TW201625679A

TW201625679A - 針對人類內源性反轉錄病毒之抗反轉錄病毒藥

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Publication number: TW201625679A
Application number: TW104117097A
Authority: TW
Inventors: 荷夫普倫; 法蘭西斯柯廷; 阿羅斯蘭; 拉斐爾弗卡德; 朱利米迪納; 亞歷山大馬迪拉; 納帝吉吉辛
Original assignee: 歐洲基因股份有限公司
Priority date: 2014-05-28
Filing date: 2015-05-28
Publication date: 2016-07-16
Also published as: CN106536550A; ECSP16091728A; EP2949342A1; AU2015265936B2; CA2949884A1; IL249040B; US20170101461A1; BR112016027671A2; IL249040A0; US10894820B2; KR20170012376A; BR112016027671B1; US20190263895A1; SG11201609886SA; UA120274C2; EA201692471A1; JP2017519815A; EP3148582B1; BR112016027671B8; AR100642A1

Abstract

本發明係關於一種抗體、片段或其衍生物，用於作為一種針對屬於人類內源性反轉錄病毒W型(HERV-W)的病毒之抗反轉錄病毒藥，其中該抗體、片段或其衍生物係針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)。本發明亦係關於一種組成物，其包含該抗體及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥，用於作為針對屬於HERV-W的病毒之抗反轉錄病毒藥。

Description

針對人類內源性反轉錄病毒之抗反轉錄病毒藥

本發明係關於一種新穎之針對人類內源性反轉錄病毒(human endogenous retrovirus)之抗反轉錄病毒藥。

人類內源性反轉錄病毒(HERV)為複雜且為基因元件(genetic elements)之異質的多拷貝(multicopy)家族，該基因元件係透過插入(insertions)於生殖細胞而進入某些物種的基因體之原始反轉錄病毒感染(ancestral retroviral infections)的殘餘物。總而言之，HERV元件呈現約8%之人類基因體，且當HERV元件已保留轉錄活性，其很少引起完全的反轉錄病毒的基因體表現且幾乎不被預期為起因於完全功能的原病毒拷貝(proviral copies)。

多發性硬化症(Multiple Sclerosis)相關的反轉錄病毒元件(MSRV)(其為W型人類內源性反轉錄病毒家族(HERV-W)之一員)首先自罹患多發性硬化症的病患的細胞單離。MSRV通常潛伏於個體之基因體中，但當經共同因子(例如某些常見病毒)激發時，其可被再活化並可進一步表現HERV-W家族之封套蛋白質。本發明者們先前研究此機制並揭露其為各種疾病之發展及進行中主要的激發及惡化因子，此等疾病諸如多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(bipolar disorder(BP))、單極性或精神性抑鬱(psychotic depression)、臨床孤立症候群(clinically isolated syndrome)(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy)(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及例如第I型或第II型糖尿病之糖尿病。

儘管有來自HERVs之所有結構性反轉錄病毒基因的可能表現，即編碼基質、蛋白殼(capsid)及核蛋白殼先驅物多蛋白質之gag基因，與編碼反轉錄病毒酵素之pol基因一起，該酵素包括蛋白酶、反轉錄酶及整合酶(integrase)先驅物多蛋白質，及與編碼來自相同HERV之封套先驅物蛋白質之env基因一起，迄今可發現來自HERVs之無感染的反轉錄病毒拷貝(copy)。

此外，與外源性感染性反轉錄病毒相反，HERVs存在於每個人類個體之所有細胞之DNA，因此，傳統用於治療人類反轉錄病毒之治療性分子無法排除帶病原細胞之次群間的對應原病毒(provirus)。於此等內源性元件上許多細胞及基因的限制亦使其受非-反轉錄病毒分子機制的控制，如此自傳統反轉錄病毒的路徑逃逸。此等各種機制中，已知有基因靜默(gene silencing)、受細胞性啟動子/增強子的基因控制、或HERV序列及細胞基因間的基因重組的參與。傳統外源性反轉錄病毒並未期待有如此特徵，因此並非容易使用於目前存在的抗反轉錄病毒療法。

於如此情形，傳統外源性反轉錄病毒之治療無法期待完全控制病原性HERV表現，因而於HERV相關的疾病上，如果有的話，無法期待具有理想的治療效力。

如此於針對HERV病毒之新穎抗反轉錄病毒的治療策略上長期間感到未滿足的需求。

[發明概要]

本發明者們已令人驚訝地發現未預期的針對來自HERV-W家族之內源性元件之抗HERV效果可減少及抑制HERV-W表現。因此，於第一態樣，本發明係關於一種抗體、片段或其衍生物，其使用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥，其中該抗體係針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)。較佳地，該抗體、片段或衍生物係用於預防及/或治療HERV-W相關的疾病。更佳地，該抗體係用於預防及/或治療多發性硬化症(MS)或慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)。更佳地，該抗體為單株人類化抗體，其中重鏈(HC)具有呈示於SEQ ID No：9之胺基酸序列及輕鏈(LC)具有呈示於SEQ ID No：10之胺基酸序列。

於第二態樣，本發明係關於一種組成物，其包含：較佳由針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物及反轉錄病毒的反轉錄酶(reverse-transcriptase)抑制藥所組成，其使用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥。

於第三態樣，本發明係關於針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥作為組合製劑以同時、分別或連續用於治療HERV-W相關的疾病之方法，較佳之疾病選自由下列組成之群組：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病。

於第四態樣，本發明係關於一種套組，其包含至少一種選自由SEQ ID No：11至28所組成的群組之寡核苷酸。

於第五態樣，本發明係關於一種針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物，使用於罹患HERV-W相關的疾病之病患中作為一種針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒(較佳為HERV-W家族，更佳為MSRV)之抗反轉錄病毒藥，其中該病患係以一種方法鑑別，該方法包含步驟i)：於一生物樣品中偵測及/或定量HERV-W。

[發明詳細說明] 定義

如本文中使用，「人類內源性反轉錄病毒」及「HERV」一詞係指包含通常稱為「HERV-W」之屬於W型內源性反轉錄病毒家族的病毒之人類內源性反轉錄病毒。

「HERV-W」係人類內源性反轉錄病毒之家族，該家族係於來自首先發現「與多發性硬化症有關的反轉錄病毒」(MSRV，為首次自具有多發性硬化症的病患中被單離的人類反轉錄病毒)之人類基因體中被解開。因此，當研究提及「LM7」(首次與MS分開描述)、「MS-反轉錄病毒」、「MSRV」、「合胞素(Syncytin)」、「HERV-W 7q」、「ERVW-E1」、「ERVW-E2」、「來自X染色體的HERV-W拷貝」或「HERV-W」，其皆指HERV-W元件。

如本文中使用，「MSRV」一詞係指為HERV-W家族之一員的特定內源性反轉錄病毒。於本發明之內文，「HERV-W」及「MSRV」兩者之表現均表示HERV-W元件。具體而言，「HERV-W Env」及「MSRV-Env」兩者之表現均指相同的封套蛋白質。典型地，胺基酸序列中最終少數變異不會防止特定抗Env抗體於治療用途之結合，尤其是具有具呈示於SEQ ID No：9之胺基酸序列之重鏈(HC)及具呈示於SEQ ID No：10之胺基酸序列之輕鏈(LC)的抗體。

如本文中使用，措詞「HERV-W相關的疾病」係指與HERV-W表現有關的病理狀態，較佳為HERV-W 封套蛋白質。典型地，該HERV-W相關的疾病為一種慢性炎症性疾病。如本文中使用，「慢性炎症性疾病」之表現係指任何疾病中於組織損傷參與的由先天免疫及/或後天免疫驅動的持續或復發性炎症及/或可偵測局部或全身性前炎症性分子之過度表現。

較佳地，該HERV-W相關的疾病係選自由下列組成的群組：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病。更佳地，該HERV-W相關的疾病係選自由下列組成的群組：多發性硬化症(MS)及慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)，兩者皆為髓鞘脫失病(demyelinating diseases)。

如本文中使用，「治療(treating)」或「治療(treatment)」一詞，如本文使用，意指轉向、緩和、抑制失調或病況之進展，或預防失調或病況成為此種情況，或轉向、緩和、抑制此失調或病況之一或多種症狀之進展、或預防失調或病況之一或多種症狀成為此種情況。

如本文中使用，「預防」一詞係指防止疾病或病況發生於尚未出現能夠臨床診斷之臨床症狀、典型病灶或生理學上失能的患者。

如本文中使用，「抗體」或「免疫球蛋白」具有相同意義，且於本發明被相等地使用。如本文使用之「抗體」一詞係指免疫球蛋白分子且免疫球蛋白分子之免疫學上的活性部分，即，含有特異性結合抗原之抗原結合位之分子。同樣地，「抗體」一詞不僅包含完整抗體分子，亦包含抗體片段，以及抗體之衍生物。

