UA117345C2 - Модифікований вірус хвороби марека і вакцина на його основі - Google Patents
Модифікований вірус хвороби марека і вакцина на його основі Download PDFInfo
- Publication number
- UA117345C2 UA117345C2 UAA201411478A UAA201411478A UA117345C2 UA 117345 C2 UA117345 C2 UA 117345C2 UA A201411478 A UAA201411478 A UA A201411478A UA A201411478 A UAA201411478 A UA A201411478A UA 117345 C2 UA117345 C2 UA 117345C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- birds
- virus
- iom
- sequence
- vaccine
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 81
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 57
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 9
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 43
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims abstract description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims abstract description 8
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 159
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 230000004224 protection Effects 0.000 claims description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 14
- 241000712909 Reticuloendotheliosis virus Species 0.000 claims description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- UJOQSHCJYVRZKJ-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-benzoxazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 UJOQSHCJYVRZKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100024516 F-box only protein 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 101001052797 Homo sapiens F-box only protein 5 Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000005894 Albizia lebbeck Species 0.000 claims 1
- 101100237844 Mus musculus Mmp19 gene Proteins 0.000 claims 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 abstract description 34
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 abstract description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 23
- 239000013212 metal-organic material Substances 0.000 description 22
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 19
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 19
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 18
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 18
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 241001260012 Bursa Species 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 4
- 241000282421 Canidae Species 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000283216 Phocidae Species 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001455214 Acinonyx jubatus Species 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010040864 CERE Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000271560 Casuariidae Species 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000271571 Dromaius novaehollandiae Species 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 241000282418 Hominidae Species 0.000 description 1
- 241000282596 Hylobatidae Species 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 208000030289 Lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 241001376324 Melon yellowing-associated virus Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- RAQQRQCODVNJCK-JLHYYAGUSA-N N-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)methyl]-N-[(E)-5-hydroxy-3-(2-hydroxyethyldisulfanyl)pent-2-en-2-yl]formamide Chemical compound C\C(N(Cc1cnc(C)nc1N)C=O)=C(\CCO)SSCCO RAQQRQCODVNJCK-JLHYYAGUSA-N 0.000 description 1
- 101100247316 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) ras-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287530 Psittaciformes Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000271567 Struthioniformes Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241001314440 Triphora trianthophoros Species 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003555 cloaca Anatomy 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 101150053701 mom gene Proteins 0.000 description 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 231100001222 nononcogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003307 reticuloendothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 150000007944 thiolates Chemical class 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/255—Marek's disease virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16311—Mardivirus, e.g. Gallid herpesvirus 2, Marek-like viruses, turkey HV
- C12N2710/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу викликання безпечної й захисної імунної відповіді в птахів проти вірусу хвороби Марека (MDV), який передбачає введення вказаній тварині терапевтично ефективної кількості композиції, яка містить вірусний агент, що включає рекомбінантний вірус хвороби Марека, стабільно трансформований чужорідною ДНК-конструкцією, яка містить послідовність довгого кінцевого повтору (LTR) вірусу ретикулоендотельозу SEQ ID NO: 2, і де послідовність LTR містить фрагмент ДНК MDV, отриманий у результаті рестрикції з використанням PacI, який має всі ідентифікаційні характеристики депонованого в ATCC штаму з обліковим номером PTA-4945, у такий спосіб викликаючи захисну імунну відповідь, вірусний агент є клональним вірусом, а не змішаною популяцією п вихідного і рекомбінантного вірусів, і де MDV є CVI988.
Description
Включення до опису винаходу відомостей шляхом посилання
Даною заявкою здійснюється запит щодо пріоритету за попередньою заявкою на патент
США Мо 61/614,142, поданою 22 березня 2012 і повністю включеною до даного опису шляхом посилання.
Галузь техніки
Загалом, даний винахід має відношення до вірусних вакцин і способів їх застосування.
Конкретніше, даний винахід має відношення до нових вакцин, призначених для захисту курей від зараження вірусом хвороби Марека, які характеризуються більшою безпекою й ефективністю в порівнянні з існуючими вакцинами.
Рівень техніки
Хвороба Марека (МО), досить поширене й серйозне лімфопроліферативне захворювання курей, яке при промисловому розведенні курей контролюється за допомогою живих вірусних вакцин, які містять ослаблені або невірулентні за природніх умов віруси герпеса, асоційовані з
МО. Незважаючи на те, що в цілому програми вакцинації були визнані ефективними, промислове птахівництво продовжує зазнавати збитків внаслідок МО. Внаслідок властивості вірусу МО з часом ставати більш вірулентним (наприклад, у результаті мутацій, які призводять до повернення до більш вірулентної форми) і напруженого економічного становища в галузі птахівництва зберігається положення, що стимулює розвиток більш безпечних і ефективних продуктів, які будуть краще захищати від раннього зараження високовірулентними польовими штамами, не викликаючи шкідливих побічних дій (наприклад, дистрофії тимуса).
У курей виявлено три різні серотипи вірусу МО: (1) серотип 1 онкогенна форма, яка викликає захворювання, включаючи високо й низьковірулентні віруси МО та їх ослаблені варіанти; (2) серотип 2, неонкогенний вірус МО; і (3) серотип З, вірус герпеса індички (НМТ). Як повідомляється в УмїЧег еї аї!. | Ат. у). меї. Ке5.31:525-538 (1970)) і ОКалакі єї а. |(патент США Мо 3,642,574|), перші МО-вакцини містили вірус серотипа 3, початково виділений з індички.
Відсутність онкогенності, самообмежувана інфекція, надійна реплікація іп мімо и іп міго, доступність в вигляді препаратів, які містять і не які не містять клітини и висока ефективність захисту зробили НМТ стандартом для УМ/ЛЮО-вакцин у всьому світі Зазвичай використовується
ЕС126 штам НМТ.
Зо Вакцини, отримані з невірулентного за своєю природою штаму 5В-1 Ібснаї еї аї., У. Маї).
Сапсег іпві.60:1075-1082 (1978) і патент США Мо 41600241, ізолят серотипа 2 МО вірусу), були ліцензовані в Сполучених Штатах з 1984 року. Штам 5В-1 має низький рівень захисту проти високовірулентних штамів МОМ і звичайно використовується в комбінації з НМТ як двовалентна вакцина, оскільки два віруси разом забезпечують кращий захист, ніж кожний з них окремо ІЗспаї еї а!., Аміап Раїної. 11:593-606 (1982); М/Щег, Аміап Раїйпої. 11:49-62 (1982), зміст яких включено до даного опису шляхом посилання). Цей феномен одержав назву "захисного синергізму". У цей час двовалентна вакцина 58-1-НМТ займає більше 5095 ринку МО-вакцин у Сполучених
Штатах і входить до числа найбільш ефективних з різних доступних МО-продуктів. Однак, незважаючи на її використання, мають місце спорадичні збитки.
У Сполучених Штатах була дозволена до комерційного застосування й інша МО-вакцина, отримана із клону С штаму СМІ988 (СМІ988/С). Про цю вакцину, отриману зі слабовірулентного серотипу 1 вірусу МО, ослабленого шляхом серійного пасирування на культурі тканин, повідомлялося в Ое Воег еї аї. (Аміап Оі5. 30:276-283 (1986)Ї. Ще одне пересіюване похідне
СМІ988/С, яке називається СМІ988/С/Кб, також було описане Ре Воег еї а!. (Адуапсез іп Магек'5 рівеазе Незеагсі, рр.405-4 З (1988)). Недавно Уміцег еїаІ. виявили, що вихідний штам з низьким пасажним рівнем, названий СМІ988/Кізреп5, який використовувався в комерційних цілях в інших країнах протягом ряду років, є високоефективним проти зараження декількома високовірулентними штамами вірусу МО |4 ІпіІ. Зутр. Магек Оізеазе, рр. 315-319 (1992)).
У згаданій вище роботі МУМЩег повідомлялося про експериментальну вакцину, отриману з
Ма11, високовірулентного серотипа 1 польового ізоляту МО. Ма11 був ослаблений шляхом серійного пасирування (75 пасажів) на культурі клітин, а отримана в результаті вакцина одержала назву Ма11/75С. Було показано, що дана вакцина забезпечує гарний захист проти зараження МаФ5 і більшості інших протестованих високовірулентних МО-вірусів; однак вона була менш ефективна проти зараження штамом УМ/102МУ, вакцини НМТ і 5В8-1 надійно захищали від прототипу вірусу МО. Більш того ефективність вакцини була незмінно зниженою в курей, які мали антитіла до НМТ.
У патенті США Мо 4,895,717, М/ШЧег розкрита мутована відносно вихідної форми модифікація (ревертант) Мап/75С, яка одержала назву Ма11/75С/К2. Було показано, що мМа11/75С/К2 перевершувала декілька інших моновалентних вакцин і була еквівалентна до двовалентної бо вакцини (НМТ-58-1) (М/ЩШег, Аміап Оів. 31:752-765 (1987) Однак при ліцензуванні таких продуктів необхідно враховувати такі фактори, як початкова патогенність вірусів серотипа 1 і здатність ослаблених штамів повертати більшу патогенність (М/Кег еї а!., Аміап Раїної. 13:75-92 (1984)Ї. МуУшщег еї ам виявили, що клон, отриманий при подальшому пасируванні штаму
Мап/75С/К2, який одержав назву Ма11/75С/К2/23 (або К2/23) (Аміап рів., 35:877-891 (1991)|, має високі захисні властивості вихідного штаму без збереження його патогенності.
У патенті США Ко 4,895,718, зміст якого включено до даного опису шляхом посилання, УЩег також описав іншу МО-вакцину, отриману з 301 В/1, непатогенного серотипа 2 польового ізоляту, штам 301 В/1 мав здатність до реплікації, яка перевершує таку 5В-1, а також кращі захисні властивості проти зараження вірусами.
Також був описаний рекомбінантний вірус хвороби Марека, який називається ЕМІ1, що має довгі кінцеві повтори вірусу ретикулоендотеліоза, стабільно інтегровані в короткі повторювані ділянки (К5) його генома. Цей штам був створений в ОЗБА-АН5З-АБОЇ на основі серотипа 1 патогенного штаму ОМ вірусу хвороби Марека (МуКНег еї а!., 1997, Аміап рів., 41:407-421, і допе5 еї аї., 1996, У. Мігоіїоду, 70(4):2460-2467|. Було показано, що штам ЕМІ1 забезпечував рівень захисту, який був аналогічний або переважав такий для СМІ988. Однак, незважаючи на це, характерна для цього штаму залишкова патогенність приводила до атрофії тимуса у птахів, які зазнали обробки.
Таким чином, незважаючи на те, що всі існуючі НМТ, 58-1, СМІ988, СМІ988/С, Ма11/75С,
Ма11/75С/К2 і 301 В/1 вакцини викликають імунну відповідь проти певних МО-вірусів, жодна із цих вакцин не забезпечує оптимального захисту від зараження всіма МО-вірусами у всіх курей.
Більше того, ці вакцини демонструють знижену ефективність проти деяких з недавно виділених високовірулентних штамів МО-вірусу. Щоб запобігти будь-яким великим спалахам МО у майбутньому, необхідно розробити більш безпечні вакцини, які мають поліпшену ефективність проти високовірулентних штамів МО-вірусу.
Розкриття винаходу
Даний винахід частково грунтується на виробництві й використанні вакцин, яка містять вірус хвороби Марека (МОМ), спочатку розкритих у заявці номер ОЗЗМ 10/623,891 (опублікованої як
О05Б2005/0019348А1, Кеаду еї аї.), зміст якої, як і повна історія розгляду заявки, повністю включені до даного опису шляхом посилання. Зокрема, в основу даного винаходу лягло дивне й
Зо несподіване відкриття, що СМАКМ2 "вірус" (МОМ штам "СМІ988", трансформований конструкцією чужорідної ДНК; розкритий, наприклад, в Таблиці 1 Кедау еї аї.) у дійсності не відрізнявся тим, що був клонально окремим рекомбінантним ослабленим вірусом хвороби Марека (МОМ).
