UA115888U - Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу - Google Patents
Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу Download PDFInfo
- Publication number
- UA115888U UA115888U UAU201612664U UAU201612664U UA115888U UA 115888 U UA115888 U UA 115888U UA U201612664 U UAU201612664 U UA U201612664U UA U201612664 U UAU201612664 U UA U201612664U UA 115888 U UA115888 U UA 115888U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- toxoplasmosis
- transducer
- plasmon resonance
- solution
- surface plasmon
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 208000003463 Animal Toxoplasmosis Diseases 0.000 title claims abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 229920002518 Polyallylamine hydrochloride Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims abstract description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 3
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010955 niobium Substances 0.000 description 1
- GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N niobium atom Chemical compound [Nb] GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу включає визначення у сироватці крові тварин наявності антитіл до збудника токсоплазмозу. Визначення включає послідовне нанесення на поверхню трансдьюсера: поліаліламіну гідрохлориду, розчину білка А, токсоплазменного антигену, бичачого сироваткового альбуміну і позитивної та негативної досліджуваних сироваток крові, після кожного етапу проводиться промивання фізіологічним розчином, оцінку результатів реакції проводять за зміною кута відбиття на сенсорограмі за умови попередньої обробки поверхні трансдьюсера, загальний час аналізу становить 30-40 хвилин.
Description
Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини та біотехнології і може бути використана для зажиттєвої діагностики токсоплазмозу.
Відомий аналог (Інструкція з застосування набору реагентів для імуноферментного виявлення сумарних антитіл до Тохоріазта допаїй у сироватці (плазмі) крові (ВектоТоксо- антитіла); Кішп 1І., бішгКоміс-ЮБіакоміє О., ТпшПе Р. Сотрагізоп ої а соттегсіа! ЕГ15ЗА м/ййп Ше тодаіїїєй адаІшіпаїйоп їеві Тог Пе деїесіюп ої Тохоріазта допаїї іп'тесійоп іп паштгаПу ехрозей зПпеер /7хоопозе5 Рибіїс Неайй, 2007. - Мо 54 (3-4). - б. 165-168; Галат М.В. Сучасні методи діагностики токсоплазмозу котів /М.В. Галат //Тваринництво України, 2015. - Мо 1-2. - б. 27-30.
Нпер//прим.дом.ца/І-ра/ТтмОКи 2015 1-2 9.раї), на планшет з іммобілізованим антигеном вносять контрольні зразки (позитивний, слабо позитивний і негативний), а також досліджувані сироватки (по 100 мкл). Лунки планшету закривають та інкубують 30 хвилин при 37 "С.
Після закінчення інкубації за допомогою спеціального пристрою промивають лунки планшету 5 разів буферним розчином (ФОСБ-Т одноразовий розводили з дистильованою водою у співвідношенні 1:25). При цьому чергують аспірацію і негайне заповнення лунок кожного стрипу. В кожну лунку вносять не менше 400 мкл рідини у процесі кожного циклу промивання.
Час між заповненням і випорожненням лунок триває не менше 30 секунд. Повного випорожнення лунок досягають після кожного їх заповнення. По закінченні промивання залишки вологи із лунок ретельно видаляють. З цією метою перевернутим планшетом постукують по фільтрувальному паперу. На наступному етапі вносять в усі лунки по 100 мкл кон'югату та інкубують 30 хвилин при 37 "С. Після закінчення інкубації лунки промивають 5 разів, як описано вище і вносять у кожну лунку по 100 мкл розчину ТМБ (тетраметилбензидин). Витримують у темному місці упродовж 25 хвилин при 18-25 "С, а потім результати реєструють за допомогою спектрофотометра.
Недоліками аналога є те, що він потребує дорогих реактивів, обладнання (вошер, імуноферментний аналізатор), послуг висококваліфікованого персоналу, а також не менше 2 годин для здійснення аналізу в умовах добре обладнаної лабораторії.
Задачею корисної моделі є розробка нового способу діагностики токсоплазмозу тварин з використанням імунного біосенсора на основі поверхневого плазмонного резонансу (ППР).
Поставлена задача вирішується тим, що спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на
Зо основі поверхневого плазмонного резонансу, який включає визначення у сироватці крові тварин наявності антитіл до збудника токсоплазмозу згідно з пропонованим рішенням визначення включає послідовне нанесення на поверхню трансдьюсера: поліаліламіну гідрохлориду (ПААГ), розчину білка А, токсоплазменного антигену, бичачого сироваткового альбуміну і позитивної та негативної досліджуваних сироваток крові, після кожного етапу проводиться промивання фізіологічним розчином, оцінку результатів реакції проводять за зміною кута відбиття на сенсорограмі за умови попередньої обробки поверхні трансдьюсера, загальний час аналізу становить 30-40 хвилин.
Приклад здійснення способу
Чутливий шар біосенсора формується на скляній пластинці, поверхня якої покрита 1-2 нм адгезійного шару ніобію та 50 нм плівкою золота, на якій відбувається виникнення поверхневого плазмонного резонансу. З призмою пластинка поєднується і фіксується за допомогою імерсійної рідини. Це дає змогу легко змінити використану на нову, що значно скорочує час проведення аналізу.
Спочатку у вимірювальну комірку вносили ФР для отримання базової лінії. Поліелектролітна плівка на золотій поверхні трансдьюсера формувалась з використанням розчину поліаліламіну гідрохлориду (ПААГ). Поліелектроліт використовували у концентрації 20 мкг/мл. Потім на поверхню, вкриту плівкою полієлектроліту, наносили розчин білку А з концентрацією 20 мкг/мл.
