресувати або інгібувати повністю або частково реплікацію вірусу, який належить до родини ендогенних ретровірусів людини М/-типу (НЕКМ-М); або - супресувати або інгібувати повністю або частково експресію вірусу, який належить до родини ендогенних ретровірусів людини Му/-типу, або експресію білка оболонки зазначеного вірусу.
7. Застосування антитіла, або його фрагмента, спрямованого проти білка оболонки НЕКМ-М/ Зо (НЕКМ-М/ Епу) у комбінації з лікарським засобом, який інгібує ретровірусну зворотну транскриптазу, при запобіганні або лікуванні захворювання, що асоціюється з НЕКМ-ММ, де вказане антитіло, або його фрагмент, містить кожний з 6 СОК, представлених в 5ЕО ІЮО МО: 1, ЗЕО ІЮ МО: 2, ЗЕО ІЮ МО: 3, ЗЕО ІЮ МО: 4, ЗЕО ІЮО МО: 5 і ЗЕО ІО МО: 6.
8. Застосування за п. 7, яке відрізняється тим, що вказане НЕКМ-М/-асоційоване захворювання, вибране із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5), шизофренії (52),
біполярного розладу (ВР), однополярної або психотичної депресії, клінічно ізольованого синдрому (СІ5, з неврологічним симптомом), хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СІОР), епілепсії, псоріазу, онкологічного захворювання, запального панкреатиту й діабету, такого як цукровий діабет 1-го або 2-го типу.
9. Застосування за п. 8, яке відрізняється тим, що вказане НЕКУ-М/-асоційоване захворювання вибране із групи, яка складається з розсіяного склерозу (М5) і хронічної запальної демієлінізуючої полінейропатії (СТОР).
10. Спосіб запобігання або лікування НЕКМ-М/-асоційованого захворювання, який відрізняється тим, що включає введення комбінованої композиції за п. 1. А и В ра» . . х ШЕ Б жа В я Шу і ж І ЕЕ Й БЕ е жк «ЕД . 5 | й 5 х гія, заківвавьь аа Ба З х ' Ст д я Е мо "з, : що в . 5 в ши: ші . ай Кок я ен мкм мк щк ШО ЩО) ща ор юний пон бло є їх пе й "Ди ШИ. в Ж гу в ї Те щ І жа КЕ те «и й пн Вр кое зу ва з ої 7 мія я кл ех «8 х ж «ї жк «х ! Ж ЕЕ шк ше Ка Б Ї 5 Е Ж Е З Позо» , ПЕ в М ще Ві га ЗЕ вв, З З ж с ь й, я г. З Кн Бо ж Б : : і зві; фреска етеюккжесесткнтй кла кжкакалжиісьжкжння В З й й те Ж ТА ща: ЩЕ Ок ке ВВЕ ; ЯН ї й 3 й у ШИ .
а. Б МКК 4 ЗЕ В В ОБ'яЖЕЕ ЩО
З. В 2 Н з 5: ІНН НН м: ша ВЕ БУ Зх РН І ЗЕ БЕ Її : бе ОМ і. я я | ї гЗ я З її 2 5 їй й є в в и і я Фо о й
З я. Й Бе гу що ях т. 3 з ж Е ше Ж . іа з
Ж . ЩЕ - ни ин и ГИ В нив ен нн жк ни нн К З Зщя ЩО 58 ще НЕ БИ З ЗБ ЯК Ж аж же Зам НЕ ВІДНОСНЕ ЕКСПРЕСІЯ УМ ВІДНОСНА ЕКСПРЕСІЯ ВВ ВІЙНОСМА ЕКСПРЕС ВО.
СЕРЕДНЯ ДЛЯ ПАЦІЄНТІВ З мейх КЕБРЕДНЕ ДІЯ ГРАЄ К ваг ї т Ж че ЩЕ З г дя Шини ! нд: . й ві «с ВЕ що дн з о Ве Й пофрея фо ее са г - р шин с і ба С кфусттссврюс ЖК в р в ен й шк ВЕ Шишки ен іекна я а СУ що кре ших м : Щі У -й щ 1 і І ц |. ; У а 5 ах я ; Ши М М МЕ НЕ нОомек ВВЕДЕННЯ номер ваБлЕМНЯ СЕРЕДНЕ ПЛЯ ПАЦІЄНТІВ ВСІ ДОЗ і в в пад МОЮ КО НИЙ о св НН ко |до В Ге знне зши свавнанн за МЕР ВВЕДЕННЯ
Ж ВЕУ За й ЩО! п : ех : пеллля Е МИНЕ! в ще з: ВИШ НН: пн БОЇ а : : вх З Е Н й " Е З 5 1 З 5 ноашкР ЕНЕДЕННЯ КОМЕР ВВЕДЕННЯ їх Н 0 В МЕ ЕЕ В вза я ах: ЕТ - ! БЕ ї ! вх Н | Побала ма ВЕ 1 і ЖЕ ї з К 1 ЕЕ се ШЕ т НЕ яті ! Б Е я ж Е В дрон яннннлнянняннкн інн ддиннннних фран няння ннняяаляяадялаажттяяаятннинінялннаннях і З її х З ре Е номер ВВЕДЕННЯ номав вавдЕнНЯ. ще Т деомйнссх ДЕ Ся : її і как Н Е ся п ї седнх х Н ДЖ, хну ук ух укду ку укк ук Кока Я й г ІННиКе введення
А В с ня Бе Б ПЕ У 0 : ПО зав З о оте о «пе ФГ АЕН : С введе ФГ
UAA201613240A 2014-05-28 2015-05-27 Антиретровірусний лікарський засіб, націлений на ендогенний ретровірус людини UA120274C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14305806.3A EP2949342A1 (en) 2014-05-28 2014-05-28 Antiretroviral drug targeting human endogenous retrovirus
PCT/EP2015/061691 WO2015181226A1 (en) 2014-05-28 2015-05-27 Antiretroviral drug targeting human endogenous retrovirus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA120274C2 true UA120274C2 (uk) 2019-11-11