Замість цього заявники встановили, що СМКМ2 був гетерогенною популяцією рекомбінантного й вихідного МОМ, і при виділенні й уведенні птахам чистої клональної лінії СУМКМаО2 (яка тут і надалі називається "КМ1250") були отримані результати, які за показниками ефективності й безпеки набагато переважаючі ті, які фахівець міг очікувати після прочитання Кеаду еї аї.
Відповідно до цього відкриття, метою винаходу є надання нової вакцини проти МО, яка має високі захисні властивості для птахів, включаючи курей. Також метою винаходу є надання вакцини, яка забезпечує кращий захист від високовірулентних штамів вірусу хвороби Марека, ніж ті вакцини, які використовуються в комерційних цілях у цей час.
Іншою метою винаходу є поліпшення життєздатності й продуктивності курей, зокрема, бройлерів і несучок, і зменшення економічних втрат у птахівництві, спричинених хворобою
Марека.
Ці та інші варіанти здійснення розкриваються, стають зрозумілими й включаються до наведеного докладного опису.
Короткий опис креслень
На Фіг. 1 схематично показана організація генома МОМ, який містить унікальну протяжну ділянку (ШІ), фланковану інвертованим повтором (ІК5), довгий кінцевий повтор (ТКІ), довгий внутрішній повтор (ІК!) ї унікальну коротку ділянку (05) і фланкований двома інвертованими повторами, коротким внутрішнім повтором (ІК5) і коротким кінцевим повтором (ТК5). Також показане схематичне зображення космідних клонів, що перекриваються, створених щоб "урятувати" інфекційний вірус від високовірулентного штаму МОМ; на Фіг. 2 зображене створення косміди В40-Рас, яку використовується для одержання
СУВМ-вакцини;
Фіг. З ілюструє діагностику рекомбінантного МОМ методом ПЛР; представлені ПЛР- праймери, передбачувані розміри продуктів і зображення агарозного гелю, яке показує, що
СМКМ2 не був клоном, а в дійсності був подвійною популяцією рекомбінантного й вихідного
МОМ. Доріжки: 1) маркер; 2) негативний контроль; 3) Кізреп5; 4) СА 22; 5) Кізтамас; 6) КВ1В; 7)
КМ1250; 8) позитивний контроль (вихідна змішана популяція); 60 Фіг. 4 є підтвердженням методом ПЛР КМ1250 ММ, КМ1250 х.к5 і ВР5. Доріжки: без матриці
(1), КМ1250 ММ (2), ЕМ1250 х5 (3), ЕМ1250 ВР5 (4). ПЛР із усіма парами праймерів приводила до утворення передбачуваного ПЛР-продукту й характерного розташування смуг.
Таким чином, доказів наявності вихідного вірусу Кізреп5 в ізолятах КМ1250 М5МУ, КМ1250 х5 і
ВР5 отримано не було.
Докладний опис винаходу
Визначення "Імунологічна реакція" на композицію або вакцину проявляється у розвитку у хазяїна клітинної й/або опосередкованої антитілами імунної відповіді на досліджувану композицію або вакцину. Як правило, "імунологічна реакція" включає, але не обмежується одним або більшою кількістю з поміж наступних ефектів: утворення антитіл, В-клітин, Т-хелперних клітин і/або цитотоксичних Т-клітин, специфічно націлених на антиген або антигени, включені в досліджувану композицію або вакцину. Бажано, у хазяїна буде проявлятися терапевтична або захисна імунологічна відповідь, під час якої стійкість до нової інфекції буде підвищуватися й/або буде зменшуватися тяжкість клінічного перебігу хвороби. Такий захист буде проявлятися в зменшенні або відсутності симптомів, які, як правило, спостерігаються у зараженого хазяїна, більш швидкому відновленні й/або зниженому титрі вірусу в інфікованого хазяїна.
Під "тваринам" слід розуміти ссавців, птахів тощо. Тварина або хазяїн, як це прийнято в межах даного опису включає ссавців і людей. Тварина може бути обраною із групи, яка складається з родин коней (наприклад, коня), собачих (наприклад, собак, вовків, лисиць, койотів, шакалів), котячих (наприклад, левів, тигрів, домашніх котів, диких котів, інших великих кішок та інших котячих, включаючи гепардів і рисей), овечих (наприклад, овець), бичачих (наприклад, великої рогатої худоби), свинячих (наприклад, свиней), класу птахів (наприклад, курей, качок, гусей, індиків, перепелів, фазанів, папуг, співочих птахів, хижих птахів, круків, страусів, ему й казуара), ряду приматів (наприклад, деревних приматів, довгоп'ятів, мавп, гібонів, людиноподібних мавп), тхорів, тюленів і риб. Термін "тварина" також включає окрему тварину на всіх стадіях розвитку, включаючи ембріональні й зародкові стадії.
Якщо не зазначено іншого, усі технічні й наукові терміни, які використовуються в цьому описі, мають ті ж значення, які є зрозумілими пересічному фахівцеві в галузі техніки, до якої відноситься це розкриття. Використання термінів в однині включає множину об'єкта, про якого йде мова, якщо контекст явно не диктує іншого. Аналогічно, слово "або" включає "і", якщо з контексту явно не випливає іншого.
Слід зазначити, що в цьому розкритті й, зокрема, у формулі винаходу й/або пунктах, такі терміни, як "містить", "що містить" і тому подібні, можуть мати значення, яке приписує їм закон про патенти США; наприклад, вони можуть означати "включає", "що, включає", "включаючи" тощо; і що такі терміни, як "що, складається головним чином з" і "складається головним чином з" мають значення, яке приписує їм закон про патенти США, наприклад, вони беруть до уваги неназвані явно елементи, але виключають елементи, які виявляються на попередньому рівні техніки або які призводять до зміни основних або принципово нових характеристик винаходу.
Клонування. Відбір і відтворення (а) генетичного матеріалу окремого індивідуума, (Б) вектора, що містить один ген або фрагмент гена, або (с) одиничного організму, що містить один такий ген або фрагмент гена.
Вектор для клонування. Плазміда, вірус, ретровірус, бактеріофаг, косміда, штучна хромосома (бактеріальна або дріжджова) або нуклеїновокислотна послідовність, яка здатна до реплікації в клітині-хазяїні й характеризується одним або невеликим числом сайтів упізнавання рестрикційною ендонуклеазою, за якими послідовність може бути розщеплена заздалегідь визначеним чином, і яка необов'язково може містити маркер, придатний для ідентифікації трансформованих клітин, наприклад, стійкість до тетрацикліну або стійкість до ампіциліну.
Вектор для клонування може мати або не мати характеристики, необхідні для виконання функцій експресійного вектора.
Експресія. Процес, якого зазнає структурний ген для утворення поліпептиду. Експресія вимагає транскрипції ДНК, посттранскрипційних модифікацій вихідного РНК-транскрипта й трансляції РНК.
Експресійна касета. Нуклеїновокислотна послідовність у складі вектора, який підлягає транскрипції, і промотор для керування транскрипцією. Експресійна касета може містити одну або більше неспоріднених послідовностей ДНК, які кодують один або, що більше пептидів, що представляють інтерес.
Послідовність контролю експресії. Послідовності контролю експресії є послідовностями ДНК, які тим або іншим способом залучені в контроль транскрипції або трансляції, і повинні включати промотор. Придатні послідовності контролю експресії, способи їх створення й використання 60 добре відомі в даній галузі техніки.
Експресійний вектор. Реплікон, такий як плазміда, вірус, ретровірус, бактеріофаг, косміда, штучна хромосома (бактеріальна або дріжджова) або нуклеїновокислотна послідовність, яка здатна реплікуватися в клітині-хазяїні й характеризується сайтом упізнавання рестрикційною ендонуклеазою, за яким послідовність може бути розщеплена заздалегідь визначеним способом для вставки гетерологічної послідовності ДНК. Експресійний вектор має у своєму складі промотор, розташований перед сайтом, за яким послідовність розщеплюється для вставки гетерологічної послідовності ДНК. Сайт упізнавання вибирають таким чином, що промотор буде функціонально пов'язаний з гетерологічною послідовністю ДНК. Гетерологічна послідовність ДНК є "функціонально зв'язаною" із промотором у клітині, де РНК-полімераза, яка зв'язується з послідовністю промотору, транскрибує (здійснює транскрипцію), кодуючу послідовність із утворенням мРНК, яка потім, у свою чергу, транслюється з утворенням білка, який кодується кодуючою послідовністю.
Термін "нуклеїнова кислота" і "полінуклеотид" відноситься до РНК або ДНК, лінійної або розгалуженої, одно- або дволанцюгової, або їх гібриду. Термін також охоплює РНК/ДНК гібриди.
Необмежуючими прикладами полінуклеотидів є: ген або фрагмент гена, екзони, інтрони, мРНК,
ТРНК, рРНК, рибозими, кДНК, рекомбінантні полінуклеотиди, розгалужені полінуклеотиди, плазміди, вектори, виділена ДНК будь-якої послідовності, виділена РНК будь-якої послідовності, зонди з нуклеїнових кислот і праймери. Полінуклеотид може містити модифіковані нуклеотиди, такі як метилізовані нуклеотиди й аналоги нуклеотидів, урацил, інші цукри їі з'єднувальні групи, такі як фторрибоза й тіолат, і розгалужені нуклеотиди. Послідовність нуклеотидів може бути додатково модифікована після полімеризації, наприклад, шляхом кон'югації з компонентом, який служить міткою. Іншими типами модифікації, включеними в це визначення є кепірування, заміщення одного або більше природних нуклеотидів аналогом і введення "засобів", призначених для прикріплення полінуклеотидів до білків, іонів металів, міток, інших полінуклеотидів або твердої основи. Полінуклеотиди можуть бути отримані за допомогою хімічного синтезу або з мікроорганізмів.
Термін "ген" використовується широко, щоб його можна було віднести до будь-якої частини полінуклеотиду, пов'язаної з біологічною функцією. Таким чином, гени включають інтрони й екзони, як геномну послідовність, або лише кодуючу послідовність, як у КДНК, і/або регуляторні послідовності, необхідні для їхньої експресії. Наприклад, "ген" також відноситься до фрагмента нуклеїнової кислоти, який експресує мРНК або функціональну РНК або кодує специфічний білок і який включає регуляторні послідовності. "Виділений (ізольований)» біологічний компонент (такий, як нуклеїнова кислота або білок або органела) відноситься до компонента, який був в основному відділений або очищений від інших біологічних компонентів клітини організму, у якій компонент існує в природі, наприклад, іншої хромосомної й поза-хромосомної ДНК і РНК, білків і органел. "Виділені" нуклеїнові кислоти й білки включають нуклеїнові кислоти й білки, виділені за допомогою стандартних методів очищення. Термін також охоплює нуклеїнові кислоти й білки, отримані з використанням рекомбінантної технології, а також хімічного синтезу.
Термін "очищений", як він використовується в цьому описі не вимагає абсолютної чистоти; скоріше мають на увазі відносне поняття. Таким чином, наприклад, частково очищений препарат поліпептиду є препаратом, у якому поліпептиду міститься більше, ніж у природніх умовах (тобто препарат стає збагаченим поліпептидом). Інакше кажучи, поліпептидом відділеним від клітинних компонентів. Термін "значною мірою очищений" означає, що щонайменше 60 95, щонайменше 70906, щонайменше 80 956, щонайменше 90 9565, щонайменше 9595 або щонайменше 98 95 або більше клітинних компонентів або речовин було вилучено.