如本文中使用，措詞「抗體之片段」係指如此模擬高度變異區(hypervariable region)之抗體之一部分，諸如CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)。依據本發明之抗體之片段保留該抗體之結合親和性及特異性。如此片段為該抗體之功能性相等物且其結合於實質上與該抗體相同之抗原決定位(epitope)。抗體之片段之例包括但未限於重鏈、輕鏈、VL、VH、Fv、Fab、Fab’、F(ab)2、及F(ab')2。

如本文中使用，措詞「抗體之衍生物」係指與至少一個不同於天然序列的序列(例如，另一物種之連結物(linker)序列等)融合之本發明之抗體之片段，較佳包括該抗體之至少一個CDR，較佳該抗體之至少一個CDR3，該衍生物具有相當於本發明之抗體對HERV-W Env之結合親和性及特異性。依據本發明之衍生物保留該抗體之結合親和性及特異性。如此衍生物為該抗體之功能性相等物且其結合於實質上與該抗體相同之抗原決定位。抗體之衍生物之例包括但未限於scFv、(scFv)2及雙功能抗體(diabodies)。

於天然的抗體，兩個重鏈(HC)藉由雙硫鍵彼此連結且各重鏈與輕鏈(LC)藉由雙硫鍵連結。輕鏈有兩種型式，λ(l)及κ(k)。有5個主要重鏈類別(或同型 (isotype))，其決定抗體分子：IgM、IgD、IgG、IgA及IgE之功能活性。各鏈含有可區別的序列功能域(sequence domains)。

典型地，輕鏈包括兩個功能域：可變功能域(VL)及恆定功能域(CL)。重鏈包括四個功能域：一可變功能域(VH)及三個恆定功能域(CH1、CH2及CH3，共同指CH)。輕鏈之可變區(VL)及重鏈之可變區(VH)兩者決定專一於抗原性抗原決定位之結合位。輕鏈之恆定區功能域(CL)及重鏈之恆定區功能域(CH)授予重要的生物性質，諸如抗體鏈聯合(antibody chain association)、分泌、經胎盤的移動性(trans-placental mobility)、補體結合、及結合至Fc受體(FcR)。Fv片段為免疫球蛋白之Fab片段之N-端部分，且由一輕鏈及一重鏈之可變部分所組成。抗體之特異性存在於抗體結合位與抗原性抗原決定位之間的結構互補性。抗體結合位係由主要來自高度變異或互補決定區(CDRs)的殘基所構成。於特殊情形，來自非高度變異區或框架區(FR)的殘基影響整個功能域結構，因而影響結合位。互補決定區或CDRs係指一起定義天然免疫球蛋白結合位之天然Fv區的結合親和性及特異性之胺基酸序列。免疫球蛋白之輕鏈及重鏈各具有三個CDRs，分別指名為L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3及H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。因此抗原結合位包括六個CDRs，包含各來自重鏈及輕鏈V區之CDR組。框架區(FRs)係指於CDRs間插入的胺基酸序列。

如本文中使用，「嵌合抗體」一詞係指：包含來自任何物種之抗體之VH功能域及VL功能域，較佳為小鼠，及包含人類抗體之CH功能域及CL功能域的抗體。

依據本發明，「人類化抗體」一詞係指具有來自人類抗體之可變區框架及恆定區但殘留來自任何物種(較佳為小鼠)之CDRs抗體之抗體。

「Fab」一詞意指具有約50,000之分子量及具抗原結合活性之抗體片段，其中H鏈之N-端側的約一半及整個L鏈，藉由將IgG以蛋白酶、木瓜酵素處理所獲得的片段之中，透過雙硫鍵一起結合。

如本文中使用，「F(ab')2」一詞係指具有約100,000之分子量及抗原結合活性之抗體片段，於藉由將IgG以蛋白酶、木瓜酵素處理所獲得的片段之中，其稍大於經由絞鍊區(hinge region)之雙硫鍵鍵結的Fab。

如本文中使用，「Fab'」一詞係指具有約50,000之分子量且具有抗原結合活性之抗體片段，其藉由切斷F(ab')2之絞鍊區之雙硫鍵而獲得。

措詞「單鏈Fv」或「scFv」係指多胜肽，其為一共價連結的VH：：VL異二聚物(heterodimer)且通常自包括藉由胜肽編碼連結物連結的VH及VL編碼基因之基因融合表現。「dsFv」係藉由雙硫鍵而安定化的VH：：VL異二聚物。二價及多價抗體片段可由單價scFvs之聯合而自發形成，或可藉由將單價scFvs藉胜肽連結物(例如二價sc(Fv)2)偶合而產生。

「雙功能抗體」一詞係指具二個抗原結合位之小抗體片段，其片段包含連結至相同多胜肽鏈之輕鏈可變功能域(VL)的重鏈可變功能域(VH)(VH-VL)。藉由使用太短以至於能夠於相同鏈上的兩功能域間成對的連結物，功能域被迫與另一鏈之互補功能域成對並創造出兩個抗原結合位。

如本文中使用，措詞「本發明之抗體」係指：針對(即，特異性結合至)HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)，較佳為抗W型人類內源性反轉錄病毒家族(HERV-W)之HERV-W封套蛋白質，更佳為抗MSRV之封套蛋白質，更較佳為抗MSRV封套蛋白質之細胞外功能域之抗體。較佳地，本發明之抗體包含SEQ ID No：1至6所述之全部6個CDRs。

如本文中使用，本文使用的「生物樣品」一詞係指以活體外評估為目的而獲得的任何生物樣品。於本發明，樣品或病患樣品可包含任何體液或疾病特異性組織及病灶。體液之例包括血液、血清、血漿、乳頭抽吸液(nipple aspirate fluid)、尿液、唾液、關節液及腦脊髓液(CSF)。疾病特異性組織及損傷之例包括MS腦斑、CIDP神經生檢或糖尿病胰臟生檢。

作為抗反轉錄病毒藥使用的抗體

病原性HERV-W表現發生於某些個體，當與病理狀況連結時，尤其當表現此HERV-W家族之多發性硬化症有關的(MSRV)元件。此已被顯示涉及封套蛋白質作為於HERV-W-編碼的蛋白質中單獨病原性角色，當暴露於免疫系統或神經膠細胞(neuroglial cells)時，不論病患中有無HERV-W gag-編碼的抗原的顯示。

迄今，治療策略在於針對以人類化抗體中和HERV-W封套蛋白質，以便預防及抑制於HERV-W相關的人類疾病中其免疫發炎性及神經病原性效果。因此，此治療手段係針對炎症性串級之上游及目標細胞毒殺效果之上游，尤其，於起因於MS中樞神經系統(CNS)中具損傷的修復潛力的病灶來源中具髓鞘再生封鎖(remyelination blockade)的炎症性脫髓鞘串級之上游。

本發明者們已評估人類化IgG4抗體，其選擇性結合MSRV之封套蛋白質細胞外功能域，於其第I期臨床試驗之健康志願者中的安全性及藥物動力學，其被稱為「GNbAC1」。此抗體亦已被於MS病患中評估一年期間，於兩平行組中每4周重複輸注GNbAC1抗體6mg/Kg或2mg/kg。於後來的MS病患中的第IIa期臨床試驗，於第一次處理6個月後以定量RT-PCR(qRT-PCR)測試HERV-W生物標記的研究前及期間，本發明者已自病患獲得血液樣品，以便研究伴隨以GNbAC1處理的特異性HERV-W env及pol mRNAs表現。

因而獲得的結果已顯示以GNbAC1抗體於活體內對HERV-W Env蛋白質中和之完全未預期且未知的效果。

確實，本發明者們發現以此抗體治療之人類病患已顯示對於HERV-W反轉錄病毒的基因體表現本身的抑制效果，其並未限於表現如以GNbAC1特異性標的之封套蛋白質之env基因。確實，本發明者的結果無可置疑地指出於治療三及六個月後，env mRNA(編碼HERV-W封套蛋白質)及pol mRNA(編碼HERV-W酵素，包括反轉錄酶)量之兩者顯示平行且改進的減少，相較於於相同病患治療前測量的量。

如此，以GNbAC1治療6個月後已觀察到於HERV-W表現上顯著抗反轉錄病毒的效果，且平行影響env及pol兩者基因表現。由於反轉錄病毒的HERV-W RNA表現並未被預期受到HERV-W封套蛋白質表現而調節，而是來自編碼所有未相關抗原蛋白質的pol基因的mRNA，本發明者們推斷HERV-W Env(或MSRV-Env)之未知效果產生對與其疾病有關的表現之HERV-W基因調節的正向效果，如於具MS病患中所見，且於本發明者們進行第IIa期臨床試驗中的病患中已被GNbAC1中和(參見實施例1)。此效果並非皆與於免疫及神經系統的已知HERV-W Env病理學效果有關。