Family

ID=50976559

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201613240A UA120274C2 (uk) 2014-05-28 2015-05-27 Антиретровірусний лікарський засіб, націлений на ендогенний ретровірус людини

Country Status (24)

Country Link
US (2) US20170101461A1 (uk)
EP (2) EP2949342A1 (uk)
JP (1) JP2017519815A (uk)
KR (1) KR20170012376A (uk)
CN (2) CN114276444A (uk)
AR (1) AR100642A1 (uk)
AU (1) AU2015265936B2 (uk)
BR (1) BR112016027671B8 (uk)
CA (1) CA2949884C (uk)
DK (1) DK3148582T3 (uk)
EA (1) EA034612B1 (uk)
EC (1) ECSP16091728A (uk)
ES (1) ES2752131T3 (uk)
HU (1) HUE046187T2 (uk)
IL (1) IL249040B (uk)
MX (1) MX2016015560A (uk)
PL (1) PL3148582T3 (uk)
PT (1) PT3148582T (uk)
RU (1) RU2689326C1 (uk)
SG (1) SG11201609886SA (uk)
TW (1) TW201625679A (uk)
UA (1) UA120274C2 (uk)
WO (1) WO2015181226A1 (uk)
ZA (1) ZA201608050B (uk)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018028538A (ja) * 2016-08-12 2018-02-22 公立大学法人名古屋市立大学 統合失調症とその関連疾患の診断用マーカー及びその使用
WO2019201908A1 (en) 2018-04-17 2019-10-24 Geneuro Sa Method for the detection of the soluble hydrophilic oligomeric form of herv-w envelope protein
EP3916015A1 (en) * 2020-05-28 2021-12-01 Geneuro SA Anti-herv-w envelope protein antibody for use in the treatment of psychotic diseases

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0893691A1 (en) * 1997-07-23 1999-01-27 Mach, Bernard François, Prof. Methods for diagnosis and therapy of autoimmunedisease, such as insulin dependent diabetes mellitus, involving retroviral superantigens
FR2791140B1 (fr) * 1999-03-19 2002-03-22 Bio Merieux Procede de detection d'une activite superantigenique dans un echantillon et composition therapeutique ou prophylactique
WO2003027247A2 (en) * 2001-09-24 2003-04-03 Sangamo Biosciences, Inc. Modulation of stem cells using zinc finger proteins
FR2865403B1 (fr) * 2004-01-23 2009-06-12 Biomerieux Sa Composition pour le traitement d'une pathologie associee a la msrv/herv-w
FR2912314B1 (fr) * 2007-02-09 2012-08-03 Geneuro Sa Composition pharmaceutique comprenant des anticorps diriges contre l'enveloppe de herv-w.
HUE054712T2 (hu) * 2008-07-08 2021-09-28 Geneuro Sa Specifikus ligandum terápiás alkalmazása MSRV-vel összefüggõ betegségekben
US20120321637A1 (en) * 2011-06-20 2012-12-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Combination cancer therapy with herv inhibition
UA119032C2 (uk) * 2012-10-02 2019-04-25 Женеро Са Фармацевтична композиція для лікування блокади ремієлінізації при захворюваннях, які пов'язані з експресією білка оболонки herv-w