Аналогічно, поліпептид може бути очищеним частково. "Частково очищений" означає, що видалено менше 6095 клітинних компонентів або речовин. Те ж саме застосовується до полінуклеотидів. Розкриті в цьому описі поліпептиди можуть бути очищені за допомогою будь- якого способу, відомого в даній галузі техніки.
Варіанти включають алельні варіанти. Термін "алельний варіант" відноситься до полінуклеотиду або поліпептиду, який містить поліморфізми, наявність яких приводить до змін в амінокислотній послідовності білка і які існують у природній популяції (наприклад, види або різноманітність вірусів). Такі природні алельні варіації як правило, можуть приводити до наявності 1-5 95 варіантів полінуклеотиду або поліпептиду. Алельні варіанти можуть бути ідентифіковані шляхом секвенування досліджуваної нуклеїновокислотної послідовності ряду різних видів, яке можна легко здійснити з використанням гібридизаційних проб для ідентифікації генетичного локусу того ж гена в цих видах. Усі такі нуклеїновокислотні варіації й обумовлені цим амінокислотні поліморфізми або варіації, які є результатом природних алельних варіацій і бо які не змінюють функціональну активність гена, який представляє інтерес, включаються в рамки винаходу.
Терміни "похідне" або "варіант", як вони використовуються в даному описі відноситься до поліпептиду або нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, який має одну або більше консервативних амінокислотних варіацій або інших мінорних модифікацій, таких, що (1) відповідний поліпептид має практично еквівалентну функцію в порівнянні з поліпептидом дикого типу або (2) антитіло до поліпептиду є імунореактивним відносно поліпептиду дикого типу. Такі модифікації можуть бути навмисними, як у випадку сайт-специфічного мутагенезу, або спонтанними. Термін "варіант" додатково позначає делеції, вставки й заміни в послідовності, за умови, що поліпептид викликає імунологічну реакцію, зазначену в цьому документі.
Термін "консервативна зміна" означає заміщення амінокислотного залишку іншим біологічно подібним залишком або заміну нуклеотиду в нуклеїновокислотній послідовності таким чином, що кодований амінокислотний залишок не змінюється або замінюється на інший, біологічно подібний залишок. З цієї точки зору, найкращі заміни, як правило, будуть консервативними за природою, як описано вище. "Вектор" відноситься до рекомбінантної ДНК або РНК плазміди або вірусу, який містить гетерологічний полінуклеотид, призначений для доставки в клітину-мішень іп міго або іп мімо.
Гетерологічний полінуклеотид може містити послідовність, яка представляє інтерес із метою запобігання або лікування захворювання, і може необов'язково перебувати у формі експресійної касети. При використанні в цьому описі, вектор не повинен мати здатності до реплікації в кінцевій клітині-мішені або суб'єктові. Термін включає вектори для клонування й вірусні вектори.
Термін "рекомбінантний" позначає полінуклеотид напівсинтетичного або синтетичного походження, який не зустрічається в природі або пов'язаний з іншим полінуклеотидом у порядку, який не зустрічається в природі.
Термін "гетерологічний" позначає, що об'єкт походить з генетично відмінного суб'єкта, з іншої частини організму, з яким він порівнюється. Наприклад, полінуклеотид може бути поміщений за допомогою генно-інженерних методів у плазміду або вектор, отриманий з іншого джерела, і в цьому випадку є гетерологічним полінуклеотидом. Промотор, вилучений з його нативної кодуючої послідовності і функціонально пов'язаний з кодуючою послідовністю, яка відрізняється від нативної послідовності, є гетерологічним промотором.
Полінуклеотиди запропоновані винаходом можуть містити додаткові послідовності, такі як додаткові кодуючі послідовності, усередині однієї й тієї ж одиниці транскрипції, які кКонтТрРоОлЛюють елементи, такі як промотори, сайти зв'язування рибосоми, 5'ТК, З'СОТК, термінатори транскрипції, сайти поліаденілювання, додаткові одиниці транскрипції під контролем того ж самого або іншого промотору, які дозволяють послідовності здійснювати клонування, експресію, гомологічну рекомбінацію й трансформацію клітини-хазяїна, і будь-який подібний конструкт, який може бути бажаним для забезпечення варіантів здійснення.
Функціонально кодує або зв'язаний. Кожне з виразів "функціонально кодує" або "функціонально зв'язаний" відноситься до функціонального зв'язку між промотором і нуклеїновокислотною послідовністю, де промотор ініціює транскрипцію РНК, яка відповідає ДНК послідовності. Гетерологічна ДНК послідовність є "функціонально зв'язаною" із промотором у клітині в тому випадку, якщо РНК-полімераза, яка зв'язується із промоторною послідовністю, транскрибує кодуючу послідовність із утворенням мРНК, яка потім, у свою чергу, зазнає трансляції з утворенням білка, кодованого кодуючою послідовністю.
Промотор. Послідовність ДНК у межах більшої послідовності ДНК, яка визначає сайт, з яким може зв'язатися РНК-полімераза, щоб почати транскрипцію. Промотор може необов'язково включати дистальні енхансерний або репресійний елементи. Промотор може бути гомологічним, тобто таким, що існує у природі для керування експресією бажаної нуклеїнової кислоти, або гетерологічним, тобто таким, що існує у природі для керування експресією нуклеїнової кислоти, отриманої з гена, відмінного від бажаної нуклеїнової кислоти. Промотор може бути конститутивним або індуцибельним.
Вакцина. У цьому описі вакцина визначена в широкому сенсі цього слова, щоб стосувалась до будь-якого типу біологічного агента в придатній для введення формі, здатному стимулювати захисну імунну відповідь у тварин, інокульованих вакциною.
Варіанти здійснення
Даний винахід пропонує рекомбінантний вірус хвороби Марека (МОМ), у який був вставлений шляхом гомологічної рекомбінації довгий кінцевий повтор (ІТК), отриманий з вірусу ретикулоендотельозу (КЕМ). Ці рекомбінанти ефективно викликають імунну відповідь у птахів до вірусу хвороби Марека, за відсутності значного ступеня патогенності. При використанні в цьому описі "відсутність значного ступеню патогенності" визначається як відсутність МО- бо специфічних макроскопічних ушкоджень, видимих неозброєним оком, в інокульованих/вакцинованих птахів, навіть у птахів з високою чутливістю. В окремих варіантах здійснення птахи є курми.
СУВМ-2 був отриманий авторами Кедау еї аї., як описано в документі й проілюстровано на
Фіг. 1 ї 2 даного розкриття. Після одержання зразка СМКМО2 заявники даного винаходу провели ретельний ПЛР-аналіз для ппідтвердження ідентичності/цілісності ізоляту вірусу (Фіг.3 представляє результат поділу ампліфікованих продуктів в агарозному гелі). На власний подив, заявники виявили, що зразок не був ізолятом клону, а в дійсності був комбінованою популяцією рекомбінантного СУМКМ2 і вихідного штаму МОМ. Потім заявники провели необхідне очищення шляхом клонування за допомогою методу утворення бляшок, щоб одержати чистий ізолят, який складається тільки з СМКМА (і який не є вихідним штамом МОМ Кізреп5). Для ясності новий, клональний ізолят називається "«КМ1250" протягом усього подальшого розкриття.
Рекомбінантний МОМ даного винаходу може бути отриманий модифікацією серотипа 1 МОМ штаму СМІ988 або кожного з його клонів або серійно пасированих штамів, які в цьому описі носять загальну назву "штами "СМІ988/Х"». Таким чином, при використанні в цьому описі
СМІ988/Х включає, але не обмежується раніше описаним вихідним штамом з низьким пасажним рівнем, СМІ988/Кізрепз (Кізрепз5 еї аї., 1972, Аміап Оі5., 16:106-125 і 126-138), клон зі штаму
СМІ988 (СМІ988/С) (Ое Воег, 0.5. Раїепі Мо. 4,673,572, і Ое Воег еї аї., 1986, Аміап Оі5. 30:276- 283) і СМІ988/С/К6 (Ое Воег еї аї., 1988, Адмапсез іп Магек5 Оізеазе Кезеагсі, рр. 405-413).
Зміст кожної з вищевказаних публікацій/патентів включено до даного опису шляхом посилання.
В одному варіанті здійснення винахід пропонує новий рекомбінантний ослаблений штам
МОМ, який отриманий шляхом заміщення частини нативної послідовності СМІ988/Х екзогенної
ДНК, що включає послідовність довгого кінцевого повтору (ТК) вірусу ретикулоендотельозу (ВЕМ).
В одному варіанті здійснення рекомбінація штаму СМІ988 здійснювалася за допомогою серотипа 1 МОМ штаму КМІ1 як джерела екзогенних І ТЕ (ЕМІ1 є рекомбінантним МОМ, у який були інтегровані КЕМ І ТЕ). Як показано на Ффіг.2, КЕМ І ТЕ був "вирізаний" з очищеної вірусної
ДНК КМІ1 шляхом розщеплення Рас 1 і "вставлений" в "човниковий" вектор В40, отриманий з високовірулентного штаму вірусу хвороби Марека Ма5. Отриманий рекомбінантний вектор В40-
Рас використовувався для вставки ТЕ у штам вірусу хвороби Марека СМІ988. Для створення
Зо рекомбінантного МОМ з ГТК проводили ко-трансфекцію клітин ембріональних фібробластів курей або качок (СЕРЕ або СЕР) очищеною вірусною ДНК штаму МОМ СМІ988 з рекомбінантним вектором, розщепленим за Моїї. Рекомбінантні віруси, які містять ЕМ І ТЕ, інтегровані в їхній геном, реплікувались із більшою швидкістю, ніж вихідний штам СМІ988. Не будучи зв'язаними теорією, автори вважають, що це збільшення швидкості реплікації є результатом вставки ТК вірусу ретикулоендотельозу в геном МОМ перед геном ІСРА.
В іншому варіанті здійснення МОМ СМІ988/Х може бути модифікований шляхом додавання виділених ГТК вірусу ретикулоендотельозу із джерел, що відрізняються від штаму КМ'І.
Наприклад, було показано, що сайт інтеграції ТК у штам ЕМІ МОМ розташовується між ІКІ. і
ІїЇХ5 генома (допез еї аї., 1996, Кеїгоміга! іпзепіопа! асіїмайоп іп а Пегребмігив: ШМапзсгіріїопаї асіїманйоп ої О5 депез Бу ап іпіведгаївс опо їептіпаї! гереаї іп а МОМ сіопе, 9. Мігоіоду, 70(4):2460- 2467). Це приблизно відповідає положенню 152,745 штаму Ма5 вірусу хвороби Марека. Ця ділянка розташована усередині довгого фрагмента ЕсокК!І довжиною 1704 пар основ (нуклеотиди 152, 198-153, 902) серотипа 1 мМа5 (Тиїтап еї аї., 2000, Те депоте ої мегу мігшепі
Магек'з Оівзеаве мігив, у). Мікоіоду, 74а7):7980-7988). Цей ЕсокК!І фрагмент довжиною 1704 п.о. може бути клонований у плазмідний вектор, який не має сайтів розщеплення ендонуклеазою
Огапі, ї використовується як вектор перенесення (Ігапоїег месіог) для введення будь-якого І ТК. у геном МОМ. Цей ЕсоїїХ фрагмент має єдиний сайт рестрикції Оган, розташований на 10 п.о. вище (попереду) розташування І ТК в КМ. ІТК можуть бути вставлені в ЮОгапй сайт фрагмента
ЕсомІ довжиною 1704 пар основ для створення вектора для перенесення І ТЕ, для того, щоб створити рекомбінантний МОМ із вставками І ТЕ, вектор для перенесення слід лінеаризувати за допомогою ЕсоКІІ, виділити з використанням фенолу й хлороформу й осадити етанолом. Ко- трансфекція лінеаризованого вектора для перенесення разом із ДНК будь-якого штаму МОМ серотипа 1 у придатні клітини в культурі приведе до введення послідовностей ІТК у геном МОМ шляхом гомологічної рекомбінації.