因此，於第一態樣，本發明係關於一種抗體、片段或其衍生物，其用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥，其中該抗體、片段或衍生物係針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)。

如本文中使用，措詞「 針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥) 」係指一種抗體、片段或其衍生物，其能夠抑制屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之表現及/或複製。更具體而言，該表現係指抗體能夠： - 壓制或抑制屬於HERV之全部或部分病毒之複製，較佳為屬於HERV-W家族。典型地，該複製的壓制或抑制為普遍且完全的；或- 壓制或抑制屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)之全部或部分病毒之複製，較佳為屬於人類內源性反轉錄病毒W型(HERV-W)家族，或該病毒之封套蛋白質之表現。

較佳地，該病毒屬於W型人類內源性反轉錄病毒家族(HERV-W)。更佳地，該病毒為MSRV。於此特定具體實施例，本發明之抗體係針對MSRV之封套蛋白質。

於一較佳具體實施例，依據本發明之抗反轉錄病毒藥壓制或抑制屬於HERV之病毒(較佳為屬於HERV-W之病毒)之env-及/或pol-編碼的蛋白質之全部或部分表現。

本發明者們已顯示針對MSRV之特異性封套蛋白質導致抑制或壓制病毒之表現的驚人效果。如先前所述，MSRV牽涉數種疾病的啟動及發展。因此，本發明之抗體極有希望用於治療HERV-W相關的疾病，較佳為與HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)表現有關的病症。

較佳地，該HERV-W相關的疾病係選自由多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病所組成的群組。

更佳地，該HERV-W相關的疾病係選自由多發性硬化症(MS)及慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)所組成的群組。

於一具體實施例，本發明亦關於一種用於預防及/或治療選自由下列組成的群組的疾病的藥劑：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病，其中該藥劑由抗HERV-W封套蛋白質之抗體(HERV-W Env)或片段或其衍生物所組成。於此特定具體實施例，此抗體預防HERV-W表現。

於一具體實施例，本發明之抗體、片段或衍生物包含如SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：5、及SEQ ID No：6所述的6 CDRs之每一者。

於一具體實施例，本發明之抗體、片段或衍生物包含：- 輕鏈，其中可變功能域包含如描述於SEQ ID No：1之CDR-L1、描述於SEQ ID No：2之CDR-L2及描述於SEQ ID No：3之CDR-L3之3個CDRs之每一者；及 - 重鏈，其中可變功能域包含如描述於SEQ ID No：4之CDR-H1、描述於SEQ ID No：5之CDR-H2及描述於SEQ ID No：6之CDR-H3之3個CDRs之每一者。

上述互補決定區(CDRs)揭示於表1：

於一具體實施例，本發明之抗體、片段或衍生物包含：- 如SEQ ID No：7所述之輕鏈可變區(VL)；及- 如SEQ ID No：8所述之重鏈可變區(VH)。

上述輕鏈及重鏈可變區揭示於表2：

於一具體實施例，本發明之抗體、片段或衍生物係選自由Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體、及自抗體片段形成的多特異性抗體所組成的群組。

於一較佳具體實施例，本發明之抗體為單株抗體。本發明之單株抗體為單價、雙價、多價、單特異性、雙特異性、或多特異性。於另一具體實施例，針對HERV-W Env之抗體係結合片段或結合物(conjugate)。例如本發明之抗體可與生長抑制劑、細胞毒殺劑、或前藥活化酵素結合。

亦期望就效應子(effector)功能，修飾本發明之抗體，例如因而增進抗體之抗原-依賴性細胞媒介的細胞毒殺性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒殺性(CDC)。此可經於抗體之Fc區中導入一或多個胺基酸取代而達成。或者或另外地，半胱胺酸殘基可被導入Fc區，因而使得於此區中鏈間雙硫鍵形成。如此產生的同質二聚(homodimeric)抗體可具有改進的內化能力及/或增加的補體媒介細胞殺死及/或抗體-依賴的細胞毒殺性(ADCC)(Caron PC.et al.1992；及Shopes B.1992)。

本發明之抗體之胺基酸修飾的另一形式可有用於改變抗體之原始糖基化(glycosylation)樣式。藉由「改變」係意指刪除抗體中發現的一或多個碳水化合物部分(carbohydrate moieties)，及/或添加一或多個不存在於此抗體的糖基化位。抗體之糖基化典型地為N-連結的。「N-連結」係指碳水化合物部分對天冬醯胺(asparagine) 殘基之側鏈的附著。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺-X-蘇胺酸，其中X為除了脯胺酸之任何胺基酸，為碳水化合物部分酵素性附著於天冬醯胺側鏈之識別序列(recognition sequences)。如此，於多胜肽中此等三肽序列任一者之存在創造出可能的糖基化位。對抗體添加糖基化位係藉由改變胺基酸序列而容易地達成，如此其含有一或多個上述三肽序列(對於N-連結的糖基化位)。

於另一具體實施例，本發明之抗體為一單株人類化抗體，更佳為IgG4人類化的單株抗體。

該人類化抗體可藉由獲得編碼CDRs功能域的核酸序列而製造，藉由插入此等核酸於一動物細胞用之表現載體(expression vector)，其具有編碼與人類抗體相同之重鏈恆定區、及與人類抗體相同之輕鏈恆定區，且藉由將其導入動物細胞中而表現此表現載體之基因。此人類化抗體表現載體可為編碼抗體重鏈之基因及編碼抗體輕鏈之基因存在於分別載體的型式或者兩個基因存在於相同載體的型式(串列式)之任一種。就人類化抗體表現載體之建構的容易性、導入動物細胞中的容易性、及於動物細胞中抗體H及L鏈之表現量間的平衡而言，人類化抗體表現載體之串列式為更佳。串列式人類化抗體表現載體之例包括pKANTEX93、pEE18等。基於習用重組DNA及基因轉染技術之製造人類化抗體之方法為本項技術領域眾所皆知。使用本項技術已知的各種技術可將抗體人類化，該技術包括例如CDR-接枝、鑲面(veneering)或表面重修(resurfacing)、及鏈替換(chain shuffling)。製備如此抗體之一般重組DNA技術亦為已知。

如此，本發明之一具體實施例係關於一單株人類化抗體，包含：- 輕鏈，其中可變功能域包含如描述於SEQ ID No：1之CDR-L1、描述於SEQ ID No：2之CDR-L2及描述於SEQ ID No：3之CDR-L3之3個CDRs之每一者；及- 重鏈，其中可變功能域包含如描述於SEQ ID No：4之CDR-H1、描述於SEQ ID No：5之CDR-H2及描述於SEQ ID No：6之CDR-H3之3個CDRs之每一者。

於一特定具體實施例，該人類化抗體之重鏈(HC)具有呈示於SEQ ID No：9之胺基酸序列及該抗體之輕鏈(LC)具有呈示於SEQ ID No：10之胺基酸序列。此特異性抗體於本文稱為「GNbAC1」。

上述重鏈及輕鏈揭示於表3：

用於作為抗反轉錄病毒藥之組成物

本發明者們進一步調查本發明之抗體最新未顯露的抗反轉錄病毒的效果。於此目的，其評估其於活體外表現HERV-W gag、pol及env-編碼的蛋白質的細胞培養之效果，係於西方氏轉漬法(Western-Blot analysis)以特異性抗體偵測。

本發明者們已確認相當於HERV-W反轉錄酶(RT)之pol蛋白質的表現顯示於GNbAC1存在下培養之細胞中較不重要，除了於以GNbAC1治療的病患中pol RNA量降低之外。此外，RT已知藉由自表現的RNA產生反轉錄病毒的DNA的額外拷貝而放大反轉錄病毒的表現。此等新產生的反轉錄病毒的DNA拷貝然後可表現對應的RNA，因而透過此表現本身的產物藉由放大表現拷貝而放大反轉錄病毒的元件之總體表現，例如由pol RNA至RT。

因此，本發明者們已想像GNbAC1及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制劑諸如疊氮胸苷(azidothymidine，AZT)兩者的組合於HERV-W表現可產生較佳抑制效果，尤其於先前例示之其RT表現。

如此進一步研究，而相當驚訝地，此針對HERV-W Env之抗體及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥之組合於此等產出細胞中消除了HERV-W RT蛋白質的表現。