Also Published As

Publication number Publication date
MX2016015560A (es) 2017-07-13
IL249040B (en) 2020-05-31
ZA201608050B (en) 2020-05-27
US10894820B2 (en) 2021-01-19
BR112016027671B1 (pt) 2023-11-21
IL249040A0 (en) 2017-01-31
CA2949884C (en) 2023-09-05
AU2015265936B2 (en) 2020-07-30
BR112016027671A2 (pt) 2018-01-30
RU2689326C1 (ru) 2019-05-27
CN114276444A (zh) 2022-04-05
HUE046187T2 (hu) 2020-02-28
PT3148582T (pt) 2019-11-04
TW201625679A (zh) 2016-07-16
JP2017519815A (ja) 2017-07-20
AR100642A1 (es) 2016-10-19
US20170101461A1 (en) 2017-04-13
AU2015265936A1 (en) 2016-12-15
EA034612B1 (ru) 2020-02-27
BR112016027671B8 (pt) 2024-01-09
US20190263895A1 (en) 2019-08-29
EA201692471A1 (ru) 2017-04-28
ES2752131T3 (es) 2020-04-03
EP3148582B1 (en) 2019-07-31
WO2015181226A1 (en) 2015-12-03
KR20170012376A (ko) 2017-02-02
SG11201609886SA (en) 2016-12-29
CN106536550A (zh) 2017-03-22
DK3148582T3 (da) 2019-10-28
PL3148582T3 (pl) 2020-06-15
ECSP16091728A (es) 2017-06-30
EP2949342A1 (en) 2015-12-02
EP3148582A1 (en) 2017-04-05
CA2949884A1 (en) 2015-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2892927B1 (en) Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
CN111108201B (zh) 结合至人类肌养蛋白前体mRNA的外显子51的反义寡核苷酸
IL301468A (en) Use of myostatin inhibitors and combined treatments
TW201520230A (zh) 一種可屏蔽抗體活性的閉鎖器
EA016626B1 (ru) Способ лечения натализумабом воспалительного и/или аутоиммунного заболевания (варианты)
UA123773C2 (uk) ВИДІЛЕНЕ АНТИТІЛО ПРОТИ HtrA1 ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ ПРИ ЛІКУВАННІ ПОВ'ЯЗАНОГО З HtrA1 ПОРУШЕННЯ АБО ХВОРОБИ ОКА
US10894820B2 (en) Antiretroviral drug targeting human endogenous retrovirus
JP2020534337A (ja) オートファジーをモジュレーションするための方法及び医薬組成物
TW202134278A (zh) 用於治療腫瘤之ｅｐｈａ３導向ｃａｒ－ｔ細胞
US9683042B2 (en) T-cell-specific humanized single fragment antibody delivery vehicle
EP3519822B1 (fr) Marqueurs cellulaires
US20180134788A1 (en) Methods and Pharmaceutical Compositions (NTSR1 Inhibitors) for the Treatment of Hepatocellular Carcinomas
US20230374124A1 (en) Compositions for treatment alopecia areata, biomarkers for treatment success and, methods of use thereof
US20240190950A1 (en) Method of treating diseases using gremlin1 antagonists
EP3916015A1 (en) Anti-herv-w envelope protein antibody for use in the treatment of psychotic diseases
NZ789250A (en) Use of myostatin inhibitors and combination therapies
TW202019482A (zh) Htlv-1關聯性脊髓病(ham)之治療或預防劑、及ham之治療方法
US20180099056A1 (en) A therapeutic gene cocktail for heart regeneration
NZ789269A (en) Use of myostatin inhibitors and combination therapies