Кеаду еї аІ. було показано (вище), що отриманий рекомбінантний вірус (ТЕ.МОМ з ІТК вірусу ретикулоендотельозу) повинен "рости швидше, ніж відповідний вихідний штам МОМ і, таким чином, немає необхідності проводити очищення шляхом клонування за допомогою методу утворення бляшок". Однак, беручи до уваги несподівано виявлений заявниками факт, що зразок СМКМ-2 у дійсності був комбінацією рекомбінантного МОМ і відповідного вихідного бо МОМ, фахівцеві настійно рекомендується проводити очищення шляхом клонування за допомогою методу утворення бляшок усіх рекомбінантних МОМ, передбачених даним розкриттям. Це особливо важливо, оскільки фахівець може помилково вилучити потенційно придатний рекомбінантний МОМ після одержання результатів, що вказують на те, що імунізація вірусом не може забезпечити достатній рівень захисту проти наступного зараження вірулентним
МОМ (дивися Таблицю 1 в Кедау єї аІ., де СМАМ-2, очевидно, забезпечує менше 80 95 захисту).
В іншому варіанті здійснення рекомбінантний МОМ, який містить КЕТМ І ТЕ, може бути приготовлений з будь-якого МОМ, включаючи інші штами СМІ988/Х, з використанням депонованого СМАКМ-2, за умови, що СМКМ-2 очищається шляхом клонування за допомогою методу утворення бляшок, щоб гарантувати, що вірус є КМ1250, а не комбінацією КМ1250 і вихідного штаму МОМ.
Багато КЕМ ГТК є придатними для використання в даному винаході. Багато виділених і описаних придатних І ТЕ вірусу ретикулоендотельозу включає, але не обмежується названими, описані Кобі еї аї. (1993, Кеїгоміги5 іпзепіоп іпіо пегребміги5: спагасіегігайоп ої а Магек5 Оізеазе міги5 Нагбогіпд а 5о0іо І ТА, Мігоіоду, 192:161-169), Віддулау (1992, ВЕМ І ТА вІетепіз аге епйісіепі рготогег»: іп сеїЇ5 ої магіои5 5ресієв і їі5це огідіп, іпсіпдіпд питап Іутрноїа сеї, Сепе, 121:213- 218), ВоекКкоєї! апа Кипд (1992, Тгапзсгіріопаї! іпіетасіоп реїуеєп геїгоміга! Іопу їептіпа! гереаї5 (5): теспапієт ої 5 ТА 5,ирргеввіоп апа 3' ТА рготоїег асіїмайоп ої с-тус іп аміап В-сеї
Іутрпотав, «у. МігоіІ., 66:4814-4823|, Ніррептеуєг апа Кіїмі (1991, Сепе ехргезвіоп Пот
Пеїегоїодоив рготоїег5 іп а геріїсайоп-деїесіїме аміап геїгоміги5 месіог іп диаї сеїї5, Рош. 5сі., 70:982-92), Віддулау сеї а. (1989, Тгапвіспі ехргезвіоп апапувів ої Те геїїсшоепаоїНеїїовів мігив пд
Іегтіпа! гереаї єЇєтепі, Мисієїс Асійб5 Нев5., 17:3199-3215), Етргеївоп апа Тетіп (1987,
Тгапзстіріюп їтот а 5рієєп песгов5ів міги5 5' Іопа їегтіпа! гереаї і5 зирргезз5ей іп тоизе сеїв, «5.
Мігої., 61:3454-3462), Моїапі апа Зацегбрієг (1987, Зедиепсе іпеїабіїйу іп їйе Іопа іептіпаї! гереаїв ої аміап 5рієєп пестовів міги5 апа геїсиоепаоїпеїовів міги5, У. Мої. Емої., 25:241-247), Вобіпзоп апа Садпоп (1986, Рацетпв ої ргоміга! іпзепіоп апа аеїейоп іп аміап ІеиКовів мігив-іпдисед Іутрпотавзв,
У. Мігої., 57:28-36), і Кідду/ау еї а. (1985, Іп міїго (Ігапзсгірноп апапузів ої Пе міга! рготоїег іпмоїмей іп с-тус асіїмайоп іп спіскеп В Імутрпотаєв: дебесіоп апа тарріпу ої мо РНК іпіайноп 5зйез м/йпіп
Ше гтейсшоепаоїНеїйовів міки І0пдуд їептіпа! гереаї, 9. Мігої., 54:161-170). Зміст кожної з вищевказаних публікацій включено до даного опису шляхом посилання, крім того, багато І ТК- послідовностей доступно в СсСепВапк та інших геномних базах даних і може бути синтезовано за допомогою ПЛР із використання І ТК-специфічних праймерів. Ампліфіковані в ході ПЛР послідовності потім можуть бути введені в кожній із двох векторів для перенесення (Ігапветег месіог5), описаних вище.
Розкриті в цьому документі нуклеїновокислотні послідовності КЕМ ІТК або їх біологічно функціональні еквіваленти можуть використовуватися відповідно до даного винаходу. Фраза "біологічно функціональні еквіваленти", як вона використовується в даному документі, позначає нуклеїновокислотні послідовності, що проявляють таку ж або аналогічну біологічну/мунопротективну активність, як і зазначені вище нуклеїновокислотні послідовності
Ї ТК вірусу ретикулоендотельозу (тобто, при введенні в СМІ988 МОМ хазяїна зі збереженням функціональності вони викликають захисну імунну відповідь, не викликаючи значного ступеня патогенності в курей).
Наприклад, описані в цьому документі нуклеїновокислотні послідовності можуть бути змінені шляхом заміни, уведення, додавання або делеції основ з метою одержання біологічно й функціонально еквівалентних нуклеїнових кислот, які зберігають промоторну або енхансерну активність.
Розглянуті в цьому документі варіанти геномних ДНК або кДНК (при одержанні за допомогою ПЛР зі зворотною транскрипцією із РНК), повинні мати більше 75 95 гомології, краще більше 85595 гомології й найкраще більше 9595 гомології із природними КЕМ ІТК, обговорюваними в цьому документі.
Вакцина на основі рекомбінантного вірусу хвороби Марека запропонована винаходом може бути приготовлена у вигляді безклітинового препарату або, у кращому варіанті здійснення, у вигляді клітинно-асоційованого препарату. Клітинно-асоційована вакцина може бути приготовлена безпосередньо з іп міго культури живих вірусних агентів у придатному поживному, середовищі таких як фібробласти курячих ембріонів, як описано УМНег (054,895,718, зміст якого включено до даного опису шляхом посилання). Альтернативно, для приготування безклітинного вірусного інокулята клітини тканини інфікованого хазяїна або клітинна культура зазнають обробки ультразвуком або руйнуванню іншим способом, як описано раніше. Клітинний дебрис видаляють центрифугуванням, а цетрифугат відновлюють як інокулят. Більше того, у той час як краща вакцина є життєздатним вірусом, також передбачається, що вакцина може бути бо приготовлена з убитого вірусу або з імуногенних компонентів, виділених з вірусу, хоча така обробка призведе до значно більших витрат. Наприклад, субодинична вакцина може бути приготовлена шляхом відділення з убитого вірусу одного або більше очищених вірусних білків, які проявляють імуногенні властивості.
Призначений для введення вірусний агент в ефективній для імунізації дозі включається до композиції з фармацевтично прийнятним переносником або розчинником, таким як фізіологічний розчин або середовище для культури тканини. Вираз "ефективна для імунізації доза" визначається як кількість, яка буде стимулювати імунітет у курей проти зараження вірулентним штамом вірусу хвороби Марека, при цьому вважається, що імунітет у популяції курчат сформований, коли рівень захисту для даної популяції є значно вищим, ніж у невакцинованої контрольної групи (імунітет оцінюється при рівні вірогідності, щонайменше, 80 95, бажано при рівні вірогідності 95 95). Одним з показників рівня захисту є індекс захисту (Рі), який обчислюється як різниця між числом випадків МО серед невакцинованих заражених МОМ контрольних птахів і числом випадків МО серед вакцинованих заражених МОМ птахів, розділене на число випадків хвороби Марека в невакцинованих заражених МОМ контрольних птахів і помножене на 100.
Як правило, вакцина буде містити, щонайменше, приблизно 200 БУО (бляшкоутворювальних одиниць) вірусу, і бажано приблизно від 2000 до 5000 БУО. Вакцина може вводитися 3 ефективністю в будь-який момент після досягнення курчатами імунокомпетентності, що відбувається приблизно на 18-ий день інкубації (З дня до вилуплення); але, як правило, уводиться інокуляцією в межах 24-48 годин після вилуплення. Альтернативно рекомбінантна вірусна ДНК може вводитися у вигляді ДНК-вакцини, як описано в Тібспег еї аї. (2002, 9). Сеп. Мігоіоду, 83:2367-2376, зміст якої включено до даного опису шляхом посилання).
Придатні ад'юванти, відомі в даній галузі техніки, також можуть бути включені до вакцинної композиції. У багатьох випадках ефективність вакцини може бути збільшена комбінацією рекомбінантних вірусів хвороби Марека запропонованих винаходом з іншими вірусними агентами в бівалентній або полівалентній вакцині.
В іншому варіанті здійснення фармацевтично або ветеринарно прийнятний носій, ексципієнт або наповнювач (основа) може бути емульсією воді-у-олії. У ще одному варіанті здійснення емульсія вода-в-олії може бути потрійною емульсію вода/олія/вода (М/ОЛЛМ). В іншому варіанті
Зо здійснення фармацевтично або ветеринарно прийнятний переносник, ексципієнт або наповнювач може бути емульсією олії-у-воді.
Способи застосування й готовий виріб
Даний винахід включає наступні варіанти здійснення способу винаходу. В одному варіанті здійснення спосіб вакцинування птахів включає введення композиції, яка містить вірус хвороби
Марека (МОМ).
В одному варіанті здійснення винаходу може використовуватися "прайм-буст" режим, який передбачає, щонайменше, одне первинне введення й, щонайменше, одне повторне (бустерне) введення з використанням, щонайменше, одного загального поліпептиду, антигену, епітопа або імуногена. Як правило, імунологічна композиція або вакцина, яка використовується при первинному уведенні, відрізняється за своєю природою від вакцини, яка використовується як бустер-ін'єкція. Однак, слід зазначити, що та ж композиція може використовуватися для первинного й вторинного введення. Цей протокол уведення називається "прайм-буст".
Режим уведення прайм-буст передбачає, щонайменше, одне первинне введення й, щонайменше, одне вторинне введення з використанням, щонайменше, одного загального поліпептиду й/або його варіанта або фрагмента. Вакцина, яка використовується при первинному уведенні, може відрізнятися за своєю природою від вакцини, яка використовується пізніше як бустерна вакцина. Первинне введення може включати одне або більше уведень.
Аналогічно, вторинне введення може включати одне або більше уведень.
Як правило, об'єм дози композицій становить приблизно від 0.1 до 2.0 мл, приблизно від 0.1 до 1.0 мл і приблизно від 0.5 мл до 1.0 мл.
Фахівцеві в даній галузі техніки зрозуміло, що наведене розкриття надається як приклад, і даний винахід ним не обмежується. Виходячи з даного розкриття й знань у даній галузі техніки, фахівець може визначити число введень, спосіб уведення й дози, які повинні використовуватися для кожного протоколу введення, не прибігаючи до надлишкового експериментування.