於平行且同時的培養，藉由西方氏轉漬於未處理細胞的HERV-W RT之陽性偵測及以GNbAC1或 AZT單獨處理的細胞中輕微或部分減少，確認此觀察的特異性及顯著性：於相同情況，中和HERV-W Env蛋白質之GNbAC1抗體及AZT兩者之組合消除了此HERV-W RT蛋白質的偵測。

因此，於第二態樣，本發明係關於一種組成物，包含：- 依據本發明之抗體、片段或衍生物；及- 反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥，使用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥。

較佳地，該反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥係選自由疊氮胸苷、恩替卡韋(entecavir)、拉脈優錠(lamivudine)、阿德福韋(adefovir)、索氟布韋(sofosbuvir)、地達諾新(didanosine)、泰諾福韋(tenofovir)、阿巴卡韋(abacavir)、拉脈優錠、司他夫定(stavudine)、恩曲他濱(emtricitabine)、扎西他濱(zalcitabine)、替比夫定(telbivudine)、及地達諾新組成的群組。更佳地，該反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥為疊氮胸苷(AZT)。所有先前揭示的的技術資料可適用於本文。

本發明之組成物對於HERV-W病原性表現之治療干涉提供未預期及新穎的觀點。此治療係以下列組合：- 一種針對HERV-W Env之抗體，諸如GNbAC1；及- 一種針對反轉錄酶本身及/或其活性之分子，諸如AZT，被證實於與HERV-W有關的疾病中極有用於抑制HERV-W RT表現。

如此，本發明亦關於一種組成物，其包含：- 依據本發明之抗體、片段或衍生物；及- 反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥，其有用於預防及/或治療HERV-W相關的疾病。

本發明亦關於一種組成物，其包含：- 依據本發明之抗體、片段或衍生物；及- 反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥，其有用於預防及/或治療選自下列組成的群組的疾病：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病。更佳地，該疾病選自由多發性硬化症(MS)及慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)組成的群組。

所有先前揭示的的技術資料可適用於本文。

於第三態樣，本發明係關於針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體或片段或其衍生物，及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥，較佳為疊氮胸苷作為組合製劑以同時、分別或連續使用於治療HERV-W相關的疾病之方法中，較佳地，疾病係選自下列組成的群組：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性脫髓鞘多發性神經炎(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病。

所有先前揭示的的技術資料可適用於本文。

依據本發明之套組

此等HERV-W元件的表現於具有下列疾病的病患中及/或其於疾病特異性組織及病灶處之偵測，辨別及定義HERV-W相關疾病或症狀之一般分類。其亦反映HERV-W於此疾病發展及其治療期間之經時變化的生物活性。

如此，具改善敏感性、具特定疾病特異性、或於具HERV-W相關疾病或症狀的病患中具特定相關臨床特徵的HERV-W之偵測，構成於診斷識別及層次化以及於病患之追蹤及治療監測的重要價值。由引子、探針及PCR實驗計畫之一組調查，本發明者們如此已選擇及發展出一種引子及探針之套組，其顯示有用於偵測病患中HERV的表現存在及/或測量表現量。

因此，於第四態樣，本發明係關於一種套組，其包含至少一個，較佳為至少二個，較佳為至少三個，較佳為至少四個，較佳為至少五個，較佳為至少六個，較佳為至少七個，較佳為至少八個，較佳為至少九個，較佳為至少十個選自由SEQ ID No：11至28組成之群組之寡核苷酸。

較佳地，該套組至少包含SEQ ID No：17及/或18，或SEQ ID No：19、及20。

或者，該套組包含：- SEQ ID No：19、20、23、24及25；或- SEQ ID No：17、18、23、24及25；或- SEQ ID No：19、20、14、15、16、23、24及25；或- SEQ ID No：17、18、14、15、16、23、24及25。

更佳地，本發明之套組包含SEQ ID No：11至28所述之所有寡核苷酸。典型地，該套組被意圖用於進行PCR試驗，或更具體而言，定量PCR(qPCR)試驗。因此，此套組較佳亦包含來自最適合於RNA或DNA相對定量及於各種指示之參考細胞基因的引子及/或探針。

該套組較佳進一步包含：- SEQ ID No：26、27及28；或- 對GUSB基因特異性的序列；或- 對RNAse P基因特異性的序列；或- 對以qPCR之相對定量用之參考細胞基因特異性的序列。

該套組有用於監測屬於W型人類內源性反轉錄病毒家族(HERV-W)之病毒的偵測及/或定量，包含MSRV但亦包含其他HERV-W亞型(s)。更具體而言，本發明之套組有用於偵測及/或定量編碼HERV-W Env之序列，如彼等編碼HERV-W pol多蛋白質，包括RT。典型地，於病患中HERV-W之偵測及/或定量包含：(i)特異性HERV-W RNA、DNA或抗原之偵測及/或定量，較佳於體液偵測或於疾病特異性組織及病灶處偵測， (ii)來自血液或具病灶或官能不良的器官的細胞或組織中升高的DNA或RNA拷貝數之偵測及/或定量。

因此，於第五態樣，本發明係關於抗HERV-W封套蛋白質之抗體(HERV-W Env)、片段或其衍生物，於罹患HERV-W相關的疾病之病患中有用於作為針對屬於HERV的病毒(較佳為HERV-W，更佳為MSRV)之抗反轉錄病毒藥，其中該病患係以一種方法鑑定，該方法包含於生物樣品中偵測及/或定量HERV-W之步驟i)。

於此特定具體實施例，醫師因而能夠配合及理想化對罹患HERV-W相關的疾病之病患的適當醫療照護。HERV-W表現之存在及/或表現量之監測係極適合追蹤照護(follow-up care)及臨床決策。的確，醫師可確定對每一病患適合的策略的適當治療。

典型地，依據本項技術領域中具通常知識者習知的常規技術可進行步驟i)之偵測及/或定量。典型地，該步驟i)包含：將病患之生物樣品與選擇的試劑接觸，該試劑例如探針、引子、配位體(ligands)或抗體，因而於樣品中偵測原本感興趣的核酸或蛋白質之存在。較佳地，該步驟i)之偵測HERV-W的存在及/或定量HERV-W係以如本發明之套組進行。

所有先前描述的的技術資料可適用於此。

醫藥組成物

本發明之另一目標係關於一種醫藥組成物，其包含有效劑量之抗HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體及可選擇包含一種反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥。

如上述之本發明之任一治療劑可與醫藥上可接受的賦形劑、及可選擇的持續釋放基質合併以形成治療組成物，該持續釋放基質例如為生物可降解聚合物。

「醫藥上」或「醫藥上可接受」係指因應必要當被投予哺乳類動物，尤其是人類時，不會產生副作用、過敏或其他不適當反應的分子實體及組成物。醫藥上可接受載劑或賦形劑係指無毒性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、封膠物質(encapsulating material)或任何形式的調配輔助物。

此醫藥組成物之型式、投予路徑、劑量及投藥計畫(regimen)當然依據病患欲治療的病況、疾病嚴重性、年齡、重量及性別等而定。

本發明之醫藥組成物可被調配用於局部、口服、鼻內、眼內、靜脈內、肌肉內或皮下投予等。

較佳地，此醫藥組成物含有媒劑(vehicle)，其對於能夠被注射的調配物為醫藥上可接受的。此等可特別為等張、滅菌的鹽溶液(磷酸一鈉或二鈉，氯化鈉、鉀、鈣或鎂等或此等鹽之混合物)，或為乾燥，尤其是冷凍乾燥的組成物，其於視情況添加滅菌水或生理食鹽水，使可構成可注射溶液。

投予用劑量可被調整，如以各種參數的函數，尤其以相關病理學或冀望的治療期間之使用的投予模式的函數來調整。

為了製備醫藥組成物，有效量之針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)抗體可被溶解或分散於醫藥上可接受載劑或水性介質。

適合注射使用之醫藥型式包括無菌水溶液或分散液；包括芝麻油、花生油或水性丙二醇之調配物；及經滅菌粉末用於臨時置備無菌可注射溶液或分散液。於所有情形，此型式必須為無菌且必須為以可容易注射(easy syringability)的流動範圍存在。其在製造及儲存的條件下必須為安定且必須防止微生物諸如細菌及真菌的污染作用。

呈游離鹼或藥理學上可接受的鹽類之活性化合物之溶液可於水中與界面活性劑適當混合而被製備，該界面活性劑例如羥基丙基纖維素。分散液亦可被製備於甘油、液體聚乙二醇、其混合物及油中。於儲存及使用的平常條件下，此等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。

於調配時，溶液以與劑量調配物(dosage formulation)且以與治療有效的量相容的方式被給予。此調配物以各種劑型被容易地投予，諸如上述可注射溶液的型式，但亦可運用藥物釋放膠囊等。