Після цього здійснювали адсорбцію розчину антигену (Ад) Тохоріазта допаїї протягом 15 хв. за температури 25"С. Наступним етапом було проведено нанесення розчину бичачого сироваткового альбуміну (БСА) у концентрації 20 мкг/мл. Обробка поверхні 1 95 розчином БСА після іммобілізації антитіл не внесла суттєвих змін у значення резонансного кута, що реєструється. Це означає, що на поверхні практично не залишались вільні місця зв'язування, а концентрація антитіл була достатньою для створення максимально щільного шару.
Наступним етапом експерименту було нанесення розчинів антитіл (АБ) негативної та позитивної сироватки до Тохоріабта допадїі она попередньо підготовлену поверхню перетворювача.
На кожному етапі здійснювали промивання комірки ФР. Швидкість осідання реактивів на поверхні трансдьюсера відслідковували по зміні кута відбиття на сенсорограмі приладу. Час експозиції кожного розчину становив до 15 хвилин за температури 25 "С, оскільки надалі зміна бо кута відбиття не спостерігалася. Це свідчить про закріплення біологічного шару на поверхні перетворювача. При введенні у вимірювальну комірку сироватки крові тварини, що позитивно реагувала на наявність збудника токсоплазмозу величина відгуку біосенсора суттєво збільшувалася у порівнянні з негативною сироваткою.
Загальний час проведення аналізу за попередньої модифікації поверхні трансдьюсера становить близько 30-40 хв.
Короткий час проведення аналізу за умови попередньої підготовки поверхні перетворювача, а також використання підготовлених для аналізу колекцій сироваток крові різних видів тварин дозволяє здійснювати діагностику хвороби у польових умовах.
Технічне рішення способу імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі ефекту поверхневого плазмонного резонансу дає можливість використовувати його з метою вчасної діагностики даної хвороби серед різних видів тварин.
Claims (1)
- ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу, який включає визначення у сироватці крові тварин наявності антитіл до збудника токсоплазмозу, який відрізняється тим, що визначення включає послідовне нанесення на поверхню трансдьюсера: поліаліламіну гідрохлориду, розчину білка А, токсоплазменного антигену, бичачого сироваткового альбуміну і позитивної та негативної досліджуваних сироваток крові, після кожного етапу проводиться промивання фізіологічним розчином, оцінку результатів реакції проводять за зміною кута відбиття на сенсорограмі за умови попередньої обробки поверхні трансдьюсера, загальний час аналізу становить 30-40 хвилин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (xx) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (xx) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA115888U true UA115888U (xx) | 2017-04-25 |
Family
ID=58634044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201612664U UA115888U (xx) | 2016-12-12 | 2016-12-12 | Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA115888U (uk) |
-
2016
- 2016-12-12 UA UAU201612664U patent/UA115888U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2503009C2 (ru) | Устройство и способ для разделения и анализа крови | |
| CN105823880B (zh) | 一种利用钩状效应拓展检测范围的生物芯片及其检测方法 | |
| CN102043058A (zh) | 用于预测肿瘤的乙酰金刚烷胺的检测试剂盒 | |
| US10921322B2 (en) | Methods for detecting a marker for active tuberculosis | |
| CN105785041A (zh) | 用于定量检测钙卫蛋白的试纸条及其制备方法和钙卫蛋白浓度的测定方法 | |
| CN115060888A (zh) | 一种新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原检测试纸的制备方法 | |
| CN104090109A (zh) | 快速检测人血降钙素原胶体金免疫层析试纸及其检测方法 | |
| KR20190058357A (ko) | 고농도 검체 내 표적물질 정량화가 가능한 광범위 체외 진단 키트 | |
| JP5010374B2 (ja) | 免疫測定装置用の対照系としてのウシアルブミンｐ−アミノフェニルＮ−アセチルβ−Ｄグルコサミニドの使用 | |
| JP2013507618A (ja) | 抗ｖｌａ‐４関連アッセイ | |
| Yuksel et al. | A precise and rapid early pregnancy test: Development of a novel and fully automated electrochemical point-of-care biosensor for human urine samples | |
| Tomassetti et al. | Comparison of three immunosensor methods (surface plasmon resonance, screen-printed and classical amperometric immunosensors) for immunoglobulin G determination in human serum and animal or powdered milks | |
| CN100480703C (zh) | 幽门螺旋杆菌抗体及其抗原结合片段在传感器制备中的应用 | |
| UA115888U (xx) | Спосіб імунодіагностики токсоплазмозу тварин на основі поверхневого плазмонного резонансу | |
| CN105044335B (zh) | 一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法 | |
| US11782052B2 (en) | Biosensor for male infertility | |
| CN103454418B (zh) | 一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条及其制备方法 | |
| US20100216162A1 (en) | Immunological Method, Test Kit and Device for the Determination of the Analyte Content of a Sample | |
| CN208537565U (zh) | C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白a免疫层析定量联合检测试纸条 | |
| CN105929175A (zh) | 尿液胱抑素c半定量检测胶体金试纸 | |
| CN201365914Y (zh) | 快速诊断检测装置 | |
| UA125506U (uk) | Спосіб діагностики токсоплазмозу тварин на основі ефектів фотолюмінесценції і наноструктур металів | |
| RU2757078C1 (ru) | Способ потенциометрической диагностики лейкоза крупного рогатого скота | |
| RU2741382C1 (ru) | Способ иммуноферментного анализа идиотипических и антиидиотипических антител к бензо[а]пирену в биологических жидкостях человека | |
| CN107490679A (zh) | 一种唾液降钙素原酶联免疫检测方法 |