Даний винахід припускає, щонайменше, одне введення тварині ефективної кількості терапевтичної композиції, виготовленої відповідно до винаходу. Тварина може бути самцем, самкою, вагітною самкою або дитинчам тварини. Це введення може здійснюватися різними способами, включаючи, але не обмежуючись цим, внутрішньом'язову (ІМ), внутрішньошкірну 60 (ІЮ) або підшкірну (ЗС) ін'єкцію, або шляхом інтраназального або перорального введення.
Відповідно до винаходу терапевтична композиція також може вводитися за допомогою безголкового обладнання (наприклад, як у випадку обладнань Рідієї, Оегтоїеї, Віоіесіог, Амізеї (МегіаІ, СА, США), МеЦеї або Міга|єї (Віоїесі, Огедоп, США)). Іншим підходом для введення композицій, які містять плазміди, є використання електропорацій (дивися, наприклад, ТоПеїбвеп еї а!., 2002; ТоПеїзеп еї а!., 2003; Вабісик еї аї., 2002; РСТ Арріїсайоп Мо. УМО99/01158). В іншому варіанті здійснення терапевтична композиція доставляється тварині за допомогою генної гармати або бомбардування частками золота. У кращому варіанті здійснення тварина є собакою, тхором або тюленем.
Іншим варіантом здійснення винаходу є набір для здійснення способу викликання або індукції імунної або захисної відповіді на МОМ у тварини, який включає імунологічну композицію або вакцину, яка містить рекомбінантний МОМ, та інструкції зі здійснення способу доставки в ефективній кількості для того, щоб викликати імунну відповідь у тварини.
В одному варіанті здійснення розкритий у цьому описі предмет винаходу має відношення до набору для здійснення способу одержання або викликання імунної відповіді, яка може включати кожну з композицій або вакцин, що містять рекомбінантний МОМ, та інструкції для здійснення даного способу.
Інші цитокіни, які можуть використовуватися в даному винаході, включають, але не обмежуються цим, гранулоцитарний колоніє стимулюючий фактор (5-С5Е), гранулоцитарно- макрофагальний колонієстимулюючий фактор (ЗМ-С5Е), інтерферон а (ІЄМу), інтерферон В (ІЄМр), інтерферон у, (ІЄМу), інтерлейкін-1а« (1--10), інтерлейкін-1В (1--1р), інтерлейкін-2 (ІІ -2), інтерлейкін-З (ІІ -3), інтерлейкін-4 (ІІ-4), інтерлейкін-5 (ІІ -5), інтерлейкін-б (ІІ -6), інтерлейкін- 7 (1І--7), інтерлейкін-8 (ІІ/-8), інтерлейкін-9 (ІІ -9), інтерлейкін-10 (11-10), інтерлейкін-11 (11-11), інтерлейкін-12 (1-12), фактор некрозу пухлини « (ТМЕРо), фактор некрозу пухлини ВД (ТМЕрД) та фактор, що трансформує ріст В (ТОЕД). Зрозуміло, що цитокіни можуть уводитися разом з і/або послідовно з імунологічною або вакцинною композицією запропонованою даним винаходом.
Таким чином, наприклад, вакцина запропонована даним винаходом також може містити молекулу екзогенної нуклеїнової кислоти, яка експресує іп мімо придатний цитокін, наприклад, цитокін, придатний для вакцинування даного хазяїна, або хазяїна, у якого повинна бути викликана імунологічна відповідь (наприклад, пташиний цитокін для препаратів, призначених для введення птахам).
Далі винахід було додатково описано за допомогою наступних, необмежувальних прикладів.
Приклад 1 - ефективність ЗК-1 штамів СМАКМ-2 КЕМ1250 і ЕМІ СМ32399 і Кізреп5 СМ32553 вірусу хвороби Марека (МОМ)
Ключовим аспектом даного винаходу є відкриття авторів винаходу, зроблене після завершення описаного в цьому Прикладі дослідження. Було встановлено, що СМАМ-2 МОМ не був клональним рекомбінантним МОМ, а в дійсності був змішаною популяцію КМ1250 рекомбінантного МОМ і вихідного Кізреп5 МОМ. Таким чином, тепер, коли автори винаходу одержали стабільний клональний КМ1250 МОМ, ефективність якого як вакцини продемонстрована в наступних Прикладах, фахівець не буде здивований широким (їі неприйнятним) діапазоном рівня захисту (37-86 95), який забезпечував СМКМ-2 МОМ у цьому попередньому дослідженні.
Ціль. Оцінити й порівняти ефективність трьох експериментальних штамів МОМ 5К-1 і штамів
Кізреп5 з комерційною вакциною (Кізтамасфт-Іпіегмеї, Іпс.) в ЗРЕ курей з використанням раннього зараження МОМ Т. Кіпа.
Матеріали й методи. Сто п'ятдесят добових ЗРЕ курчат (ЗРАБАЗ група М/-42) випадковим чином розділили на п'ять груп по тридцять птахів кожна (групи 1-5). Потім кожну групу, призначену для лікування, випадковим чином розділяли по ізоляційних блоках. Спочатку курчат групи 1, яких використовували як невакцинованих заражених контрольних птахів, помістили в ізоляційні блоки з негативним тиском, по п'ятнадцять птахів на блок. Потім кожну з решти груп (групи 2-5) підшкірно (503) вакцинували препаратами Іпіегмеї Кізреп5 Кізтамасе; МОМ 5К-1 ВМІ
СМ32399 га; МОМ 58-11 СМАМ-2 ВМ1250 в4 або МОМ Кізреп5 СМ32553 ві4 по 0.2 мл на птаха.
Вакцинованих підшкірно птахів із груп 2-5 також поміщали в ізоляційні блоки з негативним тиском, по 15 птахів у блок. Через чотири дні, у день дослідження 4, птахів у групах 1-5 індивідуально інфікували МОМ Т. Кіпд, розведеним 1:500 (протокол 02-085 від 02 січня 2003).
Птахів інфікували внутрішньоочеревинно (ІР), по 0.2 мл на птаха. Після інфікування птахів спостерігали протягом 49 днів. Проводили розтин і обстеження на наявність характерних для
МОМ ушкоджень усіх птахів, що вмерли до 53 дня дослідження. У День 53 забивали всіх птахів, що залишилися, і проводили розтин і обстеження на наявність характерних для МОМ ушкоджень. бо Результати. Експериментальні МОМ 5К-1 і Кізреп5 штами забезпечували ступінь захисту 37-
86 95 проти раннього інфікування МОМ Т. Кіпд. Іпіегуеї5 Кізтамасое забезпечував 83 95 захисту.
Інфікування підтверджувалося рівнем захворюваності МО серед невакцинованих заражених контрольних птахів (97 б).
Приклад 2 - ефективність МОМ, 5БК-1, КМ1250 вакцини в товарних бройлерів з використанням Зпеаадег СпаІепде маоаєеї (моделі спричиненої інфікуванням линьки).
Матеріали й методи: сімдесят шість (76) добових товарних бройлерів, отриманих із групи
Натізоп 1-1, випадковим чином розподілили по трьом колоніальним будиночкам і чотирьом різним групам, як зазначено далі: група 1:13 птахів; група 2:13 птахів; група 3:25 птахів; і група 4:25 птахів (один будиночок був розділений на два відділення, щоб утворилися два загони).
Після рандомізації задню частину шиї птахів кільцювали для ідентифікації, і потім птахів внутрішньоочеревинно (ІР) інокулювали хуМОМм Т. Кіпд 0,2 мл на птаха при розведенні 1:500.
Після інфікування птахів поміщали у відповідний колоніальний будиночок по 25-26 птахів у будиночок. Ці птахи залишалися в колоніальних будиночках протягом 14 днів перед приміщенням МОМ вакцинованих і невакцинованих контактуючих контрольних птахів. Через 14 днів після розміщення птахів, що линяють (5Ппедаег бБіга5), 304 добових товарних бройлерів випадковим чином розподілили, як зазначено далі: дві групи по 75 птахів у кожній (групи З і 4) і дві групи по 38 і 40 птахів (групи 1 і 2), для вакцинування; крім того, дві групи по 25 птахів і дві по 13 птахів використовувалися як невакциновані контактуючі контрольні птахи для груп 1-4 (Група 1: 13 птахів; Група 2:13 птахів; Група 3:25 птахів; і Група 4:25 птахів). Для ідентифікації задню частину шиї цих невакцинованих контактуючих контрольних птахів кільцювали, після чого їх поміщали в колоніальні будиночки. Птахів, які зазнали вакцинування інокулювали підшкірно (0.2 мл на птаха), як зазначено далі: птахів у групі 1 вакцинували КМ1250 до М5У, Рб (ізолят 1); птахів у групі 2 вакцинували КЕМ1250 до М5М, Р7 (ізолят У); птахів у групі З вакцинували КМ1250 до М5М, Р7 (ізолят Е); і птахів у групі 4 вакцинували Кізттамаєсю серійний номер 02760010, придатний до 15.04.2012. Після інокулювання вакцинованих птахів поміщали в ті ж колоніальні будиночки, де заздалегідь були розміщені невакциновані контактуючі контрольні птахи, що й линяють. Додатково п'ятдесят (50) неінокульованих добових товарних бройлерів поміщали в ізольовані блоки й утримували протягом 49 днів для того, щоб вони служили другою групою контактуючих у більш пізній день контрольних птахів. Через вісім днів задню частину шиї всіх
Зо вакцинованих птахів кільцювали, використовуючи пронумеровані кільця з кольоровим маркуванням. Птахи, що линяють, залишалися в колоніальних будиночках протягом п'ятдесяти днів, а потім усіх птахів, що вижили, забивали й проводили розтин.
Клінічні прояви хвороби й смертність контролювали щодня протягом 49 днів після вакцинації. Для виділення вірусу збирали селезінки всіх померлих контрольних птахів, що контактували. На 53 день дослідження сорок неінокульованих товарних бройлерів, які утримувалися в ізольованих блоках, і які служили другою групою контактуючих контрольних птахів, поміщали в колоніальні будиночки груп 1-4 відповідно до схеми рандомізації, по 10 птахів на групу. Перед розміщенням цих птахів кільцювали пронумерованими кільцями для ідентифікації. Селезінки цих птахів також збирали для виділення вірусу у випадку їх смерті.
Решту вакцинованих птахів і вихідних невакцинованих контактуючих контрольних птахів забивали й проводили розтин на 63 день дослідження після періоду спостереження, який тривав 49 днів. Від 10 контактуючих контрольних птахів для виділення вірусу збирали селезінку й, щонайменше, два пір'яні фолікули від одного птаха. Птахів для відбору зразків визначали відповідно до схеми рандомізації У день дослідження 83 забивали решту контрольних контактуючих птахів, які були приєднані до груп у День дослідження 53 (друга група). Від цих, контрольних контактуючих птахів для виділення вірусу збирали селезінки й, щонайменше, два пір'яні фолікули від одного птаха.