較佳地，本發明之抗HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體或其片段及其衍生物可被調配於緩衝液中，於其中其被溶解、儲存及注射治病患。較佳地，該緩衝液包含20mM組胺酸、5%蔗糖、及0.01%聚山梨醇酯20且呈現pH 6.0。用於將GNbAC1靜脈內投予之一調配物之示例呈現於實施例3。

於水溶液中用以腸胃外投予，例如溶液可被適當地緩衝且液體稀釋劑首先以充分的鹽水或葡萄糖給予等張。此等特定水溶液係特別適合靜脈內、肌肉內、皮下及腹膜內投予。就此點而論，藉由本文之揭示，可被運用的無菌水性介質將為熟悉本技術領域者知悉。例如，一劑量可被溶解於1ml之等張NaCl溶液，亦可被添加至1000ml之皮下灌注法(hypodermoclysis)液體或於提議的輸注位置被注射(參見例如，「Remington's Pharmaceutical Sciences」第15版，第1035-1038及1570-1580頁)。視欲治療病患之病況，劑量上的一些變動必然會發生。無論如何，負責投藥之人士將決定對個別病患適當的劑量。

除了調配用來腸胃外投予(例如靜脈內或肌肉內注射)的化合物，其他醫藥上可接受型式包括，例如，口服投予用的錠劑或其他固體類；時間釋放膠囊；及目前使用的任何其他形式。

依據本發明之治療方法及監測方法

本發明亦係關於一種藉由投予病患抗HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體而於病患中抑制屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)之表現及/或複製之方法。

於另一具體實施例，本發明係關於一種預防及/或治療罹患選自下列組成的群組之疾病的病患之方法：多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II 型糖尿病之糖尿病，藉由投予該病患抗HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物，其中該抗體作用為作為一種針對HERV(較佳針對HERV-W，更佳針對MSRV)的抗反轉錄病毒藥。

本發明亦關於一種治療罹患HERV-W相關的疾病之方法，包含下列步驟：1)以本發明之套組，於生物樣品中藉由偵測及/或定量屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)家族之病毒(較佳為HERV-W，更佳為MSRV)而預測病患的預後；及然後2)若該步驟1)顯示人類內源性反轉錄病毒(HERV)之表現，則本發明之方法包含步驟3)，其提供本發明之抗體、片段或衍生物至該病患。

本發明亦關於一種監測罹患HERV-W相關疾病之病患對治療的反應的方法，該方法包含下列步驟：a.以依據本發明之抗體、片段或衍生物治療該病患；然後b.於該病患之生物樣品中偵測及/或定量HERV-W。

於另一具體實施例，本發明關於一種監測罹患HERV-W相關的疾病之病患對治療的反應之方法，該方法包含於該病患之生物樣品中偵測及/或定量HERV-W之步驟。較佳地，該病患包含依據本發明之抗體、片段或衍生物。措詞「包含抗體之病患」係指以抗體治療且於該病患血液、組織、或器官中存有可偵測量的該抗體之病患。典型地，於偵測及/或定量HERV-W之步驟之前，該抗體、片段或衍生物被提供或投予至病患。

依據本發明，於監測罹患HERV-W相關的疾病之病患對治療的反應的情形，生物樣品可為體液諸如血液、腦脊髓液、尿液、或於疾病特異性組織及病灶諸如MS腦斑、CIDP神經生檢、或糖尿病胰臟生檢之樣品。

典型地，偵測及/或定量之步驟b.可依據熟悉本項技術領域者熟知之常規技術進行。典型地，該步驟b.包含使病患之生物樣品與選擇試劑諸如探針、引子、配位體或抗體接觸，因而於樣品中偵測原本感興趣的核酸或蛋白質之存在。較佳地，該步驟b.之偵測HERV-W的存在及/或測量HERV-W之表現量係依據本發明之套組進行。

所有先前描述的的技術特徵可適用於此。

第1圖

(A)以qPCR用之不同引子對及探針偵測，收容於HERV-W env及pol的轉錄物量。

(B)被包括於2mg/ml組(空白圓圈)及6mg/ml組(空白四方形)之並行病患中，以「env」及「UNO」引子及探針之HERV-W env轉錄。

(C)被包括於2mg/ml組(空白圓圈)及6mg/ml組(空白四方形)之並行病患中，以「UNO2」、「syn」及「pol」引子及探針之HERV-W env轉錄。

縱軸表示各病患目標RNA之相對表現(與GUS B之比)且橫軸表示用於相同樣品之不同的qPCR實驗計畫。

第2圖：收容於MS之不同臨床型式之間的HERV-W env與pol轉錄物量的差異，當以於qPCR(A)「env」實驗計畫、(B)「UNO」實驗計畫、(C)「UNO2」實驗計畫、(D)「syn」實驗計畫、(E)「pol」實驗計畫之不同引子對及探針偵測時。

縱軸表示各病患目標RNA之相對表現(與GUS B之比)且橫軸表示MS之不同臨床型式：原發進行性(Primary Progressive)(PPMS)、復發-緩解型(Relapsing-Remitting)(RRMS)及次發進行性(Secondary Progressive)(SPMS)。

第3圖：收容於HERV-W env及pol轉錄物量及MS病患之臨床參數之間的相關性，當以qPCR(A)「Syn」實驗計畫用之特定引子對及探針偵測時，顯示合胞素-型HERV-W表現及疾病期間之間的負相關：皮爾遜相關檢定(Pearson’s correlation test)r=-0.96；p=0.009；(B)「Syn」實驗計畫顯示合胞素-型HERV-W表現與疾病發展指數(progression index)之間的正相關：皮爾遜相關檢定r=0.95；p=0.014；(C)「pol」實驗計畫亦顯示HERV-W型pol基因(編碼蛋白酶、反轉錄酶及整合酶)表現及疾病發展指數之間的正相關：皮爾遜相關檢定r=0.95；p=0.048。

縱軸表示以年來計算之疾病期間(A)或發展指數(B&C)；橫軸表示各病患目標RNA之相對表現(與GUS B之比)。

第4圖：於GNC002中之前6個月期間HERV-W相關的轉錄物量的變動。資料呈現平均目標RNA對GUS B之相對表現，對於2mg/kg組(A)、6mg/kg組(B)、及所有包括於GNC002(C)的病患中，各HERV-W相關轉錄。虛線表示收容於對應轉錄物之量。縱軸表示於各qPCR實驗計畫組之病患中目標RNA之平均相對表現(相對於GUS B之比)。橫軸表示GNbAC1注射至病患的數目。

第5圖：於GNC002中之前6個月期間HERV-W相關的轉錄物量的變動。資料呈現被包括於GNC002之所有病患中對於各HERV-W轉錄，平均目標RNA對GUS B之相對表現。說明伴隨於來自收容於MS治療至第6次注射之日，於HERV-W env及pol轉錄物量之變動，由各病患以不同引子對及探針測量qPCR(A)「env」實驗計畫、(B)「UNO」實驗計畫、(C)「UNO2」實驗計畫、(D)「syn」實驗計畫、(E)「pol」實驗計畫之資料的長鬚圖(Whiskers plots)(10-90百分比)。

縱軸表示對各qPCR實驗計畫之病患組中，目標RNA之平均相對表現(對GUS B之比)。橫軸表示收集血液樣品之前，注射GNbAC1至病患的數量(因此，「1」，對應於任何注射前的狀態；「3」，第二次注射後4週的狀態；及「6」，第五次注射後4週的狀態。

第6圖：藉由西方氏墨漬法以特異性抗體偵測時，CH2細胞自發表現gag、pol及env-編碼的HERV-W蛋白質。

以各抗HERV-W gag、pol及env-編碼的抗體之特異性抗體偵測之顯著分子量帶於對應各抗原之細胞萃取物的通道右側被指出。於A、B及C中的左通道表示用於估算KDa之分子量標記。

(A)HERV-W Gag多蛋白質及裂解產物，包括典型的蛋白殼蛋白質約30KDa。

(B)HERV-W Pol多蛋白質及裂解產物，包括典型的反轉錄酶蛋白質約55KDa。

(C)HERV-W封套蛋白質、裂解產物及多聚體(multimers)，包括SU(表面)及TM(跨膜)裂解的單元約45及35KDa。以於約75及80KDa偵測的單體帶間的糖基化的可能變動偵測糖基化env產物。55KDa相當於無糖基化單體，具有約100KDa的二聚體。約160KDa的帶可能為糖基化二聚體或非糖基化三聚體。

第7圖：於以或未以GNbAC1及/或AZT處理的CH2培養中HERV-W pol-編碼的反轉錄酶蛋白質。

以抗HERV-W pol-編碼的抗體之特異性抗體偵測之顯著分子量帶於西方氏墨漬之右側被指出。西方氏墨漬通道的數目(1至6)以下列陳述呈現。

1)以GNbAC1及AZT之合併治療

2)僅以AZT治療

3)僅以GNbAC1治療

4)模擬處理細胞(mock-treated cells)(無處理)

5)空孔

6)分子量標記

[實施例] 實施例1：於以GNbAC1治療具多發性硬化症之病患中人類內源性反轉錄病毒W型mRNA表現之抑制

GNbAc1為一種IgG4單株抗體，其針對與多發性硬化症有關之反轉錄病毒封套蛋白質(MSRV-Env)，為HERV-W家族之內源性反轉錄病毒的元件的一員，因此亦稱為HERV-W Env。於健康自願者進行的第I期臨床試驗中，GNbAC1已顯示良好的安全性概況。

目前的GNC002第IIa期臨床試驗於10位MS病患被進行以評估GNbAC1於2及6mg/kg之安全性概況(safety profile)及藥物動力學。GNC002在於12個月的縱向研究，其中GNbAC1於每個月的基礎被投予。

本分析係於GNC002中的前6個月期間收集的樣品進行，其中HERV-W相關的轉錄物量係於編入的病患之周圍血液單核球細胞(PBMC)以即時定量聚合酶連鎖反應(RT-qPCR)評估。HERV-W轉錄物以如下列之不同引子/探針組評估：MSRV-env、HERV-W-UNO、HERV-W-UNO2。

材料及方法

於4ml CPT Vacutainer管中收集樣品，依據Geneuro於GNC002 Laboratory Manual提供之實驗計畫處理、儲存及運送。

來自10位病患之經冷凍的PBMC係由參與GNC002研究的2個招募中心提供。

化學品及生物材料

軟體

- Biorad CFX Manager 2.0：PCR執行及分析

- Genex 5：PCR原始資料之修勻

- Graph Pad Prism：製圖

- SigmaStat：統計分析

使用的常態檢定(Normality test)為科摩哥洛夫-史密諾夫檢定(Kolmogorov-Smirnov test)。若資料為多參數的，以皮爾遜積差分析(Pearson Product Moment analysis)或斯皮爾曼等級分析(Spearman Rank Order analysis)決定相關性。

實驗計劃(Protocols)

簡言之，第一步驟在於自PBMC樣品萃取總RNA。樣品係收集於CPT管中自血液單離的PBMC且於0.5ml之DMSO 10%胎牛血清中冷凍。解凍後，PBMC樣品以冰冷PBS洗滌且總RNAs以QIAamp RNeasy Mini 套組萃取。然後，藉由反轉錄所有含於先前萃取的總RNA中的mRNA而製備cDNAs。於此等cDNAs進行定量PCRs，添加用於作為盤內校正之內部標準(允許以多盤的實驗之整個數值之標準化)。結果表示為目標RNA(MSRV/HERV-W)之相對表現，藉由GUS B RNA，於MS群體中具安定表現量之參考內部管理基因(reference housekeeping gene)之表現比率。

引子及探針序列

控制內部管理基因GUS B用之市售偵測引子/探針組為Taqman Gene Expression Assay GusB(應用生物系統4448485)。VIC®為GusB探針之5’端被偵測的螢光染料標示。

MSRV-env引子及探針被設計用來特異性偵測MSRV-Env蛋白質且非合胞素之序列編碼。相反地，合胞素引子能夠特異性放大編碼合胞素之序列，而非MSRV-env。FAM^TM染料標示之螢光係於MSRV-env及合胞素探針上測量。

UNO2引子被Geneuro設計用來辨識被假定具有潛在免疫抑制功能的MSRV-Env序列，藉由於其他內源性反轉錄病毒序列之對應區類推；然而，此處使用的術語(「免疫抑制胜肽/序列」)係定位反轉錄病毒的封套蛋白質中定義的功能域，其可能於許多反轉錄病毒中一點也沒有免疫抑制性。此等引子亦可與編碼合胞素的序列雜交。

UNO，由Geneuro設計用來結合編碼MSRV-Env及合胞素的序列。無探針被設計用於UNO及UNO2引子放大的序列，如此SYBR綠螢光能夠定量此等序列的放大。

MSRV-pol引子及探針被Geneuro設計及辨識編碼MSRV反轉錄酶之序列。MSRV-pol探針雜交之偵測以FAM^TM螢光報導子定量。

CFX溫度循環器偵測的螢光團(fluorophore)為5’探針。於無探針之引子組，偵測係以插入的SYBR綠色染料進行。

結果之分析 防止分析物的偏差之樣品排除標準如下：

- 萃取及DNase處理後，樣品之RNA濃度低於10ng/μL

- 於一樣品，PCR三份的標準偏差高於0.2Cq

- 高於降解切除以上的GUS B之Cq(量化週期(Cycle of Quantification))，其指出於此研究中RNA並未到達預期品質的量。降解切除(degradation cut-off)係計算如下：平均值+2x所有個別GUS B Cq值之標準偏差

依據其添加於個別實驗盤的內部標準品，MSRV/HERV-W env基因及GUS B之所有個別Cq以Genex®軟體(MultiD analyses AB,Sweden)被標準化。

各目標RNA於各樣品之相對表現被計算如下：相對於GUS B，目標RNA之相對表現=2^{(Cq GUS B-Cq目標RNA)}

萃取產量及樣品排除

萃取後，各樣品之總RNA濃度係以Nanodrop®裝置決定。具低於10ng/μl之總RNA的所有樣品被排除。總RNA定量之前，總RNA經歷DNase處理以排除最後殘留於總RNA製備物中的污染的基因體DNA。此DNase步驟後，於各樣品之無污染的基因體DNA藉由無反轉錄之PCR控制(NoRT Ctrl n^o1)。若於此步驟中偵測到基因體DNA，對應樣品歷經第二次DNase步驟，及第二次RNA定量，以及第二次NoRT對照(NoRT Ctrl n^o2)。若基因體DNA仍存於此製品中或若於此額外的DNase處理後總RNA低於10ng/μl，則最終排除此樣品。

以Genex®標準化原始資料及樣品之排除

為了調和由多個PCR微量盤收集的原始資料，依據於各微量盤中之內部標準物，以Genex軟體將所有原始資料標準化。於PCR三份之標準偏差之樣品大於0.2 Cq者自此研究排除。樣品之品質以其GUS B表現量反映。自此研究排除降解去除以上的所有樣品。

結果 收容於HERV-W相關的轉錄物量

於此研究之第一時間點，於第一次投予GNbAC1或安慰劑之前，自所有受試者的血液單離PBMCs。如此，呈現於表5及第1圖之結果表示對應於研究收容之時間時，各病患關注的HERV-W相關轉錄物之基礎量。

以「env」及「syn」qPCR實驗計畫，來自所有病患的結果之分布為均一，但以UNO及UNO2實驗計畫可見分布的差異，儘管以「UNO2」特異性標的之RNA為低相對表現。

於2mg/kg及6mg/kg組中編入的病患之間及參與此研究的兩招募中心之間，觀察到收容於HERV-W轉錄物量分布上無差異。

收容於具臨床資料的HERV-W env及pol轉錄物量之比較

依據表6摘述的資料，評估收容於時具HERV-W相關的轉錄物量之臨床參數的關聯。

首先，此等結果證實下列事實：無論是於不同qPCR實驗計畫所使用的引子及探針為何及無論是何種HERV-W基因(env或pol)，最高HERV-W RNA量皆被發現於PPMS病患且最低量被發現於SPMS病患(第2 圖)。此清楚地提供有意義的新資訊，關於在具有兩不同型的進行性MS(PPMS及SPMS)的病患中不同的HERV-W轉錄表現量。此可能亦對RRMS重要但於此僅一者呈現中等相對的表現。

此顯示於MS病患中HERV-W轉錄量之定量可具有診斷價值且可例如用於支持SPMS及PPMS病例之間的區別診斷的目的。此亦可有用於分層化qPCR閾值，用於PPMS、SPMS及最終亦用於RRMS之預後或治療性監測。

其次，儘管目前為低數量，當使用「Syn」及「pol」實驗計畫，於HERV-W env及pol RNA轉錄量之間及疾病期間及/或發展指數已發現統計學上顯著的相關。使用不同引子及探針之其他實驗計畫與臨床參數並未產生顯著相關，其凸顯所選實驗計畫之價值，如第3圖所示。