Таблиця 1
Число птахів, що вижили до п'ятиденного віку
Птахи, які вижили до
Режим Група Назва п'ятиденного віку/загальна кількість птахів
Таблиця 1 (продовження)
Птахи, які вижили до
Режим Група Назва п'ятиденного віку/загальна кількість птахів
ВМ1250 до ММ (0) 133
ВМ1250 до МБУ (Є) 22/25 23/25
Таблиця 2
Індекси захисту проти інфікування ууМОМм Т. Кіпу
Я заражені ві Індекс ідсоток
Режим Група Назва /загальна |, 7: захисту ний з інфікованих Б кількість птахів вакцини
РМ1250 до М5М (І)! 2/38 5.2695 | 87.4 (81.2)6
РМ1250 до М5М ()2 6/40 15.0 95 2.6 (46.4)6
ЕМ1250 до МБМ (ГЕ)? 6/73 8.22 9 15/73 20.5 95 линяють линяють линяють линяють
Контактуючий о
Контактуючий о
Контактуючий о контроль
ЕМ1250 до М5М (І) 9ло 90.0 9
ЕМ1250 до М5М (5) вл 80.0 9
ЕМ1250 до М5М (Є) 9ло 90.0 9 вл 80.0 9 "титр вакцини ЕМ1250 (1): 3600 БУО/О.2 мл. 2 титр вакцини ЕМ1250 (0): 3144 БУО/0.2 мл. з титр вакцини КМ1250 (Р): 3710 БУО/О.2 мл. я титр вакцини Кіхтамаст: 2328 БУО/0.2 мл. » Індекс захисту вакцини: відсоток невакцинованих контактуючих птахів з характерними для
МО ушкодженнями (контроль інфікування) - відсоток вакцинованих курей з характерними для
МО ушкодженнями / відсоток невакцинованих контактуючих птахів з характерними для МО ушкодженнями (контроль інфікування). 6 |ндекс захисту вакцини з урахуванням відсотка невакцинованих контактуючих птахів з характерними для МО ушкодженнями (контроль інфікування) у колоніальному будиночку 10,
Групи 1 і 2, як одна група (28 95 або 7/25).
Висновок. Вакцина від хвороби Марека, Серотип 1, вакцина КМ1250, до М5М (І) ї (Є) були більш ефективними, ніж препарат Іпіегуеї5 Кізтамасф у товарних бройлерів при використанні
МОМ Т. Кіпд на моделі з5педаег спаПепде тоавеї (спричиненої інфікуванням линьки).
Приклад З - дослідження безпечності МОМ ЕМ1250 (Х.к5) на 5РЕ добових курчатах
Двісті п'ятдесят добових 5РЕ курчат випадковим чином розподіляли на п'ять лікувальних груп, по 50 курчат на групу, а також випадковим чином розподіляли по ізоляційних блоках з негативним тиском, які використовували для утримання птахів. Сто курчат були позначені як вакциновані й були названі Групами 1 і 2. Сто курчат були позначені як псевдовакциновані контрольні контактуючі птахи Груп 1 і 2 (Групи 4 ії 5, відповідно); решта псевдовакцинованих курчат (50) були названі Групою 3 і служили негативним контролем. Після рандомізації псевдовакциновані контактуючі контрольні птахи й псевдовакциновані птахи негативного контролю були позначені для ідентифікації за допомогою пронумерованих міток на крилах і поміщені у відповідні блоки (7-10 птахів у блок). Псевдовакцинованих птахів інокулювали розріджувачем в об'ємі 0.2 мл на птаха. Курчат, позначених вакцинованими, підшкірно (50) інокулювали КМ1250 (Х5) (Група 1) або Кіхтамасе (Група 2), в об'ємі 0.2 мл на птаха (- 5000- 6500 бляшкоутворювальних одиниць (БУС) на дозу). Після інокулювання вакцинованих птахів поміщали у відповідно позначені блоки (7-10 птахів на блок) до тих псевдовакцинованих контактуючих контрольних птахів, які були розміщені попередньо, у кількості від 15 до 20 курчат на блок.
Таблиця З
Дизайн дослідження птахів вакцинованих МОМ ЗК-1 КМ1250 птахів вакцинованих МОМ ЗК-1 Кізтамасое птахів
На 7 день у птахів із груп 1-5 (у п'яти птахів з кожної групи) були взяті й зафіксовані в 10 95 буферному формаліні зразки органів (бурси, тимуса й селезінки) для гістопатологічних досліджень. Відповідно до схеми рандомізації з кожного блоку вибирали по 2-3 птаха. У День дослідження 14 проводили визначення маси тіла й маси органів (бурси, тимуса й селезінки) в 15 птахів із груп 1-5. Зразки органів (бурси, тимуса й селезінки) птахів із груп 1-5 (п'яти птахів з кожної групи) відбирали й фіксували в 10 95 буферному формаліні. Двох-трьох птахів із блоку зважували й використовували для узяття органів. Птахів вибирали відповідно до схеми рандомізації. Процедуру, описану для Дня дослідження 14, повторювали в Дні 28 і 49 із рештою птахів.
Результати. Атрофія органів КМ1250. Бурса птахів, вакцинованих МОМ 5-1 ЕМ1250, і бурса псевдовакцинованих контрольних контактуючих птахів незначно відрізнялися за показниками від бурси псевдовакцинованих птахів з негативного контролю, за винятком Дня 28, коли бурса контрольних контактуючих птахів для МОМ5К-1 КМ1250 за показниками була значно більшою, ніж у птахів із групи негативного контролю (р20.0111). Показники тимуса птахів, вакцинованих
Зо МОУ5ЗВ-1 АМ1250, і псевдовакцинованих контрольних контактуючих птахів не виявляли значних відмінностей від показників тимуса псевдовакцинованих птахів із групи негативного контролю (р20.7265). Нарешті, показники селезінки в птахів, вакцинованих МОМеК-1 КМ1250, і псевдовакцинованих контрольних контактуючих птахів не показали значних відмінностей від цих показників у псевдовакцинованих птахів із групи негативного контролю (р20.5286).
Атрофія органів при використанні Кізтамаст
Показники бурси птахів, вакцинованих вакциною МОМУ5В-1 Кізтамасо), і псевдовакцинованих контрольних контактуючих птахів не виявляли значних відмінностей від цих показників псевдовакцинованих птахів із групи негативного контролю (р20.0581). Показники тимуса птахів, вакцинованих вакциною МОМ5К-1 КізтамасФ, і псевдовакцинованих контрольних контактуючих птахів не виявляли значних відмінностей від цих показників у псевдовакцинованих птахів з негативного контролю (р20.4004). Показник селезінки в птахів, вакцинованих вакциною МОМ5А-1 Кібвтамаст, був значно вищим, ніж показник селезінки в псевдовакцинованих птахів з негативного контролю в День 14 (р-0.0141); і показники селезінки псевдовакцинованих контактуючих контрольних птахів були значно більшими, ніж показники в псевдовакцинованих птахів із групи негативного контролю в День 28 (р«е0.0001). Показники не демонстрували істотних відмінностей в інші дні (р20.5558). У результаті гістологічного дослідження не було виявлено доказів атрофії бурси, тимуса або селезінки в птахів, заражених вірусом хвороби Марека 5К-1 ВМ1250 або Кізтамастф).
Висновок. За умов даного дослідження МОМ 5-1, КМ1250, Х-5 були безпечними при підшкірному уведенні при оцінці за показниками атрофії бурси, тимуса й/або селезінки.
Приклад 4 - поширення МОМ, 5-1, ЕМ1250 в 5РЕ добових курчат
Ціль. Оцінити поширення МОМ при підшкірному уведенні 5К-1, КЕМ1250 експериментальної вакцини (Хж5) у добових вільних від патогенної мікрофлори (РЕ) курчат і визначити, чи буде він поширюватися на невакцинованих контактуючих птахів.
Матеріали й методи. Сто двадцять (120) добових 5РЕ курчат випадковим чином розподіляли по трьом лікувальним групам і шести блокам для утримання 15 вакцинованих і п'яти контактуючих курчат у кожному. Задню поверхню шиї птахів, позначених як контактуючі, кільцювали кольоровими пронумерованими мітками відповідно до схеми рандомівзації, після чого їх поміщали у відповідні блоки. Птахів, відібраних для вакцинації, вакцинували з використанням МОМ КМ1250 Хя5 або Кіхреп5. Експериментальну й комерційну вакцини розбавляли в розріджувачі Марека з одержанням приблизно 100,000 БУО на дозу (приблизно 17Х передбачувана польова доза) і вводили підшкірно. Після вакцинації птахів поміщали у відповідні блоки разом з контактуючими птахами, поміщеними в них раніше. Вакцинованих птахів кільцювали у віці 8 днів по задній поверхні шиї кольоровими пронумерованими мітками відповідно до схеми рандомізації. Співробітники, які приймали участь у клінічній оцінці в ході дослідження, не були присутніми при нанесенні міток контактуючих і вакцинованих птахів, а також не здійснювали клінічні спостереження протягом цього періоду часу для збереження статусу дослідження як "сліпого".
Таблиця 4
Групи дослідження контактуючі
МОм 5В-1 зО/ ізреп5 вакцина 0.2 мл на птаха негативний контроль 0.2 мл на птаха
Через два тижні після вакцинації у всіх вакцинованих птахів брали мазки із трахеї й клоаки для виділення вірусу. Мазки поєднували за групами, по п'ять трахеальних або клоакальних мазків в одну пробірку для узяття мазка, яка містить 5 мл стабілізатора 5РОА. Первинні пір'яні фолікули для виявлення вірусу збирали від двох вакцинованих птахів у кожній групі, збираючи по два або три пір'яні фолікули від одного птаха. Двох птахів із групи для відбору пір'яних фолікулів вибирали відповідно до схеми рандомізації й залишали в живих після відбору зразків.
Зо Усі зразки направляли в аналітичний відділ Мегіа! 5еІесї5 для обробки. Аналогічну процедуру відбору зразків повторювали двічі із семиденними інтервалами.
У День дослідження 21 на додачу до узяття трахеального й клоакального мазків і пір'яних фолікулів, п'ять вакцинованих і невакцинованих контактуючих птахів із групи (обраних відповідно до схеми рандомізації) забивали, проводили розтин і видаляли селезінку. Виділення вірусу проводили тільки із селезінок, узятих у невакцинованих птахів, що контактували (у вакцинованих птахів селезінки брали для збереження статусу дослідження як "сліпого"). В останній День дослідження (День 49) проводили евтаназію й розтин усіх птахів, що залишилися, і завершували дослідження. Проводили індивідуальне видалення селезінки у решти п'яти вакцинованих і не вакцинованих контактуючих птахів у кожній групі. Виділення вірусу проводили тільки із селезінок, узятих у невакцинованих птахів, що контактували (у вакцинованих птахів селезінки брали для збереження статусу дослідження як "сліпого").
Результати. У першій групі МОМ 5К-1 КМ1250 Х5 середнє арифметичне титру (АМТ) склало 94,160 БУО/О.2 мл дозу. У другій групі МОМ 5-1 Візрепзв - 51,800 БУО/О.2 мл дозу. Усі трахеальні й клоакальні мазки на наявність вірусу були негативними.
Група 1, МОМ 5К-1 КМ1250: усі протестовані на наявність вірусу зразки пір'яних фолікулів із цієї групи були негативними.
Група 2, МОМ 5К-1 Кізрепе: у День 21 пір'яні фолікули від обох птахів були позитивними у відношенні цитопатичного ефекту вірусу хвороби Марека (МО СРЕ). У Дні 14 і 28 пір'яні фолікули від усіх птахів, у яких були взяті зразки, були негативними.
Група З, псевдовакцинований негативний контроль: усі протестовані на наявність вірусу зразки пір'яних фолікулів були негативними.
Із селезінок, узятих у контактуючих птахів у Дні 21 і 49, вірус виділити не вдалося. Зразки від
Дня 49 були початково контаміновані, однак були заново протестовані за допомогою ПЛР і виявилися негативними. Заморожений матеріал лейкоцитарної плівки із цих же зразків також був висіяний повторно, і було підтверджено, що всі ці зразки були негативними.
Висновок. За умов даного дослідження птахів вакцинували підшкірно експериментальною вакциною МОМ, 5К-1, КЕМ1250, що продемонструвала розподіл, аналогічний до такого в птахів, вакцинованих підшкірно комерційно доступною вакциною МОМ, 5Н-1 Кізреп5. Вірус не був виділений і не було отримано доказів клінічних проявів хвороби в невакцинованих птахів, що перебували в контакті із птахами, вакцинованими експериментальною вакциною МОМ ЕМ1250.