此顯示一般為編碼合胞素亞型(「Syn」實驗計畫，以SEQ ID N^o：14、15及16)之env基因、或pol基因(「pol」實驗計畫，以SEQ ID N^o：23、24及25)之HERV-W轉錄量的定量用之實驗計畫之選擇，於MS亦可具有特別的診斷價值。此處，「syn」及「pol」qPCR實驗計畫可用於作為HERV-W相關疾病活性(疾病發展之進化性)之生物標記以用於臨床分層化、追蹤及治療偵測。此亦可有用於於進行性MS中分層疾病「期間相對於活性」，以「Syn」qPCR，於具發展性演化數年之病患(尤其是SPMS)中依據HERV-W env「合胞素」轉錄量，產生運用不同的治療策略的觀點。

6個月間之HERV-W相關的轉錄物量

於研究中被包括的每一病患，於第1天(包含(inclusion))、第2日、第8日、第15日、及第29日，自血液樣品單離PBMCs。之後，病患接受5個額外每月的GNbAC1投予且抗體之各輸注前自血液樣品單離PBMCs。如此，下列結果呈現於前6個月之GNC002研究中各HERV-W相關轉錄物之變動。

第二GNbAC1投予發生於第1日之不同時間點，依病人而定。如此，以僅投予各GNbAC1之前收集的血液樣品評估HERV-W相關轉錄物之平均變動。

於2mg/kg組，於第6次GNbAC1投予觀察到所有HERV-W轉錄量之降低，當與於包含的基值比較(第4圖)。此於6mg/kg組被確認(第4圖)。當所有病患(2mk/kg及6mg/kg組)被分組，藉由HERV-W UNO、UNO2、及貫通GNC002研究之qPCR實驗計畫，此降低被較佳顯現(第4圖)。此亦以於所有病患第1次、第3次及第6次GNbAC1注射前之測量值之統計分布說明(第5圖)。

極預料之外地，此降低於pol mRNA亦為顯著。此效果並非於具疾病相關HERV-W表現之病患於6個月中每月注射1次後抗體特異性結合至HERV-W Env蛋白質所預期產生。因此於mRNAs編碼反轉錄酶、蛋白酶及整合酶酵素的效果顯示對於抗Env抗體諸如GNbAC1為獨特及新穎。因此其證明透過其pol編碼的產物，於其整體HERV-W表現及於其複製的反轉錄病毒的活性的效果。因此，其顯示抗反轉錄病毒的效果，尤其是針對HERV-W家族之抗內源性反轉錄病毒效果。

於第5圖，qPCR實驗計畫用之最精確引子及探針對於以GNbAC1處理或以任何藥物干擾HERV-W表現之病患群的治療性監測之選擇，係HERV-W env為「UNO2」且編碼pol基因的HERV-W酵素為「pol」。然而，以其他qPCR實驗計畫獲得的態樣之比率計算亦可透露診斷或預後的關係。

於此實驗，包括於GNC002研究的MS病患中HERV-W相關的轉錄物量藉由即時定量PCR評估，使用不同組之放大不同HERV-W env基因代表的序列之引子及一組放大HERV-W pol序列(於反轉錄酶編碼區)的引子。此處調查的HERV-W轉錄物被命名為MSRV-env、HERV-W-UNO、HERV-W-UNO2、HERV-W-Syn及MSRV-pol。

結果清楚指出此等生物標記可提供MS之診斷及HERV-W相關疾病之治療性監測關注之敏感性的生物臨床資料。

此外，HERV-W相關的轉錄物量似乎於PPMS病患中高於SPMS病患，其於以病患之生物臨床評價用，除此以外，於MS預後型式(SPMS及PPMS)之間的區別診斷目的用之不同引子組確認本定量性PCR試驗之價值。

由於2mg/kg及6mg/kg組兩者中GNC002的前6個月，所有HERV-W相關的轉錄量降低，此確認本引子組及qPCR實驗計畫於病患之治療性監測及治療效力之生物臨床評價的生物臨床價值。

最後，此亦提供生物證據證實於MS病患中抗HERV-W Env抗體治療(諸如GNbAC1)對於HERV-W表現有抑制效果，其於env mRNA量並未被預期，更不用說pol mRNA。此清楚指出此抗-Env抗體對與人類疾病相關之內源性反轉錄病毒治療的效果，於從未被描述於人類外源性反轉錄病毒時。

實施例2：人類內源性反轉錄病毒W型pol-基因編碼的蛋白質(反轉錄酶)之抑制係藉由GNbAC1抗體與AZT組合治療而協同性地被增強。 A.自發表現HERV-W gag、pol及env蛋白質之細胞培養的抗原性特徵 材料及方法 自發表現HERV-W gag、pol及env蛋白質之細胞培養

人類CH2細胞於37℃具5%CO₂中，被維持於補充10%胎牛血清(10270106；Invitrogen)、1%盤尼西林/鏈黴素(P4333；Sigma)之IMDM培養基(12440053；Lifetech)。

蛋白質萃取

蛋白質萃取

於4℃，CH2細胞被懸浮於500μl之含cOmplete ®抗磷酸酶抑制劑雞尾酒(04 693 132001；Roche)及0.05%LPG(326495-22-1；Avanti Polar)之RIPA緩衝液(R0278,SIGMA)，於26℃之旋轉平台上培育2小時並於26℃以10000g離心20分鐘。將上清液收集並儲存於-20℃。

西方式墨漬

蛋白質萃取物被稀釋於2X Laemmli緩衝液(Biorad)並於裝載之前於100℃加熱5分鐘。蛋白質以7.5%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺膠體電泳(TGX,Biorad)分離。於操作緩衝液(running buffer(Life Technologies))中膠體於120mA進行15分鐘。蛋白質轉移至0.2μm硝基纖維素膜(Biorad)上後，此膜以含0.05%Tween20緩衝液(Sigma)之1x PBS(Biomérieux)洗滌2次並於旋轉平台上於室溫下以Starting Block(Thermo)封阻1小時。依據表1於1x PBS中使用一級抗體1小時。然後將此膜洗滌3次並與HRP-結合的山羊抗兔(G21234；lifetech,1/1000於1x PBS)或小鼠(115-035-146；jackson,1/1000於1x PBS)IgG抗體)培育30分鐘。以色彩度量反應(colometric reaction(Opti 4-CN,Biorad))偵測關注的蛋白質，依據所提供的實驗計畫。

具有目標抗原及抗體稀釋之抗體：1)兔多株pAb1(SQ09AK001,Squarix),MSRV-Env,0.5μg/ml；2)兔多株330110 J77血清(330110 J77,InCellArt),MSRV-Pol多蛋白質，1/500；鼠科單株38E12(250510,Squarix)；MSRV-Gag多蛋白質，1μg/ml。

結果

如由第6圖可見，藉由抗gag、pol及env-編碼的蛋白質之特異性抗體偵測，此等細胞表現所有HERV-W結構蛋白質。

值得注意的，抗-gag抗體偵測HERV-W gag-編碼的多蛋白質及不同的裂解蛋白質，包括類蛋白殼P30 蛋白質帶之較強偵測。藉由抗-Env抗體偵測的樣式顯示以HERV-W env-編碼的糖基化及非-糖基化單體、二聚物及三聚物之偵測較複雜，以及約45及35KDa之裂解的SU或TM單元。抗-pol抗體主要偵測裂解的反轉錄酶酵素，儘管於膠體上部可見高分子量帶(未以KDa評估標示)，其可對應未裂解的HERV-W pol-編碼的多蛋白質。

B.於暴露於以GNbAC1抗體及AZT組合處理的細胞中可不再偵測到人類內源性反轉錄病毒W型pol-基因編碼的蛋白質(反轉錄酶)。 材料及方法 索脊瘤(Chordomas)細胞培養

人類CH1及CH2細胞(1：1)細胞被共培養以最佳化CH2細胞之生長並以1.10⁶個細胞/孔之密度於補充有10%胎牛血清(10270106；Invitrogen)、1%盤尼西林/鏈黴素(P4333；Sigma)之IMDM培養基(12440053；Lifetech)中維持於6孔盤(CC7672-7506；CytoOne)，於37℃，具5%CO₂。細胞以i)AZT(1μg/ml,A21-69；Sigma)、ii)GNbAC1(300μg/ml,T950111-A；Polymun)、iii)AZT+GNbAC1或對應的具GNbAC1緩衝液[20mM His,5%蔗糖(w/v),0,01%Tween 20(w/v)]之對照組處理。

蛋白質萃取

於4℃，將CH1及CH2細胞再懸浮於200μl之含cOmplete ®抗磷酸酶抑制劑雞尾酒(04 693 132001；Roche)及0.05%LPG(326495-22-1；Avanti Polar)之RIPA緩衝液(R0278,SIGMA)，於26℃之旋轉平台上培育2 小時並於26℃以10000g離心20分鐘。將上清液收集並儲存於-20℃。