Приклад 5 - оцінка ефективності МОМ, 51, КМ1250 вакцини (Х-5) проти інфікування вірусом
ММ, ЕВІ1В при введенні добовим курчатам
Матеріали й методи. Двісті вісімдесят (280) добових 5РЕ курчат випадковим чином розподілили у вісім груп і 24 ізоляційних блоки відповідно до схеми рандомізації (по 11-12 птахів на блок, 35 птахів на лікувальну групу). Після рандомізації птахів у групах 6 і 7 (псевдовакцинованої зараженої групи й псевдовакцинованої псевдозараженої групи негативного контролю) піддавали неправильній вакцинації розріджувачем вакцини Марека й поміщали у відповідні блоки згідно зі схемою рандомізації. Решту птахів потім вакцинували МОМ
ЗВ8-1 КМ1250 у кількості 287, 578, 736, 1085 або 1392 бляшкоутворювальних одиниць (БУС) на дозу одному птаху або МОМ 5К-3 НМТ у кількості 1728 БУО на дозу одному птаху. Вакцину вводили підшкірно (503) в об'ємі 0.2 мл. Після вакцинації кожну вакциновану групу поміщали у відповідні блоки згідно зі схемою рандомізації. У день дослідження 4 птахів у групі 7 піддавали неправильному інфікуванню, використовуючи розріджувач вакцини Марека, а птахів у групах 1-6 і 8 внутрішньоочеревинно (ІР) інфікували ммМОМ КВІВ в об'ємі 0.2 мл на птаха. Птахів спостерігали щодня протягом 45 днів після інфікування на предмет яких-небудь небажаних реакцій на зараження, особливо смерті або пригніченого стану. У День дослідження 49 птахів забивали й проводили розтин для дослідження великих уражень, пов'язаних із хворобою
Марека.
Результати. Частка птахів, захищених від зараження умхМОМ КВІ1В у групах 1-5, перебувала в межах від 0.84 до 0.94. Частка птахів, захищених від зараження, у групі 8 (вакцинованій НМТ групі) склала 0.73. Захворюваність МОМ у псевдовакцинованій зараженій контрольній групі б склала 91.295. У птахів у групі 7 (псевдовакцинованій псевдозараженій групі негативного контролю) не спостерігалася ураження МОМ протягом всього періоду дослідження.
Висновок. МОМ вакцина, серотип-1, живий вірус, КЕМ1250 експериментальна вакцина (Хж5) при підшкірному (50) уведенні добовим ЗРЕ курчатам була ефективною при використанні для зараження 287 бляшкоутворювальних одиниць вірусу КВІ1В на дозу.
Таблиця 5
Короткий виклад дозозалежної ефективності ! ГА ! ре В ши : ва В
Н і ! : І ОЩ в: м : Ку :
БВ В: Н НЕ ЯКУ ЗНАНІ щ : їй :
БР. з як Б шия ше ше ши
НИ СЕ Язава суши о фавгнчУна дова Ж к хі: |. ! Бо.
Б: Ї Я ОВО ві х УНН и МЕ с Н ГОЮ ОМ кі: 5 : Мк : і Я : : ША ШЕ 5 ИН не : : : ШЕ: ВК М :
Е Я : Ї : : ще : : і : : і Ж : Ж ! п нн І НН З НІ І а шини 5 іш шишок вин шини и В ОН НН НН
Б вакЕнцид 730 БУЄ 000005 ми (ДМЖУ
Я я : КУ Н УТА Ух КУ ко хх ВІН : ОА ТЮ 5 ХАТУ ! зл : хі й : ш пл Н 71077 вакцюва 1002 БУЄ 0.09 вл бдмтЕ ТТ пи и НН додогют дян оорвух ки РОМ. Є АД
Бо. Мсевцовакцинований дана МВ дя пі і ї псевд овакии ваним: : ! : :
ОЗ Р ОшО поеввдовзораженний / ООВЯЖж о МЯВ 0003.
Я і вегативний ЕсВтЮрОйе: ' і ше і тТиже зивійвняноете 01505 БУЄ 00 дя дико дя мк: НЕ НИ ПМ п поп п п по во і БУЗВ Р У ВВ 245 : Е | нут Р. ма (АМТС : жожож жо ж жжж
Таким чином, після прочитання докладно описаних кращих варіантів здійснення даного винаходу, слід розуміти, що винахід, визначений вищевикладеними розділами, не обмежується викладеними в наведеному вище описі конкретними деталями, оскільки є можливими багато очевидних варіантів без виходу за межі сутності й обсягу даного винаходу.
Перелік лослідовностей «1105 ПРІТЧАРД, ДжОЙС
МЕБАТСЬОН, Тезом
БЮБЛО, Мішель «120» МОДИФІКОВАНИЙ ВІРУС ХВОРОБИ МАРЕКА Її ВАКЦИНИ НА ЙОГО ОСНОВІ «130» МЕК 09-144 «1505 5 61,514,142 «1515 2012-03-22 І «160» 2 «1705 РасепстІп меге1оп 3.5 «2105 1 «211» 585 «2122 ДНК о «2132 Штучна послідовність «220» . , . Й «223» генетичний банк 582226.1 рекомбінантний МОМ штаму ЕМі який повторюється «4005 1 тІдасстстс тасачасоадо чдахтосадачад дазастесода чадаасатач дачадчадсс Бо сддададаає адсустдаст содстаастос сатастадст хстотааєса состтасста 120 ссітаоссос саєсотасто оататастсс остдасаєса сссстсодаа ссодсаєсаа 180 дассаддссс атазассаста азасодаааво тд сааад дсаадсаєса дассасттас 240 ассасссаат сасозасааа сасодадчаєсо аасстассата стдаоссаає датсосааай 300 сдсадатасе ассстссааї одадодаааат оссатодсаас атсстдсаао содстатата 350 адссадотас атстсттост содоаоссосс дссстасаса кходстосодас отосодссса 420 саєссдаатс тасааєзава осттсттстт стататсстс адаєстодсач содададдавда 480 тЕстатссас дотахссдоаст дасстастодо дсодадсадо датссодасе дааєссосад 540 тасстсдаса саасададададч даадсссстс ттататтоддс даатоа 585 «210» 2 «211» 533 «2122» ДНК «213» Штучна послідовність «220» «223» Довгий кінцевий повтор з ретикулоендотеліального вірусу «3005 2 тос9додад99 адссссдодо даатосодаа оддадстссо додзазасад састчастса 60 стаастосса тастардсттс жхутаассасо стхосттасс стадссосса стсотасесода 120 тататсссос тддататсасс тстсдадаааєс ддсаєсаада асадосссат ааассатаза 180 аддазастоаєс тодстоаадчос аадсатсада ссасттудсас сатссаатса сддаасаааса 240 сдадаєсдаа стаєсатаст дадссаасодуд сатааадод садатудссає ссессааєоа 300 додаазаєує сатдсаасат сстдтаадсо'дссататаау ссаддатасає стсттдссса 360 дододссуссує сстасасатєт чІтосоасої осодсссада сссдазтсту тааєзазас 420
Ек сСтстІ атассстісад аткдоасадчіо адачдчачате єстатссосда хтассодаст9а 480 сстассодоає дадосадада сссодассда асссотадта тсхсуддсаса аса 533
Claims (18)
1. Спосіб викликання безпечної й захисної імунної відповіді в птахів проти вірусу хвороби Марека (МОМ), який передбачає введення вказаній тварині терапевтично ефективної кількості композиції, яка містить вірусний агент, що включає рекомбінантний вірус хвороби Марека, стабільно трансформований чужорідною ДНК-конструкцією, яка містить послідовність довгого кінцевого повтору (ІТК) вірусу ретикулоендотельозу, у такий спосіб викликаючи захисну імунну відповідь, вірусний агент є клональним вірусом, а не змішаною популяцією п вихідного і рекомбінантного вірусів, і де МОМ є СМІ988.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція додатково містить ветеринарно або фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.
3. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що птах є курчам.
4. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що І ТК є послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 2.
5. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що послідовність ІТК містить фрагмент ДНК МОМ, отриманий у результаті рестрикції з використанням Расі, який має всі ідентифікаційні характеристики депонованого в АТСС штаму з обліковим номером РТА-4945.
6. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що послідовність ЇТК уводиться з 5'-кінця відносно гена ІСРА зазначеного МОМ.
7. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що вірусний агент є ефективним для викликання імунної відповіді в птахів до МОМ без значного ступеня патогенності в зазначених птахів.
8. Спосіб за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що вірусний агент є асоційованим із клітинами.
9. Спосіб створення вірусного агента, ефективного для захисту птахів від хвороби Марека, що містить трансформований МОМ штам СМІ988 із чужорідною ДНК-конструкцією, що включає послідовність ІТК вірусу ретикулоендотельозу, і виділення вказаного вірусного агента шляхом очищення за допомогою методу утворення бляшок, де МОМ є СМІ988.
10. Вірус хвороби Марека (МОМ), стабільно трансформований чужорідною ДНК-конструкцією, Зо який містить послідовність довгого кінцевого повтору (ІТК) вірусу ретикулоендотельозу, де МОУ є клональним вірусом, а не змішаною популяцією вихідного і рекомбінантного вірусів, і де МОМ містить нуклеотидну послідовність, що має щонайменше 90 З95-ну гомологію з послідовністю, представленою в 5ЕО ІЮО МО: 2, і де МОМ є СМІ988.
11. МОМ за п. 10, який відрізняється тим, що нуклеотид має послідовність хЕО ІЮ МО: 2.
12. Імунологічна композиція, що містить МОМ за пунктом 10 або 11.
13. Композиція за п. 12, яка відрізняється тим, що є вакцинною композицією.
14. Композиція за п. 13, яка відрізняється тим, що забезпечує рівень захисту щонайменше 85
Чо.
15. Композиція за п. 14, яка відрізняється тим, що забезпечує рівень захисту щонайменше 90
Чо.
16. Композиція за п. 15, яка відрізняється тим, що забезпечує рівень захисту щонайменше 95
Чо.
17. Ізольована клітина, стабільно трансформована МОМ за п. 10 або 11.
18. Ізольована клітина за п. 17, яка відрізняється тим, що клітина є курячим або качиним ембріональним фібробластом (СЕР, ОЕРБ).
ТЕ. | й. І щ5 5 ТК5 БІМ5 ЗМІ16 іо шини шиашишитишинит шиашишнни бетА1(42294) 5иТА1 (67529) БигАЇ Вір! (140156) (109416) РУ де шити нати шини Маг (35537) Ріпсі Аве Бапіі (78402) (102314) (145776)
Фіг. 1
Що Ма5 косміда ЕМІ1 . асі розщеплення уз ків оз в Расіі Рас | Лігрування
Бактеріальна.