西方式墨漬

蛋白質萃取物被稀釋(2：1)於2X Laemmli緩衝液(Biorad)並於裝載之前於100℃加熱5分鐘。蛋白質以7.5%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺膠體電泳(TGX,Biorad)分離。於操作緩衝液(running buffer(Life Technologies))中膠體於120mA進行15分鐘。蛋白質轉移至0.2μm硝基纖維素膜(Biorad)上後，此膜以含0.05%Tween20緩衝液(Sigma)之1x PBS(Biomérieux)洗滌2次並於旋轉平台上於室溫下以Starting Block(Thermo)封阻1小時。依據表1於1x PBS中使用一級抗體1小時。然後將此膜洗滌3次並與HRP-結合的山羊抗兔(G21234；lifetech,1/400於1x PBS)或小鼠(115-035-146；jackson,1/1000於1x PBS)IgG抗體)培育30分鐘。以色彩度量反應(Opti 4-CN,Biorad)偵測關注的蛋白質，依據所提供的實驗計畫。抗體：兔多株330110 J77血清(330110 J77,InCellArt)，被產生來抗MSRV-Pol多蛋白質並以1/500稀釋。

如由此實驗結果可見，說明於第7圖，GNbAC1及AZT(第1道)兩者組合的存在下培養的細胞不再表現可偵測量之HERV-W反轉錄酶(RT)。當單獨暴露於AZT(第2道)，HERV-W RT表現之清楚的減少係藉由減少的對應的抗-HERV-W RT抗體染色訊號而被顯示；然而，此剩餘部分效果。於第3道，單獨暴露於GNbAC1，於HERV-W pol-編碼的反轉錄酶蛋白質上顯示具有較小的效果，如於活體外條件存在的偵測。作為並行的陽性對照組，來自僅暴露於GNbAC1稀釋劑(稀釋緩衝液)的細胞之HERV-W RT蛋白質表現，作為模擬處理，於第4道中顯示此RT帶正常存在於此等細胞。

如此，於此顯示僅GNbAC1抗HERV-W Env抗體與疊氮胸苷(AZT)兩者之組合具有完全抑制自人類細胞表現HERV-W gag、pol及env基因全部之此培養產生的HERV-W RT之充分效果，而各單獨之治療分子於此HERV-W表現上僅有部分或極少效果。即使此與活體外細胞培養條件有關，儘管如此於HERV-W RT表現之抑制效力上其顯示了明顯地增加及大的協同效果，藉由此中和HERV-W Env蛋白質之抗體及抗-反轉錄病毒的反轉錄酶藥物的獨特組合。此等治療分子並未被預期於內源性反轉錄病毒(例如HERV-W)之RT表現有協同效果，正因為(i)其特別針對完全不同的分子及蛋白質結構，(ii)其具有完全不同的作用模式(藉由特異性抗原決定位標定之Env中和及RT酵素活性之抑制)及(iii)一者為一種抗體，而另一者為小的化學分子。

實施例3：適合靜脈注射於人類個體之GNbAC1抗體製劑用緩衝溶液之調配物

如實施例1所述，GNbAc1為一種針對多發性硬化症有關的反轉錄病毒封套蛋白質(MSRV-Env)之IgG4單株抗體，該封套蛋白為內源性反轉錄病毒的元件之HERV-W家族之一員，因此亦稱為HERV-W Env。GNbAC1於健康自願者中進行的第I期臨床試驗中已顯示良好的安全性概況及線性藥物動力學。於GNC002第IIa期臨床試驗中，於10位MS病患以2及6mg/kg進行以評估GNbAC1之安全性概況及藥物動力學。GNC002在於12個月縱向研究，其中GNbAC1以每月為基礎被投予。

於GNbAC1抗體之靜脈(iv)投予的目的，被溶解於緩衝液之特別適合的調配物，被儲存及注射至病患，其內容如下：20mM組胺酸、5%蔗糖、0.01%聚山梨醇酯20，pH6.0。

<110> Geneuro

<120> 針對人類內源性反轉錄病毒之抗反轉錄病毒藥

<130>

<160> 28

<170> BiSSAP 1.3

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 1

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 2

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 3

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 4

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 5

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 6

<210> 7

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 7

<210> 8

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 8

<210> 9

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HC

<400> 9

<210> 10

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LC

<400> 10

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 11

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 12

<210> 13

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探針/FAM於5’位置及TAMRA於3’位置

<400> 13

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 14

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 15

<210> 16

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探針/FAM於5’位置及TAMRA於3’位置

<400> 16

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 17

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 18

<210> 19

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 19

<210> 20

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 20

<210> 21

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 21

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 22

<210> 23

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 23

<210> 24

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 24

<210> 25

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探針/FAM於5’位置及TAMRA於3’位置

<400> 25

<210> 26

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 26

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 27

<210> 28

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 探針/VIC於5’位置及TAMRA於3’位置

<400> 28

Claims

一種抗體、片段或其衍生物，使用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥，其中該抗體、片段或衍生物係針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)。
如請求項1之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該抗體、片段或衍生物係能夠：- 壓制或抑制屬於人類內源性反轉錄病毒W型(HERV-W)家族的病毒之全部或部分的複製；或- 壓制或抑制屬於人類內源性反轉錄病毒W型家族的病毒之全部或部分的表現或該病毒之封套蛋白質的表現。
如請求項1或2之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該病毒屬於人類內源性反轉錄病毒家族(HERV-W)之MSRV亞型。
如請求項1至3中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該病毒為MSRV。
如請求項1至4中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其用於預防及/或治療HERV-W相關的疾病。
如請求項1至5中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該HERV-W相關的疾病係選自由多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(clinically isolated syndrome)(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy)(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病所組成之群組。
如請求項1至6中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該HERV-W相關的疾病係選自由多發性硬化症(MS)及慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)所組成的群組。
如請求項1至7中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該抗體、片段或衍生物包含SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：5及SEQ ID No：6所述之6個CDRs之各者。
如請求項1至7中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該抗體、片段或衍生物包含：- SEQ ID No：7所述之輕鏈可變區(VL)；及- SEQ ID No：8所述之重鏈可變區(VH)。
如請求項1至9中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該抗體、片段或衍生物係選自由Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、sc(Fv)2、雙功能抗體(diabody)、及由抗體片段所形成的多特異性抗體所組成之群組。
如請求項1至8中任一項之使用的抗體、片段或其衍生物，其中該抗體為單株人類化抗體。
如請求項11之使用的抗體、片段或其衍生物，其中：- 重鏈(HC)具有SEQ ID No：9所述之胺基酸序列及- 輕鏈(LC)具有SEQ ID No：10所述之胺基酸序列。
一種組成物，其包含：- 如請求項1至12所定義之抗體、片段或其衍生物；及- 反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥；使用於作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒W型(HERV-W)的病毒之抗反轉錄病毒藥。
一種組成物，其包含：- 如請求項1至12所定義之抗體、片段或其衍生物；及- 反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥；使用於預防及/或治療選自多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病所組成之群組的疾病。
如請求項13或14之使用的組成物，其中該反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥為疊氮胸苷(AZT)。
一種如請求項1至12所定義之針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥作為組合製劑，該組合製劑係同時、分別或連續使用治療下列疾病之方法，該疾病選自由多發性硬化症(MS)、精神分裂症(SZ)、雙極性情感疾患(BP)、單極性或精神性抑鬱、臨床孤立症候群(CIS，具神經症狀)、慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變 (CIDP)、癲癇、乾癬、癌症、炎症性胰臟炎及諸如第I型或第II型糖尿病之糖尿病組成的群組。
一種如請求項1至12所定義之針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物及反轉錄病毒的反轉錄酶抑制藥作為組合製劑，該組合製劑係同時、分別或連續使用於治療下列疾病之方法，該疾病選自由多發性硬化症(MS)及慢性發炎脫髓鞘多發性神經病變(CIDP)組成的群組。
一種套組，其包含至少二個選自由SEQ ID No：11至28組成的群組之寡核苷酸。
一種針對HERV-W封套蛋白質(HERV-W Env)之抗體、片段或其衍生物，於罹患HERV-W相關的疾病之病患中使用作為針對屬於人類內源性反轉錄病毒(HERV)的病毒之抗反轉錄病毒藥，其中該病患係藉由下列方法鑑別，該方法包含步驟i)：於該病患之生物樣品中偵測及/或定量HERV-W。
如請求項19之使用的抗體、片段或衍生物，其中步驟i)以如請求項18之套組進行。
如請求項19或20之使用的抗體、片段或衍生物，其中該生物樣品係選自由下列組成的群組：- 體液，諸如血液、血清、血漿、乳頭抽吸液(nipple aspirate fluid)、尿液、唾液、關節液及腦脊髓液；及- 疾病特異性組織及病灶，諸如MS腦斑、CIDP神經生檢或糖尿病胰臟生檢。