Расі Рас трансформація
Скрінінг клонів в40-Рас із Киї Ох КОХ Расі Расі нн бинт ЕМ 1. Ко-трансфекція.ї СУ1988 ДНК и ВС-40-Рас в клітини Гомологічна рекомбінація Підтвердження рекомбінації методом ПЦР СсУвМ-2 УЗ Ки ШІ КО МОУ ТВ 03 ТІАДССТОТСТАТАВОСОБОСОЦСТОБСАСОСАССТОСССОбСАДТОТОССАСОСАВСТОССОСОССААТАССОСТВОСТОССТААСТОЇ САТАТТАОСЕТСТОТААТСАТОСТТОСТТООСТТАСССОССАТТОТАСТТОАТАТАТТРСОСТОАТАТСАТТТСТОООСААТСОССАТОДА ІАПСАСИСТОСАТАААССАТАЛААССАЛАТОСТУТОТ ТІДАССААССАТСАСАСТАСТТОСАССАТОССААТСАКТААСАААСАСОЙОДС СТАТ САТАСТОаЛОССААТОСТТОГТАААООСАСАТОСТАТОСТОСААТСАСССЛААВТОТСАТОСААСАХССТОСТААОСОСССТАТ АТ, СОСАССТСАТОТОТ КОТ ТАС ТТ АСАСАТТОТ АЛОТССНПААТ СОДА ТСТИТААТАЛАМУТТТТРТИТТІ СТАТАТОСТОВОАТТОССАСТАСАССАСАТТТТоТТтОосВОоСсТтеЕТТО Стос АСТСОСТОСвпОТАВИСАТС САС СДАТИОТТ АСУ ТАТТТОЗОТАСААСТСТ Аа ТТ ТАТАТТОССОАСВТО ІТК Мру
13 Хкдиакиути І Її ехо мих пи х мазиз повимену ВО БшЄлЛІДВВМІТЬ : етична ак ї 3 : і весен вНВаНя азу Ка и ? 3 ж І Кк о хат ПУ яко га КА і нисвої осві вавиа ОО ЦЯ ; З ж І Й шк шу хр скігіи й З і кВеашсвкст ах ЗО СКУ у 4 Ї удару ложе сто кити ші ких Кз У І син осивкнаНоЕ зма ЦО КК Н і савесневаи вно еВ. ЗО ЕМО КОТ фОМАДЯХ ин и внесе яті ТК иа у. аа по х кх Еш ер фрожеКхвУМУх ММ МЕ ЯКАЙ КТ ан і Паза подив ОБМАН МК Казала БК у нн нн М нн нн те НЕ їх НЕ АЮ Я і : шо З ТОЖ не ї пан нан по унів м здо ооо со: а ОМаВ г- : ул КАК М Ук АКА А НА РУХ Худ Н Я З : во і ше Н ВЕРХУ руч а в а рон М рн ЖУКІВ Я Ж Гр ку : БРЧІКОоЮОо Я ОБО ОжБІ і ОВЕН МеОо т Я пОЯЗаоа і о а а ка - у Е х де 7 В ши ше ши ше КВК КК ОККО М сірку кими Я хх с Повимери ой КОКО ЗХ Зх п. с ще аванс и ПО ох х ОХ хх ЗКЕХ КОКО ПОМ ОО хх о. о с 3 Кивхвосивююни ДНК інв ГИ ОС уки ДОК с сх х ПМ - Х Ех Збій їй зт ижі ІЕМ ох дя с о с З. Мегщтнаннин контроль ОКХ ОККО о З хо й ОХ -х З ХУ ХЕ хх ОК К Ім лу є хе ОХ ЗУ КВ Х ОХ х хх з ХОБІ с й -
БО . 463» МЕН гурт В В КВ ТИХ ох Нв ОК ЕВ КО НИХ ко ВВ КК 0. ОБЦКНУНЕ гніт в ОВ Ох ОХ В МІ ХВ пе В ОК 5 ХХ о ХХ ОКХ ЖЕК КМ КАЛУ ОВ КК Сх ха Я ще ОО КО ЗЕ КЕРІВ печуть о. а . 5 Я Позитивння контролі» МОХ х ВО МЕ текст сук гумка ку 00000000 ОМішВНнаполуляція) с ЕКО п СО З й й шо ХХ ОХ МК Зх МО х х й . І Фіг З
. о. о. . о. о
Фіг. 4 0 КомпютернаверсткаА. Крижанівський (00000000 Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261614142P | 2012-03-22 | 2012-03-22 | |
| PCT/US2013/032539 WO2013142377A2 (en) | 2012-03-22 | 2013-03-15 | Modified marek's disease virus, and vaccines made therefrom |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA117345C2 true UA117345C2 (uk) | 2018-07-25 |
Family
ID=48045766
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201411478A UA117345C2 (uk) | 2012-03-22 | 2013-03-15 | Модифікований вірус хвороби марека і вакцина на його основі |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20130251737A1 (uk) |
| EP (2) | EP3326646A1 (uk) |
| JP (1) | JP2015512396A (uk) |
| KR (5) | KR20230145532A (uk) |
| CN (1) | CN104602706A (uk) |
| AP (1) | AP2014007955A0 (uk) |
| AR (1) | AR090472A1 (uk) |
| BR (1) | BR112014023398A8 (uk) |
| CA (1) | CA2868099C (uk) |
| CR (1) | CR20140432A (uk) |
| DO (1) | DOP2014000215A (uk) |
| EA (1) | EA030866B1 (uk) |
| EC (1) | ECSP14023407A (uk) |
| ES (1) | ES2663610T3 (uk) |
| GE (1) | GEP201706650B (uk) |
| GT (1) | GT201400199A (uk) |
| HK (1) | HK1255682A1 (uk) |
| IL (1) | IL234721B (uk) |
| MA (1) | MA37432A1 (uk) |
| MX (1) | MX355332B (uk) |
| MY (1) | MY169061A (uk) |
| NL (1) | NL301087I2 (uk) |
| PE (1) | PE20150323A1 (uk) |
| PH (1) | PH12014502085B1 (uk) |
| TN (1) | TN2014000393A1 (uk) |
| UA (1) | UA117345C2 (uk) |
| WO (1) | WO2013142377A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA201406884B (uk) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112014023398A8 (pt) * | 2012-03-22 | 2022-08-16 | Merial Ltd | Vírus da doença de marek modidicado e vacinas feitas do mesmo |
| CN106397602B (zh) * | 2016-08-02 | 2019-06-18 | 青岛明勤生物科技有限公司 | 一种分子佐剂加强型鸡马立克氏病蛋白工程疫苗 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3642574A (en) | 1970-04-29 | 1972-02-15 | Us Agriculture | Method for producing vaccine for immunization of poultry against marek{3 s disease |
| US4160024A (en) | 1978-05-01 | 1979-07-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Marek's disease vaccine |
| NL8401120A (nl) | 1984-04-09 | 1985-11-01 | Centraal Diergeneeskundig Inst | Viruspreparaat, waarmee gevaccineerd kan worden tegen de ziekte van marek. |
| US4895717A (en) | 1987-07-10 | 1990-01-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Revertant serotype 1 Marek's disease vaccine |
| US4895718A (en) | 1987-07-10 | 1990-01-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Serotype 2 Marek's disease vaccine |
| CZ299473B6 (cs) | 1997-06-30 | 2008-08-06 | Rhone-Poulenc Rorer S. A. | Nukleová kyselina a elektrické pole jako sdruženýprodukt pro prenos nukleové kyseliny do bunek prícne pruhovaného svalstva |
| US20050019348A1 (en) * | 2003-07-21 | 2005-01-27 | Reddy Sanjay M. | Marek's disease virus vaccine |
| BR112014023398A8 (pt) * | 2012-03-22 | 2022-08-16 | Merial Ltd | Vírus da doença de marek modidicado e vacinas feitas do mesmo |
| US9113301B1 (en) | 2014-06-13 | 2015-08-18 | Snapchat, Inc. | Geo-location based event gallery |
-
2013
- 2013-03-15 BR BR112014023398A patent/BR112014023398A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-03-15 CA CA2868099A patent/CA2868099C/en active Active
- 2013-03-15 MA MA37432A patent/MA37432A1/fr unknown
- 2013-03-15 EP EP17199985.7A patent/EP3326646A1/en active Pending
- 2013-03-15 JP JP2015501821A patent/JP2015512396A/ja active Pending
- 2013-03-15 ES ES13714141.2T patent/ES2663610T3/es active Active
- 2013-03-15 KR KR1020237033927A patent/KR20230145532A/ko active Application Filing
- 2013-03-15 CN CN201380023461.4A patent/CN104602706A/zh active Pending
- 2013-03-15 EA EA201401044A patent/EA030866B1/ru unknown
- 2013-03-15 KR KR1020147029496A patent/KR20140146136A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-03-15 MX MX2014011388A patent/MX355332B/es active IP Right Grant
- 2013-03-15 KR KR1020237005968A patent/KR102586316B1/ko active IP Right Grant
- 2013-03-15 UA UAA201411478A patent/UA117345C2/uk unknown
- 2013-03-15 KR KR1020227000586A patent/KR102503316B1/ko active IP Right Grant
- 2013-03-15 WO PCT/US2013/032539 patent/WO2013142377A2/en active Application Filing
- 2013-03-15 KR KR1020197024099A patent/KR20190100431A/ko not_active IP Right Cessation
- 2013-03-15 MY MYPI2014002694A patent/MY169061A/en unknown
- 2013-03-15 AP AP2014007955A patent/AP2014007955A0/xx unknown
- 2013-03-15 US US13/841,684 patent/US20130251737A1/en not_active Abandoned
- 2013-03-15 PE PE2014001444A patent/PE20150323A1/es not_active Application Discontinuation
- 2013-03-15 EP EP13714141.2A patent/EP2827898B1/en active Active
- 2013-03-15 GE GEAP201313604A patent/GEP201706650B/en unknown
- 2013-03-22 AR ARP130100944A patent/AR090472A1/es not_active Application Discontinuation
-
2014
- 2014-09-18 IL IL234721A patent/IL234721B/en active IP Right Grant
- 2014-09-19 DO DO2014000215A patent/DOP2014000215A/es unknown
- 2014-09-19 GT GT201400199A patent/GT201400199A/es unknown
- 2014-09-19 CR CR20140432A patent/CR20140432A/es unknown
- 2014-09-19 ZA ZA2014/06884A patent/ZA201406884B/en unknown
- 2014-09-19 TN TNP2014000393A patent/TN2014000393A1/fr unknown
- 2014-09-22 PH PH12014502085A patent/PH12014502085B1/en unknown
- 2014-10-17 EC ECIEPI201423407A patent/ECSP14023407A/es unknown
-
2018
- 2018-11-20 HK HK18114829.8A patent/HK1255682A1/zh unknown
-
2019
- 2019-01-30 US US16/262,774 patent/US11510978B2/en active Active
-
2021
- 2021-01-12 NL NL301087C patent/NL301087I2/nl unknown
-
2022
- 2022-11-23 US US18/058,619 patent/US20230310589A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2624037C2 (ru) | Конструкции рекомбинантного непатогенного вируса болезни марека, кодирующие антигены вируса инфекционного ларинготрахеита и вируса болезни ньюкасла | |
| Rauw et al. | Improved vaccination against Newcastle disease by an in ovo recombinant HVT-ND combined with an adjuvanted live vaccine at day-old | |
| EP3185899B1 (en) | Improved hvt-vectored nd-ibd vaccine | |
| RU2593950C2 (ru) | Рекомбинантный непатогенный mdv-вектор, обеспечивающий полиспецифический иммунитет | |
| US20220088187A1 (en) | Recombinant non-pathogenic marek's disease virus constructs encoding multiple heterologous antigens | |
| US20230310589A1 (en) | Modified Marek's Disease Virus, and Vaccines Made Therefrom | |
| EP4378474A2 (en) | Recombinant hvt vectors expressing influenza hemagglutinin and immunogenic compositions, and production and uses thereof | |
| ES2954910T3 (es) | Vacuna de amplio espectro contra el reovirus aviar | |
| US20230031097A1 (en) | Multivalent hvt vector vaccine | |
| US20240058436A1 (en) | Multivalent hvt vector vaccine | |
| WO2023213946A1 (en) | New multivalent hvt vector vaccine | |
| OA17137A (en) | Modified marek's disease virus, and vaccines made therefrom | |
| CN116555193A (zh) | 一株伪狂犬病病毒弱毒株及其构建方法和应用 | |
| Runge et al. | Marita Olbert1, Angela Römer-Oberdörfer2, Christiane Herden3, Sara Malberg3 |